KR101436578B1 - 척추 측만증의 발병 위험성을 측정하는 방법, 척추 측만증에 걸린 대상자를 계층화하는 방법, 척추 측만증에 걸린 대상자에 있어서 고정기의 효능을 평가하는 방법, 및 이를 위한 키트 - Google Patents

척추 측만증의 발병 위험성을 측정하는 방법, 척추 측만증에 걸린 대상자를 계층화하는 방법, 척추 측만증에 걸린 대상자에 있어서 고정기의 효능을 평가하는 방법, 및 이를 위한 키트 Download PDF

Info

Publication number
KR101436578B1
KR101436578B1 KR1020097022732A KR20097022732A KR101436578B1 KR 101436578 B1 KR101436578 B1 KR 101436578B1 KR 1020097022732 A KR1020097022732 A KR 1020097022732A KR 20097022732 A KR20097022732 A KR 20097022732A KR 101436578 B1 KR101436578 B1 KR 101436578B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ser
thr
scoliosis
asp
opn
Prior art date
Application number
KR1020097022732A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20100016075A (ko
Inventor
알랭 모로
Original Assignee
슈 생-쥐스땡
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 슈 생-쥐스땡 filed Critical 슈 생-쥐스땡
Publication of KR20100016075A publication Critical patent/KR20100016075A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101436578B1 publication Critical patent/KR101436578B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/30—Dietetic or nutritional methods, e.g. for losing weight
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F5/00—Orthopaedic methods or devices for non-surgical treatment of bones or joints; Nursing devices; Anti-rape devices
    • A61F5/01—Orthopaedic devices, e.g. splints, casts or braces
    • A61F5/0102—Orthopaedic devices, e.g. splints, casts or braces specially adapted for correcting deformities of the limbs or for supporting them; Ortheses, e.g. with articulations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/04—Sulfur, selenium or tellurium; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/15—Medicinal preparations ; Physical properties thereof, e.g. dissolubility
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/10—Musculoskeletal or connective tissue disorders
    • G01N2800/108—Osteoporosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/50—Determining the risk of developing a disease

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Nursing (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)

Abstract

대상자로부터 얻은 시료 중에서 오스테오폰틴 (OPN)의 경시적인 발현을 모니터링하여, 대상자 시료에 있어서 경시적으로 OPN 발현이 증가하면 그 대상자는 척추 측만증 발병 위험이 있음을 나타내는 것으로 하는 척추 측만증의 발병 위험성을 측정하는 방법.
척추측만증, 오스테오폰틴, CD44 억제제, sCD44 촉진제

Description

척추 측만증의 발병 위험성을 측정하는 방법, 척추 측만증에 걸린 대상자를 계층화하는 방법, 척추 측만증에 걸린 대상자에 있어서 고정기의 효능을 평가하는 방법, 및 이를 위한 키트{METHODS OF DETERMINNG THE RISK OF DEVELOPING SCOLIOSIS, METHODS OF STRATIFYING A SUBJECT HAVING A SCOLIOSIS, METHODS FOR ASSESSING THE EFFICACY OF A BRACE ON A SUBJECT HAVING A SCOLIOSIS, AND KITS THEREFOR}
관련 출원의 상호 참조
[0001] 이 출원은 2007년 3월 30일 출원된 미국 가특허출원 제 60/909,408gh 및 2008년 2월 1일 출원된 미국 가특허출원 제61/025,571호의 35 U.S.C.§119(e)조 규정에 따른 우선권 주장 출원이다. 본 명세서에 언급된 모든 문헌은 그 내용 전체가 본문에 참조로 통합되어 있다.
연구 또는 개발에 대한 연방정부 지원 여부에 관한 진술
[0002] N/A
발명의 분야
[0003] 본 발명은 척추측만증의 발병 위험성을 측정하는 방법, 척추측만증에 걸린 대상자를 계층화하는 방법, 척추측만증에 걸린 대상자에 있어서 고정기의 효능을 평가하는 방법 및 이를 위한 키트에 관한 것이다.
[0004] 척추 기형 및 특히 척추측만증은 아동과 청소년에서 발생하는 가장 흔한 유형의 정형외과적 기형데, 청소년기 특발성 척추측만증(AIS: adolescent idiopathic scoliosis)은 척추측만증의 가장 흔한 형태이다.
[0005] 청소년기 특발성 척추측만증 (AIS)의 병인에 대하여는 거의 알려지지 않은 상태임으로 해서 AIS는 유전적 소인과 함께 다원적 질병이라는 전통적인 패러다임이 형성되었다.(1-7) AIS에 걸린 환자의 수술 중에 얻은 생검물로부터 유도된 세포에 있어서 멜라토닌 시그널링 장애가 일어난다는 것이 보고된 바 있다.8
[0006] 불행하게도, 아동이나 청소년의 AIS 발병 위험성을 확인할 수 있는 입증된 방법이나 테스트 또는, 이 질환에 걸린 개체 중 누가 이 질환의 진행 위험성으로 인하여 치료를 요하는지를 확인할 수 있는 입증된 방법은 없다. 그 결과, 고정기 또는 외과적 교정과 같이 현재 행하여지고 있는 치료법은 척추 기형이 심해질 때까지 또는 이 질환이 상당히 진행되었다는 것이 명백히 입증될 때까지 지연됨으로 해서, 최적의 치료를 지연시키거나 감소시키고 있다.29
[0007] 본 발명은 몇몇 문헌을 인용하고 있으며, 이들 문헌은 그 내용 전체가 본문에 참조로 통합된다.
발명의 개요
[0008] 더욱 구체적으로, 본 발명에 따라 대상자로부터 얻은 시료 중에서 오스테오폰틴(OPN: osteopontin)의 경시적인 발현을 모니터링하여, 대상자의 시료 중 에서 OPN 발현이 경시적으로 증가할 경우 그 대상자는 척추측만증의 발병 위험성이 있다고 판단하는 것을 포함하여 이루어지는 척추측만증의 발병 위험성을 측정하는 방법이 제공된다.
[0009] 특수한 실시 상태에 있어서, 모니터링은 대상자가 약 3세가 되었을 무렵부터 개시한다. 또 다른 특수한 실시 상태에 있어서, 모니터링은 적어도 1개월에 약 1회의 측정 빈도로 OPN 발현을 측정함으로써 수행한다. 또 다른 특수한 실시 상태에 있어서, 모니터링은 적어도 6개월에 약 1회의 빈도로 OPN 발현을 측정함으로써 수행한다. 또 다른 실시 상태에 있어서, 이 방법은 대상자로부터의 시료 중에서 sCD44 발현을 측정하는 것을 추가로 포함한다. 또 다른 특수한 실시 상태에 있어서, OPN 발현의 모니터링은 효소 결합 면역흡수분석법 (ELISA) 또는 방사능면역분석법 (RIA)을 이용하여 수행한다.
[0010] 본 발명에 따라, 대상자로부터의 시료에 있어서 오스테오폰틴 (OPN) 발현을 측정하고; 대조군 시료에서보다 대상자 시료에서 OPN 발현이 더 높을 경우 그 대상자가 척추측만증의 발병 위험성이 있는 것으로 판단하는 것을 포함하여 이루어지는 척추측만증의 발병 위험성을 측정하는 방법이 제공된다.
[001] 또 다른 특정 실시 상태에 이어서, 대상자는 척추측만증에 걸릴 것 같은 후보자이다. 또 다른 특정 실시 상태에 있어서, 대상자는 청소년기 특발성 척추측만증에 걸릴 것 같은 후보자이다. 또 다른 특정 실시 상태에 있어서, 대상자는 척추측만증에 걸린 것으로 예진된 경우이다.
[0012] 또 다른 특정 실시 상태에 있어서, 대상자는 청소년기 특발성 척추측 만증에 걸린 것으로 예진된 경우이다.
[0013] 본 발명의 또 다른 태양에 따라, 대상자로부터 얻은 시료 중에서 오스테오폰틴 (OPN) 발현을 측정함으로써, 이러한 측정 단계에 의하여 대상자를 척추측만증 서브그룹으로 계층화시키는 것을 포함하여 이루어지는, 척추측만증에 걸린 대상자를 계층화시키는 방법이 제공된다.
[0014] 본 발명의 또 다른 태양에 따라, 대상자에게 고정기를 설치하기 전 및 고정기 설치 후 적어도 한번 대상자의 시료 중에서 오스테오폰틴 (OPN) 발현을 측정하고, 고정기 설치 전보다 고정기 설치 후의 OPN 발현이 증가한 경우 고정기가 효과가 없는 것으로 판단하는 것을 포함하여 이루어지는, 대상자에 있어서 고정기의 효능을 평가하는 방법이 제공된다.
[0015] 특정한 실시 상태에 있어서, 고정기 설치 후 OPN 발현을 측정하는 것은 고정기를 설치한지 적어도 1개월 후에 행한다. 또 다른 특수한 실시 상태에 있어서, 대상자에 고정기를 설치한 후 OPN 발현을 측정하는것은 고정기 설치 후 적어도 2개월 경과 후에 수행한다. 또 다른 특수한 실시 상태에 있어서, 대상자에게 고정기 설치 후 OPN 발현을 측정하는 것은 고정기 설치 후 적어도 3개월 경과 후 수행한다. 또 다른 특수한 실시 상태에 있어서, 대상자에 있어서 고정기 설치 후 OPN 발현을 측정하는 것은 고정기 설치 후 적어도 6개월 경과 후에 수행한다.
[0016] 또 다른 특정 실시 상태에 있어서, 이 방법은 대상자로부터의 시료 중에 있어서 가용성 CD44 수용체 (sCD44) 발현을 측정하는 것을 추가로 포함하여 이루어진다.
[0017] 또 다른 특정 실시 상태에 있어서, 대상자로부터 얻은 시료는 대상자로부터 얻은 생물학적 체액이다. 또 다른 특정 실시 상태에 있어서, 생물학적 체액은 혈액, 뇨, 눈물 및 타액으로 구성된 군으로부터 선택된다. 또 다른 특정 실시 상태에 있어서, 생물학적 체액은 혈장이다.
[0018] 또 다른 특정 실시 상태에 있어서, OPN 발현물은 OPN 단백질이다. 또 다른 특정 실시 상태에 있어서, OPN 발현의 측정은 OPN에 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 수행한다. 또 다른 특정 실시 상태에 있어서, OPN 발현의 측정은 효소 결합 면역흡수분석법 (ELISA)을 이용하여 수행한다. 또 다른 특정 실시 상태에 있어서, 시료는 혈장 시료이고 혈장 1 밀리리터 당 700 나노그램을 초과하여 OPN이 발현될 경우 그 대상자는 척추측만증의 발병 위험성이 있는 것으로 진단한다. 또 다른 특정 실시 상태에 있어서, 시료는 혈장 시료이고 혈장 1 밀리리터 당 800 나노그램을 초과하여 OPN이 발현될 경우 그 대상자는 척추측만증의 발병 위험성이 있는 것으로 진단한다.
[0019] 또 다른 특정 실시 상태에 있어서, OPN 발현물은 OPN RNA이다. 또 다른 특정 실시 상태에 있어서, 대상자로부터의 시료는 척추주위(paraspinal) 근육의 생검시 얻은 시료이며 OPN 발현물은 OPN RNA이다.
[0020] 본 발명의 또 다른 실시 상태에 따라, 후보 물질을 오스테오폰틴(OPN)을 발현하는 세포와 접촉시키고, OPN의 발현을 측정한 다음, OPN 발현이 그 후보 물질의 부재시에 비하여 후보 물질 존재 시에 더 낮을 경우, 그 후보 물질을 선택하는 것을 포함하여 이루어지는, 척추측만증을 경감 또는 예방할 수 있는 잠재 적인 후보 물질의 선택 방법이 제공된다.
[0021] 본 발명의 또 다른 태양에 따라, 후보 물질을 sCD44를 발현하는 세포와 접촉시키고, sCD44의 발현을 측정한 다음, OPN 발현이 그 후보 물질의 부재시에 비하여 후보 물질 존재 시에 더 높을 경우, 그 후보 물질을 선택하는 것을 포함하여 이루어지는, 척추측만증을 경감 또는 예방할 수 있는 잠재적인 후보 물질의 선택 방법이 제공된다.
[0022] 또 다른 특정 실시 상태에 있어서, 세포는 척추측만증 환자로부터 유래된 세포이다.
[0023] 본 발명의 또 다른 태양에 따라, 척추측만증이 척추측만증 모델 동물에서 발병되기 전에 후보 물질을 그 동물에 투여하고, 후보 물질이 투여되지 않은 대조군 동물에 비하여 그 모델 동물에서 척추측만증이 예방 또는 경감된 경우 그 후보 물질을 선택하는 것을 포함하여 이루어지는, 척추측만증을 경감 또는 예방할 수 있는 잠재적인 후보 물질의 선택 방법이 제공된다.
[0024] 본 발명의 또 다른 태양에 따라, 척추측만증에 걸린 대상자에게 유효 치료량의 오스테오폰틴 (OPN) 억제제 또는 셀레늄이 풍부한 식단을 투여함으로써 척추측만증을 예방 또는 치료하는 것을 포함하여 이루어지는, 척추측만증을 예방 또는 경감시키는 방법이 제공된다.
[0025] 본 발명의 또 다른 태양에 따라, 척추측만증에 걸린 대상자에게 유효 치료량의 CD 억제제를 투여함으로써, 척추측만증을 예방 또는 치료하는 것을 포함하여 이루어지는, 척추측만증을 예방 또는 경감시키는 방법이 제공된다.
[0026] 본 발명의 또 다른 태양에 따라, 척추측만증에 걸린 대상자에게 유효 치료량의 sCD44 촉진제를 투여함으로써, 척추측만증을 예방 또는 치료하는 것을 포함하여 이루어지는, 척추측만증을 예방 또는 경감시키는 방법이 제공된다.
[0027] 본 발명의 방법의 특정 실시 상태에 있어서, 대상자는 인간이다. 본 발명의 방법의 또 다른 특정 실시 상태에 있어서, 대상자는 인간 여성이다. 본 발명의 방법의 또 다른 특정 실시 상태에 있어서, 대상자는 인간 남성이다.
[0028] 본 발명의 또 다른 태양에 따라, 척추측만증을 치료 또는 예방하는데 이용되는 오스테오폰틴 억제제가 제공된다.
[0029] 본 발명의 또 다른 태양에 따라, 척추측만증을 치료 또는 예방하는데 이용되는 CD44 억제제가 제공된다.
[0030] 본 발명의 또 다른 태양에 따라, 척추측만증을 치료 또는 예방하는데 이용되는 sCD44 촉진제가 제공된다.
[0031] 본 발명의 또 다른 태양에 따라, 척추측만증을 예방 또는 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 오스테오폰틴 억제제의 용도가 제공된다.
[0032] 본 발명의 또 다른 태양에 따라, 척추측만증을 예방 또는 치료하기 위한 오스테오폰틴 억제제의 용도가 제공된다.
[0033] 본 발명의 또 다른 태양에 따라, 척추측만증을 예방 또는 치료하기위한 약제의 제조를 위한 CD44 억제제의 용도가 제공된다.
[0034] 본 발명의 또 다른 태양에 따라, 척추측만증의 예방 또는 치료를 위한 CD44 억제제의 용도가 제공된다.
[0035] 본 발명의 또 다른 태양에 따라, 척추측만증의 예방 또는 치료를 위한 의약의 제조를 위한 sCD44 촉진제의 용도가 제공된다.
[0036] 본 발명의 또 다른 태양에 따라, 척추측만증의 예방 또는 치료를 위한 sCD44 촉진제의 용도가 제공된다.
[0037] 본 발명의 또 다른 태양에 따라, 척추측만증은 청소년기 특발성 척추측만증이다.
[0038] 본 발명의 또 다른 태양에 따라, 오스테오폰틴 (OPN)에 특이적인 리간드 및 척추측만증 발병 위험을 예측하기 위한 키트에 사용될 지침서를 포함하여 이루어지는, 척추측만증의 발병 위험성을 예측하기 위한 키트가 제공된다. 특정 실시 상태에 있어서, 이 키트는 가용성 CD44 (sCD44)에 특이적인 리간드를 추가로 포함한다.
[0039] 본 발명의 다른 목적, 장점 및 특성은 첨부된 도면을 참조로 오직 예시 목적을 위해 제공된 특정 실시 상태에 대한 이하의 비제한적인 설명을 읽으면 더욱 명확히 이해될 것이다.
[0063] 청소년기 특발성 척추측만증(AIS)에 있어서 오스테오폰틴 (OPN) (분비된 인단백질 1, 골 시알로단백질 1, 조기 T-임파구 활성화 1이라고도 칭해짐), 다기능성 시토카인의 연관성을 조사하고, 혈장 OPN 농도를 세가지 집단, 즉; AIS에 걸린 환자, 가족 중 척추측만증에 걸린 조상이 없는 건강한 대조군 대상자, 및 부모 중 적어도 한명이 척추측만증 환자이며, 발병 위험이 있다고 여겨지는 무증상 후손 대상자 ("발병 위험이 있는 아동")에 대하여 측정하였다.
[0064] AIS에 걸린 252명의 연속 환자군을 척추측만증 가족력이 없는 건강한 35명의 대조군 대상자 및 70명의 발병 위험이 있는 무증상 대상자와 비교하였다. 모든 대상자들은 백인이었고 이들의 피부묘기(dermographic) 특성을 아래의 표 2에 나타내었다. 효소 결합 면역흡수 분석법에 의하여 혈장 OPN, 가용성 CD44 수용체 (sCD44) 및 히알루로난 (HA) 수준을 측정하였다. 송과체가 절단된 병아리 및 OPN 또는 공지의 OPN 수용체인 CD44 중 어느 하나가 없는, 유전적으로 변형된 양족 C57Bl/6j 마우스 역시도 연구 대상으로 하였다.
[0065] AIS에 걸린 환자에 있어서의 평균 혈장 OPN 농도는 Cobb 각도가 >45o (1 밀리리터 당 965±414 나노그램)인 AIS 환자에 경우가, 건강한 대조군 (1 밀리리터 당 570±156 나노그램) 보다 훨씬 더 높았고, Cobb 각도가 <45o (1 밀리리터 당 799±284 나노그램)인 AIS 환자의 경우보다 훨씬 더 높았다. AIS에 대한 OPN의 진단 감수성 및 특이성은 각각 84.4% 및 90.6%였다 (컷오프 값 ≥ 1 밀리리터 당 800 나노그램). 서브그룹에 대한 분석 결과 발병 위험이 있는 아동의 47.9 퍼센트는 OPN 값이 1 밀리리터 당 800 나노그램을 상회하였는데, 이는 대조군의 경우 단지 8.6 퍼센트에 불과하였다는 것과 대비되는 것으로, 상승된 혈장 OPN 농도가 척추측만증 형성에 선행함을 가리키는 것이다. 모든 그룹에 있어서, 평균 혈장 sCD44 수준과 HA 수준에는 유의적인 차이가 없었다. 척추측만증의 병태생리학과 관련, 양족 C57Bl/6j 마우스 모델은 척추측만증의 발병이 CD44 수용체와 OPN과의 상호작용을 필요로 한다는 것을 입증하였는데, 이는 유전적으로 변형된 양족 마우스 중 어느 것도 척추측만증을 발병하지 않았기 대문이다. 본 발명에 개시된 OPN에 대한 컷오프 값은 IBL로부터의 인간 OPN에 특이적인 시판 Elisa 키트를 이용하여 산출된 것이다. 이 값들은 OPN 발현물 (mRNA 또는 단백질)이 달리 측정될 경우에는 달라질 수 있다 (예컨대, 상이한 생물학적 시료에서 OPN RNA 또는 OPN 단백질을 통하여 그러나 상이한 항체를 이용하여 OPN 발현 측정).
[0066] OPN (분비된 인단백질-1, 미노폰틴 또는 Eta-1로도 칭해짐)은 세포외 매트릭스와 같은 미네랄화 조직에 존재하는 아르기닌-글리신-아스파테이트 (RGD) 서열을 함유하는 포스포릴화 당단백질이다. 이 다기능 시토카인은 많은 병리적 조건과 연관이 있다.9,10 소뇌, 골격근 고유수용성 감각 기관 및 평형을 조절하는 내이 구조(11)와 같은 자세성 조절 중심 (postural contral centers)에 OPN 전사체와 단백질이 존재한다는 것은 흥미로운데, 이는 AIS 환자들 역시도 자세성 조절, 고유수용성 및 평형능 결여를 나타내기 때문이다.(12;13) 여러가지 성인 암과 염증성 질환에서 OPN 혈장 농도가 높은 것으로 관찰되었다.30-33
[0067] OPN 시그널링 작용: OPN 시그널링 경로는, 비록 인테그린과 상호작용하는 것 이외에, OPN이 세포 표면에서 CD44 수용체와 상호작용할 수 있다는 것이 알려지기는 했지만, 여전히 잘 이해되지 않고 있다.14,15 CD44가 히알루로난(HA)의 주요 수용체이기는 하나, 이것은 OPN에 대한 수용체 역할도 하고 다중 RGD 결합 부위를 갖는다. 부착 분자의 CD44 패밀리의 모든 인간 이소형이 단일 유전자에 의하여 코딩된다. 인간 CD44 유전자 중 19개 엑손 중 12개를 교대로 스플라이싱하면 복수개의 변이체 이소형이 생산되고16,17 이러한 구조적 이종성은 피브로넥틴18, 콘드로이틴 황산염19, 오스테오폰틴20, 적어도 2개의 헤파린 결합 성장 호르몬 및 히알루로난21,22를 포함하는 CD44의 리간드 레퍼토리에 책임이 있다. sCD44의 가용성 변이체 이소형 (sCD44var)은 몇몇 병리학적 증상과 연관이 있다.16,18,23,24 sCD44 이소형은 세포 표면 CD44의 단백질분해 절단을 통해서 또는 교번 스플라이싱에 의한 드 노보 합성을 통해 생성되는 것으로 제안되었다. CD44 분자들 중 변이체 엑손 용도와 관련이 없는 기능적 다양성은 CD44H 또는 여타의 특정한 스플라이스-변이체가 어떤 세포 종류에서 발현될 때는 히알루로난(HA) 결합에 활성적인 반면 다른 세포에서 발현될 경우에는 불활성적이라는 관찰에 의해 입증된다. 많은 CD44 이소형태가 조직 특이적이지만, sCD44의 가용성 변이체 이소형(들)의 전 범위는 몇몇 병리학적 증상과 연관되어 있다. 실제로, 전체 sCD44 및 특이적인 가용성 CD44 이소형의 순환 농도는 비호지킨씨 임파종 및 유방암, 위암 및 대장암종을 비롯한 몇몇 악성 종양의 종양 전이와 연관이 있는 것으로 나타났다. 가용성 CD44의 수준 역시 류마티스 관절염, 내장 점막 염증(pouchitis) 및 대장염, 및 기관지염과 같은 특정한 염증성 증상을 앓는 대상자의 체액에서 더 높은 것으로 알려져 있다. 히알루론산염 또는 히알루론산으로도 칭해지는 히알루로난(HA)은 신체에 널리 분포하는 뮤코다당류로서 섬유아세포 및 기타 특화된 연결 조직 세포를 비롯한 다양한 세포에 의해 생산된다.
]0068] 본 발명에서 "대상자"라는 용어는 인간, 마우스, 래트, 개, 고양이, 돼지, 원숭이, 말 등을 비롯한 여하한 포유동물을 가리키는 것이다. 특정 실시 상태에서 이 용어는 인간을 가리킨다.
[0069] 본 발명에서 "고정기(brace)"라는 용어는 치과적 및 정형외과적 교정기를 모두 포함하며 따라서 "고정기를 설치하다"라는 의미는 대상자에게 고정기를 설치하는 작용을 가리킨다. 특정한 실시 상태에 있어서, 이 용어는 척추측만증 대상자의 고정기를 가리키는 것으로 의도된다.
[0070] 본 발명에서 "척추 칠환 및 척추측만증을 유발하는 질환"이라는 용어는 척추측만증의 발병과 연관이 있을 수 있는 질환을 가리키는 것이다. 여기에는 AIS, 선천성 척추측만증, 선천성 사이포즈(cyphose) 척추측만증, 신경계 척추측만증, 형성이상성 척추측만증, 신경섬유종증, 뇌성마비, 근육퇴행위축증, 신경근육 척추측만증, 척추전방전위증 및 누난(Noonan) 증후군이 포함되나 이에 한정되지 않는다. 사고에 의한 것 또는 특정한 선천성 기형에 의해 야기되는 것은 계층화 또는 예측될 수 있는 척추측만증으로부터 배제된다.
[0071] 본 발명에서 "청소년기 특발성 척추측만증에 걸릴 가능성이 높은 후보"라는 용어에는 부모 중 적어도 한 사람이 청소년기 특발성 척추측만증에 걸린 아동이 포함된다. 여러 인자들 중에서도, 연령(청소년기), 성별 및 유전성 (즉, 척추측만증에 걸린 모친이나 부친을 두었다는 것)은 척추측만증의 발병 위험에 기여하는 것으로 알려져 있으며 어느 정도는 척추측만증의 발병 위험성을 평가하는데 이용된다. 특정 대상자에 있어서, 척추측만증은 급속히 진전되어, 단기간에 교정 수술을 필요로 하는 시점에 이르게 된다. AIS가 진단된 시점 (척추측만증이 명백한 때)에서 할 수 있는 현재의 처치로는 관찰 (Cobb 각도가 약 10-25o인 경우), 정형외과적 기구의 사용 (Cobb 각도가 약 25-30o인 경우), 및 외과적 수술 (Cobb 각도가 45o를 초과하는 경우)이 있다. 이 질환의 진행 위험성을 측정하고 치료 효능을 모니터링하는 본 발명에 따른 보다 신뢰성 높은 방법은 1) 척추측만증을 심화시키는 것으로 알려진 특정 식품을 배제한 적절한 식단을 선택하고; 2) 최적의 치료제를 선택하며; 3) 가장 덜 침습적인 예방 작용 및/또는 자세적 운동, 정형외과적 기구, 및/또는 덜 침습적인 외과수술 또는 융합없는 외과수술 (척추골을 융합하지 않고 척주 운동성을 보존하는 외과수술)을 선택하는데 도움이 될 수 있다.
[0072] 본 발명에서, "위중한 AIS"라는 용어는 Cobb 각도가 45o 이상인 척추측만증을 칭한다.
[0073] 본 발명에서, "척추측만증 발병 위험성"이라는 용어는 척추측만증 (즉, 척추 기형) 및/또는 미래에 보다 심각한 척추측만증을 일으킬 유전적 또는 대사적 소인을 가리킨다. 예를 들어, 대상자의 Cobb 각도가 증가 (예컨대 40o에서 50o를로, 또는 18o에서 25o로 증가)하는 경우 척추측만증이 "발병"한다고 한다.
[0074] 본 발명에서 "생물학적 시료"라는 용어는 생명체로부터 분리된 여하한 고체 또는 액체 시료를 가리킨다. 특정 실시 상태에 있어서, 이 용어는 인간으로부터 분리된 여하한 고체 또는 액체 시료를 칭한다. 여기에는 생검물, 혈액, 눈물 (48), 타액, 모유, 윤활액, 뇨, 귀지액(ear fluid), 양수 및 뇌척수액을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 특정 실시 상태에서 이 용어는 혈액 시료를 가리킨다.
[0075] 본 발명에서 "혈액 시료"라는 용어는 혈액, 혈장 또는 혈청을 가리킨다. 바람직한 실시 상태에 있어서는 혈장이 사용된다. 보다 특정한 실시 상태에 있어서 이 용어는 혈장 시료를 가리킨다.
[0076] 본 발명에서 "대조군 시료"라는 용어는 척추측만증에 걸린 것으로 알려진 대상자 또는 척추측만증의 발병 위험이 있는 후보로 알려진 대상자로부터 유래한 것이 아닌 시료를 의미한다. 척추측만증에 걸린 것으로 예진된 대상자에 있어서 척추측만증의 발병 위험을 측정하는 방법에 있어서는, 그러나 시료가 이 질환 또는 질병의 초기 상태에서 엄밀한 검사를 거친 대상자로부터 유래된 것일 수 있다.
[0077] 본 발명에서 척추측만증와 관련하여 "치료" 또는 "치료하다"라는 용어는 이미 존재하는 척추 기형에 있어서의 Cobb 각도 감소, 척추 운동성의 증진, 척추 운동성의 보존/유지, 특정 플랜의 평형 및 밸런스의 증진; 특정 플랜에 있어서 기능성 향상, 특정 플랜에 있어서 기능성의 유지/보유, 미용상의 개선, 및 이들의 조합 중 적어도 한가지를 의미하는 것이다.
[0078] 본 발명에서 척추측만증와 관련하여 "예방하다" 또는 "예방"이라는 용어는 척추측만증에 걸린 환자 또는 무증상 환자에 있어서, Cobb 각도 진행 감소, 흉곽 및 골반에 3차원적 영향을 미치는 변화를 비롯한 척추 기형 환영의 완전한 예방, 및 이들의 조합 중 적어도 한가지를 의미하는 것이다.
[0079] 본 발명에서 "오스테오폰틴 억제제"라는 용어는 OPN (sspi1이라 칭해지는 유전자)의 발현 (전사 또는 번역)을 감소 또는 차단할 수 있는 물질, OPN 분비를 감소 또는 차단할 수 있는 물질 또는 OPN이 그의 수용체인 CD44에 결합하는 것을 감소 또는 차단할 수 있는 물질을 가리킨다. 이러한 물질은 천연 또는 합성된 것일 수 있고 OPN에 특이적으로 결합하는 항체와 같은 단백질, 펩타이드, 소분자, OPN에 특이적인 siRNA 또는 안티센스와 같은 비제한적인 뉴클레오타이드일 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
[0080] 본 발명에서 "CD44 억제제"라는 용어는 CD44의 발현 (전사 또는 번역)을 감소시킬 수 있는 물질, 또는 세포막에서 CD44 국소화를 감소시킬 수 있는 물질을 가리킨다. 이 물질은 천연 또는 합성된 것일 수 있고 CD44에 특이적으로 결합하는 항체와 같은 단백질 (이에 한정되지 않는다), 펩타이드, 소분자, CD44에 특이적인 siRNA 또는 안티센스와 같은 비제한적인 뉴클레오타이드일 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
[0081] 본 발명에서 "sCD44 촉진제"라 함은 sCD44의 발현 (전사 또는 번역)을 증가시킬 수 있는 물질, sCD44 분비를 증가시킬 수 있는 물질 또는 OPN에 대한 sCD44 친화성을 증가시킬 수 있는 물질을 의미한다. 이 물질은 단백질, 펩타이드, 소분자 또는 뉴클레오타이드일 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
[0082] 본 발명에서 관사 "a", "an", 및 "the"는 그 관사의 문법적 목적어를 하나 이상 (즉, 적어도 하나) 칭하는 것으로 의도된다.
[0083] "포함하다" 및 "함유하다"라는 표현은 본 발명에서 "포함하나 그에 한정되지 않는", 및 "함유하나 이에 한정되지 않는"이라는 의미와 호환적으로 사용된다.
[0084] "와 같은"이라는 용어는 "와 같은 그러나 이에 한정되지 않는"이라는 표현을 의미하며 이것과 호환적으로 사용된다.
[0085] 본 발명은 또한 OPN, HA 또는 sCD44의 발현물 (즉 전사 또는 번역 산물)의 수준을 측정하기 위한 방법에 관한 것이기도 하다. 본 발명은 따라서 Elisa (효소 결합 면역흡수측정법), RIA (방사능면역측정법), 실시간 PCR 및 경쟁적 PCR, 노던 블랏, 뉴클리아제 보호, 플라크 하이브리다이제이션 및 슬롯 블랏과 같이, 이러한 측정에 사용되는 여하한 공지 방법을 모두 포괄한다.
[0086] 본 발명은 또한 OPN, sCD44 또는 CD44를 검출하기 위한 프로브 및 프라이머를 포함하는 분리된 핵산 분자에 관한 것이기도 하다. 특정 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 뉴클레오타이드를 300개 이하, 또는 200개 이하, 또는 100개 이하, 또는 90개 이하, 또는 80개 이하, 또는 70개 이하, 또는 60개 이하, 또는 50개 이하, 또는 40개 이하, 또는 30개 이하 갖는다. 특정 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 뉴클레오타이드를 17개 이상, 또는 18개 이상, 또는 19개 이상, 또는 20개 이상, 또는 30개 이상, 또는 40개 이상 갖는다. 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 20개 이상 300개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 20개 이상 200개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 20개 이상 100개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 20개 이상 90개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 20개 이상 80개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 20개 이상 70개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 20개 이상 60개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 20개 이상 50개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 20개 이상 40개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 17개 이상 40개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 20개 이상 30개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 17개 이상 30개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 30개 이상 300개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 30개 이상 200개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 30개 이상 100개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 30개 이상 90개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 30개 이상 80개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 30개 이상 70개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 30개 이상 60개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 30개 이상 50개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 또 다른 특수한 실시 상태에서, 분리된 핵산 분자는 30개 이상 40개 이하의 뉴클레오타이드를 갖는다. 실시간 PCR에서, 프라이머들은 이 용어의 전통적인 의미로가 아닌 의미로 프로브를 구성한다. 본 발명의 방법에서 OPN sCD44 및 CD44를 검출하는데 적절한 프라이머 또는 프로브는 이들 각각의 뉴클레오타이드 서열에 산재한 서열을 이용하여 공지 방법에 따라 디자인할 수 있다 (49).
[0087] 본 발명의 프로브는 천연의 당-인산염 백본 뿐만 아니라 포스포로티오에이트, 디티오네이트, 알킬 포스포네이트 및 α-뉴클레오타이드 등을 비롯한 변형 백본을 이용할 수 있다. 변형된 당-인산염 백본은 일반적으로 널리 알려져 있다. 본 발명의 프로브는 리보핵산 (RNA) 또는 데옥시리보핵산 (DNA)로 구성될 수 있으며 DNA로 만들어지는 것이 좋다.
[0088] 프로브를 사용하는 검출 방법의 종류로는 서던 블랏 (DNA 검출), 도트 또는 슬롯 블랏 (DNA, RNA) 및 노던 블랏 (RNA 검출)을 들 수 있다. 덜 바람직하긴 하지만, 표지된 단백질에 결합하는 특정 핵산 서열을 검출하기 위하여 표지된 단백질을 사용할 수도 있다. 기타의 측정법으로는 딥스틱 셋업 상에 프로브를 함유하는 키트 등을 들 수 있다.
[0089] 본 발명에서 "검출가능하게 표지된"이라는 용어는 본 발명에 따라, OPN, HA 및/또는 sCD44를 검출할 수 있도록 본 발명에 따른 프로브 또는 항체를 마킹하는 것을 가리킨다. 비록 본 발명이 특정 핵산 서열을 검출하기 위한 표지를 사용하는데 전적으로 의존하는 것은 아니지만, 이러한 표지를 사용하는 것이 검출법의 감도를 증가시키기 때문에 유리할 수 있다. 또한, 자동화도 가능해진다. 프로브는 공지의 수많은 방법에 따라 표지시킬 수 있다. 표지의 비제한적인 예로는 3H, 14C, 32P 및 35S를 들 수 있다. 검출가능한 마커의 비제한적인 예로는 리간드, 플루오로포어, 화학발광제, 효소 및 항체를 들 수 있다. 본 발명의 방법의 감도를 증가시킬 수 있으면서 프로브와 함께 사용되기 위한 기타의 검출가능한 마커로는 바이오틴과 라디오뉴클레오타이드를 들 수 있다. 당업자라면 표지가 결합되는 프로브나 항체의 방식에 따라 어떠한 표지를 선택해야 하는지 쉽게 이해할 수 있을 것이다.
[0090] 익히 알려진 바와 같이, 여러가지 방법에 의해 본 발명의 프로브 내로 방사능 뉴클레오타이드를 혼입시킬 수 있다. 이의 비제한적인 예로는 감마 32P ATP 및 폴리뉴클레오타이드 키나아제를 이용하여 프로브의 5' 말단을 키나아제화하거나, 방사능 dNTP의 존재 하에 대장균의 Pol I의 클레노우 단편을 이용하거나 (예컨대, 저융점 겔 중에서 랜덤 올리고뉴클레오타이드 프라이머를 이용하는 균질하게 표지된 DNA 프로브) 또는 1종 이상의 방사능 dNTP의 존재 하에 DNA 세그먼트를 전사하기 위해 SP6/T17 시스템을 이용하는 방법 등을 들 수 있다.
[0091] 본 발명은 또한 화합물의 선택 방법에 관한 것이다.본 발명에서 "화합물"이라는 용어는 천연, 합성 또는 반합성 화합물을 포괄하며, 화학물질, 마크로분자, 세포 또는 조직 추출물 (식물 또는 동물로부터의), 핵산 분자, 펩타이드, 항체 및 단백질을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
[0092] 본 발명은 또한 어레이에 관한 것이기도 하다. 본 발명에서 "어레이"라는 용어는 합성적으로 또는 생합성적으로 제조할 수 있는 분자들의 의도적으로 창안된 컬렉션을 의미한다. 어레이 중의 분자들은 서로 같거나 다를 수 있다. 어레이는 예컨대, 가용성 분자들의 라이브러리; 비드, 실리카 칩, 또는 기타 고상 지지체에 결합되는 화합물들의 라이브러리와 같이 다양한 포맷을 취할 수 있다.
[0093] 본 발명에서 "핵산 분자의 어레이"라는 용어는 여러가지 상이한 포맷으로 합성적 또는 반합성적으로 제조될 수 있는 핵산들의 의도적으로 창안된 컬렉션을 가리킨다 (예컨대 가용성 분자들의 라이브러리; 및 비드, 실리카 칩, 또는 기타 고상 지지체에 결합되는 올리고뉴클레오타이드의 라이브러리). 이에 더하여, "어레이"라는 용어는 기본적으로 여하한 길이 (예컨대 길이가 뉴클레오타이드 모노머 약 1 내지 1000개인)의 핵산을 기질 상에 스폿팅함으로써 제조할 수 있는 핵산의 라이브러리를 포함한다. 본 발명에서 "핵산"이라는 용어는 퓨린 염기와 피리미딘 염기, 또는 기타 천연, 화학적 또는 생화학적으로 변형되거나, 비천연 또는 유도된 뉴클레오타이드 염기를 포함하는 여하한 길이의 뉴클레오타이드의 폴리머 형태를 가리키며, 리보뉴클레오타이드건, 데옥시리보뉴클레오타이드건 또는 펩타이드 핵산 (PNAs)일 수 있다. 폴리뉴클레오타이드의 백본은 당과 인산기를 포함할 수 있으며, RNA 또는 DNA에서 또는 변형 또는 치환된 당 또는 포스페이트기에서 일반적으로 발견될 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 메틸화 뉴클레오타이드 및 뉴클레오타이드 유사체와 같은 변형된 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 뉴클레오타이드의 서열은 비뉴클레오타이드 성분에 의해 간섭될 수 있다. 따라서 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드, 데옥시뉴클레오사이드 및 데옥시뉴클레오타이드라는 용어는 일반적으로 본 발명에 설명된 것과 같은 유사체를 일반적으로 포괄한다. 이러한 유사체들은 핵산 또는 올리고뉴클레오타이드 서열 내로 혼입시 용액 중에서 자연 발생적인 핵산 서열과 하이브리다이제이션할 수 있는, 자연 발생적인 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오타이드에 공통적인 몇몇 특성들을 갖는 것들이다. 일반적으로, 이 유사체들은 염기, 리보오스 또는 포스포디에스테르 부분을 치환 및/또는 변형시킴으로써 자연 발생적인 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드로부터 유도될 수 있다. 하이브리드 형태를 안정화 또는 불안정화시키거나 또는 상보적인 핵산 서열을 이용하여 원하는 대로 하이브리다이제이션의 특이성을 증진시키기 위하여 알맞게 변형시키는 것이 가능하다.
[0094] 본 발명에서 "고상 지지체", "지지체"라는 용어는 호환적으로 사용되며 경성 또는 반경성 표면 또는 표면들을 갖는 재료 또는 일군의 재료를 칭한다. 많은 실시 상태에 있어서, 몇몇 실시 상태에서는 예컨대 웰, 융기된 구역, 핀, 엣칭된 함몰부 등을 이용하여, 상이한 화합물들에 있어서 합성 대역들을 물리적으로 분리시키는 것이 요망될 수 있으나, 고상 지지체의 표면 중 적어도 하나는 실질적으로 평평할 것이다. 다른 실시 상태에 있어서, 고상 지지체(들)은 비드, 수지, 겔, 마이크로스피어, 또는 기타의 기하학적 형상을 취할 수 있다.
[0095] 본 발명에 따라 여하한 공지의 핵산 어레이를 이용할 수 있다. 예를 들어, 이러한 어레이에는 cDNA 또는 폴리머라제 연쇄반응 (PCR) 산물 뿐만 아니라 이보다 짧거나 더 긴 올리고뉴클레오타이드 프로브 또는 프라이머에 기초한 것들이 포함된다. 기타 방법으로 유전자 발현의 계열 분석 (SAGE: serial analysis of gene expression), 분화 디스플레이 및 소거식 (subtractive) 하이브리다이제이션법 , 분화 스크리닝 (DS), RNA 임의 프라이머 (RAP)-PCR, 분화적으로 발현된 서열의 제한효소 엔도뉴클레오라이틱 분석 (READS:restriction endonucleolytic analysis of differentially expressed sequences), 증폭된 제한효소 단편-길이 다형성 (AFLP:amplified restriction fragment-length polymorphisms)을 들 수 있다.
항체
[0096] 본 발명은 예를 들어 대상자의 시료 중에서 OPN, sCD44 또는 CD44 수준을 측정 또는 검출하고 본 발명의 키트에 포함시키기 위하여 항체를 이용하는 것을 포괄한다. 이들 생물학적 마커에 특이적으로 결합하는 항체들은 후술하는 방법에 의해 일상적으로 제조할 수 있다. 본 발명은 또한 시판되는 항체를 이용하는 것 역시도 포괄한다. OPN에 특이적으로 결합하는 항체들로는 다음 표 1에 수록된 것을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
[0097]

표 1: 시판되는 인간 OPN Elisa 키트
회사 키트 명칭 카탈로그 번호 감수성
IBL Hambourg Human Osteopontin ELISA JP 171 58 3.33 ng/ml
IBL America Human Osteopontin N-Half Assay Kit-IBL 27258 3.90 pmol/L
IBL America Human Osteopontin Assay Kit-IBL 27158 3.33 ng/ml
Assay designs Osteopontin (human) EIA Kit 900-142 0.11 ng/ml
American Research Products, Inc. Osteopontin, human kit 17158 ?
R&D Systems Human Osteopontin (OPN) ELISA Kit DOST00 0.024 ng/mL
Promokine Human Osteopontin ELISA PK-El-KA4231 3.6 ng/ml
Uscnlife Human Osteopontin, OPN ELISA Kit E0899h ?
[0098] OPN에 대한 모노클로날 항체와 폴리클로날 항체는 당업자에게 잘 알려진 확립된 공정에 의하여 생산될 수 있기 때문에 두가지 모두 본 발명의 범위에 속한다. 또한, 제1 항체에 대한 모든 제2 항체는 모노클로날이건 폴리클로날이건 본 발명의 범위에 포괄된다.
[0099] 본 발명에서, "항-OPN 항체" 또는 "면역학적으로 특이적인 항 OPN 항체"라는 용어는 OPN 단백질에 특이적으로 결합하고 (상호반응하고), OPN 단백질과 동일한 항원 결정인자를 공유하는 것이 아닌 다른 천연 단백질에는 실질적으로 결합하지 않는 항체를 가리킨다. 항체 또는 면역글로불린이라는 용어는 최광의의 의미로 사용되며, 이 용어는 모노클로날 항체 (전장 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 다중특이적 항체 및 소망되는 생물학적 활성을 나타내는 것을 전제로 항체 단편을 모두 포괄한다. 항체 단편은 전장 항체의 일부, 일반적으로는 그의 항원 결합부 또는 가변부를 포함한다. 항체 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편, 항체 단편으로부터 형성된 다이아바디, 선형 항체, 단일쇄 항체 분자, 단일 도메인 항체 (예컨대 카멜리드로부터), 상어의 NAR 단일 도메인 항체 및 다중 특이적 항체를 들 수 있다. 항체 단편은 또한 CDR을 포함하는 결합 부분이나 또는 비제한적인 예로 VH 대역 (VH, VH-VH), 안티칼린, PepBodiesTM, 항체-T-세포 에피토프 융합물 (Troybodies) 또는 펩티바디를 비롯한 항원 결합 도메인을 지칭할 수 있다. 또한, 제1 항체에 대한 모노클로날 또는 폴리클로날의 여하한 제2 항체 역시도 본 발명의 범위에 포함된다.
[00100] 일반적으로, 항체(모노클로날 항체 및 하이브리도마를 포함)의 제조 및 항체를 이용하여 항원을 검색하는 기술은 기술 분야에 잘 알려져 있다 (Campbell, 1984, In "Monoclonal Antibody Technology: Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology" Elsevier Science Publisher, Amsterdam, The Netherlands) 및 Harlow 외, 1988 (Antibody A Laboratory Manual, CSH Laboratories). 항체라는 용어는 본 발명에서 폴리클로날, 모노클로날 항체 및 항체 변형체, 예컨대 단쇄 항체, 인간화 항체, 키메라 항체를 포괄하며 하이픈 중에서 이들의 상호작용 도메인을 억제 또는 무력화시키는 면역학적으로 활성적인 항체 단편 (예컨대, Fab 및 Fab' 단편)을 포괄한다.
[00101] 폴리클로날 항체는 어쥬번트 존재 또는 부재 하에, 좋기로는 대응하는 항원을 복수회 피하(sc), 정맥 (iv) 또는 복강 (ip) 주사함으로써 동물 체내에서 발생된다. 이중기능성 또는 유도화 제제, 예컨대 말레이미도벤조일 술포숙신이미드 에스테르 (시스테인 잔기를 통한 컨쥬게이션), N0히드록시숙신이미드 (라이신 잔기를 통함), 글루타르알데히드, 무수 숙신산, SOCl2, 또는 R1N=C=NR (여기서 R 및 R1은 서로 다른 알킬기이다)를 이용하여, 대응하는 항원을 면역화시키고자 하는 종에 있어서 면역원성인 단백질, 예컨대, 키홀 림펫 헤모시아닌, 혈청 알부민, 소의 타이로글로불린, 또는 대두 트립신 저해제와 함께 컨쥬게이션시키는 것이 유용할 수 있다.
[00102] 동물을 항원, 면역원성 컨쥬게이트, 또는 유도체에 대하여, 항원이나 컨쥬게이트 (예컨대 토끼의 경우 100 ㎍, 또는 마우스의 경우 5㎍)를 3배 용량의 프로인드 완전 어쥬번트와 결합시켜 신체 여러 부위에서 이 용액을 주사함으로써 면역화시킬 수 있다. 1개월 후 신체 여러 부위에 프로인드 완전 어쥬번트 중 항원 또는 컨쥬게이트 (예컨대 면역화에 사용된 본래 사용량의 1/5 내지 1/10의 양)를 피하 주사함으로써 동물을 부스트시킨다. 7일 내지 14일 후 동물로부터 채혈하고 혈청을 항체 역가에 대해 분석한다. 역가가 평형에 달할 때까지 동물을 부스트시킨다. 좋기로는, 컨쥬게이트 면역화에 있어서, 동물을 동일한 항원의, 그러나 상이한 단백질에 컨쥬게이트된 컨쥬게이트로 부스트시키거나 및/또는 상이한 가교제를 통해 부스트시킨다. 컨쥬게이트는 또한 단백질 융합물과 같이 재조합 세포 배양물 중에서 만들어질 수 있다. 또한, 면역 반응을 증진시키기 위해 명반과 같은 응집제를 적절히 사용할 수 있다.
[00103] 모노클로날 항체는 Kohler 외, Nature, 256: 495 (1975)에 의하여 최초로 설명된 하이브리도마법을 이용하여 제조할 수 있으며 또는, 재조합 DNA 법( 예컨대, 미국 특허 No. 6,204,023)에 의하여 제조할 수 있다. 모노클로날 항체는 또한 미국 특허 Nos. 6,025,155 및 6,077,677, 그리고 미국 특허출원공개 Nos. 2002/0160970 및 2003/0083293에 설명된 기술을 이용하여 제조될 수도 있다 (또한, 예컨대, Lindenbaum 외, 2004 참조).
[00104] 하이브리도마법에 있어서는, 마우스나 기타 적절한 숙주 동물, 예컨대 래트, 햄스터 또는 원숭이를 면역화시켜 (예컨대 전술한 바와 같이) 면역화에 사용된 항원과 특이적으로 결합하게 될 항체를 샌산하거나 생산할 수 있는 임파구를 유발시킨다. 또는 임파구를 시험관 내에서 면역화시킬 수 있다. 이어서 예컨대 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적절한 융합제를 이용하여 임파구를 골수종 세포와 융합시킴으로써 하이브리도마 세포를 만든다.
[00105] 이렇게 제작된 하이브리도마 세포를 좋기로는 비융합, 모 골수종 세포의 성장 또는 생존을 억제하는 1종 이상의 기질을 함유하는 적절한 배양 배지 중에 접종하여 생장시킨다. 예컨대, 모 골수종 세포가 하이포잔틴 구아닌 포스포리보실 트랜스페라제 (HGPRT 또는 HPRT) 효소를 결여하는 경우, 하이브리도마용 세포 배지는 일반적으로 HGPRT-결핍 세포의 생육을 방지하는 물질인 하이포잔틴, 아미노프테린 및 티미딘 (HAT 배지)을 포함할 것이다.
[00106] 본 발명에서 "정제된 항체"와 같은 표현에서 "정제된"이라는 용어는 그 자신의 항원에 대해 동물이 자연적으로 생산해낼 수 있는 항체로부터 인공적인 항체를 구별하기 위한 의미로 사용된다. 따라서, 항-OPN 항체를 함유하는 가공되지 않은 혈청 및 하이브리도마 배양 배지는 본 발명의 의미 상 "정제된 항체"이다.
[00107] 본 발명은 또한 OPN, HA 또는 sCD44의 번역 산물을 검출 및/또는 정량화하기 위한 어레이 역시도 포괄한다. 이러한 어레이에는 단백질 마이크로- 또는 마크로어레이, 고해상도 2D-겔 방법학을 비롯한 겔 테크놀로지가 포함되며, 형광 표지 시스템과 연계된 현미경과 같이 세포 수준에서 질량 분광광도계 조영 시스템과 커플링될 수도 있다.
[00108] 본 발명은 또한 전사, 번역, 후번역적 변형 또는 OPN 활성에 직접 또는 간접적으로 영향을 미치는 특이적인 돌연변이(들)을 동정하는 방법도 포괄한다. 관심의 대상이 되는 돌연변이에는 CD44의 가용성 또는 비가용성 이소형과 OPN 사이의 상호작용에 영향을 미치는 돌연변이 또는 CD44의 가용성 또는 비가용성 이소형에 대한 HA의 결합에 영향을 미치는 돌연변이가 모두 포함되나 이에 한정되지 않는다.
[00109] 본 발명은 또한 물리적 요법 (에컨대, 자세 교정 체조, 물리치료, 예컨대 진동판과 같은 특정 장치를 이용하거나 조작에 의한 생물기계적 자극)과 같은, 척추측만증 및 커브 진행을 예방하기 위한 여러가지 접근법의 효능을 평가하기 위하여 본 발명에 개시된 마이오마커를 모니터링하는 것; 고정기 효능 또는 신규한 고정기 개발의 모니터링; 척추골을 융합시키거나 융합시키지 않는 새로운 외과 장치의 모니터링, 및 특정 식이요법, 영양약리적(neutraceutical) 및/또는 약학적 처치의 효능을 모니터링하는 방법등을 모두 포괄한다. 예컨대 고정기가 잘 적응되는지 그리고 환자가 치료에 잘 순응하는지를 검사하기 위해 고정기가 설치된 후 1개월 후에 최초의 측정을 행할 수 있으나 반드시 이러한 것은 아니다. 이후에는, 모니터링은 높은 OPN 수준이 측정되는지 또는 아닌지에 따라 3 내지 6개월 마다 수행할 수 있다. 본 발명의 이 방법은 x선 촬영에 대한 의존도를 크게 낮출 수 있다. x선은 예컨대 OPN 수준이 너무 높게 검출되는 경우 방문시에만 수행할 수 있다.
[00110] 본 발명은 또한 발병 위험이 있는 환자의 조기 고정기 착용을 위한 본 발명에 개시된 바이오마커의 모니터링, 신규한 무융합 장치를 이용한 덜 침습적인 외과수술법, 약학적 치료법 및 AIS에 걸린 환자의 치료에 대한 반응을 모니터링하는 것도 포괄한다. 이 중에서도, 무융합 장치가 특히 여전히 성장 잠재력이 있는 환자에 있어서 유용한데, 대상자에 있어서 가능한 한 조기에 척추측만증의 발병 위험을 동정하는 것이 유용하기 때문이다. 특정한 실시 상태에 있어서, 모니터링은 대상자가 척추측만증 가족력을 갖는 경우 대상자가 약 5세 이하일 때 개시한다. 검사 빈도는 매 6개월마다 하는 것이 일반적이다. OPN 값이 컷오프 값보다 높으면 (즉, OPN IBL ELISA 키트 코드 No. 27158이 사용될 경우 > 800 ng/ml), 이 빈도를 유의적으로 증가시키는 것이 유리하다 (예컨대 매달, 2개월마다, 3개월마다...).
[00111] 본 발명은 또한 총 세포 분석을 이용한 잠재적으로 유용한 치료제를 스크리닝/선별하기 위한 방법도 포괄하는데, 여기서 상기 치료제는 OPN (ssp1 유전자에 의해 코딩됨)의 전사 및/또는 합성을 억제할 수 있고, 및/또는 순환 중의 OPN을 격리시킬 수 있는 sCD44의 생산을 증가시킬 수 있고, 및/또는 OPN과 CD44 수용체와의 연계를 간섭할 수 있고, 및/또는 CD44 수용체를 차단할 수 있는 화합물을 가리킨다. 이러한 방법에 사용될 수 있는 세포에는 여하한 소스 (자가 제조 또는 시판되는 세포주를 포함) 및 유형 (여하한 조직)의 세포가 모두 포함된다. 자가 제조시 세포주는 예컨대 AIS 대상자로부터의 세포를 불멸화시킴으로써 제조될 수 있다. 특정 실시 상태에 있어서, 본 발명의 스크리닝법은 OPN 발현 (전사 및/또는 번역)을 억제하는 물질 및 sCD44 발현 (전사 및/또는 번역)을 증가시키는 물질을 찾아내는 것이다. 이러한 구체예에 유용한 세포주에는 OPN을 고수준으로 및/또는 저sCD44를 저수준으로 생산하는 세포들이 포함된다. 이러한 유용한 세포주는 참고문헌 43-56에 설명되어 있다.
[00112] 특정 실시 상태에서는, 척추측만증 환자로부터 유래된 세포 종류가 포함된다 (총 세포 분석). 특정 실시 상태에서, 여기에는 조골세포, 연골세포, 골격 근육모세포 또는 임파구를 비롯한 혈액 세포가 포함된다. 본 발명에서 "척추측만증 환자로부터 유래된 세포"라는 용어는 척추측만증 환자로부터 직접 분리된 세포, 또는 척추측만증 환자로부터 직접 분리된 세포에 기원을 둔 불멸화 세포주를 가리킨다. 특정 실시 상태에 있어서, 세포를 척추주변 근육 세포이다. 이러한 세포는 예컨대 바늘 생검을 통하여 대상자로부터 분리해 낼 수 있다.
[00113] 약학적 조성물은 경비, 정맥내, 근육내, 피하, 설하, 경막내, 피내와 같은 경로에 의해 투여될 수 있다. 투여 경로는 환경 및 치료 목적과 같은 다양한 인자에 따라 달라질 수 있다.
투여량
[00114] 어떠한 양으로든 약학적 조성물 및/또는 영양약리적 조성물 및/또는 식이보조 조성물을 대상자에게 투여할 수 있다. 투여량은 투여 방식을 비롯한 많은 인자에 의해 좌우된다. 일반적으로, 1회 투여분 중에 함유된 항척추측만증 조성물 (예컨대, 오스테오폰틴 억제제 또는 셀레늄 화합물)의 양은 심한 독성을 유발함이 없이 척추측만증을 효과적으로 예방, 지연 또는 경감시키는 "치료적 유효량"이 될 것이다.
[00115] 몇몇 실시 상태에 있어서, 영양약리적 항척추측만증 조성물 (예컨대, 셀레늄 보조제)의 치료적 유효량은 변동될 수 있다. 유용한 유효량 농도는 중량 기준으로 총 다이어트의 약 0.01% 내지 약 10%, 중량 기준으로 약 1% 내지 약 6^, 또는 중량 기준으로 약 0.2% 내지 약 6% 범위이다.
[00116] 오스테오폰틴 억제제 또는 셀레늄 화합물의 유효량 역시 직접 측정가능하다. 이 유효량은 매일 또는 주단위로 투여될 수도 있고 그의 일부가 투여될 수도 있다. 일반적으로, 본 발명의 약학적 조성물 및/또는 영양약리적 조성물 및/또는 식이 보조제 조성물은 1일 체중 1 kg 당 약 0.001 mg 내지 약 500 mg 이하 (예컨대, 10 mg, 50 mg, 100 mg, 또는 250 mg)의 양으로 투여될 수 있다. 투여량은 일회 또는 복수회 투여 처방으로 제공될 수 있다. 예를 들어, 몇몇 실시 상태에 있어서, 유효량은 1일 항척추측만증 제제 약 1 mg 내지 약 25 그램, 1일 항척추측만증 제제 약 50 mg 내지 약 10 그램, 1일 항척추측만증 제제 약 100 mg 내지 약 5 그램, 1일 항척추측만증 제제 약 1 그램, 1주일에 항척추측만증 제제 약 1 mg 내지 약 25 그램, 1주일에 항척추측만증 제제 약 50 mg 내지 약 10 그램, 1주일에 항척추측만증 제제 약 100 mg 내지 약 5 그램, 및 1주일에 항척추측만증 제제 약 1 그램이다.
[00117] 예를 들어, 본 발명의 약학적 조성물 (예컨대 오스테오폰틴 억제제를 함유)및/또는 영양약리적 조성물 (예컨대 셀레늄을 함유) 및/또는 식이 보조제 조성물 (예컨대 셀레늄을 함유)은 액제, 용액제, 현탁제, 알약, 캡슐제, 정제, 겔캅, 분말제, 겔제, 연고제, 크림제, 분무제(nebulae), 미스트제, 분무증기제(atomized vapor), 에어로졸제, 또는 피토좀제의 형태일 수 있다. 경구 투여용의 경우, 정제 또는 캡슐제는 결합제, 충전제, 윤활제, 붕해제 또는 습윤제와 같은 1종 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제와 함께 상법에 다라 제조될 수 있다. 경구 투여용의 액상 제제는 예컨대, 용액제, 시럽제, 또는 현탁제의 형태일 수 있거나, 또는 사용 전에 염수 또는 기타 적절한 액상 비히클과 함께 조성되도록 건조 제품으로서 제공될 수 있다. 본 발명의 식이 보조제는 또한 현탁제, 유화제, 비수성 담체, 방부제, 완충염류, 향료, 착색제 및 감미료와 같은 약학적으로 허용되는 첨가제를 적절히 함유할 수 있다. 경구용 제제는 또한 활성 성분을 조절적으로 방출하도록 적절히 조제될 수 있다.
[00118] 이에 더하여, 본 발명의 약학적 조성물 (예컨대 오스테오폰틴 억제제를 함유)및/또는 영양약리적 조성물 (예컨대 셀레늄을 함유) 및/또는 식이 보조제 조성물 (예컨대 셀레늄을 함유)은 비제한적인 예로서 멸균 수성 또는 비수성 용액, 현탁액 및 에멀젼을 비롯하여 포유동물에게 투여하기 위한 약학적으로 허용가능한 담체를 함유할 수 있다. 비수성 용매의 예로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일 및 주사가능한 유기 에스테르를 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 수성 담체의 예로는 물, 알코올, 염수 및 완충 용액을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 약학적으로 허용가능한 담체에는 또한 생리적으로 허용가능한 수성 비히클 (예컨대 생리 식염수) 또는 특정 투여 경로에 적합한 기타 공지의 담체가 포함된다.
[00119] 오스테오폰틴 억제제 또는 셀레늄은 예컨대 탈크, 아라비아검, 락토오스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 코코아 버터, 수성 또는 비수성 용매, 오일, 파라핀 유도체 또는 글리콜과 같이 약학적 제제에서 흔히 사용되는 여하한 비시클과 함께 투여 제형 내로 혼입될 수 있다. 식물성 오일 (예컨대 대두유 또는 홍화씨유), 유화제 (예컨대 난황 인지질) 및 물이 글리세롤과 함께 결합되어 있는 미국 특허 제 5,434,183호에 설명된 것들과 같은 에멀젼 역시 사용될 수 있다. 적절한 포뮬레이션의 제조 방법은 기술 분야에 잘 알려져 있다 (예컨대, Remington's Pharmaceutical Sciences, 16판, 1980, A. Oslo Ed., Easton, Pa 참조).
[00120] 투여 경로로서 비경구 투여가 선택된 경우, 오스테오폰틴 억제제 또는 셀레늄을 함유하는 제제를, 약학적으로 허용되는 멸균 수성 또는 비수성 용매, 현탁액 또는 에멀젼과 조합하여 환자에게 제공할 수 있다. 비수성 용매의 예로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일, 어유 및 주사가능한 유기 에스테르를 들 수 있다. 수성 담체에는 물, 물-알코올 용액, 에멀젼 또는 현탁액이 포함되며, 염화나트륨 용액을 비롯한 염수 및 완충된 의약용 비경구 담체, 링거 덱스트로스 용액, 덱스트로스 플러스 염화나트륨 용액, 락토스를 함유하는 링거 용액 또는 고정된 오일이 여기에 속한다. 정맥용 비히클에는 플루이드 및 영양 강화제, 예컨대 링거 덱스트로스를 기제로 한 전해질 강화제 등이 포함된다.
[00121] 실제 투여량은 신중히 선택되어 각각의 환자마다 특징적인 임상적 인자에 기초하여 임상의가 또는 또는 영양사에 의해 조정되어야 하므로 전술한 내용은 개략적인 지침에 불과하다. 최적의 일이 투여량은 기술 분야에 알려진 방법에 의해 결정되며 환자의 연령 및 기타 임상적으로 타당한 인자와 같은 여러 인자에 의해 영향을 받을 수 있다. 또한, 환자들은 다른 질환이나 증상으로 인하여 약제를 복용하는 경우도 있다. 이러한 다른 약제의 복용은 환자에게 오스테오폰틴 억제제 또는 셀레늄 화합물이 주어지는 동안 지속될 수 있으나, 이러한 경우, 부작용이 일어날지를 검사하기 위해 소량으로 복용하기 시작하는 것이 특히 권장된다.
[00122] 본 발명은 또한 키트에 관한 것이기도 하다. 본 발명은 척추측만증 대상자의 계층화 및/또는 대상자가 척추측만증을 발병할 위험이 있는지를 예측하기 위한 키트에 관한 것으로 이 키트는 본 발명에 따른 전술한 분리된 핵산, 단백질 또는 항체와 같은 리간드를 포함한다. 예를 들어, 본 발명에 따라 구획화된 키트는 시약들이 별개의 용기에 담겨있는 여하한 키트를 모두 포괄한다. 이러한 용기로는 소형 유리 용기, 플라스틱 용기 또는 플라스틱 또는 종이로 된 스트립을 들 수 있다. 이러한 용기는 시료와 시약이 상호 오염되지 않도록, 그리고 각각의 용기 중의 시약이나 용액이 구획 별로 정량적인 방식으로 첨가될 수 있도록, 시약을 이 구획에서 저 구획으로 효과적으로 전달시킬 수 있도록 해주는 것이다. 이러한 용기에는 대상자의 시료 (DNA 게놈 핵산, 세포 시료 또는 혈액 시료)를 수납할 용기, 본 발명의 몇몇 키트에 있어서, 본 발명의 방법에서 사용되는 프로브를 함유하는 용기, 효소를 함유하는 용기, 세제를 함유하는 용기, 확장 산물을 검출하는데 사용되는 시약을 함유하는 용기가 포함된다. 본 발명의 키트는 또한 척추측만증 대상자를 계층화하거나 또는 대상자가 척추측만증에 걸릴 위험이 있는지를 예측하는데 있어서 이들 프로브 및/또는 항체를 사용하기 위한 지침서 역시도 포함할 수 있다.
[00123] 본 발명을 이하의 비제한적인 실시예를 들어 더욱 상세히 설명한다.
[0040] 첨부된 도면에서:
[0041] 도 1은 송과체가 절제된 병아리에 있어서의 OPN 검출 및 대응하는 척추측만증을 도시한다. 상부 패널과 하부 패널은 각각 mRNA 및 단백질 수준에서, 송과체가 절제된 척추측만증이 발병된 병아리 (S) 대 발병되지 않은 병아리 (NS)의 척추부위 근육에서 검출된 OPN 발현의 상향 조절을 도시한다;
[0042] 도 2의 왼쪽 패널은 외과 수술 후 척추측만증에 걸린 양족(bipedal) C57Bl/6j 마우스에 있어서의 순환 OPN 수준의 역동적 변동을 도시하며, 오른쪽 패널은 양족 C57Bl/6j 마우스에서 관찰된 척추측만증 기형의 전형적인 x선 사진을 도시한 것으로, 수컷(907)에 비해 암컷(708)의 증상이 더 심한 것으로 나타났다.
[0043] 도 3은 상이한 여러가지 마우스 스트레인에 있어서 멜라토닌의 혈장 농도의 변동을 나타낸 것이다. S=척추측만증에 걸린 것이고; NS=척추측만증에 걸리지 않은 것이다.
[0044] 도 4는 척추측만증에 걸린 송과체 절제된 병아리에 미치는 OPN 전사의 약리학적 억제 효과를 도시한 도면이다.
[0045] 도 5는 건강한 대조군 대상자, AIS 환자 및 발병 위험이 있는 무증상 대상자에 있어서 혈장 오스테오폰틴의 감수성과 특이성을 그래프로 도시한 도면이다. 패널 A에 있어서, 33명의 건강한 대조군 대상자와 Cobb 각도 (≥45o)인 32명의 AIS 환자를 포함한 분석 결과 곡선하 면적 (AUC: area under the curve)는 0.94였고 표준 오차는 0.03 (95 퍼센트 신뢰 구간 [CI], 0.88 내지 1.000)이었다. 패널 B에서, 오스테오폰틴 1 ml 당 700 나노그램의 컷오프 값은 AIS의 조기 진단 및 척추측만증 진행 위험성을 측정하는데 있어서 높은 감수성 (90.6%) 및 매우 우수한 특이성 (81.8%)을 보여주었다. 패널 C에서, 800 나노그램/오스테오폰틴 1 ml의 컷오프 값을 사용하는 경우에도 척추측만증 진전 위험성의 측정 및 AIS의 조기 검진에 있어서 높은 감수성 (84.9%)과 보다 높은 특이성 (90.9%)을 나타내었다. 패널 D에 있어서, 오스테오폰틴 혈장 농도와 Cobb 각도 사이의 명확한 상관 관계가 모든 AIS 환자를 이용하여 입증되었으며, p 값은 <0.001이고 r2=0.26이었다;
[0046] 도 6은 남녀 혼합군 (대조군, 발병 위험군, AIS <45 및 AIS =45) (패널 A), 및 여성군 (패널 B)과 남성군 (패널 C)의 연령 분포를 나타낸 그래프이다;
[0047] 도 7은 기초 방문 (baseline visit)시 12세 (적색), 14세 (녹색 및 청색), 그리고 17세 (황색)의 4명의 선택된 AIS 여성 환자 (고정기 치료를 받고 있지 않음)에 있어서 OPN 수준, sCD44 수준 및 Cobb 각도의 후속적인 변화 프로파일 을 도시한 도면이다;
[0048] 도 8은 기형성이 악화된 커브를 갖는 AIS 환자 (Cobb 각도의 총 증가가 3o를 초과함; n=14) 및 커브가 크게 달라지지 않은 환자 (Cobb 각도에 아무런 변화가 없고 3o 미만으로 감소 또는 증가된 경우; n=36)에 있어서 후속 시간 동안 OPN (좌측 패널) 및 sCD44 (우측 패널) 수준의 총 변화량 분포를 도시한 도면이다;
[0049] 도 9는 AIS 환자에 있어서 Cobb 각도 진전과 상관 관계가 있는 OPN 진전을 도시한 그래프이다;
[0050] 도 10은 AIS 환자에 있어서 Cobb 각도의 퇴행 및 안정화와 상관 관계가 있는 OPN 퇴행 및 안정화를 도시한 그래프이다;
[0051] 도 11은 척추측만증에 걸리지 않은 선택된 위험한 대상자에 있어서 후속 시간에 있어서 OPN 및 sCD44 수준의 변화 프로파일을 도시한 도면이다 ; 기초 방문 (baseline visit)시 13세 남아 (녹색) 1명, 및 5세 여아 (황금색), 11세 여아 (청색) 및 9세 여아 (적색)의 3명.
[0052] 도 12는 비AIS 척추측만증 환자 (NAIS) (OPN (n=28), sCD44 (n=18), HA (n=24)), 건강한 대조군 (n=35) 및 AIS 환자 (n=252)에 있어서 OPN, sCD44 및 HA 수준을 비교한 도면이다;
[0053] 도 13은 수술전 AIS 환자 (n=79) 대 수술후 AIS 환자 (n=28)에 있어서 척추 바이오메카닉스의 기능에 있어서 OPN 변화의 순환 수준을 비교한 히스토그램을 나타낸 것이다;
[0054] 도 14는 수술전 AIS 여성 (OPN (n=10); sCD44 (n=15)) 대 수술후 AIS 여성(OPN (n=10); sCD44 (n=12))의 OPN 및 sCD44의 순환 수준을 비교 도시한 히스토그램이다;
[0055] 도 15는 수술전 (패널 A) 및 수술후 (패널 B)에 있어서 소정의 컷오프 존에 있어서 AIS 환자의 분포를 도시한 차트이다.
[0056] 도 16은 고정기 처리 전 (패널 A) 및 고정기 처리 후 (패널 B)에 있어서 소정의 컷오프 존에 있어서 AIS 환자의 분포를 도시한 차트이다.
[0057] 도 17은 AIS에 있어서 척추 기형 진행 과정 중의 가상적인 분자 개념도이다;
[0058] 도 18은 AIS 환자에 있어서 OPN 수준과 상관 관계가 있는 셀레늄 수준을 나타내는 그래프이다;
[0059] 도 19는 3가지 카테고리의 대상자: 즉 대조군, 낮은 OPN 프로듀서 및 높은 OPN 프로듀서에 있어서 셀레늄 수준을 비교한 히스토그램이다;
[0060] 도 20은 3종의 인간 OPN 이소형 (전사 변이체 1, mRNA NM_001040058 (SEQ ID NO: 1); 전사 변이체 2, mRNA NM_000582 (SEQ ID NO: 2); 전사 변이체 3, mRNA NM_001040060 (SEQ ID NO: 3)의 뉴클레오타이드 서열 및 이들 3종의 인간 OPN 이소형의 아미노산 서열 (이소형 a NP_001035147 (SEQ ID NO: 4); 이소형 b NP_000573 (SEQ ID NO: 5); 및 이소형 c NP_001035149 (SEQ ID NO: 6))을 나타낸 도면이다;
[0061] 도 21은 (mRNA) 인간 CD44의 6종의 이소형의 뉴클레오타이드 서열 (NM_000610 전사 변이체 1 (SEQ ID NO　: 7); NM_001001389 전사 변이체 2 (SEQ ID NO: 8); NM_001001390 전사 변이체 3 (SEQ ID NO: 9); NM_001001391 전사 변이체 4 (SEQ ID NO: 10); NM_001001392 전사 변이체 5 (SEQ ID NO: 11); 종양 세포에서 동정된 X62739 이소형 (SEQ ID NO: 12)) 및 인간 sCD44의 6종의 이소형의 아미노산 서열 (NP_000601 이소형 1 전구체 (SEQ ID NO　: 13); NP_001001389 이소형 2 전구체 (SEQ ID NO: 14); NP_001001390 이소형 3 전구체 (SEQ ID NO: 15); NP_001001391 이소형 4 전구체 (SEQ ID NO: 16); NP_001001392 이소형 5 전구체 (SEQ ID NO: 17); 및 종양 세포에서 동정된 CAA44602 이소형 (SEQ ID NO: 18))을 나타낸 도면이다;
[0062] 도 22는 sCD44의 구조 (패널 A), 여러가지 CD44 이소형의 기원 (패널 B) 및 하나의 sCD44 이소형 (SEQ ID NO: 23)에 있어서의 절단 부위를 나타낸 도면이다.
실시예 1
재료 및 방법
[00124] 양족 C57BL/6j OPN-NULL 및 CD44-NULL 마우스의 제작. The Ste-Justine Hospital's Animal Health Care Review Committee에 의해 승인된 프로토콜에 따라 마우스를 이용하여 실험을 수행하였다. C57Bl/6j 마우스에서 10세대 넘게 역교배시킨 OPN이 없는 C57Bl/6 마우스 (OPN-null 마우스) 또는 CD44 수용체가 없는 C57Bl/6 마우스 (CD44-null 마우스)의 육종쌍을 각각 수전 리틀링 박사 (Dr. Susan Rittling), (Rutger University, NJ, USA)와 탁 막 박사 (Dr. Tak Mak) (University of Toronto, ON, Canada)로부터 기증받아서 새로운 콜로니를 확립하는 한편, C57Bl/6j 마우스는 야생형 대조군으로서 사용하였다 (Charles-River, Wilmington, MA, USA). C57Bl6/6j 마우스를 사용하였는데 이는, 이들이 본래부터 멜라토닌 결핍이어서(26), 순환 OPN 수준이 높고(27), 양족 상태로 유지될 경우 척추측만증을 발병하기 때문이다(28). 이것은 잘 알려진 척추측만증 동물 모델이다. 양족 수술은 앞서 보고된 바와 같이 마취 하에 앞다리와 꼬리를 절단함으로써 이유기 후에 실시하였다. (28)Faxitron X-선 장치 (Faxitron X-rays Corp. Wheeling, IL, USA)를 이용하여 6주령부터 시작하여 2주일마다 마취 하에 철저히 방사능 시험을 모든 마우스에 대하여 실시하였다. 전후 X-선 사진을 찍고, 이어서 척추측만증의 존재 여부에 대하여 각각의 디지털 이미지를 평가하였다. 유의적인 척추측만증 증상으로써 Cobb 각도의 역치를 10o 이상으로 유지하였다.
[00125] 마우스 OPN의 면역분석 OPN의 혈청 수준을 측정하기 위하여 말초 혈액 시료로부터 마우스의 혈청을 수득하고 실리카 겔을 함유하는 혈청 분리기 튜브에 모은 다음 (BD Microtainer, BD New Jersey, USA), 원심분리하였다. 유도된 혈청 시료들을 분주하고 해동 및 분석 전까지 -80℃에서 냉동 보관하였다. OPN의 혈청 농도를 제조업체 (IBL, Hamburg, Germany)의 프로토콜에 따라 포획 효소 결합 면역흡수 분석법 (ELISA)에 의해 측정하였다. OPN ELISA 키트로 혈청 중 OPN의 포 스포릴화 및 비포스포릴화의 모든 이소형의 총 농도를 측정하였다. ELISA 테스트를 중복 수행하고 AsysHiTechTM Expert-96 마이크로플레이트 판독기 (Biochrom, Cambridge, UK)를 이용하여 450 nm에서 광학 밀도를 측정하였다. 이 실시예에서는 마우스의 혈청을 사용하였으나, 본 발명은 마우스 혈장에서의 OPN 측정도 포괄한다.
[00126] 송과체가 절단된 병아리의 제작. 송과체가 절단된 병아리 중 일 퍼센트는 척추측만증이 발병되었고 따라서 이들을 척추측만증 모델로서 사용하였다. 이 연구를 위하여, 지역 부화장에서 145마리의 새로 부화된 병아리 (Mountain Hubbard)를 구입하여 전술한 바와 같이 송과체 절단을 실시하였다(25).
[00127] 병아리 OPN의 발현 분석 및 면역분석. 총 세포 RNA를 페놀/클로로포름 추출에 의하여 송과체가 절단된 병아리의 척추 부근의 근육으로부터 제조하였다. RT-PCR을 위해, 1 마이크로그램의 총 RNA를 ThermoScriptTM 역전사효소 (Invitrogen)을 이용하여 역전사시키고 PCR 반응을 위하여, 이 역전사된 RNA 0.1 마이크로그램 당량을 사용하였다. 이것은 200 마이크로몰의 dNPTs, 1.5 밀리몰의 MgCl2, 각각의 프라이머 10 피코몰, 및 1U Pfu DNA-폴리머라제 (Stratagene, LaJolla, CA, USA)를 함유하는 최종 부피 50 마이크로리터가 되도록 실시하였다. PCR 반응은 다음의 프라이머와 조건을 이용하여 실시하였다: 병아리의 OPN (420 bp PCR 산물): 5'-ACACTTTCACTCCAATCGTCC-3'(SEQ ID NO: 19)(정방향), 5'- GCCCTTTCCGTTGTTGTCC-3'(SEQ ID NO: 20) (역방향) 35 사이클: 95℃/45초, 66℃/45 초, 72℃/1분. 정량 분석을 위하여, 모든 증폭물을 하우스키핑 유전자인 β-액틴의 그것에 대하여 정규화시켰다; 병아리의 β-액틴 (460 bp PCR 산물) 5'-GGAAATCGTGCGTGACAT-3' (SEQ ID NO: 21) (정방향), 5'-TCATGATGGAGTTGAATGTAGTT-3' (SEQ ID NO: 22) (역방향) 32 사이클: 94℃/45초, 55℃/45초, 72℃/1분. 에티디움 브로마이드를 함유하는 1.5% 아가로스 겔 상에서 PCR 증폭 산물을 분석하였다. 척추 부근의 근육의 총 단백질 추출물을 이용하여 병아리 OPN (클론 8E5, Kamiya Biomedial , WA, USA)과 가교반응하는 항인간 OPN 항체를 이용하여 웨스턴 블랏법에 의하여 병아리의 OPN을 측정하였다.
[00128] 인간 집단 The Sainte-Justine Hospital, The Montreal Children's Hospital, The Shriners Hospital for Children in Montreal, McGill University and The Affluent School Board의 제도 심의 위원회가 이 연구를 승인하였다. 각 참여자의 부모 또는 법정 후견인이 서면 동의서를 제출하였으며, 소수는 동의 의사를 표시하였다.
[00129] AIS에 걸린 모든 환자들은 6명의 정형외과 의사 중 한명에게 검사를 받았다. 병력 및 임상 시험 결과가 특발성 척추측만증 진단 결과와 일치하고, 척추골 회전과 함께 최소 10도의 관상면 만곡이 척추골의 스탠딩 라디오그래프 상에서 발견되면 그 개체는 이 병에 걸린 것으로 판정하였다. 몬트리올의 초등학교에서 건강한 대조군을 모집하였다. 동일한 정형외과 의사가 척추 만곡계(scoliometer)를 이용하여 Adam 전방 굽힘 테스트를 실시하여 각각의 대상자를 시험하였다.
[00130] 세 집단, 즉: AIS 환자, 어떠한 척추측만증 가족력/병력도 없는 건강한 대조군, 및 척추측만증 발병 위험이 있는 것으로 사료되고 부모 중 적어도 한명이 척추측만증에 걸린 무증상 자녀에 대하여 조사를 실시하였다. 252명의 속발성 AIS 환자, 35명의 건강한 대조군 대상자 및 70명의 척추측만증 발병 위험이 있는 무증상 아동을 모집하였다. 모든 대상자들은 백인이었으며 이들의 인구학적 특징은 다음의 표 2에 나타내었다.
Figure 112009066578308-pct00001
Figure 112009066578308-pct00002
[00131] 오스테오폰틴, sCD44 및 HA 효소 결합 면역흡수 분석법 AIS 환자, 무증상 아동 및 대조군의 말초 혈액 시료를 EDTA-함유 시험관에 수집한 다음 원심분리하였다. 유도된 혈장 시료를 분주하고 -80℃에서 냉동 보관한 후 분석 시 해동하였다. OPN 및 sCD44의 혈장 농도를 제조업체 (IBL, Hamburg, Germany)가 제공한 프로토콜에 따라 포획 효소 결합 면역흡수 분석법 (ELISA)에 의해 측정하였다. sCD44 Elisa 키트 (sCD44std)는 표준 단백질 서열을 포함하는 순환하는 (가용성) 모든 CD44 이소형은 측정하였으나, 엑손 V2과 V10 (50) 사이의 교번 스플라이싱과 연관된 희귀한 이소형은 측정하지 않았다 (도 22 참조). OPN IBL ELISA 키트 (코드 No. 27158)는 혈장 중 OPN의 포스포릴화 및 비포스포릴화 두가지 모두의 이소형의 총 농도를 측정하였다. HA의 순환 수준을 ELISA 키트 (HA-Elisa (K-1200), Echelon Biosciences, Salt Lake City, UT)를 이용하여 혈장 시료 중에서 측정하였다. 모든 ELISA 테스트를 두번씩 실시하고, AsysHiTech Expert-96 마이크로플레이트 판독기 (Biochrom, Cambridge, UK)를 이용하여 450 nm (OPN 및 sCD44의 경우) 및 405 nm (HA의 경우)에서 광학 밀도를 측정하였다. 시판하는 다른 Elisa 키트 또는 자가 제조 키트를 본 발명의 방법에 사용할 수 있다. 이들 여러가지 키트에 의해 측정된 척추 측만증 발병 위험성을 예측하는데 도움이 되는 척추 측만증 대상자로부터 비척추 측만증 대상자를 통계적으로 구별시키는 컷오프 값은 본 발명에 사용된 키트를 이용하여 산출된 값과는 아마도 다를 것이다. 그러나 본 발명에 설명된 바와 같이 사용된 각각의 새로운 항체에 대하여 산출될 수 있다.
[00132] 통계적 분석 서로 다른 AIS 및 대조군에서의 연령 및 성별 차이를 각각 Pearson's Chi-스퀘어법과 Student's t 검정법에 의해 평가하였다. OPN, sCD44 및 HA의 수준과 이들 그룹 간의 관련성에 대한 검정을 위해 다중 선형 회귀 모델을 이용하였다. 이들 잠재적인 중첩요인들(confounders)이 p<0.1로 바이오마커 수준과 관련된 경우, 얻어진 값들을 연령, 성별 및 연령-성별 상호작용에 대하여 조정하였다. 그룹과 성별 사이의 상호작용도 조사하였다. 먼저 그룹 효과가 있는 모델과 없는 모델을 비교하는 글로벌 F 검정을 이용하여 전체적인 그룹 효과를 테스트하였다. 이어서 다중 검정에 대하여 Bonferroni 교정을 적용하여, 그룹 간의 특이적인 차이점에 대하여 테스트하였다. 수신자 판단특성 (ROC: Receiver-operating characteristics) 곡선을 이용하여 OPN의 진단값을 평가하고, 최적 역치를 동정하였다. 곡선을 이용하여 OPN의 감수성 (AIS에 걸린 것으로 알려진 환자에 대하여 분석을 실시한 경우의 참-양성 비율)과 특이성 (건강한 대조군에 대하여 분석을 실시한 경우의 참-음성 결과의 비율)을 프로파일링하였다. ROC 곡선하 면적 (AUC) 및 연관된 95% 신뢰구간을 산출하였다. 이론치 AUC가 0.5라는 가정의 검정은 신뢰 구간에 기초하였다. ROC 곡선 분석을 R에 대한 ROCR 패키지를 이용하여 실시한 것을 제외하고, SAS 소프트웨어, 버젼 9.1에 대하여 통계 분석을 실시하였다 (www.r-project.org)(51,52). 달리 언급하지 않는 한 모든 분석에서 p 값 <0.005이면 통계적으로 유의적인 것으로 고려하였다.
실시예 2
송과체가 절단된 병아리의 mRNA 및 단백질 OPN 수준
[00133] 송과체가 절단된 병아리에 있어서 OPN의 발현 분석 및 면역검출 분석을 상술한 실시예 1에 설명된 바와 같이 실시하였다. 송과체가 절단된 병아리에서 발생하는 mRNA 및 단백질 수준으로 OPN을 측정하였다. 도 1은 척추 측만증이 발병된 송과체 절단 병아리에 있어서만 mRNA 및 단백질 수준에서 OPN이 크게 증가하였음을 보여준다.
실시예 3
C57Bl/6j 마우스에 있어서 OPN 단백질 수준
[00134] 양족 C57Bl/6j 마우스를 만들고 이들의 OPN 수준을 상기 실시예 1에 설명된 바와 같이 측정하였다. C57Bl/6j 마우스에 있어서 8주일간 양족 절단하자 암컷의 경우 46 퍼센트, 그리고 수컷의 경우 24 퍼센트의 비율로 척추 측만증이 유발되었는데, 이는 암컷에서 혈장 OPN 수준이 더 높은 것으로 나타난 것과 연관이 있다 (하기 표 3 참조). 이 동물 모델의 타당성은 인간에서도 관찰되는 바와 같이, 양족 수컷 (24%)에 비할 경우 양족 C57Bl/6j 암컷 (46%)에서 척추 측만증이 숫적인 면에서나, 위중도 면에서나 더 빈번히 관찰된다는 사실에 의해 잘 뒷받침된다.
[00135] 표 3. 천연 멜라토닌 결핍 마우스 스트레인 C57Bl/6j 마우스 및 OPN 또는 CD44가 결핍되도록 유전적으로 변형된 C57Bl 마우스에 있어서 척추 측만증 빈도.

n
척추 측만증의 %
평균 팔로우업 기간

C57Bl/6j
♂
♀
21
28
24%
46%
57주 +/- 3
57주 +/- 3

C57Bl/6j
OPN-null
♂
♀
30
24
0%
0%
54주 +/- 2
54주 +/- 2

C57Bl/6j
CD44-null
♂
♀
29
31
0%
0%
52주 +/- 2
52주 +/- 2
[00136] 도 2는 척추 측만증 C57Bl/6j 마우스에 있어서 양족 수술 후 (즉, 척추 측만증 발달 동안) OPN 단백질 수준이 크게 증가하였음을 보여준다.
실시예 4
양족 C57Bl/6j 마우스의 척추 측만증에 미치는 OPN 또는 CD44 부재에 따른
효과의 관찰
[00137] 척추 측만증 형성 및 곡선 진행 (progression)에 있어서 병태생리학 캐스케이드의 중요한 부분으로서의 OPN 및 CD44 수용체의 기여도를, 유전적으로 변형된 양족 C57Bl/6j 마우스를 이용하여 전술한 실시예 1에 설명된 바와 같은 실험을 실시함으로써 연구하였다. 상기 표 3에 나타낸 바와 같이, 양족 C57Bl/6j OPN-null (n=54) 및 C57Bl/6j CD44-null 마우스 (n=60) 중 어느 것도 이들에 대한 분석이 52주일 넘게 연장 실시 되었음에도 불구하고 척추측만증을 발병시키지 않은 것으로 나타났다. 척추 측만증 발병은 수술 후 8주일 후에 검색되었다. 척추 측만증의 발명이 단지 OPN-null 및 CD44-null 마우스에서 지연된 것이 아님을 입증하기 위하여 보다 긴 팔로우-업을 실시하였다.
[00138] 이와 함께, 양족 C57Bl/6j OPN-KO 마우스에 있어서 척추 측만증의 부재가 멜라토닌의 증가된 생성에 기인한 것일 수 있다는 가능성을 배제하기 위하여, 멜라토닌 순환 수준을 야생형 및 OPN-KO 마우스에서 측정하였다.
[00139] 도 3은 야생형 (C57Bl/6j, C57Bl/6j 및 FVB)에 비교할 때 양족 C57Bl/6j OPN KO 마우스의 순환 멜라토닌 수준이 2배 감소되었음을 보여준다.
[00140] 전술한 바와 같이, C57Bl/6j 마우스는 멜라토닌 결핍이며, 멜라토닌을 높은 수준으로 생산하는 FVB 스트레인과 대조적으로 척추 측만증 (S)를 발병시킬 가능성이 있다. OPN-녹아웃 마우스는 이들이 동일한 유전적 배경 (C57Bl/6j)을 가지고는 있으나, 멜라토닌이 현저히 감소하였다 하여도 척추 측만증를 발병하지 않는데 (NS), 이는 멜라토닌이 생체내에서의 OPN 발현 및 합성을 음성적으로 조절함을 시사하는 것이다. 이 가설에 구애됨이 없이, 유전적으로 변형된 마우스에 있어서 OPN이 부재할 경우, OPN 발현 및 합성을 증가시키기 위한 후천적인 생리적 반응으로서 멜라토닌 수준이 더 감소될 것으로 여겨진다.
실시예 5
척추 측만증 예방에 미치는 OPN 억제제의 효과
[00141] OPN의 전사 또는 합성에 영향을 미치는 것으로 여겨지는 2종의 화합물을 송과체 절단 24-48 시간 전에 병아리에게 500 ㎍/1kg 체중/1일의 투여량으로 복강 주사하였다.
[00142] 도 4에 명백히 도시된 바와 같이, 이들 약물로 전처리된 송과체 절단 병아리들은 약물로 처리되지 않은 송과체 절단 병아리에 비해 척추 측만증 발병이 더 적었다 (50% 감소).
실시예 6
두 그룹으로 분류된 AIS 환자 및 건강한 대조군에 있어서 순환 OPN의 수준 비교
[00143] AIS에 걸린 252명의 환자와 35명의 건강한 대조군 대상자 그룹을 상기 실시예 1에 설명된 바와 같이 시험하였다. AIS에 걸린 환자들을 이들의 척추 만곡 정도 (10o-44o 대 ≥ 45o)에 따라 2개의 서브그룹으로 분류하였다. 증상이 가장 심한 AIS 서브그룹에서는 어떠한 환자도 검사 도중 교정 수술을 받지 않았다. 완만한 만곡의 경우 소년에 비해 10대 소녀에서 AIS 비율이 더 높다는 문헌상의 보고 (Cobb 각도 ≥ 30o인 곡선에서 10:1의 비율)와 일치하는 바와 같이, 대조군 그룹 (건강한 대상자와 발병 위험 대조군 그룹에서 각각 54% 및 64%, 대조군에 비해 p≤ 0.0001)에 비해 AIS 그룹에서 소녀들의 비율이 더 높았다 (10o-44o 및 ≥45o 서브그룹에서 각각 86% 및 84%). 두가지 AIS 서브그룹 (p = 0.76)이나 두가지 대조군 그룹 (p=0.32) 간에는 성별에 따른 유의적인 차이는 없었다. 평균 연령은 Cobb 각도가 ≥ 45o인 경우가 10-44o인 경우에 비해 훨씬 높았다 (15.2±1.8 대 13.8±2.1, p<0.0001). AIS 그룹은 두 그룹 모두 대조군에 비해 평균 연령이 더 높았다 (건강한 그룹 10.7±0.6, 발병 위험군 9.9±3.4, AIS 그룹에 비해 p<0.0001).
[00144] 심한 기형 (Cobb 각도 ≥ 45o)을 나타내는 AIS 환자, 낮은 수준 내지 보통 수준의 만곡 (Cobb 각도 10o 내지 44o)을 나타내는 AIS 환자 및 건강한 대조군에 있어서의 혈장 OPN 수준을, 여러가지 임상적 변수에 따라 하기 표 4에 요약하였다. 비록 혈장 OPN 수준은 기형이 가장 심한 환자 (Cobb 각도 ≥ 45o)에서 더 많이 증가하였으나, 평균 혈장 OPN 수준은 건강한 대조군에 비해 두개의 AIS 그룹 모두에서 유의적으로 더 높았다 (연령, 성별 및 연령-성별 상호반응에 대한 조정 후 Bonferroni 교정 p < 0.001). AIS 환자에 있어서 혈장 OPN 수준은 소년과 소년 모두에서 만곡의 기형도 수준 (도 5D)과 연관이 있었다 (연령에 대해 조정된 Partial Pearson 상관 계수 = 각각 0.29, p < 0.001, 및 0.33, p = 0.04). 척추 측만증 발병 위험 그룹에 있어서의 평균 혈장 OPN 수준 (846±402 ng/ml)은 건강한 대조군 (570±156 ng/ml)과 유의적으로 차이가 났다 (Bonferroni-교정 p < 0.001).
Figure 112009066578308-pct00003
[00145] 증상이 심한 (Cobb 각도 ≥ 45o) AIS 환자와 건강한 대조군에 있어서 혀장 OPN의 수신자 판단 특성 (ROC) 곡선을 분석하자 표준 오차 0.03으로 AUC가 0.94인 것으로 나타났다 (95 퍼센트 신뢰 구간 0.88 내지 0.99) (도 5A 참조). 1 밀리리터 당 컷오프 값 > 700 나노그램의 경우 감수성 90.6 퍼센트, 특이성 81.8 퍼센트였다 (도 5B 참조). 1 밀리리터 당 컷오프 값 > 800 나노그램인 경우 가장 정확도가 높았으며 감수성 84.4 퍼센트, 그리고 특이성 90.6 퍼센트로서, 척추 측만증로 확진된다 (최소 거짓 음성 및 거짓 양성 결과) (도 5C 참조).
[00146] 비록 전술한 바와 같이, 다른 성인 질환에서 OPN이 높은 수준으로 발견되지만, 척추 측만증 환자에서 발견되는 높은 혈장 OPN 수준은 소아 집단에서는 독특한 것이다. 따라서 OPN 수준 측정함은 무증상 아동들 중에서 척추 측만증 발병 위험 (AIS 또는 기타 척추 질환 및 척추 측만증을 야기하는 질환)이 있는 아동들을 동정하고 척추 측만증 대상자 중에서 척추 측만증 진행 경험이 있거나 진행 위험이 있는 대상자를 동정하는데 이용할 수 있다. 뿐만 아니라, AIS 환자에서 발견되는 혈장 OPN 수준은 종종 성인 질환에서 발견되는 수치보다 높다. OPN 수준은 또한 성인에 있어서 위험성 (예컨대 퇴행성 척추 측만증 및 성인기에 걸쳐 진행되는 특발성 척추 측만증)을 예측하는데 이용될 수 있다. 어떠한 돌연변이는 척추 측만증를 유발할 수 있는 다른 질환과 이미 연관되어 있을 수 있다. 특정 실시 상태에 있어서, OPN 수준은 이들 돌연변이의 조사와 조합적으로 사용될 수 있다.
실시예 7
발병 위험이 있는 무증상 아동 및 건강한 대조군에 있어서 순환 OPN의
수준 비교
[00147] 척추 측만증의 발병 위험이 있는 70명의 무증상 아동군과 35명의 대조군 대상자를 상기 실시예 1에 설명된 바와 같이 검사하였다. 척추 측만증 발병 위험군 내의 평균 혈장 OPN 수준 (846±402 나노그램/밀리리터)는 건강한 대조군의 경우 (570±156 나노그램/밀리리터)와 유의적으로 달랐고 (p=0.001) 두 그룹 모두 연령 및 성별을 맷치시켰다. 성별에 따른 유의적인 차이는 관찰되지 않았다 (상기 표 4 참조).
[00148] 밀리리터 당 800 나노그램의 컷오프 값을 이용한 경우, 무증상 아동 그룹의 47.9 퍼센트가 이 혈장 OPN 값보다 높은 반면, 건강한 대조군에서는 오직 8.6 퍼센트만이 이 값을 상회하였다. 이러한 결과는 부모 중 적어도 한명이 병에 걸린 자녀는 이 병에 걸리지 않은 부모의 자녀보다 척추 측만증이 더 많이 걸린다는 이전의 보고와 일치하는 것이다 (34, 35).
[00149] 따라서 예진 목적으로 척추 측만증 발병 위험이 있는 대상자를 조기 발견하고/또는 새로운 무융합 장치로 덜 침습적인 외과수술을 하거나 조기 보정기 착용을 위한 척추 측만증 환자의 계층화 목적, AIS에 걸린 환자 치료를 위한 약리학적 치료 및 이러한 치료에 대한 반응을 모니터링을 위해, 예컨대 OPN에 대한 효소 결합 면역흡수 분석법(ELISA) 또는 RIA를 이용할 수 있다.
실시예 8
두개의 그룹으로 분류된 AIS 환자 및 건강한 대조군에 있어서 순환 sCD44의
수준 비교
[00150] 상기 실시예 1에 설명된 실험을 실시하였다. 건강한 대조군, AIS군 및 발병 위험이 있는 무증상 아동군에 있어서 혈장 sCD44 및 HA 수준을 상기 표 4에 나타내었다. 모든 그룹을 서로 비교하자 평균 혈장 sCD44 및 HA 값에서는 유의적이니 변화가 나타나지 않았다. 그러나, 가장 심한 척추 기형 (≥45o)을 나타내는 AIS 환자는 다른 세가지 그룹과 비교한 경우 평균 혈장 sCD44 수준 역시도 가장 낮았다 (p=0.066).
[00151] CD44 및 sCD44는 각각 OPN에 대한 수용체 및 유인(decoy) 수용체로서 작용할 수 있다. 검사된 모든 그룹에 있어서 아무런 유의적인 변화가 측정되지 않았음에도 불구하고, 가장 심한 정상의 AIS 환자 (≥45o)는 검사된 모든 그룹 중에서 평균 sCD44값이 가장 낮았다. 면역결핍 질환 및 자가면역 질환에서 혈장 sCD44 수준의 감소가 발견되는 반면, 이들 질환 중 어느 것도 일반적으로 고혈장 OPN 수준의 부재하에서 척추 측만증를 유발하지 않는다는 것은 흥미로운데(35-37), 이는 sCD44가 OPN의 작용을 간섭함으로써 질병-변형 인자로서 AIS에서 어떤 역할을 할 수 있는 것임을 시사하는 것이다 (도 17 참조).
실시예 9
AIS 환자에 있어서 OPN 수준, sCD44 수준 및 Cobb 각도의 경시적인
변화 프로파일
[00152] AIS 환자에 있어서 팔로우 업 시간에 걸쳐 바이오마커 (OPN 및 sCD44 수준)과 Cobb 각도의 진전이 측정되었다. 도 7은 베이스라인 방문시 12세 (적색), 14세 (녹색 및 청색) 및 17세 (황색)의 4명의 선택된 AIS 여성 환자 (보정기 치료를 받지 않음)에 있어서 이러한 진전을 보여주고 있다.
[00153] 기형 만곡도가 악화된 AIS 환자 (Cobb 각도의 총 증가가 3o를 초과함)와 만곡도가 유의적으로 변화하지 않은 대상자 (Cobb 각도에 변화가 없거나, 각도의 감소 또는 증가가 3o 미만인 경우)에 있어서 팔로우업 시간 동안의 도 8은 OPN (좌측 패널)과 sCD44 (우측 패널) 수준의 분포를 나타낸 도면으로; OPN 수준의 평균 변화가 기형 만곡도가 악화된 그룹에 있어서 유의적으로 더 높았음을 나타낸다 (Wilcoxon 랭크 합계 검사 p<0.01)). sCD44의 경우 유의적인 차이는 측정되지 않았다 (p>5). 팔로우업 시간의 길이는 2 그룹에서 서로 유사하였다 (p>0.5).
[00154] 도 9는 AIS 환자 군에 있어서 Cobb 각도의 프로그레션(progression),과 연과된 OPN 프로그레션을 보여주는 반면, 도 10은 다른 AIS 환자에 있어서 Cobb 각도의 회귀 (regression) 또는 안정화와 연관된 OPN 회괴 또는 안정화를 도시한다.
[00155] OPN 수준을 이용함으로써 예진된 환자 중 척추 측만증이 진전될 환자들을 동정할 수 있다.
실시예 10
발병 위험이 있는 무증상 환자의 OPN 수준, sCD44 수준 및 Cobb 각도의
경시적 변화 프로파일
[00156] 도 11은 척추 측만증을 앓지 않는 4명의 발병 위험군 대상자, 즉: 13세 남아 1명 (녹색), 13세 여아 (녹색), 및 5세 여아 (황금색), 11세 여아 (청색) 및 9세 여아 (적색) 3명에 있어서 베이스라인 방문시 OPN 및 sCD44 수준의 변화 프로파일을 도시한 도면이다. 발병 위험 대상자에 있어서 바이오마커의 베이스라인 수준과 경시적 변화에 있어서 유의적인 대상자간 변동 (variability)이 관찰되었는데, 이는 발병 위험 대상자에 있어서 척추 측만증의 개시를 모니터하기 위한 도구로서 이 바이오마커가 유용할 수 있다는 가능성을 나타내는 것이다.
[00157] 하기의 표 5 내지 8에, 건강한 대조군 대상자 (표 5), Cobb 각도가 45도 미만인 AIS 환자 (표 6), Cobb 각도가 45o 이상인 AIS 환자 (표 7) 및 발병 위험이 있는 무증상 아동 (표 8) 각각에 있어서의 임상적 프로파일 및 생화학적 프로파일을 자세히 나타내었다.
Figure 112009066578308-pct00004
Figure 112009066578308-pct00005
Figure 112009066578308-pct00006
Figure 112009066578308-pct00007
Figure 112009066578308-pct00008
Figure 112009066578308-pct00009
Figure 112009066578308-pct00010
Figure 112009066578308-pct00011
Figure 112009066578308-pct00012
Figure 112009066578308-pct00013
Figure 112009066578308-pct00014
Figure 112009066578308-pct00015
Figure 112009066578308-pct00016
Figure 112009066578308-pct00017
Figure 112009066578308-pct00018
Figure 112009066578308-pct00019
Figure 112009066578308-pct00020
Figure 112009066578308-pct00021
실시예 11
비AIS 척추 측만증 환자에 있어서 OPN, sCD44 및 HA 수준
[00158] 비척추 측만증 환자 (NAIS 환자)에 있어서 OPN 수준을 측정하였다. 결과를 다음 표 9에 요약하였다. 건강한 사람, AIS 환자 및 NAIS 환자에 있어서의 CPN, sCD44 및 HA 수준의 비교 결과를 도 12에 도시하였다.
Figure 112009066578308-pct00022
[00159] 다음의 표 10은 비AIS 척추 측만증 환자에 있어서 상세한 바이오마커 수준을 나타낸다.
Figure 112009066578308-pct00023
Figure 112009066578308-pct00024
실시예 12
수술전 및 수술후 AIS 환자에 있어서 OPN 및 sCD44 수준
[00160] 수술전 (n=79) 및 수술후 (n=28)의 AIS 환자에 있어서 OPN 수준을 측정하였다. 흥미롭게도, 수술전 대 수술후 AIS 환자의 비교 결과 순환 OPN 수준이 감소된 것으로 나타났는데, 이는 세포 수준에서 OPN의 메카노센서로서의 역할을 더욱 뒷받침하는 것이다 (도 13).
[00161] 고정기 착용 전 (n=10) 및 착용후 (n=10) AIS 여성 환자에 있어서 OPN을 측정하였다. 마찬가지로, 수술전(n=15) 및 수술후 (n=12) AIS 여성 환자에 있어서 sCD44 수준을 측정하였다. 이 결과를 표 14에 나타내었다.
[00162] 수술전 및 수술후 소정의 컷오프 대역에 있어서의 12명의 AIS 환자의 분포를 조사하였다. 도 15는 수술 처리된 환자의 92%가 적색 대역 (혈장의 OPN 수준 > 8000 ng/ml)의 수술전 OPN 수준을 갖는 반면, 나머지 8%는 황색 대역 (700-800 ng/mL)에 해당한다는 것을 보여준다. 어떤 환자도 혈장 OPN 수준이 <700 ng/mL인 녹색 대역에 해당하지는 않았다. 이것은 또한 높은 OPN 농도와 척추 측만증 만곡의 프로그레션 간의 깊은 상관관계를 나타내는 것이다.
[00163] 도 15의 패널 B는 외과 수술을 받은 적색 대역 환자들이 혈액 중 OPN 농도가 감소되었음을 보여준다. 외과 수술을 받은 환자의 75%는 녹색 및 황색 대역으로 옮겨갔다 (800 ng/mL 이하).
실시예 13
여러가지 유형의 고정기를 착용한 AIS 환자에 있어서 OPN 수준
[00164] 고정기 착용 전 (n=79) 및 착용후 (N=28) AIS 환자에 있어서 OPN 수준도 측정하였다. 하기 표 11은 바이오마커에 대한 고정기의 효과를 나타내는 것이다.
Figure 112009066578308-pct00025
[00165] 고정기 착용전 및 착용 후 소정의 컷오프 대역에 대한 AIS 환자의 분포도 조사하였다. 8명의 환자를 고정기 착용 후 몇개월간, 즉, 환자 #1 내지 #8 각각을 고정기 착용 후 7,7,8,22,22,22 및 26개월간 조사하였다. 도 16은 고정기 착용전 (패널 A), 이 환자들의 63%가 적색 및 황색 대역에 있었음을 도시한다. 녹색 대역 (<700 ng/mL)으로의 유의적인 이동이 관찰되었는데, 이는 도 13-15에 도시된 바와 같이, 외과수술을 받은 환자들에서 관찰된 경향과 일치하는 것이다.
실시예 14
AIS 환자 대 건강한 대상자들 간의 셀레늄 수준 비교
[00166] AIS 환자의 혈장에서 셀레늄 농도가 크게 저하되는 것으로 보고된 바 있다 (42). 셀레늄, 더욱 구체적으로 식품중에 자연적으로 존재하는 Se-메틸셀레노시스테인은 OPN 전사를 표적화함으로써 화학예방요법으로서 유방암에 있어서 전이를 방지하는데 사용된다 (43-45).
[00167] AIS에 있어서 낮은 셀레늄 수준이 높은 OPN 농도와 연관이 있는지 결정하기 위하여 소아 집단 (AIS 대 건강한 대조군)에서 혈장의 셀레늄 농도를 측정하였다. 2,3-디아미노나프탈렌(DAN)을 이용하여 형광측정법에 의해 혈장 셀레늄 농도를 측정하였다 (46, 47). 도 18 및 도 19에 제시된 결과는 척추 측만증 환자 및 발병 위험이 있는 무증상 아동에 있어서 높은 OPN 수준과 낮은 셀레늄 수준 간의 상관 관계를 보여준다.
[00168] 비록 특정 구체예를 들어 이제까지 본 발명을 설명하였으나, 첨부된 특허청구범위 내에서 본 발명의 범위와 특성을 벗어남이 없이 얼마든지 변형이 가능하다.
참고문헌
(1) Brodner W, Krepler P, Nicolakis M et al. Melatonin and adolescent idiopathic scoliosis. J Bone Joint Surg Br 2000; 82(3):399-403.
(2) Lowe TG, Edgar M, Margulies JY et al. Etiology of idiopathic scoliosis: current trends in research. J Bone Joint Surg Am 2000; 82-A(8):1157-1168.
(3) Veldhuizen AG, Wever DJ, Webb PJ. The aetiology of idiopathic scoliosis: biomechanical and neuromuscular factors. Eur Spine J 2000; 9(3):178-184.
(4) Miller NH. Cause and natural history of adolescent idiopathic scoliosis. Orthop Clin North Am 1999; 30(3):343-52, vii.
(5) Miller NH. Genetics of familial idiopathic scoliosis. Clin Orthop 2002;(401):60-64.
(6) Miller NH, Schwab DL, Sponseller PD, Manolio TA, Pugh EW, Wilson AP. Characterization of idiopathic scoliosis in a clinically well-defined population. Clin Orthop 2001;(392):349-357.
(7) Wise CA, Barnes R, Gillum J, Herring JA, Bowcock AM, Lovett M. Localization of susceptibility to familial idiopathic scoliosis. Spine 2000; 25(18):2372-2380.
(8) Moreau A, Wang DS, Forget S et al. Melatonin Signaling Dysfunction in Adolescent Idiopathic Scoliosis. Spine 2004.
(9) Denhardt DT, Noda M, O'Regan AW, Pavlin D, Berman JS. Osteopontin as a means to cope with environmental insults: regulation of inflammation, tissue remodeling, and cell survival. J Clin Invest 2001; 107(9):1055-1061.
(10) Mazzali M, Kipari T, Ophascharoensuk V, Wesson JA, Johnson R, Hughes J. Osteopontin--a molecule for all seasons. QJM 2002; 95(1):3-13.
(11) Lopez CA, Olson ES, Adams JC, Mou K, Denhardt DT, Davis RL. Osteopontin expression detected in adult cochleae and inner ear fluids. Hear Res 1995; 85(1-2):210-222.
(12) Simoneau M, Richer N, Mercier P, Allard P, Teasdale N. Sensory deprivation and balance control in idiopathic scoliosis adolescent. Exp Brain Res 2006; 170(4):576-582.
(13) Guo X, Chau WW, Hui-Chan CW, Cheung CS, Tsang WW, Cheng JC. Balance control in adolescents with idiopathic scoliosis and disturbed somatosensory function. Spine 2006; 31(14):E437-E440.
(14) Weber B, Rosel M, Arch R, Moller P, Zoller M. Transient expression of CD44 variant isoforms in the ontogeny of the rat: ectoderm-, endoderm- and mesoderm-derived cells express different exon combinations. Differentiation 1996; 60(1):17-29.
(15) Panda D, Kundu GC, Lee BI et al. Potential roles of osteopontin and alphaVbeta3 integrin in the development of coronary artery restenosis after angioplasty. Proc Natl Acad Sci U S A 1997; 94(17):9308-9313.
(16) Ruiz P, Schwarzler C, Gunthert U. CD44 isoforms during differentiation and development. Bioessays 1995; 17(1):17-24.
(17) Katagiri YU, Sleeman J, Fujii H et al. CD44 variants but not CD44s cooperate with beta1-containing integrins to permit cells to bind to osteopontin independently of arginine-glycine-aspartic acid, thereby stimulating cell motility and chemotaxis. Cancer Res 1999; 59(1):219-226.
(18) Jalkanen S, Jalkanen M. Lymphocyte CD44 binds the COOH-terminal heparin-binding domain of fibronectin. J Cell Biol 1992; 116(3):817-825.
(19) Naujokas MF, Morin M, Anderson MS, Peterson M, Miller J. The chondroitin sulfate form of invariant chain can enhance stimulation of T cell responses through interaction with CD44. Cell 1993; 74(2):257-268.
(20) Weber GF, Ashkar S, Glimcher MJ, Cantor H. Receptor-ligand interaction between CD44 and osteopontin (Eta-1). Science 1996; 271(5248):509-512.
(21) Bennett KL, Modrell B, Greenfield B et al. Regulation of CD44 binding to hyaluronan by glycosylation of variably spliced exons. J Cell Biol 1995; 131(6 Pt 1):1623-1633.
(22) Stamenkovic I, Aruffo A, Amiot M, Seed B. The hematopoietic and epithelial forms of CD44 are distinct polypeptides with different adhesion potentials for hyaluronate-bearing cells. EMBO J 1991; 10(2):343-348.
(23) Komura K, Sato S, Fujimoto M, Hasegawa M, Takehara K. Elevated levels of circulating CD44 in patients with systemic sclerosis: association with a milder subset. Rheumatology (Oxford) 2002; 41(10):1149-1154.
(24) Scott DA, Stapleton JA, Palmer RM et al. Plasma concentrations of reputed tumor-associated soluble CD44 isoforms (v5 and v6) in smokers are dose related and decline on smoking cessation. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2000; 9(11):1211-1214.
(25) Wang X, Jiang H, Raso J et al. Characterization of the scoliosis that develops after pinealectomy in the chicken and comparison with adolescent idiopathic scoliosis in humans. Spine 1997; 22(22):2626-2635.
(26) von Gall C, Lewy A, Schomerus C et al. Transcription factor dynamics and neuroendocrine signalling in the mouse pineal gland: a comparative analysis of melatonin-deficient C57BL mice and melatonin-proficient C3H mice. Eur J Neurosci 2000; 12(3):964-972.
(27) Aherrahrou Z, Axtner SB, Kaczmarek PM et al. A locus on chromosome 7 determines dramatic up-regulation of osteopontin in dystrophic cardiac calcification in mice. Am J Pathol 2004; 164(4):1379-1387.
(28) Machida M, Dubousset J, Yamada T et al. Experimental scoliosis in melatonin-deficient C57BL/6J mice without pinealectomy. J Pineal Res 2006; 41(1):1-7.
(29) Scoliosis Research Society. Morbidity & Mortality Committee annual report 1997.
(30) Mishima R, Takeshima F, Sawai T et al. High plasma osteopontin levels in patients with inflammatory bowel disease. J Clin Gastroenterol 2007; 41(2):167-172.
(31) Ang C, Chambers AF, Tuck AB, Winquist E, Izawa JI. Plasma osteopontin levels are predictive of disease stage in patients with transitional cell carcinoma of the bladder. BJU Int 2005; 96(6):803-805.
(32) Wong CK, Lit LC, Tam LS, Li EK, Lam CW. Elevation of plasma osteopontin concentration is correlated with disease activity in patients with systemic lupus erythematosus. Rheumatology (Oxford) 2005; 44(5):602-606.
(33) Kim J, Ki SS, Lee SD et al. Elevated plasma osteopontin levels in patients with hepatocellular carcinoma. Am J Gastroenterol 2006; 101(9):2051-2059.
(34) Wynne-Davies R. Familial (idiopathic) scoliosis. A family survey. J Bone Joint Surg Br 1968; 50(1):24-30.
(35) De George FV, Fisher RL. Idiopathic scoliosis: genetic and environmental aspects. J Med Genet 1967; 4(4):251-257.
(36) Lein M, Jung K, Weiss S, Schnorr D, Loening SA. Soluble CD44 variants in the serum of patients with urological malignancies. Oncology 1997; 54(3):226-230.
(37) Karjalainen JM, Tammi RH, Tammi MI et al. Reduced level of CD44 and hyaluronan associated with unfavorable prognosis in clinical stage I cutaneous melanoma. Am J Pathol 2000; 157(3):957-965.
(38) Schlosser W, Gansauge F, Schlosser S, Gansauge S, Beger HG. Low serum levels of CD44, CD44v6, and neopterin indicate immune dysfunction in chronic pancreatitis. Pancreas 2001; 23(4):335-340.
(39) Sjoberg S, Fogelstrand L, Hulthe J, Fagerberg B, Krettek A. Circulating soluble CD44 is higher among women than men and is not associated with cardiovascular risk factors or subclinical atherosclerosis. Metabolism 2005; 54(2):139-141.
(40) Jenkins RH, Thomas GJ, Williams JD, Steadman R. Myofibroblastic differentiation leads to hyaluronan accumulation through reduced hyaluronan turnover. J Biol Chem 2004; 279(40):41453-41460.
(41) Lien YH, Fu J, Rucker RB, Scheck M, Abbott U, Stern R. Collagen, proteoglycan and hyaluronidase activity in cultures from normal and scoliotic chicken fibroblasts. Biochim Biophys Acta 1990; 1034(3):318-325.
(42) Dastych M, Cienciala J. Idiopathic scoliosis and concentrations of zinc, copper, and selenium in blood plasma. Biol Trace Elem Res 2002; 89(2):105-110.
(43) El-Bayoumy K, Sinha R. Molecular chemoprevention by selenium: a genomic approach. Mutat Res 2005; 591(1-2):224-236.
(44) Unni E, Kittrell FS, Singh U, Sinha R. Osteopontin is a potential target gene in mouse mammary cancer chemoprevention by Se-methylselenocysteine. Breast Cancer Res 2004; 6(5):R586-R592.
(45) He YT, Liu DW, Ding LY, Li Q, Xiao YH. Therapeutic effects and molecular mechanisms of anti-fibrosis herbs and selenium on rats with hepatic fibrosis. World J Gastroenterol 2004; 10(5):703-706.
(46) Sheehan TM, Gao M. Simplified fluorometric assay of total selenium in plasma and urine. Clin Chem 1990; 36(12):2124-2126.
(47) Ando M, Takizawa M, Suwabe S, Yamato S, Shimada K. Determination of selenium in human serum by liquid chromatography/electron capture atmospheric pressure chemical ionization mass spectrometry after acid digestion and derivatization using 2,3-diaminonaphthalene. Eur J Mass Spectrom (Chichester, Eng) 2003; 9(6):619-622.
(48) Uchio E, Matsuura N, Kadonosono K, Ohno S, Uede T. Tear osteopontin levels in patients with allergic conjunctival diseases. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol, 2002; 240(11): 924-8.
(49) Buck et al. Design Strategies and Performance of Custom DNA Sequencing primers. Biotechniques 1999; 27:528-536.
(50) Ponta, H, Sherman L, Herrlich, PA. CD44　: from Adhesion molecules to signalling regulators. Nature Reviews. 2004; 4:33-45.
(51) Garrett, K.A., P.D. Esker, and A.H. Sparks. 2007. Introduction to the R Programming Environment. The Plant Health Instructor. DOI:10.1094/PHI-A-2007-1226-02.
(52) Ihaka R, Gentleman R. A language for data analysis and graphics. Journal of Computational and Graphical Statistics1996, 5(3):299-314.
(53) Goodison S, and Tarin D. Clinical Implications Of Anomalous Cd44 Gene Expression In Neoplasia. Frontiers in Bioscience 1998, 3, e89-109.
(54) Ito T, Hashimoto Y, Tanaka E, Kan T, Tsunoda S, Sato F, Higashiyama M, Okumura T, Shimada Y. An Inducible Short-Hairpin RNAVector against Osteopontin Reduces Metastatic Potential of Human Esophageal Squamous Cell Carcinoma In vitro and In vivo Clin Cancer Res 2006;12(4) 1308-1316.
(55) Kadkol SS, Lin AY, Barak V, Kalickman I, Leach L, Valyi-Nagy K, Majumdar D, Setty S, Maniotis A J, Folberg R, Pe'er J. Osteopontin Expression and Serum Levels in Metastatic Uveal Melanoma - A Pilot Study Invest Ophthalmol Vis Sci. 2006; 47(3): 802 06.
(56) Guarino V, Faviana P, Salvatore G, Castellone MD, Cirafici A , De Falco V, Celetti A, Giannini R, Basolo F, Melillo RM, Santoro M. Osteopontin Is Overexpressed in Human Papillary Thyroid Carcinomas and Enhances Thyroid Carcinoma Cell Invasiveness. The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism.2005 90(9):5270278.
(57) Ponta et al, Nat Rev Mol Cell Biol. 2003 Jan;4(1):33-45. Review.
<110> CHU Sainte-Justine <120> METHODS OF DETERMINING THE RISK OF DEVELOPING SCOLIOSIS, METHODS OF STRATIFYING A SUBJECT HAVING A SCOLIOSIS, METHODS FOR ASSESSING THE EFFICACY OF A BRACE ON A SUBJECT HAVING A SCOLIOSIS, AND KITS THEREFOR <130> KP-CH-098883 <140> PCT/CA2008/000595 <141> 2008-03-31 <150> 60/909,408 <151> 2007-03-30 <150> 61/025,571 <151> 2008-02-01 <160> 23 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 1641 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 ctccctgtgt tggtggagga tgtctgcagc agcatttaaa ttctgggagg gcttggttgt 60 cagcagcagc aggaggaggc agagcacagc atcgtcggga ccagactcgt ctcaggccag 120 ttgcagcctt ctcagccaaa cgccgaccaa ggaaaactca ctaccatgag aattgcagtg 180 atttgctttt gcctcctagg catcacctgt gccataccag ttaaacaggc tgattctgga 240 agttctgagg aaaagcagct ttacaacaaa tacccagatg ctgtggccac atggctaaac 300 cctgacccat ctcagaagca gaatctccta gccccacaga atgctgtgtc ctctgaagaa 360 accaatgact ttaaacaaga gacccttcca agtaagtcca acgaaagcca tgaccacatg 420 gatgatatgg atgatgaaga tgatgatgac catgtggaca gccaggactc cattgactcg 480 aacgactctg atgatgtaga tgacactgat gattctcacc agtctgatga gtctcaccat 540 tctgatgaat ctgatgaact ggtcactgat tttcccacgg acctgccagc aaccgaagtt 600 ttcactccag ttgtccccac agtagacaca tatgatggcc gaggtgatag tgtggtttat 660 ggactgaggt caaaatctaa gaagtttcgc agacctgaca tccagtaccc tgatgctaca 720 gacgaggaca tcacctcaca catggaaagc gaggagttga atggtgcata caaggccatc 780 cccgttgccc aggacctgaa cgcgccttct gattgggaca gccgtgggaa ggacagttat 840 gaaacgagtc agctggatga ccagagtgct gaaacccaca gccacaagca gtccagatta 900 tataagcgga aagccaatga tgagagcaat gagcattccg atgtgattga tagtcaggaa 960 ctttccaaag tcagccgtga attccacagc catgaatttc acagccatga agatatgctg 1020 gttgtagacc ccaaaagtaa ggaagaagat aaacacctga aatttcgtat ttctcatgaa 1080 ttagatagtg catcttctga ggtcaattaa aaggagaaaa aatacaattt ctcactttgc 1140 atttagtcaa aagaaaaaat gctttatagc aaaatgaaag agaacatgaa atgcttcttt 1200 ctcagtttat tggttgaatg tgtatctatt tgagtctgga aataactaat gtgtttgata 1260 attagtttag tttgtggctt catggaaact ccctgtaaac taaaagcttc agggttatgt 1320 ctatgttcat tctatagaag aaatgcaaac tatcactgta ttttaatatt tgttattctc 1380 tcatgaatag aaatttatgt agaagcaaac aaaatacttt tacccactta aaaagagaat 1440 ataacatttt atgtcactat aatcttttgt tttttaagtt agtgtatatt ttgttgtgat 1500 tatctttttg tggtgtgaat aaatctttta tcttgaatgt aataagaatt tggtggtgtc 1560 aattgcttat ttgttttccc acggttgtcc agcaattaat aaaacataac cttttttact 1620 gcctaaaaaa aaaaaaaaaa a 1641 <210> 2 <211> 1616 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 ctccctgtgt tggtggagga tgtctgcagc agcatttaaa ttctgggagg gcttggttgt 60 cagcagcagc aggaggaggc agagcacagc atcgtcggga ccagactcgt ctcaggccag 120 ttgcagcctt ctcagccaaa cgccgaccaa ggaaaactca ctaccatgag aattgcagtg 180 atttgctttt gcctcctagg catcacctgt gccataccag ttaaacaggc tgattctgga 240 agttctgagg aaaagcagct ttacaacaaa tacccagatg ctgtggccac atggctaaac 300 cctgacccat ctcagaagca gaatctccta gccccacaga cccttccaag taagtccaac 360 gaaagccatg accacatgga tgatatggat gatgaagatg atgatgacca tgtggacagc 420 caggactcca ttgactcgaa cgactctgat gatgtagatg acactgatga ttctcaccag 480 tctgatgagt ctcaccattc tgatgaatct gatgaactgg tcactgattt tcccacggac 540 ctgccagcaa ccgaagtttt cactccagtt gtccccacag tagacacata tgatggccga 600 ggtgatagtg tggtttatgg actgaggtca aaatctaaga agtttcgcag acctgacatc 660 cagtaccctg atgctacaga cgaggacatc acctcacaca tggaaagcga ggagttgaat 720 ggtgcataca aggccatccc cgttgcccag gacctgaacg cgccttctga ttgggacagc 780 cgtgggaagg acagttatga aacgagtcag ctggatgacc agagtgctga aacccacagc 840 cacaagcagt ccagattata taagcggaaa gccaatgatg agagcaatga gcattccgat 900 gtgattgata gtcaggaact ttccaaagtc agccgtgaat tccacagcca tgaatttcac 960 agccatgaag atatgctggt tgtagacccc aaaagtaagg aagaagataa acacctgaaa 1020 tttcgtattt ctcatgaatt agatagtgca tcttctgagg tcaattaaaa ggagaaaaaa 1080 tacaatttct cactttgcat ttagtcaaaa gaaaaaatgc tttatagcaa aatgaaagag 1140 aacatgaaat gcttctttct cagtttattg gttgaatgtg tatctatttg agtctggaaa 1200 taactaatgt gtttgataat tagtttagtt tgtggcttca tggaaactcc ctgtaaacta 1260 aaagcttcag ggttatgtct atgttcattc tatagaagaa atgcaaacta tcactgtatt 1320 ttaatatttg ttattctctc atgaatagaa atttatgtag aagcaaacaa aatactttta 1380 cccacttaaa aagagaatat aacattttat gtcactataa tcttttgttt tttaagttag 1440 tgtatatttt gttgtgatta tctttttgtg gtgtgaataa atcttttatc ttgaatgtaa 1500 taagaatttg gtggtgtcaa ttgcttattt gttttcccac ggttgtccag caattaataa 1560 aacataacct tttttactgc ctaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa 1616 <210> 3 <211> 1560 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 ctccctgtgt tggtggagga tgtctgcagc agcatttaaa ttctgggagg gcttggttgt 60 cagcagcagc aggaggaggc agagcacagc atcgtcggga ccagactcgt ctcaggccag 120 ttgcagcctt ctcagccaaa cgccgaccaa ggaaaactca ctaccatgag aattgcagtg 180 atttgctttt gcctcctagg catcacctgt gccataccag ttaaacaggc tgattctgga 240 agttctgagg aaaagcagaa tgctgtgtcc tctgaagaaa ccaatgactt taaacaagag 300 acccttccaa gtaagtccaa cgaaagccat gaccacatgg atgatatgga tgatgaagat 360 gatgatgacc atgtggacag ccaggactcc attgactcga acgactctga tgatgtagat 420 gacactgatg attctcacca gtctgatgag tctcaccatt ctgatgaatc tgatgaactg 480 gtcactgatt ttcccacgga cctgccagca accgaagttt tcactccagt tgtccccaca 540 gtagacacat atgatggccg aggtgatagt gtggtttatg gactgaggtc aaaatctaag 600 aagtttcgca gacctgacat ccagtaccct gatgctacag acgaggacat cacctcacac 660 atggaaagcg aggagttgaa tggtgcatac aaggccatcc ccgttgccca ggacctgaac 720 gcgccttctg attgggacag ccgtgggaag gacagttatg aaacgagtca gctggatgac 780 cagagtgctg aaacccacag ccacaagcag tccagattat ataagcggaa agccaatgat 840 gagagcaatg agcattccga tgtgattgat agtcaggaac tttccaaagt cagccgtgaa 900 ttccacagcc atgaatttca cagccatgaa gatatgctgg ttgtagaccc caaaagtaag 960 gaagaagata aacacctgaa atttcgtatt tctcatgaat tagatagtgc atcttctgag 1020 gtcaattaaa aggagaaaaa atacaatttc tcactttgca tttagtcaaa agaaaaaatg 1080 ctttatagca aaatgaaaga gaacatgaaa tgcttctttc tcagtttatt ggttgaatgt 1140 gtatctattt gagtctggaa ataactaatg tgtttgataa ttagtttagt ttgtggcttc 1200 atggaaactc cctgtaaact aaaagcttca gggttatgtc tatgttcatt ctatagaaga 1260 aatgcaaact atcactgtat tttaatattt gttattctct catgaataga aatttatgta 1320 gaagcaaaca aaatactttt acccacttaa aaagagaata taacatttta tgtcactata 1380 atcttttgtt ttttaagtta gtgtatattt tgttgtgatt atctttttgt ggtgtgaata 1440 aatcttttat cttgaatgta ataagaattt ggtggtgtca attgcttatt tgttttccca 1500 cggttgtcca gcaattaata aaacataacc ttttttactg cctaaaaaaa aaaaaaaaaa 1560 1560 <210> 4 <211> 314 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Arg Ile Ala Val Ile Cys Phe Cys Leu Leu Gly Ile Thr Cys Ala 1 5 10 15 Ile Pro Val Lys Gln Ala Asp Ser Gly Ser Ser Glu Glu Lys Gln Leu 20 25 30 Tyr Asn Lys Tyr Pro Asp Ala Val Ala Thr Trp Leu Asn Pro Asp Pro 35 40 45 Ser Gln Lys Gln Asn Leu Leu Ala Pro Gln Asn Ala Val Ser Ser Glu 50 55 60 Glu Thr Asn Asp Phe Lys Gln Glu Thr Leu Pro Ser Lys Ser Asn Glu 65 70 75 80 Ser His Asp His Met Asp Asp Met Asp Asp Glu Asp Asp Asp Asp His 85 90 95 Val Asp Ser Gln Asp Ser Ile Asp Ser Asn Asp Ser Asp Asp Val Asp 100 105 110 Asp Thr Asp Asp Ser His Gln Ser Asp Glu Ser His His Ser Asp Glu 115 120 125 Ser Asp Glu Leu Val Thr Asp Phe Pro Thr Asp Leu Pro Ala Thr Glu 130 135 140 Val Phe Thr Pro Val Val Pro Thr Val Asp Thr Tyr Asp Gly Arg Gly 145 150 155 160 Asp Ser Val Val Tyr Gly Leu Arg Ser Lys Ser Lys Lys Phe Arg Arg 165 170 175 Pro Asp Ile Gln Tyr Pro Asp Ala Thr Asp Glu Asp Ile Thr Ser His 180 185 190 Met Glu Ser Glu Glu Leu Asn Gly Ala Tyr Lys Ala Ile Pro Val Ala 195 200 205 Gln Asp Leu Asn Ala Pro Ser Asp Trp Asp Ser Arg Gly Lys Asp Ser 210 215 220 Tyr Glu Thr Ser Gln Leu Asp Asp Gln Ser Ala Glu Thr His Ser His 225 230 235 240 Lys Gln Ser Arg Leu Tyr Lys Arg Lys Ala Asn Asp Glu Ser Asn Glu 245 250 255 His Ser Asp Val Ile Asp Ser Gln Glu Leu Ser Lys Val Ser Arg Glu 260 265 270 Phe His Ser His Glu Phe His Ser His Glu Asp Met Leu Val Val Asp 275 280 285 Pro Lys Ser Lys Glu Glu Asp Lys His Leu Lys Phe Arg Ile Ser His 290 295 300 Glu Leu Asp Ser Ala Ser Ser Glu Val Asn 305 310 <210> 5 <211> 300 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Met Arg Ile Ala Val Ile Cys Phe Cys Leu Leu Gly Ile Thr Cys Ala 1 5 10 15 Ile Pro Val Lys Gln Ala Asp Ser Gly Ser Ser Glu Glu Lys Gln Leu 20 25 30 Tyr Asn Lys Tyr Pro Asp Ala Val Ala Thr Trp Leu Asn Pro Asp Pro 35 40 45 Ser Gln Lys Gln Asn Leu Leu Ala Pro Gln Thr Leu Pro Ser Lys Ser 50 55 60 Asn Glu Ser His Asp His Met Asp Asp Met Asp Asp Glu Asp Asp Asp 65 70 75 80 Asp His Val Asp Ser Gln Asp Ser Ile Asp Ser Asn Asp Ser Asp Asp 85 90 95 Val Asp Asp Thr Asp Asp Ser His Gln Ser Asp Glu Ser His His Ser 100 105 110 Asp Glu Ser Asp Glu Leu Val Thr Asp Phe Pro Thr Asp Leu Pro Ala 115 120 125 Thr Glu Val Phe Thr Pro Val Val Pro Thr Val Asp Thr Tyr Asp Gly 130 135 140 Arg Gly Asp Ser Val Val Tyr Gly Leu Arg Ser Lys Ser Lys Lys Phe 145 150 155 160 Arg Arg Pro Asp Ile Gln Tyr Pro Asp Ala Thr Asp Glu Asp Ile Thr 165 170 175 Ser His Met Glu Ser Glu Glu Leu Asn Gly Ala Tyr Lys Ala Ile Pro 180 185 190 Val Ala Gln Asp Leu Asn Ala Pro Ser Asp Trp Asp Ser Arg Gly Lys 195 200 205 Asp Ser Tyr Glu Thr Ser Gln Leu Asp Asp Gln Ser Ala Glu Thr His 210 215 220 Ser His Lys Gln Ser Arg Leu Tyr Lys Arg Lys Ala Asn Asp Glu Ser 225 230 235 240 Asn Glu His Ser Asp Val Ile Asp Ser Gln Glu Leu Ser Lys Val Ser 245 250 255 Arg Glu Phe His Ser His Glu Phe His Ser His Glu Asp Met Leu Val 260 265 270 Val Asp Pro Lys Ser Lys Glu Glu Asp Lys His Leu Lys Phe Arg Ile 275 280 285 Ser His Glu Leu Asp Ser Ala Ser Ser Glu Val Asn 290 295 300 <210> 6 <211> 287 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Met Arg Ile Ala Val Ile Cys Phe Cys Leu Leu Gly Ile Thr Cys Ala 1 5 10 15 Ile Pro Val Lys Gln Ala Asp Ser Gly Ser Ser Glu Glu Lys Gln Asn 20 25 30 Ala Val Ser Ser Glu Glu Thr Asn Asp Phe Lys Gln Glu Thr Leu Pro 35 40 45 Ser Lys Ser Asn Glu Ser His Asp His Met Asp Asp Met Asp Asp Glu 50 55 60 Asp Asp Asp Asp His Val Asp Ser Gln Asp Ser Ile Asp Ser Asn Asp 65 70 75 80 Ser Asp Asp Val Asp Asp Thr Asp Asp Ser His Gln Ser Asp Glu Ser 85 90 95 His His Ser Asp Glu Ser Asp Glu Leu Val Thr Asp Phe Pro Thr Asp 100 105 110 Leu Pro Ala Thr Glu Val Phe Thr Pro Val Val Pro Thr Val Asp Thr 115 120 125 Tyr Asp Gly Arg Gly Asp Ser Val Val Tyr Gly Leu Arg Ser Lys Ser 130 135 140 Lys Lys Phe Arg Arg Pro Asp Ile Gln Tyr Pro Asp Ala Thr Asp Glu 145 150 155 160 Asp Ile Thr Ser His Met Glu Ser Glu Glu Leu Asn Gly Ala Tyr Lys 165 170 175 Ala Ile Pro Val Ala Gln Asp Leu Asn Ala Pro Ser Asp Trp Asp Ser 180 185 190 Arg Gly Lys Asp Ser Tyr Glu Thr Ser Gln Leu Asp Asp Gln Ser Ala 195 200 205 Glu Thr His Ser His Lys Gln Ser Arg Leu Tyr Lys Arg Lys Ala Asn 210 215 220 Asp Glu Ser Asn Glu His Ser Asp Val Ile Asp Ser Gln Glu Leu Ser 225 230 235 240 Lys Val Ser Arg Glu Phe His Ser His Glu Phe His Ser His Glu Asp 245 250 255 Met Leu Val Val Asp Pro Lys Ser Lys Glu Glu Asp Lys His Leu Lys 260 265 270 Phe Arg Ile Ser His Glu Leu Asp Ser Ala Ser Ser Glu Val Asn 275 280 285 <210> 7 <211> 5748 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 7 gagaagaaag ccagtgcgtc tctgggcgca ggggccagtg gggctcggag gcacaggcac 60 cccgcgacac tccaggttcc ccgacccacg tccctggcag ccccgattat ttacagcctc 120 agcagagcac ggggcggggg cagaggggcc cgcccgggag ggctgctact tcttaaaacc 180 tctgcgggct gcttagtcac agcccccctt gcttgggtgt gtccttcgct cgctccctcc 240 ctccgtctta ggtcactgtt ttcaacctcg aataaaaact gcagccaact tccgaggcag 300 cctcattgcc cagcggaccc cagcctctgc caggttcggt ccgccatcct cgtcccgtcc 360 tccgccggcc cctgccccgc gcccagggat cctccagctc ctttcgcccg cgccctccgt 420 tcgctccgga caccatggac aagttttggt ggcacgcagc ctggggactc tgcctcgtgc 480 cgctgagcct ggcgcagatc gatttgaata taacctgccg ctttgcaggt gtattccacg 540 tggagaaaaa tggtcgctac agcatctctc ggacggaggc cgctgacctc tgcaaggctt 600 tcaatagcac cttgcccaca atggcccaga tggagaaagc tctgagcatc ggatttgaga 660 cctgcaggta tgggttcata gaagggcacg tggtgattcc ccggatccac cccaactcca 720 tctgtgcagc aaacaacaca ggggtgtaca tcctcacatc caacacctcc cagtatgaca 780 catattgctt caatgcttca gctccacctg aagaagattg tacatcagtc acagacctgc 840 ccaatgcctt tgatggacca attaccataa ctattgttaa ccgtgatggc acccgctatg 900 tccagaaagg agaatacaga acgaatcctg aagacatcta ccccagcaac cctactgatg 960 atgacgtgag cagcggctcc tccagtgaaa ggagcagcac ttcaggaggt tacatctttt 1020 acaccttttc tactgtacac cccatcccag acgaagacag tccctggatc accgacagca 1080 cagacagaat ccctgctacc actttgatga gcactagtgc tacagcaact gagacagcaa 1140 ccaagaggca agaaacctgg gattggtttt catggttgtt tctaccatca gagtcaaaga 1200 atcatcttca cacaacaaca caaatggctg gtacgtcttc aaataccatc tcagcaggct 1260 gggagccaaa tgaagaaaat gaagatgaaa gagacagaca cctcagtttt tctggatcag 1320 gcattgatga tgatgaagat tttatctcca gcaccatttc aaccacacca cgggcttttg 1380 accacacaaa acagaaccag gactggaccc agtggaaccc aagccattca aatccggaag 1440 tgctacttca gacaaccaca aggatgactg atgtagacag aaatggcacc actgcttatg 1500 aaggaaactg gaacccagaa gcacaccctc ccctcattca ccatgagcat catgaggaag 1560 aagagacccc acattctaca agcacaatcc aggcaactcc tagtagtaca acggaagaaa 1620 cagctaccca gaaggaacag tggtttggca acagatggca tgagggatat cgccaaacac 1680 ccaaagaaga ctcccattcg acaacaggga cagctgcagc ctcagctcat accagccatc 1740 caatgcaagg aaggacaaca ccaagcccag aggacagttc ctggactgat ttcttcaacc 1800 caatctcaca ccccatggga cgaggtcatc aagcaggaag aaggatggat atggactcca 1860 gtcatagtat aacgcttcag cctactgcaa atccaaacac aggtttggtg gaagatttgg 1920 acaggacagg acctctttca atgacaacgc agcagagtaa ttctcagagc ttctctacat 1980 cacatgaagg cttggaagaa gataaagacc atccaacaac ttctactctg acatcaagca 2040 ataggaatga tgtcacaggt ggaagaagag acccaaatca ttctgaaggc tcaactactt 2100 tactggaagg ttatacctct cattacccac acacgaagga aagcaggacc ttcatcccag 2160 tgacctcagc taagactggg tcctttggag ttactgcagt tactgttgga gattccaact 2220 ctaatgtcaa tcgttcctta tcaggagacc aagacacatt ccaccccagt ggggggtccc 2280 ataccactca tggatctgaa tcagatggac actcacatgg gagtcaagaa ggtggagcaa 2340 acacaacctc tggtcctata aggacacccc aaattccaga atggctgatc atcttggcat 2400 ccctcttggc cttggctttg attcttgcag tttgcattgc agtcaacagt cgaagaaggt 2460 gtgggcagaa gaaaaagcta gtgatcaaca gtggcaatgg agctgtggag gacagaaagc 2520 caagtggact caacggagag gccagcaagt ctcaggaaat ggtgcatttg gtgaacaagg 2580 agtcgtcaga aactccagac cagtttatga cagctgatga gacaaggaac ctgcagaatg 2640 tggacatgaa gattggggtg taacacctac accattatct tggaaagaaa caaccgttgg 2700 aaacataacc attacaggga gctgggacac ttaacagatg caatgtgcta ctgattgttt 2760 cattgcgaat cttttttagc ataaaatttt ctactctttt tgttttttgt gttttgttct 2820 ttaaagtcag gtccaatttg taaaaacagc attgctttct gaaattaggg cccaattaat 2880 aatcagcaag aatttgatcg ttccagttcc cacttggagg cctttcatcc ctcgggtgtg 2940 ctatggatgg cttctaacaa aaactacaca tatgtattcc tgatcgccaa cctttccccc 3000 accagctaag gacatttccc agggttaata gggcctggtc cctgggagga aatttgaatg 3060 ggtccatttt gcccttccat agcctaatcc ctgggcattg ctttccactg aggttggggg 3120 ttggggtgta ctagttacac atcttcaaca gaccccctct agaaattttt cagatgcttc 3180 tgggagacac ccaaagggtg aagctattta tctgtagtaa actatttatc tgtgtttttg 3240 aaatattaaa ccctggatca gtcctttgat cagtataatt ttttaaagtt actttgtcag 3300 aggcacaaaa gggtttaaac tgattcataa taaatatctg tacttcttcg atcttcacct 3360 tttgtgctgt gattcttcag tttctaaacc agcactgtct gggtccctac aatgtatcag 3420 gaagagctga gaatggtaag gagactcttc taagtcttca tctcagagac cctgagttcc 3480 cactcagacc cactcagcca aatctcatgg aagaccaagg agggcagcac tgtttttgtt 3540 ttttgttttt tgtttttttt ttttgacact gtccaaaggt tttccatcct gtcctggaat 3600 cagagttgga agctgaggag cttcagcctc ttttatggtt taatggccac ctgttctctc 3660 ctgtgaaagg ctttgcaaag tcacattaag tttgcatgac ctgttatccc tggggcccta 3720 tttcatagag gctggcccta ttagtgattt ccaaaaacaa tatggaagtg ccttttgatg 3780 tcttacaata agagaagaag ccaatggaaa tgaaagagat tggcaaaggg gaaggatgat 3840 gccatgtaga tcctgtttga catttttatg gctgtatttg taaacttaaa cacaccagtg 3900 tctgttcttg atgcagttgc tatttaggat gagttaagtg cctggggagt ccctcaaaag 3960 gttaaaggga ttcccatcat tggaatctta tcaccagata ggcaagttta tgaccaaaca 4020 agagagtact ggctttatcc tctaacctca tattttctcc cacttggcaa gtcctttgtg 4080 gcatttattc atcagtcagg gtgtccgatt ggtcctagaa cttccaaagg ctgcttgtca 4140 tagaagccat tgcatctata aagcaacggc tcctgttaaa tggtatctcc tttctgaggc 4200 tcctactaaa agtcatttgt tacctaaact tatgtgctta acaggcaatg cttctcagac 4260 cacaaagcag aaagaagaag aaaagctcct gactaaatca gggctgggct tagacagagt 4320 tgatctgtag aatatcttta aaggagagat gtcaactttc tgcactattc ccagcctctg 4380 ctcctccctg tctaccctct cccctccctc tctccctcca cttcacccca caatcttgaa 4440 aaacttcctt tctcttctgt gaacatcatt ggccagatcc attttcagtg gtctggattt 4500 ctttttattt tcttttcaac ttgaaagaaa ctggacatta ggccactatg tgttgttact 4560 gccactagtg ttcaagtgcc tcttgttttc ccagagattt cctgggtctg ccagaggccc 4620 agacaggctc actcaagctc tttaactgaa aagcaacaag ccactccagg acaaggttca 4680 aaatggttac aacagcctct acctgtcgcc ccagggagaa aggggtagtg atacaagtct 4740 catagccaga gatggttttc cactccttct agatattccc aaaaagaggc tgagacagga 4800 ggttattttc aattttattt tggaattaaa tacttttttc cctttattac tgttgtagtc 4860 cctcacttgg atatacctct gttttcacga tagaaataag ggaggtctag agcttctatt 4920 ccttggccat tgtcaacgga gagctggcca agtcttcaca aacccttgca acattgcctg 4980 aagtttatgg aataagatgt attctcactc ccttgatctc aagggcgtaa ctctggaagc 5040 acagcttgac tacacgtcat ttttaccaat gattttcagg tgacctgggc taagtcattt 5100 aaactgggtc tttataaaag taaaaggcca acatttaatt attttgcaaa gcaacctaag 5160 agctaaagat gtaatttttc ttgcaattgt aaatcttttg tgtctcctga agacttccct 5220 taaaattagc tctgagtgaa aaatcaaaag agacaaaaga catcttcgaa tccatatttc 5280 aagcctggta gaattggctt ttctagcaga acctttccaa aagttttata ttgagattca 5340 taacaacacc aagaattgat tttgtagcca acattcattc aatactgtta tatcagagga 5400 gtaggagaga ggaaacattt gacttatctg gaaaagcaaa atgtacttaa gaataagaat 5460 aacatggtcc attcaccttt atgttataga tatgtctttg tgtaaatcat ttgttttgag 5520 ttttcaaaga atagcccatt gttcattctt gtgctgtaca atgaccactg ttattgttac 5580 tttgactttt cagagcacac ccttcctctg gtttttgtat atttattgat ggatcaataa 5640 taatgaggaa agcatgatat gtatattgct gagttgaaag cacttattgg aaaatattaa 5700 aaggctaaca ttaaaagact aaaggaaaca gaaaaaaaaa aaaaaaaa 5748 <210> 8 <211> 5619 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 8 gagaagaaag ccagtgcgtc tctgggcgca ggggccagtg gggctcggag gcacaggcac 60 cccgcgacac tccaggttcc ccgacccacg tccctggcag ccccgattat ttacagcctc 120 agcagagcac ggggcggggg cagaggggcc cgcccgggag ggctgctact tcttaaaacc 180 tctgcgggct gcttagtcac agcccccctt gcttgggtgt gtccttcgct cgctccctcc 240 ctccgtctta ggtcactgtt ttcaacctcg aataaaaact gcagccaact tccgaggcag 300 cctcattgcc cagcggaccc cagcctctgc caggttcggt ccgccatcct cgtcccgtcc 360 tccgccggcc cctgccccgc gcccagggat cctccagctc ctttcgcccg cgccctccgt 420 tcgctccgga caccatggac aagttttggt ggcacgcagc ctggggactc tgcctcgtgc 480 cgctgagcct ggcgcagatc gatttgaata taacctgccg ctttgcaggt gtattccacg 540 tggagaaaaa tggtcgctac agcatctctc ggacggaggc cgctgacctc tgcaaggctt 600 tcaatagcac cttgcccaca atggcccaga tggagaaagc tctgagcatc ggatttgaga 660 cctgcaggta tgggttcata gaagggcacg tggtgattcc ccggatccac cccaactcca 720 tctgtgcagc aaacaacaca ggggtgtaca tcctcacatc caacacctcc cagtatgaca 780 catattgctt caatgcttca gctccacctg aagaagattg tacatcagtc acagacctgc 840 ccaatgcctt tgatggacca attaccataa ctattgttaa ccgtgatggc acccgctatg 900 tccagaaagg agaatacaga acgaatcctg aagacatcta ccccagcaac cctactgatg 960 atgacgtgag cagcggctcc tccagtgaaa ggagcagcac ttcaggaggt tacatctttt 1020 acaccttttc tactgtacac cccatcccag acgaagacag tccctggatc accgacagca 1080 cagacagaat ccctgctacc agtacgtctt caaataccat ctcagcaggc tgggagccaa 1140 atgaagaaaa tgaagatgaa agagacagac acctcagttt ttctggatca ggcattgatg 1200 atgatgaaga ttttatctcc agcaccattt caaccacacc acgggctttt gaccacacaa 1260 aacagaacca ggactggacc cagtggaacc caagccattc aaatccggaa gtgctacttc 1320 agacaaccac aaggatgact gatgtagaca gaaatggcac cactgcttat gaaggaaact 1380 ggaacccaga agcacaccct cccctcattc accatgagca tcatgaggaa gaagagaccc 1440 cacattctac aagcacaatc caggcaactc ctagtagtac aacggaagaa acagctaccc 1500 agaaggaaca gtggtttggc aacagatggc atgagggata tcgccaaaca cccaaagaag 1560 actcccattc gacaacaggg acagctgcag cctcagctca taccagccat ccaatgcaag 1620 gaaggacaac accaagccca gaggacagtt cctggactga tttcttcaac ccaatctcac 1680 accccatggg acgaggtcat caagcaggaa gaaggatgga tatggactcc agtcatagta 1740 taacgcttca gcctactgca aatccaaaca caggtttggt ggaagatttg gacaggacag 1800 gacctctttc aatgacaacg cagcagagta attctcagag cttctctaca tcacatgaag 1860 gcttggaaga agataaagac catccaacaa cttctactct gacatcaagc aataggaatg 1920 atgtcacagg tggaagaaga gacccaaatc attctgaagg ctcaactact ttactggaag 1980 gttatacctc tcattaccca cacacgaagg aaagcaggac cttcatccca gtgacctcag 2040 ctaagactgg gtcctttgga gttactgcag ttactgttgg agattccaac tctaatgtca 2100 atcgttcctt atcaggagac caagacacat tccaccccag tggggggtcc cataccactc 2160 atggatctga atcagatgga cactcacatg ggagtcaaga aggtggagca aacacaacct 2220 ctggtcctat aaggacaccc caaattccag aatggctgat catcttggca tccctcttgg 2280 ccttggcttt gattcttgca gtttgcattg cagtcaacag tcgaagaagg tgtgggcaga 2340 agaaaaagct agtgatcaac agtggcaatg gagctgtgga ggacagaaag ccaagtggac 2400 tcaacggaga ggccagcaag tctcaggaaa tggtgcattt ggtgaacaag gagtcgtcag 2460 aaactccaga ccagtttatg acagctgatg agacaaggaa cctgcagaat gtggacatga 2520 agattggggt gtaacaccta caccattatc ttggaaagaa acaaccgttg gaaacataac 2580 cattacaggg agctgggaca cttaacagat gcaatgtgct actgattgtt tcattgcgaa 2640 tcttttttag cataaaattt tctactcttt ttgttttttg tgttttgttc tttaaagtca 2700 ggtccaattt gtaaaaacag cattgctttc tgaaattagg gcccaattaa taatcagcaa 2760 gaatttgatc gttccagttc ccacttggag gcctttcatc cctcgggtgt gctatggatg 2820 gcttctaaca aaaactacac atatgtattc ctgatcgcca acctttcccc caccagctaa 2880 ggacatttcc cagggttaat agggcctggt ccctgggagg aaatttgaat gggtccattt 2940 tgcccttcca tagcctaatc cctgggcatt gctttccact gaggttgggg gttggggtgt 3000 actagttaca catcttcaac agaccccctc tagaaatttt tcagatgctt ctgggagaca 3060 cccaaagggt gaagctattt atctgtagta aactatttat ctgtgttttt gaaatattaa 3120 accctggatc agtcctttga tcagtataat tttttaaagt tactttgtca gaggcacaaa 3180 agggtttaaa ctgattcata ataaatatct gtacttcttc gatcttcacc ttttgtgctg 3240 tgattcttca gtttctaaac cagcactgtc tgggtcccta caatgtatca ggaagagctg 3300 agaatggtaa ggagactctt ctaagtcttc atctcagaga ccctgagttc ccactcagac 3360 ccactcagcc aaatctcatg gaagaccaag gagggcagca ctgtttttgt tttttgtttt 3420 ttgttttttt tttttgacac tgtccaaagg ttttccatcc tgtcctggaa tcagagttgg 3480 aagctgagga gcttcagcct cttttatggt ttaatggcca cctgttctct cctgtgaaag 3540 gctttgcaaa gtcacattaa gtttgcatga cctgttatcc ctggggccct atttcataga 3600 ggctggccct attagtgatt tccaaaaaca atatggaagt gccttttgat gtcttacaat 3660 aagagaagaa gccaatggaa atgaaagaga ttggcaaagg ggaaggatga tgccatgtag 3720 atcctgtttg acatttttat ggctgtattt gtaaacttaa acacaccagt gtctgttctt 3780 gatgcagttg ctatttagga tgagttaagt gcctggggag tccctcaaaa ggttaaaggg 3840 attcccatca ttggaatctt atcaccagat aggcaagttt atgaccaaac aagagagtac 3900 tggctttatc ctctaacctc atattttctc ccacttggca agtcctttgt ggcatttatt 3960 catcagtcag ggtgtccgat tggtcctaga acttccaaag gctgcttgtc atagaagcca 4020 ttgcatctat aaagcaacgg ctcctgttaa atggtatctc ctttctgagg ctcctactaa 4080 aagtcatttg ttacctaaac ttatgtgctt aacaggcaat gcttctcaga ccacaaagca 4140 gaaagaagaa gaaaagctcc tgactaaatc agggctgggc ttagacagag ttgatctgta 4200 gaatatcttt aaaggagaga tgtcaacttt ctgcactatt cccagcctct gctcctccct 4260 gtctaccctc tcccctccct ctctccctcc acttcacccc acaatcttga aaaacttcct 4320 ttctcttctg tgaacatcat tggccagatc cattttcagt ggtctggatt tctttttatt 4380 ttcttttcaa cttgaaagaa actggacatt aggccactat gtgttgttac tgccactagt 4440 gttcaagtgc ctcttgtttt cccagagatt tcctgggtct gccagaggcc cagacaggct 4500 cactcaagct ctttaactga aaagcaacaa gccactccag gacaaggttc aaaatggtta 4560 caacagcctc tacctgtcgc cccagggaga aaggggtagt gatacaagtc tcatagccag 4620 agatggtttt ccactccttc tagatattcc caaaaagagg ctgagacagg aggttatttt 4680 caattttatt ttggaattaa atactttttt ccctttatta ctgttgtagt ccctcacttg 4740 gatatacctc tgttttcacg atagaaataa gggaggtcta gagcttctat tccttggcca 4800 ttgtcaacgg agagctggcc aagtcttcac aaacccttgc aacattgcct gaagtttatg 4860 gaataagatg tattctcact cccttgatct caagggcgta actctggaag cacagcttga 4920 ctacacgtca tttttaccaa tgattttcag gtgacctggg ctaagtcatt taaactgggt 4980 ctttataaaa gtaaaaggcc aacatttaat tattttgcaa agcaacctaa gagctaaaga 5040 tgtaattttt cttgcaattg taaatctttt gtgtctcctg aagacttccc ttaaaattag 5100 ctctgagtga aaaatcaaaa gagacaaaag acatcttcga atccatattt caagcctggt 5160 agaattggct tttctagcag aacctttcca aaagttttat attgagattc ataacaacac 5220 caagaattga ttttgtagcc aacattcatt caatactgtt atatcagagg agtaggagag 5280 aggaaacatt tgacttatct ggaaaagcaa aatgtactta agaataagaa taacatggtc 5340 cattcacctt tatgttatag atatgtcttt gtgtaaatca tttgttttga gttttcaaag 5400 aatagcccat tgttcattct tgtgctgtac aatgaccact gttattgtta ctttgacttt 5460 tcagagcaca cccttcctct ggtttttgta tatttattga tggatcaata ataatgagga 5520 aagcatgata tgtatattgc tgagttgaaa gcacttattg gaaaatatta aaaggctaac 5580 attaaaagac taaaggaaac agaaaaaaaa aaaaaaaaa 5619 <210> 9 <211> 5001 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 9 gagaagaaag ccagtgcgtc tctgggcgca ggggccagtg gggctcggag gcacaggcac 60 cccgcgacac tccaggttcc ccgacccacg tccctggcag ccccgattat ttacagcctc 120 agcagagcac ggggcggggg cagaggggcc cgcccgggag ggctgctact tcttaaaacc 180 tctgcgggct gcttagtcac agcccccctt gcttgggtgt gtccttcgct cgctccctcc 240 ctccgtctta ggtcactgtt ttcaacctcg aataaaaact gcagccaact tccgaggcag 300 cctcattgcc cagcggaccc cagcctctgc caggttcggt ccgccatcct cgtcccgtcc 360 tccgccggcc cctgccccgc gcccagggat cctccagctc ctttcgcccg cgccctccgt 420 tcgctccgga caccatggac aagttttggt ggcacgcagc ctggggactc tgcctcgtgc 480 cgctgagcct ggcgcagatc gatttgaata taacctgccg ctttgcaggt gtattccacg 540 tggagaaaaa tggtcgctac agcatctctc ggacggaggc cgctgacctc tgcaaggctt 600 tcaatagcac cttgcccaca atggcccaga tggagaaagc tctgagcatc ggatttgaga 660 cctgcaggta tgggttcata gaagggcacg tggtgattcc ccggatccac cccaactcca 720 tctgtgcagc aaacaacaca ggggtgtaca tcctcacatc caacacctcc cagtatgaca 780 catattgctt caatgcttca gctccacctg aagaagattg tacatcagtc acagacctgc 840 ccaatgcctt tgatggacca attaccataa ctattgttaa ccgtgatggc acccgctatg 900 tccagaaagg agaatacaga acgaatcctg aagacatcta ccccagcaac cctactgatg 960 atgacgtgag cagcggctcc tccagtgaaa ggagcagcac ttcaggaggt tacatctttt 1020 acaccttttc tactgtacac cccatcccag acgaagacag tccctggatc accgacagca 1080 cagacagaat ccctgctacc aatatggact ccagtcatag tataacgctt cagcctactg 1140 caaatccaaa cacaggtttg gtggaagatt tggacaggac aggacctctt tcaatgacaa 1200 cgcagcagag taattctcag agcttctcta catcacatga aggcttggaa gaagataaag 1260 accatccaac aacttctact ctgacatcaa gcaataggaa tgatgtcaca ggtggaagaa 1320 gagacccaaa tcattctgaa ggctcaacta ctttactgga aggttatacc tctcattacc 1380 cacacacgaa ggaaagcagg accttcatcc cagtgacctc agctaagact gggtcctttg 1440 gagttactgc agttactgtt ggagattcca actctaatgt caatcgttcc ttatcaggag 1500 accaagacac attccacccc agtggggggt cccataccac tcatggatct gaatcagatg 1560 gacactcaca tgggagtcaa gaaggtggag caaacacaac ctctggtcct ataaggacac 1620 cccaaattcc agaatggctg atcatcttgg catccctctt ggccttggct ttgattcttg 1680 cagtttgcat tgcagtcaac agtcgaagaa ggtgtgggca gaagaaaaag ctagtgatca 1740 acagtggcaa tggagctgtg gaggacagaa agccaagtgg actcaacgga gaggccagca 1800 agtctcagga aatggtgcat ttggtgaaca aggagtcgtc agaaactcca gaccagttta 1860 tgacagctga tgagacaagg aacctgcaga atgtggacat gaagattggg gtgtaacacc 1920 tacaccatta tcttggaaag aaacaaccgt tggaaacata accattacag ggagctggga 1980 cacttaacag atgcaatgtg ctactgattg tttcattgcg aatctttttt agcataaaat 2040 tttctactct ttttgttttt tgtgttttgt tctttaaagt caggtccaat ttgtaaaaac 2100 agcattgctt tctgaaatta gggcccaatt aataatcagc aagaatttga tcgttccagt 2160 tcccacttgg aggcctttca tccctcgggt gtgctatgga tggcttctaa caaaaactac 2220 acatatgtat tcctgatcgc caacctttcc cccaccagct aaggacattt cccagggtta 2280 atagggcctg gtccctggga ggaaatttga atgggtccat tttgcccttc catagcctaa 2340 tccctgggca ttgctttcca ctgaggttgg gggttggggt gtactagtta cacatcttca 2400 acagaccccc tctagaaatt tttcagatgc ttctgggaga cacccaaagg gtgaagctat 2460 ttatctgtag taaactattt atctgtgttt ttgaaatatt aaaccctgga tcagtccttt 2520 gatcagtata attttttaaa gttactttgt cagaggcaca aaagggttta aactgattca 2580 taataaatat ctgtacttct tcgatcttca ccttttgtgc tgtgattctt cagtttctaa 2640 accagcactg tctgggtccc tacaatgtat caggaagagc tgagaatggt aaggagactc 2700 ttctaagtct tcatctcaga gaccctgagt tcccactcag acccactcag ccaaatctca 2760 tggaagacca aggagggcag cactgttttt gttttttgtt ttttgttttt tttttttgac 2820 actgtccaaa ggttttccat cctgtcctgg aatcagagtt ggaagctgag gagcttcagc 2880 ctcttttatg gtttaatggc cacctgttct ctcctgtgaa aggctttgca aagtcacatt 2940 aagtttgcat gacctgttat ccctggggcc ctatttcata gaggctggcc ctattagtga 3000 tttccaaaaa caatatggaa gtgccttttg atgtcttaca ataagagaag aagccaatgg 3060 aaatgaaaga gattggcaaa ggggaaggat gatgccatgt agatcctgtt tgacattttt 3120 atggctgtat ttgtaaactt aaacacacca gtgtctgttc ttgatgcagt tgctatttag 3180 gatgagttaa gtgcctgggg agtccctcaa aaggttaaag ggattcccat cattggaatc 3240 ttatcaccag ataggcaagt ttatgaccaa acaagagagt actggcttta tcctctaacc 3300 tcatattttc tcccacttgg caagtccttt gtggcattta ttcatcagtc agggtgtccg 3360 attggtccta gaacttccaa aggctgcttg tcatagaagc cattgcatct ataaagcaac 3420 ggctcctgtt aaatggtatc tcctttctga ggctcctact aaaagtcatt tgttacctaa 3480 acttatgtgc ttaacaggca atgcttctca gaccacaaag cagaaagaag aagaaaagct 3540 cctgactaaa tcagggctgg gcttagacag agttgatctg tagaatatct ttaaaggaga 3600 gatgtcaact ttctgcacta ttcccagcct ctgctcctcc ctgtctaccc tctcccctcc 3660 ctctctccct ccacttcacc ccacaatctt gaaaaacttc ctttctcttc tgtgaacatc 3720 attggccaga tccattttca gtggtctgga tttcttttta ttttcttttc aacttgaaag 3780 aaactggaca ttaggccact atgtgttgtt actgccacta gtgttcaagt gcctcttgtt 3840 ttcccagaga tttcctgggt ctgccagagg cccagacagg ctcactcaag ctctttaact 3900 gaaaagcaac aagccactcc aggacaaggt tcaaaatggt tacaacagcc tctacctgtc 3960 gccccaggga gaaaggggta gtgatacaag tctcatagcc agagatggtt ttccactcct 4020 tctagatatt cccaaaaaga ggctgagaca ggaggttatt ttcaatttta ttttggaatt 4080 aaatactttt ttccctttat tactgttgta gtccctcact tggatatacc tctgttttca 4140 cgatagaaat aagggaggtc tagagcttct attccttggc cattgtcaac ggagagctgg 4200 ccaagtcttc acaaaccctt gcaacattgc ctgaagttta tggaataaga tgtattctca 4260 ctcccttgat ctcaagggcg taactctgga agcacagctt gactacacgt catttttacc 4320 aatgattttc aggtgacctg ggctaagtca tttaaactgg gtctttataa aagtaaaagg 4380 ccaacattta attattttgc aaagcaacct aagagctaaa gatgtaattt ttcttgcaat 4440 tgtaaatctt ttgtgtctcc tgaagacttc ccttaaaatt agctctgagt gaaaaatcaa 4500 aagagacaaa agacatcttc gaatccatat ttcaagcctg gtagaattgg cttttctagc 4560 agaacctttc caaaagtttt atattgagat tcataacaac accaagaatt gattttgtag 4620 ccaacattca ttcaatactg ttatatcaga ggagtaggag agaggaaaca tttgacttat 4680 ctggaaaagc aaaatgtact taagaataag aataacatgg tccattcacc tttatgttat 4740 agatatgtct ttgtgtaaat catttgtttt gagttttcaa agaatagccc attgttcatt 4800 cttgtgctgt acaatgacca ctgttattgt tactttgact tttcagagca cacccttcct 4860 ctggtttttg tatatttatt gatggatcaa taataatgag gaaagcatga tatgtatatt 4920 gctgagttga aagcacttat tggaaaatat taaaaggcta acattaaaag actaaaggaa 4980 acagaaaaaa aaaaaaaaaa a 5001 <210> 10 <211> 4605 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 10 gagaagaaag ccagtgcgtc tctgggcgca ggggccagtg gggctcggag gcacaggcac 60 cccgcgacac tccaggttcc ccgacccacg tccctggcag ccccgattat ttacagcctc 120 agcagagcac ggggcggggg cagaggggcc cgcccgggag ggctgctact tcttaaaacc 180 tctgcgggct gcttagtcac agcccccctt gcttgggtgt gtccttcgct cgctccctcc 240 ctccgtctta ggtcactgtt ttcaacctcg aataaaaact gcagccaact tccgaggcag 300 cctcattgcc cagcggaccc cagcctctgc caggttcggt ccgccatcct cgtcccgtcc 360 tccgccggcc cctgccccgc gcccagggat cctccagctc ctttcgcccg cgccctccgt 420 tcgctccgga caccatggac aagttttggt ggcacgcagc ctggggactc tgcctcgtgc 480 cgctgagcct ggcgcagatc gatttgaata taacctgccg ctttgcaggt gtattccacg 540 tggagaaaaa tggtcgctac agcatctctc ggacggaggc cgctgacctc tgcaaggctt 600 tcaatagcac cttgcccaca atggcccaga tggagaaagc tctgagcatc ggatttgaga 660 cctgcaggta tgggttcata gaagggcacg tggtgattcc ccggatccac cccaactcca 720 tctgtgcagc aaacaacaca ggggtgtaca tcctcacatc caacacctcc cagtatgaca 780 catattgctt caatgcttca gctccacctg aagaagattg tacatcagtc acagacctgc 840 ccaatgcctt tgatggacca attaccataa ctattgttaa ccgtgatggc acccgctatg 900 tccagaaagg agaatacaga acgaatcctg aagacatcta ccccagcaac cctactgatg 960 atgacgtgag cagcggctcc tccagtgaaa ggagcagcac ttcaggaggt tacatctttt 1020 acaccttttc tactgtacac cccatcccag acgaagacag tccctggatc accgacagca 1080 cagacagaat ccctgctacc agagaccaag acacattcca ccccagtggg gggtcccata 1140 ccactcatgg atctgaatca gatggacact cacatgggag tcaagaaggt ggagcaaaca 1200 caacctctgg tcctataagg acaccccaaa ttccagaatg gctgatcatc ttggcatccc 1260 tcttggcctt ggctttgatt cttgcagttt gcattgcagt caacagtcga agaaggtgtg 1320 ggcagaagaa aaagctagtg atcaacagtg gcaatggagc tgtggaggac agaaagccaa 1380 gtggactcaa cggagaggcc agcaagtctc aggaaatggt gcatttggtg aacaaggagt 1440 cgtcagaaac tccagaccag tttatgacag ctgatgagac aaggaacctg cagaatgtgg 1500 acatgaagat tggggtgtaa cacctacacc attatcttgg aaagaaacaa ccgttggaaa 1560 cataaccatt acagggagct gggacactta acagatgcaa tgtgctactg attgtttcat 1620 tgcgaatctt ttttagcata aaattttcta ctctttttgt tttttgtgtt ttgttcttta 1680 aagtcaggtc caatttgtaa aaacagcatt gctttctgaa attagggccc aattaataat 1740 cagcaagaat ttgatcgttc cagttcccac ttggaggcct ttcatccctc gggtgtgcta 1800 tggatggctt ctaacaaaaa ctacacatat gtattcctga tcgccaacct ttcccccacc 1860 agctaaggac atttcccagg gttaataggg cctggtccct gggaggaaat ttgaatgggt 1920 ccattttgcc cttccatagc ctaatccctg ggcattgctt tccactgagg ttgggggttg 1980 gggtgtacta gttacacatc ttcaacagac cccctctaga aatttttcag atgcttctgg 2040 gagacaccca aagggtgaag ctatttatct gtagtaaact atttatctgt gtttttgaaa 2100 tattaaaccc tggatcagtc ctttgatcag tataattttt taaagttact ttgtcagagg 2160 cacaaaaggg tttaaactga ttcataataa atatctgtac ttcttcgatc ttcacctttt 2220 gtgctgtgat tcttcagttt ctaaaccagc actgtctggg tccctacaat gtatcaggaa 2280 gagctgagaa tggtaaggag actcttctaa gtcttcatct cagagaccct gagttcccac 2340 tcagacccac tcagccaaat ctcatggaag accaaggagg gcagcactgt ttttgttttt 2400 tgttttttgt tttttttttt tgacactgtc caaaggtttt ccatcctgtc ctggaatcag 2460 agttggaagc tgaggagctt cagcctcttt tatggtttaa tggccacctg ttctctcctg 2520 tgaaaggctt tgcaaagtca cattaagttt gcatgacctg ttatccctgg ggccctattt 2580 catagaggct ggccctatta gtgatttcca aaaacaatat ggaagtgcct tttgatgtct 2640 tacaataaga gaagaagcca atggaaatga aagagattgg caaaggggaa ggatgatgcc 2700 atgtagatcc tgtttgacat ttttatggct gtatttgtaa acttaaacac accagtgtct 2760 gttcttgatg cagttgctat ttaggatgag ttaagtgcct ggggagtccc tcaaaaggtt 2820 aaagggattc ccatcattgg aatcttatca ccagataggc aagtttatga ccaaacaaga 2880 gagtactggc tttatcctct aacctcatat tttctcccac ttggcaagtc ctttgtggca 2940 tttattcatc agtcagggtg tccgattggt cctagaactt ccaaaggctg cttgtcatag 3000 aagccattgc atctataaag caacggctcc tgttaaatgg tatctccttt ctgaggctcc 3060 tactaaaagt catttgttac ctaaacttat gtgcttaaca ggcaatgctt ctcagaccac 3120 aaagcagaaa gaagaagaaa agctcctgac taaatcaggg ctgggcttag acagagttga 3180 tctgtagaat atctttaaag gagagatgtc aactttctgc actattccca gcctctgctc 3240 ctccctgtct accctctccc ctccctctct ccctccactt caccccacaa tcttgaaaaa 3300 cttcctttct cttctgtgaa catcattggc cagatccatt ttcagtggtc tggatttctt 3360 tttattttct tttcaacttg aaagaaactg gacattaggc cactatgtgt tgttactgcc 3420 actagtgttc aagtgcctct tgttttccca gagatttcct gggtctgcca gaggcccaga 3480 caggctcact caagctcttt aactgaaaag caacaagcca ctccaggaca aggttcaaaa 3540 tggttacaac agcctctacc tgtcgcccca gggagaaagg ggtagtgata caagtctcat 3600 agccagagat ggttttccac tccttctaga tattcccaaa aagaggctga gacaggaggt 3660 tattttcaat tttattttgg aattaaatac ttttttccct ttattactgt tgtagtccct 3720 cacttggata tacctctgtt ttcacgatag aaataaggga ggtctagagc ttctattcct 3780 tggccattgt caacggagag ctggccaagt cttcacaaac ccttgcaaca ttgcctgaag 3840 tttatggaat aagatgtatt ctcactccct tgatctcaag ggcgtaactc tggaagcaca 3900 gcttgactac acgtcatttt taccaatgat tttcaggtga cctgggctaa gtcatttaaa 3960 ctgggtcttt ataaaagtaa aaggccaaca tttaattatt ttgcaaagca acctaagagc 4020 taaagatgta atttttcttg caattgtaaa tcttttgtgt ctcctgaaga cttcccttaa 4080 aattagctct gagtgaaaaa tcaaaagaga caaaagacat cttcgaatcc atatttcaag 4140 cctggtagaa ttggcttttc tagcagaacc tttccaaaag ttttatattg agattcataa 4200 caacaccaag aattgatttt gtagccaaca ttcattcaat actgttatat cagaggagta 4260 ggagagagga aacatttgac ttatctggaa aagcaaaatg tacttaagaa taagaataac 4320 atggtccatt cacctttatg ttatagatat gtctttgtgt aaatcatttg ttttgagttt 4380 tcaaagaata gcccattgtt cattcttgtg ctgtacaatg accactgtta ttgttacttt 4440 gacttttcag agcacaccct tcctctggtt tttgtatatt tattgatgga tcaataataa 4500 tgaggaaagc atgatatgta tattgctgag ttgaaagcac ttattggaaa atattaaaag 4560 gctaacatta aaagactaaa ggaaacagaa aaaaaaaaaa aaaaa 4605 <210> 11 <211> 3985 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 11 gagaagaaag ccagtgcgtc tctgggcgca ggggccagtg gggctcggag gcacaggcac 60 cccgcgacac tccaggttcc ccgacccacg tccctggcag ccccgattat ttacagcctc 120 agcagagcac ggggcggggg cagaggggcc cgcccgggag ggctgctact tcttaaaacc 180 tctgcgggct gcttagtcac agcccccctt gcttgggtgt gtccttcgct cgctccctcc 240 ctccgtctta ggtcactgtt ttcaacctcg aataaaaact gcagccaact tccgaggcag 300 cctcattgcc cagcggaccc cagcctctgc caggttcggt ccgccatcct cgtcccgtcc 360 tccgccggcc cctgccccgc gcccagggat cctccagctc ctttcgcccg cgccctccgt 420 tcgctccgga caccatggac aagttttggt ggcacgcagc ctggggactc tgcctcgtgc 480 cgctgagcct ggcgcagatc gatttgaata taacctgccg ctttgcaggt gtattccacg 540 tggagaaaaa tggtcgctac agcatctctc ggacggaggc cgctgacctc tgcaaggctt 600 tcaatagcac cttgcccaca atggcccaga tggagaaagc tctgagcatc ggatttgaga 660 cctgcagttt gcattgcagt caacagtcga agaaggtgtg ggcagaagaa aaagctagtg 720 atcaacagtg gcaatggagc tgtggaggac agaaagccaa gtggactcaa cggagaggcc 780 agcaagtctc aggaaatggt gcatttggtg aacaaggagt cgtcagaaac tccagaccag 840 tttatgacag ctgatgagac aaggaacctg cagaatgtgg acatgaagat tggggtgtaa 900 cacctacacc attatcttgg aaagaaacaa ccgttggaaa cataaccatt acagggagct 960 gggacactta acagatgcaa tgtgctactg attgtttcat tgcgaatctt ttttagcata 1020 aaattttcta ctctttttgt tttttgtgtt ttgttcttta aagtcaggtc caatttgtaa 1080 aaacagcatt gctttctgaa attagggccc aattaataat cagcaagaat ttgatcgttc 1140 cagttcccac ttggaggcct ttcatccctc gggtgtgcta tggatggctt ctaacaaaaa 1200 ctacacatat gtattcctga tcgccaacct ttcccccacc agctaaggac atttcccagg 1260 gttaataggg cctggtccct gggaggaaat ttgaatgggt ccattttgcc cttccatagc 1320 ctaatccctg ggcattgctt tccactgagg ttgggggttg gggtgtacta gttacacatc 1380 ttcaacagac cccctctaga aatttttcag atgcttctgg gagacaccca aagggtgaag 1440 ctatttatct gtagtaaact atttatctgt gtttttgaaa tattaaaccc tggatcagtc 1500 ctttgatcag tataattttt taaagttact ttgtcagagg cacaaaaggg tttaaactga 1560 ttcataataa atatctgtac ttcttcgatc ttcacctttt gtgctgtgat tcttcagttt 1620 ctaaaccagc actgtctggg tccctacaat gtatcaggaa gagctgagaa tggtaaggag 1680 actcttctaa gtcttcatct cagagaccct gagttcccac tcagacccac tcagccaaat 1740 ctcatggaag accaaggagg gcagcactgt ttttgttttt tgttttttgt tttttttttt 1800 tgacactgtc caaaggtttt ccatcctgtc ctggaatcag agttggaagc tgaggagctt 1860 cagcctcttt tatggtttaa tggccacctg ttctctcctg tgaaaggctt tgcaaagtca 1920 cattaagttt gcatgacctg ttatccctgg ggccctattt catagaggct ggccctatta 1980 gtgatttcca aaaacaatat ggaagtgcct tttgatgtct tacaataaga gaagaagcca 2040 atggaaatga aagagattgg caaaggggaa ggatgatgcc atgtagatcc tgtttgacat 2100 ttttatggct gtatttgtaa acttaaacac accagtgtct gttcttgatg cagttgctat 2160 ttaggatgag ttaagtgcct ggggagtccc tcaaaaggtt aaagggattc ccatcattgg 2220 aatcttatca ccagataggc aagtttatga ccaaacaaga gagtactggc tttatcctct 2280 aacctcatat tttctcccac ttggcaagtc ctttgtggca tttattcatc agtcagggtg 2340 tccgattggt cctagaactt ccaaaggctg cttgtcatag aagccattgc atctataaag 2400 caacggctcc tgttaaatgg tatctccttt ctgaggctcc tactaaaagt catttgttac 2460 ctaaacttat gtgcttaaca ggcaatgctt ctcagaccac aaagcagaaa gaagaagaaa 2520 agctcctgac taaatcaggg ctgggcttag acagagttga tctgtagaat atctttaaag 2580 gagagatgtc aactttctgc actattccca gcctctgctc ctccctgtct accctctccc 2640 ctccctctct ccctccactt caccccacaa tcttgaaaaa cttcctttct cttctgtgaa 2700 catcattggc cagatccatt ttcagtggtc tggatttctt tttattttct tttcaacttg 2760 aaagaaactg gacattaggc cactatgtgt tgttactgcc actagtgttc aagtgcctct 2820 tgttttccca gagatttcct gggtctgcca gaggcccaga caggctcact caagctcttt 2880 aactgaaaag caacaagcca ctccaggaca aggttcaaaa tggttacaac agcctctacc 2940 tgtcgcccca gggagaaagg ggtagtgata caagtctcat agccagagat ggttttccac 3000 tccttctaga tattcccaaa aagaggctga gacaggaggt tattttcaat tttattttgg 3060 aattaaatac ttttttccct ttattactgt tgtagtccct cacttggata tacctctgtt 3120 ttcacgatag aaataaggga ggtctagagc ttctattcct tggccattgt caacggagag 3180 ctggccaagt cttcacaaac ccttgcaaca ttgcctgaag tttatggaat aagatgtatt 3240 ctcactccct tgatctcaag ggcgtaactc tggaagcaca gcttgactac acgtcatttt 3300 taccaatgat tttcaggtga cctgggctaa gtcatttaaa ctgggtcttt ataaaagtaa 3360 aaggccaaca tttaattatt ttgcaaagca acctaagagc taaagatgta atttttcttg 3420 caattgtaaa tcttttgtgt ctcctgaaga cttcccttaa aattagctct gagtgaaaaa 3480 tcaaaagaga caaaagacat cttcgaatcc atatttcaag cctggtagaa ttggcttttc 3540 tagcagaacc tttccaaaag ttttatattg agattcataa caacaccaag aattgatttt 3600 gtagccaaca ttcattcaat actgttatat cagaggagta ggagagagga aacatttgac 3660 ttatctggaa aagcaaaatg tacttaagaa taagaataac atggtccatt cacctttatg 3720 ttatagatat gtctttgtgt aaatcatttg ttttgagttt tcaaagaata gcccattgtt 3780 cattcttgtg ctgtacaatg accactgtta ttgttacttt gacttttcag agcacaccct 3840 tcctctggtt tttgtatatt tattgatgga tcaataataa tgaggaaagc atgatatgta 3900 tattgctgag ttgaaagcac ttattggaaa atattaaaag gctaacatta aaagactaaa 3960 ggaaacagaa aaaaaaaaaa aaaaa 3985 <210> 12 <211> 1014 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 12 gtacgtcttc aaataccatc tcagcaggct gggagccaaa tgaagaaaat gaagatgaaa 60 gagacagaca cctcagtttt tctggatcag gcattgatga tgatgaagat tttatctcca 120 gcaccatttc aaccacacca cgggcctttg accacacaaa acagaaccag gactggaccc 180 agtggaaccc aagccattca aatccggaag tgctacttca gacaaccaca aggatgactg 240 atgtagacag aaatggcacc actgcttatg aaggaaactg gaacccagaa gcacaccctc 300 ccctcattca ccatgagcat catgaggaag aagagacccc acattctaca agcacaatcc 360 aggcaactcc tagtagtaca acggaagaaa cagctaccca gaaggaacag tggtttggca 420 acagatggca tgagggatat cgccaaacac ccagagaaga ctcccattcg acaacaggga 480 cagctgcagc ctcagctcat accagccatc caatgcaagg aaggacaaca ccaagcccag 540 aggacagttc ctggactgat ttcttcaacc caatctcaca ccccatggga cgaggtcatc 600 aagcaggaag aaggatggat atggactcca gtcatagtac aacgcttcag cctactgcaa 660 atccaaacac aggtttggtg gaagatttgg acaggacagg acctctttca atgacaacgc 720 agcagagtaa ttctcagagc ttctctacat cacatgaagg cttggaagaa gataaagacc 780 atccaacaac ttctactctg acatcaagca ataggaatga tgtcacaggt ggaagaagag 840 acccaaatca ttctgaaggc tcaactactt tactggaagg ttatacctct cattacccac 900 acacgaagga aagcaggacc ttcatcccag tgacctcagc taagactggg tcctttggag 960 ttactgcagt tactgttgga gattccaact ctaatgtcaa tcgttcctta tcag 1014 <210> 13 <211> 742 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Met Asp Lys Phe Trp Trp His Ala Ala Trp Gly Leu Cys Leu Val Pro 1 5 10 15 Leu Ser Leu Ala Gln Ile Asp Leu Asn Ile Thr Cys Arg Phe Ala Gly 20 25 30 Val Phe His Val Glu Lys Asn Gly Arg Tyr Ser Ile Ser Arg Thr Glu 35 40 45 Ala Ala Asp Leu Cys Lys Ala Phe Asn Ser Thr Leu Pro Thr Met Ala 50 55 60 Gln Met Glu Lys Ala Leu Ser Ile Gly Phe Glu Thr Cys Arg Tyr Gly 65 70 75 80 Phe Ile Glu Gly His Val Val Ile Pro Arg Ile His Pro Asn Ser Ile 85 90 95 Cys Ala Ala Asn Asn Thr Gly Val Tyr Ile Leu Thr Ser Asn Thr Ser 100 105 110 Gln Tyr Asp Thr Tyr Cys Phe Asn Ala Ser Ala Pro Pro Glu Glu Asp 115 120 125 Cys Thr Ser Val Thr Asp Leu Pro Asn Ala Phe Asp Gly Pro Ile Thr 130 135 140 Ile Thr Ile Val Asn Arg Asp Gly Thr Arg Tyr Val Gln Lys Gly Glu 145 150 155 160 Tyr Arg Thr Asn Pro Glu Asp Ile Tyr Pro Ser Asn Pro Thr Asp Asp 165 170 175 Asp Val Ser Ser Gly Ser Ser Ser Glu Arg Ser Ser Thr Ser Gly Gly 180 185 190 Tyr Ile Phe Tyr Thr Phe Ser Thr Val His Pro Ile Pro Asp Glu Asp 195 200 205 Ser Pro Trp Ile Thr Asp Ser Thr Asp Arg Ile Pro Ala Thr Thr Leu 210 215 220 Met Ser Thr Ser Ala Thr Ala Thr Glu Thr Ala Thr Lys Arg Gln Glu 225 230 235 240 Thr Trp Asp Trp Phe Ser Trp Leu Phe Leu Pro Ser Glu Ser Lys Asn 245 250 255 His Leu His Thr Thr Thr Gln Met Ala Gly Thr Ser Ser Asn Thr Ile 260 265 270 Ser Ala Gly Trp Glu Pro Asn Glu Glu Asn Glu Asp Glu Arg Asp Arg 275 280 285 His Leu Ser Phe Ser Gly Ser Gly Ile Asp Asp Asp Glu Asp Phe Ile 290 295 300 Ser Ser Thr Ile Ser Thr Thr Pro Arg Ala Phe Asp His Thr Lys Gln 305 310 315 320 Asn Gln Asp Trp Thr Gln Trp Asn Pro Ser His Ser Asn Pro Glu Val 325 330 335 Leu Leu Gln Thr Thr Thr Arg Met Thr Asp Val Asp Arg Asn Gly Thr 340 345 350 Thr Ala Tyr Glu Gly Asn Trp Asn Pro Glu Ala His Pro Pro Leu Ile 355 360 365 His His Glu His His Glu Glu Glu Glu Thr Pro His Ser Thr Ser Thr 370 375 380 Ile Gln Ala Thr Pro Ser Ser Thr Thr Glu Glu Thr Ala Thr Gln Lys 385 390 395 400 Glu Gln Trp Phe Gly Asn Arg Trp His Glu Gly Tyr Arg Gln Thr Pro 405 410 415 Lys Glu Asp Ser His Ser Thr Thr Gly Thr Ala Ala Ala Ser Ala His 420 425 430 Thr Ser His Pro Met Gln Gly Arg Thr Thr Pro Ser Pro Glu Asp Ser 435 440 445 Ser Trp Thr Asp Phe Phe Asn Pro Ile Ser His Pro Met Gly Arg Gly 450 455 460 His Gln Ala Gly Arg Arg Met Asp Met Asp Ser Ser His Ser Ile Thr 465 470 475 480 Leu Gln Pro Thr Ala Asn Pro Asn Thr Gly Leu Val Glu Asp Leu Asp 485 490 495 Arg Thr Gly Pro Leu Ser Met Thr Thr Gln Gln Ser Asn Ser Gln Ser 500 505 510 Phe Ser Thr Ser His Glu Gly Leu Glu Glu Asp Lys Asp His Pro Thr 515 520 525 Thr Ser Thr Leu Thr Ser Ser Asn Arg Asn Asp Val Thr Gly Gly Arg 530 535 540 Arg Asp Pro Asn His Ser Glu Gly Ser Thr Thr Leu Leu Glu Gly Tyr 545 550 555 560 Thr Ser His Tyr Pro His Thr Lys Glu Ser Arg Thr Phe Ile Pro Val 565 570 575 Thr Ser Ala Lys Thr Gly Ser Phe Gly Val Thr Ala Val Thr Val Gly 580 585 590 Asp Ser Asn Ser Asn Val Asn Arg Ser Leu Ser Gly Asp Gln Asp Thr 595 600 605 Phe His Pro Ser Gly Gly Ser His Thr Thr His Gly Ser Glu Ser Asp 610 615 620 Gly His Ser His Gly Ser Gln Glu Gly Gly Ala Asn Thr Thr Ser Gly 625 630 635 640 Pro Ile Arg Thr Pro Gln Ile Pro Glu Trp Leu Ile Ile Leu Ala Ser 645 650 655 Leu Leu Ala Leu Ala Leu Ile Leu Ala Val Cys Ile Ala Val Asn Ser 660 665 670 Arg Arg Arg Cys Gly Gln Lys Lys Lys Leu Val Ile Asn Ser Gly Asn 675 680 685 Gly Ala Val Glu Asp Arg Lys Pro Ser Gly Leu Asn Gly Glu Ala Ser 690 695 700 Lys Ser Gln Glu Met Val His Leu Val Asn Lys Glu Ser Ser Glu Thr 705 710 715 720 Pro Asp Gln Phe Met Thr Ala Asp Glu Thr Arg Asn Leu Gln Asn Val 725 730 735 Asp Met Lys Ile Gly Val 740 <210> 14 <211> 699 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Met Asp Lys Phe Trp Trp His Ala Ala Trp Gly Leu Cys Leu Val Pro 1 5 10 15 Leu Ser Leu Ala Gln Ile Asp Leu Asn Ile Thr Cys Arg Phe Ala Gly 20 25 30 Val Phe His Val Glu Lys Asn Gly Arg Tyr Ser Ile Ser Arg Thr Glu 35 40 45 Ala Ala Asp Leu Cys Lys Ala Phe Asn Ser Thr Leu Pro Thr Met Ala 50 55 60 Gln Met Glu Lys Ala Leu Ser Ile Gly Phe Glu Thr Cys Arg Tyr Gly 65 70 75 80 Phe Ile Glu Gly His Val Val Ile Pro Arg Ile His Pro Asn Ser Ile 85 90 95 Cys Ala Ala Asn Asn Thr Gly Val Tyr Ile Leu Thr Ser Asn Thr Ser 100 105 110 Gln Tyr Asp Thr Tyr Cys Phe Asn Ala Ser Ala Pro Pro Glu Glu Asp 115 120 125 Cys Thr Ser Val Thr Asp Leu Pro Asn Ala Phe Asp Gly Pro Ile Thr 130 135 140 Ile Thr Ile Val Asn Arg Asp Gly Thr Arg Tyr Val Gln Lys Gly Glu 145 150 155 160 Tyr Arg Thr Asn Pro Glu Asp Ile Tyr Pro Ser Asn Pro Thr Asp Asp 165 170 175 Asp Val Ser Ser Gly Ser Ser Ser Glu Arg Ser Ser Thr Ser Gly Gly 180 185 190 Tyr Ile Phe Tyr Thr Phe Ser Thr Val His Pro Ile Pro Asp Glu Asp 195 200 205 Ser Pro Trp Ile Thr Asp Ser Thr Asp Arg Ile Pro Ala Thr Ser Thr 210 215 220 Ser Ser Asn Thr Ile Ser Ala Gly Trp Glu Pro Asn Glu Glu Asn Glu 225 230 235 240 Asp Glu Arg Asp Arg His Leu Ser Phe Ser Gly Ser Gly Ile Asp Asp 245 250 255 Asp Glu Asp Phe Ile Ser Ser Thr Ile Ser Thr Thr Pro Arg Ala Phe 260 265 270 Asp His Thr Lys Gln Asn Gln Asp Trp Thr Gln Trp Asn Pro Ser His 275 280 285 Ser Asn Pro Glu Val Leu Leu Gln Thr Thr Thr Arg Met Thr Asp Val 290 295 300 Asp Arg Asn Gly Thr Thr Ala Tyr Glu Gly Asn Trp Asn Pro Glu Ala 305 310 315 320 His Pro Pro Leu Ile His His Glu His His Glu Glu Glu Glu Thr Pro 325 330 335 His Ser Thr Ser Thr Ile Gln Ala Thr Pro Ser Ser Thr Thr Glu Glu 340 345 350 Thr Ala Thr Gln Lys Glu Gln Trp Phe Gly Asn Arg Trp His Glu Gly 355 360 365 Tyr Arg Gln Thr Pro Lys Glu Asp Ser His Ser Thr Thr Gly Thr Ala 370 375 380 Ala Ala Ser Ala His Thr Ser His Pro Met Gln Gly Arg Thr Thr Pro 385 390 395 400 Ser Pro Glu Asp Ser Ser Trp Thr Asp Phe Phe Asn Pro Ile Ser His 405 410 415 Pro Met Gly Arg Gly His Gln Ala Gly Arg Arg Met Asp Met Asp Ser 420 425 430 Ser His Ser Ile Thr Leu Gln Pro Thr Ala Asn Pro Asn Thr Gly Leu 435 440 445 Val Glu Asp Leu Asp Arg Thr Gly Pro Leu Ser Met Thr Thr Gln Gln 450 455 460 Ser Asn Ser Gln Ser Phe Ser Thr Ser His Glu Gly Leu Glu Glu Asp 465 470 475 480 Lys Asp His Pro Thr Thr Ser Thr Leu Thr Ser Ser Asn Arg Asn Asp 485 490 495 Val Thr Gly Gly Arg Arg Asp Pro Asn His Ser Glu Gly Ser Thr Thr 500 505 510 Leu Leu Glu Gly Tyr Thr Ser His Tyr Pro His Thr Lys Glu Ser Arg 515 520 525 Thr Phe Ile Pro Val Thr Ser Ala Lys Thr Gly Ser Phe Gly Val Thr 530 535 540 Ala Val Thr Val Gly Asp Ser Asn Ser Asn Val Asn Arg Ser Leu Ser 545 550 555 560 Gly Asp Gln Asp Thr Phe His Pro Ser Gly Gly Ser His Thr Thr His 565 570 575 Gly Ser Glu Ser Asp Gly His Ser His Gly Ser Gln Glu Gly Gly Ala 580 585 590 Asn Thr Thr Ser Gly Pro Ile Arg Thr Pro Gln Ile Pro Glu Trp Leu 595 600 605 Ile Ile Leu Ala Ser Leu Leu Ala Leu Ala Leu Ile Leu Ala Val Cys 610 615 620 Ile Ala Val Asn Ser Arg Arg Arg Cys Gly Gln Lys Lys Lys Leu Val 625 630 635 640 Ile Asn Ser Gly Asn Gly Ala Val Glu Asp Arg Lys Pro Ser Gly Leu 645 650 655 Asn Gly Glu Ala Ser Lys Ser Gln Glu Met Val His Leu Val Asn Lys 660 665 670 Glu Ser Ser Glu Thr Pro Asp Gln Phe Met Thr Ala Asp Glu Thr Arg 675 680 685 Asn Leu Gln Asn Val Asp Met Lys Ile Gly Val 690 695 <210> 15 <211> 493 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Met Asp Lys Phe Trp Trp His Ala Ala Trp Gly Leu Cys Leu Val Pro 1 5 10 15 Leu Ser Leu Ala Gln Ile Asp Leu Asn Ile Thr Cys Arg Phe Ala Gly 20 25 30 Val Phe His Val Glu Lys Asn Gly Arg Tyr Ser Ile Ser Arg Thr Glu 35 40 45 Ala Ala Asp Leu Cys Lys Ala Phe Asn Ser Thr Leu Pro Thr Met Ala 50 55 60 Gln Met Glu Lys Ala Leu Ser Ile Gly Phe Glu Thr Cys Arg Tyr Gly 65 70 75 80 Phe Ile Glu Gly His Val Val Ile Pro Arg Ile His Pro Asn Ser Ile 85 90 95 Cys Ala Ala Asn Asn Thr Gly Val Tyr Ile Leu Thr Ser Asn Thr Ser 100 105 110 Gln Tyr Asp Thr Tyr Cys Phe Asn Ala Ser Ala Pro Pro Glu Glu Asp 115 120 125 Cys Thr Ser Val Thr Asp Leu Pro Asn Ala Phe Asp Gly Pro Ile Thr 130 135 140 Ile Thr Ile Val Asn Arg Asp Gly Thr Arg Tyr Val Gln Lys Gly Glu 145 150 155 160 Tyr Arg Thr Asn Pro Glu Asp Ile Tyr Pro Ser Asn Pro Thr Asp Asp 165 170 175 Asp Val Ser Ser Gly Ser Ser Ser Glu Arg Ser Ser Thr Ser Gly Gly 180 185 190 Tyr Ile Phe Tyr Thr Phe Ser Thr Val His Pro Ile Pro Asp Glu Asp 195 200 205 Ser Pro Trp Ile Thr Asp Ser Thr Asp Arg Ile Pro Ala Thr Asn Met 210 215 220 Asp Ser Ser His Ser Ile Thr Leu Gln Pro Thr Ala Asn Pro Asn Thr 225 230 235 240 Gly Leu Val Glu Asp Leu Asp Arg Thr Gly Pro Leu Ser Met Thr Thr 245 250 255 Gln Gln Ser Asn Ser Gln Ser Phe Ser Thr Ser His Glu Gly Leu Glu 260 265 270 Glu Asp Lys Asp His Pro Thr Thr Ser Thr Leu Thr Ser Ser Asn Arg 275 280 285 Asn Asp Val Thr Gly Gly Arg Arg Asp Pro Asn His Ser Glu Gly Ser 290 295 300 Thr Thr Leu Leu Glu Gly Tyr Thr Ser His Tyr Pro His Thr Lys Glu 305 310 315 320 Ser Arg Thr Phe Ile Pro Val Thr Ser Ala Lys Thr Gly Ser Phe Gly 325 330 335 Val Thr Ala Val Thr Val Gly Asp Ser Asn Ser Asn Val Asn Arg Ser 340 345 350 Leu Ser Gly Asp Gln Asp Thr Phe His Pro Ser Gly Gly Ser His Thr 355 360 365 Thr His Gly Ser Glu Ser Asp Gly His Ser His Gly Ser Gln Glu Gly 370 375 380 Gly Ala Asn Thr Thr Ser Gly Pro Ile Arg Thr Pro Gln Ile Pro Glu 385 390 395 400 Trp Leu Ile Ile Leu Ala Ser Leu Leu Ala Leu Ala Leu Ile Leu Ala 405 410 415 Val Cys Ile Ala Val Asn Ser Arg Arg Arg Cys Gly Gln Lys Lys Lys 420 425 430 Leu Val Ile Asn Ser Gly Asn Gly Ala Val Glu Asp Arg Lys Pro Ser 435 440 445 Gly Leu Asn Gly Glu Ala Ser Lys Ser Gln Glu Met Val His Leu Val 450 455 460 Asn Lys Glu Ser Ser Glu Thr Pro Asp Gln Phe Met Thr Ala Asp Glu 465 470 475 480 Thr Arg Asn Leu Gln Asn Val Asp Met Lys Ile Gly Val 485 490 <210> 16 <211> 361 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Met Asp Lys Phe Trp Trp His Ala Ala Trp Gly Leu Cys Leu Val Pro 1 5 10 15 Leu Ser Leu Ala Gln Ile Asp Leu Asn Ile Thr Cys Arg Phe Ala Gly 20 25 30 Val Phe His Val Glu Lys Asn Gly Arg Tyr Ser Ile Ser Arg Thr Glu 35 40 45 Ala Ala Asp Leu Cys Lys Ala Phe Asn Ser Thr Leu Pro Thr Met Ala 50 55 60 Gln Met Glu Lys Ala Leu Ser Ile Gly Phe Glu Thr Cys Arg Tyr Gly 65 70 75 80 Phe Ile Glu Gly His Val Val Ile Pro Arg Ile His Pro Asn Ser Ile 85 90 95 Cys Ala Ala Asn Asn Thr Gly Val Tyr Ile Leu Thr Ser Asn Thr Ser 100 105 110 Gln Tyr Asp Thr Tyr Cys Phe Asn Ala Ser Ala Pro Pro Glu Glu Asp 115 120 125 Cys Thr Ser Val Thr Asp Leu Pro Asn Ala Phe Asp Gly Pro Ile Thr 130 135 140 Ile Thr Ile Val Asn Arg Asp Gly Thr Arg Tyr Val Gln Lys Gly Glu 145 150 155 160 Tyr Arg Thr Asn Pro Glu Asp Ile Tyr Pro Ser Asn Pro Thr Asp Asp 165 170 175 Asp Val Ser Ser Gly Ser Ser Ser Glu Arg Ser Ser Thr Ser Gly Gly 180 185 190 Tyr Ile Phe Tyr Thr Phe Ser Thr Val His Pro Ile Pro Asp Glu Asp 195 200 205 Ser Pro Trp Ile Thr Asp Ser Thr Asp Arg Ile Pro Ala Thr Arg Asp 210 215 220 Gln Asp Thr Phe His Pro Ser Gly Gly Ser His Thr Thr His Gly Ser 225 230 235 240 Glu Ser Asp Gly His Ser His Gly Ser Gln Glu Gly Gly Ala Asn Thr 245 250 255 Thr Ser Gly Pro Ile Arg Thr Pro Gln Ile Pro Glu Trp Leu Ile Ile 260 265 270 Leu Ala Ser Leu Leu Ala Leu Ala Leu Ile Leu Ala Val Cys Ile Ala 275 280 285 Val Asn Ser Arg Arg Arg Cys Gly Gln Lys Lys Lys Leu Val Ile Asn 290 295 300 Ser Gly Asn Gly Ala Val Glu Asp Arg Lys Pro Ser Gly Leu Asn Gly 305 310 315 320 Glu Ala Ser Lys Ser Gln Glu Met Val His Leu Val Asn Lys Glu Ser 325 330 335 Ser Glu Thr Pro Asp Gln Phe Met Thr Ala Asp Glu Thr Arg Asn Leu 340 345 350 Gln Asn Val Asp Met Lys Ile Gly Val 355 360 <210> 17 <211> 139 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Met Asp Lys Phe Trp Trp His Ala Ala Trp Gly Leu Cys Leu Val Pro 1 5 10 15 Leu Ser Leu Ala Gln Ile Asp Leu Asn Ile Thr Cys Arg Phe Ala Gly 20 25 30 Val Phe His Val Glu Lys Asn Gly Arg Tyr Ser Ile Ser Arg Thr Glu 35 40 45 Ala Ala Asp Leu Cys Lys Ala Phe Asn Ser Thr Leu Pro Thr Met Ala 50 55 60 Gln Met Glu Lys Ala Leu Ser Ile Gly Phe Glu Thr Cys Ser Leu His 65 70 75 80 Cys Ser Gln Gln Ser Lys Lys Val Trp Ala Glu Glu Lys Ala Ser Asp 85 90 95 Gln Gln Trp Gln Trp Ser Cys Gly Gly Gln Lys Ala Lys Trp Thr Gln 100 105 110 Arg Arg Gly Gln Gln Val Ser Gly Asn Gly Ala Phe Gly Glu Gln Gly 115 120 125 Val Val Arg Asn Ser Arg Pro Val Tyr Asp Ser 130 135 <210> 18 <211> 337 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Thr Ser Ser Asn Thr Ile Ser Ala Gly Trp Glu Pro Asn Glu Glu Asn 1 5 10 15 Glu Asp Glu Arg Asp Arg His Leu Ser Phe Ser Gly Ser Gly Ile Asp 20 25 30 Asp Asp Glu Asp Phe Ile Ser Ser Thr Ile Ser Thr Thr Pro Arg Ala 35 40 45 Phe Asp His Thr Lys Gln Asn Gln Asp Trp Thr Gln Trp Asn Pro Ser 50 55 60 His Ser Asn Pro Glu Val Leu Leu Gln Thr Thr Thr Arg Met Thr Asp 65 70 75 80 Val Asp Arg Asn Gly Thr Thr Ala Tyr Glu Gly Asn Trp Asn Pro Glu 85 90 95 Ala His Pro Pro Leu Ile His His Glu His His Glu Glu Glu Glu Thr 100 105 110 Pro His Ser Thr Ser Thr Ile Gln Ala Thr Pro Ser Ser Thr Thr Glu 115 120 125 Glu Thr Ala Thr Gln Lys Glu Gln Trp Phe Gly Asn Arg Trp His Glu 130 135 140 Gly Tyr Arg Gln Thr Pro Arg Glu Asp Ser His Ser Thr Thr Gly Thr 145 150 155 160 Ala Ala Ala Ser Ala His Thr Ser His Pro Met Gln Gly Arg Thr Thr 165 170 175 Pro Ser Pro Glu Asp Ser Ser Trp Thr Asp Phe Phe Asn Pro Ile Ser 180 185 190 His Pro Met Gly Arg Gly His Gln Ala Gly Arg Arg Met Asp Met Asp 195 200 205 Ser Ser His Ser Thr Thr Leu Gln Pro Thr Ala Asn Pro Asn Thr Gly 210 215 220 Leu Val Glu Asp Leu Asp Arg Thr Gly Pro Leu Ser Met Thr Thr Gln 225 230 235 240 Gln Ser Asn Ser Gln Ser Phe Ser Thr Ser His Glu Gly Leu Glu Glu 245 250 255 Asp Lys Asp His Pro Thr Thr Ser Thr Leu Thr Ser Ser Asn Arg Asn 260 265 270 Asp Val Thr Gly Gly Arg Arg Asp Pro Asn His Ser Glu Gly Ser Thr 275 280 285 Thr Leu Leu Glu Gly Tyr Thr Ser His Tyr Pro His Thr Lys Glu Ser 290 295 300 Arg Thr Phe Ile Pro Val Thr Ser Ala Lys Thr Gly Ser Phe Gly Val 305 310 315 320 Thr Ala Val Thr Val Gly Asp Ser Asn Ser Asn Val Asn Arg Ser Leu 325 330 335 Ser <210> 19 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonuleotide primer <400> 19 acactttcac tccaatcgtc c 21 <210> 20 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide primer <400> 20 tgccctttcc gttgttgtcc 20 <210> 21 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide primer <400> 21 ggaaatcgtg cgtgacat 18 <210> 22 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide primer <400> 22 tcatgatgga gttgaatgta gtt 23 <210> 23 <211> 720 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> UNSURE <222> (1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 23 Xaa Leu Asn Ile Thr Cys Arg Phe Ala Gly Val Phe His Val Glu Lys 1 5 10 15 Asn Gly Arg Tyr Ser Ile Ser Arg Thr Glu Ala Ala Asp Leu Cys Lys 20 25 30 Ala Phe Asn Ser Thr Leu Pro Thr Met Ala Gln Met Glu Lys Ala Leu 35 40 45 Ser Ile Gly Phe Glu Thr Cys Arg Tyr Gly Phe Ile Glu Gly His Val 50 55 60 Val Ile Pro Arg Ile His Pro Asn Ser Ile Cys Ala Ala Asn Asn Thr 65 70 75 80 Gly Val Tyr Ile Leu Thr Ser Asn Thr Ser Gln Tyr Asp Thr Tyr Cys 85 90 95 Phe Asn Ala Ser Ala Pro Pro Glu Glu Asp Cys Thr Ser Val Thr Asp 100 105 110 Leu Pro Asn Ala Phe Asp Gly Pro Ile Thr Ile Thr Ile Val Asn Arg 115 120 125 Asp Gly Thr Arg Tyr Val Gln Lys Gly Glu Tyr Arg Thr Asn Pro Glu 130 135 140 Asp Ile Tyr Pro Ser Asn Pro Thr Asp Asp Asp Val Ser Ser Gly Ser 145 150 155 160 Ser Ser Glu Arg Ser Ser Thr Ser Gly Gly Tyr Ile Phe Tyr Thr Phe 165 170 175 Ser Thr Val His Pro Ile Pro Asp Glu Asp Ser Pro Trp Ile Thr Asp 180 185 190 Ser Thr Asp Arg Ile Pro Ala Thr Thr Leu Met Ser Thr Ser Ala Thr 195 200 205 Ala Thr Glu Thr Ala Thr Lys Arg Gln Glu Thr Trp Asp Trp Phe Ser 210 215 220 Trp Leu Phe Leu Pro Ser Glu Ser Lys Asn His Leu His Thr Thr Thr 225 230 235 240 Gln Met Ala Gly Thr Ser Ser Asn Thr Ile Ser Ala Gly Trp Glu Pro 245 250 255 Asn Glu Glu Asn Glu Asp Glu Arg Asp Arg His Leu Ser Phe Ser Gly 260 265 270 Ser Gly Ile Asp Asp Asp Glu Asp Phe Ile Ser Ser Thr Ile Ser Thr 275 280 285 Thr Pro Arg Ala Phe Asp His Thr Lys Gln Asn Gln Asp Trp Thr Gln 290 295 300 Trp Asn Pro Ser His Ser Asn Pro Glu Val Leu Leu Gln Thr Thr Thr 305 310 315 320 Arg Met Thr Asp Val Asp Arg Asn Gly Thr Thr Ala Tyr Glu Gly Asn 325 330 335 Trp Asn Pro Glu Ala His Pro Pro Leu Ile His His Glu His His Glu 340 345 350 Glu Glu Glu Thr Pro His Ser Thr Ser Thr Ile Gln Ala Thr Pro Ser 355 360 365 Ser Thr Thr Glu Glu Thr Ala Thr Gln Lys Glu Gln Trp Phe Gly Asn 370 375 380 Arg Trp His Glu Gly Tyr Arg Gln Thr Pro Lys Glu Asp Ser His Ser 385 390 395 400 Thr Thr Gly Thr Ala Ala Ala Ser Ala His Thr Ser His Pro Met Gln 405 410 415 Gly Arg Thr Thr Pro Ser Pro Glu Asp Ser Ser Trp Thr Asp Phe Phe 420 425 430 Asn Pro Ile Ser His Pro Met Gly Arg Gly His Gln Ala Gly Arg Arg 435 440 445 Met Asp Met Asp Ser Ser His Ser Ile Thr Leu Gln Pro Thr Ala Asn 450 455 460 Pro Asn Thr Gly Leu Val Glu Asp Leu Asp Arg Thr Gly Pro Leu Ser 465 470 475 480 Met Thr Thr Gln Gln Ser Asn Ser Gln Ser Phe Ser Thr Ser His Glu 485 490 495 Gly Leu Glu Glu Asp Lys Asp His Pro Thr Thr Ser Thr Leu Thr Ser 500 505 510 Ser Asn Arg Asn Asp Val Thr Gly Gly Arg Arg Asp Pro Asn His Ser 515 520 525 Glu Gly Ser Thr Thr Leu Leu Glu Gly Tyr Thr Ser His Tyr Pro His 530 535 540 Thr Lys Glu Ser Arg Thr Phe Ile Pro Val Thr Ser Ala Lys Thr Gly 545 550 555 560 Ser Phe Gly Val Thr Ala Val Thr Val Gly Asp Ser Asn Ser Asn Val 565 570 575 Asn Arg Ser Leu Ser Gly Asp Gln Asp Thr Phe His Pro Ser Gly Gly 580 585 590 Ser His Thr Thr His Gly Ser Glu Ser Asp Gly His Ser His Gly Ser 595 600 605 Gln Glu Gly Gly Ala Asn Thr Thr Ser Gly Pro Ile Arg Thr Pro Gln 610 615 620 Ile Pro Glu Trp Leu Ile Ile Leu Ala Ser Leu Leu Ala Leu Ala Leu 625 630 635 640 Ile Leu Ala Val Cys Ile Ala Val Asn Ser Arg Arg Arg Cys Gly Gln 645 650 655 Lys Lys Lys Leu Val Ile Asn Ser Gly Asn Gly Ala Val Glu Asp Arg 660 665 670 Lys Pro Ser Gly Leu Asn Gly Glu Ala Ser Lys Ser Gln Glu Met Val 675 680 685 His Leu Val Asn Lys Glu Ser Ser Glu Thr Pro Asp Gln Phe Met Thr 690 695 700 Ala Asp Glu Thr Arg Asn Leu Gln Asn Val Asp Met Lys Ile Gly Val 705 710 715 720

Claims (49)

  1. 대상자로부터 얻은 혈액, 혈장, 혈청, 뇨, 눈물 및 타액으로 이루어진 군으로부터 선택된 생물학적 체액 시료 중에서 오스테오폰틴 (OPN) 단백질의 경시적인 발현을 모니터링하여, 대상자 시료 중에서 OPN 단백질 발현이 경시적으로 증가하면 그 대상자가 척추 측만증의 발병 위험이 있음을 나타내는 것으로 하는 척추 측만증의 발병 위험을 측정하는 시험관 내(in vitro) 방법.
  2. 제1항에 있어서, 모니터링은 대상자 나이가 3세에 개시하는 것인 방법.
  3. 제1항에 있어서, 모니터링은 1개월에 적어도 1회의 빈도로 OPN 단백질 발현을 측정함으로써 실시하는 것인 방법.
  4. 제1항에 있어서, 모니터링은 6개월에 적어도 1회의 빈도로 OPN 단백질 발현을 측정함으로써 실시하는 것인 방법.
  5. 제1항에 있어서, OPN 단백질 발현의 모니터링은 효소결합 면역흡수 분석법 (ELISA) 또는 방사능면역분석법 (RIA)를 이용하여 실시하는 것인 방법.
  6. 대상자로부터 얻은 혈액, 혈장, 혈청, 뇨, 눈물 및 타액으로 이루어진 군으로부터 선택된 생물학적 체액 시료 중에서 오스테오폰틴 (OPN) 단백질의 발현을 모니터링하여, 대조군 시료에서보다 대상자 시료 중에서 OPN 단백질이 더 많이 발현될 경우 그 대상자가 척추 측만증의 발병 위험이 있음을 나타내는 것으로 하는 척추 측만증의 발병 위험을 측정하는 시험관 내(in vitro) 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 하나의 항에 있어서, 대상자는 척추 측만증에 걸릴 가능성이 있는 후보자인 방법.
  8. 제1항 내지 제6항 중 어느 하나의 항에 있어서, 대상자는 청소년기 특발성 척추 측만증에 걸릴 가능성이 있는 후보자인 방법.
  9. 제1항 내지 제6항 중 어느 하나의 항에 있어서, 대상자는 척추 측만증에 걸린 것으로 예진된 것인 방법.
  10. 제1항 내지 제6항 중 어느 하나의 항에 있어서, 대상자는 청소년기 특발성 척추 측만증에 걸린 것으로 예진된 것인 방법.
  11. 대상자로부터 얻은 혈액, 혈장, 혈청, 뇨, 눈물 및 타액으로 이루어진 군으로부터 선택된 생물학적 체액 시료 중에서 오스테오폰틴 (OPN) 단백질의 발현을 모니터링하여, 대상자를 척추 측만증 서브그룹으로 계층화시키는 것을 포함하여 이루어지는 척추 측만증에 걸린 환자를 계층화하는 시험관 내(in vitro) 방법.
  12. 고정기를 착용하기 전 및 고정기 착용후 적어도 한번 대상자로부터 얻은 혈액, 혈장, 혈청, 뇨, 눈물 및 타액으로 이루어진 군으로부터 선택된 생물학적 체액 시료 중에서 오스테오폰틴 (OPN) 단백질의 발현을 모니터링하여, 고정기 착용 전에 비해 고정기 착용 후의 OPN 단백질 발현이 증가하였을 경우 고정기가 효과가 없는 것임을 나타내는 것으로 하는 척추 측만증에 걸린 환자에 있어서 고정기의 효능을 평가하는 시험관 내(in vitro) 방법.
  13. 제12항에 있어서, 고정기 착용 후 OPN 단백질 발현 측정은 고정기를 착용한지 적어도 1개월 후에 실시하는 것인 방법.
  14. 제12항에 있어서, 고정기 착용 후 OPN 단백질 발현 측정은 고정기를 착용한지 적어도 2개월 후에 실시하는 것인 방법.
  15. 제12항에 있어서, 고정기 착용 후 OPN 단백질 발현 측정은 고정기를 착용한지 적어도 3개월 후에 실시하는 것인 방법.
  16. 제12항에 있어서, 고정기 착용 후 OPN 단백질 발현 측정은 고정기를 착용한지 적어도 6개월 후에 실시하는 것인 방법.
  17. 제1항 내지 제6항 및 제11항 내지 제16항 중 어느 하나의 항에 있어서, 대상자로부터 얻은 생물학적 체액 시료 중에서 가용성 CD44 수용체 (sCD44) 발현을 측정하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  18. 제17항에 있어서, 생물학적 체액은 혈액, 혈장 및 혈청으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  19. 제18항에 있어서, 생물학적 체액은 혈장인 것인 방법.
  20. 제1항 내지 제6항 및 제11항 내지 제16항 중 어느 하나의 항에 있어서, OPN 단백질 발현의 측정은 OPN에 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 실시하는 것인 방법.
  21. 제20항에 있어서, OPN 단백질 발현의 측정은 효소 결합 면역흡수 분석법 (ELISA)를 이용하여 실시하는 것인 방법.
  22. 제21항에 있어서, 시료는 혈장 시료이고 혈장 1 밀리터 당 OPN 단백질 발현이 700 나노그램을 초과할 경우 그 대상자가 척추 측만증 발병 위험이 있음을 나타내는 것으로 하는 방법.
  23. 제21항에 있어서, 시료는 혈장 시료이고 혈장 1 밀리터 당 OPN 단백질 발현이 800 나노그램을 초과할 경우 그 대상자가 척추 측만증 발병 위험이 있음을 나타내는 것으로 하는 방법.
  24. 후보 물질을 sCD44를 발현하는 세포와 접촉시키고, sCD44 발현을 측정하여, 후보 물질 존재 시의 sCD44 발현이 후보 물질 부재시에 비하여 높을 경우 그 후보 물질을 선택하는 것을 포함하여 이루어지는, 척추 측만증의 경감 또는 예방을 위한 잠재적인 후보 물질을 선택하는 방법.
  25. 제24항에 있어서, 세포는 척추 측만증 환자로부터 유래한 세포인 것인 방법.
  26. 제24항 또는 제25항에 있어서, 대상자는 인간인 방법.
  27. 제24항 또는 제25항에 있어서, 대상자는 인간 여성인 방법.
  28. 제24항 또는 제25항에 있어서, 대상자는 인간 남성인 방법.
  29. 오스테오폰틴 (OPN) 단백질에 특이적인 리간드, 가용성 CD44 (sCD44)에 특이적인 리간드 및 척추 측만증 발병 위험성의 예측을 위해 키트를 사용하기 위한 지침서를 포함하여 이루어지는 척추 측만증의 발병 위험성을 예측하기 위한 키트.
  30. 삭제
  31. 삭제
  32. 삭제
  33. 삭제
  34. 삭제
  35. 삭제
  36. 삭제
  37. 삭제
  38. 삭제
  39. 삭제
  40. 삭제
  41. 삭제
  42. 삭제
  43. 삭제
  44. 삭제
  45. 삭제
  46. 삭제
  47. 삭제
  48. 삭제
  49. 삭제
KR1020097022732A 2007-03-30 2008-03-31 척추 측만증의 발병 위험성을 측정하는 방법, 척추 측만증에 걸린 대상자를 계층화하는 방법, 척추 측만증에 걸린 대상자에 있어서 고정기의 효능을 평가하는 방법, 및 이를 위한 키트 KR101436578B1 (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US90940807P 2007-03-30 2007-03-30
US60/909,408 2007-03-30
US2557108P 2008-02-01 2008-02-01
US61/025,571 2008-02-01
PCT/CA2008/000595 WO2008119170A1 (en) 2007-03-30 2008-03-31 Method of determining risk of scoliosis

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20100016075A KR20100016075A (ko) 2010-02-12
KR101436578B1 true KR101436578B1 (ko) 2014-09-01

Family

ID=39807753

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020097022732A KR101436578B1 (ko) 2007-03-30 2008-03-31 척추 측만증의 발병 위험성을 측정하는 방법, 척추 측만증에 걸린 대상자를 계층화하는 방법, 척추 측만증에 걸린 대상자에 있어서 고정기의 효능을 평가하는 방법, 및 이를 위한 키트

Country Status (11)

Country Link
US (3) US20100075333A1 (ko)
EP (1) EP2132568B1 (ko)
JP (1) JP5426530B2 (ko)
KR (1) KR101436578B1 (ko)
CN (1) CN101680887B (ko)
AU (1) AU2008234374B2 (ko)
CA (1) CA2682114C (ko)
HK (1) HK1132550A1 (ko)
IL (1) IL201186A (ko)
MX (1) MX2009010400A (ko)
WO (1) WO2008119170A1 (ko)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2598875B1 (en) * 2010-10-04 2016-12-07 Chu Sainte-Justine Biomechanical-based methods of diagnosing scoliosis
DE102012102338A1 (de) 2012-03-20 2013-09-26 Hauni Maschinenbau Ag Messanordnung zum Messen von in Strangmaschinen der Tabak verarbeitenden Industrie hergestellten und geförderten Strängen
RS60416B1 (sr) 2012-08-09 2020-07-31 Celgene Corp Lečenje imunoloških i zapaljenskih bolesti
US20150038511A1 (en) 2012-08-09 2015-02-05 Celgene Corporation Treatment of immune-related and inflammatory diseases
WO2014201557A1 (en) 2013-06-17 2014-12-24 Chu Ste-Justine Gi protein phosphorylation as marker for scoliosis and scoliosis progression, methods of increasing gipcr signaling in scoliotic subjects
CA2914213A1 (en) 2013-06-17 2014-12-24 Alain Moreau A method of increasing gipcr signalization in the cells of a scoliotic subject
WO2014201560A1 (en) 2013-06-17 2014-12-24 Chu Ste-Justine New markers for severe progression of idiopathic scoliosis and uses thereof to stratify scoliotic patients and predict the risk of developing scoliosis
US10247737B2 (en) * 2013-09-09 2019-04-02 Chu Sainte-Justine Kits for classifying a subject having or at risk for developing idiopathic scoliosis
TWI745271B (zh) 2014-05-19 2021-11-11 美商西建公司 全身紅斑性狼瘡之治療
CN106310610A (zh) * 2016-10-21 2017-01-11 上海交通大学医学院附属新华医院 一种脊柱侧凸特定运动疗法
CN106841593B (zh) * 2017-03-24 2018-08-17 北京致成生物医学科技有限公司 Lacc1和fhl2基因在制备脊柱侧弯检测产品中的应用
CN111638329B (zh) * 2020-06-09 2021-06-01 南方医科大学 一种用于检测布鲁氏菌病elispot检测试剂盒及其应用
CN113350004B (zh) * 2021-06-01 2022-08-26 黑龙江中医药大学 一种维持脊柱生理曲度支具及脊髓损伤大鼠用脊柱矫正法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050130250A1 (en) 2002-02-28 2005-06-16 Hopital Sainte-Justine Method of diagnosing adolescent idiopathic scoliosis and related syndromes

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5618920A (en) * 1985-11-01 1997-04-08 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
SE9101642D0 (sv) * 1991-05-30 1991-05-30 Kabi Pharmacia Ab Phospholipids
US6010865A (en) * 1993-06-22 2000-01-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Process for detecting a variant CD44 gene product
KR970705401A (ko) 1994-08-30 1997-10-09 사무엘 시몬 에스큘라이 세포활성의 조정용 히알루론산과 그 유도체(hyaluronic acid and derivatives for modulation of cellular activity)
US5858709A (en) * 1996-10-15 1999-01-12 Smithkline Beecham P.L.C. Fibronectin binding protein B compounds
US20020160970A1 (en) * 1996-04-10 2002-10-31 Gyula Hadlaczky Artificial chromosomes, uses thereof and methods for preparing artificial chromosomes
US6025155A (en) * 1996-04-10 2000-02-15 Chromos Molecular Systems, Inc. Artificial chromosomes, uses thereof and methods for preparing artificial chromosomes
WO1998008379A1 (en) 1996-08-27 1998-03-05 Dana-Farber Cancer Institute Methods for identifying modulators of cellular interactions mediated by osteopontin
US6150162A (en) * 1998-12-17 2000-11-21 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of CD44 expression
JP2005517379A (ja) 1999-01-18 2005-06-16 オステオミーター・ビオテク・エー／エス 遺伝的疾病素因
MXPA01010403A (es) * 1999-04-15 2004-09-10 Childrens Medical Center Agentes quimiotacticos e inhibidores derivados de osteopontina y usos de los mismos.
JP2003528322A (ja) 2000-03-23 2003-09-24 グラクソ グループ リミテッド オステオポンチンのインヒビターのスクリーニング方法
RU2305111C2 (ru) * 2001-09-25 2007-08-27 Джуридикэл Фаундейшн Дзе Чемо-Серо-Терапьютик Рисерч Инститьют Рекомбинантное антитело против остеопонтина и его применение
AU2003214604A1 (en) * 2002-03-21 2003-10-08 Hadasit Medical Research Services And Development Ltd. Peripheral blood cell markers useful for diagnosing multiple sclerosis and methods and kits utilizing same
US20040110933A1 (en) * 2002-09-13 2004-06-10 Dyax Corporation CD44-binding ligands
US20050282163A1 (en) * 2003-02-03 2005-12-22 Medstar Research Institute Washington Hospital Center Polymorphisms in elastin, fibrillin and related genes as predisposing to restenosis and to a therosclerosis
US20090104620A1 (en) * 2007-07-03 2009-04-23 Axial Biotech, Inc. Simplified Method of Determining Predisposition to Scoliosis

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050130250A1 (en) 2002-02-28 2005-06-16 Hopital Sainte-Justine Method of diagnosing adolescent idiopathic scoliosis and related syndromes

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Biochem. Biophys., Res., Comm., 342권, 963-972면, 2006 *
Bulletin of the Osaka Medical College, 52(1):37-44, 2006 *
Bulletin of the Osaka Medical College, 52(1):37-44, 2006*
PNAS, 102권, 21호, 7877-82면, 2005 *

Also Published As

Publication number Publication date
EP2132568B1 (en) 2013-05-29
CN101680887A (zh) 2010-03-24
CA2682114A1 (en) 2008-10-09
KR20100016075A (ko) 2010-02-12
AU2008234374B2 (en) 2013-05-23
MX2009010400A (es) 2010-02-18
AU2008234374A1 (en) 2008-10-09
JP5426530B2 (ja) 2014-02-26
US20100075333A1 (en) 2010-03-25
IL201186A0 (en) 2010-05-17
US20150323553A1 (en) 2015-11-12
EP2132568A4 (en) 2010-06-09
CN101680887B (zh) 2014-06-25
WO2008119170A1 (en) 2008-10-09
US20130266966A1 (en) 2013-10-10
IL201186A (en) 2013-10-31
HK1132550A1 (en) 2010-02-26
CA2682114C (en) 2017-08-01
EP2132568A1 (en) 2009-12-16
US10073101B2 (en) 2018-09-11
JP2010522699A (ja) 2010-07-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101436578B1 (ko) 척추 측만증의 발병 위험성을 측정하는 방법, 척추 측만증에 걸린 대상자를 계층화하는 방법, 척추 측만증에 걸린 대상자에 있어서 고정기의 효능을 평가하는 방법, 및 이를 위한 키트
JP4659736B2 (ja) スクリーニング方法
PT2711023T (pt) Promotor da osteogénese
EP3027225A2 (en) Compositions and methods for modulating thermogenesis using pth-related and egf-related molecules
JP7170096B2 (ja) 血漿バイオマーカーのレベルを測定することによる、がんに罹患していることが疑われる患者のアフリベルセプトによる治療の転帰を予測するための方法
KR20160020554A (ko) 척추측만 개체의 세포에서 gipcr 신호전달을 증가시키는 방법
EP1761784B1 (en) Identification of ergothioneine transporter and therapeutic uses thereof
EP3837361A1 (en) Ahr-ror-gamma t complex as a biomarker and therapeutic target for autoimmune disease and il-17a-associated disease
KR20160020553A (ko) 특발성 척추측만증의 심각한 진행에 대한 새로운 마커, 그리고 척추측만 환자를 층화하고 척추측만증이 발달할 위험을 예측하기 위한 이들의 용도
WO2010035888A1 (ja) マイクロドメイン病のバイオマーカー
CA2801162A1 (en) Diagnostic, screening and therapeutic applications of ocab-based tools
WO2021075535A1 (ja) 異常幹細胞を標的とする糖尿病治療
WO2009098656A2 (en) Method for predicting or diagnosing outcome of intracranial tumors in a subject
JP2002506437A (ja) 癌の新規な検出および治療方法
JPWO2007037538A1 (ja) Ｓｐｏ１１遺伝子の治療的又は診断的用途
US20120077734A1 (en) Methods and assays for treating conditions in which macrophages play a pathogenic role
WO2002046466A2 (en) Complexes of brca and stat polypeptides and methods of use in the detection and treatment of cancer
WO2012133994A1 (ko) Pauf 및 그의 결합 파트너를 상호작용을 이용한 암 치료제의 스크리닝 방법
KR20230049059A (ko) 염증성 질환 치료를 위한 팔모틸화/탈팔모틸화 주기 표적화
JPWO2007037560A1 (ja) Ｓｇｋ２遺伝子の治療的又は診断的用途
JP2004051553A (ja) 抗ｍｒｐ１抗体を含有する抗癌剤の抗癌作用増強剤
WO2006017992A1 (fr) Procédé de détection de l&#39;expression de la protéine ppn/mg61 et utilisation de celui-ci
JP2008118862A (ja) Ｎｋ細胞の機能調節剤およびそのスクリーニング法

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20170811

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20180810

Year of fee payment: 5

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20190717

Year of fee payment: 6