JP7069476B2 - ErbB2抗体およびその使用 - Google Patents
ErbB2抗体およびその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7069476B2 JP7069476B2 JP2019557693A JP2019557693A JP7069476B2 JP 7069476 B2 JP7069476 B2 JP 7069476B2 JP 2019557693 A JP2019557693 A JP 2019557693A JP 2019557693 A JP2019557693 A JP 2019557693A JP 7069476 B2 JP7069476 B2 JP 7069476B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- antibody
- nos
- erbb2
- cdr
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/77—Internalization into the cell
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
本出願は、全ての目的のためにその開示全体が参照により本明細書により組み込まれる、2017年1月6日に出願された米国仮特許出願第62/443078号に対する優先権を主張する。
「抗体」という用語は、広義の意味で使用され、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子を含み、具体的にはモノクローナル抗体(完全長モノクローナル抗体を含む)、ポリクローナル抗体および多重特異性抗体(例えば、二重特異性抗体)を網羅する。抗体(Ab)および免疫グロブリン(Ig)は同じ構造的特徴を有する糖タンパク質である。抗体は特異的標的に対する結合特異性を示すが、免疫グロブリンは抗体と、標的特異性を欠く他の抗体様分子の両方を含む。天然抗体および免疫グロブリンは通常、2本の同一の軽(L)鎖および2本の同一の重(H)鎖で構成される、約150000ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各重鎖は、一端に、可変領域(VH)、引き続いていくつかの定常領域を有する。各軽鎖は、一端に、可変領域(VL)および他端に定常領域を有する。さらに、「抗体」(Ab)または「モノクローナル抗体」(mAb)という用語は、完全抗体と、タンパク質に特異的に結合することができる抗体フラグメント(例えば、FabおよびF(ab’)2フラグメントなど)の両方を含むことを意図している。FabおよびF(ab’)2フラグメントは、完全抗体のFcフラグメントを欠き、動物または植物の循環からより迅速になくなり、完全抗体よりも非特異的組織結合が少なくなり得る(Wahlら、J Nucl Med 24:316(1983))。
重鎖フレームワーク-1(H-FR1):
Q-V-Q-L-V-Q-S-G-A-E-V-K-K-P-G-S-S-V-K-V-S-C-K-X24-S-G-G-T-F-X30(配列番号52)(式中、X24はAまたはTであり、X30はSまたはTである);
重鎖フレームワーク-2(H-FR2):W-V-R-Q-A-P-G-Q-G-L-E-W-M-G(配列番号4);
重鎖フレームワーク-3(H-FR3):
R-X67-T-I-T-A-D-X73-S-T-X76-T-A-Y-M-E-L-S-S-L-R-S-E-D-T-A-V-Y-Y-C-A-R(配列番号53)(式中、X67はAまたはVであり、X73はKまたはQであり、X76はSまたはNである)
重鎖フレームワーク-4(H-FR4):W-G-Q-G-T-L-V-T-V-S-S(配列番号6)
軽鎖フレームワーク-1(L-FR1):
D-I-Q-M-T-Q-S-P-S-S-L-S-A-S-V-G-D-R-V-T-I-T-C(配列番号7);
軽鎖フレームワーク-2(L-FR2):W-Y-Q-X38-K-P-G-K-G-P-K-L-L-I-X49(配列番号54)(式中、X38はQまたはHであり、X49はYまたはHである)、
軽鎖フレームワーク-3(L-FR3):
G-X58-P-S-R-F-S-G-S-G-S-G-X69-D-X71-T-X73-T-I-S-S-L-Q-P-E-D-F-A-T-Y-Y-C(配列番号55)(式中、X58はIまたはVであり、X69はK、TまたはRであり、X71はYまたはFであり、X73はLまたはFである);
軽鎖フレームワーク-4(L-FR4):F-G-Q-G-T-K-V-E-I-K(配列番号10)
からなる群から選択されるアクセプターフレームワーク配列の1つまたは複数(例えば、結合ドメイン1つ当たりいずれか1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、6つ、7つまたは8つ)を含む。
本発明の一態様は、トラスツズマブ相乗中和能力を有するErbB2に結合する単離マウスモノクローナル抗体を提供する。本発明の別の態様は、ErbB2に結合するキメラ抗体を提供する。本発明の別の態様は、ErbB2に結合するCDRグラフト抗体またはその抗原結合部分を提供する。本発明の別の態様は、ErbB2に結合するヒト化抗体またはその抗原結合部分を提供する。一実施形態では、抗体またはその部分が単離抗体またはその単離部分である。別の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合部分が中和抗ErbB2抗体である。有利には、このようなErbB2に結合する抗体またはその抗原結合部分が、個体(ヒトまたは他の哺乳動物)へ投与され得るトラスツズマブ機能的相乗パートナーとしての用途を見出す。好ましくは、本発明の抗体またはその抗原結合部分が、トラスツズマブと組み合わせると、ErbB2陽性癌細胞の増殖を相乗的に阻害する。
ハイブリドーマ、組換え体およびファージディスプレイ技術、またはこれらの組み合わせの使用を含む多種多様な当技術分野で公知の技術を使用して、モノクローナル抗体を調製することができる。例えば、当技術分野で公知であり、例えば、Harlowら、Antibodies:A Laboratory Manual、第2版、(Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring Harbor、1988)に教示されている技術を含むハイブリドーマ技術を使用して、モノクローナル抗体を作製することができる。
抗体を作製するための技術を上で説明してきた。本発明はさらに、相乗生理活性(細胞増殖阻害活性など)を含む抗体組み合わせを単離する方法を提供する。本発明の抗体組み合わせは、以下の所望の特性を有する少なくとも2つ以上のモノクローナル抗体を含む:<1>抗体がErbB2上に存在する別個の非重複エピトープに結合する;<2>抗体が新規な抗体であるまたは組み合わせの一部が新規な抗体である;<3>抗体組み合わせ(本発明の任意の抗体+トラスツズマブ)の有効性が、各個々の成分の有効性または各個々の有効性の和よりも強力である。好ましくは、本発明は、一方が本発明の5つのモノクローナル抗体で、他方がトラスツズマブである2つのモノクローナル抗体の相乗組み合わせを提供した。このような二抗体組み合わせの抗腫瘍活性は、いずれかの成分の抗腫瘍活性または各個々の有効性の和よりも強力である。
本発明の抗体は、当技術分野で公知のいくつかの技術のいずれかによって作製することができる。例えば、宿主細胞からの発現、ここでは重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターを標準的な技術によって宿主細胞にトランスフェクトする。「トランスフェクション」という用語の種々の形態は、外因性DNAを真核宿主細胞に導入するために一般的に使用される多種多様な技術、例えば電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、DEAE-デキストラントランスフェクションなどを包含することを意図している。本発明の組換え抗体を発現するための代表的な哺乳動物宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣(CHO細胞)(例えば、KaufmanおよびSharp、J.Mol.Biol.、159:1~621(1982)に記載されるDHFR選択マーカーと共に使用される、UrlaubおよびChasin、Proc.Natl.Acad.Sci.米国、77:4216~4220(1980)に記載されるdhfr-CHO細胞を含む)、NSO骨髄腫細胞、COS細胞およびSP2細胞が含まれる。抗体をコードする組換え発現ベクターを哺乳動物宿主細胞に導入する場合、宿主細胞中での抗体の発現、またはより好ましくは宿主細胞が増殖される培養培地への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間、宿主細胞を培養することによって、抗体を産生させる。標準的なタンパク質精製法を使用して、抗体を培養培地から回収することができる。
ヒトErbB2に結合する単離マウスモノクローナル抗体のVHおよびVL領域のアミノ酸配列を、表13A及び表13Bでクローン4C9、4H2、4G6、5F12および5G9について示す(以下の実施例参照)。本明細書に記載される単離抗ErbB2抗体CDR配列は、本発明によって単離され、そこから誘導されたCDR配列を含むポリペプチドを含むErbB2抗体のファミリーを確立する。モノクローナル抗体およびそのヒト化抗体誘導体の可変領域およびCDRの配列を表13A、表13B、表17A、表17B、表20Aおよび表20Bに列挙する。本発明による抗体について、ヒトErbB2に関して好ましいErbB2結合および/または中和活性を有するCDRを作製および選択するために、それだけに限らないが、本明細書に具体的に記載されるものを含む、本発明の抗体を作製し、これらの抗体のErbB2結合および/または中和特性を評価するための当技術分野で公知の標準的な方法を使用することができる。
CDR-H1は、
X1-X2-X3-X4-X5(配列番号11)(式中、
X1はSであり、
X2はYであり、
X3はTまたはYであり、
X4はMまたはIであり、
X5はHである)
4C9 CDR-H1(配列番号17)の残基31~35
4H2 CDR-H1(配列番号19)の残基31~35
4G6 CDR-H1(配列番号21)の残基31~35
5F12 CDR-H1(配列番号23)の残基31~35
4G9 CDR-H1(配列番号25)の残基31~35
5F12 CDR-H2VH.V1(配列番号27)の残基31~35
5F12 CDR-H1 VH.1(配列番号28)の残基31~35
5F12 CDR-H1 VH.2(配列番号29)の残基31~35
5F12 CDR-H1 VH.3(配列番号30)の残基31~35
5F12 CDR-H1 VH.4(配列番号31)の残基31~35
5G9 CDR-H1 VH.V1(配列番号39)の残基31~35
5G9 CDR-H1 VH.1(配列番号40)の残基31~35
5G9 CDR-H1 VH.2(配列番号41)の残基31~35
5G9 CDR-H1 VH.3(配列番号42)の残基31~35
5G9 CDR-H1 VH.4(配列番号43)の残基31~35
5G9 CDR-H1 VH.5(配列番号44)の残基31~35
からなる群から選択され、
CDR-H2は、
X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17(配列番号12)(式中、
X1はYであり、
X2はIであり、
X3はNであり、
X4はPであり、
X5はSであり、
X6はSであり、
X7はSまたはDであり、
X8はYであり、
X9はTであり、
X10はAまたはNであり、
X11はYであり、
X12はNであり、
X13はQであり、
X14はKまたはNであり、
X15はFであり、
X16はKまたはRであり、
X17はDである)
4C9 CDR-H2(配列番号17)の残基50~66
4H2 CDR-H2(配列番号19)の残基50~66
4G6 CDR-H2(配列番号21)の残基50~66
5F12 CDR-H2(配列番号23)の残基50~66
4G9 CDR-H2(配列番号25)の残基50~66
5F12 CDR-H2VH.V1(配列番号27)の残基50~66
5F12 CDR-H2VH.1(配列番号28)の残基50~66
5F12 CDR-H2VH.2(配列番号29)の残基50~66
5F12 CDR-H2VH.3(配列番号30)の残基50~66
5F12 CDR-H2VH.4(配列番号31)の残基50~66
5G9 CDR-H1 VH.V1(配列番号39)の残基50~66
5G9 CDR-H2VH.1(配列番号40)の残基50~66
5G9 CDR-H2VH.2(配列番号41)の残基50~66
5G9 CDR-H2VH.3(配列番号42)の残基50~66
5G9 CDR-H2VH.4(配列番号43)の残基50~66
5G9 CDR-H2VH.5(配列番号44)の残基50~66
からなる群から選択され、
CDR-H3は、
X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9(配列番号13)(式中、
X1はAであり、
X2はSであり、
X3はAまたはSであり、
X4はFであり、
X5はSであり、
X6はLであり、
X7はDであり、
X8はFであり、
X9はWである)
4C9 CDR-H3(配列番号17)の残基95~103
4H2 CDR-H3(配列番号19)の残基95~103
4G6 CDR-H3(配列番号21)の残基95~103
5F12 CDR-H3(配列番号23)の残基95~103
4G9 CDR-H3(配列番号25)の残基95~103
5F12 CDR-H3VH.V1(配列番号27)の残基95~103
5F12 CDR-H3VH.1(配列番号28)の残基95~103
5F12 CDR-H3VH.2(配列番号29)の残基95~103
5F12 CDR-H3VH.3(配列番号30)の残基95~103
5F12 CDR-H3VH.4(配列番号31)の残基95~103
5G9 CDR-H1 VH.V1(配列番号39)の残基95~103
5G9 CDR-H3VH.1(配列番号40)の残基95~103
5G9 CDR-H3VH.2(配列番号41)の残基95~103
5G9 CDR-H3VH.3(配列番号42)の残基95~103
5G9 CDR-H3VH.4(配列番号43)の残基95~103
5G9 CDR-H3VH.5(配列番号44)の残基95~103
からなる群から選択され、
CDR-L1は、
X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11(配列番号14)(式中、
X1はKであり、
X2はAであり、
X3はSであり、
X4はHまたはQであり、
X5はDであり、
X6はIであり、
X7はNであり、
X8はKであり、
X9はYであり、
X10はIであり、
X11はAである)
4C9 CDR-L1(配列番号18)の残基24~34
4H2 CDR-L1(配列番号20)の残基24~34
4G6 CDR-L1(配列番号22)の残基24~34
5F12 CDR-L1(配列番号24)の残基24~34
4G9 CDR-L1(配列番号26)の残基24~34
5F12 CDR-L1VL.V1(配列番号32)の残基24~34
5F12 CDR-L1VL.1(配列番号33)の残基24~34
5F12 CDR-L1VL.2(配列番号34)の残基24~34
5F12 CDR-L1VL.3(配列番号35)の残基24~34
5F12 CDR-L1VL.4(配列番号36)の残基24~34
5F12 CDR-L1VL.5(配列番号37)の残基24~34
5F12 CDR-L1VL.6(配列番号38)の残基24~34
5G9 CDR-L1VL.V1(配列番号45)の残基24~34
5G9 CDR-L1VL.1(配列番号46)の残基24~34
5G9 CDR-L1VL.2(配列番号47)の残基24~34
5G9 CDR-L1VL.3(配列番号48)の残基24~34
5G9 CDR-L1VL.4(配列番号49)の残基24~34
5G9 CDR-L1VL.5(配列番号50)の残基24~34
5G9 CDR-L1VL.6(配列番号51)の残基24~34
からなる群から選択され、
CDR-L2は、
X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7(配列番号15)(式中、
X1はYまたはSであり、
X2はTであり、
X3はSであり、
X4はTであり、
X5はLであり、
X6はQまたはYであり、
X7はPである)
4C9 CDR-L2(配列番号18)の残基50~56
4H2 CDR-L2(配列番号20)の残基50~56
4G6 CDR-L2(配列番号22)の残基50~56
5F12 CDR-L2(配列番号24)の残基50~56
4G9 CDR-L2(配列番号26)の残基50~56
5F12 CDR-L2VL.V1(配列番号32)の残基50~56
5F12 CDR-L2VL.1(配列番号33)の残基50~56
5F12 CDR-L2VL.2(配列番号34)の残基50~56
5F12 CDR-L2VL.3(配列番号35)の残基50~56
5F12 CDR-L2VL.4(配列番号36)の残基50~56
5F12 CDR-L2VL.5(配列番号37)の残基50~56
5F12 CDR-L2VL.6(配列番号38)の残基50~56
5G9 CDR-L2VL.V1(配列番号45)の残基50~56
5G9 CDR-L2VL.1(配列番号46)の残基50~56
5G9 CDR-L2VL.2(配列番号47)の残基50~56
5G9 CDR-L2VL.3(配列番号48)の残基50~56
5G9 CDR-L2VL.4(配列番号49)の残基50~56
5G9 CDR-L2VL.5(配列番号50)の残基50~56
5G9 CDR-L2VL.6(配列番号51)の残基50~56
からなる群から選択され、
CDR-L3は、
X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9(配列番号16)(式中、
X1はLであり、
X2はQまたはNであり、
X3はYであり、
X4はDであり、
X5はNであり、
X6はLであり、
X7はLであり、
X8はWであり、
X9はTである)
4C9 CDR-L3(配列番号18)の残基89~97
4H2 CDR-L3(配列番号20)の残基89~97
4G6 CDR-L3(配列番号22)の残基89~97
5F12 CDR-L3(配列番号24)の残基89~97
4G9 CDR-L3(配列番号26)の残基89~97
5F12 CDR-L3VL.V1(配列番号32)の残基89~97
5F12 CDR-L3VL.1(配列番号33)の残基89~97
5F12 CDR-L3VL.2(配列番号34)の残基89~97
5F12 CDR-L3VL.3(配列番号35)の残基89~97
5F12 CDR-L3VL.4(配列番号36)の残基89~97
5F12 CDR-L3VL.5(配列番号37)の残基89~97
5F12 CDR-L3VL.6(配列番号38)の残基89~97
5G9 CDR-L3VL.V1(配列番号45)の残基89~97
5G9 CDR-L3VL.1(配列番号46)の残基89~97
5G9 CDR-L3VL.2(配列番号47)の残基89~97
5G9 CDR-L3VL.3(配列番号48)の残基89~97
5G9 CDR-L3VL.4(配列番号49)の残基89~97
5G9 CDR-L3VL.5(配列番号50)の残基89~97
5G9 CDR-L3VL.6(配列番号51)の残基89~97
からなる群から選択される。
キメラ抗体は、抗体の異なる部分が異なる動物種に由来する分子、例えばマウスモノクローナル抗体に由来する可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体である。例えば、Morrison、Science、229 1202~1207(1985);Oiら、BioTechniques、4:214(1986);Gilliesら、J.Immunol.Methods 125:191~202(1989) 米国特許第5807715号;同第4816567号;および同第4816397号を参照されたい。さらに、適切な生物活性のヒト抗体分子からの遺伝子と合わせて、適切な抗原特異性のマウス抗体分子からの遺伝子をスプライシングすることによる「キメラ抗体」を作製するために開発された技術を使用することができる。例えば、Morrisonら、Proc.Natl.Acad.Sci. 米国、81:6851~6855(1984);Neubergerら、Nature、312:604~608(1984);Takedaら、Nature、314:452~454(1985)を参照されたい。
本発明の単離抗ErbB2抗体CDR配列を使用してCDRグラフト抗体を作製して元の抗体の特性を調節することができる。このような特性には、それだけに限らないが、結合速度論、親和性、生物活性、種交差反応性、分子交差反応性、エピトープ、物理化学特性、薬物動態特性、薬力学特性または薬理学特性が含まれる。CDRグラフト抗体はヒト抗体または非ヒト霊長類抗体の重鎖および軽鎖可変領域配列を含み、VHおよび/またはVLのCDR領域の1つまたは複数が元の抗ErbB2抗体のCDR配列で置き換えられている。任意のヒトまたは非ヒト霊長類抗体のフレームワーク配列が、CDRグラフトのための鋳型として働き得る。しかしながら、このようなフレームワーク上での直鎖置換はしばしば、抗原に対する結合親和性のいくらかの喪失をもたらす。ヒトまたは他の種の抗体が相同性になればなるほど、CDRと新たなヒトフレームワークまたは非ヒト霊長類フレームワークを組み合わせることによって、親和性または他の特性を減少させ得るような歪みがCDRに導入される可能性が少なくなる。そのため、CDRから離れたヒト可変領域フレームワークを置き換えるように選択される可変フレームワークが、ヒト抗体可変領域フレームワークと少なくとも30%の配列同一性を有することが好ましい。CDRから離れたヒト可変領域フレームワークを置き換えるように選択される可変領域フレームワークが、ヒト抗体可変領域フレームワークと少なくとも40%の配列同一性を有することがより好ましい。CDRから離れたヒト可変フレームワークを置き換えるように選択される可変領域フレームワークが、ヒト抗体可変領域フレームワークと少なくとも50%の配列同一性を有することがより好ましい。CDRから離れたヒト可変フレームワークを置き換えるように選択される可変領域フレームワークが、ヒト抗体可変領域フレームワークと少なくとも60%の配列同一性を有することがより好ましい。新たなヒトまたは非ヒト霊長類可変領域フレームワークとCDRから離れた元のヒト可変領域フレームワークが、少なくとも70%の配列同一性を有することがより好ましい。新たなヒトまたは非ヒト霊長類可変領域フレームワークとCDRから離れた元のヒト可変領域フレームワークが、少なくとも75%の配列同一性を有することがさらにより好ましい。新たなヒトまたは非ヒト霊長類可変領域フレームワークとCDRから離れた元のヒト可変領域フレームワークが、少なくとも80%の配列同一性を有することが最も好ましい。高度に相同性のヒトまたは非ヒト霊長類フレームワークを使用して元のヒト抗ErbB2抗体のCDRをグラフトする場合でさえ、得られるグラフト抗体はなお、抗原に対する結合親和性をある程度喪失し得る。この場合、親和性を回復するために、新たにグラフトされた抗体の対応する部分に元の抗体の少なくとも1つまたは複数のキーフレームワーク残基置換を含めることが必要である。このような主要残基は、
CDRに隣接する残基;
グリコシル化部位残基;
レア残基;
ヒトErbB2と相互作用することができる残基;
カノニカル残基;
重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間の接触残基;
Vernierゾーン内の残基;および
Chothiaによって定義された可変重鎖CDR1とKabatによって定義された第1の重鎖フレームワークとの間で重複する領域の残基
からなる群から選択され得る。
本発明の組成物はヒト化抗体を作製する必要を排除するが、本発明の組成物を使用して、ヒト化ErbB2抗体を調製することができる。ヒト化抗体は、1つまたは複数の非ヒト種の相補性決定領域(CDR)およびヒト免疫グロブリン分子のフレームワーク領域を有する、所望の抗原に結合する非ヒト種抗体の抗体分子である。公知のヒトIg配列は、ワールドワイドウェブ(www.)を介して入手可能なウェブサイト、例えばncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi;atcc.org/phage/hdb.html;sciquest.com/;abcam.com/;antibodyresource.com/onlinecomp.html;public.iastate.eduLabout.pedro-/research_tools.html;mgen.uniheidelberg.de/SD/IT/IT.html;whfreeman.com/immunology-/CH05/kuby05.htm;library.thinkquest.org/12429/Immune/Antibody.html;hhmi.org/grants/lectures/l996/vlab/;path.-cam.ac.uk/.about.mrcV/mikeimages.html;antibodyresource.com/;mcb.harvard.edu/BioLinks-/Immunology.html;immunologylink.com/;pathbox.wustl.eduLabout.hcenter/index.html;bio-tech.ufl.edu/.about.hcl/;pebio.com/pa/340913-/340913.html;nal.usda.gov/awic/pubs/antibody/;m.ehimeu.acjp/.about.yasuhito-/Elisa.html;biodesign.com/table.asp;icnet.uk/axp/facs/davies/lin-ks.html;biotech.ufl.edu-/.about.fccl/protocol.html;isac-net.org/sites_geo.html;aximtl.imt.uni-marburg.de/.about.rek/AEP-Start.html;baserv.uci.kun.nl/.about.jraats/linksl.html;recab.uni-hd.de/immuno.bme.nwu.edu/;mrc-cpe.cam.ac.uk/imt-doc/public/INTRO.html;ibt.unam.mx/-virN_mice.html;imgt.cnusc.fr:8104/;biochem.ucl.ac.uk/.about.martin/abs/index.html;anti-body.bath.ac.uk/;abgen.cvm.tamu.edu/lab/wwwabgen.html;unizh.ch/.about.honegger/AHO-seminar/Slide01.html;cryst.bbk.ac.uk/about.ubcgOVs/;nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.htm;path.cam.ac.uk/.about.mrcV/humanisation/TAHHP.html;ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.-html;biosci.missouri.edu/smithgp/index.html;cryst.bioc.cam.ac.uk/.about.fmolina/Webpages-/Pept/spottech.html;jerini.de/frroducts.htm;patents.ibm.com/ibm.html. Kabatら、Sequences of Proteins of Immunological Interest、U.S.Dept.Health(1983)で開示されている。このようなインポート配列を使用して、免疫原性を減少させる、結合、親和性、結合速度、解離速度、結合活性、特異性、半減期または当技術分野で公知の任意の他の適切な特性を増強または改変することができる。
好ましくは、本発明の抗ErbB2抗体は、例えば当技術分野で公知のいくつかのin vitroおよびin vivoアッセイのいずれか1つによって評価されるように、トラスツズマブと組み合わせると、ErbB2陽性腫瘍増殖活性を阻害する高い能力を示す。例えば、トラスツズマブ+本発明のこれらの抗体のいずれか1つの組み合わせのIC50は、in vitro細胞増殖阻害アッセイ(表11)および/またはin vivo腫瘍モデル(表24)および同じin vitro細胞ベースバイオアッセイでの各個々の抗体のIC50の約50%であり、トラスツズマブ+本発明のこれらの抗体のいずれか1つの組み合わせの最大阻害能力は81%~95%の範囲にあり、これに対して、各個々の抗体の最大阻害能力は13%~70%の範囲にある。
(i)モノクローナル抗体
ヒトErbB2抗体に結合する能力を考慮すると、酵素免疫測定法(ELISA)、放射免疫測定法(RIA)または組織免疫組織化学などの当技術分野で公知の従来の免疫測定法のいずれかを使用して、抗体およびその部分を含む、本明細書に記載されるErbB2抗体を使用して試料(例えば、混合物、溶液または生体試料、例えば血液、血清または血漿)中のErbB2を検出または測定することができる。
二重特異性抗体は、少なくとも2つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。代表的な二重特異性抗体はErbB2タンパク質の2つの異なるエピトープに結合し得る。他のこのような抗体は、EGFR、ErbB3および/またはErbB4についてErbB2結合部位を組み合わせ得る。あるいは、抗ErbB2アームを、T細胞受容体分子(例えば、CD2もしくはCD3)などの白血球、またはIgGのためのFc受容体(FcγR)、例えばFcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)およびFcγRIII(CD16)上の誘因分子に結合するアームと組み合わせて、細胞防御機構をErbB2発現細胞に集中させることができる。二重特異性抗体を使用して、細胞傷害剤を、ErbB2を発現している細胞に局在化させることもできる。これらの抗体は、ErbB2結合アームと、細胞傷害剤(例えば、サポリン、抗インターフェロンα、ビンカアルカロイド、リシンA鎖、メトトレキサートまたは放射性同位体ハプテン)に結合するアームとを有する。二重結合性抗体は、完全長抗体または抗体フラグメント(例えば、F(ab’)2二重特異性抗体)として調製することができる。国際公開第96/16673号は二重特異性抗ErbB2/抗FcγRIII抗体を記載しており、米国特許第5837234号は二重特異性抗ErbB2/抗FcγRI抗体を開示している。二重特異性抗ErbB2/Fcα抗体は国際公開第98/02463号に示されている。米国特許第5821337号は二重特異性抗ErbB2/抗CD3抗体を教示している。
本発明の抗体および組成物の治療的使用の別の選択肢は、イムノコンジュゲート、すなわち、1つまたは複数の抗癌剤にコンジュゲートした抗体の形態にある。特に、別個のErbB2エピトープに結合する2つ以上の本発明の個々の抗体を含む組成物の場合、これにより、細胞表面上に架橋した抗体-受容体格子が生成され、それによって単一モノクローナル抗体の使用と比較して増加したレベルの受容体内部移行が潜在的に得られると考えられる。そのため、このような組成物の個々の抗体の1つまたは複数と1つまたは複数の抗癌剤のコンジュゲーションは、コンジュゲートした抗癌剤を腫瘍細胞の内側に特異的かつ有効に送達し、それによって、本発明の抗ErbB2抗体の、改善された腫瘍細胞死滅活性を提供するとの効果を増強する。
本発明の抗体および組成物は、当の状態を治療するのに有効な量で、すなわち、所望の結果を達成するのに必要な投与量および期間で投与される。治療上有効量は、治療される特定の状態、患者の年齢、性別および体重、ならびに抗ErbB2抗体が単独治療として投与されているのか、1つまたは複数の追加の抗癌治療と組み合わせて投与されているのかどうかなどの因子によって変化し得る。
[1-1]ハイブリドーマ技術を使用したマウス抗ErbB2モノクローナル抗体の作製
マウスを当技術分野で公知の方法に従って免疫した(例えば、E Harlow、D.Lane、Antibody:A Laboratory Manual、(Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring Harbor、ニューヨーク、1998))。
SP2/0細胞(ATCC CRL-1581)を培養して融合直前に対数期段階に到達させた。当技術分野で公知の方法(例えば、Kohler GおよびMilstein C、「Continuous cultures of fused cell secreting antibody of predefined specificity」、Nature、256:495~497(1975))に従って、免疫化マウス脾細胞を無菌的に調製し、SP2/0細胞と融合した。その後、融合した「ハイブリッド細胞」をDMEM/20%FCS/HAT培地中96ウェルプレートに分注した。融合7~10日後に生存ハイブリドーマコロニーを顕微鏡下で観察し、その後、各ウェルの上清を以下の手順に従ってELISAフォーマットを使用してハイブリドーマスクリーニングに供した:<1>ELISAプレートを、4℃で一晩、50μLのヒトErbB2(PBS中2.0μg/mL)でコーティングした;<2>プレートを250μLのPBS/0.5%Tween20で3回洗浄し、200μLのブロッキング緩衝液(0.5%Tween20を含むPBS中2%BSA)でブロッキングした;<3>希釈血清またはハイブリドーマ上清(100μL)を各ウェルに添加し、室温で1時間インキュベートした;<4>次いで、プレートをPBS/0.5%Tween20で3回洗浄し、ヤギ抗マウスIgG-HRPを検出に使用し、結合ODを450nmで観察した。次いで、組換えヒトErbB2-ECDに結合する抗体を分泌する陽性ハイブリドーマを選択し、その後の細胞ベース結合スクリーニングのために新たな96ウェルプレートに移した。本発明の融合によって、約30000~40000個のHAT耐性生存ハイブリドーマが生成され、1415個の組換えヒトErbB2-ECDタンパク質に特異的に結合する陽性ハイブリドーマが得られた。このようなハイブリドーマスクリーニングの1つのプレートを、陽性ハイブリドーマに下線を付し、イタリック体にして、以下の表4として例示する。
実施例1のELISAスクリーニングが完了したら、ErbB陽性ハイブリドーマを新たな69ウェルプレートに移し、HAT選択しないで新鮮なDMEM培地を供給し、3~5日後、ハイブリドーマ培地を細胞結合スクリーニングに供した。手短に言えば、SK-BR3細胞(ATCC番号HTB-30、高レベルErbB2)またはMCF7細胞(ATCC番号HTB-30、低レベルErbB2)を、1~5×105個細胞/ウェルで96ウェル(丸底)プレートに分注し、4℃で1時間、ハイブリドーマ上清(50μL)とインキュベートした。次いで、細胞をFACS緩衝液(2%FBSを含むPBS pH7.2)で3回洗浄し、100μLのヤギ抗マウスIgG-F(ab)2-Alexa(JIR番号:115-545-006)に再懸濁した。次いで、4℃で1時間インキュベートした後、細胞をFACS緩衝液(2%PBSを含むPBS pH7.2)で3回洗浄し、次いで、FACS緩衝液に再懸濁し、引き続いてFACS機器(FACSCalibur(商標)Flow Cytometer、BD Biosciences)によって結合シグナル収集および分析を行った。SK-BR3細胞およびMCF7細胞に対する同じハイブリドーマ上清の結合シグナルを計算し、SK-BR3結合/MCF7結合の比をさらに計算した。上記ELISAスクリーニングの1415個の陽性ハイブリドーマの中から、高比率のSK-BR3結合/MCF7結合クローン(クローンA2、クローンA7、クローンA11、クローンB2、クローンB5、クローンB7、クローンB9など)を含む上位672のハイブリドーマを、細胞バンキングおよびその後の機能的スクリーニングのために陽性クローンとして単離した。このような細胞結合スクリーニングの1つのプレートを以下の表5として例示する。
実施例2の細胞結合スクリーニングからの陽性ハイブリドーマ細胞に基づいて、各細胞株のハイブリドーマ上清をベンチマーク抗体(例えば、トラスツズマブおよび/またはペルツズマブ)に基づくエピトープグループ分けでさらに評価して、本発明の抗体をベンチマーク競合群とベンチマーク非競合群の2つのカテゴリーに分けた。手短に言えば、96ウェルELISAプレートを組換えヒトErbB2-ECD(0.1μg/mL)でコーティングし、4℃で一晩インキュベートした。濾紙上に穏やかに捨て、軽くたたくことによってコーティング溶液を除去し、200μL/ウェルのブロッキング緩衝液を添加し、37℃で2時間インキュベートする。50μLの目的の抗体を添加し、37℃で30分間インキュベートし、引き続いて50μLの0.03μg/mLビオチン標識ベンチマーク抗体(例えば、ビオチン-トラスツズマブまたはビオチン-ペルツズマブ)を添加し、37℃でさらに30分間インキュベートし、次いで、プレートをPBSTで3回洗浄する。100μL/ウェルのストレプトアビジン-HRP(1:5000)を添加し、37℃で30分間インキュベートする。PBSTで3回洗浄する。100μL/ウェルのTMB基質を添加し、室温で15分間インキュベートする。50μL/ウェルの1N HClを添加して反応を終了させる。450nmでMicroplate Readerによってプレートを読み取る。以下の表6は、トラスツズマブ競合ELISA結果を例示している。表6中、F7ウェルは正常なヒトIgG(対照として)であり、G7ウェルは正常なマウスIgG(対照として)であり、H7ウェルはベンチマーク対照(すなわち、トラスツズマブ、5μg/mL)である。表6に示されるように、トラスツズマブはビオチン-トラスツズマブのErbB2-ECD結合能力を遮断するが、ヒトIgGもマウスIgGも遮断しない。同様に、試料C6、C7、D2、D3、D4およびH1~H6(太字、イタリックおよび下線)は一定の阻害活性を示し、これらがトラスツズマブエピトープと同じまたは重複するエピトープに結合することを示している。このプレートの残りの試料(A1~A7など)は、組換えヒトErbB2-ECDに対するトラスツズマブ結合活性を阻害せず、これらの抗体がトラスツズマブエピトープとは別個のエピトープに結合することを示している。トラスツズマブエピトープ競合グループ分けに基づいて、本発明は、トラスツズマブ結合エピトープと別個のエピトープに結合するErbB2抗体を同定するのに成功した。
標準的なアプローチとは異なり、本発明は、初期段階での大規模なトラスツズマブベース相乗生理活性スクリーニングを行った。実施例2から単離された抗原陽性ハイブリドーマについて、各ハイブリドーマの細胞培養上清を、BT474乳癌細胞および/またはMDA-MB-VII175細胞の細胞増殖を阻害するトラスツズマブ相乗効力についてさらにスクリーニングした。手短に言えば、細胞を、2000個細胞/ウェルで100μL培地を含むプレートに播種する。細胞播種の翌日、40μLの細胞培養培地を吸引し、引き続いてベンチマーク抗体(トラスツズマブ、ペルツズマブおよびトラスツズマブ+ペルツズマブの組み合わせ)、実施例2からの個々のハイブリドーマ上清、およびトラスツズマブと実施例2からの各個々のハイブリドーマ上清の組み合わせを含む60μL抗体試料を添加する。120~144時間細胞を培養し続ける。CellTiter Gloを10分間添加する。試験細胞培養プレートをSpectraMax M5プレートリーダーによって分析した。好ましくは、トラスツズマブの細胞増殖阻害を相乗的に促進するハイブリドーマ上清を明らかにするために、目的の試料のセットは、(a)トラスツズマブ単独活性群(HOA);ペルツズマブ単独活性群(POA);(c)トラスツズマブ/ペルツズマブ(50%トラスツズマブ/50%ペルツズマブ)組み合わせ群(HPC);(d)Mab非依存性活性群(MIA):試験中のハイブリドーマ上清試料;(e)トラスツズマブ相乗活性群(HSA):トラスツズマブ+試験中のハイブリドーマ上清試料;(f)陰性対照群(NC):ヒトIgG+マウスIgGを含む。トラスツズマブ相乗候補を選択するための基準は以下に基づく:同じ条件下で、HSAの細胞増殖阻害活性がHOAまたはMIAよりも高く、HOA+MIAの和の50%よりも高い場合、試験中の試料は細胞増殖阻害アッセイでトラスツズマブ相乗生理活性を含む。好ましくは、同じ細胞培養条件下で、HSAの細胞増殖阻害活性がHPC(トラスツズマブ/ペルツズマブ群)よりも高い場合、試験中の試料はペルツズマブよりも高いトラスツズマブ相乗生理活性を示すと考えられる。上記スクリーニング後、上位672の実施例2からのハイブリドーマ上清を細胞増殖阻害のトラスツズマブ相乗生理活性について評価およびランク付けし、上位15の候補を限界希釈によってサブクローニングして各細胞株のクローン性を確保した。その中でも、実施例としての5つのハイブリドーマ細胞株(4C9、4H2、4G6、5F12および5G9)を抗体産生のために使用し、対応する精製IgGを上記プロトコルに従ってトラスツズマブ相乗生理活性についてさらに確認した。結果を実施例5および表11に要約する。
[5-1]本発明の精製IgGのErbB2結合活性確認
本発明の5つの抗体の対応する精製IgGをSDS-PAGE分析に供し、結果を図1に示した。全5つの抗体を、組換えErbB2-ECDおよびErbB2陽性細胞に結合することができるIgG1/κであるとしてアイソタイピングする(以下の表7参照)。
本発明の5つの抗体の対応する精製IgGも、捕捉ELISAによって組換えヒトErbb2に対する結合活性について評価した。手順を以下のように手短に記載する:96ウェルプレートを0.5μg/mLの抗ErbB2抗体で一晩コーティングし、37℃で1時間、PBST中1%BSAによってブロッキングした。1:5系列希釈で、2μg/mLで開始するビオチン-ヒトErbB2-ECDの系列希釈試料を添加する。プレートをPBSTで3回洗浄し、100μLのHRP-ストレプトアビジン(1:5000)を各ウェルに添加する。37℃でさらに40分間インキュベートする。プレートをPBSTで3回洗浄し、100μL/ウェルのTMBを添加して、室温で15分間展開し、引き続いて50μLの1N HClでクエンチする。OD値について450nmでプレートを読み取る。Prismソフトウェアを使用することによって結合EC50を計算し、結果は以下の表8にある。
実施例1に記載される間接ELISA法を使用して、マウス、ラット、アカゲザル(Macaca mulatta)、カニクイザル(Macacca fascicularis)およびヒトなどの様々な種に由来する組換えErbB2-ECDに対する本発明の抗体の結合活性を調査した。手短に言えば、96ウェルELISAプレートを、100μL/ウェルで1μg/mLの様々な種の組換えErbB2-ECDでコーティングし、4℃で一晩インキュベートする。濾紙上に穏やかに捨て、軽くたたくことによってコーティング溶液を除去する。200μL/ウェルのブロッキング緩衝液を添加し、37℃で1~2時間インキュベートする。本発明の精製抗体を添加し、37℃で1時間インキュベートする。プレートをPBSTで3回洗浄し、ヤギ抗マウスIgG-HRP 100μL/ウェルを添加し、37℃で1時間インキュベートする。プレートをPBSTで3回洗浄し、15分後に100μL/ウェルのTMBを添加し、50μL/ウェルの1N HClを添加する。450nm波長でMicroplate Readerを用いてプレートを読み取る。本発明の5つの抗体はアカゲザル(Macaca mulatta)、カニクイザル(Macacca fascicularis)に由来する組換えErbB2に交差反応性であるが、ラットおよびマウス対応物には交差反応性ではないことを示す結果を以下の表9に要約する。
実施例3に記載される方法とは異なり、精製抗体のエピトープグループ分けを競合ELISA後の捕捉ELISAによって評価した。<1>捕捉ELISAを行って、ビオチン標識組換えErbB2-ECDの結合EC80の濃度を決定した。手短に言えば、96ウェルプレートを0.5μg/mLの抗ErbB2抗体で一晩コーティングし、37℃で1時間、PBST中1%BSAによってブロッキングした。プレートをPBSTで3回洗浄し、100μLのHRP-ストレプトアビジン(1:5000)を各ウェルに添加する。37℃でさらに40分間インキュベートする。プレートをPBSTで3回洗浄し、100μL/ウェルのTMBを添加して、室温で15分間展開させ、引き続いて50μL 1N HClでクエンチする。OD値について450nmでプレートを読み取って、各試験抗体に対するビオチン標識組換えErbB2-ECDのEC80濃度を得た;<2>競合ELISAを行って、2つの抗体が別個のエピトープに結合するのか、同じエピトープに結合するのかを決定する。抗原に結合する2つの抗体の交差競合能力が高ければ高いほど、2つの抗体のエピトープがより同じになる(2つの試験抗体の別個のエピトープの可能性が少なくなる)。手短に言えば、上記と同じ手順後に96ウェルプレートをコーティングした。EC80の濃度のErbB2-ECD-ビオチンと10μg/mLの試験抗体のプレインキュベート混合物をプレートに添加し、1時間インキュベートする。プレートをPBSTで3回洗浄し、100μLのHRP-ストレプトアビジン(1:5000)を各ウェルに添加する。37℃でさらに40分間インキュベートする。上記の捕捉ELISAと同じ手順に従って、OD450値を得て、交差競合能力を計算する。交差競合能力が80%以上である場合に、2つの抗体を同じエピトープに結合するとみなす。表10に示すように、4C9、4H2、4G6、5F12および5G9は互いに強力な交差競合性能力を示すが、ErbB2-ECDとの結合においてトラスツズマブともペルツズマブとも競合せず、本発明の抗体が同じエピトープまたは高度に重複するエピトープに結合するが、トラスツズマブエピトープともペルツズマブエピトープとも別個のエピトープに結合することを示す。
実施例4に記載される方法を使用することによって、本発明によって単離した精製抗体(4C9、4H2、4G6、5F12および5G9)のトラスツズマブ相乗生理活性を、BT474細胞増殖阻害アッセイによって評価した。結果(図2A~図2Eおよび表11参照)は、本発明の抗体が、細胞増殖の一定の阻害活性を示すが、トラスツズマブと組み合わせると強力な相乗阻害活性を示すことを実証した。トラスツズマブ+本発明の抗体の細胞増殖阻害活性は、診療所で使用される公知の組み合わせであるトラスツズマブとペルツズマブの活性よりも高い。
以下のプロトコルを使用して、Trizol試薬(Invitrogen、15596)を使用して、全RNAをハイブリドーマ細胞ペレットから抽出した。1mLのTrizol試薬を添加して細胞(DPBS中で調製したおよそ1×107個細胞)を破壊し、室温で5分間インキュベートした。200μLのクロロホルムを添加する。15秒間激しく振盪する。室温で3分間インキュベートする。4℃で15分間、12000×gで遠心分する。水相を新たな1.5mL遠心管に移す。500μLのイソプロピルアルコールを添加する。室温で10分間インキュベートする。4℃で10分間、12000×gで遠心分離する。1mLの75%エタノールで洗浄する。4℃で5分間、7500rpmで遠心分離する。10分間風乾する。40μLのDEPC処理水に再懸濁する。55℃で10分間インキュベートする。NanodropでA260を測定する。
抗ErbB2モノクローナル抗体(上記の表13Aおよび表13B)の重鎖および軽鎖の可変領域をそれぞれヒトIgG1重鎖およびκ軽鎖定常領域にインフレームでクローニングした。得られたキメラ抗体の活性を捕捉ELISAアッセイ(以下の表14)で確認したら、その親マウスモノクローナル抗体に匹敵していた。
実施例5に記載されるのと同じ手順に従って、BT474乳癌細胞の細胞増殖を阻害するトラスツズマブ相乗効力について、対応するキメラ抗体を評価した。結果を表16に要約する。
5F12マウス抗ErbB2抗体(上記の表13Aおよび表13B)をヒト化した。ヒト化変異体アミノ酸配列VH.v1、VH.1、VH.2、VH.3、VH.4、VL.v1、VL.1、VL.2、VL.3、VL.4、VL.5、VL.6(以下の表17Aおよび表17B)を、最も相同性の高いヒト生殖系列に基づいてDNA配列に変換し、合成した。重鎖変異体については、ヒト生殖系列重鎖アクセプター配列hIGHV1-46 FR1、hIGHV1-46 FR2、hIGHV1-46 FR3およびhIGHJ4 FR4を使用した(上記の表2参照)。軽鎖変異体VL.1、VL.1aおよびVL.1bについては、ヒト生殖系列軽鎖アクセプター配列hIGKV1-33 FR1、hIGKV1-33 FR2、hIGKV1-33 FR3およびhIGKJ1 FR4を使用した(上記の表3参照)。個々の構築物を配列検証して正確性をチェックした。次いで、陽性変異体を250mis Luriaブロス+アンピシリンに接種し、37℃で一晩培養した。Qiagen maxi prepキットを使用して、変異体培養物からDNAを抽出した。
5G9マウス抗ErbB2抗体(上記の表13Aおよび表13B)をヒト化した。ヒト化変異体アミノ酸配列VH.v1、VH.1、VH.2、VH.3、VH.4、VL.v1、VL.1、VL.2、VL.3、VL.4、VL.5、VL.6(以下の表20Aおよび表20B)を、最も相同性の高いヒト生殖系列に基づいてDNA配列に変換し、合成した。重鎖変異体については、ヒト生殖系列重鎖アクセプター配列hIGHV1-69 FR1、hIGHV1-69 FR2、hIGHV1-69 FR3およびhIGHJ1 FR4を使用した(上記の表2参照)。軽鎖変異体VL.v1、VL.1、VL.2、VL.3、VL.4、VL.5、VL.6については、ヒト生殖系列軽鎖アクセプター配列hIGKV1-27 FR1、hIGKV1-27 FR2、hIGKV1-27 FR3およびhIGKJ1 FR4を使用した(上記の表3参照)。個々の構築物を配列検証して正確性をチェックした。次いで、陽性変異体を250mL Luriaブロス+アンピシリンに接種し、37℃で一晩培養した。Qiagen maxi prepキットを使用して、変異体培養物からDNAを抽出した。
BT474乳癌異種移植片腫瘍モデルのin vivo試験を、契約番号E0627-T1401でCrown Bioscienceによって商業的に行った。本試験は、(a)トラスツズマブ単独での処置;(b)トラスツズマブと本発明によって単離された抗体のいずれか1つの組み合わせ;(c)トラスツズマブとペルツズマブの組み合わせの抗腫瘍活性を調査した。
NCI-N87異種移植片モデルを使用して、トラスツズマブと組み合わせた本発明の抗体の相乗有効性をさらに評価した。この試験の手順を以下のように手短に要約する:<1>NCI-N87細胞を対数期に培養し、回収した;<2>NCI-N87細胞をPBSに再懸濁し、細胞密度を8×107個細胞/mLに調節し、その後、100μLまたは8×107個細胞を胸腺欠損ヌード雌マウスの左側腹領域に皮下注射した;<3>マウスを群にランダム化する前に、腫瘍をおよそ100~200mm3のサイズに増殖させた;<4>動物に、1週間に2回、指示される用量で抗体の腹腔内投与を受けさせ、腫瘍サイズならびに体重を1週間に2回測定した。腫瘍量(TV)を、式TV=1/2×a×b2(式中、「a」は大きい腫瘍直径を表し、「b2」は最も小さい腫瘍直径を表す)を使用して計算した。
その内部移行速度に対する二抗体組み合わせの相乗効果を調査するために、細胞ベースエンドサイトーシスアッセイを行った。手短な手順は以下の通りである:<1>SKBR3細胞をPBSで洗浄し、次いで、37℃で約2分間、トリプシンで消化した。細胞を冷FACS緩衝液に再懸濁し、3×106個細胞/mLに調節した;<2>1mLの細胞懸濁液をFACS管に添加し、ここに最終濃度2μg/mLのFITCコンジュゲートまたはAPCコンジュゲート抗体(トラスツズマブ、またはペルツズマブ、または本発明の抗体)またはその組み合わせを添加した。細胞を氷上で1時間インキュベートした。次いで、細胞を1000rpm、5分間、4℃で遠心分離し、上清をデカントした。次いで、細胞をFACS緩衝液で2回洗浄し、1mLのFACS緩衝液に再懸濁した。2×200μLの細胞懸濁液をそれぞれ0分で対照および試料として取った。細胞の残りを1000rpm、4℃で5分間遠心分離して上清を除去した;<3>細胞を培地(DMEM+10%FBS+PS)に再懸濁し、内部移行のために37℃でインキュベートした。次いで、200μLの試料を30分および2時間でそれぞれ取った。試料を氷上で5分間冷却し、1000rpm、4℃で5分間遠心分離して上清を除去し、次いで、FACS緩衝液で1回洗浄した;<4>250μLのストリップ緩衝液を細胞に添加し、室温で7分間インキュベートした。次いで、細胞を1000rpm、4℃で5分間遠心分離して上清を除去し、FACS緩衝液で2回洗浄した;<5>200μLの固定緩衝液を細胞に添加し、4℃で少なくとも30分間インキュベートした。次いで、細胞をフローサイトメーターによって分析した;<6>工程2で取った0分での対照および試料について、一方を固定緩衝液で直接固定し(工程5)、もう一方を工程4および工程5で処理した(ストリップ緩衝液および固定緩衝液を使用);<7>抗体または抗体組み合わせの内部移行速度を以下のように計算した:平均変化率=[内部移行群(MFI-MFIブランク)]/[結合親和性群(MFI-MFIブランク)]。
Crown Bioscience(Beijing)Inc.の確立され、検証されたPDXモデルとして、69歳女性アジア人患者由来のHUPRIME(登録商標)胃癌異種移植片モデルGA0060をこの有効性試験に選択する。Balb/cヌードマウスにおけるHUPRIME(登録商標)胃癌異種移植片モデルGA0060の処置での抗ErbB2抗体組み合わせのin vivo有効性試験を、契約番号E0627-T1501/T1502で、Crown Bioscience Inc.(Beijing)によって行った。手短に言えば、選択された原発ヒト胃癌組織を接種したストックマウスからの腫瘍断片を採取し、BALB/cヌードマウスへの接種に使用した。各マウスに、腫瘍発達のために、原発ヒト胃癌モデルGA0060断片(P7、直径2~4mm)を右側腹部に皮下接種した。平均腫瘍サイズが約200mm3に到達したら、処置を開始した。マウスを、1群当たり6匹で、その腫瘍サイズに従って、12の実験群にランダムに割り当てた。その日を0日目として示した。試験物を、以下の表30に示される所定のレジメンに従って、0日目~28日目に腫瘍保有マウスに投与した。
Claims (18)
- 受容体チロシンプロテインキナーゼErbB-2(ErbB2)に特異的に結合する抗体または抗原結合フラグメントを含む結合タンパク質であって、前記抗体または前記抗原結合フラグメントがCDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含み、それぞれ、CDR-H1が配列番号80を含有し、CDR-H2が配列番号81を含有し、CDR-H3が配列番号82を含有し、CDR-L1が配列番号83を含有し、CDR-L2が配列番号84を含有し、かつ、CDR-L3が配列番号85を含有する、結合タンパク質。
- 請求項1に記載の結合タンパク質であって、前記抗体または前記抗原結合フラグメントが、配列番号25,26,39~51からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる少なくとも1つの可変領域を含む、結合タンパク質。
- 請求項1または請求項2に記載の結合タンパク質であって、前記抗体または前記抗原結合フラグメントが、配列番号25および26、配列番号39および45、配列番号39および46、配列番号39および47、配列番号39および48、配列番号39および49、配列番号39および50、配列番号39および51、配列番号40および45、配列番号40および46、配列番号40および47、配列番号40および48、配列番号40および49、配列番号40および50、配列番号40および51、配列番号41および45、配列番号41および46、配列番号41および47、配列番号41および48、配列番号41および49、配列番号41および50、配列番号41および51、配列番号42および45、配列番号42および46、配列番号42および47、配列番号42および48、配列番号42および49、配列番号42および50、配列番号42および51、配列番号43および45、配列番号43および46、配列番号43および47、配列番号43および48、配列番号43および49、配列番号43および50、配列番号43および51、配列番号44および45、配列番号44および46、配列番号44および47、配列番号44および48、配列番号44および49、配列番号44および50、および配列番号44および51からなる群から選択される2つの可変領域を含む、結合タンパク質。
- 請求項1から請求項3のいずれか一項に記載の結合タンパク質であって、前記抗体または前記抗原結合フラグメントが、マウスモノクローナル抗体、マウス抗体由来抗原結合フラグメント、キメラ抗体、キメラ抗原結合フラグメント、ヒト化抗体およびヒト化抗原結合フラグメントからなる群から選択される抗体または抗原結合フラグメントである、結合タンパク質。
- 請求項1から請求項4のいずれか一項に記載の結合タンパク質であって、i)ErbB2媒介生理活性を調節する、ii)ErbB2陽性細胞と接触すると前記ErbB2陽性細胞に内部移行される、iii)ErbB2陽性細胞の増殖を阻害する、および/または、iv)ErbB2陽性腫瘍およびトラスツズマブ耐性腫瘍の増殖をトラスツズマブと相乗的に阻害する、結合タンパク質。
- 請求項1から請求項5のいずれか一項に記載の結合タンパク質であって、単独で、または、トラスツズマブと組み合わせて、ErbB2陽性腫瘍およびトラスツズマブ耐性腫瘍の増殖を少なくとも70%阻害する、結合タンパク質。
- 請求項1から請求項6のいずれか一項に記載の結合タンパク質と、リンカーポリペプチドまたは免疫グロブリン定常領域と、薬剤とを含む結合タンパク質コンジュゲートであって、前記薬剤がイメージング剤、治療薬、細胞傷害剤および免疫付着分子からなる群から選択される、結合タンパク質コンジュゲート。
- 請求項1から請求項6のいずれか一項に記載の結合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
- 請求項8に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
- i)請求項1から請求項6のいずれか一項に記載の結合タンパク質、請求項7に記載の結合タンパク質コンジュゲート、請求項8のポリヌクレオチドまたは請求項9に記載のベクターの、治療上有効量と、ii)薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
- 請求項10に記載の医薬組成物であって、ErbB2活性が有害である障害を治療するための少なくとも1つの追加の薬剤をさらに含む、医薬組成物。
- 請求項11に記載の医薬組成物であって、前記少なくとも1つの追加の薬剤が、治療薬、イメージング剤、抗新生物薬、化学療法薬、血管新生阻害剤、抗VEGF抗体、抗EGFR抗体、抗c-Met抗体、抗ErbB3抗体、抗ErbB2抗体、抗CD20抗体、アフリベルセプト、キナーゼ阻害剤、同時刺激分子遮断薬、抗B7.2抗体、CTLA4-Ig、接着分子遮断薬、抗Eセレクチン抗体、抗Lセレクチン抗体、抗サイトカイン抗体またはその機能的フラグメント、抗IL-18抗体、抗TNF抗体、抗IL-6抗体、メトトレキサート、コルチコステロイド、シクロスポリン、ラパマイシン、FK506、DNAアルキル化剤、シスプラチン、カルボプラチン、抗チューブリン剤、パクリタキセル、ドセタキセル、ドキソルビシン、ゲムシタビン、ジェムザール、アントラサイクリン、アドリアマイシン、トポイソメラーゼI阻害剤、トポイソメラーゼII阻害剤、5-フルオロウラシル(5-FU)、ロイコボリン、イリノテカン、受容体チロシンキナーゼ阻害剤、アポトーシス阻害剤、Bcl2/Bclx阻害剤、エルロチニブ、ゲフィチニブ、COX-2阻害剤、セレコキシブ、シクロスポリン、ラパマイシン、検出可能な標識またはレポーター分子、TNFアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋弛緩薬、麻薬、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗微生物薬、抗乾癬薬、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫化、免疫グロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医薬品、抗うつ薬、統合失調症治療薬、刺激剤、喘息薬、βアゴニスト、吸入ステロイド、エピネフリン、そのエピネフリン類似体、サイトカイン、およびサイトカインアンタゴニストからなる群から選択される少なくとも1つの追加の薬剤である、医薬組成物。
- 請求項11に記載の医薬組成物であって、前記少なくとも1つの追加の薬剤が、ErbB2に結合することができる抗体または抗原結合フラグメントである、医薬組成物。
- 請求項11から請求項13のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、前記少なくとも1つの追加の薬剤が、トラスツズマブ、ペルツズマブまたはこれらの組み合わせを含む少なくとも1つの追加の薬剤である、医薬組成物。
- 対象の疾患または障害の治療に用いるための、請求項10から請求項14のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、ErbB2活性が前記疾患または前記障害において有害である、医薬組成物。
- 請求項15に記載の医薬組成物であって、前記疾患または障害が、乳癌、胃癌(gastric cancer)、結腸癌、直腸癌、肺癌、中咽頭癌、下咽頭癌、食道癌、胃癌(stomach cancer)、膵臓癌、肝臓癌、胆嚢癌、胆管癌、小腸癌、尿道癌、女性生殖系癌、男性生殖系癌、内分泌線癌、皮膚癌、血管腫、黒色腫、肉腫、脳腫瘍、神経癌、眼腫瘍、髄膜癌、造血器腫瘍からの固形腫瘍、腫瘍転移、眼血管新生、浮腫、関節リウマチ、動脈硬化プラーク、クローン病、炎症性腸疾患、難治性腹水、乾癬、サルコイドーシス、動脈硬化症、敗血症、消化性潰瘍、火傷、膵炎、多嚢胞性卵巣(POD)、子宮内膜症、子宮類線維症、良性前立腺肥大症、T細胞急性リンパ芽球性白血病(T-ALL)、皮質下梗塞と白質脳症を伴う常染色体優性脳動脈症(CADA-SIL)、多発性硬化症(MS)、ファロー四徴症(TOF)、アラジール症候群(AS)、黄斑変性および加齢性黄斑変性疾患、ならびに異常なErbB2活性を特徴とする他の血管新生非依存性および依存性疾患からなる群から選択される疾患または障害である、医薬組成物。
- 請求項15に記載の医薬組成物であって、前記疾患または障害が、乳癌、胃癌(gastric cancer)および肺癌からなる群から選択される疾患または障害である、医薬組成物。
- ErbB2陽性細胞の増殖を阻害するのに用いるための、請求項10から請求項14のいずれか一項に記載の医薬組成物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762443078P | 2017-01-06 | 2017-01-06 | |
US62/443,078 | 2017-01-06 | ||
PCT/IB2018/000078 WO2018127791A2 (en) | 2017-01-06 | 2018-01-04 | Erbb2 antibodies and uses therefore |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020508694A JP2020508694A (ja) | 2020-03-26 |
JP2020508694A5 JP2020508694A5 (ja) | 2021-02-12 |
JP7069476B2 true JP7069476B2 (ja) | 2022-05-18 |
Family
ID=62791131
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019557693A Active JP7069476B2 (ja) | 2017-01-06 | 2018-01-04 | ErbB2抗体およびその使用 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11390685B2 (ja) |
EP (1) | EP3565845A4 (ja) |
JP (1) | JP7069476B2 (ja) |
KR (1) | KR102646046B1 (ja) |
CN (1) | CN110709419B (ja) |
WO (1) | WO2018127791A2 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN117264063B (zh) * | 2023-03-22 | 2024-04-23 | 赛业(苏州)生物科技有限公司 | 一种抗gpc3抗体及其应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001000245A3 (en) | 1999-06-25 | 2001-10-25 | Genentech Inc | HUMANIZED ANTI-ErbB2 ANTIBODIES AND TREATMENT WITH ANTI-ErbB2 ANTIBODIES |
JP2013529904A (ja) | 2010-05-27 | 2013-07-25 | ゲンマブ エー/エス | Her2に対するモノクローナル抗体 |
JP2016501234A (ja) | 2012-12-03 | 2016-01-18 | メリマック ファーマスーティカルズ, インコーポレイテッドMerrimack Pharmaceuticals, Inc. | Her2陽性癌を処置するための併用療法 |
Family Cites Families (44)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB8308235D0 (en) | 1983-03-25 | 1983-05-05 | Celltech Ltd | Polypeptides |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US5807715A (en) | 1984-08-27 | 1998-09-15 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin |
US6492107B1 (en) | 1986-11-20 | 2002-12-10 | Stuart Kauffman | Process for obtaining DNA, RNA, peptides, polypeptides, or protein, by recombinant DNA technique |
DE3590766C2 (ja) | 1985-03-30 | 1991-01-10 | Marc Genf/Geneve Ch Ballivet | |
US4676980A (en) | 1985-09-23 | 1987-06-30 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Target specific cross-linked heteroantibodies |
US5618920A (en) | 1985-11-01 | 1997-04-08 | Xoma Corporation | Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use |
US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
GB8607679D0 (en) | 1986-03-27 | 1986-04-30 | Winter G P | Recombinant dna product |
ATE108068T1 (de) | 1987-09-23 | 1994-07-15 | Bristol Myers Squibb Co | Antikörper-heterokonjugate zur töting von hiv- infizierten zellen. |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
CA2016842A1 (en) | 1989-05-16 | 1990-11-16 | Richard A. Lerner | Method for tapping the immunological repertoire |
CA2016841C (en) | 1989-05-16 | 1999-09-21 | William D. Huse | A method for producing polymers having a preselected activity |
EP0478627A4 (en) | 1989-05-16 | 1992-08-19 | William D. Huse | Co-expression of heteromeric receptors |
ATE144793T1 (de) | 1989-06-29 | 1996-11-15 | Medarex Inc | Bispezifische reagenzien für die aids-therapie |
GB8928874D0 (en) | 1989-12-21 | 1990-02-28 | Celltech Ltd | Humanised antibodies |
GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
CA2089362C (en) | 1990-08-24 | 2000-11-21 | William D. Huse | Methods of synthesizing oligonucleotides with random codons |
JP3298879B2 (ja) | 1990-12-20 | 2002-07-08 | イグジス,インコーポレイテッド | 結合タンパク質の最適化 |
US5571894A (en) | 1991-02-05 | 1996-11-05 | Ciba-Geigy Corporation | Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor |
EP0586505A1 (en) | 1991-05-14 | 1994-03-16 | Repligen Corporation | Heteroconjugate antibodies for treatment of hiv infection |
DE69233482T2 (de) | 1991-05-17 | 2006-01-12 | Merck & Co., Inc. | Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen |
DE69233254T2 (de) | 1991-06-14 | 2004-09-16 | Genentech, Inc., South San Francisco | Humanisierter Heregulin Antikörper |
ES2136092T3 (es) | 1991-09-23 | 1999-11-16 | Medical Res Council | Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados. |
WO1993006213A1 (en) | 1991-09-23 | 1993-04-01 | Medical Research Council | Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach |
US5587458A (en) | 1991-10-07 | 1996-12-24 | Aronex Pharmaceuticals, Inc. | Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof |
WO1993008829A1 (en) | 1991-11-04 | 1993-05-13 | The Regents Of The University Of California | Compositions that mediate killing of hiv-infected cells |
JP4157160B2 (ja) | 1991-12-13 | 2008-09-24 | ゾーマ テクノロジー リミテッド | 改変抗体可変領域の調製のための方法 |
DE69333807T2 (de) | 1992-02-06 | 2006-02-02 | Chiron Corp., Emeryville | Marker für krebs und biosynthetisches bindeprotein dafür |
CA2140280A1 (en) | 1992-08-17 | 1994-03-03 | Avi J. Ashkenazi | Bispecific immunoadhesins |
US5639641A (en) | 1992-09-09 | 1997-06-17 | Immunogen Inc. | Resurfacing of rodent antibodies |
AU6132994A (en) | 1993-02-02 | 1994-08-29 | Scripps Research Institute, The | Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains |
CA2207869A1 (en) | 1994-12-02 | 1996-06-06 | Chiron Corporation | Method of promoting an immune response with a bispecific antibody |
US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
US5837234A (en) | 1995-06-07 | 1998-11-17 | Cytotherapeutics, Inc. | Bioartificial organ containing cells encapsulated in a permselective polyether suflfone membrane |
US6331431B1 (en) | 1995-11-28 | 2001-12-18 | Ixsys, Inc. | Vacuum device and method for isolating periplasmic fraction from cells |
US5714352A (en) | 1996-03-20 | 1998-02-03 | Xenotech Incorporated | Directed switch-mediated DNA recombination |
US5922845A (en) | 1996-07-11 | 1999-07-13 | Medarex, Inc. | Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies |
US7371376B1 (en) * | 1996-10-18 | 2008-05-13 | Genentech, Inc. | Anti-ErbB2 antibodies |
AU8691398A (en) | 1997-08-04 | 1999-02-22 | Ixsys, Incorporated | Methods for identifying ligand specific binding molecules |
PE20070207A1 (es) | 2005-07-22 | 2007-03-09 | Genentech Inc | Tratamiento combinado de los tumores que expresan el her |
KR101453462B1 (ko) * | 2013-05-16 | 2014-10-23 | 앱클론(주) | Her2에 특이적으로 결합하는 항체 |
CN105985435B (zh) * | 2015-01-30 | 2019-10-15 | 嘉和生物药业有限公司 | 全人源her2抗体的突变抗体及其编码基因和应用 |
AU2016280159A1 (en) | 2015-06-17 | 2017-12-07 | Genentech, Inc. | Anti-HER2 antibodies and methods of use |
-
2018
- 2018-01-04 KR KR1020197022997A patent/KR102646046B1/ko active IP Right Grant
- 2018-01-04 EP EP18736067.2A patent/EP3565845A4/en active Pending
- 2018-01-04 CN CN201880015752.1A patent/CN110709419B/zh active Active
- 2018-01-04 JP JP2019557693A patent/JP7069476B2/ja active Active
- 2018-01-04 US US16/475,770 patent/US11390685B2/en active Active
- 2018-01-04 WO PCT/IB2018/000078 patent/WO2018127791A2/en unknown
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001000245A3 (en) | 1999-06-25 | 2001-10-25 | Genentech Inc | HUMANIZED ANTI-ErbB2 ANTIBODIES AND TREATMENT WITH ANTI-ErbB2 ANTIBODIES |
JP2013529904A (ja) | 2010-05-27 | 2013-07-25 | ゲンマブ エー/エス | Her2に対するモノクローナル抗体 |
JP2016501234A (ja) | 2012-12-03 | 2016-01-18 | メリマック ファーマスーティカルズ, インコーポレイテッドMerrimack Pharmaceuticals, Inc. | Her2陽性癌を処置するための併用療法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Mol Cancer Ther,2015年,Vol.14, No.3,p.669-680 |
Proteins,2008年,Vol.70,p.938-949 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2018127791A2 (en) | 2018-07-12 |
JP2020508694A (ja) | 2020-03-26 |
KR20190114985A (ko) | 2019-10-10 |
CN110709419B (zh) | 2023-11-28 |
US11390685B2 (en) | 2022-07-19 |
KR102646046B1 (ko) | 2024-03-08 |
EP3565845A2 (en) | 2019-11-13 |
EP3565845A4 (en) | 2020-10-07 |
WO2018127791A3 (en) | 2018-08-16 |
US20200002434A1 (en) | 2020-01-02 |
CN110709419A (zh) | 2020-01-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US9469689B2 (en) | Therapeutic DLL4 binding proteins | |
US9469688B2 (en) | Therapeutic DLL4 binding proteins | |
KR20170020874A (ko) | 항―axl 항체 | |
KR20170020476A (ko) | 항―axl 항체 | |
JP2014519317A (ja) | 抗神経成長因子抗体並びに前記の製造及び使用方法 | |
US11851460B2 (en) | PD1 binding agents | |
TW201134489A (en) | Basigin binding proteins | |
US11673963B2 (en) | CRTAM antibodies and methods of treating cancer | |
JP7069476B2 (ja) | ErbB2抗体およびその使用 | |
JP2020508694A5 (ja) | ||
US20240132614A1 (en) | Crtam antibodies and methods of treating cancer | |
AU2015202980A1 (en) | Therapeutic DLL4 binding proteins |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20201231 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20201231 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20210507 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211102 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220131 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220405 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20220411 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7069476 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |