JP7034900B2 - 修飾自己エピトープに対する抗腫瘍免疫応答 - Google Patents
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Description
VIGMDVAASEFFcitSGKYDLD(Eno1 241-259)、
VIGMDVAASEFYcitSGKYDLD(Eno2/3 241-259)、
EVDLFTSKGLFcitAAVPSGAS(Eno1 21-40)、
EVDLYTAKGLFcitAAVPSGAS(Eno3 21-40)、
KGVPLYcitHIADLAGNSEVIL(Eno1 126-145)、
KGVPLYcitHIADLAGNPEVIL(マウスEno1 126-145)、
VGDDLTVTNPKcitIAKAVNEK(Eno1 316-335)、または
VGDDLTVTNPKcitIAKAASEK(マウスEno1 316-335)、
IFDScitGNPTVEVDLF(Eno1 11-25)、
IFDScitGNPTVEVDLY(Eno3/マウスEno1 11-25)
(ここで「cit」は、シトルリンを表す)から選択されるアミノ酸配列、あるいは
iii)非シトルリン位置での1、2もしくは3個のアミノ酸置換および/または1、2もしくは3個のアミノ酸挿入および/または1、2もしくは3個のアミノ酸欠失を有するi)のアミノ酸配列
を含むか、またはそのアミノ酸配列から本質的になるか、またはそのアミノ酸配列からなるペプチドが提供される。
VIGMDVAASEFFcitSGKYDLD/VIGMDVAASEFYcitSGKYDLD - 253位でシトルリン化されたエノラーゼ241-260、および
EVDLFTSKGLFcitAAVPSGAS/EVDLYTAKGLFcitAAVPSGAS - 32位でシトルリン化されたエノラーゼ21-40
が、シトルリン化自己エノラーゼエピトープに対してin vivoでT細胞応答を生じさせたことを示した。3つのペプチド:
KGVPLYcitHIADLAGNSEVIL/KGVPLYcitHIADLAGNPEVIL - 132位でシトルリン化されたエノラーゼ126-145、
VGDDLTVTNPKcitIAKAVNEK/VGDDLTVTNPKcitIAKAASEK - 328位でシトルリン化されたエノラーゼ316-335、および
IFDScitGNPTVEVDLF/IFDScitGNPTVEVDLY - 15位でシトルリン化されたエノラーゼ11-25
は、マウスに対して相同でないシトルリン化ヒトエピトープに対してin vivoでT細胞応答を生じさせ、それゆえ外来抗原として認識されていた。
VAASEFFRSGKYDLDFKSPD
VAASEFYRSGKYDLDFKSPD
TSKGLFcitAAVPSGASTGIYE
TAKGLcitAAVPSGASTGIYE
AGAVEKGVPLYcitHIADLAGN
TVTNPKcitIAKAVNEKSCNCL、または
TVTNPKcitIAKAASEKSCNCL
から選択される配列を含まない、その配列から本質的になるものでない、またはその配列からなるものでないことが好ましい。
本発明を、以下の例および添付の図面を参照してさらに記述する。
2.1.市販mAb
抗HLA-DR抗体(クローンL243)を、セファロースタンパク質GアフィニティクロマトグラフィーによるHB-55ハイブリドーマ細胞(ATCC,USA)培養上清から精製した。ENO1に対するウサギモノクローナル抗体[EPR10864(B)]を使用した。抗マウスCD4(クローンGK1.5)および抗マウスCD8(クローン2.43)を、BioXcell,USAから購入した。
マウスメラノーマB16F1およびマウスLewis肺癌LLC/2細胞株は、ATCCから取得した。マウスPan02細胞株を、米国国立がん研究所腫瘍レポジトリから取得した。B16F1細胞株をRPMI培地1640(GIBCO/BRL)中で培養し、LLC/2およびPan02をDMEM中で培養する。別様に示されない限り、両方に10%FCS、L-グルタミン(2mM)および炭酸水素ナトリウム緩衝液を補足する。
2.3.1.ペプチド
純度>90%のペプチドをGenscript(New Jersey,USA)により合成した。0.2mgのアリコート中に凍結乾燥物を-80℃で保存した。使用の当日に、PBSで適切な濃度に再構成した。
マウスアルファエノラーゼ(ENO-1)をコードする哺乳類発現ベクターpCMVSPORT6全長cDNA(IMAGE ID5376359)を、Source Bioscienceから取得した。
LLC2細胞を、Lipofectamineトランスフェクション試薬(Invitrogen)を使用して、全長キメラアルファ鎖とベータ鎖の両方をコードする4μgのプラスミドpVitro2キメラHLA-DR401で、製造業者の指示に従ってトランスフェクトした。Zinc finger Technology(Sigma Aldrich)によりマウスMHCクラスIIについて先にノックアウトしたB16F1細胞株を、pDC GASキメラHLA-DR401またはpVitro2キメラHLA-DR401プラスミドのいずれかでトランスフェクトした。この場合、キメラHLA-DR401は、高レベル発現をそれぞれ駆動するIFNγ誘導性プロモータまたは構成性プロモータの発現下に置かれている。トランスフェクトした細胞を、Hygromycin B(300μg/ml)またはゼオシン(300μg/ml)の存在下での増殖により選択した。株を限界希釈によりクローニングし、発現をeBioscience社製の抗ヒトHLA-DR PE-Cy7コンジュゲート抗体(クローンL243)を使用してフローサイトメトリーにより確認した。細胞をIFNγ誘導性プラスミドでトランスフェクトし、マウスIFNγ(30ng/ml,Gibco life technologies)の非存在または存在下で一晩インキュベートした後、抗体で染色した。
細胞溶解液を、プロテアーゼ阻害剤カクテル(Sigma)を含むRIPAバッファー中で調製し、タンパク質を4~12%NuPAGE Bis-Trisゲル(Invitrogen)で分離し、PVDF膜上に移した。膜を、3%BSAで1時間ブロッキングし、次いで、抗体を用いてヒト/マウスENO-1(クローンEPR10863(B)、Abcam)1対1000およびβアクチン(クローンAC-15,Sigma)1対15000について探索した。タンパク質は、ウサギに対する蛍光二次抗体IRDye800RD(ENO-1に関して)およびIRDye680RD二次抗マウス(βアクチンに関して)を使用して視覚化した。膜を、Licor Odysseyスキャナーを使用して画像化した。
2.7.1.免疫化プロトコル
8~12週齢のC57BL/6マウス(Charles River,UK)、HLA-DR4マウス(Taconic,USA)、HHDII/DR1マウス(Pasteur institute,フランス)および特許文献WO2013/017545A1(EMMA repository,フランス)に記載のマウスのHHD/HLA-DP4トランスジェニック株を使用し、Nottingham Trent Universityのスタッフにより飼育した。全ての作業は、Home Officeプロジェクトライセンス下に実施した。ペプチドを、PBSで溶解して1mg/mlとし、次いで様々なアジュバント:CpGおよびMPLA6μg/各マウス(Invivogen,UK)、不完全フロイント50μl/マウス(Sigma,UK)、ポリI:C10μg/マウス(Invivogen,UK)、イミキモド25μg/マウス(Invivogen,UK)およびGMCSF10μg/マウス(Peprotech,UK)を用いて(一連の希釈液)で乳化した。ペプチド(25μg/マウス)を尾の基部に皮下注射した。DNA(1μg/マウス)を1.0μmの金粒子(BioRad,Hemel Hempstead,UK)に製造業者の指示書を使用して被覆し、遺伝子銃(BioRad)で皮膚内に投与した。Homspera(10nM/マウス)(PeptideSynthetics,UK)を、遺伝子銃免疫化により皮膚内に注射した。マウスは、別様に示されない限り、ペプチド免疫化について0日目、または遺伝子銃免疫化について0および7日目のいずれかで免疫化した。脾臓は、別のことが示されない限り、ペプチド免疫化の14日目におよびペプチドもしくは遺伝子銃免疫化の20日目に、解析のために取り出した。
2.8.1.ex vivoエリスポットアッセイ
エリスポットアッセイを、マウスIFNγ、IL-17およびIL-10捕捉および検出試薬を使用して、製造業者の指示(Mabtech,スウェーデン)に従って実施した。簡単に述べると、抗IFNγ、IL-17およびIL-10抗体を96ウェルのImmobilin-Pプレートのウェル上にコートした。合成ペプチド(各種濃度)およびウェルあたり5×105の脾細胞をプレートのウェルに3連で添加した。腫瘍標的細胞を、適所に、5×104/ウェルに3連で加え、プレートを37℃で40時間インキュベートした。インキュベーション後、捕捉されたIFNγおよびIL-10をビオチン化抗IFNγおよびIL-10抗体で検出し、ストレプトアビジンアルカリホスファターゼおよび発色基質で発色させた。スポットを解析し、自動プレートリーダー(Cellular Technologies Ltd)を使用して計数した。
3工程の間接的手法を、IL-10、IL-17、IFNγ、TNFα、IL-2&IL-4に対するIgG抗体のマルチプレックスLuminexアッセイ(Invitrogen)について使用した。標準、対照、および未知の血清を、50%アッセイ希釈バッファー(Invitrogen)&50%無血清RPMIで1:2希釈した。標準段階希釈を、各アッセイに加えた。標準、対照,および未知の血清の各希釈液を、96ウェル濾過プレート(Millipore Multiscreen;Millipore Corporation,Bedford,Mass.)中で一組の対のLuminexマイクロスフェアと混合し、室温で振盪しながら2時間インキュベートした。マイクロスフェアを真空濾過により収集し、PBSTで洗浄した。ビオチン化検出抗体を、室温で1時間、各ウェルに振盪しながら加えた。マイクロスフェアを真空濾過により収集し、PBSTで洗浄した。ストレプトアビジン共役R-フィコエリトリンを各ウェルに加えた。30分のインキュベーションおよび洗浄工程後、マイクロスフェアをPBST中に再懸濁し、XYプラットフォーム搭載Biorad BioPlex Luminex解析機で読んだ。データ取得および解析を、Luminexソフトウェア(BioPlex Systems)で実施した。
PBMCを、新たに採取したヘパリン化血液からFicol-Hypaque(Sigma)勾配遠心分離により単離した。PBMC(1.5×106細胞/ウェル)を、5%のプールされた自家ヒト血清、2mMのグルタミン、20mMのHEPES、およびペニシリン-ストレプトマイシン(1%)を含有する最終体積2mlのRPMI中の単一ペプチド(最終濃度10μg/ml)で刺激した。精製タンパク質誘導体PPD(最終濃度10μg/ml)を用いた刺激を、PBMCの増殖能力についての陽性対照とした。陰性対照として、PBMCを培地のみと共にインキュベートした。PBMCを5%CO2の雰囲気中で4、7および11日間37℃で培養した。これらの時間点で増殖を評価するために、各培養物から100μlを3連で96ウェルプレートの丸底ウェルにアリコートし、3H-チミジンを加え(0.0185MBq/ウェル)、37℃でさらに8時間インキュベートした。培養物をunifilterプレート上に採集し、3H-チミジンの取り込みをβ-シンチレーション計数によって決定した。結果は、未刺激培養物の平均に対するエピトープ刺激物の1分あたりの計数(cpm)の平均の比として、刺激指標(SI)を計算することにより評価した。SI>2.5であるとき、増殖アッセイを陽性と考えた。
PBMCを、新たに採取したヘパリン化血液からFicol-Hypaque(Sigma)勾配遠心分離により単離した。PBMC(1.5×106細胞/ウェル)を、5%のプールされた自家ヒト血清、2mMのグルタミン、20mMのHEPES、およびペニシリン-ストレプトマイシン(1%)を含む、最終体積2mlのRPMI中の単一ペプチド(最終濃度10μg/ml)で刺激した。陰性対照として、PBMCを培地のみとインキュベートした。PBMCを5%CO2の雰囲気中で7および10日間35℃で培養した。これらの時間点での増殖を評価するために、細胞を試料採取し、PE-Cy5およびefluor450でそれぞれ標識した表面マーカーCD4およびCD8抗体を用いて染色した。染色後、細胞を固定し、Milteny MACSQuantフローサイトメーターで解析した。
PBMCを、新たに採取したヘパリン化血液からFicol-Hypaque(Sigma)勾配遠心分離により単離した。PBMC(1.5×106細胞/ウェル)を、5%のプールされた自家ヒト血清、2mMのグルタミン、20mMのHEPES、ペニシリン-ストレプトマイシン(1%)、10ng/mlの組換えヒトIL-15および5ng/ml組換えヒトIL-7を含む、最終体積2mlのRPMI中の単一ペプチド(最終濃度10μg/ml)で刺激した。組換えヒトIL-2を、3日目に20IU/mlで加えた。13日目に細胞を洗浄し、ヒトIFNγエリスポットアッセイに加えた。エリスポットアッセイを、ヒトIFNγ捕捉および検出試薬を使用して、製造業者の指示(Mabtech,スウェーデン)に従って実施した。簡単に述べると、抗IFNγ抗体を、96ウェルのImmobilin-Pプレートのウェルにコートした。合成ペプチド(10μg/ml)およびウェルあたり1×105のPBMCを、プレートのウェルに4連で加え、プレートを37℃で20時間インキュベートした。インキュベーション後、捕捉されたIFNγをビオチン化抗IFNγ抗体で検出し、ストレプトアビジンアルカリホスファターゼおよび発色基質で発色させた。スポットを解析し、自動プレートリーダー(Cellular Technologies Ltd)を使用して計数した。
PBMC培養物を上記の通り設定した。14日目にPBMCを洗浄し、ブレフェルジンAの存在下で合成ペプチド(10μg/ml)と共に37℃で20時間培養した。細胞を、PE-Cy5およびefluor450でそれぞれ標識した抗体を用いて細胞表面マーカーCD4およびCD8で染色した。続いて細胞を固定し、浸透させ、IFNγPE-Cy7標識抗体を用いて染色した。染色後、細胞を固定し、Miltenyi MACSQuantフローサイトメーターで解析した。
正常および腫瘍組織の結合を、先に記述されているように(Durrantら,2006)、免疫組織化学(IHC)により解析した。免疫組織化学染色を、4μm切片に、Novolinkポリマー検出システム(Leica Biosystems,RE7150-K)を使用して実施した。簡単に述べると、スライドをキシレンで脱パラフィンし、3回のアルコール交換を通じて再水和し、抗原賦活化を、クエン酸バッファー(pH6.0)中で20分間、電子レンジを使用して実施した。内因性ペルオキシダーゼ活性を、Peroxidase Blockにより5分間ブロッキングした。スライドをTBS(pH7.6)で洗浄し、続いて、Protein Blockを5分間適用した。さらに1回のTBS洗浄後、Leica抗体希釈液(RE7133)で至適希釈した一次抗体を適用し、60分間インキュベートした。抗ENO1ウサギモノクローナルEPR10864(B)は1/200で使用した。スライドをTBSで洗浄し、続いてPost-Primary Blockと共に30分間インキュベーションした後、TBSで洗浄した。Novolinkポリマーを30分間適用した。DAB色素原のDAB基質緩衝液1:20で構成されるDAB作用溶液を調製し、5分間適用した。スライドを、Novolinkヘマトキシリンで6分間対比染色し、脱水した。
試験集団は、NottinghamまたはDerby大学病院で、組織学的に証拠付けられたがんの待機的外科手術を受けた患者から取得した、462のアーカイブ結腸直腸がんの連続的シリーズ(Simpsonら,2010)検体(1994-2000;追跡期間中央値42ケ月;打ち切り2003年12月;リンパ節陽性疾患を有する患者は日常的に5-フルオロウラシル/フォリン酸のアジュバント化学療法を受けた)、350の卵巣がん(Duncanら,2007)試料(1982-1997;追跡期間中央値192ケ月:打ち切り2005年11月:疾患ステージII~IVを有する患者は、後年に白金ベースであった標準的アジュバント化学療法を受けた)、142の胃がん(Abdel-Fatahら,2013)試料(2001-2006;追跡期間中央値66ケ月;打ち切り2009年1月;化学療法なし)、68の膵臓および120の胆道(billary)/膨大部がん(Storrら,2012)試料(1993-2010:中央値45ケ月;打ち切り2012;25~46%の患者は、5-フルオロウラシル/フォリン酸およびゲムシタビンでのアジュバント化学療法を受けた)、220の非小細胞肺がん(01/1996-07/2006:追跡期間中央値36ケ月、打ち切り2013年5月;いずれの患者も手術前は化学療法を受けなかったが、手術後に11人の患者は放射線療法を受け、9人の患者は少なくとも1サイクルのアジュバント化学療法を受けた)のコホートを含んだ。関連する臨床-病理学的材料/データが入手不可能な場合を除き、除外した事例は無かった。この遡及研究は、1987年から1998年に診断され、Nottingham Tenovus原発性乳癌シリーズに組み入れられた原発浸潤性乳癌を有する902人の患者の連続的シリーズに基づく。これは、長期追跡期間のある、71歳未満の患者(中央値55歳)で良く特徴付けられたシリーズである。全ての患者は単一の機関で統一された方法で処置を受け、広範囲のタンパク質の発現について調査を受けた。
エノラーゼの配列アラインメントおよび相同性
哺乳類では、エノラーゼ酵素の4つの異性体ENO1(A)、ENO2(B)、ENO3(G)およびENO4があり、これらは4つの別個の遺伝子でコードされている。それらは高度に保存されており、高いアミノ酸相同性を有する(図1)。
シトルリン化エノラーゼに対するCD4応答
ヒトアルファ-エノラーゼペプチド配列を、重複する20merに分断した。アルギニンを含有する任意の20merを選択し、アルギニン残基をシトルリン(cit)で置きかえた。選択された20merのペプチドを表1に列挙する。
マウスにおける候補シトルリン化エノラーゼエピトープを特定するためにスクリーニングを実施した。マウスを4~6ヒトシトルリン化ペプチドのプールで免疫化した。潜在的な交差反応性の影響を減少するために、各プール内のペプチドを、任意の重複するアミノ酸配列を含まないように選択した。各プールを、20μgの各ペプチドおよびアジュバントとしてCpG/MPLAを含有する単回免疫化として投与した。14日目に、マウスを選別し、免疫化プール内の各ペプチドに対する免疫応答をex vivoエリスポットにより評価した(図2)。さらに、脾細胞を、マウス等価配列に対してスクリーニングした。我々は、トランスジェニックDR4マウス株においてシトルリン化ペプチドが応答を誘導しうることを以前に示している。様々なマウス株が異なるMHCレパートリを有することを考慮して、いくつかの株をスクリーニングに使用した。ペプチド応答を、C57BL/6マウスおよびC57BL/6バックグラウンドでヒトDR4またはHHD/DR1を発現するトランスジェニック株で評価した(材料および方法参照)。
腫瘍細胞上に提示されるCitエノラーゼペプチドは、腫瘍療法のための標的とすることができる。
DNA免疫化によりシトルリン化エノラーゼに対する応答がもたらされる
APCはシトルリン化エピトープを構成的に発現することができるので、エノラーゼをコードしているDNA構築物は、シトルリン化されており、応答を刺激してもよい可能性があった。したがって、HLA-DR4トランスジェニックマウスを、マウスエノラーゼをコードしているDNA構築物で免疫化した。これらのマウスからの刺激されたT細胞を、シトルリン化と非シトルリン化エノラーゼ241ペプチドの両方に対するIFNγの応答についてin vitroでスクリーニングした。図8Aは、マウスが、シトルリン化マウスペプチドに対してのみ応答したことを示す(平均:IFNγ180/100万個の脾細胞;p=0.0001)。Il-10応答は観察されなかった(図8B)。
様々なアジュバントおよび様々な用量で比較するとき、エノラーゼペプチドに対するCD4応答が変動するかどうかの決定
エノラーゼ241citペプチドは、25ugの用量でアジュバントCpG/MPLAと共に単回投与するとき、強力なIFNγ応答を誘導する。生成される応答に対するアジュバントおよび用量レジメンの影響を調査した。マウスを、単回用量のエノラーゼ241citペプチドで、アジュバントとしてCpG/MPLAまたは不完全フロイントアジュバント(IFA:incomplete Freund's adjuvant)のいずれかを用いて、免疫化した。CpG/MPLA(p=0.0028)をアジュバントとしたとき、エノラーゼ241citペプチドに対するIFNγ応答がエリスポットにより検出されたが、IFAをアジュバントとして使用したときは、IFNγ応答は見られなかった(図9A)。IL-10応答は、エノラーゼ241citペプチドをIFA(p<0.0001)と一緒に投与したときはエリスポットにより検出されたが、CpG/MPLAと一緒に投与したときは検出されなかった(図9B)。これらのアジュバントに加えて、他のTLRアゴニストポリI:C(TLR3)およびイミキモド(TLR7)と組み合わせた応答を、DR4マウスとDP4トランスジェニックマウスの両方で評価した。ポリI:Cとの組み合わせは、両方のマウス株でIFNγ応答を誘導するが、IL-10応答は誘導しない(図19)。イミキモドと組み合わせたエノラーゼ241citペプチドは、DP4トランスジェニックマウスでIFNγ応答を誘導するが、DR4トランスジェニックマウスでは誘導しない(図19)。このことは、エノラーゼ241citペプチドを用いた免疫化により生じるサイトカイン応答の種類は、選択したアジュバントにより強く影響を受けうることを示唆している。
エノラーゼ241citメモリ応答
様々なアジュバントがエノラーゼ241citペプチドを用いた免疫化に対する応答を分極化する能力は、関与するT細胞集団の柔軟性を示唆し得る。これは既存のまたはメモリ応答を示してもよい。したがって、次に、エノラーゼcit応答が発生する速さを決定した。マウスを、CpG/MPLA中のエノラーゼ241citペプチドの単回用量で、屠殺される2、6または14日前に免疫化した。ex vivoエリスポットを使用して、IFNγ応答を決定した(図10)。ペプチドのマウスバージョンを用いた免疫化によりIFNγ応答が誘導され、2日後に検出することができた。2、6または14日後にみられる応答の間に有意な差異はなかった。ヒトエノラーゼ241citペプチドを用いた免疫化によりIFNγ応答が導かれ、6日後に検出可能であった。応答は、2日後の応答と比較して、6日後(p=0.0009)および14日後(p=0.0092)に有意に増加した。これらの結果は、内因性マウスペプチドに特異的であるエノラーゼ241citペプチドに対する既存の応答があってもよいことを示唆する。
健常ヒトドナーにおける応答
エノラーゼ241citペプチドに対するマウス応答は、免疫化後早くも2日目に検出することができる。このことは、ヒトがエノラーゼ241citペプチドに対する検出可能な既存の応答を有しているかどうかという疑問を提起する。このことを調査するために、PBMCを、6人の健常ドナーから単離し、ヒトエノラーゼペプチドの存在下で培養した。チミジン増殖アッセイを4、7および11日後に細胞に対して実施し、それぞれについての増殖指標を計算した(図11A)。5/6のドナーが、試料採取日の少なくとも1つで、エノラーゼ241citペプチドに対する増殖を示した。たとえば、ドナー1は、エノラーゼ241citに対する増殖応答を11日目(平均20.4)および7日目(平均28.6)に示したが、4日目は示さなかった(平均0.8)。エノラーゼ241wtに対する応答は、11日目(平均0.9)、7日目(平均1.2)および4日目(平均0.3)で一貫して低かった。対照的に、ドナー2は、11日目で低レベルの応答(平均2.7)のみを示し、ドナー6は非応答者であった。それぞれのドナーについて、HLA型を決定し、図に示す。
免疫組織化学
シトルリン化は、PAD酵素、特にPAD2およびPAD4酵素によって実施される。これらは高レベルのカルシウムを必要とし、通常、死細胞、瀕死の細胞、またはオートファジーを経ている細胞において活性化される。健常細胞はシトルリン化タンパク質を発現しないが、腫瘍は、低酸素または栄養ストレスにより、オートファジーおよびシトルリン化エノラーゼを活性化する。それゆえ、結腸直腸、胃、肺、乳房および卵巣腫瘍は、エノラーゼの発現について染色された。
異なる種間のエノラーゼの相同性
エノラーゼは、マウス、イヌ ヒツジ、ウシ、ウマ、ブタおよびヒトの間で高度に保存されている(図12~14)。ワクチンはヒトおよびマウスにおけるT細胞応答ならびにマウスにおける抗腫瘍応答を誘導するので、同様の応答が他種でもみられると推定することができる。
以下に、出願当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
[1] VIGMDVAASEFFcitSGKYDLD、
VIGMDVAASEFYcitSGKYDLD、
EVDLFTSKGLFcitAAVPSGAS、
EVDLYTAKGLFcitAAVPSGAS、
KGVPLYcitHIADLAGNSEVIL、
KGVPLYcitHIADLAGNPEVIL、
VGDDLTVTNPKcitIAKAVNEK、
VGDDLTVTNPKcitIAKAASEK、
IFDScitGNPTVEVDLF、または
IFDScitGNPTVEVDLY
(ここで「cit」は、シトルリンを表す)から選択されるアミノ酸配列、あるいは
iii)非シトルリン位置での1、2もしくは3個のアミノ酸置換および/または1、2もしくは3個のアミノ酸挿入および/または1、2もしくは3個のアミノ酸欠失を有するi)のアミノ酸配列
を含むか、またはそのアミノ酸配列から本質的になるか、またはそのアミノ酸配列からなるペプチド。
[2] [1]に記載のペプチドをコードする核酸。
[3] [1]に記載のペプチドに結合する結合部分。
[4] 抗体である、[3]に記載の結合部分。
[5] [1]に記載のポリペプチドおよび/または[2]に記載の核酸および/または[3]もしくは[4]に記載の結合部分を、薬学的に許容される担体と組み合わせて含む、医薬組成物。
[6] 薬における使用のための、[1]に記載のペプチドおよび/または[2]に記載の核酸および/または[3]もしくは[4]に記載の結合部分。
[7] がんの処置における使用のための、[4]に記載の使用のためのペプチドおよび/または核酸および/または結合部分。
[8] 前記がんが、エストロゲン受容体陰性乳がんを含む乳がん、結腸直腸がん、胃がん、非小細胞肺がん、子宮内膜癌を含む卵巣がん、膵管腺癌を含む膵臓がん、白血病、メラノーマ、頭頸部がんまたは肺がんである、[5]に記載の使用のためのペプチドおよび/または核酸および/または結合部分。
[9] 前記使用が、ヒトまたは獣医学的使用である、[7]または[8]に記載の使用のためのペプチドおよび/または核酸および/または結合部分。
[10] 前記核酸がエノラーゼをコードしている、[7]、[8]または[9]に記載の使用のための核酸。
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Claims (7)
- i) VIGMDVAASEFFcitSGKYDLD、もしくは
VIGMDVAASEFYcitSGKYDLD(ここで「cit」は、シトルリンを表す)から選択されるアミノ酸配列からなるペプチド、
ii) 非シトルリン位置での1もしくは2個のアミノ酸の置換、挿入および/もしくは欠失を有するi)のアミノ酸配列からなるペプチドであって、前記ペプチドは腫瘍に対する免疫応答を高めるために使用しうるペプチド、または
iii) i)のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるペプチドであって、前記ペプチドは、非シトルリン位置でのアミノ酸に変化を有し、かつ、腫瘍に対する免疫応答を高めるために使用しうるペプチド。 - 結合部分が抗体である、請求項1に記載のペプチドのシトルリン化エピトープに結合する単離された結合部分。
- 請求項1に記載のポリペプチドおよび/または請求項2に記載の結合部分を、薬学的に許容される担体と組み合わせて含む、医薬組成物。
- 薬における使用のための、請求項1に記載のペプチドおよび/または請求項2に記載の結合部分。
- がんの処置における使用のための、請求項4に記載の使用のためのペプチドおよび/または結合部分。
- 前記がんが、エストロゲン受容体陰性乳がんを含む乳がん、結腸直腸がん、胃がん、非小細胞肺がん、子宮内膜癌を含む卵巣がん、膵管腺癌を含む膵臓がん、白血病、メラノーマ、頭頸部がんまたは肺がんである、請求項5に記載の使用のためのペプチドおよび/または結合部分。
- 前記使用が、ヒトまたは獣医学的使用である、請求項5または請求項6に記載の使用のためのペプチドおよび/または結合部分。
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