JP7085950B2

JP7085950B2 - 早産リスクを判定するための方法、早産リスク判定装置

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Publication number: JP7085950B2
Application number: JP2018163219A
Authority: JP
Inventors: 寿幸三上; 良樹高嶋; 睦美宮内; 隆高田; 美樹工藤
Original assignee: Arkray Inc; Hiroshima University NUC
Current assignee: Arkray Inc; Hiroshima University NUC
Priority date: 2018-08-31
Filing date: 2018-08-31
Publication date: 2022-06-17
Anticipated expiration: 2038-08-31
Also published as: JP2020034502A

Description

本発明は、早産及び／又は低体重児出産のリスクを判定するための方法並びにその装置に関する。

従来、早産及び低体重児出産のリスクを判定する方法が種々検討されてきた。たとえば、従来知られている早産マーカーの中には顆粒球エラスターゼ及び癌胎児性フィブロネクチンがある。

顆粒球エラスターゼは、頸管炎の診断に有効であり、早産及びｐＰＲＯＭ（preterm premature rupture of membranes、妊娠３７週未満の前期破水）の予知及び早期治療によりこれらの予防が可能であるという意義がある一方、測定が容易ではなく、国際的なカットオフ値がないという問題点があった（非特許文献１）。さらに、偽陽性率が高いという問題点も指摘されている（非特許文献２）。

一方、癌胎児性フィブロネクチンは、陰性例においては早産率及び検査１週間以内の分娩率が極めて低いという意義がある一方、陽性例に治療を行っても早産を予防できないという問題点があった（非特許文献１）。さらには、臨床症状のない時点で将来の流早産を予知するマーカーとしては不適であるとの指摘もされている（非特許文献２）。

なお、非特許文献３では、在胎期間とヒト新生児の臍帯血中のガレクチン－３レベルとに正の相関があり、早産児の臍帯血では正期産児と比較してガレクチン－３レベルが高いことが報告されている。

また、特許文献１には、在胎３６週６日までのヒト妊婦から採取された血液、血漿又は血清中のガレクチン－３濃度が１３ｎｇ／ｍｌ以上であれば、早産及び／又は低体重児出産のリスクがあることを判定する発明が開示されている。

ＷＯ２０１６／０２４６２７Ａ１

酒井正利、米田哲、斎藤滋、「早産の予知法」、２００５年７月、産婦人科治療、第９１巻、第１号、ｐ．４４－４９小林正幸、手山知行、平川修、伊東武久、「流早産予知における癌胎児性フィブロネクチンと顆粒球エラスターゼ測定の有用性について」、１９９８年９月、産婦人科治療、第７７巻、第３号、ｐ．３４８－３５３ M.Demmert et al., "Galectin-3 in cord blood of term and preterm infants", Clin. Exp. Immunol., 2012, Vol.167, No.2, p.246-251

特許文献１記載の発明では、在胎３６週６日までのヒト妊婦から検体を採取している。しかし、正期産となる３７週に近い時期に採取された検体から高濃度のガレクチン－３が検出されたとしても、３４週以降の胎児は早産であっても形態や機能の異常なく生育できるので、臨床的には早産治療は行われない。また、結果として正期産となるケースが数多く存在する。

その一方で、ガレクチン－３濃度が１３ｎｇ／ｍｌ未満であっても、測定時期や早産の原因によっては早産となるケースもあるため、正期産と判定される早産リスク妊婦も多く存在する。

以上に鑑み、本発明の実施態様は、特許文献１で開示されているよりも早い時期に、かつ、さらに低いガレクチン－３濃度で早産リスクの判定を可能とすることを課題とする。

本開示の第１の態様の早産リスク判定方法では、血液、血漿又は血清中のガレクチン－３濃度の下限値を７ｎｇ／ｍｌとし、上限値を１３ｎｇ／ｍｌとしたときに、在胎２２週０日から３３週６日までのヒト妊婦から採取された血液、血漿又は血清である検体のガレクチン－３濃度を測定し、該ガレクチン－３濃度が、前記下限値以上かつ前記上限値未満の注意範囲に該当することをもって早産要注意と判定する。

本開示の第２の態様では、第１の態様において、前記下限値を８ｎｇ／ｍｌとする。

本開示の第３の態様では、第１の態様において、前記下限値を１０ｎｇ／ｍｌとする。

本開示の第４の態様では、第１から第３までのいずれかの態様において、早産及び／又は低体重児出産のリスク因子を有すると判定されたヒト妊婦から、前記検体を採取する。

本開示の第５の態様では、第４の態様において、前記リスク因子が、多胎妊娠、早産若しくは流産の経験、出生前管理の欠如、低栄養、ストレス、低年齢若しくは高年齢妊娠、喫煙、糖尿病、高血圧、感染症又は子宮若しくは子宮頸の障害である。

本開示の第６の態様では、第４の態様において、前記リスク因子が、歯周病菌に起因する歯周病の罹患である。

本開示の第７の態様では、第６の態様において、前記歯周病菌がポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas gingivalis）、タネレラ・フォーサイシア（Tannerella forsythia）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Fusobacterium nucleatum）、プレボテラ・インターメディア（Prevotella intermedia）又はアグレガチバクター・アクチノミセテムコミタンス（Aggregatibacter actinomycetemcomitans）である。

本開示の第８の態様では、第１から第６までのいずれかの態様において、生体特異的親和性に基づく測定法を使用して、前記ガレクチン－３濃度を測定する。

本開示の第９の態様では、第８の態様において、前記測定法は、抗ガレクチン－３抗体を使用して前記ガレクチン－３濃度を測定する。

本開示の第１０の態様の早産リスク判定装置では、血液、血漿又は血清である検体を導入する導入部と、前記検体のガレクチン－３濃度を測定する測定部と、前記ガレクチン－３濃度が、下限値７ｎｇ／ｍｌ以上かつ上限値１３ｎｇ／ｍｌ未満の注意範囲に該当するか否かに基づき早産リスクを判定する判定部と、を備える。

本開示の第１１の態様では、第１０の態様において、前記測定部は、前記ガレクチン－３濃度を生体特異的親和性に基づく測定法によって測定する。

本発明の実施態様では、早産及び／又は低体重児出産のリスクを、精度よく判定することができる。特に、本方法を使用することにより、早産リスクのある妊婦を早期に発見することができる他、早産の可能性のある妊婦を高い的中率で見出すことが可能となる。

この判定結果は、早産及び／又は低体重児出産に対する予防処置を必要とする妊婦の選別に使用でき、効果的かつ効率的な周産期医療が促進され得る。

本発明のある実施態様に係る早産リスク判定装置の外観を斜視図で示す。測定器の機能ブロック図である。制御部のハードウェア構成をブロック図で示す。

特に具体的な定めのない限り、本開示で使用される用語は、有機化学、医学、薬学、分子生物学、微生物学等の分野における当業者に一般に理解されるとおりの意味を有する。以下にいくつかの本開示で使用される用語についての定義を記載するが、これらの定義は、本開示において、一般的な理解に優先する。

本開示に関して、「早産」は、正期産より短い在胎期間での出産を意味し、ヒトの場合、在胎２２週０日から在胎３６週６日まででの出産を意味する。ヒトの正期産は、在胎３７週０日から在胎４１週６日まででの出産を意味する。ヒトの在胎週数は、性周期が一定していて２８日前後である場合、妊娠前の最後の月経開始日を０週０日として起算する。性周期が不定である場合、妊娠初期の胎児の大きさから在胎週数を推定する。性周期が安定していた場合でも、胎児の大きさに基づいて在胎週数を補正してもよい。高い確度で排卵時期の特定が可能な場合は、推定排卵日を２週０日とみなして起算してもよい。

本発明に関して、「低体重児出産」は、その種について標準的な出産時の体重より低い体重での出産を意味し、ヒトの場合、２５００ｇよりも低い体重での出産を意味する。

本開示のある実施態様の早産リスク判定方法においては、血液、血漿又は血清中のガレクチン－３濃度の下限値を７ｎｇ／ｍｌとし、上限値を１３ｎｇ／ｍｌとしたときに、在胎２２週０日から３３週６日までのヒト妊婦から採取された血液、血漿又は血清である検体のガレクチン－３濃度を測定し、該ガレクチン－３濃度が、前記下限値以上かつ前記上限値未満の注意範囲に該当することをもって早産要注意と判定する。

ここで、検体を採取する対象となるヒト妊婦の在胎週数を２２週０日から３３週６日までとしたことについては、この在胎週数の間に早産要注意と判定されれば、正期産となる在胎３７週０日までの間に早産治療を開始することができる、という意義を有する。ちなみに、この在胎週数の下限である２２週０日は、「流産」とされる在胎週数の２１週６日を経過して早産の在胎週数に入ったヒト妊婦が対象となる、という意義を有する。

なお、本態様でいう「早産要注意」とは、当該ヒト妊婦が、早産及び／又は低体重児出産のリスクを有する、ということを意味する。以下、本開示では早産及び／又は低体重児出産のリスクを「早産リスク」と称する。

ここで、この早産要注意となるガレクチン－３濃度の注意範囲における下限値を７ｎｇ／ｍｌとしたのは、早産例の見落としを避けるためのカットオフ値としての意義を有する。

なお、この下限値を、８ｎｇ／ｍｌとしてもよく、あるいは、１０ｎｇ／ｍｌとしてもよい。下限値としてどの値を採用するかについては、検査対象のヒト妊婦の状態を勘案して決定することとしてもよい。たとえば、後述するようなリスク因子を有するヒト妊婦の場合にはより低い値を下限値として採用することで、早産リスクの見落としをできるだけ避けるようにすることができる。一方、そのようなリスク因子がないヒト妊婦の場合にはより高い値を下限値として採用することで、偽陽性の可能性を低減させることができる。

また、この早産要注意となるガレクチン－３濃度の注意範囲における上限値を１３ｎｇ／ｍｌとしたのは、従来の早産リスク判定方法で見落とされていた早産リスクを掬い上げるための意義を有する。ただし、この上限値以上となる場合には当然早産リスクはより高いため、実際の早産リスク判定においてはガレクチン－３濃度がこの上限値以上となるケースを含めても差し支えない。あるいは、ガレクチン－３濃度がこの上限値以上となるケースについては、「早産要注意」よりも高いレベルの早産リスクカテゴリー（たとえば「早産要警戒」）に属するものとして判定することとしてもよい。このとき、ガレクチン－３濃度が上限値以上となる範囲をたとえば「警戒範囲」と称することとしてもよい。

ここで、本態様においては、早産及び／又は低体重児出産のリスク因子を有すると判定されたヒト妊婦から、前記検体を採取することが望ましい。

上記のようなリスク因子は、たとえば、多胎妊娠、早産若しくは流産の経験、出生前管理の欠如、低栄養、ストレス、低年齢若しくは高年齢妊娠、喫煙、糖尿病、高血圧、感染症又は子宮若しくは子宮頸の障害である。

あるいは、上記のようなリスク因子は、歯周病菌に起因する歯周病の罹患である。このような歯周病菌としては、たとえば、ポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas gingivalis）、タネレラ・フォーサイシア（Tannerella forsythia）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Fusobacterium nucleatum）、プレボテラ・インターメディア（Prevotella intermedia）又はアグレガチバクター・アクチノミセテムコミタンス（Aggregatibacter actinomycetemcomitans）が挙げられる。

本態様においては、当分野で知られているいかなる方法を用いてガレクチン－３濃度を測定してもよい。たとえば、生体特異的親和性に基づく測定法（親和性リガンドを用いた測定法ともいう）によってガレクチン－３濃度を測定し得る。生体特異的親和性に基づく検査の方法は当業者に周知であり、特に限定されないが、イムノアッセイなどの免疫測定法、アプタマー等を用いたガレクチン－３の特異反応物質を利用した方法、液体クロマトグラフィー法、キャピラリー電気泳動法などが挙げられる。イムノアッセイなどの免疫測定法には、たとえば、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay。サンドイッチイムノ法、競合法、直接吸着法などを含む）、イムノクロマト法、免疫沈降法、沈降反応、免疫拡散法、免疫凝集測定、補体結合反応分析、免疫放射定量法、蛍光イムノアッセイ、プロテインＡイムノアッセイなどの、競合及び非競合アッセイ系が含まれる。

たとえば、上記したイムノアッセイによってガレクチン－３濃度を測定する場合、抗ガレクチン－３抗体を使用することができる。ガレクチン－３と抗ガレクチン－３抗体とが免疫複合体を形成し得る条件のもと、妊婦から採取された検体を抗ガレクチン－３抗体に接触させることにより、当該検体中のガレクチン－３濃度を測定する。当業者は、抗ガレクチン－３抗体を適宜作成ないし選択し得る。

上記の抗ガレクチン－３抗体は、ガレクチン－３に結合する抗体であってもよいし、その断片であってもよいし、あるいはその誘導体、すなわち、免疫グロブリン骨格をベースとする親和性リガンドであってもよい。抗体は、任意の起源のモノクローナル抗体であってもよいし、ポリクローナル抗体であってもよい。そのような抗体の起源としては、ネズミ、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒト又は他の動物由来であってもよいし、複数の動物種に由来する配列を含むキメラ抗体であってもよい。このようなキメラ抗体としては、たとえば、部分的にヒト化された抗体、たとえば、部分的にヒト化されたマウス抗体が挙げられる。ポリクローナル抗体は、動物を抗原で免疫化することにより産生し得る。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術を使用して産生できる。抗体の断片及び誘導体は、ガレクチン－３と選択的に相互作用できるものである。抗体の断片及び誘導体は、たとえば、完全な免疫グロブリンタンパク質の重鎖第１定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１）、軽鎖定常ドメイン（Ｃ_Ｌ）、重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）からなるＦ_ａｂ断片、２個の可変抗体ドメインＶ_Ｈ及びＶ_ＬからなるＦ_ｖ断片、可動性ペプチドリンカーにより連結された２個のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインからなる一本鎖Ｆ_ｖ断片（ｓｃＦ_ｖ）、ラクダ科の重鎖二量体及び単一可変領域、並びに、テンジクザメの新規抗原受容体などの単一ドメイン骨格及び可変重鎖ドメインに基づくミニボディー（minibody）のうちのいずれであってもよい。

抗ガレクチン－３抗体は、標識されていてもよい。標識は、当業者が適宜選択し得る。標識の例には、蛍光染料又は金属（たとえば、フルオレセイン、ローダミン、フィコエリトリン、フルオレサミン、ユーロピウム）、発色団の染料（たとえば、ロドプシン）、化学発光化合物（たとえば、ルミナール、イミダゾール）及び生物発光タンパク質（たとえば、ルシフェリン、ルシフェラーゼ）、ハプテン（たとえば、ビオチン）、酵素（たとえば、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータラクタマーゼ）、放射性同位元素（たとえば、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３２Ｐ、^３５Ｓ又は^１２５Ｉ）、粒子（たとえば、金などの金属粒子）、蛍光性半導体ナノ結晶（量子ドット）が含まれる。たとえば、標識は、蛍光化合物、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ及びβ－ガラクトシダーゼからなる群から選択され得る。各種標識を、当業者に周知の様々な化学反応、たとえば、アミン反応又はチオール反応を使用して、抗ガレクチン－３抗体に結合させることができる。アミン及びチオール以外の反応基、たとえば、アルデヒド、カルボン酸及びグルタミンも使用できる。

標識の検出方法には、蛍光定量的、発光定量的及び酵素的技法が含まれ得るが、これらに限定されない。蛍光標識は、蛍光標識を特定の波長の光に曝し、その後、特定の波長領域で発せられる光を検出及び／又は定量することにより、検出及び／又は定量する。発光標識は、化学反応中に生じる発光を検出及び／又は定量することにより、検出及び／又は定量する。酵素標識は、化学反応から生じるサンプル中の色の変化を検出及び／又は定量することにより、検出及び／又は定量する。ＥＬＩＳＡは、酵素的反応を基礎とする方法の一例である。当業者は、適切な検出及び／又は定量のためにプロトコルを改変することができる。

イムノアッセイの方法は、当業者に周知であり、一例を挙げると、以下のとおりである。プラスチックチューブ、マイクロプレート、ガラスビーズ、基板などの固相に、捕獲抗体を吸着させる。捕獲抗体としては、たとえば、上記の標識された抗ガレクチン－３抗体のエピトープとは異なるガレクチン－３タンパク質中のエピトープを認識する、ガレクチン－３に結合する抗体、その断片及び誘導体、たとえば、ガレクチン－３のポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体が用いられ得る。吸着に用いる捕獲抗体溶液の濃度は、当業者が適宜決定し得る。たとえば、捕獲抗体溶液の濃度は、１～１０μｇ／ｍＬの範囲で決定することができ、たとえば、２μｇ／ｍＬ又は５μｇ／ｍＬとすることができる。

抗原抗体反応及び酵素反応に関与しないタンパク質により、捕獲抗体を吸着させた固相をブロッキングする。ブロッキングに適するタンパク質としては、スキムミルク、アルブミン、フィッシュゼラチン、カゼインなどが挙げられる。たとえば、ブロッキング用のタンパク質の濃度は、０．１～５％又は０．５％～２％の範囲で決定することができ、たとえば、１％とすることができる。

固相上の捕獲抗体に、妊婦から採取された検体を加え、捕獲抗体とこの検体中のガレクチン－３とが免疫複合体を形成し得る条件下に置く。検体を、必要に応じて適宜希釈した後に、上述の処理を行うことができる。検体の希釈率は、当業者が適宜決定し得る。たとえば、測定するサンプルの種類や他の条件に基づいて、１～２０倍又は５～１０倍の範囲で決定することができ、たとえば、５倍又は１０倍とすることができる。あるいは、検体を希釈せずに、上述の処理を行うことができる。

固相を洗浄し、その後、上記の標識された抗ガレクチン－３抗体を加え、捕獲抗体に結合したガレクチン－３と標識された抗ガレクチン－３抗体とが免疫複合体を形成し得る条件下に置く。加えられる標識された抗ガレクチン－３抗体の濃度は、測定するサンプルの種類や他の条件等を考慮して、当業者が適宜決定し得る。たとえば、標識された抗ガレクチン－３抗体の濃度は、０．１～１０μｇ／ｍＬ又は０．１～２μｇ／ｍＬの範囲で決定することができ、たとえば、０．１μｇ／ｍＬとすることができる。

さらに固相を洗浄し、ガレクチン－３に結合した、標識された抗ガレクチン－３抗体に由来するシグナルを、上記の蛍光定量的技法、発光定量的技法、酵素的技法などにより、検出及び定量する。このシグナルの測定値は、使用した血液、血漿又は血清中のガレクチン－３の濃度に相関する。

あるいは、捕獲抗体に結合したガレクチン－３を検出するために、標識されていない抗ガレクチン－３抗体を使用することもできる。この場合は、検出用の抗ガレクチン－３抗体を認識する、標識された二次抗体をさらに使用する。二次抗体の標識及びその検出方法は、上記の標識された抗ガレクチン－３抗体のものと同様であり得る。

本開示のある実施態様の早産リスク判定装置は、血液、血漿又は血清である検体を導入する導入部と、前記検体のガレクチン－３濃度を測定する測定部と、前記ガレクチン－３濃度が、下限値７ｎｇ／ｍｌ以上かつ上限値１３ｎｇ／ｍｌ未満の注意範囲に該当するか否かに基づき早産リスクを判定する判定部と、を備える。

ここで、前記測定部は、前記ガレクチン－３濃度を生体特異的親和性に基づく測定法によって測定することが望ましい。

本態様の早産リスク判定装置で導入される検体を、在胎２２週０日から３３週６日までのヒト妊婦から採取されたものとすれば、前記したような本開示の早産リスク判定方法が本態様の早産リスク判定装置で実施される。

＜早産リスク判定装置＞
本開示のある実施態様の早産リスク判定装置１０は、図１に示すように、測定器２０と、導入部４０とを組み合わせたものである。導入部４０は、上述した検体が導入される部分であるとともにその検体中のガレクチン－３を前記したような生体特異的親和性に基づいて捕捉する部分でもあり、たとえば、図示するようなマイクロプレートをこの導入部４０として用いることができる。そして、たとえば図示するようなマイクロプレートリーダを測定器２０として用いることができる。この測定器２０には、導入部４０を載置した状態で出退可能なトレイ２２と、操作手順や測定結果等を表示可能なディスプレイ２１とが設けられている。この早産リスク判定装置１０では、前記したような生体特異的親和性に基づく測定法として、たとえばＥＬＩＳＡによるガレクチン－３濃度の測定が行われる。

マイクロプレートとしての導入部４０には複数のウェルが設けられている。固相としてのウェル底部には、前記した捕獲抗体としての抗ガレクチン－３抗体が吸着されている。この捕獲抗体を吸着した固相を前記したようにブロッキングした後、妊婦から採取された検体を適宜希釈して加え、捕獲抗体とこの検体中のガレクチン－３とが免疫複合体を形成し得る条件下に置く。固相を洗浄した後、捕獲抗体とは別のエピトープを認識する、標識した抗ガレクチン－３抗体を加え、捕獲抗体に結合したガレクチン－３と標識された抗ガレクチン－３抗体とが免疫複合体を形成し得る条件下に置く。そして再度洗浄した後、基質溶液を加え発色させる。この導入部４０は、図１に示すように測定器２０にセットされて、光学的な測定に供される。すなわち、測定器２０では、上記した免疫複合体の標識の発色を光学的に測定することで、ガレクチン－３濃度を定量的に測定することができる。

この測定器２０の機能ブロック図を図２に示す。制御部３０は、この測定器２０の各部を制御するものである。制御部３０は、後述するハードウェア構成によって、導入部４０からガレクチン－３濃度を定量的に測定する測定部３０Ａ、及び、この測定されたガレクチン－３濃度が注意範囲に該当するか否かに基づき早産リスクを判定する判定部３０Ｂとして機能する。発光部２３は、内部に収納されたトレイ２２に載置された導入部４０に所定波長の光線を照射する。受光部２４は、この導入部４０における発色を光学的に検出する。ディスプレイ２１は、この光学的な検出に基づく判定結果を表示する。

制御部３０は、図３のハードウェア構成に示すように、ＣＰＵ（ＣｅｎｔｒａｌＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇＵｎｉｔ）３１、ＲＯＭ（ＲｅａｄＯｎｌｙＭｅｍｏｒｙ）３２、ＲＡＭ（ＲａｎｄｏｍＡｃｃｅｓｓＭｅｍｏｒｙ）３３及びストレージ３４を有する。各構成は、バス３９を介して相互に通信可能に接続されている。

ＣＰＵ３１は、中央演算処理ユニットであり、各種プログラムを実行したり、各部を制御したりする。すなわち、ＣＰＵ３１は、ＲＯＭ３２又はストレージ３４からプログラムを読み出し、ＲＡＭ３３を作業領域としてプログラムを実行する。ＣＰＵ３１は、ＲＯＭ３２又はストレージ３４に記録されているプログラムに従って、上記各構成の制御及び各種の演算処理を行う。

ＲＯＭ３２は、各種プログラム及び各種データを格納する。ＲＡＭ３３は、作業領域として一時的にプログラム又はデータを記憶する。ストレージ３４は、ＨＤＤ（ＨａｒｄＤｉｓｋＤｒｉｖｅ）、ＳＳＤ（ＳｏｌｉｄＳｔａｔｅＤｒｉｖｅ）又はフラッシュメモリにより構成され、オペレーティングシステムを含む各種プログラム、及び各種データを格納する。本態様では、ＲＯＭ３２又はストレージ３４には、測定や判定に関するプログラムや各種データが格納されている。また、ストレージ３４には、測定データを保存しておくこともできる。

制御部３０は、上記ハードウェア構成のうちＣＰＵ３１が、前記したプログラムを実行することによって、測定器２０において図２に示すような測定部３０Ａや判定部３０Ｂとして機能する。すなわち、測定部３０Ａは、発光部２３及び受光部２４を制御し、導入部４０における発色を光学的に測定し、定量的な測定値を得る。判定部３０Ｂはこの測定値からガレクチン－３濃度を算出し、この算出したガレクチン－３濃度が注意範囲に該当するか否かに基づき早産リスクを判定し、さらにこの判定結果をディスプレイ２１に表示する。

なお、早産リスク判定装置１０に用いられる測定器２０としては、図１に示すようなマイクロプレートのように測定器２０とは分離した導入部４０を要する態様のみならず、生体特異的親和性に基づく測定法に適した任意の装置を用いることができる。たとえば、測定器２０に一体に設けられた導入部４０から検体を導入させ、内部で前記したような生体特異的親和性に基づく測定法を実行するような装置を用いることもできる。また、たとえば、測定器２０に一体に設けられた導入部４０から検体と抗ガレクチン－３抗体と反応させた反応液を導入させ、内部で前記したような生体特異的親和性に基づく測定法を実行するような装置を用いることもできる。

以下、実際のヒト妊婦の例によって、本態様の早産リスク判定方法の有用性を示す。

正期産妊婦３２例及び早産妊婦２３例について、在胎２２週０日から３３週６日までに採取した血清から、ガレクチン－３測定キット（Human Galectin-3 Quantikine ELISA Kit, R&D Systems, Minneapolis, MN, USA）を用法どおりに使用してガレクチン－３濃度を測定した。なお、この測定キットは、抗ガレクチン－３抗体を用いたＥＬＩＳＡによってガレクチン－３濃度を測定するものである。下記表１にて、その測定結果をガレクチン－３濃度の高い順に示す。

上記表１のデータを、カットオフ値を７．０ｎｇ／ｍｌとして２×２分割表に示したものが下記表２である。

上記表２で示した値をカイ二乗検定に供したところ、
χ^２＝４．９４（自由度＝１）
Ｐ＝０．０２６３
となり、危険率５％未満で測定値が７．０以上であった割合に有意差がある、という結果となった。

上記表１のデータを、カットオフ値を８．０ｎｇ／ｍｌとして２×２分割表に示したものが下記表３である。

上記表３で示した値をカイ二乗検定に供したところ、
χ^２＝１１．８３（自由度＝１）
Ｐ＝０．０００６
となり、危険率０．１％未満で測定値が８．０以上であった割合に有意差がある、という結果となった。

上記表１のデータを、カットオフ値を１０．０ｎｇ／ｍｌとして２×２分割表に示したものが下記表４である。

上記表４で示した値をカイ二乗検定に供したところ、
χ^２＝２１．９７（自由度＝１）
Ｐ＝０．０００００３０４
となり、危険率０．００１％未満で測定値が１０．０以上であった割合に有意差がある、という結果となった。

以上より、早産リスク判定における注意範囲の下限値としては、７．０ｎｇ／ｍｌ、８．０ｎｇ／ｍｌ及び１０．０ｎｇ／ｍｌのいずれも、統計的に意味がある、という結果となった。

下限値を７．０ｎｇ／ｍｌとした場合、上記表２から、早産例でこの下限値以上となったのは２３例中２０例（８７．０％）と極めて高い割合となった。一方、正期産例でこの下限値以上であったのは３２例中１９例（５９．４％）であった。よって、この値をカットオフ値とした場合には、偽陽性も半数以上で認められる、ということとなった。

下限値を１０．０ｎｇ／ｍｌとした場合、上記表４から、正期産でこの下限値以上であったのは３２例中２例（６．３％）に過ぎなかった。一方で、早産例では２３例中８例（３４．８％）でこの下限値を下回った。よって、この値をカットオフ値とした場合には、偽陽性となる確率は低くなるものの、約３分の１の確率で早産例を見落とす可能性があることになる。

なお、下限値をこれらの間に当たる８．０ｎｇ／ｍｌとした場合、上記表３から、正期産この下限値以上であったのは３２例中１０例（３１．３％）であったのに対し、早産例では２３例中１８例（７８．３％）であった。

以上から、早産リスクを見落としたくない場合には、注意範囲の下限値をなるべく低い値、たとえば、７．０ｎｇ／ｍｌとすることが望ましい。このような場合とは、たとえば、ヒト妊婦が早産リスク因子を有する場合、特に前記したようなリスク因子が複数該当するような場合が挙げられる。早産リスク因子には該当するものの、比較的軽度の場合には、注意範囲の下限値は８．０ｎｇ／ｍｌとしてもよい。

一方で、早産リスク因子に全く該当しないヒト妊婦の場合には、注意範囲の下限値を１０ｎｇ／ｍｌとして、無用の早産治療を受ける可能性を低減させることとしてもよい。

なお、上記表１から、注意範囲の上限値とされる１３．０ｎｇ／ｍｌを上回った例は、早産例で８例（３７．８％）であったのに対し、正期産例では０であった。早産リスクを判定する上では、この上限値を上回る例を除外する意味はない。しかし、この１３．０ｎｇ／ｍｌを下限値としていた場合、今回の例ではこの下限値を下回る１５例（＝２３－８、表１参照）の早産例が見落とされていたことになる。このような見落とされる可能性のあった早産例を、上記表２～表４を基に算出したのが下記表５である。

上記表５からは、ガレクチン－３濃度が１３．０ｎｇ／ｍｌ未満の早産例において、カットオフ値としての下限値を７．０ｎｇ／ｍｌとした注意範囲を設けた場合では、１５例中１２例（８０．０％）を要注意妊婦とすることができる。同様に、下限値を８．０ｎｇ／ｍｌとした場合では１５例中１０例（６６．７％）、下限値を１０ｎｇ／ｍｌとした場合でも１５例中７例（４６．７％）を要注意妊婦として掬い上げることができる。この点で、本態様の早産リスク判定方法において上限値と下限値とを有する注意範囲を設けることには意義がある。

本発明は、早産及び／又は低体重児出産のリスクを判定する方法並びにその装置に利用可能である。

１０早産リスク判定装置
２０測定器
２１ディスプレイ
２２トレイ
２３発光部
２４受光部
３０制御部
３０Ａ測定部
３０Ｂ判定部
３１ＣＰＵ
３２ＲＯＭ
３３ＲＡＭ
３４ストレージ
３９バス
４０導入部

Claims

ヒト妊婦の早産リスクの判定を行うために、在胎２２週０日から３３週６日までのヒト妊婦から採取された血液、血漿又は血清である検体のガレクチン－３濃度を測定することを含む方法であって、
前記検体のガレクチン－３濃度が、７ｎｇ／ｍｌ以上かつ１３ｎｇ／ｍｌ未満の注意範囲に該当することをもって早産要注意と判定するための方法。
前記検体は、早産及び／又は低体重児出産のリスク因子を有すると判定されたヒト妊婦から採取されたものである、請求項１に記載の方法。
前記リスク因子が、多胎妊娠、早産若しくは流産の経験、出生前管理の欠如、低栄養、ストレス、低年齢若しくは高年齢妊娠、喫煙、糖尿病、高血圧、感染症又は子宮若しくは子宮頸の障害である、請求項２記載の方法。
前記リスク因子が、歯周病菌に起因する歯周病の罹患である、請求項２記載の方法。
前記歯周病菌がポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas gingivalis）、タネレラ・フォーサイシア（Tannerella forsythia）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Fusobacterium nucleatum）、プレボテラ・インターメディア（Prevotella intermedia）又はアグレガチバクター・アクチノミセテムコミタンス（Aggregatibacter actinomycetemcomitans）である、請求項４記載の方法。
生体特異的親和性に基づく測定法を使用して、前記ガレクチン－３濃度を測定する、請求項１から請求項５までのいずれか１項に記載の方法。
前記測定法は、抗ガレクチン－３抗体を使用して前記ガレクチン－３濃度を測定する、請求項６記載の方法。
血液、血漿又は血清である検体を導入する導入部と、
前記検体のガレクチン－３濃度を測定する測定部と、
前記ガレクチン－３濃度が、下限値７ｎｇ／ｍｌ以上かつ上限値１３ｎｇ／ｍｌ未満の注意範囲に該当するか否かに基づき早産リスクを判定する判定部と、
を備える、早産リスク判定装置。
前記測定部は、前記ガレクチン－３濃度を生体特異的親和性に基づく測定法によって測定する、請求項８記載の早産リスク判定装置。