JP6846404B2 - 生体適合性逆ミセル系内におけるシアノ架橋金属ナノ粒子のｉｎ ｓｉｔｕ調製 - Google Patents

生体適合性逆ミセル系内におけるシアノ架橋金属ナノ粒子のｉｎ ｓｉｔｕ調製 Download PDF

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Description

本発明は、少なくとも１つの金属塩前駆体をそれぞれ含有する少なくとも２つの逆ミセル系を混合することによって、金属ナノ粒子としてシアノ架橋配位ポリマーを生体適合性逆ミセル系中でin situで調製するための方法に関する。本発明はまた、生体適合性逆ミセル系を使用することによるこれらのナノ粒子の安定化に関する。この系は、さらなる安定剤を使用せずに、少なくともアシルグリセロール、ステロール、レシチン、エタノール及び水を含むナノリアクターとして、安定なシアノ架橋金属ナノ粒子を調製するための合成の一部を担う。
発明の背景
シアノ架橋配位ポリマーは、磁性分子系材料の重要なファミリーに属する。これらの材料は、それらの磁気（Holmes, 1999）、エレクトロクロミズム及びフォトクロミズム（Sato, 2003及びSato, 2007）、重金属封鎖（Torad, 2012）並びにスピンクロスオーバー効果（Papanikolaou, 2007）に対する幅広い関心を有する化合物を示す。
最も重要なシアノ架橋化合物の１つは、プルシアンブルー（ＰＢと称される）である。ＰＢは、フェロヘキサシアニドアニオンに連結した鉄（ＩＩＩ）を含み、１７００年代初期にDippel及びDiesbachによって発見されて以来、十分に研究されている。第１の構造仮説は、面心立方単位格子内における格子間金属イオンの発生を仮定している（Keggin, 1936）。この仮説から、Ｆｅ４［Ｆｅ（ＣＮ）６］３（式中、４つのフェロシアン化物は８面体であり、４つの鉄（ＩＩＩ）はシアン化物の窒素に結合されており、４／３の第二鉄イオンは８点の格子間に分布している）の４／３の式単位を含有する単位格子が導かれる。次いで、この面心立方単位格子は、Ludi及びBuserによって確認されたが、彼らは、ランダムに分布した空孔を有する、より複雑な構造をＸ線技術によって示した（Ludi, 1970及びBuser, 1972）。
中心の鉄を遷移金属カチオンによって置き換えて、プルシアンブルーアナログ（ＰＢＡと称される）として公知のシアノメタラート系配位ポリマーを形成し得る。ＰＢＡは、ニュートラル三次元ネットワークＭｐ［Ｍ’（ＣＮ）６］ｑ，ｎＨ２Ｏを含むバルク化合物をもたらす２つの水溶液（一方はヘキサシアノメタラートアニオン［Ｍ’（ＣＮ）６］ｑ−を含有し、他方は遷移金属ルイス酸Ｍｐ＋を含有する）の伝統的な混合によって合成され得る。
実際、この式は、固有の空孔の存在と、シアノメタラートアニオンの電荷に対抗するアルカリ金属カチオンの存在とを考慮していない。したがって、この式は、Ａ４ｘＭ４［Ｍ’（ＣＮ）６］４ｚ□４（１−ｚ），ｎＨ２Ｏ（式中、Ａは、アルカリ金属カチオン及び□空孔である）と記載されるべきである（Verdaguer, 2004）。上記式に加えて、ＣＮ基の数は、シアノメタラートアニオンに結合した遷移金属に応じて、４〜８の範囲であり得る。シアノ架橋配位ポリマーの特定の特性は、吸着拡散に応じて多くの原子によって充填され得るこれらの空孔の存在に起因し得る（Kaye, 2006）。
ＰＢ化合物の主な用途は、セシウムの除染に関する。チェルノブイリ事故の後、最初の処置は、汚染されたヒトにＰＢカプセル（３〜１０グラム）を経口投与することからなるものであった。ＰＢ化合物であるRadiogardase（登録商標）は、１０〜１００ミクロンの範囲のサイズを有する水相中のコロイド粒子であった。ＰＢ粒子は消化管内に留まり、セシウムをそれらの格子間空間中に吸収する。カリウム経路後のセシウムの再吸収（腸肝循環として公知である）を阻害するためには、大量のＰＢ粒子が消化管内に一定でなければならない。等モル濃度では、セシウム原子は、ナトリウム及びカリウムと比較して優れた（１９９７年においてIAEA - International Atomic Energy Agency -によれば１０３〜１０４倍優れた）効率でＰＢ粒子に連結される。その上、２０１０年においてHPA - Health Protection Agency-によれば、セシウム原子がＰＢの格子間空孔によって吸収されると、不溶性粒子は尿及び糞便中に排泄される。
しかしながら、大量のＰＢの使用は、
−子供の場合には低い処置効率（４３％）
−低カリウム血症：心臓病（Farina, 1991）；
−重度の便秘：腸内腔における危険なセシウム曝露（Stevens, 1974）；及び／又は
−（ＦＤＡによれば）腹痛
などの望ましくない副作用を引き起し得る。
したがって、これらの副作用を回避し、哺乳動物、非ヒト哺乳動物又はヒト哺乳動物、より具体的には子供のための除染処置を改善する新規治療が必要である。
最近、これらのシアノ架橋配位ポリマーは、ナノメートルスケールで研究されている。バルク化合物とは異なる新規な結晶特性により、ナノ粒子の調査が劇的に普及した（Klabunde, 2001及びLarionova, 2009）。無機金属ナノ粒子の光学的、電気的、磁気的、化学的及び生物医学的な特性は、サイズ、形状、組成及び構造に広く依存するので、徹底的な努力が合成手段に注がれている。例えば、ＰＢ及びＰＢＡは、ポリマー保護(Li, 2006)、ラングミュア−ブロジェット(Wang, 2007)、ゾルゲル(Guo, 1999)及びイオン液体(Clavel, 2006)などの新たな方法を用いて合成され得る。特に、水中で形成されたナノ粒子は、それらの成長を防いでそれらのサイズをコントロールするために、長鎖ポリマーを必要とする（Yamada, 2004及びChelebaeva, 2008）。
逆ミセル系の使用は、ナノ粒子調製方法の１つである。実際、有機相に含まれる水滴は均一な等方相を生成し、様々な無機ナノ構造の合成のためのナノリアクターを提供する。この方法は、粒子スケール及びナノ構造のコントロールを可能にし、前駆体の閉じ込めを提供して、マイクロエマルジョンそれ自体によって安定化されたナノ粒子を形成する（Pileni, 1997 and 2007及びQi, 2006）。
一般に、マイクロエマルジョンは、水、油及び両親媒性化合物を含む系であって、光学的に等方的かつ熱力学的に安定な液相である系である（Danielsson, 1981）。両親媒性化合物は、液体中で多種多様な組織構造、例えばそれぞれ水中油型（ｏ／ｗ）及び油中水型（ｗ／ｏ）のマイクロエマルジョンである直接ミセル及び逆ミセル、ベシクル並びにリオトロピック液晶に自己集合し得る。マイクロエマルジョンを形成するためには、必要なミセルのサイズ範囲及び安定性に応じて、補助界面活性剤と称される他の化合物を追加することができる（Saito, 1967）。ナノ粒子合成の場合、各成分の性質は、安定な系を与えるために重要である。
ｗ／ｏマイクロエマルジョン反応法によって合成されるナノ粒子の特徴は、水相含量、成分濃度、溶媒の性質、界面活性剤、並びにマイクロエマルジョンの安定性及び均一性を増強するための補助界面活性剤の追加の必要性などの多くの変数に依存する（Eastoe, 2006）。一般的なナノ粒子合成方法は、２つの逆ミセル系の混合物（両方とも金属前駆体を含有する）を含む（Lopez-Quintela, 2003）。ナノ粒子は、化合物濃度に応じて異なる速度のミセル間交換によって形成される。
マイクロエマルジョン製剤において使用される様々な界面活性剤の中で最も一般的なものは、イオン性界面活性剤、例えば二重鎖界面活性剤ナトリウムビス（２−エチルヘキシル）スルホスクシナート（ＡＯＴと称される）、セチルトリメチルアンモニウムブロミド（ＣＴＡＢと称される）及び非イオン性ポリエトキシル化界面活性剤である（Barnickel, 1990、Pileni, 1993及びLopez-Quintila, 2003b）。
特に、Vaucher及び共同研究者（Vaucher, 2000）は、ＡＯＴ及びイソオクタンを含む逆マイクロエマルジョン中のＰＢナノ粒子を合成した。暗所において、少量の（ＮＨ４）３［Ｆｅ（Ｃ２Ｏ４）３］及び（ＮＨ４）３［Ｆｅ（ＣＮ）６］等モル混合物をマイクロエマルジョンに室温で追加して、ｗ／ｏマイクロエマルジョンを形成した。次いで、シュウ酸イオンを徐々に光還元し、ＰＢナノ粒子を合成するために、マイクロエマルジョンを昼光に曝露した。主な問題は、ＰＢ結晶のサイズをコントロールする様々な要因を決定することである。このようにして、彼らは、１２〜５４nmで変動するサイズ範囲を有する立方ＰＢナノ粒子の存在を示す透過型電子顕微鏡（ＴＥＭと称される）画像を記載した。
その後、Li及び共同研究者（Li, 2004）は、同じ逆マイクロエマルジョン中のＰＢナノ粒子タイプを合成した。しかしながら、彼らは、ＰＢナノ粒子を保護するためにポリマーを使用して、より優れたサイズコントロールを可能にした。彼らは、イソオクタン中のＡＯＴを使用して進行し、第１に、ＦｅＣｌ２及びポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）の水溶液を油相に追加し、第２に、Ｋ３Ｆｅ（ＣＮ）６の水溶液を別の油相に追加した。次いで、等容量の先の２つのマイクロエマルジョンを混合した。その結果、ＰＶＰは、ＰＢの核形成及び成長のための立体安定剤として作用したことが示された。彼らは、２０〜２７nmのサイズ範囲を有するナノ粒子を特性評価した。
残念なことに、ＡＯＴ及びＣＴＡＢ界面活性剤は、水生生物、生きている被験体に対して高い毒性を生じさせ、環境を汚染する（Okumura, 1998）。逆ミセル系では、界面活性剤が毒性を有するだけではなく、油及び炭化水素などの分散液も実行可能な生体適合性を有しない。逆ミセル系において使用される主な油は、ヘキサン、オクタン及びデカンなどの長鎖炭素を含む（Fletcher, 1987、Atik, 1981、Pileni, 1997及びEastoe, 2006）。
Nesamony及び共同研究者(Nesamony, 2005)は、ミリスチン酸イソプロピル溶媒（ＩＰＭ）及びジオクチルスルホコハク酸ナトリウム界面活性剤（ＤＯＳＳ）などの薬学的に許容し得る成分を使用して、抗菌用途のための油中水型マイクロエマルジョン中のスルファジアジン銀のナノ結晶を形成した。２つの逆ミセル相を調製し（第１のものはＡｇＮＯ３を含有し、第２のものは水滴中にスルファジアジンナトリウム（ＮａＳＤ）を含有する）、一緒に混合して、室温でスルファジアジン銀（ＡｇＳＤ）ナノ粒子を形成する。著者らは、その溶解度よりも高い濃度を有するサブミクロンナノ粒子を生産した。しかしながら、ナノ粒子は本質的に不安定であり、著者らは、許容し得るコーティング／キャッピング試薬を使用して、粒子成長を抑制することを提案している。
Ma及び共同研究者(Ma, 2010)は、脂質及びポリエチレングリコールを含む両親媒性ミセル系を使用して、カプセル化されたマンガン酸化鉄を形成した。実際、ＭｎＦｅ２Ｏ４ナノ結晶は、高温の有機相中で単独で合成される。次いで、これらのナノ結晶を脂質−ポリエチレングリコール相に分散させ、超音波処理している水に混合物を追加する。しかしながら、ナノ粒子は、ミセルのコア内に水相を有しない両親媒性脂質界面活性剤によってカプセル化され、それが静脈内投与される。
Noritomi及び共同研究者(Noritomi, 2013)は、アルキルグルコシドなどのスクロース脂肪酸エステルの逆ミセルを使用して、銀ナノ粒子を調製した。ナノ粒子の調製は、同じ含水量で等容量の２つの逆ミセル相（第１の相はＡｇＮＯ３を含有し、第２の相はヒドラジン又は水素化ホウ素ナトリウムを含有する）を室温で混合することからなるものであった。彼らは、室温で少なくとも１カ月安定した１４nmの平均直径を有するナノ粒子を観察した。しかしながら、この研究では、同じ形状及びサイズを有する単分散ナノ粒子を合成するために、多くのパラメータ、例えば温度、含水量及び反応物質の種類の影響が大きいことが強調された。
上記引用文献では、マイクロエマルジョン内における安定なナノ粒子の調製に対するいくつかのパラメータの影響が強調されている。また、ナノ粒子の所望の性質に応じて、安定な逆ミセル系を得ることが困難であることも確認されている。
さらに、シアノ架橋金属ナノ粒子を含む生体適合性マイクロエマルジョンはこれまで記載されていない。このようなナノ粒子は、最終的な用途に応じて他の方法によって合成された。
例えば、Huang及び共同研究者（米国特許出願公開第２０１０／０２５４９１２号）は、水溶液中で合成されてカルボン酸によって安定化された磁気共鳴イメージング（ＭＲＩと称される）剤としてＰＢナノ材料を使用した。この参考文献は、全てのＰＢＡ及びガドリニウムドープＰＢナノ粒子の使用に関するものである。塩化鉄及び塩化ガドリニウムを含有する水溶液をヘキサシアノ鉄酸塩の水溶液に徐々に追加することによって、前記ナノ粒子の合成は実施された。２つの水溶液は、ナノ粒子のサイズ（５〜３００nmのサイズ範囲）をコントロールしてナノ粒子の凝集を防止するためにカルボキシル表面キャッピング剤として使用されるクエン酸を含有する。
同様の方法で、Perrier及び共同研究者は、水溶液中で合成されて有機ポリマー化合物で安定化されたナノサイズシアノ架橋粒子の核磁気共鳴（ＮＭＲと称される）緩和能を調査した（Perrier, 2013）。適切な量の安定剤を含有するＫ３［Ｍ（ＣＮ）６］の水溶液を、同じ量の安定剤を含有するＬｎ（ＮＯ３）３，ｎＨ２Ｏ溶液と混合した。使用された安定剤は、ＰＥＧ型ポリマー（これは生体適合性と考えられ、２〜３．４nmのサイズ範囲を有するシアノ架橋金属ナノ粒子の形成を可能にする）を主に含む。
より最近では、Zhu及び共同研究者(Zhu, 2015)は、光学特性及び磁気特性を示すために、ＰＥＧ化化合物を使用してＭｎドープＰＢの合成を研究した。彼らは、ＰＢ中のＭｎの存在が腫瘍イメージングを増強することを見出した。
これら３つの文献には、水溶液による静脈内投与に適切な生体適合性有機化合物が開示されている。
Grandjean及び共同研究者（国際公開公報第２０１０／１３３６８９号）は、多孔質ガラス媒体の孔コアに化学的に結合した有機基上のグラフトとして、固体のヘキサシアノメタラートナノ複合材料及びオクタシアノメタラートナノ複合材料を調製した。彼らはまた、官能化支持膜などの別の媒体を使用して、シアノ架橋金属ナノ粒子をグラフト化した（国際公開公報第２０１４／０４９０４８号）。両特許は、汚染された核廃液からのセシウムの回収に関するものであるので、ヒトの除染に容易に転用され得ない。
上記引用文献では、サイズコントロールされたシアノ架橋金属ナノ粒子、又はグラフト化シアノ架橋金属ナノ粒子を取得可能なマトリックスを調製するために、安定剤が必要であることが立証された。
したがって、リアクター媒体として作用する生体適合性マイクロエマルジョン内で調製及び安定化されたシアノ架橋金属ナノ粒子が必要である。
加えて、媒体は、有機組織へのナノ粒子の輸送を可能するものでなければならない。
本出願人は、活性物質としてアシルグリセロール、リン脂質又はスフィンゴ脂質及び金属カチオンをベースとする逆ミセル系の使用を開示している（国際公開公報第２０１１／１１７３３３号）。前記逆ミセル系は、粘膜及び細胞膜を通過することができるので、有効成分として金属カチオンをターゲット部位に誘導することを可能にする。
実際、非毒性シアノ架橋金属ナノ粒子を含む生体適合性逆ミセル系であって、経粘膜送達を可能にし、及び／又は経口投与を可能にする生体適合性逆ミセル系の使用は、この時点ではまだ存在しない。
驚くべきことに、本出願人は、シアノ架橋金属ナノ粒子は逆ミセル系中で調製し得るので、それらの調製及び使用中に安定剤又は保護剤として作用する有機ポリマーを必要とせずに、ターゲット組織又は部位（例えば、胃腸管）に効率的に運ばれ得ることを立証した。逆ミセル系は、in situで調製されたシアノ架橋金属ナノ粒子のための反応媒体及び保護シェルの両方として作用して、６カ月間を超える安定化を可能にする。次いで、逆ミセル系は、シアノ架橋金属ナノ粒子を所望の細胞及び／又は器官に送達するためのベクターとして作用する。
発明の概要
本発明の第１の目的は、シアノ架橋金属ナノ粒子を含む生体適合性逆ミセル系を調製するための方法であって、以下：
（ｉ）少なくとも１つのアシルグリセロール、ステロール、レシチン、エタノールと、少なくとも１つの金属塩を含む水溶液と、水とを含む少なくとも１つの生体適合性逆ミセル系と、
（ｉｉ）少なくとも１つのアシルグリセロール、ステロール、レシチン、エタノールと、シアノメタラート塩を含む水溶液と、水とを含む生体適合性逆ミセル系とを混合することからなる工程を含む方法である。
本発明の別の目的は、少なくとも１つのアシルグリセロール、ステロール、レシチン、エタノールと、シアノ架橋金属ナノ粒子と、水とを含む生体適合性逆ミセル系であって、安定剤を含まない生体適合性逆ミセル系である。より具体的には、本発明の生体適合性逆ミセル系に含まれるシアノ架橋金属ナノ粒子は、有利には、特定の安定剤を必要とせずに、逆ミセル系によって安定化される。
本発明の別の目的は、少なくとも１つのアシルグリセロール、ステロール、レシチン、エタノールと、シアノ架橋金属ナノ粒子と、水とを含む生体適合性逆ミセル系であって、安定剤を含まず、該生体適合性逆ミセル系又はそれに含まれるシアノ架橋金属ナノ粒子が、造影剤及び／又は診断剤として使用される生体適合性逆ミセル系である。
本発明の別の目的は、少なくとも１つのアシルグリセロール、ステロール、レシチン、エタノールと、シアノ架橋金属ナノ粒子と、水とを含む生体適合性逆ミセル系であって、安定剤を含まず、該生体適合性逆ミセル系又はそれに含まれるシアノ架橋金属ナノ粒子が、放射性核種カチオン及び／又は金属カチオンによる置換及び／又はその封鎖に使用される生体適合性逆ミセル系である。
本発明の別の目的は、本発明の生体適合性逆ミセル系を含む組成物である。
逆ミセル系内のＰＢナノ粒子のin situ合成のための工程の概略図。ＨＯＢＰは均一な油性相を表し、ＭＳＰは金属塩前駆体を表し、ＷＰは水相を表し、ＣＭＳＰはシアノメタラート塩前駆体を表し、ＲＭＳは逆ミセル系を表し、ＣＢＭＮＰはシアノ架橋金属ナノ粒子を表す。 （１）逆ミセル系中のＦｅ（ＩＩ）−ＣＮ−Ｆｅ（ＩＩＩ）ナノ粒子（サンプルＡ）及び（２）逆ミセル系中のフェロシアン化物前駆体（サンプルＡ６）のＦＴＩＲ（フーリエ変換赤外）スペクトル （１）フェロシアン化物前駆体（サンプルＡ６）、（２）Ｆｅ（ＩＩＩ）−ＣＮ−｛Ｍｎ（ＩＩ），Ｚｎ（ＩＩ）｝ナノ粒子（サンプルＥ）、（３）Ｆｅ（ＩＩＩ）−ＣＮ−Ｍｎ（ＩＩ）（サンプルＣ）及び（４）Ｆｅ（ＩＩＩ）−ＣＮ−Ｚｎ（ＩＩ）（サンプルＢ）（これらは全て、逆ミセル系内にある）のＦＴＩＲスペクトル （１）ＰＢナノ粒子（サンプルＡ）、（２）フェロシアン化物前駆体（サンプルＡ６）、（３）塩化鉄前駆体（サンプルＡ３）（これらは全て、逆ミセル系内にある）及び（４）サンプルＡ７のＵＶ可視スペクトル 逆ミセル系内にＰＢナノ粒子を含むサンプルＡのＴＥＭ（透過型電子顕微鏡）画像 （１）本発明のin situ調製ＰＢナノ粒子及び（２）市販のＰＢを含有する逆ミセル系のＣｓ＋等温線。 Ｃｓ＋初期用量０．５mg/ラットと比較した、４つの群の尿及び糞便中の４日間の％回収Ｃｓ＋（ラット ４匹の平均）：未処置、サンプルＬ（強制飼養）、サンプルＭ（口腔）及びサンプルＬ（直腸）は、それぞれ累積除染ＰＢ用量０mg、８mg、４mg、２mgである（平均に対する標準誤差は、エラーバーによって表される） コントロール群と比較した、強制飼養によって処置した７つの群の心臓におけるＣｓ＋除染の％有効性（ラット ５匹の平均）：サンプルＯ、Ｐ、Ｑ及びＲは、それぞれ累積除染ＰＢ用量４mg、８mg、１６mg、８０mg/ラットであり、サンプルＳ、Ｔ及びＵは、それぞれ累積除染ＰＢ用量４mg、８mg、１６mg/ラットである（平均に対する標準誤差は、エラーバーによって表される） Ｃｓ＋初期用量０．０５mg/ラットと比較した、９つの群の糞便中の２日間及び４日間の％回収Ｃｓ＋（ラット ５匹の平均）：水、サンプルＯ、Ｐ、Ｑ及びＲは、それぞれ累積除染ＰＢ用量４mg、８mg、１６mg、８０mg/ラットであり、サンプルＮ、Ｓ、Ｔ及びＵは、それぞれ累積除染ＰＢ用量０mg、４mg、８mg、１６mg/ラットである（平均に対する標準誤差は、エラーバーによって表される）
発明の詳細な説明
本発明の第１の目的は、生体適合性逆ミセル系内でナノ粒子としてシアノ架橋配位ポリマーをin situで調製するための方法である。
「シアノ架橋配位ポリマー」という用語は、逆ミセル系内の（ＣＮリガンドを含む）シアノ架橋ネットワークの成長によって得られる金属カチオンＭｐ＋及びシアノメタラートアニオン［Ｍ’（ＣＮ）ｎ］ｑ−の連続集合の反復を指す。一般に、前記ポリマーは、ポリマーのネットワークを形成する。ＣＮリガンドによって金属前駆体Ｍが別の金属前駆体Ｍ’に連結されて、サブユニットＭ’−ＣＮ−Ｍを形成する場合、このポリマーは配位ポリマーと称され、このようなサブユニットは、反応媒体中で多数回反復される。
本方法は、シアノ架橋金属ナノ粒子を含む生体適合性逆ミセル系を調製するための方法であって、以下：
（ｉ）少なくとも１つのアシルグリセロール、ステロール、レシチン、エタノールと、前駆体として少なくとも１つの金属塩を含む水溶液と、水とを含む少なくとも１つの生体適合性逆ミセル系と、
（ｉｉ）少なくとも１つのアシルグリセロール、ステロール、レシチン、エタノールと、前駆体として少なくとも１つのシアノメタラート塩を含む水溶液と、水とを含む生体適合性逆ミセル系とを混合することからなる工程を含む。
本発明によれば、金属塩は、対アニオンとして塩素アニオン又は硝酸アニオンと、水分子とを一般に有する金属カチオンを指す。好ましくは、対アニオンは、塩化物である。金属カチオン（Ｍｐ＋）は、遷移金属及びランタニドカチオンの中から選択され得る。金属カチオンは、１つ以上の正電荷（ｐ＋）を有し得、ｐは一般に、１〜１０の整数であり、より具体的にはｐは、２、３、４又は５であり、対アニオン及び水分子の数は、正電荷の数に依存する。
使用される遷移金属カチオン（Ｍと称される）は、全ての既存の遷移金属カチオンの中から選択され得る。本発明にしたがって使用される遷移金属カチオンは、鉄、亜鉛及びマンガンである。好ましくは、本発明において使用される遷移金属カチオンは、鉄である。
ランタニドカチオン（Ｍとも称される）は、ガドリニウム（Ｇｄ）、テルビウム（Ｔｂ）又はイッテルビウム（Ｙｂ）を含む全ての既存のランタニドカチオンの中から選択され得る。より具体的には、本発明にしたがって使用されるランタノイドカチオンは、ガドリニウムある。
より具体的には、金属カチオン（Ｍｐ＋）は、鉄（Ｆｅ２＋又はＦｅ３＋）、亜鉛（Ｚｎ２＋）、マンガン（Ｍｎ２＋）又はガドリニウム（Ｇｄ３＋）（これらはそれぞれ、ＦｅＣｌ２，４Ｈ２Ｏ；ＦｅＣｌ３，６Ｈ２Ｏ；ＺｎＣｌ２，４Ｈ２Ｏ；ＭｎＣｌ２，４Ｈ２Ｏ；又はＧｄ（ＮＯ３）３，６Ｈ２Ｏを形成する）であり得る。
少なくとも１つの金属塩を含む水溶液は、１つ、２つ又は３つの金属塩（すなわち、１つの金属塩又は金属塩の混合物）を含み得る。
本発明によれば、シアノメタラート塩（Ａｌｋ＋ ｘ［Ｍ’（ＣＮ）ｎ］ｑ−）は、ＣＮリガンド及びアルカリカチオン（Ａｌｋ＋）を一般に有する金属カチオン（Ｍ’）を指す。金属カチオン（Ｍ’）は、それに結合した数のＣＮリガンド及びアルカリカチオンをもたらす遷移金属カチオンの中から選択され得、ｑは一般に、ｘに等しい整数であり、より具体的にはｑは、２、３又は４であり；ｎは一般に、整数であり、より具体的にはｎは、４、６又は８であり；ｘは一般に、整数であり、より具体的にはｘは、２、３又は４である。
より具体的には、金属カチオン（Ｍ’）は、鉄（Ｆｅ２＋又はＦｅ３＋）、コバルト（Ｃｏ２＋又はＣｏ３＋）、ニッケル（Ｎｉ２＋）、モリブデン（Ｍｏ４＋、Ｍｏ５＋）又はタングステン（Ｗ４＋）であり得る。Ｍ’は好ましくは、鉄である。
アルカリカチオン（Ａｌｋ＋）は、（除染の場合には）リチウム（Ｌｉ＋）、ルビジウム（Ｒｕ＋）、ナトリウム（Ｎａ＋）、カリウム（Ｋ＋）又はセシウム（Ｃｓ＋）であり得る。シアノ架橋金属ナノ粒子が医療分野及び医薬品分野において使用される場合、ナトリウムカチオンがより好ましい。
式Ａｌｋ＋ ｘ［Ｍ’（ＣＮ）ｎ］ｑ−は、以下：Ｎａ４［Ｆｅ（ＣＮ）６］、Ｎａ３［Ｆｅ（ＣＮ）６］、Ｎａ２［Ｎｉ（ＣＮ）４］、Ｎａ４［Ｍｏ（ＣＮ）８］又はＮａ４［Ｗ（ＣＮ）８］であり得る。前記式中、ナトリウムは、カリウムによって置き換えられ得る。
したがって、本発明の方法の混合は、逆ミセル系中のシアノ架橋金属ナノ粒子のin situ合成を可能にする。
一般に、生体適合性逆ミセル系（ｉ）及び（ｉｉ）中の金属塩及びシアノメタラート塩の量は、大幅に変動し得る。混合すべき生体適合性逆ミセル系（ｉ）及び（ｉｉ）の量もまた、大幅に変動し得る。特定の実施態様では、前記（ｉ）及び（ｉｉ）の生体適合性逆ミセル系の混合は、金属塩及びシアノメタラート塩が等モル量になるように行われる。
特定の実施態様によれば、（ｉ）の少なくとも１つの生体適合性逆ミセル系は、１つ以上の（例えば、２つ又は３つの）金属塩を含み得る。
他の実施態様によれば、（ｉ）の少なくとも１つの生体適合性逆ミセル系は、互いに異なる金属塩をそれぞれ含む１つ、２つ又は３つの生体適合性逆ミセル系であり得る。したがって、少なくとも１つの金属塩を含む生体適合性逆ミセル系（ｉ）は、少なくとも１つのシアノメタラート塩を含む生体適合性逆ミセル系（ｉｉ）と一緒に混合され得る。
「生体適合性」系という用語は、生きている細胞、組織、器官又は系との適合性を指す；より具体的には、それは、哺乳動物、より好ましくはヒト哺乳動物の免疫系による傷害、毒性又は拒絶のリスクがない系を指す。
混合、より具体的には時間及び温度の条件は、当業者によって容易に決定され得る。慣例では、温度は、大気圧下において室温（１８〜２５℃）〜４０℃で変動し得る。混合の時間は、均一な逆ミセル系が得られるようなもの、より具体的には視覚的に透明な製剤が得られるようなものである。
特定の実施態様によれば、混合の前に、以下の工程：
工程１：各金属前駆体を水、好ましくは脱イオン水に溶解することによって、少なくとも１つの金属前駆体（すなわち、少なくとも１つの水溶液は、少なくとも１つの金属塩化合物及び他の１種の少なくとも１つのシアノメタラート塩を含む）をそれぞれ含有する水溶液を別個に調製すること、
工程２：少なくとも１つのアシルグリセロール、ステロール、レシチン及びエタノールと、場合により水とを含む均一な油性相内において、工程１によって得られた各水溶液を可溶化して、均一な逆ミセル系を形成すること（ここで、前記均一な油性相は、好ましくは同じものである（質及び量に関して。すなわち、同じ量の同じ化合物））
を含む方法によって、前記（ｉ）及び（ｉｉ）の生体適合性逆ミセル系を調製し得る。
工程１の好ましい実施態様によれば、金属前駆体を適切な濃度で水に溶解して、逆ミセル系において所望の最終ナノ粒子濃度を得る。したがって、当業者であれば、所望の最終ナノ粒子濃度を得るために、溶解すべき金属前駆体の量を評価するであろう。水溶液は、溶媒が実質的に水である溶液として定義される。水性という用語は、水との関係、水との関連、水との類似又は水への溶解として定義される。
より具体的には、工程２によって得られた逆ミセル系は、本発明の方法にしたがってその後一緒に混合される生体適合性逆ミセル系（ｉ）及び（ｉｉ）であり、好ましくは、生体適合性逆ミセル系（ｉ）の重量は、生体適合性逆ミセル系（ｉｉ）の量と同じものである。前記生体適合性逆ミセル系は、好ましくは、各生体適合性逆ミセル系において異なる金属前駆体を除いて同じものである（質及び量に関して。すなわち、同じ量の同じ化合物）。
より具体的には、本発明の方法による混合は、金属前駆体の相互作用を可能にするので、得られた逆ミセル系内におけるin situシアノ架橋金属ナノ粒子形成を誘導する。
工程（２）において使用される本発明の均一な油性相は、当技術分野で公知の任意の技術によって調製され得る。より具体的には、それらは、以下の方法によって得られ得る：
（ａ）（ｉ）アシルグリセロール、好ましくはアシルグリセロールと、（ｉｉ）レシチンと、（ｉｉｉ）エタノールと、（ｉｖ）ステロールと、（ｖ）場合により水、好ましくは精製水とを接触させること、
（ｂ）工程（ａ）によって得られた混合物を４０℃以下で、均一な油性相の形成を達成するために十分な時間撹拌すること。
撹拌のパラメータ、より具体的には機械的撹拌の継続時間及び速度は、当業者によって容易に決定され得、実験条件に依存し得る。慣例では、これらのパラメータは、均一な油性相が得られるようなものである；速度は、視覚的に透明な製剤の形成を可能にするように決定され、撹拌の継続時間は、視覚的に透明な製剤が得られた数分（例えば、２分、３分、４分、５分又は６分）後に撹拌が停止され得るようなものである。
「均一な」相又は逆ミセル系という用語は、視覚的に透明な系を指す。
特定のシアノ架橋金属ナノ粒子のin situ調製の概要は、図１に示されている。
一般に、本発明の方法は、特に指定がない限り、室温（すなわち、１８℃〜２５℃）〜４０℃で行われる。
均一な油性相又は逆ミセル系の成分
−アシルグリセロール
本発明の逆ミセル系又は均一な油性相において使用されるアシルグリセロールは、動物の大部分、より好ましくは植物から単離され得る。
本発明にしたがって使用されるアシルグリセロールとしては、以下の式（Ｉ）：ＣＨ２（ＯＲ１）−ＣＨ（ＯＲ２）−ＣＨ２（ＯＲ３）（式中：
○Ｒ１は、１４〜２４個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖の不飽和脂肪酸のアシル残基であり；
○Ｒ２は、２〜１８個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐鎖の不飽和脂肪酸のアシル残基であるか、又は水素原子であり；
○Ｒ３は、１４〜２４個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐鎖の不飽和脂肪酸のアシル残基であるか、又は水素原子である）のモノアシルグリセロール、ジアシルグリセロール及びトリアシルグリセロールが挙げられる：。
特定の実施態様によれば、Ｒ１又はＲ３、好ましくはＲ１及びＲ３の一方のみ、特にＲ１のみが、オレイン酸（Ｃ１８：１［ｃｉｓ］−９）のアシル残基を表す。
特定の態様によれば、Ｒ２は、１８個の炭素原子を有し、好ましくはＲ２は、オレイン酸残基（オレオイル基）、二重結合に関するその位置異性体の一方（ｃｉｓ−６，７，９，１１及び１３）、又はそのイソ分岐鎖異性体の一方である。
別の特定の態様によれば、Ｒ１は、オレオイル基を表す。
別の特定の態様によれば、Ｒ３は、水素原子である。
別の特定の態様によれば、Ｒ２及びＲ３は、水素原子である。
一般規則として、高濃度のオレイン酸を含有する油は、本発明にしたがって有用なアシルグリセロール供給源として選択されるであろう。このような油は、通常、本発明にしたがって有用な高い割合のアシルグリセロールを含有する。
本発明の特定の態様によれば、好ましいアシルグリセロールは、グリセロール１−モノオレアート及びグリセロール１，２−ジオレアートである。
また、それら（より具体的には、その後に要求される用途において最も活性であることが見出されたもの）の一定数は市販されている。例えば、グリセロールモノオレアート４０は、約３２〜５２％のモノアシルグリセロール、３０〜５０％のジアシルグリセロール、５〜２０％のトリアシルグリセロールを含有し、薬学的に認められている（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ（８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ），ＵＳＰ ２５／ＮＦ２０及びＪａｐａｎｅｓｅ Ｓｔａｎｄａｒｄ ｏｆ ｆｏｏｄ Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ）。
このような製品は、例えば、Gattefosse CompanyによってPeceol（登録商標）の名称で市販されている。特に、Peceol（登録商標）は、およそ４５．３wt%のモノアシルグリセロール、およそ４４．５wt%のジアシルグリセロール及びおよそ８．６wt%のトリアシルグリセロールを含み得る（Peceol（登録商標）のアシル画分は、オレオイルから主に構成されており、通常、アシル残基のおよそ８０％はオレオイル画分である）。
本明細書によれば、アシルグリセロールの重量は、アシルグリセロールを通常含有する混合物、又はアシルグリセロールと前記アシルグリセロール由来のグリセロール及び脂肪酸との混合物、例えば上記Peceol（登録商標）の総重量に対応する。
アシルグリセロールは天然化合物であり、再生可能な植物源から抽出及び／又は生成され得る。したがって、それらの使用は、合成化合物と比較した場合、生体適合性及び環境問題の点で有利である。
−ステロール
本発明の均一な油性相又は逆ミセル系は、少なくとも１つのステロール、好ましくは天然ステロール、例えばコレステロール又はフィトステロール（ベジタブルステロール）を含む。シトステロール及びコレステロールは、本発明の逆ミセル系中に存在し得る好ましいステロールである。好ましくは、逆ミセル系は、シトステロール、例えばβ−シトステロールを含む。
シトステロール及びコレステロールは市販されている。より具体的には、大豆から抽出された市販のシトステロールが使用され得る。このような製品では、一般に、シトステロールは製品の５０〜８０重量％に相当し、カンペステロール及びシトスタノールとの混合物では、それぞれ１５％ほどの各割合で一般に見られる。トールオイルと称される様々なマツから抽出された市販のシトステロールも使用され得る。
−レチシン
本発明では、「レチシン」という用語は、ホスファチジルコリンを指す。ホスファチジルコリンは、１，２−ジアシル−グリセロ−３−ホスホコリン又はＰｔｄＣｈｏとしても公知である。それは、コリン、リン酸基、グリセロール及び２つの脂肪酸から構成される。実際のところ、それは、脂肪酸組成が分子によって異なる分子基である。ホスファチジルコリンは、２０〜９８％の重量分率でホスファチジルコリンを含有する市販のレチシンから得られ得る。本発明にしたがって好ましく使用されるレチシンは、（Cargill Companyによって販売されている）Epikuron 200（登録商標）であり、９０％超の割合でホスファチジルコリンを含有する。好ましくは、本発明にしたがって使用されるレチシンは、９２重量％超のホスファチジルコリンを含む。
−水
本発明の逆ミセル系又は均一な油性相の調製に有用な水は、好ましくは、精製水、より具体的には蒸留水又は脱イオン水である。
−エタノール
エタノールは、一般に、エタノールの量が約９０容量％〜９９容量％のエタノール水溶液である。より特定の実施態様では、エタノールは、純アルコール又は無水アルコール（これは、低含水量のエタノールを指す）である。様々なグレードがあり、最大含水量は１％〜数百万分率（ｐｐｍ）レベルの範囲である。純エタノールが好ましい。
−他の成分
本発明の均一な油性相又は逆ミセル系は、任意の種類のさらなる成分を含み得る。さらなる成分の例として、エタノールとは異なるアルコールが挙げられ得る。
本発明の均一な油性相又は逆ミセル系は、上記エタノールに加えて、少なくとも１つのアルコールを含み得る。本発明にしたがって使用され得るアルコールは、好ましくは、２〜４個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のモノアルコールである。アルコールの例は、１−プロパノール、２−プロパノール、２−メチル−１−プロパノール、イソプロパノール及びそれらの任意の混合物である。本発明にしたがって使用され得るポリオールは、好ましくは、グリセロール及びプロピレングリコールである。
均一な油性相又は逆ミセル系の成分の量は、例えば、該相又は系の所望の特性、例えば外観、粘度及び／又は活性剤の濃度に応じて、当業者によって適合され得る。
好ましい実施態様では、均一な油性相又は逆ミセル系は、リポソームを含まない。
本発明の一実施態様では、均一な油性相又は逆ミセル系の成分の量は、逆ミセル系（ｉ）又は（ｉｉ）が液体の形態になるように調整される。当業者であれば、例えば、所望の特性、例えば外観、粘度及び／又は活性剤の濃度を有する液体を得るために、均一な油性相又は逆ミセル系中のアシルグリセロール、ステロール、レチシン、エタノール及び水の相対量を適合し得る。
本発明にしたがって得られるシアノ架橋配位ポリマーを含む生体適合性逆ミセル系の異なる成分の量の例は、以下のものである：
逆ミセル系は、１〜３０％、好ましくは１〜２０％、特に５〜１５％のレチシンを含み得る。
逆ミセル系は、０．１〜２０％、好ましくは１〜２０％、特に５〜１５％の水を含み得る。
逆ミセル系は、５〜２０％、好ましくは５〜１５％のアルコール（エタノールを含む）を含み得る。
逆ミセル系は、０．８２〜４．５％のステロールを含み得る。
逆ミセル系は、３０〜９０％、好ましくは５０〜９０％のアシルグリセロールを含み得る。
また、得られるシアノ架橋配位ポリマーの量は、より具体的には、系内の水及びシアノ架橋配位ポリマーの総量の０．４〜１０重量％、好ましくは０．５〜５重量％、より好ましくは１〜２重量％である。
当業者であれば、上記に示されている好ましい量を得るために、前駆体を含む生体適合性逆ミセル系中の、したがって金属前駆体を含有する均一な油性相及び水溶液中の成分の量を適合する。
特に指定がない限り、本発明において使用されるパーセンテージの値は、指定の化合物又は逆ミセル系の総重量に対する重量パーセンテージである。
本発明では、「逆ミセル系」という用語は、油相に分散された水相を含む逆相系に関する。好ましくは、逆相系は逆ミセル又は逆膨潤ミセルを含むが、これらは、高次の等方性構造、例えば油中水型マイクロエマルジョン又は異方性構造、例えば立方体組織、六方体組織、ラメラ組織で組織化され得る。
シアノ架橋金属ナノ粒子
上記本発明の方法によれば、シアノ架橋金属ナノ粒子がこのようにして得られる。
本発明の別の実施態様は、少なくとも１つのアシルグリセロール、ステロール、レシチン、エタノールと、シアノ架橋金属ナノ粒子と、水とを含む生体適合性逆ミセル系であって、安定剤を含まない生体適合性逆ミセル系に関する。より具体的には、生体適合性逆ミセル系は、本明細書に詳述される方法によって得られ得る。
上記のように、シアノ架橋配位ポリマーを含む生体適合性逆ミセル系（より具体的には、本発明にしたがって得られる）の異なる成分の量は、以下のものである：
逆ミセル系は、１〜３０％、好ましくは１〜２０％、特に５〜１５％のレシチンを含み得る。
逆ミセル系は、０．１〜２０％、好ましくは１〜２０％、特に５〜１５％の水を含み得る。
逆ミセル系は、５〜２０％、好ましくは５〜１５％のアルコール（エタノールを含む）を含み得る。
逆ミセル系は、０．８２〜４．５％のステロールを含み得る。
逆ミセル系は、３０〜９０％、好ましくは５０〜９０％のアシルグリセロールを含み得る。
また、得られるシアノ架橋配位ポリマーの量は、より具体的には、系内の水及びシアノ架橋配位ポリマーの総量の０．４〜１０重量％、好ましくは０．５〜５重量％、より好ましくは１〜２重量％である。
別の実施態様によれば、本発明は、本発明の生体適合性逆ミセル系を含む組成物に関する。組成物は、より具体的には、以下に詳述されるように治療又は診断において使用するためのものである。特定の実施態様によれば、本発明は、薬学的に許容し得る担体又は支持体中に本発明の生体適合性逆ミセル系を含む医薬組成物を扱う。
より具体的には、本発明の生体適合性逆ミセル系に含まれるシアノ架橋金属ナノ粒子は、有利には、逆ミセル系によって安定化される。それに含まれるシアノ架橋金属ナノ粒子は、特定の安定剤を必要としない。
「安定剤」という用語は、ナノ粒子、より具体的にはそれらのサイズを安定化することができる化合物を指す。一般に、安定剤は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はその誘導体、例えばＰＥＧ−アミン又は多糖、例えばデキストランである。
本発明では、「シアノ架橋金属ナノ粒子」という用語は、上記に定義される金属カチオンＭｐ＋及びシアノメタラートアニオン［Ｍ’（ＣＮ）ｎ］ｑ−を含むナノ粒子（好ましくは、ナノ粒子のサイズは１〜１００nmの範囲である）の形態の化合物を指す。
より具体的には、シアノ架橋金属ナノ粒子は、Ｍ’−ＣＮ−Ｍ結合、例えばＦｅ（ＩＩ）−ＣＮ−Ｆｅ（ＩＩＩ）、Ｆｅ（ＩＩ）−ＣＮ−Ｚｎ（ＩＩ）、Ｆｅ（ＩＩ）−ＣＮ−Ｍｎ（ＩＩ）、Ｆｅ（ＩＩ）−ＣＮ−［Ｆｅ（ＩＩＩ）Ｍｎ（ＩＩ）］又はＦｅ（ＩＩ）−ＣＮ−［Ｍｎ（ＩＩ）Ｚｎ（ＩＩ）］を含む。
ＣＮ基の数は、使用される遷移金属カチオンに応じて４〜８の範囲であり得る。例えば、ＣＮ基の数は、ニッケルでは４、鉄では６及びモリブデンでは８である。
「シアノ架橋金属ナノ粒子」という用語はまた、ＰＢ及びＰＢＡを含む。
本発明の「ナノ粒子」という用語は、より具体的には、サイズが０．５〜２０nm、好ましくは１〜１０nm、より好ましくは１〜５nmの範囲の粒子を指す。例えば、本発明にしたがって調製された逆ミセル系中のＰＢナノ粒子（実施例のサンプルＡを参照のこと）は、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭと称される）画像によって識別可能であり、より具体的には、本発明のＰＢナノ粒子は、１〜５nmの範囲の直径を有すると言うことができる。
用途
シアノ架橋配位ポリマーは、イオン性化合物の収着を可能し得る固有の空孔を有する。これらのイオン性化合物の性質に応じて、用途は極めて広い。
本発明の目的の１つは、有機組織におけるシアノ架橋金属ナノ粒子内への放射性核種カチオンの封鎖である（これは、除染と称される）。
特に、セシウムの除染が考えられ得る。多くのシアノ架橋金属ナノ粒子が異なる効率で除染に使用され得る（Vincent, 2014）。伝統的なシアノ架橋金属ナノ粒子は、セシウムを効率的に除染することが公知のＰＢである（McCargar, 1988及びHenge, 2000）。ＰＢは経口経路によって吸収されず、いわゆるRadiogardase（登録商標）は、セシウムの除染に利用可能な市販の薬物である。しかしながら、前述のように、ＰＢ粒子は胃腸管内に留まり、カリウム経路後のセシウム原子との結合を待ち構えている。本発明の逆ミセル系内のＰＢナノ粒子は、特に経口投与によって、より少量の投薬でセシウムの収着を大きく増強するので、望ましくない副作用を予防し得る。
したがって、本発明の目的は、本発明のシアノ架橋金属ナノ粒子を含む生体適合性逆ミセル系であって、該生体適合性逆ミセル系又はそれに含まれるシアノ架橋金属ナノ粒子が、放射性核種カチオン及び／又は金属カチオンによる置換及び／又はその封鎖に使用される生体適合性逆ミセル系である。
「放射性核種カチオン」及び「金属カチオン」という用語は、本発明では、化学的形態の前記放射性核種及び金属カチオンを指す。例えば、本発明にしたがって置換及び／又は封鎖される放射性核種カチオン及び／又は金属カチオンは、置換又は封鎖の前において、少なくとも１つの対アニオンを場合により有するイオン形態であり得るか、又は少なくとも１つの他のリガンドと錯体形成し得るか、又は溶媒和物であり得るか、又は酸化物の形態であり得る。
本発明によれば、「置換」及びこの用語の派生語は、媒体中の１つ以上の放射性核種カチオン及び／又は金属カチオンによる、シアノ架橋金属ナノ粒子の１つ以上の原子の交換に関する。より具体的には、「置換」という用語は、ガドリニウムカチオン及びマンガンカチオンに使用される。
本発明によれば、「封鎖」及びこの用語の派生語は、媒体中のシアノ架橋金属ナノ粒子の空間による１つ以上の原子の捕捉に関する。より具体的には、「封鎖」という用語は、セシウムカチオン及びタリウムカチオンに使用される。
例えば、本発明の生体適合性逆ミセル系又はそれに含まれるシアノ架橋金属ナノ粒子は、金属カチオンによる置換に使用され得、それにより、患者の体内に含まれる金属カチオンの排泄が促される。前記金属カチオンは、例えば、外部中毒（金属カチオンへの曝露）に由来し得るか、又は患者の体内のカチオン蓄積をトリガーする病状をもたらし得る。
「除染」という用語は、本発明では、放射性核種カチオンに関連して、患者の体からの前記放射性核種カチオンの少なくとも一部の排除を指すために使用される。
一実施態様では、本発明の生体適合性逆ミセル系又はそれに含まれる本発明のシアノ架橋金属ナノ粒子又はそれを含む組成物は、患者の体から少なくとも１つの放射性核種カチオンを除染し、及び／又は少なくとも１つの金属カチオン中毒を処置するために使用される。この実施態様では、中毒の除染又は処置は、金属カチオン及び／又は放射性核種カチオンを、本発明の生体適合性逆ミセル系又はそれに含まれるシアノ架橋金属ナノ粒子で置換及び／又は封鎖すること、並びに置換及び／又は封鎖された金属カチオン又は放射性核種カチオンを患者の体から排除及び／又は排泄することを含む。好ましい実施態様では、排泄は、自然経路を介したもの、例えば尿又は糞便によるものである。
本発明では、処置又は除染という用語は、放射性核種カチオン及び／若しくは金属カチオンへの曝露に起因する任意の症候の継続時間若しくは強度を抑制若しくは低減することができ、又は患者の健康若しくは快適の状態を何らかの方法で改善することができる任意の予防的及び／又は治癒的な行為を指す。
一実施態様では、金属カチオン若しくは放射性核種カチオンは患者にとって毒性であるか、又は患者に存在する前記金属カチオン又は放射性核種カチオンの量は毒性である。
「放射性核種カチオン」又は放射能核種カチオンという用語は、不安定核を有するカチオン原子であって、核内で又は内部変換を介して新たに作り出された放射粒子に与えられる利用可能な過剰エネルギーを特徴とするカチオン原子を指す。このプロセスにおいて、放射性核種カチオンは放射性崩壊を受け、その結果、γ線及び／又は亜原子粒子、例えばα若しくはβ粒子が放出されると言われる。
逆ミセル系に含まれるシアノ架橋金属ナノ粒子の性質に応じて、前記系は、どのような種類の放射性核種カチオンの除染にも適切である。放射性核種カチオンが元素の特定のアイソトープである場合、逆ミセル系は必ずしも、放射性アイソトープによって、同じ元素の他のアイソトープよりも選択的に置換されるわけではない。
実施態様では、放射性核種カチオンは、プルトニウム、例えば、２３８Ｐｕ、２３９Ｐｕ又は２４０Ｐｕ、アメリシウム、例えば２４１Ａｍ、ウラン、例えば２３３Ｕ、２３４Ｕ、２３５Ｕ又は２３８Ｕ、セシウム、例えば１３４Ｃｓ、１３５Ｃｓ又は１３７Ｃｓ、タリウム、例えば２０１Ｔｌ又は２０４Ｔｌ、インジウム、例えば１１１Ｉｎ、ストロンチウム、例えば８５Ｓｒ、８９Ｓｒ又は９０Ｓｒ、モリブデン、例えば９９Ｍｏ又は１００Ｍｏ、鉛、例えば２１０Ｐｂ、クロム、例えば５１Ｃｒ、ポロニウム、例えば２１０Ｐｏ、コバルト、例えば５７Ｃｏ、５８Ｃｏ又は６０Ｃｏ、銅、例えば６４Ｃｕ又は６７Ｃｕ、ガリウム、例えば６７Ｇａ、テクネチウム、例えば９９ｍＴｃ及びそれらの分解生成物からなる群より選択される。放射性核種カチオンは、より好ましくはセシウム、タリウム又はいくつかのランタニドカチオンである。
放射性核種カチオン及び／又は金属カチオンによる置換又はその封鎖のための本発明の逆ミセル系の選択性は、シアノ架橋金属ナノ粒子内の金属カチオンの選択性に関連する。
したがって、シアノ架橋金属ナノ粒子は、好ましくは、２つの主な原子、例えばセシウム（１３５Ｃｓ又は１３７Ｃｓ）及びタリウム（２０１Ｔｌ又は２０４Ｔｌ）に選択的である。
一例として、ＰＢは、セシウム及び／又はタリウムを封鎖するために適切であることが公知である。したがって、本発明の生体適合性逆ミセル系に含まれるシアノ架橋金属ナノ粒子がＰＢナノ粒子である場合、本発明の生体適合性逆ミセル系又はそれに含まれるＰＢナノ粒子は、少なくとも１つのセシウム又はタリウムの捕捉に使用される。
本発明のシアノ架橋金属ナノ粒子によって置換及び／又は封鎖され得る金属カチオンは、どのような金属カチオンでもあり得る。例えば、金属カチオンは、遷移金属カチオン、重金属カチオン、ランタニドカチオン又はアルカリ金属カチオンであり得る。
一実施態様では、置換及び／又は封鎖され得る金属カチオンは、鉄、アルミニウム、水銀、鉛、ヒ素、カドミウム、セシウム、銅、金、ベリリウム、ビスマス、コバルト、クロム、ニッケル、プロトアクチニウム、ポロニウム、銀、プラチナ、アンチモン、セレン、スズ、テクネチウム、チタン、亜鉛、マンガン及びタリウムからなる群より選択される。特定の実施態様では、金属カチオンは、セシウムである。
一実施態様では、本発明の生体適合性逆ミセル系又はそれに含まれるシアノ架橋金属ナノ粒子又はそれを含む組成物は、放射性核種カチオンを体内に取り込むことによって組織に送達される累積放射線量を減少させることに使用される。実際、尿又は糞便などの自然手段による排泄を促進するために、唯一の可能性は、封鎖による放射性核種カチオンの除染である。特定の実施態様によれば、本発明の生体適合性逆ミセル系又はそれに含まれるシアノ架橋金属ナノ粒子又はそれを含む組成物は、放射性核種カチオンによって組織に送達される累積放射線量に起因する疾患を発症するリスクの減少において使用するためのものである。
特定の実施態様によれば、本発明の生体適合性逆ミセル系又はそれに含まれるシアノ架橋金属ナノ粒子又はそれを含む組成物は、それを必要とする患者における少なくとも１つの放射性核種カチオンの蓄積及び／又はオーバーロードに関連する少なくとも１つの疾患の処置において使用するためのものである。
少なくとも１つの放射性核種カチオンの蓄積及び／又はオーバーロードに関連する疾患（又は病状）は、放射線曝露（継続時間及び／又は量）に応じて変動し得、消化管障害、例えば吐き気又は嘔吐、血球数の減少に関連する症候、例えば感染症又は出血の素因、神経障害、又は異なる種類のガン（例えば、血液ガン又は甲状腺ガン）が挙げられ得る。
放射性核種カチオンへの曝露並びにそれによる放射性核種カチオンの蓄積及び／又はオーバーロードは、グローブボックスの格納容器の破壊後の原子力労働者の関与から、例えば環境への放射性核種カチオンの広範な伝播（例えば、核物質の研究、生産、操作又は保存の施設に影響を与える事件／事故又は自然災害、核兵器（放射性核種カチオンを含有する兵器）を用いた軍事衝突、これらの施設を標的とするテロ行為又は放射性核種カチオンを分散させる爆発装置（「汚染爆弾」と称される）を特徴とするテロ行為）によって汚染された多数の人々の関与に至る様々な起源を有し得る。
体内に取り込まれた放射性核種カチオンは非常に毒性であり、急性放射線傷害及び慢性放射線傷害の両方を引き起こし得る。これらの状況において最も頻繁に遭遇する核種としては、アクチノイドカチオン、例えばアメリシウム、プルトニウム又はウラン及び遷移金属カチオン、例えばセシウム又はストロンチウムが挙げられる。体内に取り込まれると、核種は、様々な組織及び／又は器官（例えば、肺、筋肉、骨及び／又は肝臓）に分布する。
特定の実施態様では、本発明の生体適合性逆ミセル系に含まれるシアノ架橋金属ナノ粒子は、ＰＢナノ粒子である。本発明の生体適合性逆ミセル系又はそれに含まれるＰＢナノ粒子又はそれを含む組成物は、少なくとも１つのセシウム若しくはタリウムを除染するために、又はそれを必要とする患者におけるセシウム及び／若しくはタリウムの蓄積及び／若しくはオーバーロードに関連する少なくとも１つの疾患の処置のために使用される。
処置すべき患者は、任意の哺乳動物、非ヒト哺乳動物又はヒト哺乳動物、より具体的には子供であり得る。
本発明の別の目的は、本発明の生体適合性逆ミセル系又はそれに含まれるシアノ架橋金属ナノ粒子又はそれを含む組成物を造影剤及び／又は診断剤として使用することである。
シアノ架橋金属ナノ粒子は、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）のための造影剤及びシンチグラフィーのためのイメージング剤として周知である。経粘膜送達によって、体内のシアノ架橋金属ナノ粒子の吸収及び／又は質が増加し得、これが、イメージング技術によって得られる画像の質を改善し得る。特に、ＭＲＩ用途について、マンガン系造影剤（Pan, 2011、Massaad, 2011及びZhu, 2015）及びガドリニウム系造影剤（Mohs, 2007及びZhou, 2013）が調査された。しかしながら、特定の用量レベルにおいて、両タイプとも非常に毒性があり、投与量を減少させなければならない。このため、逆ミセル系内にＭｎ２＋及びＧｄ３＋イオンを含有するシアノ架橋金属ナノ粒子の使用は、
−（ｉ）縦緩和能値を改善して、より低用量で造影剤を投与することを可能にするはずであり、及び／又は
−（ｉｉ）体循環時間を増加させることによって薬物動態を改善するはずであり、及び／又は
−（ｉｉｉ）毒性を減少させるはずである。
さらに、経粘膜系を使用することの利点は、血液脳関門の突破にある。より具体的には、逆ミセル系内のシアノ架橋金属ナノ粒子は、脳のイメージングを実際に可能にし得る。
シアノ架橋金属ネットワークに関与する金属カチオンの性質に応じて、イメージング方法（例えば、ＭＲＩ）にとって興味深い磁気特性を示す化合物が逆ミセル系内で形成され得る。
特定の実施態様によれば、本発明の逆ミセル系に含まれるシアノ架橋金属ナノ粒子は、ガドリニウム又はマンガン置換（含有）ＰＢナノ粒子であり、好ましくは造影剤及び／又は診断剤として使用され得る。
造影剤は、（例えば、ＭＲＩのための）磁気造影剤、シンチグラフィーのためのイメージング剤、分光造影剤又は顕微鏡造影剤であり得る。その点において、造影剤は、診断ツール又は診断剤として使用され得る。
本発明の別の目的は、患者の少なくとも１つの器官の少なくとも一部をイメージングする方法であって、本発明の生体適合性逆ミセル系又はそれに含まれるシアノ架橋金属ナノ粒子又はそれを含む組成物を投与することを含む方法である。前記イメージング方法は、有利には、放出された放射線及び／若しくはシグナルを検出する工程、並びに好ましくは、そこから画像を形成する工程をさらに含む。
本発明の別の目的は、イメージング方法及び／又は診断方法において使用すべき組成物の調製における、本発明の生体適合性逆ミセル系又はそれに含まれるシアノ架橋金属ナノ粒子又はそれを含む組成物の使用である。
イメージング方法を実行するために投与すべき逆ミセル系の量は、シアノ架橋金属ナノ粒子の量、このイメージング方法で可視化する領域、並びに使用されるイメージング技術に応じて、当業者によって容易に適合され得る。
イメージング方法は、例えば、シンチグラフィー又はＭＲＩであり得る。一実施態様では、イメージング方法は、骨、腎臓、肝臓、脳及び／又は肺のシンチグラフィーである。「造影剤」という用語は、本発明では、放出される放射線及び／若しくはシグナル又はそれらから形成される画像の量及び／又は質を改善するためにイメージング方法において有利に使用され得る薬剤を指す。
したがって、本発明の別の目的は、本発明にしたがって造影剤として使用するための逆ミセル系であって、該造影剤がシンチグラフィー及び／又はＭＲＩにおいて使用される逆ミセル系である。
造影剤はまた、腎機能及び／若しくは尿路機能の灌流を研究するために、又は糸球体ろ過率を決定するために使用され得る。
本発明のイメージング方法は、病状、好ましくは可視化領域の病状、例えば骨、腎臓、脳及び／又は肺の病状を決定するための診断方法の一部であり得る。「診断剤」という用語は、本発明では、病状の存在又は病状、例えば、骨、腎臓、脳及び／若しくは肺の病状のリスクの存在の決定の支援するために有利に使用され得る薬剤を指す。
逆ミセル系の投与
本発明の逆ミセル系は、粘膜を介して吸収されることができ、保護形態のシアノ架橋金属ナノ粒子を生物の任意の組織及び／又は器官に誘導することができる。
逆ミセル系は、異なる経路を介して投与され得る。本発明の好ましい実施態様では、逆ミセル系は、局所経路、経口経路又は経粘膜経路によって投与される。
本明細書で使用される「粘膜」及び「粘膜の」という用語は、呼吸器、消化器又は生殖器の組織などの粘膜組織を指す。本明細書で使用される「経粘膜送達」、「粘膜送達」、「粘膜投与」及び類語は、粘膜組織を介した組成物の投与を指す。「経粘膜送達」、「粘膜送達」、「粘膜投与」及び類語は、限定されないが、気管支、歯肉、舌、鼻、口、口腔、食道、膣、直腸及び胃腸の粘膜組織を介した組成物の送達を含む。
特定の実施態様では、粘膜投与は、口腔粘膜組織を介したものである。
別の実施態様によれば、本発明の逆ミセル系は、胃腸管において活性であるように経口投与され得る。これは、より具体的には、本発明のＰＢ粒子に適切である。
逆ミセル系は、金属カチオン及び／又は放射性核種カチオンへの曝露及び／又はそれらによる汚染に関して、本発明にしたがって任意の時点で投与され得る。
一実施態様では、逆ミセル系は、予防的に（これは、放射性核種カチオン及び／又は金属カチオンへの曝露及び／又はそれらによる汚染の前を意味する）投与される。
別の実施態様では、逆ミセル系は、放射性核種カチオン及び／又は金属カチオンへの曝露及び／又はそれらによる汚染の後の最初の日に、好ましくは最初の１時間に、特に最初の２０分間に投与される。
別の実施態様では、逆ミセル系は、放射性核種カチオン及び／又は金属カチオンへの曝露の終了後２４時間を超えて、好ましくは４８時間を超えて、特に９６時間を超えて投与される。
汚染、好ましくは内部汚染の１時間後、４日後、さらには７日後に処置が迅速に開始される場合、本発明の逆ミセル系は、放射性核種カチオンを除染するために有効であり得る。
熟練施術者であれば、逆ミセル系中に存在する活性剤の量、並びに金属カチオン又は放射性核種カチオンによる汚染の種類及び強度に応じて、１日の投与回数、投与すべき量、投与頻度及び／又は処置開始時期を適合することができるであろう。
それを必要とする患者における少なくとも１つの金属カチオンの蓄積に関連する病状の処置において生体適合性逆ミセル系が使用される実施態様では、病状は必ずしも、前記金属カチオンへの曝露によって開始されない。病状はまた、金属カチオンへの慢性曝露に関連し得る。
生体適合性逆ミセル系は、薬学的に許容し得る支持体をさらに含み得る組成物で製剤化され得る。
本発明の別の目的は、薬学的に許容し得る支持体又は担体と、本発明の生体適合性逆ミセル系とを含む医薬組成物である。
「薬学的に許容し得る支持体又は担体」という用語は、当業者に周知の任意の薬学的に許容し得る賦形剤、ビヒクル又は担体を指す。当業者に周知の他の添加剤、例えば安定剤、乾燥剤、結合剤又はｐＨ緩衝剤も使用され得る。本発明による好ましい賦形剤は、粘膜への最終製品の付着を促進する。
特定の実施態様によれば、医薬組成物は、カプセル、カプレット、エアロゾル、スプレー、溶液、軟弾性ゼラチンカプセルの形態である。
本発明によれば、「含む」又は「含むこと」という用語は、具体的に言及されている特徴及びあらゆる任意の、追加の不特定の特徴の全てが含まれるように一般に解釈され得る；特に指定がない限り、それはまた、指定の特徴のみが含まれる「からなる」という表現としてより具体的に解釈され得る。
本発明は、上記特定の実施態様及びそれらのどのような組み合わせも含む。
本発明では、特に指示がない限り、パーセンテージの値は、重量パーセントの値である。
値の「およそ」又は「約」という用語は、該値の±１０％の範囲を指す。
以下の実施例は、本発明の例示として提供されているに過ぎず、本発明を限定するものではない。
実施例１：遷移金属ヘキサシアノメタラートのナノ粒子をin situで調製し、逆ミセル系中で安定化する
サンプルＡの調製
− Ａ１：１０秒間ボルテックスした後、９７％超の純度を有する市販の塩化第二鉄六水和物 ０．１１ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．８９ｇに室温で溶解した。
− Ａ２：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相（又は均一な油性相）を形成した。
− Ａ３：Ａ１ １．２０ｇをＡ２ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第１のＰＢ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ａ４：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販のヘキサシアノ鉄（ＩＩ）酸ナトリウム十水和物 ０．１５ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．８５ｇに室温で溶解した。
− Ａ５：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ａ６：Ａ４ １．２０ｇをＡ５ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第２のＰＢ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ａ：Ａ３ ２．００ｇ及びＡ６ ２．００ｇを室温で一緒に１０秒間ボルテックスして、in situで自発的に形成されたＰＢナノ粒子を得た。
活性化合物又は前駆体を含まない別の逆ミセル系を以下のように調製した：ＨＰＬＣ用水 １．２０ｇをＡ２ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、等方的かつ均一な逆ミセル系を得た（サンプルＡ７）。
サンプルＢの調製
− Ｂ１：１０秒間ボルテックスした後、９８％超の純度を有する市販の塩化亜鉛四水和物 ０．０４ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．９６ｇに室温で溶解した。
− Ｂ２：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ｂ３：Ｂ１ １．２０ｇをＢ２ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第１のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｂ４：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販のヘキサシアノ鉄（ＩＩＩ）酸カリウム０．０７ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．９３ｇに室温で溶解した。
− Ｂ５：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相（又は均一な油性相）を形成した。
− Ｂ６：Ｂ４ １．２０ｇをＢ５ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第２のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｂ：Ｂ３ ２．００ｇ及びＢ６ ２．００ｇを室温で一緒に１０秒間ボルテックスして、in situで自発的に形成されたＰＢＡナノ粒子を得た。
サンプルＣの調製
− Ｃ１：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販の塩化マンガン四水和物 ０．０６ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．９４ｇに室温で溶解した。
− Ｃ２：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ｃ３：Ｃ１ １．２０ｇをＣ２ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第１のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｃ４：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販のヘキサシアノ鉄（ＩＩＩ）酸カリウム ０．０７ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．９３ｇに室温で溶解した。
− Ｃ５：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ｃ６：Ｃ４ １．２０ｇをＣ５ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第２のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｃ：Ｃ３ ２．００ｇ及びＣ６ ２．００ｇを室温で一緒に１０秒間ボルテックスして、in situで自発的に形成されたＰＢＡナノ粒子を得た。
サンプルＤ（５％）の調製
− Ｄ１：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販の塩化マンガン四水和物 ０．００８ｇと、９７％超の純度を有する市販の塩化第二鉄六水和物 ０．１９９ｇとを、ＨＰＬＣ用水 ９．７９３ｇに室温で溶解した。
− Ｄ２：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ｄ３：Ｄ１ １．２０ｇをＤ２ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第１のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｄ４：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販のヘキサシアノ鉄（ＩＩ）酸ナトリウム十水和物 ０．３１７ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．６８３ｇに室温で溶解した。
− Ｄ５：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ｄ６：Ｄ４ １．２０ｇをＤ５ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第２のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｄ（５％）：Ｄ３ ４．００ｇ及びＤ６ ４．００ｇを室温で一緒に１０秒間ボルテックスして、in situで自発的に形成されたＰＢＡナノ粒子を得た。
サンプルＤ（１０％）の調製
− Ｄ１：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販の塩化マンガン四水和物 ０．０１６ｇと、９７％超の純度を有する市販の塩化第二鉄六水和物 ０．１８８ｇとを、ＨＰＬＣ用水 ９．７９６ｇに室温で溶解した。
− Ｄ２：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ｄ３：Ｄ１ １．２０ｇをＤ２ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第１のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｄ４：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販のヘキサシアノ鉄（ＩＩ）酸ナトリウム十水和物 ０．３１７ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．６８３ｇに室温で溶解した。
− Ｄ５：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ｄ６：Ｄ４ １．２０ｇをＤ５ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第２のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｄ（１０％）：Ｄ３ ４．００ｇ及びＤ６ ４．００ｇを室温で一緒に１０秒間ボルテックスして、in situで自発的に形成されたＰＢＡナノ粒子を得た。
サンプルＤ（２５％）の調製
− Ｄ１：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販の塩化マンガン四水和物 ０．０４０ｇと、９７％超の純度を有する市販の塩化第二鉄六水和物 ０．１５７ｇとを、ＨＰＬＣ用水 ９．８０３ｇに室温で溶解した。
− Ｄ２：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ｄ３：Ｄ１ １．２０ｇをＤ２ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第１のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｄ４：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販のヘキサシアノ鉄（ＩＩ）酸ナトリウム十水和物 ０．３１７ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．６８３ｇに室温で溶解した。
− Ｄ５：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ｄ６：Ｄ４ １．２０ｇをＤ５ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第２のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｄ（２５％）：Ｄ３ ４．００ｇ及びＤ６ ４．００ｇを室温で一緒に１０秒間ボルテックスして、in situで自発的に形成されたＰＢＡナノ粒子を得た。
サンプルＤ（５０％）の調製
− Ｄ１：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販の塩化マンガン四水和物 ０．０８０ｇと、９７％超の純度を有する市販の塩化第二鉄六水和物 ０．１０５ｇとを、ＨＰＬＣ用水 ９．８１５ｇに室温で溶解した。
− Ｄ２：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ｄ３：Ｄ１ １．２０ｇをＤ２ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第１のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｄ４：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販のヘキサシアノ鉄（ＩＩ）酸ナトリウム十水和物 ０．３１７ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．６８３ｇに室温で溶解した。
− Ｄ５：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ｄ６：Ｄ４ １．２０ｇをＤ５ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第２のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｄ（５０％）：Ｄ３ ４．００ｇ及びＤ６ ４．００ｇを室温で一緒に１０秒間ボルテックスして、in situで自発的に形成されたＰＢＡナノ粒子を得た。
サンプルＤ（７５％）の調製
− Ｄ１：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販の塩化マンガン四水和物 ０．１２０ｇと、９７％超の純度を有する市販の塩化第二鉄六水和物 ０．０５２ｇとを、ＨＰＬＣ用水 ９．８２８ｇに室温で溶解した。
− Ｄ２：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ｄ３：Ｄ１ １．２０ｇをＤ２ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第１のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｄ４：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販のヘキサシアノ鉄（ＩＩ）酸ナトリウム十水和物 ０．３１７ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．６８３ｇに室温で溶解した。
− Ｄ５：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ｄ６：Ｄ４ １．２０ｇをＤ５ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第２のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｄ（７５％）：Ｄ３ ４．００ｇ及びＤ６ ４．００ｇを室温で一緒に１０秒間ボルテックスして、in situで自発的に形成されたＰＢＡナノ粒子を得た。
サンプルＥの調製
− Ｅ１：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販の塩化マンガン四水和物 ０．０６ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．９４ｇに室温で溶解した。
− Ｅ２：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ｅ３：Ｅ１ １．２０ｇをＥ２ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第１のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｅ４：１０秒間ボルテックスした後、９８％超の純度を有する市販の塩化亜鉛四水和物 ０．０４ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．９６ｇに室温で溶解した。
− Ｅ５：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ｅ６：Ｅ４ １．２０ｇをＥ５ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第１のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｅ７：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販のヘキサシアノ鉄（ＩＩＩ）酸カリウム０．０７ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．９３ｇに室温で溶解した。
− Ｅ８：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ｅ９：Ｅ７ １．２０ｇをＥ８ ８．８ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第２のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｅ：Ｅ３ ２．００ｇ、Ｅ６ ２．００ｇ及びＥ９ ４．００ｇを室温で一緒に１０秒間ボルテックスして、in situで自発的に形成されたＰＢＡナノ粒子を得た。
実施例２：逆ミセル系中の遷移金属テトラシアノメタラートのナノ粒子
サンプルＦの調製
− Ｆ１：１０秒間ボルテックスした後、９７％超の純度を有する市販の塩化第二鉄六水和物 ０．０６ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．９４ｇに室温で溶解する。
− Ｆ２：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解する。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解する。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成する。
− Ｆ３：Ｆ１ １．２０ｇをＦ２ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第１のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得る。
− Ｆ４：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販のテトラシアノニッケル酸カリウム ０．０７ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．９３ｇに室温で溶解する。
− Ｆ５：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解する。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解する。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成する。
− Ｆ６：Ｆ４ １．２０ｇをＦ５ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第２のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得る。
− Ｆ：Ｆ３ ２．００ｇ及びＦ６ ２．００ｇを室温で一緒に１０秒間ボルテックスして、in situで自発的に形成されたＰＢＡナノ粒子を得る。
実施例３：逆ミセル系中の遷移金属オクタシアノメタラートのナノ粒子
サンプルＧの調製
− Ｇ１：１０秒間ボルテックスした後、９７％超の純度を有する市販の塩化第二鉄六水和物 ０．１１ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．８９ｇに室温で溶解する。
− Ｇ２：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解する。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解する。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成する。
− Ｇ３：Ｇ１ １．２０ｇをＧ２ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第１のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得る。
− Ｇ４：１０秒間ボルテックスした後、モリブデン又はタングステンオクタシアニド ０．０９ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．９１ｇに室温で溶解する。
− Ｇ５：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解する。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解する。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成する。
− Ｇ６：Ｇ４ １．２０ｇをＧ５ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第２のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得る。
− Ｇ：Ｇ３ ２．００ｇ及びＧ６ ２．００ｇを室温で一緒に１０秒間ボルテックスして、in situで自発的に形成されたＰＢＡナノ粒子を得る。
実施例４：ランタニドヘキサシアノメタラートのナノ粒子をin situで調製し、逆ミセル系中で安定化する
サンプルＨの調製
− Ｈ１：１０秒間ボルテックスした後、９９．９％超の純度を有する市販の硝酸ガドリニウム（ＩＩＩ）六水和物 ０．０９ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．９１ｇに室温で溶解した。
− Ｈ２：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ｈ３：Ｈ１ １．２０ｇをＨ２ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第１のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｈ４：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販のヘキサシアノ鉄酸カリウム ０．０７ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．９３ｇに室温で溶解した。
− Ｈ５：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．５０ｇを、純エタノール １．３０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．２５ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ５．７５ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ｈ６：Ｈ４ １．２０ｇをＨ５ ８．８０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第２のＰＢＡ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｈ：Ｈ３ ２．００ｇ及びＨ６ ２．００ｇを室温で一緒に１０秒間ボルテックスして、in situで自発的に形成されたＰＢＡナノ粒子を得た。
実施例５：逆ミセル系中のin situ調製及び安定化シアノ架橋金属ナノ粒子の目視観察
シアノ架橋金属ナノ粒子をin situで形成した後、目視観察は、全てのサンプルが安定、均一及び等方的であることを示している。ユニークな相が観察され、混濁は存在しない。
実施例６：逆ミセル系中のin situ形成シアノ架橋金属ナノ粒子のＦＴＩＲ特性評価
赤外線測定によって、サンプルＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥを特性評価し得る。ナノ粒子形成の特徴であるＭ’−ＣＮ−Ｍ結合の伸縮振動及び結合振動を分析するために、この技術を使用した。特に、ＣＮの伸縮振動は、２０００〜２１００cm-1の波数領域で証明されている。
サンプルＡの場合、Ghosh, 1974及びEllis, 1981によって報告されているように、Ｆｅ（ＩＩ）−ＣＮ−Ｆｅ（ＩＩＩ）結合は単一のピークを誘導し、伸縮モードは２０８６cm-1で検出される。
サンプルＢの場合、Denisova, 2009及びVincent, 2014によって報告されているように、Ｆｅ（ＩＩＩ）−ＣＮ−Ｚｎ（ＩＩ）結合は単一の広いピークを誘導し、伸縮モードは２０９２cm-1で検出される。
サンプルＣの場合、Chugh, 2012によって報告されているように、Ｆｅ（ＩＩＩ）−ＣＮ−Ｍｎ（ＩＩ）結合は狭いピークを誘導し、伸縮モードは２０７１cm-1で検出される。
ＦＴＩＲスペクトルは、図２及び３に示されている。
実施例７：逆ミセル系中のin situ調製及び安定化ＰＢナノ粒子のＵＶ可視特性評価
サンプルＡは、ＵＶ可視技術によって特性評価され得る唯一のサンプルである。実際、ＰＢシアノ架橋金属ナノ粒子は、可視ドメインで吸収する。これは、６８５〜６９５nmの波長におけるＣＮ結合を介したＦｅ２＋とＦｅ３＋との間の金属間電荷移動に起因する（Riter, 1998、Uemura, 2004）。吸光度スペクトルは、図４に示されている。
実施例８：逆ミセル系中のin situ調製及び安定化ＰＢナノ粒子の顕微鏡特性評価
顕微鏡（ＴＥＭ）によってサンプルＡを分析して、ナノ粒子の存在及び構造を強調した。顕微鏡写真は、図５に示されている。本発明の条件下では、５nm未満の粒子が識別可能である。５nm超の粒子は明確に視認可能なはずであるので、サンプルＡ中の本ナノ粒子は、１〜５nmの範囲の直径を有する。
実施例９：逆ミセル系中の市販の又はin situ調製ＰＢナノ粒子を使用したin vitroセシウム吸着研究
２つの異なる系を用いて、in vitro研究を行った。目的は、異なるＰＢナノ粒子に対するセシウム吸収の効率を比較することであった。
試験した第１の系は比較用のものであり、逆ミセル系内の市販のＰＢを使用したRadiogardase（登録商標）の代用品である。
試験した第２の系は、本発明の逆ミセル系内で調製及び安定化したＰＢナノ粒子を含む。
サンプルＩの調製
− ９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン ３０．００ｇを、純エタノール ２６．００ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。次いで、β−シトステロール ５．００ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） １２９．００ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。最後に、ＨＰＬＣ用水 １０．００ｇを追加して、均一な逆ミセル系を形成した。次いで、市販のＰＢ ０．０４ｇを均一な逆ミセル系に室温で分散させ、ボルテックスした。
サンプルＪの調製
− Ｊ１：１０秒間ボルテックスした後、９７％超の純度を有する市販の塩化第二鉄六水和物 ０．１１ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．８９ｇに室温で溶解した。
− Ｊ２：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １５．００ｇを、純エタノール １３．００ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ２．５０ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ６４．５０ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ｊ３：Ｊ１ ５．００ｇをＪ２ ９５．００ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第１のＰＢ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｊ４：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販のヘキサシアノ鉄酸ナトリウム ０．１５ｇを、ＨＰＬＣ用水 ９．８５ｇに室温で溶解した。
− Ｊ５：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １５．００ｇを、純エタノール １３．００ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ２．５０ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ６４．５０ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油相を形成した。
− Ｊ６：Ｊ４ ５．００ｇをＪ５ ９５．００ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第２のＰＢ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｊ：Ｊ３ １００．００ｇ及びＪ６ １００．００ｇを室温で一緒に１０秒間ボルテックスして、in situで自発的に形成されたＰＢナノ粒子を得た。
セシウム含有サンプルＫの調製
− Ｋ１：９９％超の純度を有するＣｓＣｌ ０．００４ｇをＨＰＬＣ用水 ４４．９９６ｇに溶解することによって、０．４mol/LのＣｓ＋を調製した
− Ｋ２：９９％超の純度を有するＣｓＣｌ ０．００８ｇをＨＰＬＣ用水 ４４．９９２ｇに溶解することによって、１．０mol/LのＣｓ＋を調製した
− Ｋ３：９９％超の純度を有するＣｓＣｌ ０．０１６ｇをＨＰＬＣ用水 ４４．９８４ｇに溶解することによって、２．０mol/LのＣｓ＋を調製した
− Ｋ４：９９％超の純度を有するＣｓＣｌ ０．０３４ｇをＨＰＬＣ用水 ４４．９６６ｇに溶解することによって、４．０mol/LのＣｓ＋を調製した
− Ｋ５：９９％超の純度を有するＣｓＣｌ ０．０５０ｇをＨＰＬＣ用水 ４４．９５０ｇに溶解することによって、６．０mol/LのＣｓ＋を調製した
エクスペリエンスは、サンプルＩ及びＪ ２４．００ｇと、５つの各サンプルＫ ７．００ｇとを接触させることであった。それにより二相系が誘導され、これを密閉容器中、２４時間連続で混合した。２４時間撹拌した後、全ての二相系を遠心分離して、残存セシウムイオンを含有する水相を回収した。次いで、異なる初期Ｃｓ濃度に関するセシウムの収着を示すために（図６にいわゆる等温線を示す）、イオンクロマトグラフィーを使用してセシウム濃度を分析した。結果は、セシウムの吸着について、in situで調製及び安定化したＰＢナノ粒子が市販のＰＢよりも効率的であることを示している。
以下の表１は、上記に詳述されているサンプルを要約したものである。
Figure 0006846404
実施例１０：逆ミセル系中のin situ調製ＰＢシアノ架橋金属ナノ粒子を用いた、セシウム除染のin vivo研究
サンプルＬの調製
− Ｌ１：１０秒間ボルテックスした後、９７％超の純度を有する市販の塩化第二鉄六水和物 ０．１７ｇを、ＨＰＬＣ用水 ３．８３ｇに室温で溶解した。
− Ｌ２：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン ３．６０ｇを、純エタノール ３．２４ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．９０ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ２６．１０ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油性相を形成した。
− Ｌ３：Ｌ１ ２．１６ｇをＬ２ ３３．８４ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第１のＰＢ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｌ４：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販のヘキサシアノ鉄（ＩＩ）酸ナトリウム十水和物 ０．２３ｇを、ＨＰＬＣ用水 ３．７７ｇに室温で溶解した。
− Ｌ５：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン ３．６０ｇを、純エタノール ３．２４ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．９０ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ２６．１０ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油性相を形成した。
− Ｌ６：Ｌ４ ２．１６ｇをＬ５ ３３．８４ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第２のＰＢ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｌ：Ｌ３ ３５．００ｇ及びＬ６ ３５．００ｇを室温で一緒に１０秒間ボルテックスして、in situで自発的に形成されたＰＢナノ粒子を得た。
サンプルＭの調製
− Ｍ１：１０秒間ボルテックスした後、９７％超の純度を有する市販の塩化第二鉄六水和物 ０．３４ｇを、ＨＰＬＣ用水 ３．６６ｇに室温で溶解した。
− Ｍ２：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．２０ｇを、純エタノール １．０８ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．３０ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ８．７０ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油性相を形成した。
− Ｍ３：Ｍ１ ０．７２ｇをＭ２ １１．２８ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第１のＰＢ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｍ４：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販のヘキサシアノ鉄（ＩＩ）酸ナトリウム十水和物 ０．４５ｇを、ＨＰＬＣ用水 ３．５５ｇに室温で溶解した。
− Ｍ５：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン １．２０ｇを、純エタノール １．０８ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．３０ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ８．７０ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油性相を形成した。
− Ｍ６：Ｍ４ ０．７２ｇをＭ５ １１．２８ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第２のＰＢ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｍ：Ｍ３ １０．００ｇ及びＭ６ １０．００ｇを室温で一緒に１０秒間ボルテックスして、in situで自発的に形成されたＰＢナノ粒子を得た。
材料及び方法
３日間の馴化後、処置開始時において約７〜８週齢のSprague-Dawley異系交配ラット １６匹（すなわち、体重 ２５０＋／−３０ｇ）を個別の代謝ケージに入れて、尿及び糞便を別個に収集した（温度は２２℃一定であり、日々の食餌はＳ．Ａ．Ｆ．Ｅ．のＡＯ４Ｃ顆粒を含むものであり、水道水は不断給飼である）。
セシウム ５００μgの腹腔内投与を使用して、全てのラットを汚染した。処置は、Ｃｓ汚染の１時間後に開始する（Ａ群の未処置ラットを除く）；次いで、４日間にわたって、ラットにサンプルＬを１日１回（Ｂ群）及び１日２回（Ｄ群）投与し、又はサンプルＭを１日２回（Ｃ群）投与した。口腔経路及び直腸経路については、より再現性のある投与を保証するために、気体イソフルラン下でラットを麻酔した。各ラットの尿及び糞便を別個にかつ累積的に４日間収集し、鉱化後にＩＣＰ−ＭＳ技術によって、セシウム用量を分析した。
以下の表２は、このin vivo研究の対応する研究計画を示す：
Figure 0006846404
各群の排泄物中の回収セシウムのパーセンテージは、図７に示されている。
それは、逆ミセル系内で製剤化したＰＢナノ粒子が、糞便中へのセシウムの排泄を増強することを示している。Le Gallらは、より低いＣｓ汚染及びより高いＰＢ用量の場合の有効性結果が近いことを記載した（Legall, 2006）。それは、本発明にしたがってin situで調製したＰＢシアノ架橋金属ナノ粒子が、より低いＰＢ用量でセシウム除染の改善を可能にすることを示唆している。
実施例１１：市販のＰＢと比較した、逆ミセル系中のin situ調製ＰＢシアノ架橋金属ナノ粒子を用いたセシウム除染のin vivo研究
サンプルＮの調製
− Ｎ１：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン ６．００ｇを、純エタノール ５．４０ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール １．５０ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ４３．５０ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油性相を形成した。
− Ｎ：ＨＰＬＣ用水 ３．６０ｇをＮ１ ５６．４０ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、有効成分を含まない等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
サンプルＯ、Ｐ、Ｑ、Ｒの調製
− 市販のＰＢを蒸留水に懸濁することによって、Ｏ、Ｐ、Ｑ、Ｒを調製する。全てのサンプルを磁気撹拌下に３０分間置いて、それぞれ０．５mg/g、１mg/g、２mg/g、１０mg/gのＰＢ懸濁液を得る。
サンプルＳの調製
− Ｓ１：１０秒間ボルテックスした後、９７％超の純度を有する市販の塩化第二鉄六水和物 ０．０６ｇを、ＨＰＬＣ用水 ２．９４ｇに室温で溶解した。
− Ｓ２：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン ３．２０ｇを、純エタノール ２．８８ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．８０ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ２３．２０ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油性相を形成した。
− Ｓ３：Ｓ１ １．９２ｇをＳ２ ３０．０８ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第１のＰＢ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｓ４：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販のヘキサシアノ鉄（ＩＩ）酸ナトリウム十水和物 ０．０９ｇを、ＨＰＬＣ用水 ２．９１ｇに室温で溶解した。
− Ｓ５：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン ３．２０ｇを、純エタノール ２．８８ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．８０ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ２３．２０ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油性相を形成した。
− Ｓ６：Ｓ４ １．９２ｇをＳ５ ３０．０８ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第２のＰＢ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｓ：Ｓ３ ３０．００ｇ及びＳ６ ３０．００ｇを室温で一緒に１０秒間ボルテックスして、in situで自発的に形成されたＰＢナノ粒子を得た。
サンプルＴの調製
− Ｔ１：１０秒間ボルテックスした後、９７％超の純度を有する市販の塩化第二鉄六水和物 ０．１２ｇを、ＨＰＬＣ用水 ２．８８ｇに室温で溶解した。
− Ｔ２：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン ３．２０ｇを、純エタノール ２．８８ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．８０ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ２３．２０ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油性相を形成した。
− Ｔ３：Ｔ１ １．９２ｇをＴ２ ３０．０８ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第１のＰＢ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｔ４：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販のヘキサシアノ鉄（ＩＩ）酸ナトリウム十水和物 ０．１８ｇを、ＨＰＬＣ用水 ２．８２ｇに室温で溶解した。
− Ｔ５：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン ３．２０ｇを、純エタノール ２．８８ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．８０ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ２３．２０ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油性相を形成した。
− Ｔ６：Ｔ４ １．９２ｇをＴ５ ３０．０８ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第２のＰＢ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｔ：Ｔ３ ３０．００ｇ及びＴ６ ３０．００ｇを室温で一緒に１０秒間ボルテックスして、in situで自発的に形成されたＰＢナノ粒子を得た。
サンプルＵの調製
− Ｕ１：１０秒間ボルテックスした後、９７％超の純度を有する市販の塩化第二鉄六水和物 ０．２４ｇを、ＨＰＬＣ用水 ２．７６ｇに室温で溶解した。
− Ｕ２：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン ３．２０ｇを、純エタノール ２．８８ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．８０ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ２３．２０ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油性相を形成した。
− Ｕ３：Ｕ１ １．９２ｇをＵ２ ３０．０８ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第１のＰＢ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｕ４：１０秒間ボルテックスした後、９９％超の純度を有する市販のヘキサシアノ鉄（ＩＩ）酸ナトリウム十水和物 ０．３６ｇを、ＨＰＬＣ用水 ２．６４ｇに室温で溶解した。
− Ｕ５：９７％超のホスファチジルコリンを含有する市販のレシチン ３．２０ｇを、純エタノール ２．８８ｇに３００r/分の磁気撹拌下、室温で溶解した。β−シトステロール ０．８０ｇを、同じ条件下で混合物に溶解した。Peceol（登録商標） ２３．２０ｇをそれに追加し、磁気撹拌を７００r/分及び３７℃で行って、均一な油性相を形成した。
− Ｕ６：Ｕ４ １．９２ｇをＵ５ ３０．０８ｇに室温で追加し、混合物を１０秒間ボルテックスして、第２のＰＢ前駆体を含有する等方的かつ均一な逆ミセル相を得た。
− Ｕ：Ｕ３ ３０．００ｇ及びＵ６ ３０．００ｇを室温で一緒に１０秒間ボルテックスして、in situで自発的に形成されたＰＢナノ粒子を得た。
材料及び方法
３日間の馴化後、処置開始時において約７〜８週齢のSprague-Dawley異系交配ラット ４５匹（すなわち、体重 ２５０＋／−ｇ）を個別の代謝ケージに入れて、糞便を別個に収集した（温度は２２℃一定であり、日々の食餌はＳ．Ａ．Ｆ．Ｅ．のＡＯ４Ｃ顆粒を含むものであり、水道水は不断給飼である）。
セシウム ５０μgの腹腔内投与を使用して、全てのラットを汚染した。処置は、Ｃｓ汚染の３時間後に開始する；次いで、４日間連続で、ラットに蒸留水（Ａ群）、サンプルＮ（Ｂ群）、サンプルＯ（Ｃ群）、サンプルＰ（Ｄ群）、サンプルＱ（Ｅ群）、サンプルＲ（Ｆ群）、サンプルＳ（Ｇ群）、サンプルＴ（Ｈ群）、サンプルＵ（Ｉ群）を強制飼養によって１日２回経口投与した。各ラットの糞便を別個にかつ累積的に４８時間収集した（０〜４８時間及び４８時間〜９６時間）。処置終了時に屠殺して、心臓を収集した。鉱化後にＩＣＰ−ＭＳ技術によって、糞便及び心臓のセシウム用量を分析した。
以下の表３は、このin vivo研究の研究計画を要約したものである：
Figure 0006846404
各群の心臓における除染の有効性のパーセンテージは、図８に示されている。
それは、ＰＢナノ粒子による慢性処置が、コントロール（有効性０％）と比較してセシウムの心臓滞留を減少させたことを示している。さらに、同じ投与量において、本発明にしたがってin situで調製したＰＢシアノ架橋金属ナノ粒子は、蒸留水懸濁液中の市販のＰＢ（９〜１２％）よりも大きい有効性（３５〜５３％）を有する。
各群の糞便中の回収セシウムのパーセンテージは、図９に示されている。
同じ投与量において、本発明にしたがってin situで調製したＰＢシアノ架橋金属ナノ粒子を用いた場合、セシウム除染が、蒸留水懸濁液中の市販のＰＢと比較して効率的であることが確認される。
さらに、４８時間の時点において、本発明にしたがってin situで調製したＰＢシアノ架橋金属ナノ粒子を用いた場合、セシウム除染率は、蒸留水懸濁液中の市販のＰＢと比較して高い。
参考文献
Figure 0006846404
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Figure 0006846404

Figure 0006846404

Claims (9)

  1. シアノ架橋金属ナノ粒子を含む生体適合性逆ミセル系を調製するための方法であって、
    （ｉ）少なくとも１つのアシルグリセロール、ステロール、レシチン、エタノール、少なくとも１つの金属塩の水溶液と、水からなる生体適合性逆ミセル系と、
    （ｉｉ）少なくとも１つのアシルグリセロール、ステロール、レシチン、エタノール、シアノメタラート塩の水溶液と、水からなる生体適合性逆ミセル系とを混合することからなる工程を含む、方法。
  2. 金属塩が、塩素アニオン又は硝酸アニオン及び水分子を有するカチオンであり、好ましくは金属カチオン（Ｍｐ＋）が、遷移金属カチオン及びランタニドカチオンの中から選択される、請求項１に記載の方法。
  3. 遷移金属カチオンが、鉄、亜鉛、マンガン及びそれらの混合物からなる群より選択される、請求項２に記載の方法。
  4. 遷移金属カチオンが、ガドリニウム（Ｇｄ）、テルビウム（Ｔｂ）、イッテルビウム（Ｙｂ）及びそれらの混合物からなる群より選択される、請求項２に記載の方法。
  5. 金属塩が、ＦｅＣｌ２，４Ｈ２Ｏ；ＦｅＣｌ３，６Ｈ２Ｏ；ＺｎＣｌ２，４Ｈ２Ｏ；ＭｎＣｌ２，４Ｈ２Ｏ；Ｇｄ（ＮＯ３）３，６Ｈ２Ｏ；及びそれらの混合物からなる群より選択される金属塩化物又は金属硝酸化物である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
  6. シアノメタラート塩が、式：（Ａｌｋ＋ ｘ［Ｍ’（ＣＮ）ｎ］ｑ−）（式中、Ｍ’は、ＣＮリガンドを有する金属カチオンであり、Ａｌｋ＋は、アルカリカチオンであり、金属カチオン（Ｍ’）は、それが有する数のＣＮリガンド及びアルカリカチオンをもたらす遷移金属カチオンであり、ｑは、ｘに等しい整数であり、より具体的にはｑは、２、３又は４であり；及びｎは、整数であり、より具体的にはｎは、４、６又は８であり；及びｘは、整数であり、より具体的にはｘは、２、３又は４である）のものである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
  7. 金属カチオン（Ｍ’）が、鉄、コバルト、ニッケル又はモリブデン又はタングステンであり；好ましくはＭ’は、鉄カチオンである、請求項６に記載の方法。
  8. シアノメタラート塩が、Ｎａ４Ｆｅ（ＣＮ）６、Ｎａ３Ｆｅ（ＣＮ）６、Ｎａ２Ｎｉ（ＣＮ）４、Ｎａ４Ｍｏ（ＣＮ）８又はＮａ４Ｗ（ＣＮ）８（前記式中、ナトリウムは、カリウムによって置き換えられ得る）からなる群より選択される、請求項６又は７に記載の方法。
  9. 混合工程の前に、以下の工程：
    工程１：すくなくとも１つの金属塩又はシアノメタラート塩を水、好ましくは脱イオン水に溶解することによって、前記水溶液を別個に調製すること、
    工程２：少なくとも１つのアシルグリセロール、ステロール、レシチン及びエタノールと、場合により水からなる均一な油性相内において、工程１によって得られた各水溶液を可溶化して、均一な逆ミセル系を形成すること（ここで、前記均一な油性相は、好ましくは同じものである）
    を含む方法によって、（ｉ）及び（ｉｉ）の生体適合性逆ミセル系を調製する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
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