JP2010502962A - 電気泳動ゲルから生体分子を単離し、かつ収集する方法、カセット、ゲル及び装置 - Google Patents
電気泳動ゲルから生体分子を単離し、かつ収集する方法、カセット、ゲル及び装置 Download PDFInfo
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Abstract
Description
本願は、「電気泳動ゲルから生体分子を単離し、収集する方法、カセット、ゲル及び装置」という名称の2006年8月31日出願の米国特許仮出願第60/824,210号、及び「電気泳動ゲルから生体分子を単離し、収集する方法、カセット、ゲル及び装置」という名称の2006年10月13日出願の米国特許仮出願第60/829,517号に対する優先権の利益を主張する。これらの特許出願はともに、参照によりその全体を本願明細書に引用する。
本発明は、電気泳動ゲルからバンドを単離及び収集することを可能にする電気泳動の方法及び装置に関する。
ゲル電気泳動は、例えば新しい薬物の研究対象を特定したり、新しい診断テストを特定したりする生科学的サンプルの成分を分析するための公知の手段である。ゲル電気泳動の間、通常は個別には見えず、生物学的サンプルの中で分離されるサンプルの個々の成分は、可視の個々のバンドに分離される。
電気泳動を用いてサンプル成分を分離した後、電気泳動カセットに含まれるサンプル成分を電気泳動ゲルから分離、単離、収集するのに利用できる電気泳動システム、アセンブリ、装置、カセット及び方法が本明細書で開示される。本明細書で開示される方法を用いて分離、単離、収集されるサンプル成分は、電気泳動で分離可能なすべての分子をいう。そのような分子としては、限定されないがペプチド、ポリペプチド、プロテイン、オリゴヌクレオチド、DNAやRNAなどの生体分子を含む。これらの電気泳動システム、アセンブリ、装置、カセット及び方法は、これまでのゲル−分離バンドにおける生体分子の単離方法よりも、より単純で効率的な方法を提供する。電気泳動システム、アセンブリ、装置、カセット及び方法は、特に使い捨ての商業的な製品に適している。
他に定義されていない限り、本明細書で用いられるすべての技術的及び化学的用語は、本発明が属する分野の当業者によって共通して理解される意味と同じ意味を有する
一般的に、本明細書で用いられる用語はこの分野で公知であり共通して用いられているものである。例えば「上」及び「下」、「トップ」及び「底」、「上に」「下に」又は「上側」又は「下側」などの方向の用語は、装置を使用する間の部品の方向について言及する。用語が単数で用いられている場合は、発明者はその用語の複数の場合も意図している。参照として援用された文献に用いられた用語及び定義と相違があった場合には、本出願で用いられた用語が本明細書において与えられる定義となる。開示の全体を通して採用された次の用語は、特に示されない限り、次のような意味を有するものと理解されるべきである。
電気泳動ゲルからサンプル成分を分離、単離、収集する電気泳動システム、アセンブリ、装置、カセット及び方法の実施形態を以下に詳細に述べる。これらの例は、添付図面に示される。
(1)電気泳動カセットが、(i)壁の少なくとも一枚が、少なくとも一列のローディング開口と少なくとも一列の収集開口を有する、壁を備える分離チャンバと;(ii)分離チャンバに含まれる電気泳動ゲルマトリックスであって、少なくとも一列のローディングウェルと少なくとも一列の収集ウェルを有し、それぞれの収集ウェルが収集開口を通してアクセス可能であり、それぞれのローディングウェルが電気泳動レーンにおける少なくとも一つの収集ウェルと並んでいる、電気泳動ゲルマトリックスと;(vi)ウェル及び開口の列がこれらの電極の間に配置されている、二つの電極とを含む、閉じられた電気泳動カセットを提供又は取得する工程と、
(2)関心対象の生体分子(プロテインなど)を含む複数の成分のサンプルを、少なくとも一つのローディングウェルに、電気泳動カセットの少なくとも一つのローディング開口を通してロードする工程と、
(3)二つの電極の間に電界を印加し、収集ウェルへ生体分子の電気泳動での移動を行わせる工程と、
(4)収集ウェルから関心対象の生体分子又はバンドを有する液体を、収集開口を通して除去し、それによって関心対象の生体分子又はバンドを単離する工程と、
を含む。
(1)電気泳動カセットが、(i)壁の少なくとも一枚が、少なくとも一列のローディング開口と少なくとも一列の収集開口を有する開口の配列を有する、壁を備える分離チャンバと;(ii)分離チャンバに含まれる電気泳動ゲルマトリックスであって、少なくとも一列のローディングウェルと少なくとも一列の収集ウェルを備えるウェルの配列を有し、それぞれのローディングウェルがローディング開口を通してアクセス可能であり、それぞれの収集ウェルが収集開口を通してアクセス可能であり、それぞれのローディングウェルが電気泳動レーンにおける少なくとも一つの収集ウェルと並んでいる、電気泳動ゲルマトリックスと;(vi)少なくとも一つのアノードと少なくとも一つのカソードを含む少なくとも二つの電極であって、ウェル及び開口の列がアノードとカソードとの間に配置されている、少なくとも二つの電極とを含む、電気泳動カセットを提供又は取得する工程と、
(2)関心対象の生体分子(プロテインなど)など複数の成分を含むサンプルを、少なくとも一つのローディングウェルに、電気泳動カセットの少なくとも一つのローディング開口を通してロードする工程と、
(3)二つの電極の間に電界を印加させ、収集ウェルへ生体分子の電気泳動での移動を行わせる工程と、
(4)収集ウェルから関心対象の生体分子又はバンドを含む液体を、収集開口を通して除去し、それによって関心対象の生体分子又はバンドを単離する工程と、
を含む。
上記及び図3から8に開示された限定されない実施形態は、一つのローディングウェル及び少なくとも一つの収集ウェルに一つのカラムを利用している。しかしながら、本明細書で開示される電気泳動システム、アセンブリ、カセット及び方法の他の実施形態では、複数のウェル及び開口の配列を用い、複数のローディングウェル及びローディング開口が複数の収集ウェル及び収集開口とともに用いられる。そのようなウェルと開口の配列は、「r×c」配列として開示され、rは列の数、cはカラムの数である。そのような配列の列の数r、カラムの数cは、それぞれ独立しており、そのため、本明細書において開示される方法に用いられるウェル及び開口の配列は対象的な配列(r=c)又は非対称的な配列(r≠c)である。ウェル及び開口の配列は、例えば少なくとも1列、少なくとも2列、少なくとも3列、少なくとも4列、少なくとも5列、少なくとも6列、少なくとも7列、少なくとも8列、少なくとも9列、少なくとも10列、少なくとも11列、少なくとも12列、少なくとも15列、少なくとも20列、少なくとも50列、又は少なくとも100列が、それぞれ独立して少なくとも1カラム、少なくとも2カラム、少なくとも3カラム、少なくとも4カラム、少なくとも5カラム、少なくとも6カラム、少なくとも7カラム、少なくとも8カラム、少なくとも9カラム、少なくとも10カラム、少なくとも11カラム、少なくとも12カラム、少なくとも15カラム、少なくとも20カラム、少なくとも50カラム、又は少なくとも100カラムと組み合わせである。
円形のウェル:直径が2mmから15mmの間、深さが1mmから6mmの間。ある実施形態では、直径は2mmから10mmの間、深さは1mmから6mmの間。ある実施形態では、直径は2mm〜5mmの間、深さは1mmから6mmの間。
半円のウェル:半径が1mmから7.5mmの間。深さは、1mmから6mmの間。ある実施形態では、半径は1mmから5mmの間、深さは1mmから6mmの間。ある実施形態では、半径は1mmから3mmの間、深さは1mmから6mmの間。
四角形のウェル:長さ及び幅は2mmから15mmの間。深さは1mmから6mmの間。ある実施形態では、長さ及び幅は2mmから10mmの間。深さは1mmから6mmの間。ある実施形態では、長さ及び幅は2mmから5mmの間。深さは1mmから6mmの間。
長方形のウェル:長さは2mmから15mmの間。幅は2mmから15mmの間。深さは1mmから6mmの間。ある実施形態では、長さ及び幅は、2mmから10mmの間。深さは1mmから6mmの間。ある実施形態では、長さ及び幅は、2mmから5mmの間。深さは1mmから6mmの間。
三角形のウェル:長さは2mmから15mmの間。高さは2mmから15mmの間。深さは1mmから6mmの間。ある実施形態では、長さは2mmから10mmの間。高さは2mmから10mmの間。深さは1mmから6mmの間。ある実施形態では、長さは2mmから5mmの間。高さは2mmから5mmの間。深さは1mmから6mmの間。
楕円形のウェル:長さは2mmから15mmの間。高さは2mmから15mmの間。深さは1mmから6mmの間。ある実施形態では、長さは2mmから10mmの間。高さは2mmから10mmの間。深さは1mmから6mmの間。ある実施形態では、長さは2mmから5mmの間。高さは2mmから5mmの間。深さは1mmから6mmの間。
電気泳動カセットにおける電気泳動ゲルは、本明細書で開示される方法を実行している間、監視される。監視は本明細書において可視化とも呼ばれ、関心対象のサンプルバンドが収集ウェルに移動した時と、これに加え、本明細書で開示される2次元法の場合には、いつ第1電界から第2電界へ切り替えるかを決定するのに用いられる。この可視化は継続的でも断続的でもよい。
実施例1
SYBR SAFE(商標)ゲル(インビトロジェン社、カールスバッド)とともにE−GEL(登録商標)0.8%のダブルコームのカセットを使用して、水で希釈して最終容積が20μLになるよう10μLの低オリゴヌクレオチドマスラダー(Cat.#10068−013 インビトロジェン社、カールスバッド)を、ウェルの第1列のそれぞれのウェルにロードした。ウェルの第二列のそれぞれのウェルに30μLの水を加えた。ゲルは、DARK READER(登録商標)(Clare Chemicals社、ドロレス)トランスイルミネーターの上に置かれたE−GEL(登録商標)POWERBASE(商標)(インビトロジェン社、カールスバッド)電力供給装置を用いてランした。15分後、DARK READER(登録商標)(Clare Chemicals社、ドロレス)トランスイルミネーターは、マスラダー成分を分離するバンドの進行を監視するため、電源をオンにした。図13は、関心対象の800bpオリゴヌクレオチド(4番目のバンド)の単離及び収集を撮影した画像である。図13Aでは、第1番目のバンド(100bp)、第2番目のバンド(200bp)、及び第3番目のバンド(400bp)がウェルの2番目の列の収集ウェルを通ったことが観察されている。第3番目のバンドが収集ウェルを出て、第4番目のバンドが収集ウェルに入るのが観察された場合(図13B)、電界をさらに2分間継続し、その後電界をオフにした。第4番目のバンド(800bp)に含まれる液体をマイクロピペッタを用いて収集ウェルから収集した。収集された液体は、さらに別のE−GEL(登録商標)カセット(エチジウウムブロマイドを含む2%のダブルコーム)(インビトロジェン社、カールスバッド)上でランすると、汚染されたバンドを有さない一つのバンドのみが得られた(図13C)。E−GEL(登録商標)カセット(エチジウウムブロマイドを含む2%のダブルコーム)(インビトロジェン社、カールスバッド)の収集バンドの強度は、E−GEL(登録商標)カセット(エチジウウムブロマイドを含む2%のダブルコーム)(インビトロジェン社、カールスバッド)の上でランしたオリジナルのマスラダーで観察された強度とほとんど同じであり、このことからサンプルのロスが最小限であったことが示された。
48.8%のE−PAGE(商標)ゲルカセットを用いて、15μlのE−PAGE(商標)SEEBLUE(登録商標)(インビトロジェン社、カールスバッド)の予め染色されたマーカー(Cat.#LC5700 インビトロジェン社、カールスバッド)をウェルの第1列のそれぞれのウェルにロードし、20μLの水をウェルの第2列のそれぞれのウェルにロードした。ゲルはE−BASE(登録商標)(プログラムEP)(インビトロジェン社、カールスバッド)電力供給装置を用いてランした。図14Aは、ランの33分後に撮影された画像を示し、指定されたバンド(〜21kD)が次のウェルの縁に届いた段階で、さらに水を第2番目のウェルにロードし(追加〜10ul)、かつゲルをさらに3分ランした。この時点で指定されたバンドはウェルの中にある(図14B)。ランを停止し、ウェルの中身をマイロピペッターで収集した。収集された液体を、別のE−PAGE(商標)ゲルカセット(インビトロジェン社、カールスバッド)でランすると、一つのバンド(図14C)が示された。
DNA染色を内部に含まずに投入された0.8%のE−Gel Clonewellカセット(インビトロジェン社、カールスバッド)(非変性非サイズ分離ゲル)を用いて、GSTを含む組換えにより発現させた融合タンパク質を含む細胞溶解物のサンプルを、ウェルの第1列にロードし、固定化されたグルタチオンとともに30μlのアガロースビーズのスラリーをウェルの第2列にロードした。ゲルは、E−GEL(登録商標)IBASE(商標)(インビトロジェン社、カールスバッド)電力供給装置を用いて約30分間ランした。GST標識されたプロテインだけがビーズに結合し、サンプルの他の成分は収集ウェルを通過して移動した。、又はGST標識されたプロテインの方向には移動しなかった。又はローディングウェルの中に残存した。電力供給装置を停止し、収集ウェルの中のpHを低くするか、還元グルタチオンを含む競合バッファを収集ウェルに追加するか、又は因子XaのようなプロテアーゼをGST標識を開裂するために加えることにより、精製されたプロテインをウェルの中の液体に放出させた。精製されたプロテインを含む液体は、マイクロピペッタを用いて収集した。ビーズは収集ウェルの中に残した。
0.8%のE−Gel Clonewellカセットを用いて、PCR反応の変性生成物の混合物を含むサンプルを、ウェルの第1列にロードし、配列特異的なオリゴヌクレオチドで固定化したアガロースビーズのスラリー30μlをウェルの第2列にロードした。ゲルは、E−GEL(登録商標)IBASE(商標)(インビトロジェン社、カールスバッド)電力供給装置を用いて約30分間ランし、移動状態はE−GEL(登録商標)SAFE IMAGER(商標)(インビトロジェン社、カールスバッド)トランスイルミネーターで、全てのDNAバンドがウェルの第2列を通過して移動するのを監視した。この時点で、相補的なシーケンスを有するバンドのみがビーズに結合されているので、ランを停止した。塩、カオトロピック剤又は高いpHを結合DNAを溶離するために加え、溶離したDNAを含む液体は、マイクロピペッタを用いて収集した。
Claims (106)
- a)i)少なくとも一枚の壁が少なくとも一列のローディング開口及び少なくとも一列の収集開口を含む、壁を備える分離チャンバと、
ii)前記分離チャンバに含まれる電気泳動ゲルと、
iii)それぞれのローディングウェルがローディング開口を通してアクセス可能であり、それぞれの収集ウェルが収集開口を通してアクセス可能であり、それぞれのローディングウェルが、電気泳動レーンにおける少なくとも一つの収集ウェルと並んでおり、前記収集ウェルが液体で満たされている、前記電気泳動ゲル内の少なくとも一列のローディングウェル及び少なくとも一列の収集ウェルと、
iv)前記ウェル及び前記開口の列がアノード及びカソードの間に配置されている、少なくとも一つの前記アノード及び少なくとも一つの前記カソードを含む少なくとも二つの電極と、
を含む閉じられた電気泳動カセットを取得する工程と、
b)前記電気泳動カセットの少なくとも一つのローディング開口を通して、少なくとも一つのローディングウェルに、生体分子を含むサンプルをロードする工程と、
c)前記生体分子を収集ウェルへ電気泳動で移動させるために、二つの前記電極の間に電界を印加する工程と、
d)前記収集開口を通して前記収集ウェルから前記生体分子を除去し、それによって前記生体分子を単離する工程と、
を含む、電気泳動ゲルから生体分子を単離する方法。 - 前記収集ウェルが水で満たされる、請求項1に記載の方法。
- 前記収集ウェルがバッファで満たされる、請求項1に記載の方法。
- 前記生体分子が前記収集ウェル内にある場合に、前記工程c)の電界を終了させる工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記開口を含む壁が内面及び外面を含み、
前記内面及び前記外面が液体に接触しない、
請求項1に記載の方法。 - 前記閉じられた電気泳動カセットが、前記電気泳動の分離を引き起こすために用いられるランニングバッファに浸漬されていない、請求項1に記載の方法。
- 前記収集ウェル内の液体と他の液体との間に流体連絡がない、請求項1に記載の方法。
- 前記収集ウェル内の液体と、前記電気泳動の分離を引き起こすために用いられるランニングバッファとの間に流体連絡がない、請求項1に記載の方法。
- 前記収集ウェル内の液体が、ローディング又は収集の間、前記電気泳動カセット内の他の液体と接触しない、請求項1に記載の方法。
- 前記収集ウェル内の液体及び選択的にサンプルウェル内の液体が前記電気泳動カセット内の唯一の液体である、請求項1に記載の方法。
- 前記収集ウェル内の液体が、前記電気泳動カセットに選択的に存在する他の液体から単離されている、請求項1に記載の方法。
- 収集ウェルに接触する前記電気泳動ゲルの上には液体が存在しない、請求項1に記載の方法。
- 収集工程の後、前記収集ウェルに液体をロードする工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 第2生体分子を前記収集ウェルへ電気泳動で移動させるために、前記二つの電極の間に電界を印加する工程をさらに含む、請求項13に記載の方法。
- 前記収集開口を通して前記収集ウェルから前記第2生体分子を収集する工程をさらに含む、請求項14に記載の方法。
- 前記第2生体分子が前記収集ウェル内にある場合に、前記電界を終了させる工程をさらに含む、請求項15に記載の方法。
- 前記電界の極性を逆にする工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 第2生体分子を、前記電気泳動レーン内に配置された第2収集ウェルへ電気泳動で移動させるために、前記二つの電極の間に電界を印加する工程をさらに含む、請求項13に記載の方法。
- 第2収集開口を通して前記第2収集ウェルから前記第2生体分子を収集する工程をさらに含む、請求項18に記載の方法。
- 前記第2生体分子が、前記第2収集ウェル内にある場合に、前記電界を終了させる工程をさらに含む、請求項19に記載の方法。
- 電界を印加している間、前記生体分子の配置を監視する工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記監視が、前記サンプル中の前記生体分子を損傷しない、請求項21に記載の方法。
- 前記監視が、UV光で照明する工程を含む、請求項21に記載の方法。
- 前記監視が、白色光、青色光又は可視光で照明する工程を含む、請求項21に記載の方法。
- 前記監視が蛍光を検出する工程を含む、請求項21に記載の方法。
- 前記監視が定常的である、請求項21に記載の方法。
- 複数の公知の分子マーカーを含む標準物質をロードする工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記電気泳動カセットの少なくとも一つの壁に配置されたマーキングを通り過ぎて移動する前記生体分子を監視する工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記電気泳動カセットの少なくとも一つの壁に配置されたマーキングの勾配を通り過ぎて移動する前記生体分子を監視する工程を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記マーキングの勾配がマーキングの直線勾配である、請求項29に記載の方法。
- 前記電界がパルス電界である、請求項1に記載の方法。
- 前記サンプルが、前記ローディングウェルにロードするより前に色素と結合される、請求項1に記載の方法。
- 前記サンプルが、前記ローディングウェルにロードされた後に色素と結合される、請求項1に記載の方法。
- 前記電気泳動カセットが色素をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記電気泳動ゲルがアガロースを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記電気泳動ゲルがポリアクリルアミドを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記電気泳動ゲルがアガロース及びポリアクリルアミドを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記生体分子がDNAである、請求項1に記載の方法。
- 前記生体分子がRNAである、請求項1に記載の方法。
- 前記生体分子がペプチドである、請求項1に記載の方法。
- 前記生体分子がプロテインである、請求項1に記載の方法。
- 電界を印加する手段及びバンドの電気泳動での輸送の間複数のバンドを監視する手段を含む装置に、前記電気泳動カセットをロードする工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記工程d)からの生体分子を、ローディングウェルへロードする工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記工程d)からの生体分子を分析する工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記生体分子が質量分析法により分析される、請求項43に記載の方法。
- 前記生体分子を生化学的処理に用いる工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記生化学的処理がクローニング反応である、請求項45に記載の方法。
- 前記生化学的処理が、ライゲーション反応である、請求項45に記載の方法。
- それぞれのローディングウェルの幅が3mmから5mmであり、それぞれのローディングウェルの高さが1mmから2.5mmである、請求項1に記載の方法。
- それぞれの収集ウェルの幅が3mmから5mmであり、それぞれの収集ウェルの高さが1mmから2.5mmである、請求項1に記載の方法。
- それぞれのローディングウェルの容積が10μLから30μLの範囲である、請求項1に記載の方法。
- それぞれの収集ウェルの容積が10μLから30μLの範囲である、請求項1に記載の方法。
- a)i)少なくとも一枚の壁が、少なくとも一列のローディング開口及び少なくとも一列の収集開口を含む開口の配列を含む、壁を備える分離チャンバと、
ii)少なくとも一列のローディングウェル及び少なくとも一列の収集ウェルを含むウェルの配列を含む電気泳動ゲルであって、それぞれのローディングウェルがローディング開口を通してアクセス可能であり、それぞれの収集ウェルが収集開口を通してアクセス可能であり、それぞれの収集ウェルが液体で満たされており、それぞれの前記ローディングウェルが電気泳動レーンにおける少なくとも一つの収集ウェルと並んでいる、前記分離チャンバに含まれる電気泳動ゲルと、
iii)前記ウェル及び開口の列の配列がアノード及びカソードの間に配置されている、少なくとも一つのアノード及び少なくとも一つのカソードを含む少なくとも二つの電極と、
を含む閉じられた電気泳動カセットを取得する工程と、
b)前記電気泳動カセットの少なくとも一つのローディング開口を通して、少なくとも一つのローディングウェルに、サンプルをロードする工程と、
c)前記サンプルを複数のバンドに電気泳動分離させるために、かつ前記バンドを収集ウェルへ電気泳動で移動させるために、二つの前記電極の間に電界を印加する工程と、
d)前記収集開口を通して前記収集ウェルからサンプルバンドを除去し、それによって前記サンプルバンドを単離する工程と、
を含む、電気泳動ゲルからバンドを単離する方法。 - 前記収集ウェルが水で満たされる、請求項52に記載の方法。
- 前記収集ウェルがバッファで満たされる、請求項52に記載の方法。
- 前記バンドが前記収集ウェル内にある場合に、前記工程c)の電界を終了させる工程をさらに含む、請求項52に記載の方法。
- 前記開口を含む壁が内面及び外面を含む開口を含み、
前記内面及び前記外面が液体に接触しない、
請求項52に記載の方法。 - 前記閉じられた電気泳動カセットが、前記電気泳動の分離を引き起こすために用いられるランニングバッファに浸漬されていない、請求項52に記載の方法。
- 前記収集ウェル内の液体と他の液体との間に流体連絡がない、請求項52に記載の方法。
- 前記収集ウェル内の液体と、前記電気泳動の分離を引き起こすために用いられるランニングバッファとの間に流体連絡がない、請求項52に記載の方法。
- 前記収集ウェル内の液体が、ローディング又は収集の間、前記電気泳動カセット内の他の液体と接触しない、請求項52に記載の方法。
- 前記収集ウェル内の液体及び選択的にサンプルウェル内の液体が、前記電気泳動カセット内の唯一の液体である、請求項52に記載の方法。
- 前記収集ウェル内の液体が、前記電気泳動カセットに選択的に存在する他の液体から単離されている、請求項52に記載の方法。
- 収集ウェルに接触する前記電気泳動ゲルの上には液体が存在しない、請求項52に記載の方法。
- 収集工程の後、前記収集ウェルに液体をロードする工程をさらに含む、請求項52に記載の方法。
- 第2バンドを前記収集ウェルへ電気泳動で移動させるために、前記二つの電極の間に電界を印加する工程をさらに含む、請求項64に記載の方法。
- 前記収集開口を通して前記収集ウェルから前記第2バンドを収集する工程をさらに含む、請求項65に記載の方法。
- 前記第2バンドが前記収集ウェル内にある場合に、前記電界を終了させる工程をさらに含む、請求項66に記載の方法。
- 前記電界の極性を逆にする工程をさらに含む、請求項52に記載の方法。
- 第2バンドを、前記電気泳動レーン内に配置された第2収集ウェルへ電気泳動で移動させるために、前記二つの電極の間に電界を印加する工程をさらに含む、請求項64に記載の方法。
- 第2収集開口を通して前記第2収集ウェルから前記第2バンドを収集する工程をさらに含む、請求項69に記載の方法。
- 前記第2バンドが、前記第2収集ウェル内にある場合に、前記電界を終了させる工程をさらに含む、請求項70に記載の方法。
- 電界を印加している間、少なくとも一つのバンドの配置を監視する工程をさらに含む、請求項52に記載の方法。
- 前記監視が前記サンプルを損傷しない、請求項72に記載の方法。
- 前記監視がUV光で照明する工程を含む、請求項72に記載の方法。
- 前記監視が白色光、青色光又は可視光で照明する工程を含む、請求項72に記載の方法。
- 前記監視が蛍光を検出する工程を含む、請求項72に記載の方法。
- 前記監視が定常的である、請求項72に記載の方法。
- 複数の公知の分子マーカーを含む標準物質をロードする工程をさらに含む、請求項52に記載の方法。
- 前記電気泳動カセットの少なくとも一つの壁に配置されたマーキングを通り過ぎて移動するバンドを監視する工程をさらに含む、請求項52に記載の方法。
- 前記電気泳動カセットの少なくとも一つの壁に配置されたマーキングの勾配を通り過ぎて移動するバンドを監視する工程をさらに含む、請求項52に記載の方法。
- 前記マーキングの勾配がマーキングの直線勾配である、請求項80に記載の方法。
- 前記電界がパルス電界である、請求項52に記載の方法。
- 前記サンプルが、前記ローディングウェルにロードするより前に色素と結合される、請求項52に記載の方法。
- 前記サンプルが、前記ローディングウェルにロードされた後に色素と結合される、請求項52に記載の方法。
- 前記電気泳動カセットが色素をさらに含む、請求項52に記載の方法。
- 前記電気泳動ゲルがアガロースを含む、請求項52に記載の方法。
- 前記電気泳動ゲルがポリアクリルアミドを含む、請求項52に記載の方法。
- 前記電気泳動ゲルがアガロース及びポリアクリルアミドを含む、請求項52に記載の方法。
- 前記サンプルがDNA又はそのフラグメントを含む、請求項52に記載の方法。
- 前記サンプルがRNA又はそのフラグメントを含む、請求項52に記載の方法。
- 前記サンプルがペプチドを含む、請求項52に記載の方法。
- 前記サンプルがプロテイン又はそのフラグメントを含む、請求項52に記載の方法。
- 電界を印加する手段及びバンドの電気泳動での輸送の間複数のバンドを監視する手段を含む装置に、前記電気泳動カセットをロードする工程をさらに含む、請求項52に記載の方法。
- 前記工程d)からのバンドを、ローディングウェルへロードする工程をさらに含む、請求項52に記載の方法。
- 前記工程d)からのバンドを分析する工程をさらに含む、請求項52に記載の方法。
- 前記バンドが質量分析法により分析される、請求項43に記載の方法。
- 前記工程d)からのバンドを生化学的処理に用いる工程をさらに含む、請求項52に記載の方法。
- 前記生化学的処理がクローニング反応である、請求項97に記載の方法。
- 前記生化学的処理がライゲーション反応である、請求項97に記載の方法。
- それぞれのローディングウェルの幅が3mmから5mmであり、それぞれのローディングウェルの高さが1mmから2.5mmである、請求項52に記載の方法。
- それぞれの収集ウェルの幅が3mmから5mmであり、それぞれの収集ウェルの高さが1mmから2.5mmである、請求項52に記載の方法。
- それぞれのローディングウェルの容積が10μLから30μLの範囲である、請求項52に記載の方法。
- それぞれの収集ウェルの容積が10μLから30μLの範囲である、請求項52に記載の方法。
- i)少なくとも一枚の壁が少なくとも一列のローディング開口及び少なくとも一列の収集開口を含む、壁を有する分離チャンバと、
ii)前記分離チャンバに含まれる電気泳動ゲルと、
iii)それぞれのローディングウェルがローディング開口の下に配置され、それぞれの収集ウェルが収集開口の下に配置され、それぞれのローディングウェルが電気泳動レーンにおける少なくとも一つの収集ウェルと並んでおり、前記収集ウェルが液体で満たされている、前記電気泳動ゲル内の少なくとも一列のローディングウェル及び少なくとも一列の収集ウェルと、
iv)前記ウェル及び開口の列がアノード及びカソードの間に配置されている、少なくとも一つの前記アノード及び少なくとも一つの前記カソードを含む少なくとも二つの電極と、
v)少なくとも一列のローディング開口及び少なくとも一列の収集開口を含む壁上の少なくとも一つのマーキングであって、少なくとも一列の前記ローディング開口及び少なくとも一列の前記収集開口の間に配置される少なくとも一つのマーキングと、
を備える電気泳動ゲルから生体分子を単離する、電気泳動カセット。 - 電気泳動ゲルが、
i)少なくとも一枚の壁が少なくとも一列のローディング開口及び少なくとも一列の収集開口を含む、壁を有する分離チャンバと、
ii)前記分離チャンバに含まれる前記電気泳動ゲルと、
iii)それぞれのローディングウェルがローディング開口の下に配置され、それぞれの収集ウェルが収集開口の下に配置され、それぞれのローディングウェルが電気泳動レーンにおける少なくとも一つの収集ウェルと並んでおり、前記収集ウェルが液体で満たされている、前記電気泳動ゲル内の少なくとも一列のローディングウェル及び少なくとも一列の収集ウェルと、
iv)前記ウェル及び開口の列がアノード及びカソードの間に配置されている、少なくとも一つの前記アノード及び少なくとも一つの前記カソードを含む少なくとも二つの電極と、
v)少なくとも一列の前記ローディング開口及び少なくとも一列の前記収集開口を含む壁上の少なくとも一つのマーキングであって、少なくとも一列の前記ローディング開口及び少なくとも一列の前記収集開口の間に配置される少なくとも一つの前記マーキングと、
を備える、
電気泳動ゲルから生体分子を単離する電気泳動カセット及び電力供給装置を備える、キット。
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