JP6968168B2

JP6968168B2 - インジゴカルミンを調製する方法

Info

Publication number: JP6968168B2
Application number: JP2019528826A
Authority: JP
Inventors: ババックサヤー; ステファンクエル; ミシェルフェロー; ニコラロペス
Original assignee: プロヴファームライフソリューションズ
Priority date: 2016-12-01
Filing date: 2017-11-27
Publication date: 2021-11-17
Anticipated expiration: 2037-11-27
Also published as: ES2928385T3; FR3059664B1; KR102432094B1; AU2017369779B2; RU2019115440A3; WO2018100277A1; EP3548563A1; US20190292370A1; KR20190088486A; BR112019010919A2; ZA201903450B; JP2020500973A; AU2017369779A1; EP3548563B1; MA46994A; RU2748041C2; RU2019115440A; FR3059664A1; CN110023414B; IL266928A

Description

本発明は、インジゴカルミン分子を調製する新規な方法に関し、この方法は、高い純度を達成することを可能にし、同時に実施するのが非常に簡単であり、高収率を有する。

５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムおよび３，３′−ジオキソ−２，２′−ビス（インドリデン）−５，５′−ジスルホン酸二ナトリウム（ＣＡＳ番号８６０−２２−０）の名称でも既知であるインジゴカルミンは、食品、薬剤、および化粧品の分野だけでなく、印刷および写真の分野においても染料としてのその使用が既知である（Ｒ．Ｗ．Ｓａｂｎｉｓ，ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＤｙｅｓａｎｄＳｔａｉｎｓ，２０１０，ＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，２３９頁）。食品部門では、インジゴカルミンは、ＥＦＳＡＪｏｕｒｎａｌ２０１４；１２（７）：３７６８で報告されている仕様の対象である。薬剤部門では、組織の死滅、特定の腫瘍細胞の検出に特に使用されている。５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムは、一般に、下記のスキーム１に要約される反応に従って、インジゴまたは２−（１，３−ジヒドロ−３−オキソ−２Ｈ−インドール−２−イリデン）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−インドール−３−オン（ＣＡＳ番号：４８２−８９−３）から得られる。

しかしながら、この反応の過程で、主に５、５′、７、７′の位置で、モノ−、ジ−、トリ−、またはテトラスルホン化された、他の化合物が通常形成される。

ジスルホン化異性体は、大量に存在し、それらの物理化学的性質は、インジゴカルミンの物理化学的性質と非常に類似している。ジスルホン化分子の構造的類似性は、それらを分離することを困難にする。ジスルホン化異性体の存在は、医学的用途または診断的用途にとって、望ましくない汚染物質を患者の体内に導入するという欠点を有する。Ｓｕｎｇ−ＨｏｏｎＫｉｍｅｔａｌ．，ＫｏｒｅａｎＪ．Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌ．２０１１年１１月；６１（５）：４３５〜４３８は、不純物を含有するインジゴカルミンが投与された患者の場合における低血圧の症例を記載している。これらの副作用は、不純物によるものであった。

したがって、本発明の目的は、不純物、特にジスルホン化不純物を実質的に含まない５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムを調製する方法を開発することであった。食品部門のＥＦＳＡ要件および薬剤部門の標準ＩＣＨに準拠した５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムにアクセスできる方法の開発が求められていた（日米ＥＵ医薬品規制調和国際会議；新有効成分含有医薬品のうち原薬の不純物に関するガイドラインＱ３Ａ（Ｒ２）（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅｏｎｈａｒｍｏｎｉｓａｔｉｏｎｏｆｔｅｃｈｎｉｃａｌｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓｆｏｒｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓｆｏｒｈｕｍａｎｕｓｅ；ＩＣＨｈａｒｍｏｎｉｓｅｄｔｒｉｐａｒｔｉｔｅｇｕｉｄｅｌｉｎｅ − Ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓｉｎｎｅｗｄｒｕｇｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ − Ｑ３Ａ（Ｒ２））；ステップ４バージョン；２００６年１０月２５日）。ＩＣＨ規格は、有効成分が、有効成分に対して０．１０％以上の含有量で未確認の不純物を含有すべきではないと規定している。迅速で、安価で、効率的で、高収率で、かつ工業規模に容易に外挿可能な方法を開発することが求められていた。

本発明は、出発原料をインジゴとする５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムを調製する方法に関し、この方法は、以下の
ｉ）インジゴを、５，５′−インジゴスルホン酸を含有する混合物に導くスルホン化処理に供する工程を含み、この方法は、
ｉｉ）工程ｉ）で得られた混合物を、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸を含む組成物を得るために、還元処理および任意に精製工程に供することと、
ｉｉｉ）ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸が、工程ｉｉ）で得られた組成物から単離されることと、
ｉｖ）工程ｉｉｉ）で得られたロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸を５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムに酸化することと、
を特徴とする。

発明の詳細な説明

好ましい実施形態によれば、工程ｉ）の還元処理は、水性媒体中で亜ジチオン酸ナトリウムを使用して実施される。

好ましい実施形態によれば、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸は、工程ｉｉ）の終了時に反応媒体から沈殿する。

好ましい実施形態によれば、工程ｉｉｉ）は、
ｉｉｉａ）工程ｉｉ）で得られた組成物のろ過と、
ｉｉｉｂ）フィルター上に残った固体の回収と、
からなる少なくとも１つの工程を含む。

有利には、工程ｉｉｉ）はまた、工程ｉｉｉｂ）後に、固体を水性媒体で洗浄することからなる少なくとも１つの工程ｉｉｉｃ）を含む。

より有利には、工程ｉｉｉｃ）は、１〜５回適用される。

好ましい実施形態によれば、工程ｉｉｉ）の終了時に得られる組成物は、組成物の合計モル数に対して少なくとも９０モル％のロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸を含む。

好ましい実施形態によれば、工程ｉｖ）は、酸化剤の存在下でのアルコール媒体中での塩基での処理からなる少なくとも１つの工程ｉｖａ）を含む。

有利には、工程ｉｖａ）は、酸化剤の存在下でのエタノール中でのナトリウムエトキシドでの処理からなる。

有利には、酸化剤は、気体酸素である。

好ましい実施形態によれば、本方法はまた、工程ｉｖａ）後に、１つ以上のアルコール性および／または水性−アルコール性溶媒での１回以上の洗浄からなる少なくとも１つの工程ｉｖｂ）を含む。

本発明はまた、少なくとも９９．５％の５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムを含む組成物を生成するための上記で定義された方法の使用にも関し、その百分率は、２９０ｎｍで検出する高圧液体クロマトグラフィーによって測定される。

本発明はまた、０．１０％を超える量で不純物が存在しない組成物を生成するための上記で定義された方法の使用にも関し、その百分率は、２９０ｎｍで検出する高圧液体クロマトグラフィーによって測定される。

本発明はまた、５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムを含む医薬または診断用製品を製造する方法にも関し、この方法は、上記および下記に詳述する方法による５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムの製造、および薬学的に許容される支持体への５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムの導入を含む。

本発明はまた、５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムを含む食品組成物を製造する方法にも関し、この方法は、上記および下記に詳述する方法による５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムの製造、および食品用途に適合する支持体への５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムの導入を含む。

例えば、後者の方法は、食品着色組成物または着色食品組成物の製造に関するものであり得る。

本発明者らは、驚くべきことに、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸が、インジゴのスルホン化および還元処理の適用によって得られるそのジスルホン化異性体から容易に分離され得るのに対して、酸形態または二ナトリウム塩形態の５，５′−インジゴスルホン酸とそのジスルホン化異性体との混合物は、分離が困難であることを観察した。

具体的には、還元は、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸が難溶である反応媒体中で実施されたのに対して、その汚染物質、特にそのジスルホン化異性体は、この媒体に可溶である。

したがって、これらの中間生成物を還元形態で処理することにより、高収率で効率的な分離が可能になる。こうして、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸が回収される。次いで、単離された生成物を酸化処理に供して、高レベルの純度を有する５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムを形成し得る。
工程ｉ）インジゴのスルホン化

出発原料は、インジゴまたは２−（１，３−ジヒドロ−３−オキソ−２Ｈ−インドール−２−イリデン）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−インドール−３−オン（ＣＡＳ：４８２−８９−３）である。インジゴは、以下のスキーム２に従ってスルホン化処理に供される。

この既知の反応は、通常、硫酸で処理することにより実施される。例えば、以下の刊行物が参照され得る。米国特許第６４７２８０号明細書；ＴｕｄｏｒａＢａｌｔａｃｅｔａｌ．，ＲｅｖｉｓｔａｄｅＣｈｉｍｉｅ（Ｂｕｃｈａｒｅｓｔ，Ｒｏｍａｎｉａ）（２０１２），６３（６），６１８−６２０；ＩｑｂａｌＴ．Ｓｈａｄｉｅｔａｌ．，ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ（ケンブリッジ、英国）（２００４），（１２），１４３６−１４３７；Ｃａｐｒｏｎ，Ｆ．（１８６３），Ｂｌｕｅｓａｎｄｃａｒｍｉｎｅｓｏｆｉｎｄｉｇｏ：ａｐｒａｃｔｉｃａｌｔｒｅａｔｉｓｅｏｎｔｈｅｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎｏｆｅｖｅｒｙｃｏｍｍｅｒｃｉａｌｐｒｏｄｕｃｔｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｉｎｄｉｇｏ；Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｈ．Ｃ．Ｂａｉｒｄ（ｈｔｔｐｓ：／／ｃａｔａｌｏｇ．ｈａｔｈｉｔｒｕｓｔ．ｏｒｇ／Ｒｅｃｏｒｄ／００６２１８５８５）；ＶａｎｅｓｓａＢｉａｎｄａｅｔａｌ．，ＢｕｌｇａｒｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｃｉｅｎｃｅＥｄｕｃａｔｉｏｎ，第２２巻、第１号、２０１３年；ＣｈａｒｌｅｓＥ．Ｃａｒｒａｈｅｒｅｔａｌ．，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒＳｃｉｅｎｃｅ，第１５巻、第５号、１９８１年、７７３〜７８５頁；Ｒ．Ｗ．Ｓａｂｎｉｓ，ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＤｙｅｓａｎｄＳｔａｉｎｓ，２０１０，ＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，２３９頁。

しかしながら、本発明の方法は、この反応の生成物に限定されず、それらを得るための方法に関係なく、５，５′−インジゴスルホン酸および５，５′−インジゴスルホン酸のジスルホン化異性体を含む任意の組成物に適用され得る。

出発組成物がインジゴのスルホン化から誘導される場合、それはまた、５，５′−インジゴスルホン酸およびジスルホン化異性体に加えて、インジゴ、モノスルホン化誘導体、トリスルホン化誘導体、テトラスルホン化誘導体、およびこの反応の副生成物も含み得る。しかしながら、通常、これらの他の誘導体は、既知の方法、例えば高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により除去される。

出発組成物がインジゴのスルホン化から誘導される場合、それは、約６０％〜９５％の５，５′−インジゴスルホン酸および５〜４０％のジスルホン化異性体、好ましくは７５〜８０％の５，５′−インジゴスルホン酸および２０〜２５％のジスルホン化異性体を含み、その百分率は、全てのジスルホン化分子のモル数の合計に対するモル数として示される。しかしながら、本発明の方法は、全ての比率の異性体の混合物を含む組成物に適用され得る。

有利には、本発明の方法で実施するために、５，５′−インジゴスルホン酸およびそのジスルホン化異性体が出発組成物の合計モル数に対して少なくとも９０モル％、さらにより有利には少なくとも９５モル％、より良好には少なくとも９８モル％を占める出発組成物が使用される。

５，５′−インジゴスルホン酸の「ジスルホン化異性体」という用語は、インドール基のそれぞれにスルホン酸またはスルホン酸官能基を有する置換基を有する、インジゴ、または２−（１，３−ジヒドロ−３−オキソ−２Ｈ−インドール−２−イリデン）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−インドール−３−オンの構造を有する任意の分子を意味する。５，７′−インジゴスルホン酸は、５，５′−インジゴスルホン酸のジスルホン化異性体の例である。
工程ｉｉ）工程ｉ）で得られた混合物の還元

第１の工程では、５，５′−インジゴスルホン酸を含む工程ｉ）で得られた混合物を還元処理に供してロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸と他の化合物との混合物を得る。

有利には、この還元処理は、還元剤として亜ジチオン酸ナトリウムを使用して実施される。あるいは、以下の還元剤の１つまたは他のものを使用し得る。セスキ硫化ヒ素と亜硫酸水素ナトリウムとの混合物、硫酸鉄（ＩＩ）、亜鉛。または電気分解による還元を実施し得る。

好ましくは、還元処理は、水性媒体中で実施される。

有利には、還元処理は、４０〜６０℃、有利には４５〜５５℃の範囲の温度での加熱を適用することによって実施される。

好ましくは、処理の全期間は、３０分〜６時間、有利には１時間〜４時間である。

好ましくは、還元処理後、得られた組成物は、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸の含有量を増加させることを可能にする条件下で精製される。特に、媒体は、特定の汚染物質、例えば還元インジゴを除去するために有機溶媒で抽出される。抽出は、酢酸エチルを用いて、またはスルホン化されていない成分を抽出するのに適した他の任意の溶媒を用いて実施され得る。
工程ｉｉｉ）ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸の分離

第２の工程において、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸は、反応媒体から分離される。有利には、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸は、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸の沈殿、それに続くろ過および固体の回収によって反応媒体から分離される。

好ましくは、工程ｉｉ）は、異性体ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸が沈殿する溶媒中で実施された。好ましくは、異性体ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸は、それを含む水性組成物から分離される。有利には、分離は、工程ｉｉ）で得られた反応媒体中で、任意に第１の精製、例えば有機溶媒を使用する抽出を行った後に、直接実施される。好ましくは、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸は、工程ｉｉ）の終了時に反応媒体中に沈殿する。

あるいは、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸が可溶である媒体中で工程ｉｉ）の反応が実施された場合、次いで、反応媒体への水の添加、または溶媒交換を実施して、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸を沈殿させ得る。

好ましくは、分離は、工程ｉｉ）で得られた反応媒体をろ過支持体に通過させることによって実施される。例えば、工程ｉｉ）で得られた反応媒体は、多孔度３のフィルター漏斗またはマルチフィラメントポリプロピレンろ過ガーゼなどのフィルターを通してろ過され得る。有利には、工程ｉｉ）で得られた反応媒体は、好ましくは４０〜６０℃、有利には４５〜５５℃の範囲の温度で熱ろ過される。

これらの条件下で、固体である異性体ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸は、フィルターによって保持される一方、工程ｉｉ）からの反応媒体に可溶である、反応媒体の他の成分は、ろ過中に水相に取り込まれる。

有利には、このろ過は、固体を有機溶媒、例えばＴＨＦ中にスラリー化し、このようにして形成されたペーストをろ過することからなる処理で完了され得る。このスラリー化は、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸の純度を向上させることを可能にする。

本発明によれば、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸の分離工程を、水による洗浄などの追加の精製によって、例えば、水中にロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸を含む固相を取り上げることによって完了することが有利に想定され、これを、４０〜６０℃、有利には４５〜５５℃の範囲の温度にし、次いでこのようにして調製した懸濁液をろ過する。フィルター上に回収された固体は、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸である。その純度は、この追加の精製工程によって向上される。

有利には、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸の水での洗浄操作は、１〜５回、さらにより有利には２〜４回適用される。

有利には、この洗浄は、固体を有機溶媒、例えば、ＴＨＦ中でスラリー化することと、このようにして形成されたスラリーをろ過することとからなる処理で完了され得る。このスラリー化は、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸の純度を向上させることを可能にする。

有利には、精製処理は、期待されるレベルの純度を有するロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸が得られるまで繰り返される。好ましくは、精製処理は、組成物のモル数に対して、少なくとも９９モル％のロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸を含む組成物が得られるまで繰り返される。

ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸は、本発明の方法を実施するのに不可欠な中間体である。

ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸を工程ｉｉ）で得られた反応媒体から分離するために他の技術、例えば高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）が使用され得る。しかしながら、ろ過は、工業規模に非常に容易に外挿可能な実用的で効率的な方法であるという利点を有する。
工程ｉｖ）ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸の酸化

第４の工程において、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸は、以下のスキーム３に従って、好適な酸化処理を介して、５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムに変換される。

有利には、この処理は、酸化剤の存在下でのアルコール媒体中での塩基での処理からなる。好ましくは、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸は、酸化剤の存在下でアルコール媒体中でナトリウムアルコキシドで処理される。

好ましくは、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸は、酸化剤の存在下でエタノール媒体中でナトリウムエトキシドで処理される。好ましくは、処理は高温で、有利には４０〜６０℃、さらにより有利には４５〜５５℃の範囲の温度で実施される。好ましくは、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸は、酸化剤の存在下で、０．５〜２．５モル当量のナトリウムアルコキシド、好ましくは０．８〜１．５モル当量のナトリウムアルコキシドで処理される。さらにより好ましくは、ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸は、酸化剤の存在下で、０．５〜２．５モル当量のナトリウムエトキシド、好ましくは０．８〜１．５モル当量のナトリウムエトキシドで処理される。有利には、酸化剤は、Ｏ_２、Ｈ_２Ｏ_２、ＫＨＳＯ_５、ＦｅＣｌ_３から選択される。

好ましくは、酸化剤は、気体酸素であり、これは純粋にまたは他の気体との混合物として、例えば大気酸素として使用され得る。好ましくは、処理期間は、３０分〜１０時間、さらにより好ましくは１時間〜８時間、有利には２時間〜６時間である。

好ましくは、工程ｉｖ）の処理後に、１つ以上の有機溶媒での１回以上の洗浄が続く。好ましくは、工程ｉｖ）の処理後に、１つ以上のアルコール性および／または水性−アルコール性溶媒での１回以上の洗浄、特にエタノールでの洗浄、および／またはメタノールでの洗浄、および／または水とメタノールとの混合物での洗浄、および／または水とエタノールとの混合物での洗浄が続く。
用途

本発明の主題はまた、高レベルの純度を有するインジゴカルミンまたは５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムを生成するための上記の方法の使用である。特に、本発明は、少なくとも９９．５％、より良好には少なくとも９９．７％のインジゴカルミンまたは５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムを含む組成物を生成するための上記の方法の使用に関する。材料組成物中のインジゴカルミンの量を評価するために、％は、１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３．０）＋１ｍＭのＴＢＡＣｌ／ＭｅＯＨ（７０／３０→１０／９０）の勾配で溶出する１５０×４．６５μｍのＣ１８カラム上で２９０ｎｍで検出する高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定される。

本発明は、０．１０％を超える量で不純物が存在しない、より良好には０．０５％を超える量で不純物が存在しない組成物を生成するための上記の方法の使用に関する。不純物量の評価は、インジゴカルミン量の評価で使用されたものと同じ方法によって実施される。

本発明の主題はまた、インジゴカルミンまたは５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムを含む医薬または診断用製品を生成するための上記の方法の使用である。前記医薬または診断用製品は、これらの用途におけるその使用に好適な任意の形態であり得る。特に、１〜１０００ｍｇのインジゴカルミンを含む錠剤またはゲルカプセルの形態、０．１〜１０質量％の範囲の濃度でインジゴカルミンを含む水溶液の形態が挙げられ得る。そのような組成物は、インジゴカルミンに加えて、当業者に周知の賦形剤、例えばクエン酸および／またはクエン酸塩、リン酸緩衝液、ポリマー、セルロース誘導体、脂質を含む。インジゴカルミンを含む製剤は、特に国際公開特許ＷＯ２０１１／１０７９４５および国際公開特許ＷＯ２０１０／０１８７２３に例示されている。医学的および診断的用途において、本発明の方法を介して得られるインジゴカルミンは、その用途に有用ではない材料の本体への導入を回避する、高純度の利点を有する。

本発明の主題はまた、インジゴカルミンまたは５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムを含む食品着色料を生成するための上記の方法の使用である。前記食品着色料は、これらの用途におけるその使用に好適な任意の形態、特に粉末または水溶液形態であり得る。本発明の方法により得られる高レベルの純度のインジゴカルミンは、その無害性を確実にすることを可能にする。

本発明の方法の効率は、低コストで製品へのアクセスを可能にする。

Ｉ−材料および方法
１．出発原料および機器

インジゴは、ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社から商品番号２１２１３で購入した。純度：製造者の指定に従って９４．８％。

ガーゼ（ろ過）：ＳＥＦＡＲ社から市販されている商品番号Ｖ−０５−６−４７５Ｋ。

ヌッチェフィルター：ＢＵＣＨＩ社から市販されている直径２８０ｍｍ、３５Ｌ。
２．分析方法
機械：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００（登録商標）
カラム：ＫＲＯＭＡＳＩＬＣ１８（登録商標）１５０ｘ４．６−５μｍ
検出：２９０ｎｍ
試料濃度：１０００ｐｐｍ
試料溶解用溶媒：９０／１０Ｈ_２Ｏ／ＭｅＯＨ
溶出溶媒：１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３．０）＋１ｍＭＴＢＡＣｌ／ＭｅＯＨ
ＩＩ−プロトコル
１．５，５′−インジゴスルホン酸へのインジゴの変換

１．５ｋｇのインジゴ（５．７２モル）を１０リットルの反応器に入れ、これに、撹拌しながら、室温で６リットルの９６％濃度のＨ_２ＳＯ_４水溶液を添加する。撹拌を続けながら、混合物を７０℃で３時間維持する。次いで、混合物を５℃に冷却する。５℃に冷却した１５リットルの水を含有する６０リットルの反応器に混合物をゆっくり添加する。混合物の添加は、１時間１５分かけて実施される。９０ｍｌのオクタノールを混合物に添加し、得られた混合物を５０℃にする。反応媒体の懸濁液中に固体が得られ、これは５，５′−インジゴスルホン酸を含む混合物である。
２．５，５′−インジゴスルホン酸を含む混合物の還元

亜ジチオン酸ナトリウム水溶液を１５リットルの水および３．５１ｋｇの８５％亜ジチオン酸ナトリウム溶液から調製する。このようにして調製した水溶液を窒素下で滴下漏斗に入れる。亜ジチオン酸ナトリウム水溶液を、媒体を５０℃に維持しながら、工程１から得られた反応混合物に撹拌しながら添加する。亜ジチオン酸ナトリウム水溶液の添加は、１時間かけて実施される。次いで、混合物を５０℃で約１時間撹拌し続ける。次いで、７．５リットルの酢酸エチルを混合物に添加し、得られた混合物を５０℃で２０分間撹拌する。媒体は、依然としてロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸を含む懸濁液の形態である。
３．ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸の分離

次いで、工程２−で得られた反応媒体を、Ｖ−０５−６−４７５Ｋガーゼを備えたヌッチェフィルターを通してろ過する。

フィルター上に残った固体を４．５リットルのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）でスラリー化し、次いで液体をろ過する。
４．ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸の洗浄

工程３の終了時にフィルター上に残った生成物を６０リットルの反応器中で３０リットルの水中に取り上げる。全体を５０℃で３０分間加熱し、次いでＶ−０５−６−４７５Ｋガーゼを備えたヌッチェフィルターを通してろ過する。

フィルター上に残った固体を４．５リットルのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）でスラリー化し、次いで液体をろ過する。

この洗浄を繰り返して、同じ条件下で合計３回洗浄する。１．８ｋｇの湿った生成物が得られる。推定乾燥質量：１．３ｋｇ。
５．ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムの５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムへの変換

工程４で得られた１．８ｋｇの生成物を６０リットルの反応器中で２６リットルのエタノールに懸濁させる。エタノール中に２１質量％のナトリウムエトキシド（ＮａＯＥｔ）を含有する１１４３ｍｌの溶液を添加する。混合物を５０℃にし、それを５０℃に維持しながら空気を４時間かけて反応媒体に吹き込む。

この期間の終わりに、反応媒体を焼結漏斗を通してろ過し、ろ過した後、５．２リットルのエタノールで洗浄する。
６．５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムの洗浄

湿った固体を２６リットルのメタノール中に取り上げ、全体を４０℃で３０分間加熱し、次いで焼結漏斗を通してろ過し、続いて５．２リットルのメタノールで洗浄する。

この洗浄をもう一度繰り返す。

次に、湿った固体を１３リットルの水と１３リットルのメタノールとの混合物中に取り上げ、全体を６０℃で３０分間加熱し、次いで焼結漏斗を通してろ過し、続いて３．９リットルのメタノールで洗浄する。

固体を換気オーブン中で乾燥させる。

１．０５ｋｇの５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムが得られ、収率は、方法に関与するインジゴの全量に対して３９％である。
ＩＩＩ−結果

得られた生成物を上記の方法によりＨＰＬＣで分析する。純度は、試験に応じて９９．８５％〜９９．９５％であると評価される（３つの試験が実施された）。

本発明の方法が、大規模に容易に外挿可能であり、かつ得られた生成物の品質（純度）の観点から再現可能である簡単で安価なプロトコルを適用することによって、高収率で高純度の生成物を得ることを可能にすることが見出された。

Claims

出発原料をインジゴとする５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムを調製する方法であって、この方法が、以下の
ｉ）５，５′−インジゴスルホン酸を含有する混合物を得るスルホン化処理にインジゴを供する工程を含み、
この方法が、
ｉｉ）ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸を含む組成物を得るために、工程ｉ）で得られた前記混合物を還元処理および任意に精製工程に供することと、
ｉｉｉ）前記ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸が、工程ｉｉ）で得られた前記組成物から単離されることと、
ｉｖ）工程ｉｉｉ）で得られた前記ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸を５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムに酸化することと、
を特徴とする、方法。
工程ｉｉ）の前記還元処理が、水性媒体中で亜ジチオン酸ナトリウムを使用して実施される、請求項１に記載の方法。
前記ロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸が、工程ｉｉ）の終了時に前記反応媒体中に沈殿する、請求項１または請求項２に記載の方法。
工程ｉｉｉ）が、
ｉｉｉａ）工程ｉｉ）で得られた前記組成物のろ過と、
ｉｉｉｂ）フィルター上に残った固体の回収と、
からなる少なくとも１つの工程を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
工程ｉｉｉ）が、工程ｉｉｉｂ）後に、前記固体を水性媒体で洗浄することからなる少なくとも１つの工程ｉｉｉｃ）も含む、請求項４に記載の方法。
工程ｉｉｉｃ）が１〜５回適用される、請求項５に記載の方法。
工程ｉｉｉ）の終了時に得られる前記組成物が、前記組成物の合計モル数に対して少なくとも９０モル％のロイコ−５，５′−インジゴスルホン酸を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
工程ｉｖ）が、酸化剤の存在下でのアルコール媒体中での塩基での処理からなる少なくとも１つの工程ｉｖａ）を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
工程ｉｖａ）が、酸化剤の存在下でのエタノール中でのナトリウムエトキシドでの処理からなる、請求項８に記載の方法。
前記酸化剤が気体酸素である、請求項８または請求項９に記載の方法。
工程ｉｖａ）後に、１つ以上のアルコール性および／または水性−アルコール性溶媒での１回以上の洗浄からなる少なくとも１つの工程ｉｖｂ）も含む、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の方法。
少なくとも９９．５％の５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムを含む組成物を生成するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法の使用であって、前記百分率が２９０ｎｍで検出する高圧液体クロマトグラフィーによって測定される、使用。
不純物が０．１０％を超える量で存在しない組成物を生成するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法の使用であって、前記百分率が２９０ｎｍで検出する高圧液体クロマトグラフィーによって測定される、使用。
５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムを含む医薬または診断用製品を製造する方法であって、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法による５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムの製造および薬学的に許容される支持体への前記５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムの導入を含む、方法。
５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムを含む食品組成物を製造する方法であって、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法による５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムの製造および食品用途に適合する支持体への前記５，５′−インジゴスルホン酸二ナトリウムの導入を含む、方法。