JP7039261B2 - 組織切片の特定領域からの生体分子採取方法および装置 - Google Patents
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Description
組織切片を固定する試料台、
前記組織切片の光学イメージを取得する顕微鏡システム、
前記組織切片の特定の領域の少なくとも一部を破砕するエネルギー印加システム、
前記組織切片上に液滴を形成する分注ピペットシステム、
前記顕微鏡システムで取得した光学イメージ上で前記組織切片上の前記特定の領域を指定するコンピュータシステム
を備え、前記液滴に、破砕された前記特定の領域からの生体分子が溶解または分散することを特徴とする装置を提供する。
組織切片を顕微鏡観察する工程、
前記組織切片の特定の領域を指定する工程、
形成される液滴が前記特定の領域を含むように前記組織切片上に回収溶液を分注し、液滴を形成する工程、
前記液滴が前記組織切片上に存在する状態で前記特定の領域の少なくとも一部にエネルギーを印加する工程、
前記液滴を回収する工程
を含む方法を提供する。
本発明は、組織切片上の顕微鏡画像イメージに対応した位置の微小領域から選択的に生体分子を採取、回収および/または抽出するための装置および方法に関する。特に、顕微鏡画像イメージに対応した位置の単一細胞から個別に核酸を採取、回収および/または抽出するための装置および方法に関する。
組織切片(例えば、ホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)組織切片や凍結切片など)を固定する試料台、
組織切片上の特定の領域(単一細胞または微小領域)を光学イメージ上で指定するための、前記組織切片の光学イメージを取得する手段としての顕微鏡システム、
前記組織切片の特定の領域の少なくとも一部を破砕する手段としてのエネルギー印加システム、
生体分子を溶解または分散するための回収溶液を、形成される液滴が特定の領域を含むまたは覆うように前記組織切片上に分注し、液滴を形成する手段としての分注ピペットシステム、
前記顕微鏡システムで取得した光学イメージ上で前記組織切片上の前記特定の領域を指定するコンピュータシステム
を備え、前記液滴には、破砕された前記特定の領域からの生体分子が溶解または分散する。
組織切片を顕微鏡観察する工程、
前記組織切片の特定の領域(単一細胞または微小領域)を指定する工程、
生体分子を溶解または分散するための回収溶液を、形成される液滴が前記特定の領域を含むまたは覆うように前記組織切片上に分注し、液滴を形成する工程、
前記液滴が前記組織切片上に存在する状態で前記特定の領域の少なくとも一部にエネルギーを印加(例えばレーザ光照射、超音波照射など)する工程、
前記液滴を回収する工程
を含む。
基板上の凍結切片または接着性培養細胞上に撥水性薄膜を形成する工程、
前記凍結切片または培養細胞を顕微鏡観察する工程、
前記凍結切片または培養細胞の特定の細胞を指定する工程、
形成される液滴が前記特定の細胞を含むように前記撥水性薄膜上に回収溶液を分注し、液滴を形成する工程、
前記液滴が前記撥水性薄膜上に存在する状態で前記特定の細胞の少なくとも一部にエネルギーを印加する工程、
前記液滴を回収する工程
を含む。
本実施例は、レーザを用いてホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)サンプルから作成した組織切片中の一部の微小領域を破砕し、この領域中の生体分子を採取・回収・抽出する装置および方法に関する例である。
図1に本実施例で示す組織切片からの生体分子の採取・回収方法のフローを示す。以下の説明で(番号)は図1中の各ステップの番号を示す。
次に組織切片上の複数の単一細胞または領域中から生体分子を採取・回収する装置について説明する。図2に装置の構成例を示した。装置は樹脂包埋した組織切片1を固定する試料台2と顕微鏡システム3とレーザ照射システム4、分注ピペットシステム5、溶液回収チューブ6、組織切片の顕微鏡イメージを表示する表示装置7とこれらのシステムを制御し取得した画像を保存し位置情報に変換するためのコンピュータシステム8およびこのコンピュータシステムに採取する細胞や領域を入力するための入力デバイス9から構成されている。この入力デバイスの代わりに細胞や領域を指定する他のコンピュータシステムをコンピュータシステム8に接続してもよい。以下に詳細を記す。
本実施例は分注回収用ピペットシステム上の分注チップが複数配置された場合の装置構成に関するものである。
本実施例は、振動発生デバイス(超音波ニードル)を用いて組織切片を破砕する例である。図2のレーザ照射システムの代わりに、振動発生デバイスとして超音波を組織切片の特定の位置に印加するためのシステムを設置している。図6に装置の構成例を示す。圧電素子61に圧電ニードル(硬度の高い金属ニードルまたはセラミック製のニードル)63を固定し、超音波振動が組織切片の特定の領域または細胞中の一部の領域に伝わる構成にする。特定の領域または細胞に超音波を印加するためにニードルをモータドライバ62で印加位置を選択する。超音波振動発生させるために特定の周波数の高周波を発生させる高周波発生装置64を圧電素子(超音波素子)に接続した。ここで示した装置では、超音波印加システムは顕微鏡システムと組織切片に対して同じ側に配置しなければならないため、顕微鏡システムを用いて光学イメージを取得し、生体分子を採取する領域または細胞を指定した後に、対応する座標に対して、超音波が印加させるようにコンピュータシステム8を用いてモータドライブ62を制御する。超音波振動を用いることによって、物理的振動が直接組織切片に伝達されるため、生体分子への影響を最小限に抑えて、組織を破砕することができる。
本実施例は実施例1に記載の装置を基礎として、凍結切片およびシャーレ上培養細胞からの生体分子を採取する例である。実施例2のように液滴形成を複数にすることも可能であるとともに、実施例3のようにレーザによらず超音波を使った破砕を併用することも可能である。
11…ガラス板、12…突起、13…モータドライブステージ、14…マーカ、15…切り抜き領域
61…圧電素子、62…モータドライバ、63…圧電ニードル、64…高周波発生装置
71…凍結切片、72…撥水性樹脂膜
Claims (15)
- 組織切片の特定の領域から液滴中に生体分子を採取するための装置であって、
組織切片を固定する試料台、
前記組織切片の光学イメージを取得する顕微鏡システム、
前記組織切片の特定の領域の少なくとも一部を破砕するエネルギー印加システム、
前記組織切片上に液滴を形成する分注ピペットシステム、
前記顕微鏡システムで取得した光学イメージ上で前記組織切片上の前記特定の領域を指定するコンピュータシステム
を備え、前記液滴に、破砕された前記特定の領域からの生体分子が溶解または分散することを特徴とする装置。 - 前記エネルギー印加システムが、パルスレーザを含むレーザ照射システム、または圧電素子を含む振動発生デバイスである、請求項1に記載の装置。
- 前記組織切片上に形成した液滴の位置を安定化させるための針状部品、および
前記針状部品を前記組織切片の表面近傍に維持する機構
をさらに備える、請求項1又は2に記載の装置。 - 前記試料台には、前記組織切片を貼り付けた透明板を固定することができ、
前記コンピュータシステムが、前記透明板上のマーカを認識する機構を備える、請求項1~3のいずれか1項に記載の装置。 - 前記特定の領域が単一細胞または微小領域である、請求項1~4のいずれか1項に記載の装置。
- 前記組織切片がホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)切片である、請求項1~5のいずれか1項に記載の装置。
- 前記組織切片が、凍結切片または培養細胞とその上に配置された撥水性薄膜とから構成されるものである、請求項1~5のいずれか1項に記載の装置。
- 組織切片の特定の領域から液滴中に生体分子を採取する方法であって、
組織切片を顕微鏡観察する工程、
前記組織切片の特定の領域を指定する工程、
形成される液滴が前記特定の領域を含むように前記組織切片上に回収溶液を分注し、液滴を形成する工程、
前記液滴が前記組織切片上に存在する状態で前記特定の領域の少なくとも一部にエネルギーを印加する工程、
前記液滴を回収する工程
を含むことを特徴とする方法。 - エネルギーの印加がレーザ光照射または超音波照射である、請求項8に記載の方法。
- 前記液滴中に核酸プローブが含まれる、請求項8又は9に記載の方法。
- 前記液滴中にビーズに固定された核酸プローブが含まれる、請求項8又は9に記載の方法。
- 前記液滴中にビーズに固定された抗体が含まれる、請求項8又は9に記載の方法。
- 前記組織切片が凍結切片であり、該凍結切片上に撥水性薄膜を形成し、該撥水性薄膜上に液滴を形成する工程をさらに含む、請求項8~12のいずれか1項に記載の方法。
- 基板上に接着した培養細胞の特定の細胞中の生体分子を液滴中に採取する方法であって、
基板上に接着した培養細胞上に撥水性薄膜を形成する工程、
前記培養細胞を顕微鏡観察する工程、
前記培養細胞の特定の細胞を指定する工程、
形成される液滴が前記特定の細胞を含むように前記撥水性薄膜上に回収溶液を分注し、液滴を形成する工程、
前記液滴が前記撥水性薄膜上に存在する状態で前記特定の細胞の少なくとも一部にエネルギーを印加する工程、
前記液滴を回収する工程
を含むことを特徴とする方法。 - 生体分子を解析する方法であって、
請求項8~14のいずれか1項に記載の方法により液滴中に生体分子を採取し、前記液滴を回収する工程と、
前記回収された液滴から生体分子を採取する工程、および/または前記回収された液滴から生体分子を採取し、該生体分子を増幅し、配列決定する工程と
を含むことを特徴とする方法。
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