JP6942135B2

JP6942135B2 - 血漿バイオマーカーのレベルを測定することによる、がんに罹患していることが疑われる患者のアフリベルセプトによる治療の転帰を予測するための方法

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Publication number: JP6942135B2
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Inventors: マリエル・シロン−ブロンデル; ジェニファー・ドレイマン; カロリーヌ・パカール
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Description

本発明は、がんに罹患していることが疑われる患者のアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトによる治療の転帰を予測するための、バイオマーカーとしてのＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１およびＰｌＧＦの使用に関する。

アフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトは、ＶＥＧＦＲ１Ｒ２−Ｆｃ．ＤＥＬＴＡ．Ｃ１Ｆｌｔ１Ｄ２．Ｆｌｋ１Ｄ３．Ｆｃ．ＤＥＬＴＡ．Ｃ１またはＡＶＥ０００５とも称されるが、各ダイマーが２つの同一のモノマーを含むホモダイマータンパク質であり、その各々は、ＶＥＧＦＲ１受容体のＤ２Ｉｇドメインに融合し、それがＶＥＧＦＲ２受容体のＤ３Ｉｇドメインに融合し、さらにそれがＩｇＧ１のＦｃドメインに融合したＶＥＧＦＲ１のシグナル配列を含む融合タンパク質である。

タンパク質鎖は、炭水化物構造に寄与するＮアセチル−グルコサミン、フコース、ガラクトース、マンノースおよびシアリン酸によりグリコシル化される。Ｎ結合型オリゴ糖は、ゼロ、１または２個の末端シアリン酸を有する二分岐構造から主になる。モノマーは、配列番号１のアミノ酸配列を有する。

米国食品医薬品局（ＦＤＡ）は、商品名ＥＹＬＥＡ（登録商標）で、血管新生を伴う（滲出型の）加齢黄斑変性（ＡＭＤ）の患者の治療用に、アフリベルセプトを既に認可している。特にＥＹＬＥＡ（登録商標）は、硝子体内注射用に調製され、処理され、および製剤化されたアフリベルセプトの商品名である。

がんを標示するためのアフリベルセプト（ＺＡＬＴＲＡＰ登録商標））の登録の際、およびＡＭＤの治療におけるアフリベルセプトの認可された使用を考慮し、ＦＤＡは、がんの治療における化合物の使用に対して異なる名称（ｚｉｖ−アフリベルセプト）を付与するよう要請した。したがって、ｚｉｖ−アフリベルセプトとは、静脈内注入による注射用に調製され、処理され、および製剤化されたアフリベルセプトを含む医薬組成物を示すものとして、ＦＤＡにより容認された米国一般名（ＵＳＡＮ）である。ｚｉｖ−アフリベルセプトは、転移性結腸直腸がん（ｍＣＲＣ）の治療用に、商品名ＺＡＬＴＲＡＰ（登録商標）での販売をＦＤＡにより認可されている。

欧州医薬品庁（ＥＭＡ）もＺＡＬＴＲＡＰ（登録商標）を認可したが、化合物の名称を区別することまでは要請しなかった。ゆえに、欧州連合においては、標示に関係なく「アフリベルセプト」の名称が用いられている。

ＺＡＬＴＲＡＰ（登録商標）およびＥＹＬＥＡ（登録商標）は、わずかに異なる方法で得られる。それらはいずれも、アフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトを含むが、アフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトの凝集の比率が、ＺＡＬＴＲＡＰ（登録商標）およびＥＹＬＥＡ（登録商標）において、わずかに異なる。

ＺＡＬＴＲＡＰ（登録商標）の認可は、ＶＥＬＯＵＲ試験、すなわち多施設における、無作為化されたプラセボ対照フェーズＩＩＩ試験から得られたデータに基づき、試験では、オキサリプラチンを含むレジメンで以前に治療されたｍＣＲＣを有する患者へのＦＯＬＦＩＲＩレジメンとの組合せにおいて、アフリベルセプト対プラセボの効能を比較した。

アフリベルセプトによるがんの治療の効能および安全性にもかかわらず、治療からより恩恵を受けるべき患者をより良好に特定するという目的が依然として存在する。実際、アフリベルセプトから恩恵を受ける転移性結腸直腸がん（ｍＣＲＣ）患者を特定する能力により、この薬物の臨床的有用性がさらに改善される。

現在まで、アフリベルセプトの治療転帰と相関する、血清または血漿の有効な予測バイオマーカーは特定されていない。

臨床試験に関与した患者に由来する腫瘍および血漿サンプルのプロファイリング、ならびにそれに続くそれらのゲノム／プロテオミクスおよび臨床データの分析により、予測バイオマーカーの発見および能力検証が可能となる。

ベースラインでの高レベルのＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１および／またはＰｌＧＦが、短い生存期間と相関することが見出されている。

ＣＤ１０６としても公知の血管細胞接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）は、配列番号１の配列（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１０６９．１）を有する。用語「ＶＣＡＭ−１」には、そのホモログおよびアイソフォームおよびその変異体、ならびに配列の断片が包含されるが、ただし、変異体タンパク質（アイソフォームを含む）、ホモログタンパク質および／または断片は、１つまたはそれ以上のＶＣＡＭ−１特異的抗体により認識されるものである。

ＣＤ５４としても公知の細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ−１）は、配列番号２の配列（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０００１９２．２）を有する。用語「ＩＣＡＭ−１」には、そのホモログおよびアイソフォームおよびその変異体、ならびに配列の断片が包含されるが、ただし、変異体タンパク質（アイソフォームを含む）、ホモログタンパク質および／または断片は、１つまたはそれ以上のＩＣＡＭ−１特異的抗体により認識されるものである。

「胎盤成長因子」または「ＰｌＧＦ」には、それぞれ配列番号３の配列（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００２６２３．２）および配列番号４の配列（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１１９３９４１．１）を有する２つのアイソフォームＰｌＧＦ１およびＰｌＧＦ２が含まれる。用語「ＰｌＧＦ」にはＰｌＧＦ１およびＰｌＧＦ２、それらのホモログおよびアイソフォームおよびその変異体、ならびに配列の断片が包含されるが、ただし、変異体タンパク質（アイソフォームを含む）、ホモログタンパク質および／または断片は、１つまたはそれ以上のＰｌＧＦ特異的抗体により認識されるものである。

患者をベバシズマブで治療した臨床試験において、ＩＣＡＭ−１と患者の転帰との相関が試験された。

肺がん患者をベバシズマブ、シスプラチンおよびエトポシドで治療した試験において、ＩＣＡＭ−１と患者の転帰との相関が見出された（非特許文献１）。その著者らは、「ＩＣＡＭレベルの高い患者では、低いレベルの患者と比較し、ＯＳの改善に対する有意な傾向がみられなかった」ことを見出したが、一方、別の研究では（非特許文献２）「ＩＣＡＭのベースラインが低い患者では、高いＩＣＡＭの患者よりも高い反応を示した」ことを見出した。

しかし、ベバシズマブ、カペシタビンおよびオキサリプラチンで治療された結腸直腸がん患者においては、ＩＣＡＭ−１と患者の転帰との相関は見出されなかった（非特許文献３）。

これらの論文は、同じ生物製剤、すなわちベバシズマブを用いて研究する各種バイオマーカーの間の予測不可能性のレベルを示す。

さらに、ベバシズマブは抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体である。アフリベルセプトは、抗体ではなくキメラタンパク質である。それはヒトＩｇＧ１Ｆｃ部分に融合したヒトＶＥＧＦ受容体１および２の細胞外ドメインの部分からなる。アフリベルセプトは、ＶＥＧＦ−Ａのみならず、ＶＥＧＦ−Ｂおよび胎盤成長因子（ＰｌＧＦ）にも結合する。

ベバシズマブおよびアフリベルセプトは非常に異なる構造および機能を有し、したがって、当業者は、ベバシズマブで得られた結果をアフリベルセプトに直接当てはめることはないであろう。

ＶＣＡＭ−１と患者の転帰との相関は、前述の２つの臨床試験において、見出された（非特許文献３および非特許文献１）。しかしながら、これらの２つの研究において、効果が予測的または予後的であるかを我々に示すためのプラセボアームは存在しない。

Ｈｏｒｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．、２００９（２７）６００６〜６０１１頁Ｄｏｗｌａｔｉら、２００８、Ｃｌｉｎ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．１４（５）、１４０７頁Ｌｉｕら；ＣａｎｃｅｒＭｅｄｉｃｉｎｅ、２０１３、２（２）：２３４〜２４２頁

本発明は、がんに罹患していることが疑われる患者のアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトによる治療の転帰を予測するための、バイオマーカーとしてのＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１および／またはＰｌＧＦの使用に関する。

一態様において、本発明は、がんに罹患していることが疑われる患者が、前記がんのアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプト療法の候補であるか否かを決定する方法であって、患者の生体試料を少なくとも１つのアッセイに供して、ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１およびＰｌＧＦからなる群から選択されるバイオマーカーのレベルをベースラインで測定する工程を含み、生体試料のバイオマーカーレベルが、バイオマーカーの参照発現レベルと比較して低いときに、患者ががんの療法の候補として特定される、方法を提供する。

別の態様において、本発明は、がんに罹患していることが疑われる患者が、前記がんのアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプト療法の候補であるか否かを決定する方法であって、患者の生体試料を少なくとも１つのアッセイに供して、ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１およびＰｌＧＦからなる群から選択されるバイオマーカーのレベルをベースラインで測定する工程を含み、生体試料のバイオマーカーレベルが、バイオマーカーの参照発現レベルまたは閾値と比較して高いときに、患者ががんの療法の候補として特定されない、方法を提供する。バイオマーカーの閾値または参照発現レベルにより、感受性および非感受性の集団の画成が可能となる。

ある実施形態において、ＶＣＡＭ−１の参照発現レベルは、およそ４０６ｎｇ／ｍＬ〜およそ５７７ｎｇ／ｍＬの間となる。さらに別には、ＶＣＡＭ−１の参照発現レベルは、およそ５５３ｎｇ／ｍＬである。

別の実施形態において、ＩＣＡＭ−１の参照発現レベルは、およそ９２ｎｇ／ｍＬ〜およそ１４５ｎｇ／ｍＬの間となる。さらに別には、ＩＣＡＭ−１の参照発現レベルは、およそ１４４ｎｇ／ｍＬである。

別の実施形態において、ＰｌＧＦの参照発現レベルは、およそ１２ｎｇ／ｍＬ〜およそ１９ｎｇ／ｍＬの間となる。さらに別には、ＰｌＧＦの参照発現レベルは、およそ１７ｎｇ／ｍＬである。

本発明はまた、アフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトによりがんを有する患者を治療するための方法であって、患者に治療有効量のアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトを投与する工程を含み、患者の生体試料におけるＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１およびＰｌＧＦからなる群から選択されるバイオマーカーのレベルが、バイオマーカーの参照発現レベルと比較して低い、方法に関する。

さらに別の態様において、本発明は、がんを有する患者の無憎悪生存期間（ＰＦＳ）および／または全生存期間（ＯＳ）を改善するための方法であって、患者に治療有効量のアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトを投与する工程を含み、患者の生体試料におけるＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１およびＰｌＧＦからなる群から選択されるバイオマーカーのレベルが、バイオマーカーの参照発現レベルと比較して低い、方法に関する。

上記の方法の１つの実施形態において、生体試料は、血液、血清および血漿からなる群から選ばれる。

上記の方法の１つの実施形態において、がんは、結腸がん、結腸直腸がんまたは直腸がんである。

上記の方法の１つのさらなる実施形態において、結腸直腸がんは、転移性結腸直腸がんである。

本発明の別の実施形態において、対象は、アフリベルセプトにより治療され、さらにオキサリプラチン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）およびフォリン酸（すなわちＦＯＬＦＯＸ治療）、フォリン酸、５−フルオロウラシルおよびイリノテカン（すなわちＦＯＬＦＩＲＩ治療）、または５−フルオロウラシルおよびフォリン酸（すなわちＦＵＦＯＬまたはＬＶ５ＦＵ２治療）による化学療法的治療を受ける。

化学療法的治療では、例えば、オキサリプラチン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）およびフォリン酸の組合せ（すなわち下記の実施例にて説明するＦＯＬＦＯＸ治療または改良ＦＯＬＦＯＸ６治療）、フォリン酸、５−フルオロウラシルおよびイリノテカンの組合せ（すなわちＦＯＬＦＩＲＩ治療）、または５−フルオロウラシルおよびフォリン酸の組合せ（すなわちＦＵＦＯＬまたはＬＶ５ＦＵ２治療）など、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０の、または多くとも１０、９、８、７、６、５、４、３、２の薬剤を組み合わせてもよい。

これについて、出願ＷＯ２０１２１４６６１０は、アフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトとＦＯＬＦＩＲＩとの組合せによるｍＣＲＣの治療方法に関する。この出願の内容は、参照により組み込まれる。

上記の方法の１つの実施形態において、治療有効量の、アフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプト、オキサリプラチン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）およびフォリン酸が、前記患者に投与される。

上記の方法の１つの実施形態において、治療有効量の、アフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプト、フォリン酸、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）およびイリノテカンが、前記患者に投与される。

上記の方法の１つのさらなる実施形態において、約２００ｍｇ／ｍ^２〜約６００ｍｇ／ｍ^２の間となる投与量のフォリン酸、約２０００ｍｇ／ｍ^２〜約４０００ｍｇ／ｍ^２の間となる投与量の５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、約１００ｍｇ／ｍ^２〜約３００ｍｇ／ｍ^２の間となる投与量のイリノテカン、および約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの間となる投与量のアフリベルセプトが、患者に投与される。

上記の方法の１つのさらなる実施形態において、約４００ｍｇ／ｍ^２の投与量のフォリン酸、約２８００ｍｇ／ｍ^２の投与量の５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、約１８０ｍｇ／ｍ^２の投与量のイリノテカン、および約４ｍｇ／ｋｇの投与量のアフリベルセプトが、患者に投与される。

上記の方法の１つのさらなる実施形態において、フォリン酸は、約４００ｍｇ／ｍ^２の投与量で静脈内に投与され、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）は、約２８００ｍｇ／ｍ^２の投与量で静脈内に投与され、イリノテカンは、約１８０ｍｇ／ｍ^２の投与量で静脈内に投与され、およびアフリベルセプトは、約４ｍｇ／ｋｇの投与量で静脈内に投与され、組合せは、２週間毎に投与される。

上記の方法の１つのさらなる実施形態において、フォリン酸、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、イリノテカンおよびアフリベルセプトは、９〜１８週間の間となる期間、２週間毎に静脈内に投与される。

上記の方法の１つのさらなる実施形態において、フォリン酸は、アフリベルセプト投与の直後に静脈内に投与される。それはまた、約２時間にわたるアフリベルセプト投与の直後に静脈内に投与することができる。

上記の方法の１つのさらなる実施形態において、イリノテカンは、アフリベルセプト投与の直後に静脈内に投与される。それはまた、約９０分間にわたるアフリベルセプト投与の直後に静脈内に投与することができる。

上記の方法の１つのさらなる実施形態において、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）は、アフリベルセプト投与の直後に投与される。

上記の方法の１つのさらなる実施形態において、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）の第１の量が、アフリベルセプト投与の直後に静脈内に投与され、５−ＦＵの第２の量が、持続的注入において、第１の量の後に静脈内に投与される。

上記の方法の１つのさらなる実施形態において、約４００ｍｇ／ｍ^２の５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）が、アフリベルセプト投与後、２〜４分間にわたり静脈内に投与され、２４００ｍｇ／ｍ^２の５−ＦＵが、持続的注入において、４００ｍｇ／ｍ^２の投与後、およそ４６時間にわたり静脈内に投与される。

ある実施形態において、前記患者は、以前にオキサリプラチンまたはベバシズマブに基づく療法により治療されている患者である。

別の実施形態において、前記患者は、化学療法、放射線療法または手術に失敗した患者である。

本発明はまた、がんに罹患していることが疑われる患者を治療するのに使用するためのアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトであって、患者が、生体試料におけるＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１およびＰｌＧＦからなる群から選択されるバイオマーカーの、バイオマーカーの参照発現レベルと比較して低いレベルを有するものとして特定されている、アフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトに関する。

本発明はさらに、がんに罹患していることが疑われる患者が、アフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプト療法の候補であるか否かを予測するためのキットであって：
ａ）ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１およびＰｌＧＦからなる群から選択されるバイオマーカーのレベルを測定するための手段；ならびに
ｂ）場合により、がんに罹患していることが疑われる患者がアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプト療法の候補であるか否かを予測する際に前記キットを使用するための指示を与えるラベル
を含むキットに関する。

本発明の別の態様はさらに、製品であって：
ａ）包装資材；
ｂ）ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１およびＰｌＧＦからなる群から選択されるバイオマーカーのレベルを測定するための手段；ならびに
ｃ）がんに罹患していることが疑われる患者がアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプト療法の候補であるか否かを予測する際に前記キットを使用するための指示を与えるラベル
を含む製品に関する。

本発明の上記方法および使用は、例えば、インビトロまたはエクスビボの方法および使用であってもよい。

ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１およびＰｌＧＦタンパク質の発現レベルを測定するための手段は当技術分野で周知であり、ＥＬＩＳＡアッセイなどのイムノアッセイが含まれる。例えば、ＶＣＡＭ−１を測定するための手段としては、ＶＣＡＭ−１に特異的に結合する抗体が挙げられる。

ＶＣＡＭ−１タンパク質のレベルは、例えば、ＥＬＩＳＡアッセイなどの免疫学的検出法を使用して決定することができる。方法では、ＶＣＡＭ−１タンパク質に結合する抗体、例えばモノクローナルもしくはポリクローナル抗体、抗体変異体、または単鎖抗体、ダイアボディ、ミニボディ、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃ（Ｆｖ））、Ｓｃ（Ｆｖ）２抗体、Ｆａｂ断片もしくはＦ（ａｂ’）２断片などの断片、または単一ドメイン抗体が必要とされる。かかる抗体は当技術分野で周知であり、市販されている。それらは特に、ＶＣＡＭ−１タンパク質を有する動物（例えばウサギ、ラットまたはマウス）の免疫化によって、得ることができる。抗体は、ウエスタンブロット法、免疫組織化学／免疫蛍光法（すなわち固定された細胞または組織におけるタンパク質検出）、ＲＩＡ（放射性結合イムノアッセイ）などのラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射線アッセイ、ＦＩＡ（蛍光結合イムノアッセイ）などの蛍光イムノアッセイ、化学発光イムノアッセイ、ＥＣＬＩＡ（電気化学発光イムノアッセイ）およびプロテインＡイムノアッセイなどの技術を用いた競合的および非競合的アッセイシステムを含む、様々な免疫学的アッセイにおいて、タンパク質発現の決定に用いることができる。かかるアッセイはルーチン的なものであり、当業者に周知である、（Ａｕｓｕｂｅｌら（１９９４）、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．１、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、ＮｅｗＹｏｒｋ）。

ＶＣＡＭ−１のタンパク質発現は、質量分析アッセイ（ＬＣ−ＭＳまたはＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）などのプロテオミクス法によって、決定することができる。定性的および定量的な質量分析技術が、当技術分野において、公知であり、用いられている。この目的のために、安定な同位体で標識された合成ペプチドにより作成される較正曲線に基づいて、マーカータンパク質に特異的な標的ペプチドが、選択され、定量化される。規定量の同位体標識された標的ペプチドを添加した酵素分解物が、質量分析と連結された液体クロマトグラフィーにより分析される。標識された標的ペプチドと非標識の標的ペプチドとの比率が測定され、標的ペプチド濃度、したがってタンパク質マーカーの濃度が評価される。

ＶＣＡＭ−１の発現レベルを測定するための手段には、例えば反応および／または洗浄バッファーなどの試薬を含めてもよい。手段は、例えば、バイアルもしくはマイクロタイタープレート中に存在してもよく、またはプライマーおよびプローブの場合には、マイクロアレイなどの固体支持体に取り付けてもよい。

当業者であれば、同様の手段を用いてＩＣＡＭ−１およびＰｌＧＦの検出を行うことができる。

ある実施形態において、ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１およびＰｌＧＦタンパク質は、ビーズベースの多重アッセイ、Ｌｕｍｉｎｅｘ（商標）技術によって、測定することができる。

アフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトは、治療予定の患者に害を与えない製剤において、提供される。

ある実施形態において、アフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトは、最終ｐＨに調整された、スクロースおよびポリソルベート２０（安定化剤）、塩化ナトリウム、クエン酸バッファーおよびリン酸ナトリウムバッファーを有する製剤において、提供される。

別の実施形態において、アフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトは、
− １００ｍｇのアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプト／４．０ｍＬ（名目濃度）の形態、
− ２００ｍｇのアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプト／８．０ｍＬ（名目濃度）の第２の形態、の２つの薬物製品の形態として供給される。

両形態は、２５ｍｇ／ｍＬのアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトで、同じバルク無菌液から製造される。

患者への注入前に、濃縮溶液を０．９％の塩化ナトリウム溶液または５％のデキストロースで希釈する。

上記の方法または使用において、用いる抗がん剤は、治療予定の患者に害を与えない薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤中で提供される。

本発明の組成物において、用いることができる薬学的に許容される担体および賦形剤としては、限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ｄ−ａ−トコフェロールポリエチレングリコール１０００コハク酸エステルなどの自己乳化薬物送達システム（ＳＥＤＤＳ）、医薬剤形において、使用される、Ｔｗｅｅｎなどの界面活性剤または他の類似のポリマー送達マトリックス、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩などの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分的グリセリド混合物、水、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイダルシリカ、三ケイ酸マグネシウムなどの塩または電解質、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロース、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよびラノリンが挙げられる。

当業者に自明なように、組成物は目的の投与経路と適合するように適切に製剤化される。適切な投与経路の例としては、例えば筋肉内、皮下、静脈内、腹腔内または局所腫瘍内注射を含む非経口経路が挙げられる。経口経路を用いてもよいが、ただし、組成物は経口投与に適する（有効成分の、胃および腸内の酵素からの保護が可能な）形態である。

用語「有効量」とは、哺乳動物における疾患または障害の治療に効果的な薬物単独の、または他の薬物もしくは治療レジメンとの組合せにおける量を指す。がんの場合、薬物の治療有効量は、がん細胞の数を減少させ；腫瘍サイズを減少させ；末しょう器官へのがん細胞の浸潤を阻害（すなわちある程度減速、好ましくは停止）し；腫瘍転移を阻害（すなわちある程度減速、好ましくは停止）し；ある程度腫瘍成長を阻害し；および／または障害に関連する１つまたはそれ以上の症状をある程度緩和することができる。薬物が既存のがん細胞の成長を防止および／または死滅させることができる限り、それは細胞増殖抑制性でもよく、および／または細胞毒性でもよい。がん療法の場合、インビボ効能は、例えば生存期間、無憎悪生存期間（ＰＦＳ）、応答率（ＲＲ）、応答期間および／または生活の質を評価することによって測定することができる。

用語「療法」、「療法的」「治療」および「治療すること」とは、以下を目的とする療法的方法またはプロセスを特徴づけるものとして、本明細書において、用いられる：
（１）かかる用語が適用される病態の症状もしくは状態の進行、憎悪もしくは悪化を遅延もしくは停止させること；
（２）かかる用語が適用される病態の症状もしくは状態を軽減もしくは寛解をもたらすこと、および／または
（３）かかる用語が適用される病態もしくは状態を好転させもしくは治癒すること。

用語「全生存期間（ＯＳ）」とは、治療中および治療後の患者が生存する期間を指す。当業者が理解するように、別の患者サブグループと比較して、統計的に有意に長い平均生存期間の患者サブグループに患者が属する場合、患者の全生存期間が改善され、または長期化される。

用語「無憎悪生存期間（ＰＦＳ）」とは、治療担当医師または研究者の評価によれば、患者の疾患が悪化しない、すなわち進行しない、治療中および治療後の期間を指す。当業者が理解するように、同様の状態にある対照患者群の代表的または平均的な無憎悪生存期間と比較して、疾患が進行しない期間の長い患者サブグループに患者が属する場合、患者の無憎悪生存期間が改善され、または長期化される。

「対象」または「患者」は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物、例えば、サル、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ウサギ、ウシ、ウマ、ヤギおよびヒツジであってもよい。

本明細書における用語「参照レベル」とは、予め定められた値を指す。当業者が理解するように、参照レベルは、例えば特異性および／または感度に関する要件を満たすように予め定められ、設定される。これらの要件は、例えば規制機関によって変化しうる。例えば、アッセイ感度または特異性はそれぞれ、特定の限度、例えば８０％、９０％または９５％に設定されなければならない場合がある。これらの要件は、正のまたは負の予測値に関して画成することもできる。それにもかかわらず、本発明の教示に基づけば、常にそれらの要件を満たす参照レベルに到着できる。一実施形態において、参照レベルは、健常な個人において、決定される。一実施形態において、参照値は、患者が属する疾病において、予め定められている。特定の実施形態において、参照レベルは、例えば検査される疾病における値の全体的分布の２５％〜７５％の間の任意のパーセンテージに設定できる。他の実施形態において、参照レベルは、例えば検査される疾病における値の全体的分布から決定される中央値、三分位値または四分位値に設定できる。一実施形態において、参照レベルは、検査される疾病における値の全体的分布から決定される中央値に設定される。

ＶＣＡＭ−１によって画成される感受性および非感受性集団のＰＦＳエンドポイントのカプランマイヤー曲線を表す図である。ＶＣＡＭ−１によって画成される感受性および非感受性集団のＯＳエンドポイントのカプランマイヤー曲線を表す図である。ＩＣＡＭ−１によって画成される感受性および非感受性集団のＰＦＳエンドポイントのカプランマイヤー曲線を表す図である。ＩＣＡＭ−１によって画成される感受性および非感受性集団のＯＳエンドポイントのカプランマイヤー曲線を表す図である。ＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１によって画成される感受性および非感受性集団のＰＦＳエンドポイントのカプランマイヤー曲線を表す図である。ＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１によって画成される感受性および非感受性集団のＯＳエンドポイントのカプランマイヤー曲線を表す図である。ＰｌＧＦによって画成される感受性および非感受性集団のＰＦＳエンドポイントのカプランマイヤー曲線を表す図である。

ＡＦＬＡＭＥ試験における、ＰＦＳに対するＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１および／またはＰｌＧＦの予測効果
試験ＥＦＣ１１３３８（ＡＦＬＡＭＥ）
オキサリプラチンベースのレジメンの失敗後の転移性結腸直腸がん（ＭＣＲＣ）を有する患者において、アフリベルセプト対プラセボと、イリノテカン／５−ＦＵとの組合せ（ＦＯＬＦＩＲＩ）の、多国籍、無作為二重盲検試験として、ＥＦＣ１１３３８をデザインした。

目的：
効能エンドポイント（無憎悪生存期間（ＰＦＳ）、全生存期間（ＯＳ）および全奏効率（ＯＲＲ））に関する治療への応答の潜在的予測バイオマーカーを特定すること、
効能エンドポイント（ＰＦＳ、ＯＳおよびＯＲＲ）に関する潜在的予後バイオマーカーを特定すること、
バイオマーカーと他のベースライン特徴との間の潜在的相関を特定すること、
長期的な血漿測定と臨床エンドポイントとの潜在的相関を特定すること、
非監視下において、分子プロファイルに基づく潜在的に均一な個人の群を特定し、臨床転帰（ＰＦＳ、ＯＳおよびＯＲＲ）との相関を推定すること、
予後／予測バイオマーカーにより特定された集団の安全性プロファイルを評価すること。

投与量および投与計画：
割り当てられたアームに応じて、アフリベルセプトまたはプラセボを患者に投与した。直後に、イリノテカン、５−ＦＵおよびロイコボリン（ＦＯＬＦＩＲＩレジメン）を患者に受けさせた。この治療を２週毎に反復した。
アフリベルセプト／プラセボ
アームＡ、アフリベルセプト：２週間毎に、１日目に４ｍｇ／ｋｇを１時間にわたりＩＶ投与した、または、
アームＢ、プラセボ：２週間毎に、１日目に４ｍｇ／ｋｇを１時間にわたりＩＶ投与した。

ＦＯＬＦＩＲＩレジメン
アフリベルセプト／プラセボ投与の直後に、全ての患者に、以下を受けさせた：
− ９０分間にわたる、５００ｍＬのＤ５Ｗ中のイリノテカン１８０ｍｇ／ｍ^２のＩＶ注入、および、２時間にわたる、ｄｌロイコボリン＊４００ｍｇ／ｍ^２のＩＶ注入、Ｙ字管を用い、バッグから同時注入、続いて、
− ２〜４分間にわたる、５−ＦＵ４００ｍｇ／ｍ^２のＩＶボーラス、続いて、
− ４６時間にわたる、５００ｍＬのＤ５Ｗ（推奨）中の５−ＦＵ２４００ｍｇ／ｍ^２の持続的ＩＶ注入。

治療期間：
疾患の進行、容認できない毒性または患者の拒絶がなされるまで、患者を治療した。

観察期間：
試験治療時およびフォローアップ期間中、死亡またはＯＳの試験カットオフ日のうち早い方の到来まで、患者の観察を行った。ＯＳのカットオフ日を、最後の患者の登録の１年後とした。

対象数：
治療意図（ＩＴＴ）集団：３３２名（プラセボ群１０９名＋アフリベルセプト群２２３名）
応答率の評価可能集団：２９５名（プラセボ群９６名＋アフリベルセプト群１９９名）
Ｌｕｍｉｎｅｘバイオマーカーの評価が可能−群１バイオマーカー：２９５名（プラセボ群９９名＋アフリベルセプト群１９６名）
Ｌｕｍｉｎｅｘバイオマーカーの評価が可能−群２バイオマーカー：１０８名（プラセボ群３７名＋アフリベルセプト群７１名）
ＥＬＩＳＡバイオマーカーの評価が可能：３２９名（プラセボ群１０７名＋アフリベルセプト群２２２名）
操作上のエラーのため、アフリベルセプトのアームに無作為化された一部の患者に、１つまたは複数の治療サイクルの間、プラセボを受けさせた；逆の場合も同じ。合計１９８名の患者に、少なくとも１つの割当てミスの治療キットを受けさせた。

評価基準：
バイオマーカー：
異なるタイプのバイオマーカーのデータを、ＡＦＬＡＭＥ試験における現在の探索的医療提案にて調査した：
・Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）技術により、治療中および治療後（サイクル１注入の終了時、サイクル２または３におけるアフリベルセプト／プラセボの投与後４８時間、最後のアフリベルセプト／プラセボ投与後３０日）における、ベースラインで測定された１０７の血漿の血管新生因子および炎症性サイトカイン
・ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）技術により、血漿サンプル中において、ベースラインで測定された遊離ＶＥＧＦ−ＡおよびＰｌＧＦ

サンプルの調製および分析
血漿バイオマーカーを、Ｌｕｍｉｎｅｘ（商標）技術（ビーズベースの多重アッセイ）またはＥＬＩＳＡのいずれかにより測定した。

Ｌｕｍｉｎｅｘ（商標）技術により測定された血漿バイオマーカー
血漿の血管新生因子および炎症性サイトカインを、ベースラインでサイクル１の前に測定した。

全てのサンプルで測定された３０のタンパク質を群１バイオマーカーとして画成し、一部のサンプルにおいてのみ測定された７７のタンパク質を群２バイオマーカーとして画成した。群１のバイオマーカーは血管新生／炎症性分子であり、アフリベルセプトの作用機構（３つの血管新生因子およびそれらの受容体を阻害）に基づき選択されており、主要候補バイオマーカーは独立したアフリベルセプト試験または文献／専門家により特定されている。

ＥＬＩＳＡにより測定された血漿バイオマーカー
Ｌｕｍｉｎｅｘ（商標）技術により測定された血漿バイオマーカーに加え、ベースライン血漿サンプル中の遊離ＶＥＧＦ−Ａおよび遊離ＰｌＧＦの濃度をＥＬＩＳＡ技術により測定した。

結果
一変数分析
ＰＦＳに対する予測および予後効果について、バイオマーカーを試験した。

補正Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ−Ｈｏｃｈｂｅｒｇ（ＢＨ）ｐ値≦２を有するＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１を、潜在的に予測可能であるものとして特定した（２９５名の対象）。

次に、感受性および非感受性集団を、ＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１（ＢＨのｐ値≦０．２）を用いて画成した。

ＥＬＩＳＡにより、ＰｌＧＦを、潜在的に予測可能であるものとして特定した（非調整ｐ値＝０．０７５）。

ＶＣＡＭ−１による感受性および非感受性集団の特定
５５３ｎｇ／ｍＬに対応する閾値６．３２を決定し、それぞれＶＣＡＭ−１の低い値およびＶＣＡＭ−１の高い値を有する個人に対応する、感受性（１９７名の個人）および非感受性集団（９８名の個人）を画成した。

図１および図２は、感受性および非感受性集団のＰＦＳおよびＯＳエンドポイントのカプランマイヤー曲線を表し、高ＶＣＡＭ−１群と比較して低ＶＣＡＭ−１群において、治療効果がより良好であることを示している。ＯＳについては、プラセボと比較して治療効果がより良好であることに加え、感受性集団は全体的により良好な予後を示した（プラセボおよびアフリベルセプトのアームにおいて、低ＶＣＡＭ−１群ではＯＳが増加した）。

表１は、感受性および非感受性集団の応答率を治療群で示す。感受性集団では、非感受性集団（１０％）と比較して、アフリベルセプト／ｆｏｌｆｉｒｉ治療による応答率上昇（２６％）があった。

ＩＣＡＭ−１による感受性および非感受性集団の特定
１４４ｎｇ／ｍＬに対応する閾値５．０４を決定し、それぞれＩＣＡＭ−１の低い値およびＩＣＡＭ−１の高い値を有する個人に対応する、感受性（２０５名の個人）および非感受性集団（９０名の個人）を画成した。

図３および図４は、感受性および非感受性集団のＰＦＳおよびＯＳエンドポイントのカプランマイヤー曲線を表し、高ＩＣＡＭ−１群と比較して低ＩＣＡＭ−１群において、治療効果がより良好であることを示している。ＯＳについては、プラセボと比較して治療効果がより良好であることに加え、感受性集団は全体的により良好な予後を示した（プラセボおよびアフリベルセプトのアームにおいて、低ＩＣＡＭ−１群ではＯＳが増加した）。

表２は、感受性および非感受性集団の応答率を治療群で示す。感受性集団では、非感受性集団（９％）と比較して、アフリベルセプト／ｆｏｌｆｉｒｉ治療による応答率上昇（２５％）があった。

多変数分析
多変数の予測スコア：０．０８９×ＩＣＡＭ−１＋０．１７×ＶＣＡＭ−１を、閾値として分位値１０％〜９０％を用いて二分した。

感受性集団は、ＰＦＳおよびＯＳにおいて、プラセボに対するアフリベルセプトの有意差を示し（ＰＦＳについてはＨＲ＝０．４７、およびＯＳについてはＨＲ＝０．６６）、これは非感受性集団と比較して増加していた（ＰＦＳについてはＨＲ＝０．９８、およびＯＳについてはＨＲ＝１．０４）。アフリベルセプトとプラセボとの中央値ＰＦＳの差異は、感受性集団では２．５９ヵ月であり、非感受性集団（０．５ヵ月）と比較して、より大きいが適度な差異を示していた。

アフリベルセプトとプラセボとの中央値ＯＳの差異は、感受性集団では３．７５ヵ月であり、非感受性集団（−０．３９ヵ月）と比較してより大きい差異を示していた。非感受性集団の場合、プラセボのアームおよび治療されたアームでは中央値ＯＳが他の集団と比較して減少しており（８．９０ヵ月および８．５１ヵ月）、多変数スコアが、予測効果に加え予後効果を有しうることを示していた。

結論として、感受性集団は、ＰＦＳおよびＯＳにおいて、非感受性集団と比較してＨＲが減少しつつ、中央値については適度な増加を示した。

図５および図６は、感受性および非感受性集団のＰＦＳおよびＯＳエンドポイントのカプランマイヤー曲線を表し、高スコア群と比較して低スコア群における治療効果がより良好であることを示している。ＯＳについては、プラセボと比較して治療効果がより良好であることに加え、感受性集団は全体的により良好な予後を示した（プラセボおよびアフリベルセプトのアームにおいて、低スコア群ではＯＳが増加した）。

ＰｌＧＦによる感受性および非感受性集団の特定
１７ｐｇ／ｍｌに対応する閾値２．８２を決定し、それぞれＰｌＧＦの低い値およびＰｌＧＦの高い値を有する個人に対応する、感受性（２３０名の個人）および非感受性集団（９９名の個人）を画成した。図７は、ＰｌＧＦにより画成される感受性および非感受性集団のＰＦＳエンドポイントのカプランマイヤー曲線を表し、感受性および非感受性集団のＰｌＧＦカットオフの決定を示す。

結論
・ＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１は、一変数フレームワークにおいて、ＰＦＳの潜在的に予測可能であるバイオマーカーとして特定された（ＶＣＡＭ−１では０．０００１７、およびＩＣＡＭ−１では０．００４３の非調整ｐ値）。
・潜在的に予測可能であることが示された第３のバイオマーカーはＥＬＩＳＡにより測定されたＰｌＧＦであった（非調整ｐ値＝０．０７５）。
・ＰＦＳに対して潜在的に予測可能であるものとして、ＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１の一次結合が特定された。

Claims

結腸がん、結腸直腸がんまたは直腸がんを有する患者が、アフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプト療法に対して感受性集団に属するかまたは非感受性集団に属するかを決定するためのデータを得る方法であって、血液、血清および血漿からなる群から選ばれた該患者の生体試料を少なくとも１つのアッセイに供して、治療を受けていない状態で、循環ＶＣＡＭ−１であるバイオマーカーのレベルを測定する工程を含み、ここで、該生体試料の該バイオマーカーレベルが、該バイオマーカーの参照発現レベルと比較して低いことは、該患者はアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトに対して感受性集団に属すると決定する際の肯定的なデータであり、ここで、循環ＶＣＡＭ−１の該参照発現レベルは４０６〜５７７ｎｇ／ｍＬの間である方法。
結腸がん、結腸直腸がんまたは直腸がんを有する患者が、アフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプト療法に対して感受性集団に属するかまたは非感受性集団に属するかを決定するためのデータを得る方法であって、血液、血清および血漿からなる群から選ばれた該患者の生体試料を少なくとも１つのアッセイに供して、治療を受けていない状態で、循環ＶＣＡＭ−１であるバイオマーカーのレベルを測定する工程を含み、ここで、該生体試料の該バイオマーカーレベルが、該バイオマーカーの参照発現レベルと比較して高いことは、該患者はアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトに対して非感受性集団に属すると決定する際の肯定的なデータであり、ここで、循環ＶＣＡＭ−１の該参照発現レベルは４０６〜５７７ｎｇ／ｍＬの間である方法。
結腸がん、結腸直腸がんまたは直腸がんを有する患者が、アフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプト療法に対して感受性集団に属するかまたは非感受性集団に属するかを決定するためのデータを得る方法であって、血液、血清および血漿からなる群から選ばれた該患者の生体試料を少なくとも１つのアッセイに供して、治療を受けていない状態で、循環ＶＣＡＭ−１および循環ＩＣＡＭ−１のそれぞれのレベルを測定する工程を含み、ここで、該生体試料の循環ＶＣＡＭ−１および循環ＩＣＡＭ−１のレベルが循環ＶＣＡＭ−１および循環ＩＣＡＭ−１のそれぞれの参照発現レベルと比較して低いことは、該患者はアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトに対して感受性集団に属すると決定
する際の肯定的なデータであり、ここで、循環ＶＣＡＭ−１および循環ＩＣＡＭ−１の該参照発現レベルは、それぞれ４０６〜５７７ｎｇ／ｍＬの間、および９２〜１４５ｎｇ／ｍＬの間である、方法。
循環ＶＣＡＭ−１の参照発現レベルが、５５３ｎｇ／ｍＬである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
感受性および非感受性の集団を画成する循環ＩＣＡＭ−１の参照発現レベルが、１４４ｎｇ／ｍＬである、請求項３または４に記載の方法。
がんが、転移性結腸直腸がんである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
結腸がん、結腸直腸がんまたは直腸がんを有する患者を治療するのに使用するためのアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトを含む医薬であって、ここで、該患者は、血液、血清および血漿からなる群から選ばれた生体試料における循環ＶＣＡＭ−１バイオマーカーの、該バイオマーカー循環ＶＣＡＭ−１の参照発現レベルと比較して低いレベルを有するものとして特定されており、ここで、循環ＶＣＡＭ−１の該参照発現レベルは４０６〜５７７ｎｇ／ｍＬの間である、医薬。
結腸がん、結腸直腸がんまたは直腸がんを有する患者を治療するのに使用するためのアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトを含む医薬であって、ここで、該患者は、血液、血清および血漿からなる群から選ばれた生体試料におけるバイオマーカー循環ＶＣＡＭ−１および循環ＩＣＡＭ−１の、該バイオマーカー循環ＶＣＡＭ−１および循環ＩＣＡＭ−１のそれぞれの参照発現レベルと比較して低いレベルを有するものとして特定されており、ここで、循環ＶＣＡＭ−１および循環ＩＣＡＭ−１の該参照発現レベルは、それぞれ４０６〜５７７ｎｇ／ｍＬの間、および９２〜１４５ｎｇ／ｍＬの間である、医薬。
治療上有効な量のフォリン酸、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、およびイリノテカンと組み合わせた、請求項７または８に記載の、結腸がん、結腸直腸がんまたは直腸がんを有する患者を治療するのに使用するためのアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトを含む医薬。
請求項７〜９のいずれか１項に記載の、結腸がん、結腸直腸がんまたは直腸がんを有する患者を治療するのに使用するためのアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトを含む医薬であって、ここで、循環ＶＣＡＭ−１の参照発現レベルが、５５３ｎｇ／ｍＬである、医薬。
請求項７〜１０のいずれか１項に記載の、結腸がん、結腸直腸がんまたは直腸がんを有する患者を治療するのに使用するためのアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトを含む医薬であって、ここで、感受性および非感受性の集団を画成する循環ＩＣＡＭ−１の参照発現レベルが、１４４ｎｇ／ｍＬである、医薬。
請求項７〜１１のいずれか１項に記載の、結腸がん、結腸直腸がんまたは直腸がんを有する患者を治療するのに使用するためのアフリベルセプトまたはｚｉｖ−アフリベルセプトを含む医薬であって、がんが、転移性結腸直腸がんである、医薬。