JP6989154B2

JP6989154B2 - 生物学的活性成分の結腸標的組成物、およびその利用

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Publication number: JP6989154B2
Application number: JP2019546961A
Authority: JP
Inventors: 張鈞寿; 孫超男; 張昊
Original assignee: 南京希尓寿生物科技有限公司
Priority date: 2016-11-11
Filing date: 2017-11-09
Publication date: 2022-01-05
Anticipated expiration: 2037-11-09
Also published as: CN108066296B; EP3539538C0; EP3539538B1; WO2018086550A1; US11337926B2; JP2020500927A; US20190274960A1; CN108066296A; EP3539538A1; RU2744452C2; RU2019116519A; EP3539538A4; RU2019116519A3

Description

発明の詳細な説明

〔技術分野〕
本発明は、食品、健康製品および薬品の技術分野に属し、具体的には、生物学的活性成分の結腸標的組成物、並びにその製剤および作製方法に関する。

〔背景技術〕
生物学的活性成分は、生理学的活性を有する一大分類の成分である。適切な生物学的活性成分を取り入れることは、栄養改善、疾病の予防および治療、並びに健康管理に対し、重要な役割を果たすことができる。しかしながら、大多数の生物学的活性成分は、経口服用の場合、以下のような問題がよく生じる。１）上部消化管の環境（例えば胃酸、消化酵素など）により、大部分の生物学的活性成分の活性が著しく破壊され、当該活性成分が十分に作用することができなくなる。２）経口服用後に、生物学的活性成分は胃および小腸に大量に存在し、当該成分は効果的に人体に吸収、利用されることができず、容易に生体へのダメージと同等の結果となる。３）苛烈な生産および加工条件（例えば温度、湿度、および何らかの溶剤の導入）は、成分の活性を破壊する。

上記の問題に対し、結腸標的デリバリーシステムは、適切な方法を用いることにより、胃、十二指腸、空腸および回腸内での活性物質の放出を回避することができるものの、活性物質を直接的に患者の結腸に運んで、結腸内で放出させることができる。これにより、結腸における活性物質の局所濃度が高くなり、活性物質は、十分に吸収され、治療および健康管理において役割を果たすことができる。また、胃および小腸内での活性物質の放出が回避されることにより、副作用が低減し、胃酸に破壊され易い活性物質、または、ペプシンもしくは膵液酵素により代謝され易い活性物質の生物学的利用能が向上する。これにより、上述した欠点は大いに改善される。

剤形は、現代の薬剤作製技術と組み合わせて設計される。結腸標的投薬のためのデリバリーシステムは、主に時間遅延ドラッグデリバリーシステム、ｐＨ依存性ドラッグデリバリーシステム、酵素トリガー型ドラッグデリバリーシステム、圧力依存性ドラッグデリバリーシステムおよびプロドラッグ型ドラッグデリバリーシステムに分けられる。時間遅延ドラッグデリバリーシステムは、物質が経口服用後に胃および小腸を順に通過した後に結腸に到達するのに５〜６時間を要するという遅延特性を利用することにより、薬剤が胃および小腸での放出するのを回避するものの、結腸に到達してから薬剤を放出させることができる。ｐＨ依存性ドラッグデリバリーシステムは、胃腸管の異なるｐＨを利用し、コーティング法を選択することによって結腸に放出させる目的を達成している。コーティング作製工程は複雑である。また、当該工程は、一定の温度下で溶剤を完全に揮発させる必要がある溶剤を用いる必要がある。したがって、このような方法では、生物学的活性成分の活性が著しく低下する可能性が非常に高い。また、酵素トリガー型ドラッグデリバリーシステム、圧力依存性ドラッグデリバリーシステム、およびプロドラッグ型ドラッグデリバリーシステムは、現在は非常に注目されているが、それらの非一般的なもの、固有の複雑性、およびひいては専用装置および複雑な処理工程の必要性により制限される。このような制限は、研究および開発の複雑性が増すのみならず、製品を大規模に生産する可能性が非常に低い。

生物学的活性成分、特に有益な微生物の活性は、関連する作製の作製工程の間の僅かに高くなった温度または湿度、溶剤またはその他の物質の影響に耐えることが難しい。したがって、その結腸標的デリバリーシステムの研究および開発は非常に制限されている。複雑な作製工法ほど、しばしば活性の破壊が大きくなることになる。その結果、結腸標的性のプロバイオティクスに関連する市販品は未だにない。

従来のプロバイオティクス作製技術は、プロバイオティクスの細菌を、胃を通過して小腸内に放出させることができる。しかしながら、たとえそうでも、プロバイオティクスが小腸内に過度に集まる場合、重度な腸内毒素症のような安全性の問題が生じ得る（ＣＮ２００９１０２２９４０３．２）。従来のプロバイオティクス作製技術は、プロバイオティクスを胃腸管の遠位部分（回腸を含む）に送達することができるが、直接的に結腸まで標的としている送達を達成することができないため、プロバイオティクスの利用率は最適に近づけることができない（ＵＳ２０１６０２２５９２）。従来のプロバイオティクス作製技術は、用いられる補助剤の安全性の問題も有している（ALBERTINI B, VITALI B, PASSERINI N, et al. Development of microparticulate systems for intestinal delivery of Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium lactis [J]. European Journal of Pharmaceutical Sciences, 2010, 40（4）：359-366.）。従来のプロバイオティクス作製技術は、作製工程において用いられる溶剤、作製の間に上昇する温度または湿度等による、プロバイオティクスの活性への影響は避けられない（KLEMMER K J, KORBER D R, NICHOLAS H, et al. Pea proteinbased capsules for probiotic and prebiotic delivery [J]. International Journal of Food Science and Technology, 2011, 46 （11）：2248-2256.）。従来のプロバイオティクス作製技術では、効果的な経口服用の剤形の必要条件を満たすために、必要とされる補助剤は体積が大きいため、担持される生菌数が比較的少ない。さらに、従来のプロバイオティクス作製技術は、作製工程が複雑であり、工業生産のために用いることは困難である（CALINESCU C, MATEESCU M A. Carboxymethyl high amylase starch： chitosan self-stabilized matrix for probiotic colon delivery [J]. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 2008, 70（2）：582-589.）。

〔発明の概要〕
本発明の目的は、生物学的活性成分の大部分が胃および小腸を通過して結腸に到達した後に放出することができることにより、その生体内活性をより好適に発揮させるように、生物学的活性成分の生物学的利用能を向上させる、生物学的活性成分の結腸標的組成物、および当該組成物を含む製剤を提供することである。これにより、従来技術に存在する上述した問題が解決される。

本発明は、下記の態様により達成される。

第１の態様において、本発明は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）に基づく生物学的活性成分の結腸標的組成物であって、ヒドロキシプロピルメチルセルロースと、生物学的活性成分と、補助成分と、を含み、前記ヒドロキシプロピルメチルセルロースの重量百分率が１０〜９９％、前記生物学的活性成分の重量百分率が１〜６０％、前記補助剤の重量百分率が０〜８０％であり、より好ましくは、前記ヒドロキシプロピルメチルセルロースの重量百分率が４０〜９０％、前記生物学的活性成分の重量百分率が１０〜４０％、前記補助剤の重量百分率が０〜５０％であり、前記ヒドロキシプロピルメチルセルロースの粘度が１０００ｍＰａ・ｓよりも大きい、組成物を提供する。

好ましくは、前記ヒドロキシプロピルメチルセルロースの粘度は、１５，０００ｍＰａ・ｓ〜２００，０００ｍＰａ・ｓである。

好ましくは、前記生物学的活性成分は微生物である。より好ましくは、前記微生物はプロバイオティクスであり、前記プロバイオティクスは、食品、健康製品および薬品への使用が許容されるビフィズス菌（bifidobacteria）、乳酸桿菌（lactobacilli）およびグラム陽性球菌（gram-positive cocci）のうちの１つ以上を含み、好ましくは、前記ビフィズス菌（bifidobacteria）は、ビフィズス菌ラクティス（bifidobacterium lactis）、ビフィズス菌インファンティス（bifidobacterium infantis）、ビフィズス菌ビフィダム（bifidobacterium bifidum）、ビフィズス菌ロンガム（bifidobacterium longum）、ビフィズス菌ブレーベ（bifidobacterium breve）およびビフィズス菌アドレセンティス（bifidobacterium adolescentis）のうちの１つ以上であり、前記乳酸桿菌（lactobacilli）は、乳酸桿菌アシドフィルス（lactobacillus acidophilus）、乳酸桿菌カゼイ（lactobacillus casei）、乳酸桿菌クリスパタス（lactobacillus crispatus）、乳酸桿菌デルブリュッキ菌亜種ブルガリス（lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus）（乳酸桿菌ブルガリス（lactobacillus bulgaricus））、乳酸桿菌デルブリュッキ菌亜種（lactobacillus delbrueckii subspecies）、乳酸桿菌ファーメンタム（lactobacillus fermentum）、乳酸桿菌ガセリ（lactobacillus gasseri）、乳酸桿菌ヘルベティカス（lactobacillus helveticus）、乳酸桿菌ジョンソニ（lactobacillus johnsonii）、乳酸桿菌パラカゼイ（lactobacillus paracasei）、乳酸桿菌プランタルム（lactobacillus planterum）、乳酸桿菌ロイテリ（lactobacillus reuteri）、乳酸桿菌ラムノサス（lactobacillus rhamnosus）および乳酸桿菌サリバリウス（lactobacillus salivarius）のうちの１つ以上であり、前記グラム陽性球菌（gram-positive cocci）は、連鎖球菌フェリカス（streptococcus faecalis）およびラクトコッカス（lactococcus）のうちの１つ以上である。

さらに好ましくは、前記結腸標的組成物中のプロバイオティクスの量は、０．０１億〜１２００億ｃｆｕ／ｇである。

好ましくは、前記補助剤は、前記生物学的活性成分の生存安定性に有益な栄養物質を含み、前記栄養物質は、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、乳果オリゴ糖、大豆オリゴ糖、ペクチン、イヌリン、クランベリーパウダーなどのようなプレバイオティクス、ビタミンおよび／または糖アルコールであってもよい。

好ましくは、前記補助剤は、ペクチン、アルギン酸ナトリウムおよびキトサンなどのような、生物学的活性成分の結腸標的送達に有益な薬用補助成分または食品添加剤をさらに含む。

好ましくは、前記補助剤は、追加のバインダー（アラビアゴム、グアゴム、アルギン酸、ヒドロキシメチルセルロース、デキストリン、カルボマー、マルトース、ゼラチン、グルコース、エチルセルロース、メチルセルロース、ポリエチレンオキシドまたはポビドン）、フィラー（澱粉、圧縮性澱粉、修飾澱粉、ソルビトール、マンニトール、微晶質セルロース、パウダー状の糖、デキストリン、無機塩、無水乳糖および乳酸カルシウム）、滑剤（ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、鉱油、ポリエチレングリコール、滑石粉およびシリカ）、並びに崩壊剤（カルボキシメチル澱粉ナトリウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドンおよび乾澱粉）のような、製剤自体の特性を最適化可能なその他の補助剤をさらに含んでもよい。

第２の態様において、本発明は、本発明の生物学的活性成分の結腸標的組成物を含む、生物学的活性成分の結腸標的製剤を提供する。

好ましくは、前記製剤の剤形は錠剤であり、より好ましくは、前記錠剤は、一錠につき、≦５００ｍｇの重量および≦１０ｍｍの直径を有する。この剤形における生物学的活性成分は、胃、小腸および回腸においてでの放出は一部または少量のみ放出されるものの、このような剤形は、大量な菌叢が存在する結腸における生物学的活性成分の放出にさらに寄与することができる。

第３の態様において、生物学的活性成分の結腸標的製剤の作製における、本発明の生物学的活性成分の結腸標的組成物の使用が提供される。

第４の態様において、本発明の生物学的活性成分の結腸標的製剤を作製する方法であって、
（１）操作温度＜２８℃および湿度＜４０％の下、ヒドロキシプロピルメチルセルロースと、生物学的活性成分と、補助剤とを混合する工程と、
（２）混合物を直接的に乾式プレスして錠剤とするか、乾式造粒後にプレスして錠剤とする工程と、を含む方法が提供される。

本発明では、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを生物学的活性成分に初めて組み合わせられた。ヒドロキシプロピルメチルセルロースの除放特性および粘着効果を利用し、粉末を直接的に乾式プレスするか、乾式造粒後にプレスして錠剤とすることにより、本発明の生物学的活性成分の結腸標的錠剤を調剤する。これにより、生物学的活性成分の活性において、湿式造粒法および結腸標的の関連する先行文献でよく見られるコーティング法において使用される溶剤および温度の悪影響を回避する。さらに、作製工程が簡単であり、産業化が容易となる。ヒドロキシプロピルメチルセルロースによる複数の効果により、生物学的活性成分の結腸標的錠剤は、市販で利用可能な生物学的活性成分の錠剤に比べて、生物学的活性成分が、代謝および分解されることなく胃および小腸の環境に耐えることができるため、胃および小腸を通過して結腸に到達した後に放出する。結果として、小腸に与え得る危害の要因を減らすことができ、生物学的活性成分の生物学的利用能を向上させ得る。これにより、その生体内活性をより好適に発揮させ得る。特に、プロバイオティクス製剤の場合、その他の補助剤の使用を大幅に減らすことができるため、各錠剤の菌担持量を大幅に向上させることができる。結果として、１日の服用量は、市販品で利用可能な錠剤によく見られる９錠から１〜２錠にまで減らされる。さらに、錠剤は大きさをより小さくすることができ、飲み込みにより都合がよい。

従来技術に比べ、本発明の組成物は、顕著に改良された結腸標的効果を有し、食品グレードの補助剤を採用してもよく、極めて高い安全性に繋がる。さらに、産業上の生産に容易に適用されることができ、本発明の工程は簡単である。したがって、本発明は、食品、健康製品および薬品の産業における開発のための重要な意義を有する。

〔図面の説明〕
図１：人工胃液２時間、人工腸液３時間、および人工結腸液１８時間の順の条件下における実施例１〜７の錠剤の溶出曲線のグラフ。

図２：人工胃液２時間、人工腸液３時間、および人工結腸液１８時間の順の条件下における異なる粘度のヒドロキシプロピルメチルセルロースを用いて作製した錠剤の溶出曲線のグラフ。

〔発明の詳細な説明〕
以下の具体的な実施例を通して、本発明の技術的解決およびその效果をさらに説明する。本発明の実施例は、単に本発明の具体的な実施形態を示すためのみにも用いられ、本発明の保護範囲を限定するために森いられるものではないことを理解されるべきである。本発明の概念に基づく本発明の簡単な改良も、本発明の特許請求の範囲内である。

特段に説明しない限り、以下の実施例において用いられる試薬および設備は、いずれも通常の試薬および設備であり、市販で入手可能であり、用いられる操作方法は本分野における通常の方法であり、認識レベルおよび実験能力を組み合わせて、当業者は本明細書に記載の実験工程を実施することができ、対応する結果を得ることができる。

本発明において用いられるプロバイオティクス細菌粉末は、中国江蘇紫石微康生物科技有限公司から入手した、ビフィズス菌ラクティスＢＬａ８０、ビフィズス菌ロンガムＢＬ２１、乳酸桿菌アシドフィルスＬＡ８５およびビフィズス菌ビフィダムＢＢｉ３２、仏ＬＡＬＬＥＭＡＮＤ社から入手した、乳酸桿菌ラムノサスＲ１１、ビフィズス菌ロンガムＲ１７５およびビフィズス菌ラクティスｌａｆｔｉＢ８４を含む。本明細書において用いられるヒドロキシプロピルメチルセルロースＫ４Ｍ、Ｋ１５ＭおよびＫ１００Ｍは、中国安徽山河補料有限公司から入手する。本明細書において用いられるヒドロキシプロピルメチルセルロースＫ１００ＬＶおよびＫ２００Ｍは、米Ｄｏｗｃｈｅｍｉｓｔｒｙ社から入手する。

＜実施例１＞
処方：ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣＫ１５Ｍ、粘度１５，０００ｍＰａ・ｓ）８５ｗｔ％およびビフィズス菌ラクティスＢＬａ８０の粉末（生菌数１．０＊１０^１１ｃｆｕ／ｇ）１５ｗｔ％。

作製方法：
（１）処方に示した量にしたがって原料を均一に混合し、１００メッシュ篩に通して、再度均一に混合し、
（２）粉末の混合物を、ＧＬ２−２５型乾式造粒機（中国張家港開創機械製造公司製）を用いて造粒し、プレスして錠剤とすることを条件とした。各々の錠剤は、１５０ｍｇの重量および８ｍｍの直径を有していた。錠剤におけるビフィズス菌ラクティスの生菌数は１．５＊１０^１０ｃｆｕ／ｇであった。

＜実施例２＞
処方：ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣＫ２００Ｍ、粘度２００，０００ｍＰａ・ｓ）６５ｗｔ％、乳酸桿菌ラムノサスＲ１１の粉末（生菌数１．５＊１０^１１ｃｆｕ／ｇ）３０ｗｔ％、およびステアリン酸マグネシウム５ｗｔ％。

作製方法：
（１）処方に示した量にしたがって原料を均一に混合し、
（２）混合物の粉末を直接的に乾式プレスして、錠剤とすることを条件とした。各々の錠剤は、４５０ｍｇの重量および１０ｍｍの直径を有していた。錠剤における乳酸桿菌ラムノサスの生菌数は４．５＊１０^１０ｃｆｕ／ｇであった。

＜実施例３＞
処方：ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣＫ１００Ｍ、粘度１００，０００ｍＰａ・ｓ）６５ｗｔ％、乳酸桿菌アシドフィルス菌ＬＡ８５の粉末（生菌数１．０＊１０^１１ｃｆｕ／ｇ）３０ｗｔ％、およびステアリン酸マグネシウム５ｗｔ％。

作製方法：
（１）処方に示した量にしたがって原料を均一に混合し、
（２）混合物の粉末を直接的に乾式プレスして、錠剤とすることを条件とした。各々の錠剤は、３００ｍｇの重量および１０ｍｍの直径を有していた。錠剤における乳酸桿菌アシドフィルス菌の生菌数は３．０＊１０^１０ｃｆｕ／ｇであった。

＜実施例４＞
処方：ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣＫ２００Ｍ、粘度２００，０００ｍＰａ・ｓ）４５ｗｔ％、ビフィズス菌ラクティスＢＬａ８０の粉末（生存可能な数１．０＊１０^１１ｃｆｕ／ｇ）２５ｗｔ％、ビフィズス菌ロンガムＢＬ２１の粉末（生存可能な数１．５＊１０^１１ｃｆｕ／ｇ）２５ｗｔ％、およびステアリン酸マグネシウム５ｗｔ％。

作製方法：
（１）処方に示した量にしたがって原料を均一に混合し、
（２）混合物の粉末を直接的に乾式プレスして、錠剤とすることを条件とした。各々の錠剤は、３００ｍｇの重量および１０ｍｍの直径を有していた。錠剤における、ビフィズス菌ラクティスの生存可能な数は２．５＊１０^１０ｃｆｕ／ｇおよびビフィズス菌ロンガムの生存可能な数は３．７５＊１０^１０ｃｆｕ／ｇの錠剤であった。

＜実施例５＞
処方：ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣＫ４Ｍ、粘度４，０００ｍＰａ・ｓ）７０ｗｔ％、無水乳糖２０ｗｔ％、マルチトール５ｗｔ％、ビフィズス菌ビフィダムＢＢｉ３２の粉末（生存可能な数１．５＊１０^１１ｃｆｕ／ｇ）３ｗｔ％、シリカ１ｗｔ％、およびステアリン酸マグネシウム１ｗｔ％。

作製方法：
（１）処方に示した量にしたがって原料を均一に混合し、
（２）混合物の粉末を直接的に乾式プレスして、錠剤とすることを条件とした。各々の錠剤は、３００ｍｇの重量および１０ｍｍの直径を有していた。錠剤における、ビフィズス菌ビフィダムの生存可能な数は４．５＊１０^９ｃｆｕ／ｇであった。

＜実施例６＞
処方：ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣＫ１００Ｍ、粘度１００，０００ｍＰａ・ｓ）１３ｗｔ％、ビフィズス菌ロンガムＲ１７５の粉末（生存可能な数５＊１０^１０ｃｆｕ／ｇ）３０ｗｔ％、イソマチトール２５ｗｔ％、イヌリン１５ｗｔ％、乳酸カルシウム１０ｗｔ％、ペクチン５ｗｔ％、およびステアリン酸マグネシウム２ｗｔ％。

作製方法：
（１）処方に示した量にしたがって原料を均一に混合し、
（２）混合物の粉末を直接的に乾式プレスして、錠剤とすることを条件とした。各々の錠剤は、３００ｍｇの重量および１０ｍｍの直径を有していた。錠剤における、ビフィズス菌ロンガムの生存可能な数は１．５＊１０^１０ｃｆｕ／ｇであった。

＜実施例７＞
処方：ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣＫ１００Ｍ、粘度１００，０００ｍＰａ・ｓ）４５ｗｔ％、フラクトオリゴ糖２０ｗｔ％、乳酸桿菌アシドフィルス菌Ｒ４１８の粉末（生存可能な数１．５＊１０^１１ｃｆｕ／ｇ）１５ｗｔ％、ビフィズス菌ラクティスｌａｆｔｉＢ８４の粉末（生存可能な数１＊１０^１１ｃｆｕ／ｇ）１０ｗｔ％、クランベリー粉末５ｗｔ％、およびソルビトール５ｗｔ％。

作製方法：
（１）処方に示した量にしたがって原料を均一に混合し、
（２）混合物の粉末を乾式造粒機を用いて造粒した後、プレスして錠剤とすることを条件とした。各々の錠剤は、４５０ｍｇの重量および１０ｍｍの直径を有していた。錠剤における、乳酸桿菌アシドフィルス菌の生存可能な数は２．２５＊１０^１０ｃｆｕ／ｇおよびビフィズス菌ラクティスの生存可能な数は１．０＊１０^１０ｃｆｕ／ｇであった。

〔実験例１：本発明の実施例の溶出試験〕
プロバイオティクスは温度および水の両方に敏感であり、溶出試験のために異なる時点の溶出液を採取する必要があるため、プロバイオティクスの代わりに、結腸における薬放出特性を評価するためのモデル薬物５−アミノサリチル酸を試験において用いた。

中国薬局方（２０１５年版、第４部分、０９３１溶出率および放出率測定法、第１方法−回転バスケット法、５０ｒ／ｍｉｎ、３７℃）にしたがって、上述した実施例における方法および処方を用いて作製した錠剤（プロバイオティクスを、対応する量の５−アミノサリチル酸に代えた）を回転バスケットに置き、溶出試験の前に、人工胃液（ｐＨ１．２）２時間、人工腸液（ｐＨ６．８）３時間、および人工結腸液（ｐＨ７．８）１８時間の順とすることを条件とした。溶出量を測定した。実施例の錠剤の溶出結果を図１に示す。結腸における放出率を表１に示す。

図１および表１に示した結果から、実施例１〜７の錠剤は全て、結腸放出率が４５％以上に達することができ、顕著な結腸標的効果を示すことが分かる。

〔実験例２：異なる粘度を有するヒドロキシプロピルメチルセルロースを用いて作製される錠剤の溶出試験〕
本発明において開示される方法にしたがって、錠剤は５つの異なる粘度を有するヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣＫ１００ＬＶ（粘度１００ｍＰａ・ｓ）、Ｋ４Ｍ、Ｋ１５Ｍ、Ｋ１００ＭおよびＫ２００Ｍ）９０ｗｔ％、並びに５−アミノサリチル酸１０ｗｔ％で作製した。次いで溶出結果のために溶出試験を行った。結果は図２に示す。図２における溶出結果に示すように、低い粘度を有するＨＰＭＣ（Ｋ１００ＬＶ）を用いて作製した錠剤は、人工胃液および人工腸液を条件とした後、約１００％の放出率を有し、結腸における放出を達成できなかった。一方、より高い粘度を有するＨＰＭＣ（Ｋ４Ｍ、Ｋ１５Ｍ、Ｋ１００ＭまたはＫ２００Ｍ）を用いて作製した錠剤は、同じ条件下、結腸における放出率は６０％以上少なくとも維持され、且つ、人工結腸液中での放出が略線形放出曲線を有し、顕著な結腸標的効果を有していた。

〔実験例３：生存可能な数の検出分析〕
市販で入手可能な錠剤Siliankang（４種の生存可能なビフィズス菌の錠剤、５００ｍｇ／錠、ビフィズス菌インファンティス、乳酸桿菌アシドフィルス菌および腸球菌フェカリス（ecterococcus faecalis）は、それぞれ０．５＊１０^６ｃｆｕ／ｇ以上、桿菌セレウス（bacillus cereus）は、０．５＊１０^５ｃｆｕ／ｇ以上、補助剤は、澱粉やミルク粉末状物質である）、並びに上述の実施例において作製した錠剤で溶出を行った。次いで、生存可能な数を検出した。

Ｉ．実験方法
（１）培養培地の作製
ＭＲＳ寒天粉末３９．７ｇに６００ｍｌの蒸留水を加え、加熱溶解した。２．９ｍｍの厚さを有するガラス製培養皿を水道水できれいにし、蒸留水で３回洗浄し、空気乾燥した。

（２）滅菌
培養培地および培養皿を滅菌容器に置き、１２１℃および１０３．４ｋＰａで、３０分間滅菌した。

（３）培養培地を使用するまで温度５２℃の水浴ポット中に置き、培養皿を使用するまで冷却するために室温に置いた。

（４）溶出条件
中国薬局方（２０１５年版第、第４部分、０９３１溶出率および放出率測定法、第１方法−回転バスケット法、５０ｒ／ｍｉｎ、３７℃）にしたがって、市販で入手可能なSiliankang錠剤を取り出す前に人工胃液（ｐＨ１．２）２時間を条件とし、実施例１〜７において作製した錠剤をそれぞれ回転バスケットに置き、順に人工胃液（ｐＨ１.２）２時間、人工腸液（ｐＨ６．８）３時間を条件とした後、取り出した。

ＩＩ．培養
溶出工程前後の、Siliankang錠剤および実施例１〜７において作製した錠剤をガラス製すり鉢に置いて粉にし、５０ｍｌの生理食塩水で希釈した。混合後、１ｍｌの混合物を量り取り、１０倍の倍率の希釈を行った。希釈後、各濃度の１０ｍｌの希釈液をＭＲＳ培養培地に散布を行った。散布した皿を嫌気性のパックに置き、４８時間のインキュベートのために３７℃の一定温度のインキュベータ内に置いた。最終的に、コロニーを数えるために、皿を取り出した。

ＩＩＩ．結果
人工胃液処理（ｐＨ１．２、２７℃）１０^−４倍の希釈で２時間を条件とした市販で入手可能なSiliankang錠剤の場合、コロニーは見られなかった。市販で入手可能なSiliankang錠剤と比較して、実施例１〜７の錠剤は、顕著な違いを示した。人工胃液（ｐＨ１．２、３７℃）２時間、人工腸液（ｐＨ６．８、３７℃）３時間の条件とした実施例１〜７の各錠剤は、生存可能な数は多くまだ残っていた。具体的な生存可能な数の測定結果を表２に示す。比較の結果は、本発明のプロバイオティクス錠剤が、プロバイオティクスが胃および小腸の環境に十分に耐えることができるため、一定の生存可能な数が残り、且つ放出のために結腸に送達することができることを示す。さらに、本発明を使用することにより、様々なメーカーによる様々な菌株を全て保護し、且つ放出のために結腸部位に送達させることができた。

人工胃液２時間、人工腸液３時間、および人工結腸液１８時間の順の条件下における実施例１〜７の錠剤の溶出曲線のグラフである。人工胃液２時間、人工腸液３時間、および人工結腸液１８時間の順の条件下における異なる粘度のヒドロキシプロピルメチルセルロースを用いて作製した錠剤の溶出曲線のグラフである。

Claims

生物学的活性成分の結腸標的組成物であって、ヒドロキシプロピルメチルセルロースと、生物学的活性成分と、補助剤と、を含み、
前記ヒドロキシプロピルメチルセルロースの重量百分率は４０〜９０％であり、前記生物学的活性成分の重量百分率は１０〜４０％であり、前記補助剤の重量百分率は０〜５０％であり、前記ヒドロキシプロピルメチルセルロースの粘度は１５，０００ｍＰａ・ｓ〜２００，０００ｍＰａ・ｓであり、
前記生物学的活性成分はプロバイオティクスである、組成物。
前記プロバイオティクスは、ビフィズス菌、乳酸桿菌およびグラム陽性球菌のうちの１つ以上を含む、請求項１に記載の組成物。
前記ビフィズス菌は、ビフィズス菌ラクティス、ビフィズス菌インファンティス、ビフィズス菌ビフィダム、ビフィズス菌ロンガム、ビフィズス菌ブレーベおよびビフィズス菌アドレセンティスのうちの１つ以上であり、前記乳酸桿菌は、乳酸桿菌アシドフィルス、乳酸桿菌カゼイ、乳酸桿菌クリスパタス、乳酸桿菌デルブリュッキ菌亜種ブルガリス、乳酸桿菌デルブリュッキ菌亜種、乳酸桿菌ファーメンタム、乳酸桿菌ガセリ、乳酸桿菌ヘルベティカス、乳酸桿菌ジョンソニ、乳酸桿菌パラカゼイ、乳酸桿菌プランタルム、乳酸桿菌ロイテリ、乳酸桿菌ラムノサスおよび乳酸桿菌サリバリウスのうちの１つ以上であり、前記グラム陽性球菌は、連鎖球菌フェカリスおよびラクトコッカスのうちの１つ以上である、請求項２に記載の組成物。
前記組成物中のプロバイオティクスの量は、０．０１億〜１２００億ｃｆｕ／ｇである、請求項２または３に記載の組成物。
前記補助剤は、前記生物学的活性成分の生存安定性に有益な栄養物質、前記生物学的活性成分の結腸標的送達に有益な薬用補助剤もしくは食品添加剤、および／または、製剤自体の性質を最適化するその他の補助剤を含む、請求項４に記載の組成物。
請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物を含む、生物学的活性成分の結腸標的製剤。
前記製剤の剤形は、錠剤であり、前記錠剤は、一錠につき、≦５００ｍｇの重量および≦１０ｍｍの直径を有する、請求項６に記載の生物学的活性成分の結腸標的製剤。
生物学的活性成分の結腸標的製剤の作製における、請求項１〜５の何れか１項に記載の組成物の使用。
請求項７に記載の生物学的活性成分の結腸標的製剤を作製する方法であって、
（１）操作温度＜２８℃および湿度＜４０％の下、前記ヒドロキシプロピルメチルセルロースと、前記生物学的活性成分と、前記補助剤とを混合する工程と、
（２）混合物を直接的に乾式プレスして錠剤とするか、乾式造粒後にプレスして錠剤とする工程と、を含む方法。