JP6846023B2 - (z)−3:(e)−2−ヘキセナールイソメラーゼ - Google Patents
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Description
なお、緑の香り物質は、炭素数6の直鎖不飽和炭化水素化合物のアルデヒド体、アルコール体などから成り立っており、葉緑体に含まれる脂肪酸の一種であるリノレン酸に由来し、いくつかの酵素が作用して生合成される。
さらに、非特許文献3には、アルファルファの種が、3Z:2E−エナールイソメラーゼ活性を示したことが記載されている。
[2]アミノ酸配列(A2)が、配列番号1で示されるアミノ酸配列の39番目〜68番目のアミノ酸配列と50%以上の相同性を有する配列を含む前記[1]記載の酵素。
[3]前記ポリペプチドのアミノ酸数が300〜400である前記[1]又は[2]に記載の酵素。
[4]前記アミノ酸配列(A)からなるポリペプチドで構成された前記[1]〜[3]のいずれかに記載の酵素。
[5]前記[1]〜[4]のいずれかに記載の酵素を構成するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
[6]下記(i)〜(iii)のいずれかの塩基配列を含む前記[5]記載のポリヌクレオチド:
(i)配列番号9〜13、39〜41のいずれかで示される塩基配列、
(ii)配列番号9〜13、39〜41のいずれかで示される塩基配列に対する相同性が90%以上である塩基配列、又は
(iii)配列番号9〜13、39〜41のいずれかにおいて1又は2〜20個の塩基が置換、欠失、挿入及び/又は付加された塩基配列。
[7]前記[5]又は[6]記載のポリヌクレオチドを含む組換えベクター。
[8]前記[7]記載の組換えベクターにより形質転換された形質転換体。
[9]前記[8]記載の形質転換体を培養し、培養物から前記[1]〜[4]のいずれかに記載の酵素を採取する方法。
[10]前記[1]〜[4]のいずれかに記載の酵素を含む飲食品。
本発明の酵素は、(Z)−3−ヘキセナールを(E)−2−ヘキセナールに異性化(又は変換)するための酵素(異性化酵素、イソメラーゼ)である。また、本発明の酵素は、クピン(cupin)・スーパーファミリーに属するタンパク質である。そして、このような酵素は、配列番号1〜5、35〜37のいずれかで示されるアミノ酸配列(A1)及び配列番号1で示されるアミノ酸配列の54番目に対応する位置のアミノ酸がヒスチジン、60番目に対応する位置のアミノ酸がリシン、128番目に対応する位置のアミノ酸がチロシンであり、かつアミノ酸配列に基づくタンパク質の立体構造において、前記ヒスチジン、リシンおよびチロシンが、酵素の活性中心に配置されるアミノ酸配列(A2)から選択されたアミノ酸配列(A)を含むポリペプチドで構成されている。
なお、飲食品を構成する植物由来成分は、本発明の酵素を含んでいてもよく、含んでいなくてもよい。本発明の酵素を含んでいる場合、上記割合は、元来、植物由来の成分に含まれる酵素を含まないものとする。
本発明のポリヌクレオチドは、前記ポリペプチド(又は前記アミノ酸配列(A))をコードするポリヌクレオチドである。このようなポリヌクレオチドは、前記酵素を生成するため、前記酵素を生成するための成分(酵素生成剤)ということもできる。
ポリヌクレオチドとしては、前記ポリペプチドをコードするものであれば特に限定されないが、例えば、配列番号1〜5のいずれかで示されるアミノ酸配列(A1)をコードする塩基配列(B1)、及びアミノ酸配列(A1)と類似するアミノ酸配列(A2)をコードする塩基配列(B2)から選択された塩基配列(B)を含むポリヌクレオチドが挙げられる。
例えば、前記ポリヌクレオチドは、5’側又は3’側にタグ標識をコードするポリヌクレオチドに融合されていてもよい。また、非翻訳領域の配列、ベクター配列などの他の配列を含んでいてもよい。
<1>(Z)−3−ヘキセナールを(E)−2−ヘキセナールに異性化するための酵素であって、配列番号1〜5のいずれかで示されるアミノ酸配列(A1)及び配列番号1〜5のいずれかで示されるアミノ酸配列に対して60%以上の相同性を有し、かつ配列番号1で示されるアミノ酸配列の54番目に対応する位置のアミノ酸がヒスチジンであるアミノ酸配列(A2)から選択されたアミノ酸配列(A)を含むポリペプチドで構成された酵素。
<2>アミノ酸配列(A2)が、配列番号1で示されるアミノ酸配列の32番目に対応する位置のアミノ酸がバリン、54番目に対応する位置のアミノ酸がヒスチジン、167番目に対応する位置のアミノ酸がロイシン、177番目に対応する位置のアミノ酸がイソロイシン、239番目に対応する位置のアミノ酸がロイシン、262番目に対応する位置のアミノ酸がバリン、266番目に対応する位置のアミノ酸がロイシン、299番目に対応する位置のアミノ酸がイソロイシン、339番目に対応する位置のアミノ酸がプロリンである前記<1>に記載の酵素。
<3>アミノ酸配列(A2)が、配列番号1〜5のいずれかで示されるアミノ酸配列に対して、75%以上の相同性を有する前記<1>又は<2>に記載の酵素。
<4>アミノ酸配列(A)が、下記(i)〜(iii)のいずれかのアミノ酸配列である前記<1>〜<3>のいずれかに記載の酵素。
(i)配列番号1〜5のいずれかで示されるアミノ酸配列
(ii)配列番号1〜5のいずれかで示されるアミノ酸配列に対する相同性が75%以上であり、かつ配列番号1で示されるアミノ酸配列の32番目に対応する位置のアミノ酸がバリン、54番目に対応する位置のアミノ酸がヒスチジン、167番目に対応する位置のアミノ酸がロイシン、177番目に対応する位置のアミノ酸がイソロイシン、239番目に対応する位置のアミノ酸がロイシン、262番目に対応する位置のアミノ酸がバリン、266番目に対応する位置のアミノ酸がロイシン、299番目に対応する位置のアミノ酸がイソロイシン、339番目に対応する位置のアミノ酸がプロリンであるアミノ酸配列
(iii)配列番号1〜5のいずれかにおいて1又は複数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入及び/又は付加され、かつ配列番号1で示されるアミノ酸配列の32番目に対応する位置のアミノ酸がバリン、54番目に対応する位置のアミノ酸がヒスチジン、167番目に対応する位置のアミノ酸がロイシン、177番目に対応する位置のアミノ酸がイソロイシン、239番目に対応する位置のアミノ酸がロイシン、262番目に対応する位置のアミノ酸がバリン、266番目に対応する位置のアミノ酸がロイシン、299番目に対応する位置のアミノ酸がイソロイシン、339番目に対応する位置のアミノ酸がプロリンであるアミノ酸配列
<5>前記<1>〜<4>のいずれかに記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
<6>下記(i)〜(iii)のいずれかの塩基配列を含む前記<5>記載のポリヌクレオチド。
(i)配列番号9〜13のいずれかで示される塩基配列
(ii)配列番号9〜13のいずれかで示される塩基配列に対する相同性が90%以上である塩基配列
(iii)配列番号9〜13のいずれかにおいて1又は2〜20個の塩基が置換、欠失、挿入及び/又は付加された塩基配列
<7>前記<5>又は<6>に記載のポリヌクレオチドを含む組換えベクター。
<8>前記<7>に記載の組換えベクターにより形質転換された形質転換体。
<9>前記<8>に記載の形質転換体を培養し、培養物から前記<1>〜<4>のいずれかに記載の酵素を採取する方法。
<10>前記<1>〜<4>のいずれかに記載の酵素を含む飲食品。
[酵素活性の測定]
酵素溶液100μLを、395μLのHepes[4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジンエタンスルホン酸]−KOH緩衝液(pH7.0、50mM)と、5μLの(Z)−3−ヘキセナール(ゼオン社、濃度1M)と混合し、任意時間(5〜30分間)、室温で反応させた。反応後、2,4−ジニトロフェニルヒドラジン(DNPH)のアセトニトリル溶液(25mM)25μLと、20μLのギ酸を加え、アルデヒド成分[(Z)−3−ヘキセナール(生成している場合にはさらに(E)−2−ヘキセナール)]をDNP誘導体化した。300μLのヘキサンを加えてよく撹拌してから静置した。ヘキサン層(上層)を回収し、遠心濃縮機によりヘキサンを除去した。残渣を200μLのアセトニトリルに溶解したものを、HPLCにより分析し、(E)−2−ヘキセナールの生成の有無を確認した。
新鮮な赤パプリカから種子とワタを取り除き、良く水洗した果皮部のみを300gはかり取り、450mlのHepes−KOH緩衝液(pH7.0、50mM)とともにミキサーで破砕抽出した。二重のガーゼでろ過し残渣を取り除いた後、遠心分離器(RPR12−2、日立社製)にて、10,000rpmで10分間遠心分離した。
上清を回収し、30%飽和濃度となるように硫酸アンモニウムを加え、30%飽和硫酸アンモニウムを含む50mMリン酸カリウム緩衝液(pH7.0)で平衡化したフェニルセファロース(Phenyl−Sepharose、GEヘルスケア製)に全量供した。
非吸着物質を30%飽和硫酸アンモニウムを含む50mMリン酸カリウム緩衝液(pH7.0)で十分洗い流した後、50mMリン酸カリウム緩衝液(pH7.0)で吸着したタンパク質を溶出した。各溶出画分について酵素活性を測定し、活性のあった画分を集め、50mMリン酸カリウム緩衝液(pH7.0)で平衡化したハイドロキシアパタイトカラムに供した。
活性画分を集め、その液量の9倍量の0.1%(w/v)β−D−ドデシルマルトシドを含む20mMのHepes−KOH緩衝液(pH7.0)を加えた後、同じ緩衝液で平衡化したMonoQ(2ml、GEヘルスケア製)カラムに吸着させた。吸着したタンパク質は、1MのNaCl、0.1%(w/v)β−D−ドデシルマルトシドを含む20mMのHepes−KOH緩衝液(pH7.0)で溶出し、各画分の酵素活性を測定した。
吸着タンパク質は0Mから0.3MまでのNaClグラジエント溶出により分画した後、活性測定とSDS電気泳動を行うことにより、目的酵素が単一に精製されたことを確認した。結果を図1に示す。
実施例1で得られた精製タンパク質を70%(v/v)ギ酸に溶解し、臭化シアン片を加え、暗所で一晩反応させた後、減圧乾固した。
回収後のペプチドは、15%ポリアクリルアミドゲル(ATTO社製)を用いたトリストリシン(Tris−Tricine)緩衝液系によるSDS電気泳動法で分離した後、Tris−アミノカプロン酸緩衝液系によるセミドライブロッティング法を用いてポリビニリデンジフルオリド(PVDF)膜に転写した。転写後、PVDFに転写された断片化ペプチドを45%メタノール、5%酢酸溶液に溶解した0.1%クーマシーブリリアントブルーR−250により染色した。
実施例2で決定した2つのペプチドのアミノ酸配列に基づいて、Sol Genomics Network (http://solgenomics.net)のBLAST検索により、タンパク質をコードすると考えられる遺伝子を検索したところ、トマトの13S貯蔵タンパク質2との類似性が示されたCaHI(CA08g14620)が2つのアミノ酸配列を含むことがわかった。
植物由来の酵素を大腸菌で安定的に発現させるために、より低温で大腸菌を培養することが効果的であることが多い。そこで培養温度を低温にシフトさせることにより組換え酵素を発現させることが出来るコールドショック発現ベクターをベースとし、粘液細菌由来のProteinS(ProS)を可溶化タグとして利用する発現ベクターpCold ProS2を用いて組換え酵素の発現を行った。
なお、DNA配列の決定はビッグダイ・ターミネーター・ヴァージョン3.1サイクル・シークエンシング・キット(ABI社製)を用いたサイクルシーケンシング反応により増幅したDNA断片を、ABI PRISM3130ジェネチックアナライザ(ABI社製)により解析することで行った。
組換え酵素発現用の大腸菌は5mlのLB液体培地に植菌し、37℃でOD値が0.5になるまで培養したのち、IPTGを終濃度0.5mMとなるよう加え、15℃で一晩培養した。培養終了後、5000gで15分遠心を行い、PBSを10mlで懸濁し3回洗浄を行った。ソニケーションによって菌体を破砕し、15000rpmで30分遠心分離後の上清を可溶性画分として酵素活性測定を行い、酵素活性を有することを確認した。
パプリカのヘキセナールイソメラーゼ遺伝子配列をもとにBLAST検索を行い、草本植物で相同性が高い遺伝子を選択し、配列情報を得た。
SlHI1:配列番号2で示されるアミノ酸配列、配列番号1で示されるアミノ酸配列に対する相同性79%、トマト由来、対応する遺伝子は配列番号10で示される塩基配列
SlHI3:配列番号3で示されるアミノ酸配列、配列番号1で示されるアミノ酸配列に対する相同性79%、トマト由来、対応する遺伝子は配列番号11で示される塩基配列
StHI1:配列番号4で示されるアミノ酸配列、配列番号1で示されるアミノ酸配列に対する相同性80%、じゃがいも由来、対応する遺伝子は配列番号12で示される塩基配列
StHI2:配列番号5で示されるアミノ酸配列、配列番号1で示されるアミノ酸配列に対する相同性81%、じゃがいも由来、対応する遺伝子は配列番号13で示される塩基配列
SlHI2:配列番号6で示されるアミノ酸配列、配列番号1で示されるアミノ酸配列に対する相同性71%、トマト由来、対応する遺伝子は配列番号14で示される塩基配列
AtHI1−like:配列番号7で示されるアミノ酸配列、配列番号1で示されるアミノ酸配列に対する相同性38%、シロイヌナズナ由来、対応する遺伝子は配列番号15で示される塩基配列
AtHI2−like:配列番号8で示されるアミノ酸配列、配列番号1で示されるアミノ酸配列に対する相同性38%、シロイヌナズナ由来、対応する遺伝子は配列番号16で示される塩基配列
なお、増幅反応に用いたプライマー配列は以下の通りである。
図3の結果から明らかなように、SlHI1、SlHI3、StHI1及びStHI2については、CaHIと同様に酵素活性があり、SlHI2、AtHI1−like及びAtHI2−likeについては酵素活性を確認できなかった。
また、「有」「無」は、酵素活性の有無を意味し、四角枠で囲った部分は、酵素活性を有するアミノ酸配列のみに共通するアミノ酸を示す。
CaHIのアミノ酸配列(配列番号1)において、酵素活性を有するアミノ酸配列のみに共通する54番目のヒスチジン(H54)をアラニン(A)に置換したアミノ酸配列からなる組換え酵素(CaHI H54A)を実施例4と同様にして作製し、その酵素活性を確認したところ、酵素活性が見られなかった。
なお、CaHIのアミノ酸配列において、54番目のヒスチジンをアラニンに変えるようなプライマーを設計し、PrimeSTARRMutagenesis Basal Kitを用いて、CaHI−pColdベクターに点置換変異を導入した。
プライマー配列は以下の通りである。
この結果から明らかなように、CaHIのアミノ酸配列(配列番号1)において、54番目に位置するヒスチジンは、酵素活性に必須であることがわかった。
小松菜の新鮮重量に対し2倍量の水を加えてミキサーにかけ、ジュースを得た。得られたジュースは、特有の青臭い香りを有し、強い青臭さを感じる味を有していた。
一方、得られたジュース(1g)に、実施例4で得られた酵素(0.1g)を添加して10分振とうした後、同様に評価したところ、香り・味とも、明らかに青臭さが抑制されていた。
なお、香り及び味の評価は、5人のパネリストが行い、いずれのパネリストも同じ評価であった。
ナス科以外の植物のヘキセナールイソメラーゼを見出すために、CaHIのアミノ酸配列(配列番号1)と相同性の高いアミノ酸配列を、アルファルファ、キュウリ及びイネのデータベースに登録されているアミノ酸配列から検索した。検索により相同性の高い上位に挙げられたアミノ酸配列(4〜6配列)をアライメントし、CaHIの54番目のヒスチジン(H54)に相当する位置のアミノ酸前後のアミノ酸配列が、CaHIのアミノ酸配列と相同性が高いアミノ酸配列を選択し、ヘキセナールイソメラーゼの有無を確認した。
MsHI1:配列番号35で示されるアミノ酸配列、配列番号1で示されるアミノ酸配列に対する相同性42%、アルファルファ由来、対応する遺伝子は配列番号39で示される塩基配列
CsHI3:配列番号36で示されるアミノ酸配列、配列番号1で示されるアミノ酸配列に対する相同性38%、キュウリ由来、対応する遺伝子は配列番号40で示される塩基配列
OsHI1:配列番号37で示されるアミノ酸配列、配列番号1で示されるアミノ酸配列に対する相同性33%、イネ由来、対応する遺伝子は配列番号41で示される塩基配列
CsHI−like:配列番号38で示されるアミノ酸配列、配列番号1で示されるアミノ酸配列に対する相同性40%、キュウリ由来、対応する遺伝子は配列番号42で示される塩基配列
9−1 アライメント
図4のアライメントに、実施例8で酵素活性を確認したMsHl1、CsHl3、OsHl1およびCsHI−likeの各アミノ酸配列を追加して再度アライメントを行った結果を、図7に示す。その結果、酵素活性を有するアミノ酸配列の全てに保存されているが、酵素活性がないアミノ酸配列には保存されていないアミノ酸として、CaHIのアミノ酸配列(配列番号1)の54番目のヒスチジン(H54)及び128番目のチロシン(Y128)が該当することが見出された。
(1)CaHIの立体構造
SWISS−model(http://swissmodel.expasy.org)を利用して、配列番号1に示されるアミノ酸配列に基づいてCaHIの立体構造を予測した。図8にCaHIの立体構造を示す。図8から明らかなように、H54とY128は非常に近接していることが明らかになった。
MsHl1、CsHl3及びOsHl1についても、SWISS−model(http://swissmodel.expasy.org)を利用して、それぞれ配列番号35、36及び37に示されるアミノ酸配列に基づいて立体構造を予測した。図9にMsHl1、CsHl3及びOsHl1の立体構造中のH54及びY128の近傍の拡大図を示す。(A)がMsHl1、(B)がCsHl3、(C)がOsHl1であり、図中の点線は直径約5Åの円を表す。いずれの酵素もCaHIと同様に、H54とY128は近接していることが明らかになった。
CaHI、MsHl1、CsHl3及びOsHl1の立体構造解析から、いずれのヘキセナールイソメラーゼもH54とY128は近接していることが明らかになったことから、H54及びY128の近傍にさらに共通のアミノ酸が存在するか否かを確認したところ、いずれのヘキセナールイソメラーゼもH54及びY128の近傍にリシン(K)を有することが見出された。このリシンはCaHIのアミノ酸配列(配列番号1)の60番目リシン(K60)に相当するリシンであった(図7、図8、図9参照)。
実施例6において、CaHIの54番目のヒスチジンをアラニンに置換(H54A)した組換えタンパク質は酵素活性を持たないことが確認されている。そこで、CaHIの128番目のチロシン及び60番目のリシンをそれぞれアラニンに置換した組換えタンパク質(Y128A及びK60A)を、実施例6と同様の方法で作製し、これらの酵素活性を測定した。なお、変異導入に用いたプライマーは以下のとおりである。
(1)パプリカヘキセナールイソメラーゼ(CaHI)高発現ベクターの構築
CaHIを高発現させるための発現ベクターとしてpRI101−ANベクター(TaKaRa社製)を用いた。PCRはDNAポリメラーゼとしてExTaq(Takara)を用いた。pRI101−ANベクターに組み込めるように制限酵素認識部位配列(下線)を加えたプライマーを用いて、実施例4で調製したパプリカのcDNAを鋳型としてPCRを行った。得られたPCR断片をNdeI、SalIで消化し、pRI101−ANベクターにCaHI遺伝子を導入したプラスミドを構築した。なお、増幅反応に用いたプライマー配列は以下の通りである。
定法に従い、Agrobacterium tumefaciens C58株をCaHI遺伝子を導入したpRI101−ANベクターで形質転換した。トマトの系統は、micro TOMを用いた。トマトの子葉切片に形質転換アグロバクテリウムを感染させた。感染させた子葉切片を再分化させ、不定芽を誘導させた。これを培養し、発根させた後、ゲノムPCRを行い形質転換体であるかどうかを確認した。形質転換体の確認実験は、トマト葉を3mm角に切り取り、100μLのDNA抽出用緩衝液(100mM Tris塩酸、pH9.5、1M KCl、10mM EDTA)を加え、摩砕した。その後、10,000rpmで10分間遠心分離し、上清をDNA抽出液とした。このDNA抽出液を鋳型DNAとして、ゲノムPCR反応を行い、CaHIの増幅が確認できた個体を形質転換体とした。#8、#12、#28、#29、#37、#40の計6個体の形質転換体が得られた。ゲノムPCR反応に用いたプライマーは以下の通りである。
得られた遺伝子組み換えトマトの葉を切り取り、重さを測定後、30個のステンレスビーズ(3mm)とともにガラスバイアルに入れた。密栓し、激しく撹拌して組織を破砕し、25℃で5分間静置した後に、1mLの飽和CaCl2溶液を加えた。その後、固相抽出サンプリングファイバー(SPME)をガラスバイアル上部に挿し、25℃で30分間静置し、ファイバーに揮発性成分を吸着させた状態でGC―MS解析に供した。装置にはGCMS−QP5050(Shimadzu、Kyoto、Japan)を用い、Matsuiら(Matsui K.et al.,2012,PLoS ONE 7(4): e36433.doi:10.1371/journal.pone.0036433)に記載の条件で解析を実施した。
図11から明らかなように、CaHIを高発現させた遺伝子組み換えトマトの葉では、(Z)―3−ヘキセナールが減少し、(E)―2−ヘキセナールが増加していることが示された。
得られた遺伝子組み換えトマトの果実(#28、#29、#37、#40)を5g量り取り、液体窒素により凍結後、乳鉢で粉砕した。冷やしたファルコンチューブにサンプルを移し、パラフィルムで密栓後、固相抽出サンプリングファイバー(SPME)を挿しこみ、60分間放置してファイバーに揮発性成分を吸着させた状態でGC−MS解析に供した。解析条件は、上記(3)と同じである。
図12から明らかなように、CaHIを高発現させた遺伝子組み換えトマトの果実では、(Z)―3−ヘキセナールが減少し、(E)―2−ヘキセナールが増加していることが示された。
Claims (11)
- (Z)−3−ヘキセナールを(E)−2−ヘキセナールに異性化するための組成物であって、以下:
配列番号1〜5、35〜37のいずれかで示されるアミノ酸配列(A1)、及び
配列番号9〜13、39〜41のいずれかで示される塩基配列に対する同一性が90%以上である塩基配列によりコードされるアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列を含むポリペプチドで構成される酵素が(Z)−3:(E)−2−ヘキセナールイソメラーゼ活性を有する、アミノ酸配列(A2)
から選択されたアミノ酸配列(A)を含むポリペプチドで構成される酵素を含む、組成物。 - アミノ酸配列(A)が、アミノ酸配列(A1)である請求項1に記載の組成物。
- アミノ酸配列(A)が、アミノ酸配列(A2)であり、前記アミノ酸配列(A2)において、配列番号1で示されるアミノ酸配列の54番目に対応する位置のアミノ酸がヒスチジン、60番目に対応する位置のアミノ酸がリシン、128番目に対応する位置のアミノ酸がチロシンである請求項1に記載の組成物。
- 前記組成物が、食品組成物である、請求項1〜3のいずれかに記載の組成物。
- 前記組成物が、食品添加物である、請求項1〜3のいずれかに記載の組成物。
- 請求項1〜3のいずれかに記載の酵素を構成するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む組換えベクターにより形質転換された形質転換体を培養し、培養物から請求項1〜3のいずれかに記載の酵素を採取することを含む、請求項1〜3のいずれかに記載の組成物の製造方法。
- 請求項1〜3のいずれかに記載の酵素を用いて(Z)−3−ヘキセナールを(E)−2−ヘキセナールに異性化する方法。
- 請求項1〜3のいずれかに記載の酵素を構成するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む組換えベクターを含む、細胞に(Z)−3−ヘキセナールを(E)−2−ヘキセナールに異性化させる能力を付与するための組成物。
- 以下:
配列番号4又は5で示されるアミノ酸配列、及び
配列番号12又は13で示される塩基配列に対する同一性が98%以上である塩基配列によりコードされるアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列を含むポリペプチドで構成される酵素が(Z)−3:(E)−2−ヘキセナールイソメラーゼ活性を有する、アミノ酸配列
から選択されたアミノ酸配列を含むポリペプチドで構成される酵素。 - 請求項9に記載の酵素を含む、組成物。
- 前記組成物が、食品組成物である、請求項10に記載の組成物。
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