RU2701106C1 - Способ одновременной диагностики и терапии онкологических заболеваний в эксперименте - Google Patents
Способ одновременной диагностики и терапии онкологических заболеваний в эксперименте Download PDFInfo
- Publication number
- RU2701106C1 RU2701106C1 RU2018115651A RU2018115651A RU2701106C1 RU 2701106 C1 RU2701106 C1 RU 2701106C1 RU 2018115651 A RU2018115651 A RU 2018115651A RU 2018115651 A RU2018115651 A RU 2018115651A RU 2701106 C1 RU2701106 C1 RU 2701106C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- silicon
- nanoparticles
- tumor
- suspension
- silicon nanoparticles
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 33
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 title claims description 9
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 title abstract description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title abstract description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title abstract description 5
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 title abstract description 5
- 239000005543 nano-size silicon particle Substances 0.000 claims abstract description 39
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 31
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims abstract description 23
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 13
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims abstract description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 229910021419 crystalline silicon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims abstract description 6
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims abstract description 4
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims abstract description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims abstract 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims description 2
- 238000001208 nuclear magnetic resonance pulse sequence Methods 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 18
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 abstract description 11
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 abstract description 7
- 239000010703 silicon Substances 0.000 abstract description 7
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 abstract description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 abstract description 4
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 abstract 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 7
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 5
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 5
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 208000031637 Erythroblastic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000036566 Erythroleukaemia Diseases 0.000 description 2
- 208000006552 Lewis Lung Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 238000003917 TEM image Methods 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 208000021841 acute erythroid leukemia Diseases 0.000 description 2
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 238000002173 high-resolution transmission electron microscopy Methods 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 2
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- 229910052814 silicon oxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011856 silicon-based particle Substances 0.000 description 2
- 238000009214 sonodynamic therapy Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 2
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 2
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N Alumina Chemical class [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001233887 Ania Species 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 1
- 238000004435 EPR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 101000573199 Homo sapiens Protein PML Proteins 0.000 description 1
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 238000001069 Raman spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 229910010413 TiO 2 Inorganic materials 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004279 X-ray Guinier Methods 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000004581 coalescence Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 229960000684 cytarabine Drugs 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 1
- 238000010891 electric arc Methods 0.000 description 1
- 238000010894 electron beam technology Methods 0.000 description 1
- 238000002003 electron diffraction Methods 0.000 description 1
- 238000000804 electron spin resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005530 etching Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 102000054896 human PML Human genes 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N iron oxide Inorganic materials [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013980 iron oxide Nutrition 0.000 description 1
- VBMVTYDPPZVILR-UHFFFAOYSA-N iron(2+);oxygen(2-) Chemical class [O-2].[Fe+2] VBMVTYDPPZVILR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 230000009894 physiological stress Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000011863 silicon-based powder Substances 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 235000012431 wafers Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B6/00—Apparatus or devices for radiation diagnosis; Apparatus or devices for radiation diagnosis combined with radiation therapy equipment
- A61B6/02—Arrangements for diagnosis sequentially in different planes; Stereoscopic radiation diagnosis
- A61B6/03—Computed tomography [CT]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82B—NANOSTRUCTURES FORMED BY MANIPULATION OF INDIVIDUAL ATOMS, MOLECULES, OR LIMITED COLLECTIONS OF ATOMS OR MOLECULES AS DISCRETE UNITS; MANUFACTURE OR TREATMENT THEREOF
- B82B1/00—Nanostructures formed by manipulation of individual atoms or molecules, or limited collections of atoms or molecules as discrete units
-
- G—PHYSICS
- G09—EDUCATION; CRYPTOGRAPHY; DISPLAY; ADVERTISING; SEALS
- G09B—EDUCATIONAL OR DEMONSTRATION APPLIANCES; APPLIANCES FOR TEACHING, OR COMMUNICATING WITH, THE BLIND, DEAF OR MUTE; MODELS; PLANETARIA; GLOBES; MAPS; DIAGRAMS
- G09B23/00—Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes
- G09B23/28—Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes for medicine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Mathematical Analysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Radiology & Medical Imaging (AREA)
- Pathology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- High Energy & Nuclear Physics (AREA)
- Algebra (AREA)
- Computational Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Surgery (AREA)
- Mathematical Optimization (AREA)
- Mathematical Physics (AREA)
- Pure & Applied Mathematics (AREA)
- Business, Economics & Management (AREA)
- Educational Administration (AREA)
- Educational Technology (AREA)
- Theoretical Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
Abstract
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано при одновременной диагностике и терапии онкологических заболеваний. Для этого в организм животного осуществляют трансплантацию клеток опухоли, после чего интратуморально или внутривенно вводят суспензию кремниевых наночастиц размера 25±5 нм, состоящих из ядра кристаллического кремния, покрытого аморфной оболочкой из диоксида кремния, полученных плазмохимическим методом и имеющих до 1019 Pb-центров. Концентрация наночастиц кремния в суспензии 0,3-0,5 мг/мл. При этом для приготовления суспензии наночастиц кремния используют дистиллированную воду или физиологический раствор. Затем проводят магнитно-резонансную томографию тела животного на частоте атомов водорода в режиме измерения Т2 взвешенной последовательности импульсов. На основании результатов визуального анализа полученных изображений диагностируют наличие опухоли и затем наблюдают ингибирование роста опухоли. Способ обеспечивает высокую надежность диагностики и позволяет эффективно подавлять рост опухоли посредством использования наночастиц кремния, которые не являются цитотоксичными. 1 з.п. ф-лы, 4 ил., 2 пр.
Description
Изобретение относится к экспериментальной медицине, конкретно к способам одновременной диагностики и терапии (тераностики) онкологических заболеваний, и может быть использовано в онкологии для диагностики опухолей и их лечения.
Известен способ диагностики онкологических заболеваний радиоизотопным методом с использованием радиоактивных изотопов: 32Р, 85Sr, 99Тс, после внутривенных инъекций которых млекопитающее сканируют и определяют остаточную дозу излучения. Максимальное излучение соответствует месту расположения опухоли [1, 2]. Существенным недостатком способа является опасность для здоровья радиоактивных изотопов, а также отсутствие возможности одновременной терапии.
В последние годы для диагностики онкологических заболеваний в эксперименте широко применяются наночастицы оксидов металлов.
Многочисленные экспериментальные и теоретические исследования показывают, что переход размеров исследуемых частиц в нанометровый диапазон приводит к качественному изменению свойств объекта. При этом структурные элементы могут приобретать физические, физико-химические и химические свойства, существенно отличающиеся от свойств объемного аналога. Применение наночастиц в медицине объясняется, во-первых, прекрасным транспортом внутри живых организмов даже по самым тонким капиллярам и способностью проникать в клетки путем эндоцитоза, а во-вторых, возможностью модификации наночастиц молекулами различных веществ.
Известны способы диагностики онкологических заболеваний с использованием наночастиц на основе оксидов железа с возможным сочетанием с другими соединениями и оксидами [3, 4]. Недостатками данных способов являются токсичность используемых частиц, очень медленное выведение их из организма, а также отсутствие возможности одновременной терапии.
Известен способ диагностики онкологических заболеваний с использованием оксидов алюминия. Цитотоксическое действие структур определяли при помощи МТТ-теста на культурах базальных клеток HeLa, А549, MDA и РуМТ [5]. Недостатком этого способа является то, что наночастицы оксида алюминия плоской формы обладают ярко выраженным токсическим действием по отношению к исследованным линиям клеток, а также отсутствие возможности одновременной терапии.
Известен способ диагностики онкологических заболеваний с использованием наночастиц диоксида титана [6]. Недостатком этого способа является то, что диоксид титана приводят к разрыву одно- и двухцепочечных ДНК, а также приводят к повреждению хромосом. Попадая в организм, титановые наночастицы накапливаются в различных органах, поскольку в организме нет механизмов их выведения. Вследствие своих малых размеров они легко проникают в клетки и начинают влиять на их элементы. В частности, наночастицы вызывают так называемый оксидативный стресс - физиологический стресс или повреждение организма, вследствие протекания нехарактерных для собственного метаболизма окислительных реакций.
Таким образом, общим недостатком выше указанных способов является то, что наночастицы практически всех оксидов металлов по результатам медицинских и биомедицинских исследований обнаруживают разную степень токсичности, накапливаясь в тканях внутренних органов. Кроме того, в этих известных способах отсутствует возможность одновременной диагностики и терапии онкологических заболеваний.
Перечисленных выше недостатков лишены наноразмерные частицы кремния и диоксида кремния, проявляющие высокие биосовместимые и биодеградируемые свойства [7, 8]. Кроме того, кремниевые наночастицы нетоксичны при распаде в теле: продукт их метаболизма - кремниевая кислота - содержится в человеческом организме и полезна для образования костной и соединительной тканей.
Известно использование кремниевых наночастиц в косметических средствах, ослабляющих ультрафиолетовое излучение [9, 10], и в онкологии в качестве усилителя ультразвукового воздействия для сонодинамической терапии опухолей - для данного применения водную суспензию наночастиц получали механическим измельчением пленок мезопористого кремния в планетарной мельнице FRITSCH "Pulverisette 7", пленки мезопористого кремния, в свою очередь, формировались с помощью стандартного метода электрохимического травления пластин кристаллического кремния [11].
Задачей настоящего изобретения является создание эффективного и безопасного способа одновременной диагностики и терапии (тераностики) онкологических заболеваний в эксперименте с использованием биосовместимых и биорезорбируемых в организме кремниевых наночастиц, позволяющих применять метод магнитно-резонансной томографии (МРТ).
Решение поставленной задачи достигается предлагаемым способом одновременной диагностики и терапии (тераностики) онкологических заболеваний в эксперименте, заключающимся в том, что в организм животного осуществляют трансплантацию клеток опухоли, после чего интратуморально или внутривенно вводят суспензию кремниевых наночастиц размера 25±5 нм, состоящих из ядра кристаллического кремния, покрытого аморфной оболочкой из диоксида кремния, полученных плазмохимическим методом и имеющих до 1019 Pb-центров, при концентрации наночастиц кремния в суспензии 0,3-0,5 мг/мл, с последующим проведением магнитно-резонансной томографии тела животного на частоте атомов водорода в режиме измерения Т2 взвешенной последовательности импульсов, и на основании результатов визуального анализа полученных изображений диагностируют наличие опухоли и затем наблюдают ингибирование роста опухоли.
Для приготовления суспензии наночастиц кремния можно использовать дистиллированную воду или физиологический раствор.
Концентрация наночастиц кремния в суспензии может составлять 0,3-0,5 мг/мл.
Кремниевые наночастицы, состоящие из ядра кристаллического кремния, покрытого аморфной оболочкой из диоксида кремния, имеют до 1019 Рb-центров.
Плазмохимический синтез используемых в предлагаемом способе наночастиц кремния осуществлялся в замкнутом газовом цикле: в инертном газе в присутствии кислорода. Заполнение системы инертным высокоочищенным газом (Аr) проводилось из магистрали. Глубокую очистку технологического газа от примесей влаги и кислорода производили при помощи расплавленного алюминия или специальных финишных очистителей, необратимо поглощающих примеси до уровня нескольких ppb. Концентрация кислорода в подаваемом газе составляла 1,5-3,0 об. %. Толщина поверхностного оксидного слоя на ядре кристаллического кремния (степень окисления кремния) контролировалась по концентрации кислорода в отходящем газе. В качестве реактора использовался плазменный испаритель-конденсатор, работающий в дуговом низкочастотном разряде. Исходное сырье - порошок кремния (99,99%) подавался в реактор инертным газовым потоком из соответствующего дозатора. В реакторе порошок испарялся при температуре ~10000°С. На выходе из низкотемпературной плазменной зоны полученная парогазовая смесь подвергалась резкому охлаждению газовыми струями, то есть создавались условия для конденсации нанокремния. Далее полученный аэрозоль с температурой 100-200°С поступал в холодильник, где охлаждался до температуры 60-80°С. Крупные частицы, в том числе и не переработанная фракция, отделялись от кондиционного ультрадисперсного порошка в классификаторе инерционного типа [12].
Полученные кремниевые наночастицы были исследованы взаимодополняющим набором методов: просвечивающей электронной микроскопии высокого разрешения (HRTEM, Jeol-JEM 2100 F/Cs, 200 keV), рентгеновской дифракции (Guinier camera Huber G670), спектроскопии комбинационного рассеяния (Т-64000, Jobin Yvon), люминесцентной спектроскопии (QE65000, Ocean Optics, USA), спектроскопии электронного парамагнитного резонанса (CMS 8400 ADANI), РФЭС (Kratos AXIS Ultra DLD, Kratos Analytical, UK). В результате было установлено, что исследуемые частицы имеют размер 25±5 нм.
На микрофотографии, приведенной на фиг. 1А (ПЭМ изображение), отчетливо видны структурные элементы размером 20-30 нм, образующие разветвленные агрегаты. Механизм агрегирования может быть разным, в данном случае слипание возможно за счет электростатического взаимодействия частиц нанокремния, которое возникает в микроскопе при действии электронного пучка на частицы. Фиг. 1В и 1С (ПЭМ изображения) получены при высоком разрешении; фиг. 1D - картина электронной дифракции.
На фиг. 1Е и 1F приведены результаты исследования распределения наночастиц по размерам (на фиг. 1F - методом динамического светорассеяния).
Для получения информации о структуре отдельной частицы были приготовлены 0,1% по массе золи нанокремния в воде. Данный способ пробоподготовки в сочетании с ультразвуковой обработкой позволил избежать слипания отдельных наночастиц. Сочетание рентгенофазового анализа и просвечивающей электронной микроскопии позволило установить, что полученные ультрадисперсные частицы кремния размера 25±5 нм, состоят из кристаллического кремниевого ядра и аморфной оксидной оболочки. Количественное содержание оксида кремния в полученных наночастицах, контролируемое в процессе их синтеза по количеству поглощенного кислорода, составляло 65-80 мас. %.
Такая структура полученных плазмохимических наноразмерных кремниевых частиц имеет большое число - до 1019 Рb-центров (ЭПР-спектрометр высокого разрешения CMS 8400 ADANI), связанных с дефектами, локализованными на поверхности наночастиц и поверхности раздела "кремниевое ядро - оксидная оболочка", что обеспечивает возможность их использования для неинвазивной визуализации методом МРТ распределения и локализации введенных наночастиц в органах и тканях живых организмов, мониторинга ингибирования роста опухоли и замедления процесса метастазирования, а также контроля их биодеградации в организме.
При разработке предлагаемого способа одновременной диагностики и терапии (тераностики) онкологических заболеваний in vivo нами предварительно были проведены исследования цитотоксичности полученных плазмохимических частиц нанокремния in vitro.
Для анализа цитотоксичности использовали моноклональные клеточные линии эритролейкоза человека К562. Анализ проводили с помощью стандартного колориметрического МТТ-теста [13, 14], позволяющего количественно определять выживаемость клеток относительно контроля. Клетки эритролейкоза К562 высевали в 96-луночный планшет в объеме 100 мкл. Исходную водную суспензию частиц нанокремния разводили в PBS 1:100, получая концентрацию 730 мкг/мл, и обрабатывали ультразвуком для предотвращения слипания частиц. Далее приготавливали серию 5х разведений из первого разведения 1:100. 5 мкл полученных разведенных суспензий добавляли к клеткам в 4 повторах для каждой точки. Оставляли 4 лунки с клетками, в которые не добавляли нанокремний (контрольные лунки). Планшет помещали в СО2-инкубатор. Через 12, 48 и 72 часа во все лунки добавляли по 5 мкл раствора МТТ-реагента и помещали планшет в СO2-инкубатор на 3 часа. После инкубации во все лунки добавляли по 100 мкл лизирующего буфера, помещали планшет в герметично закрытый пакет и оставляли на ночь при комнатной температуре, чтобы обеспечить лизис клеток и растворение образовавшихся кристаллов формазана. На следующий день на планшетном спектрофотометре измеряли поглощение при 540 нм (формазан) и 690 нм (фон) для вычисления коэффициента оптического поглощения (OD), который пропорционален количеству живых клеток в лунке.
Проведенный анализ показал, что плазмохимические частицы нанокремния в исследованной концентрации не обладают токсичностью in vitro на клеточные линии К562 независимо от времени воздействия (см. фиг. 2).
В экспериментах in vivo клетки карциномы легкого Льюис (CLL) трансплантировали внутримышечно в левую заднюю лапу самцов мышей линии C57BL. После достижения опухолью объема 210±30 мм3 на 8 сутки после прививки проводилось введение суспензии кремниевых наночастиц в 0,9% растворе NaCl (концентрация 0,5 мг/мл) интратуморально или внутривенно в хвостовую вену по 0,5 мл.
В случае интратуморального введения наблюдали биологические эффекты терапевтической значимости, оцененные как по критерию увеличения продолжительности жизни, так и по критерию торможения роста опухоли. Средняя продолжительность жизни лабораторных животных в опытной группе была на 16±5% больше, чем в группе интактного контроля (мыши с привитой опухолью LLC не подвергавшиеся никаким воздействиям), а максимальная продолжительность жизни увеличилась почти на 30%, как это видно из данных, приведенных на фиг. 3, кривая 3. Для сравнения в этих экспериментах in vivo нами были испытаны кремниевые наночастицы, полученные механическим измельчением пленок мезопористого кремния, как описано в работе [11] (аналог). В контрольной партии лабораторных мышей последние полностью погибали к 34 дню развития опухолей - кривая 1. При введении наночастиц кремния аналога [11] полная гибель животных наступала на 35 сутки - кривая 2. При введении плазмохимических частиц нанокремния, используемых в предлагаемом способе, гибель животных наступала на 42 сутки развития опухоли - кривая 3 на фиг. 3.
Исследования кинетики роста опухоли (по изменению объема опухоли у контрольных и опытных животных) при интратуморальном введении плазмохимических наночастиц показали, что у мышей опытной группы первичный узел опухоли рос медленнее, чем в контрольной группе на протяжении всего периода наблюдения. Разница по проценту торможения роста опухолей доходила до 26±5% к 27 дню от начала развития опухолей. Полученные результаты указывают на заметное ингибирование роста опухоли и замедление процесса метастазирования после введения плазмохимических наночастиц кремния.
При внутривенном введении в организм здоровых лабораторных животных плазмохимических наночастиц кремния каких-либо непосредственных или отдаленных токсических эффектов не наблюдалось. Исследованная биологическая эффективность терапевтической значимости как по критерию увеличения продолжительности жизни, так и по критерию торможения роста опухоли была выражена слабее, чем в случае интратуморального введения.
Как видно из приведенных результатов, несмотря на отсутствие цитотоксичности плазмохимических наночастиц кремния в исследованиях in vitro, эти частицы эффективно подавляют рост опухоли LLC при введении in vivo.
Имплантация кусочков ткани, взятых из привитых опухолей LLC, здоровым мышам приводит к росту у них соответствующих опухолей.
Были проведены эксперименты по наблюдению накопления плазмохимических кремниевых наночастиц в опухоли и торможения роста последней на модели малых лабораторных животных (мышей) методом магниторезонансной томографии (МРТ), которые проводились на МРТ биоспектротомографе BIOSPEC ВС 70/30 USR. (Bruker) с использованием импульсных последовательностей RARE (5500/16 [время повторения, мс/время эхо, мс]) и MSME (800/14 [время повторения, мс/время эхо, мс]) на частоте атомов водорода (H1). Визуальный анализ изображений на томограммах позволил определить структуры опухоли карциномы легких Льюис и внутренних органов (кости, легкие, почки, селезенка, мочевой пузырь и печень). Эксперименты проводили на 2-х группах мышей вида BDF1 при интратуморальном или внутривенном введении.
Пример 1: кремниевые наночастицы суспензировались в физиологическом растворе (0,9% растворе NaCl в воде) и интратуморально вводились в объеме 0,5 мл с концентрацией 0,5 мг/мл на каждое животное.
Пример 2: кремниевые наночастицы суспензировались в физиологическом растворе (0,9% растворе NaCl в воде) и внутривенно вводились в объеме 0,5 мл с концентрацией 0,5 мг/мл на каждое животное.
Установлено, что как при интратуморальном, так и при внутривенном введении плазмохимических кремниевых наночастиц уже через 1 час наблюдается потемнение центральной части опухоли, обусловленное контрастными свойствами наночастиц, вызывающих укорочение поперечных времен релаксации протонов [15], что делает видимыми структуры опухолевой ткани и позволяет осуществлять надежную диагностику опухоли. Через 24 часа после введения наночастиц потемнение области опухоли заметно уменьшалось, фиксировались признаки уменьшения скорости роста опухоли, и наблюдалось появление светлого ореола вокруг опухоли, что можно связать с проявлениями диффузии наночастиц кремния из области опухоли, которые стимулировали накопление лимфоцитов и межклеточной воды.
На фиг. 4А в качестве примера приведены МРТ Т2-взвешенные изображения опухоли опытной мыши последовательно: до интратуморального введения суспензии плазмохимических наночастиц кремния, через 1 час после введения наночастиц и через 24 часа после введения; на фиг. 4В - МРТ Т2-взвешенные изображения селезенки этой мыши; 4С - МРТ Т2-взвешенные изображения опухоли опытной мыши до внутривенного введения, через 1 час после введения и через 24 часа после введения суспензии наночастиц кремния.
Таким образом, предлагаемый способ одновременной диагностики и терапии (тераностики) онкологических заболеваний обеспечивает высокую надежность диагностики и позволяет эффективно подавлять рост опухоли. Благодаря использованию безвредных для живых организмов биосовместимых и биодеградируемых плазмохимических кремниевых наночастиц и возможности применения метода МРТ способ безопасен.
Очевидная дешевизна наночастиц кремния, синтезированных плазмохимическим методом, возможность их получения в массовых количествах, контрастное проявление в МРТ диагностике и уникальные терапевтические свойства открывают возможность широкого применения их в лабораторных и медицинских целях.
Источники информации
1. Долгушин Б.И. Методы лучевой диагностики в онкологии. Энциклопедия клинической онкологии. Главный ред. Давыдов М.И. Москва, РЛС-2004, с. 30-33.
2. Ширяев С.В. Ядерная медицина в онкологии. Энциклопедия клинической онкологии. Главный ред. Давыдов М.И. Москва, РЛС-2004, с. 117-125.
3. Брусенцов Н.А. и др. Способ диагностики онкологических заболеваний в эксперименте. RU 2343828, А61В 15/055, А61K 49/06, опубл. 21.01.2009.
4. N. Shahabadi et all. Improving antiproliferative effect of the anticancer drug cytarabine on human promyelocytic leukemia cells by coating on Fe3O4-SiO2 nanoparticles // Colloids and Surfaces, B. 2016. V. 141. P. 213-222.
5. E. Radziun et all. Assessment of the cytotoxicity of aluminium oxide nanoparticles on selected mammalian cells // Toxicology In Vitro, 2011. V. 25. P. 1694-1700.
6. S. Singh et all. Endocytosis, oxidative stress and IL-8 expression in human lung epithelial cells upon treatment with fine and ultrafme ТiO2: role of the specific surface area and of surface methylation of the particles // Toxicology and Applied Pharmacology. 2007. V. 222. 141-151.
7. Дурнев А.Д., Соломина A.C. и др. Исследование генотоксичности и репродуктивной токсичности нанокристаллов кремния // Бюл. экспер. биол. 2010, Т. 149, №4, С. 429-433.
8. Low S.P., Voelcker N.H. // Handbook of Porous Silicon / Ed. L. Canham. Cham, 2014, P. 381-393.
9. Бэкман Джеймс и др. Косметическое средство для защиты от ультрафиолетового излучения. RU 2227015, А61K 7/40, А61K 7/42, опубл. 20.04.2004.
10. Beckman J., Ischenko А.А. Ultra-violet radiation absorbing silicon particle nanoclusters. US 8,394,412 B1. Date of Patent: Mar. 12, 2013.
11. Осминкина Л.А. и др. Кремниевые наночастицы как усилители ультразвукового воздействия для сонодинамической терапии // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2016. Т. 161. №2. С. 261-265.
12. Ищенко А.А., Фетисов Г.В., Асланов Л.А. Нанокремний: свойства, получение, применение, методы исследования и контроля. М.: ФИЗМАТЛИТ, 2013, 648 с.
13. Berridge M.V., Herst P.M., and Tan A.S. Tetrazolium dyes as tools in cell biology: new insights into their cellular reduction. Biotechnology Annual Review, 11: p. 127-152 (2005).
14. Mosmann, Tim (December 1983). «Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays». Journal of Immunological Methods. 65 (1-2): 55-63
15. Gongalsky M.B., Kargina Yu.V. и др. "Porous silicon nanoparticles as biocompatible contrast agents for magnetic resonance imaging", Applied Physics Letters, v. 107, 233702(2015).
Claims (2)
1. Способ одновременной диагностики и терапии онкологических заболеваний в эксперименте, заключающийся в том, что в организм животного осуществляют трансплантацию клеток опухоли, после чего интратуморально или внутривенно вводят суспензию кремниевых наночастиц размера 25±5 нм, состоящих из ядра кристаллического кремния, покрытого аморфной оболочкой из диоксида кремния, полученных плазмохимическим методом и имеющих до 1019 Pb-центров, при концентрации наночастиц кремния в суспензии 0,3-0,5 мг/мл, с последующим проведением магнитно-резонансной томографии тела животного на частоте атомов водорода в режиме измерения Т2 взвешенной последовательности импульсов, и на основании результатов визуального анализа полученных изображений диагностируют наличие опухоли и затем наблюдают ингибирование роста опухоли.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для приготовления суспензии наночастиц кремния используют дистиллированную воду или физиологический раствор.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018115651A RU2701106C1 (ru) | 2018-04-26 | 2018-04-26 | Способ одновременной диагностики и терапии онкологических заболеваний в эксперименте |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018115651A RU2701106C1 (ru) | 2018-04-26 | 2018-04-26 | Способ одновременной диагностики и терапии онкологических заболеваний в эксперименте |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2701106C1 true RU2701106C1 (ru) | 2019-09-24 |
Family
ID=68063327
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018115651A RU2701106C1 (ru) | 2018-04-26 | 2018-04-26 | Способ одновременной диагностики и терапии онкологических заболеваний в эксперименте |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2701106C1 (ru) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2343828C2 (ru) * | 2007-02-12 | 2009-01-20 | Государственное учреждение Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН | Способ диагностики онкологических заболеваний в эксперименте |
| WO2009013630A2 (en) * | 2007-07-26 | 2009-01-29 | Consejo Superior De Investigaciones Cientificas | Hyperthermia devices and their uses with nanoparticles |
| RU2447915C1 (ru) * | 2010-09-02 | 2012-04-20 | Любовь Андреевна Осминкина | Способ усиления действия ультразвука при лечении гипертермией опухолевых тканей путем использования нанокластеров кремния |
-
2018
- 2018-04-26 RU RU2018115651A patent/RU2701106C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2343828C2 (ru) * | 2007-02-12 | 2009-01-20 | Государственное учреждение Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН | Способ диагностики онкологических заболеваний в эксперименте |
| WO2009013630A2 (en) * | 2007-07-26 | 2009-01-29 | Consejo Superior De Investigaciones Cientificas | Hyperthermia devices and their uses with nanoparticles |
| RU2447915C1 (ru) * | 2010-09-02 | 2012-04-20 | Любовь Андреевна Осминкина | Способ усиления действия ультразвука при лечении гипертермией опухолевых тканей путем использования нанокластеров кремния |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| JORDAN A. et al. Effects of magnetic fluid hyperthermia (MFH) on C3H mammary carcinoma in vivo, Int J. Hyperthermia, 1997, Nov-Dec, 6, p.587-605. * |
| КОТКОВСКИЙ Г.Е. и др. Фотофизические свойства пористого кремния и его применение в технике и биомедицине. Ядерная физика и инжиниринг. 2013, том 4 (2), с.174-192. * |
| КОТКОВСКИЙ Г.Е. и др. Фотофизические свойства пористого кремния и его применение в технике и биомедицине. Ядерная физика и инжиниринг. 2013, том 4 (2), с.174-192. ОСМИНКИНА Л.А. и др. Кремниевые наночастицы как усилители ультразвукового воздействия для сонодинамической терапии. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2016, Т.161, номер 2, с.261-265. JORDAN A. et al. Effects of magnetic fluid hyperthermia (MFH) on C3H mammary carcinoma in vivo, Int J. Hyperthermia, 1997, Nov-Dec, 6, p.587-605. * |
| ОСМИНКИНА Л.А. и др. Кремниевые наночастицы как усилители ультразвукового воздействия для сонодинамической терапии. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2016, Т.161, номер 2, с.261-265. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hussein et al. | Plasmonic MXene-based nanocomposites exhibiting photothermal therapeutic effects with lower acute toxicity than pure MXene | |
| Kihara et al. | Effect of composition, morphology and size of nanozeolite on its in vitro cytotoxicity | |
| Yang et al. | A core/shell/satellite anticancer platform for 808 NIR light-driven multimodal imaging and combined chemo-/photothermal therapy | |
| CN100592921C (zh) | 可活化颗粒、制备及应用 | |
| Zhang et al. | X-ray-triggered NO-released Bi–SNO nanoparticles: all-in-one nano-radiosensitizer with photothermal/gas therapy for enhanced radiotherapy | |
| Badrigilan et al. | Iron oxide/bismuth oxide nanocomposites coated by graphene quantum dots:“Three-in-one” theranostic agents for simultaneous CT/MR imaging-guided in vitro photothermal therapy | |
| Panich et al. | PVP‐coated Gd‐grafted nanodiamonds as a novel and potentially safer contrast agent for in vivo MRI | |
| EP2130553A1 (en) | Inorganic nanoparticles of high density to destroy cells in-vivo | |
| US20100009445A1 (en) | Rare earth nanoparticles | |
| CN104812375A (zh) | 用于治疗氧化应激的纳米二氧化铈 | |
| EA029635B1 (ru) | Применение наночастицы, включающей металлический материал, покрытый материалом оксида гафния, в онкологии и композиция, ее содержащая | |
| de Alcântara Sica de Toledo et al. | Thermal magnetic field activated propolis release from liquid crystalline system based on magnetic nanoparticles | |
| Jiang et al. | A soft X-ray activated lanthanide scintillator for controllable NO release and gas-sensitized cancer therapy | |
| Gao et al. | Facile one-pot synthesis of Fe 3 O 4@ chitosan nanospheres for MRI and fluorescence imaging guided chemo-photothermal combinational cancer therapy | |
| Farag et al. | The combined antibacterial and anticancer properties of nano Ce-containing Mg-phosphate ceramic | |
| CN114558132A (zh) | 一种羟基磷灰石负载的四氧化三铁纳米材料及其制备方法和应用 | |
| Laranjeira et al. | Enhanced biosafety of silica coated gadolinium based nanoparticles | |
| Chen et al. | A magnesium-based coordination container as a multi-drugs co-loaded system for boosting anti-inflammatory therapy in joints | |
| Kielbik et al. | Preliminary studies on biodegradable zinc oxide nanoparticles doped with Fe as a potential form of iron delivery to the living organism | |
| Hayashi et al. | In situ XRF analysis of Cs adsorption by the precipitation bands of Prussian blue analogues formed in agarose gels | |
| Li et al. | Development of a magnetic MoS2 system camouflaged by lipid for chemo/phototherapy of cancer | |
| RU2701106C1 (ru) | Способ одновременной диагностики и терапии онкологических заболеваний в эксперименте | |
| CN103768620B (zh) | Fe/介孔氧化硅纳米复合材料及其制备方法和应用 | |
| WO1997005904A2 (de) | Verwendung von metall-clustern als kontrastmittel oder strahlentherapeutikum | |
| Wang et al. | Hyaluronic acid-mediated one-pot facile synthesis of a sensitive and biocompatible Gd 2 O 3 nanoprobe for MR imaging in vivo |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200427 |