JP7085841B2 - ムスク化合物の同定方法 - Google Patents
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Description
嗅覚は、ヒトの感覚系のうち、最も複雑でかつ十分な解明が進んでいないものの1つである。嗅覚受容体(OR)の活性化から知覚に至るまでには、さらなる研究を要する多くのステップが存在する。ムスク化合物は、構造的に多様な化学物質群の一部であり、これには、大環状ムスク、多環状ムスク、脂環式ムスクおよびニトロムスクが含まれる。これらのムスク化合物は香水類に使用されており、多くの市販の処方物においてベースノートを形成している。したがって、新規のムスク化合物および香料におけるムスクの知覚を高める化合物を同定する必要がある。
本明細書において、配列番号2または配列番号4と少なくとも75%同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを発現するように形質転換された宿主細胞が提供される。
a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法が提供される。
本明細書中の説明および付属の特許請求の範囲に関して、「または」の使用は、他に記載がない限り「および/または」を意味する。同様に、「含む(comprise)」、「含む(comprises)」、「含む(comprising)」、「含む(include)」、「含む(includes)」および「含む(including)」は互換的であり、限定することを意図するものではない。
a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法が提供される。
a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法が提供される。
a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法が提供される。
a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法が提供される。
a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法が提供される。
a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法が提供される。
a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法が提供される。
a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法が提供される。
a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法が提供される。
a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法が提供される。
a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
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a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法が提供される。
a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法が提供される。
a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法が提供される。
a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
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a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
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a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
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a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
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a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
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a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
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a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
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a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
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a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
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a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法が提供される。
a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
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a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
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a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
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a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
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a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
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a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
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a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法が提供される。
a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法が提供される。
a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法が提供される。
a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法が提供される。
a)前記受容体またはそのキメラもしくは断片を化合物と接触させること、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法が提供される。
特に指定しない限り、以下の用語は、それらに与えられた意味を有する。
例1
多環状ムスク受容体マウスOlfr96およびヒトOR11A1の同定。
マウスOlfr96およびヒトOR11A1ムスク受容体の機能解析
機能的な用量反応実験を行うことにより、改変された細胞株の機能活性のレベルを評価した。細胞ベースのアッセイを用いて、HEK293T細胞株においてマウスOlfr96を試験し、その際、内在性RTP1遺伝子を活性化させ、匂い物質受容体のシャペロンを発現させた。Flag-Rhoでタグ付けされた受容体遺伝子を、嗅覚正規Gタンパク質Golf遺伝子と同時にトランスフェクションし、増加する濃度のムスク匂い物質トナリド、ブルカノリドおよびムスコンに曝露した。HTRFベースのキット(CisBio, cAMP dynamic 2 kit, 62AM4PEJ)を用いてサイトゾルにおけるcAMPの増加を測定することによって、匂い物質により誘発される活性を検出した。Olfr96受容体活性の用量依存的増加は、2種の多環状ムスク(トナリドおよびブルカノリド)については観察されるが、大環状ムスクであるムスコンについては観察されない(図2)。同一の条件を用いた追加の繰り返し実験において、マウスOlfr96および対応するヒトのオルソログOR11A1について、特異性評価のために設定された多様なムスクを用いて並行して二重反復試験を行った。Lucy-Flag-Rhoでタグ付けされた受容体遺伝子を、嗅覚正規Gタンパク質Golf遺伝子と同時にトランスフェクションし、増加する濃度の大環状ムスク匂い物質ムセノン、ムスコン、ハバノリドおよびエキサルトリド;多環状ムスク匂い物質トナリド、ブルカノリド、カシュメラン、ガラクソリド;脂環式ムスク匂い物質ヘルベトリド、アンブレットリドおよびロマンドリド;ならびにニトロムスク匂い物質ムスクCおよびムスクXに曝露した。Olfr96受容体活性の用量依存的増加は、3種の多環状ムスク(トナリド、カシュメランおよびブルカノリド)ならびにニトロムスク(ムスクX)については観察されるが、ムスクC、ガラクソリド、大環状ムスクまたは脂環式ムスクについては観察されず(図3)、またOR11A1受容体活性の用量依存増加は、1種の多環状ムスク(ブルカノリド)については観察されるが、大環状ムスク、脂環式ムスクもしくはニトロムスクまたは他の多環状ムスクについては観察されない(図3)。
ムスク受容体の活性化を増強する化合物の同定。
Claims (7)
- 多環状ムスク化合物およびニトロムスクから選択される1または複数のムスク化合物によって活性化される嗅覚受容体の活性を活性化、模倣、遮断、阻害、調節および/または増強する化合物を同定するための方法であって、前記受容体は、配列番号2または配列番号4と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、
前記方法は、
a)配列番号2または配列番号4と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列からなるポリペプチドであって、多環状ムスク化合物およびニトロムスクから選択される1または複数のムスク化合物によって活性化される前記ポリペプチドを発現するよう組換え改変された細胞を、多環状ムスク化合物およびニトロムスクから選択される1または複数のムスク化合物の存在下で、化合物と接触させること、ここで、前記細胞は、
1)前記ポリペプチドをコードする核酸;または
2)前記ポリペプチドをコードし、かつ、配列番号1または配列番号3と少なくとも90%同一であるヌクレオチド配列を含む核酸を含む、発現ベクター;
を含み、
b)前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすか否かを判断すること
を含む方法。 - 前記多環状化合物が、トナリド、ブルカノリドおよびカシュメランからなる群から選択される、請求項1記載の方法。
- 前記ポリペプチドは、配列番号2と同一であるアミノ酸配列を有する、請求項1または2記載の方法。
- 前記ポリペプチドは、配列番号4と同一であるアミノ酸配列を有する、請求項1または2記載の方法。
- 前記細胞が真核細胞である、請求項1から4までのいずれか1項記載の方法。
- 前記細胞が原核細胞である、請求項1から4までのいずれか1項記載の方法。
- 前記真核細胞がHEK293、CHO、アフリカツメガエル卵母細胞、COS、酵母および嗅板由来の細胞からなる群から選択される、請求項5記載の方法。
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