JP6905961B2 - 電気泳動方法、電気泳動システム及び電気泳動ゲル - Google Patents
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Description
上記した以外の課題、構成及び効果は、以下の実施形態の説明により明らかにされる。
第1の実施形態に係る電気泳動システムについて、図1及び図2を用いて説明する。図1は、第1の実施形態に係る電気泳動システムを示す概略斜視図である。図2は、電気泳動システムに用いられる電気泳動ゲルを示す概略斜視図である。
図3に示すように、電場の傾きa=0とし、電場をY軸に平行に印加する場合、上記式(2)にa=0を代入した式は、XC>X0となる。すなわち、回収孔3の底(XC,YC)を注入孔2の底(X0,Y0)よりも深くすることで、XC>X0を満たすことができる。
上記式(2)を変形すると、下記式(5)となる。ここで、下記式(5)において、右辺のYC−Y0は、注入孔2及び回収孔3のY軸方向の距離を示すため、正の値である。よって、電場の傾きa<0とする場合、下記式(5)の右辺は負の値となる。従って、電場の傾きa<0の場合においても、回収孔3の底(XC,YC)を注入孔2の底(X0,Y0)よりも深くすることで、下記式(5)の左辺(XC−X0)、すなわち注入孔2及び回収孔3の深さの差(XC−X0)が正の値となるため、上記式(2)及び下記式(5)を満たすことができる。
電場の傾きa>0とする場合、上記式(5)の右辺は正の値となる。従って、注入孔2及び回収孔3の深さの差(XC−X0)が、電場の傾きaと、注入孔2及び回収孔3のY軸方向の距離(YC−Y0)との積(a(YC−Y0))より大きくなるように、回収孔3の底(XC,YC)を注入孔2の底(X0,Y0)よりも深くすることで、上記式(2)及び上記式(5)を満たすことができる。
次に、図6を参照して、第2の実施形態に係る電気泳動システム及び電気泳動方法について説明する。図6は、第2の実施形態に係る電気泳動ゲル1のC−C断面図である。
次に、図7を参照して、第3の実施形態に係る電気泳動システム及び電気泳動方法について説明する。図7は、第3の実施形態に係る電気泳動ゲル1のC−C断面図である。
図7に示すように、電場の傾きa=0とし、電場をY軸に平行に印加する場合、上記式(2)にa=0を代入した式は、XC>X0となる。すなわち、液体8の上面(X0,Y0)が回収孔3の底(XC,YC)よりも浅くなるように液体8を注入することで、XC>X0を満たすことができる。
上述のように、上記式(2)を変形すると、上記式(5)となる。ここで、上記式(5)において、YC−Y0は注入孔2及び回収孔3のY軸方向の距離を示すため、正の値である。電場の傾きa<0とする場合、上記式(5)の右辺は負の値となる。従って、液体8の上面(X0,Y0)が回収孔3の底(XC,YC)よりも浅くなるように液体8を注入することで、上記式(5)の左辺(XC−X0)が正の値となり、上記式(2)及び上記式(5)を満たすことができる。
電場の傾きa>0とする場合、上記式(5)の右辺は正の値となる。従って、注入孔2及び回収孔3の深さの差(XC−X0)が、電場の傾きaと、注入孔2及び回収孔3のY軸方向の距離(YC−Y0)との積(a(YC−Y0))より大きくなる。すなわち、液体8の上面(X0,Y0)が回収孔3の底(XC,YC)よりも浅くなるよう液体8を注入することで、XC−X0が正の値となり、上記式(2)及び上記式(5)を満たすことができる。
第1の実施形態の実施例について説明する。
(電気泳動ゲルの作製)
注入孔2及び回収孔3を有するアガロースゲルを作製した。アガロースゲルは、X軸方向の長さ(厚み)が5mm、Y軸方向の長さが60mm、Z軸方向の長さが55mmになるように、3%SeaKem(登録商標) GTG−TAE(Lonza社製)をプラスチック容器に流し入れて成型した。注入孔2は、YZ平面の寸法が1mm×5mm、X軸方向の深さが3mmになるように、回収孔3は、YZ平面の寸法が1mm×5mm、X軸方向の深さが4mmになるように、アガロースゲルが固まる前にコームを差し込むことで、それぞれ形成した。注入孔2及び回収孔3のY軸方向の距離は20mmとした。
作製したアガロースゲルを電気泳動装置(ミューピット(登録商標)、ミューピット社製)に水平に設置し、1×TAE緩衝液(Tris Acetate EDTA Buffer)を電気泳動槽9に注ぎ、アガロースゲルの上面ぎりぎりまで満たした。注入孔2及び回収孔3の内部もTAE緩衝液で満たした。その後、種々の長さの核酸を含む試料溶液5μLに、6×DNA Loading Dye(Thermo Fisher Scientific社製)1μLを混合して注入液とし、注入孔2に注入した。
5分毎に回収した回収液に含まれる核酸の長さ及び質量をTapeStation(Agilent Technologies社製)を用いてそれぞれ定量し、回収効率を求めた。結果を図8に示す。
回収孔3のX軸方向の深さを3mmとして、注入孔2及び回収孔3の深さを等しくしたこと以外は実施例1と同様にして電気泳動を行い、比較例1に係る核酸の回収効率を求めた。結果を図8に示す。
図8は、実施例1及び比較例1における核酸の回収効率を示すグラフである。図8に示すように、回収孔3の深さが注入孔2の深さより大きいアガロースゲルを用いた実施例1においては、注入孔2及び回収孔3の深さが等しいアガロースゲルを用いた比較例1と比較して、回収効率が2倍以上となることが分かった。
第2の実施形態の実施例について説明する。
(電気泳動ゲルの作製)
注入孔2及び回収孔3のX軸方向の深さがいずれも4mmとなるようにしたこと以外は実施例1と同様にして、アガロースゲルを作製した。
作製したアガロースゲルの負極11側の端が正極10側の端に比べて3mm高くなるように斜めに設置したこと以外は実施例1と同様にして、電場がY軸に平行に直線状に働くように電気泳動を行い、電気泳動開始直後から5分毎に、回収孔3内に電気泳動された核酸をTAE緩衝液ごと回収した。
実施例1と同様にして、5分毎に回収した回収液に含まれる核酸の長さ及び質量を定量氏、回収効率を求めた。
図示は省略しているが、負極11側の端のX軸方向の高さが正極10側の端のX軸方向の高さより3mm高くなるように電気泳動ゲルを配置した実施例2においては、同じ電気泳動ゲルを水平に配置した比較例1と比較して、回収効率が2倍以上となることが分かった。
第3の実施形態の実施例について説明する。
(電気泳動ゲルの作製)
注入孔2及び回収孔3のX軸方向の深さがいずれも4mmとなるようにしたこと以外は実施例1と同様にして、アガロースゲルを作製した。
作製したアガロースゲルを電気泳動装置(ミューピット(登録商標)、ミューピット社製)に水平に設置し、1×TAE緩衝液(Tris Acetate EDTA Buffer)を電気泳動槽9に注ぎ、アガロースゲルの上面ぎりぎりまで満たした。注入孔2及び回収孔3の内部もTAE緩衝液で満たした。その後、注入孔2に90%グリセロールを5μL注入した。その他の操作は実施例1と同様にして、電場がY軸に平行に働くように電気泳動を行い、電気泳動開始直後から5分毎に、回収孔3内に電気泳動された核酸をTAE緩衝液ごと回収した。
実施例1と同様にして、5分毎に回収した回収液に含まれる核酸の長さ及び質量を定量し、回収効率を求めた。
図示は省略しているが、注入孔2に注入液より比重の大きい90%グリセロールを注入した実施例3においては、90%グリセロールを注入しなかった比較例1と比較して、回収効率が2倍以上となることが分かった。
2、52…注入孔
3、53…回収孔
4…緩衝液
6…生体物質
8…液体
9…電気泳動槽
10…正極
11…負極
12…電圧制御部
100…電気泳動装置
Claims (9)
- 生体物質が注入される注入孔と、前記生体物質が回収される回収孔と、を有する電気泳動ゲルを用いた電気泳動方法において、
前記注入孔に前記生体物質よりも比重の大きい液体を注入するステップと、
前記液体の注入後、前記注入孔に前記生体物質を注入するステップと、
前記注入孔及び前記回収孔を貫く電場を印加するステップと、を有し、
鉛直方向下向きを正の方向とする軸をX軸とし、前記注入孔及び前記回収孔の任意の点をそれぞれ通る平面に平行であり、且つ前記X軸に垂直な軸をY軸とし、前記回収孔の底の座標を(XC,YC)として、
前記電場を印加するステップにおいて前記生体物質が前記注入孔の底から前記回収孔中の座標(X1,YC)に電気泳動される場合、前記回収孔の底のX座標XCは、下記式(1)を満たすことを特徴とする電気泳動方法。
- 請求項1に記載の電気泳動方法において、
前記回収孔は、前記注入孔より深いことを特徴とする電気泳動方法。 - 請求項1に記載の電気泳動方法において、
前記電場を印加するステップは、直線X=aYに平行な前記電場を印加するステップであり、前記電場の傾きaが負の値である電場を印加するステップであることを特徴とする電気泳動方法。 - 電気泳動ゲルと、電気泳動装置と、を備える電気泳動システムであって、
前記電気泳動ゲルは、生体物質が注入される注入孔と、前記生体物質が回収される回収孔と、を有し、
前記注入孔には、前記生体物質が注入される前に、前記生体物質よりも比重の大きい液体が注入され、
前記電気泳動装置は、前記注入孔及び前記回収孔を貫く電場を印加する制御部を有し、
鉛直方向下向きを正の方向とする軸をX軸とし、前記注入孔及び前記回収孔の任意の点をそれぞれ通る平面に平行であり、且つ前記X軸に垂直な軸をY軸とし、前記回収孔の底の座標を(XC,YC)として、
前記電場の印加により前記生体物質が前記注入孔の底から前記回収孔中の座標(X1,YC)に電気泳動される場合、前記回収孔の底のX座標XCは、下記式(1)を満たすことを特徴とする電気泳動システム。
- 請求項5に記載の電気泳動システムにおいて、
前記回収孔は、前記注入孔より深いことを特徴とする電気泳動システム。 - 請求項5に記載の電気泳動システムにおいて、
前記制御部は、直線X=aYに平行な前記電場を印加するステップであり、前記電場の傾きaが負の値である電場を印加することを特徴とする電気泳動システム。 - 生体物質が注入される注入孔と、
前記生体物質が回収される回収孔と、を備える電気泳動ゲルであって、
前記注入孔には、前記生体物質が注入される前に、前記生体物質よりも比重の大きい液体が注入され、
前記注入孔に注入された前記液体の上面の高さは、前記回収孔の底面の高さより高いことを特徴とする電気泳動ゲル。
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