JP6845755B2 - 表皮肥厚抑制用皮膚外用剤 - Google Patents
表皮肥厚抑制用皮膚外用剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6845755B2 JP6845755B2 JP2017126924A JP2017126924A JP6845755B2 JP 6845755 B2 JP6845755 B2 JP 6845755B2 JP 2017126924 A JP2017126924 A JP 2017126924A JP 2017126924 A JP2017126924 A JP 2017126924A JP 6845755 B2 JP6845755 B2 JP 6845755B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- apple
- skin
- epidermal thickening
- human epidermal
- epidermal
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 title claims 2
- 208000019028 Epidermal thickening Diseases 0.000 title description 19
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims description 26
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 18
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 11
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 3
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 claims 2
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 claims 2
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 claims 2
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 claims 1
- 241000220225 Malus Species 0.000 description 17
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 16
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 3
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N butan-2-ol Chemical compound CCC(C)O BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 3
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 3
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 3
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 3
- WWUZIQQURGPMPG-UHFFFAOYSA-N (-)-D-erythro-Sphingosine Natural products CCCCCCCCCCCCCC=CC(O)C(N)CO WWUZIQQURGPMPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 2
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010040867 Skin hypertrophy Diseases 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 230000002951 depilatory effect Effects 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- WWUZIQQURGPMPG-KRWOKUGFSA-N sphingosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCC\C=C\[C@@H](O)[C@@H](N)CO WWUZIQQURGPMPG-KRWOKUGFSA-N 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000000035 BCA protein assay Methods 0.000 description 1
- 241000272185 Falco Species 0.000 description 1
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006981 Skin Abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 102000001400 Tryptase Human genes 0.000 description 1
- 108060005989 Tryptase Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 235000021016 apples Nutrition 0.000 description 1
- 239000013040 bath agent Substances 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000001217 buttock Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000512 collagen gel Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- POLCUAVZOMRGSN-UHFFFAOYSA-N dipropyl ether Chemical compound CCCOCCC POLCUAVZOMRGSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- -1 etc.) Natural products 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000118 hair dye Substances 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 108010074109 interleukin-22 Proteins 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000005871 repellent Substances 0.000 description 1
- 230000002940 repellent Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000551 statistical hypothesis test Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Cosmetics (AREA)
Description
本発明は、紫外線曝露により生じる表皮肥厚を抑制する表皮肥厚抑制用皮膚外用剤に関する。
顔や手の甲などに見られる慢性的な紫外線曝露により生じる皮膚異常の一つに表皮肥厚が挙げられる。一方、臀部などの紫外線非曝露部の表皮層は加齢に伴い徐々に委縮することが知られている（非特許文献１参照）。
表皮肥厚を発症した皮膚は、病理学的側面における人体への影響のみならず、キメが粗くなるなどの美容的損失を伴い、特に女性にとって生活の質（ＱＯＬ）を低下させる原因となりうることが知られている。
表皮肥厚の発症に関与すると言われている物質として、ＥＧＦ（上皮細胞増殖因子）やＦＧＦ−２（線維芽細胞増殖因子−２）、トリプターゼ、インターロイキン−２２などのサイトカインや、フィブロネクチン、ＡＤＡＭ（Ａ ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｎｄ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅａｓｅ）といった生体物質が挙げられるが、その発症機序の全貌はいまだ解明されていない（非特許文献２及び特許文献１、２、３参照）。
表皮肥厚はすなわち表皮層が厚くなる現象であることから、肥厚化した表皮を正常な状態に戻すことを期待して、表皮のターンオーバーを促進する効果があるレチノイドやトコフェロールを含有する表皮肥厚促進剤や、ピーリング効果があるα−ヒドロキシカルボン酸を含有する化粧用製剤などが提案されている（特許文献４及び５参照）。
しかしながら、前記表皮肥厚促進剤や化粧用製剤は紫外線曝露により生じた症状を治療することを目的に適用するものであり、表皮肥厚を未然に防止することを目的に適用するものではない。
一方で、紫外線曝露により生じる表皮肥厚を抑制する目的で、スフィンゴシンからなる表皮肥厚抑制剤やリンゴ果実抽出物を含有したコラーゲンゲル収縮剤及び表皮肥厚抑制剤などが知られている（特許文献６及び７参照）。しかし、スフィンゴシンは、それ自体が不安定な物質であることや製剤の経時安定性の確保が難しいことに加え、安全面の観点から配合できる油剤や界面活性剤の種類及び配合量が限られるなどの理由から、皮膚外用剤としての利用可能性に多くの制約があることが問題であった（特許文献８、９、１０参照）。前記リンゴ果実抽出物を含有した表皮肥厚抑制剤として開示されている経口剤についても、紫外線に曝露した部位のみが表皮肥厚することを鑑みると、抑制効果を十分に発揮するのにふさわしい形態であるとは言えない。
標準皮膚科学 第８版 ｐｐ．１４７−１４８（医学書院）
藤田英樹著 日本臨床免疫学会会誌（Vol.35 No.3）pp.168-175
そこで、本発明は、リンゴ果実抽出物を有効成分とする、紫外線曝露により生じる表皮肥厚を抑制する皮膚外用剤を提供することを、発明が解決しようとする課題とする。
本発明者らは、上記の課題を解決しようとして、鋭意検討を重ねた結果、紫外線曝露により生じる表皮肥厚を抑制するリンゴ果実抽出物を配合してなる皮膚外用剤を見出した。
したがって、本発明は、リンゴ果実抽出物を有効成分として含有することを特徴とする、紫外線曝露により生じる表皮肥厚を抑制する皮膚外用剤を提供するものである。
また本発明は、前記リンゴ果実抽出物がリンゴ未成熟果実抽出物であることを特徴とする、前記に記載の皮膚外用剤を提供するものである。
さらに本発明は、前記有効成分を組成物全量に対して０．０００５〜１質量％含有することを特徴とする、前記に記載の皮膚外用剤を提供するものである。
また本発明は、化粧品、医薬部外品又は医薬品であることを特徴とする、前記に記載の皮膚外用剤を提供するものである。
本発明に記載のリンゴ果実抽出物を含有することを特徴とする、紫外線曝露により生じる表皮肥厚を抑制する皮膚外用剤は、化粧品、医薬部外品又は医薬品として、種々の形態に広く汎用的に利用され得る。
以下に、本発明の詳細について説明するが、本発明の技術的範囲は本項目の事項によってのみに限定されるものではなく、本発明はその目的を達成する限りにおいて種々の形態をとり得る。
本発明者らは、本発明に至るにあたり、紫外線曝露により生じる表皮肥厚の現象について、以下の通り、明らかにした。すなわち、表皮層が紫外線に曝露された時、曝露量などの条件に応じて、表皮細胞は、核酸やタンパク質及び脂質などの生体分子が受けた損傷の修復や再合成、並びに活性酸素種（ＲＯＳ：Ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ）の生成やサイトカインなどの分泌といった挙動を示して、周辺の環境を変化させうる。紫外線曝露の影響は、細胞死（アポトーシス、ネクローシスなど）などももたらすが、表皮層における細胞死は表皮細胞の減少を表すものであり、実質的に表皮の委縮をもたらすものであることを鑑みると、非特許文献１で示されるような表皮肥厚が生じる要因は、細胞死に至らなかった細胞自身及び周辺の細胞が増殖することによるものであることが明らかとなった。
本発明者らは、上記の事実から、紫外線曝露がきっかけとなって起こる細胞増殖を抑制することができれば、表皮肥厚を抑制できると考え、鋭意検討を重ねた結果、様々な成分の中でも紫外線曝露により生じる表皮肥厚を抑制するリンゴ果実抽出物を配合してなる皮膚外用剤を見出すに至った。
本発明に用いられるリンゴ果実抽出物において、リンゴ（Ｍａｌｕｓ ｐｕｍｉｌａ）の品種は特に限定されないが、例えば、ふじ、王林、紅玉、陸奥、津軽、旭、デリシャス、ジョナゴールド、陽光などが挙げられる。リンゴ果実の抽出部位は、全果、果肉、果皮、種など特に限定されない。さらに前記果実は成熟果、未成熟果（幼果）などの成熟状態を問わないが、特に未成熟果（幼果）が好ましく、１個あたりの重量が５〜２０ｇ程度の時期に摘果されたものが特に好ましい。前記の抽出部位、及び成熟状態の抽出物を１種又は２種以上組み合わせて用いても良い。
上記リンゴ果実抽出物の調整法は、特に限定されるものではないが、例えばこれらを乾燥又は乾燥せずにそのままあるいは裁断または粉砕等した後、低温もしくは常温〜加温下で溶剤により抽出する方法を挙げることができる。
抽出溶媒としては、一般的には水、低級１価アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン等）、低級アルキルエステル（酢酸エチル等）、炭化水素（ベンゼン、ヘキサン、ペンタン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、エーテル類（ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジプロピルエーテル等）、アセトニトリル等が挙げられる。
市販品としては、ファルコレックス リンゴ Ｂ（一丸ファルコス社）、リンゴ抽出液ＢＧ−J、フルーツリンクルプロテクトエッセンス（登録商標）（いずれも、丸善製薬社）、ベビーアップルエキス（片倉コープアグリ社）、アップルフェノン Ｃ−１００（アサヒフードアンドヘルスケア社）、ポマクティブＨＦＶ（ユニテックフーズ社）などが挙げられる。
リンゴ果実抽出物の含有量は、表皮肥厚の抑制作用が認められる量であれば特に限定されないが、例えば、組成物の総量に対して、０．０００５〜１質量％であり、０．００５〜０．５質量％が好ましく、０．００１〜０．２５質量％がさらに好ましい。なお、これらの値は乾燥物としての含有量である。
リンゴ果実抽出物を含有する皮膚外用剤は、それ自体として、又は他の成分とともに含有することにより、化粧品、いわゆる薬用化粧品を含む医薬部外品、医薬品として利用され得る。
化粧品及び薬用化粧品の具体的な形態は、例えば、スキンケア化粧品、メイクアップ化粧品、フレグランス化粧品、ボディケア化粧品、ヘアケア化粧品などが挙げられるが、これらに特に限定されない。
医薬品及び医薬部外品の具体的な形態は、皮膚に適用される態様であれば、その使用態様については特に限定されず、上記した化粧品及び薬用化粧品の具体的な形態に加えて、例えば、腋臭防止剤、てんか粉剤、育毛剤（養毛剤）、除毛剤、染毛剤（脱色剤、脱染剤）、パーマネント・ウェーブ用剤、浴用剤、忌避剤などが挙げられ、より具体的な剤形としては軟膏、クリームなどが挙げられる。
本発明の皮膚外用剤は、その製造方法について特に限定されず、当業者に通常知られる方法にて製造できる。
以下、本発明を実施例によってさらに具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
［１．試料の調製］
アップルフェノン Ｃ−１００（アサヒフードアンドヘルスケア社）を５％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清（ＦＢＳ；Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ；Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）に終濃度５０μｇ／ｍＬになるようにそれぞれ溶解し、これを被験溶液とした。同様の方法でコメ抽出物を溶解し、これを比較溶液とした。
アップルフェノン Ｃ−１００（アサヒフードアンドヘルスケア社）を５％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清（ＦＢＳ；Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ；Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）に終濃度５０μｇ／ｍＬになるようにそれぞれ溶解し、これを被験溶液とした。同様の方法でコメ抽出物を溶解し、これを比較溶液とした。
［２．不死化ヒト表皮細胞株ＨａＣａＴ細胞の培養と紫外線の照射］
１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳを含むＤＭＥＭを用いてＨａＣａＴ細胞を懸濁し、３５ｍｍシャーレに９．０×１０５ｃｅｌｌｓになるように播種した。その後、３５ｍｍシャーレを３７℃、ＣＯ２濃度５％の条件下で２４時間培養した。
１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳを含むＤＭＥＭを用いてＨａＣａＴ細胞を懸濁し、３５ｍｍシャーレに９．０×１０５ｃｅｌｌｓになるように播種した。その後、３５ｍｍシャーレを３７℃、ＣＯ２濃度５％の条件下で２４時間培養した。
培養後の培養上清を除去した各シャーレに、前述で調製した被験溶液 ０．１ｍＬを添加して、さらに２４時間培養した。培養後の培養上清を除去した各シャーレをハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ；日水製薬社） ２ｍＬで２度洗浄し、各シャーレにフェノールレッドを含まないＤＭＥＭ ２ｍＬを添加した。その後、紫外線を照射し、２４時間培養した。紫外線Ａ波（ＵＶＡ）の照射強度は、０（照射なし）、１０Ｊ／ｃｍ２とし、紫外線Ｂ波（ＵＶＢ）の照射強度は、０（照射なし）、２５ｍＪ／ｃｍ２とした。ＵＶＡ灯は（ＦＬ２０Ｓ−ＢＬＢ；東芝社）を、ＵＶＢ灯は（ＴＬ２０Ｗ／１２ＲＳ、ＵＶＢ Ｂｒｏａｄｂａｎｄ；Ｐｈｉｌｉｐｓ社）を用いた。強度測定には、デジタル式ＵＶＸ紫外線強度計ＵＶＸ Ｒａｄｉｏｍｅｔｅｒ（ＵＶＰ社）とＵＶ照射強度センサーＵＶＸ−３１（ＵＶＰ社）を用いた。
各シャーレ内のＨａＣａＴ細胞にＵＶＡまたはＵＶＢを照射した同日に、１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳを含むＤＭＥＭを用いてＨａＣａＴ細胞を懸濁し、９６ウェル培養プレートに３．５×１０４ｃｅｌｌｓ／ウェルになるように播種した。その後、９６ウェル培養プレートを３７℃、ＣＯ２濃度５％の条件下で２４時間培養した。
培養後の９６ウェル培養プレート内にある培養上清を除去し、ＨＢＳＳ ２ｍＬで２度洗浄した。その後、各ウェルに対し、ＵＶＡまたはＵＶＢを照射した各シャーレから得られた培養上清を０．１ｍＬずつ添加し、２４時間培養した。ＵＶＡまたはＵＶＢを照射した各シャーレから得られた培養上清は、各ウェルに添加する前に、室温、３，０００ｒｐｍの速度で５分間遠心にかけて、不要な物質を除去した。培養後の９６ウェル培養プレート内にある培養上清を除去し、ＨＢＳＳ ２ｍＬで２度洗浄した。培養後の各ウェルについて、後述するタンパク定量を実施した。
［３．タンパク定量（細胞増殖率の測定）］
０．５％（ｖ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含むリン酸緩衝溶液を９６ウェル培養プレートの各ウェルに０．０５ｍＬずつ添加して細胞を完全に溶解した。各ウェルにＰｉｅｒｃｅ ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）のＲｅａｇｅｎｔ ＡとＲｅａｇｅｎｔ Ｂの比を５０：１で混合した溶液を各ウェルに０．０５ｍＬずつ添加して１分間シェイカーにかけて混合した。その後、３７℃で１０分間インキュベートして吸光マイクロプレートリーダーＶ ｍａｘ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ社）を用いて５５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
０．５％（ｖ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含むリン酸緩衝溶液を９６ウェル培養プレートの各ウェルに０．０５ｍＬずつ添加して細胞を完全に溶解した。各ウェルにＰｉｅｒｃｅ ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）のＲｅａｇｅｎｔ ＡとＲｅａｇｅｎｔ Ｂの比を５０：１で混合した溶液を各ウェルに０．０５ｍＬずつ添加して１分間シェイカーにかけて混合した。その後、３７℃で１０分間インキュベートして吸光マイクロプレートリーダーＶ ｍａｘ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ社）を用いて５５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
［４．解析方法］
検量線をもとに、得られた吸光度からタンパク量を算出した。検量線の作成にはウシ血清アルブミン（ＢＳＡ；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社）を用いた。ＢＳＡ濃度は２、１、０．５、０．２５、０．１２５、０ｍｇ／ｍＬの５点とした。後述の結果（１）では、ＵＶＡまたはＵＶＢを照射していない時の細胞増殖率をコントロール１、後述の結果（２）では、試料なし且つＵＶＡあるいはＵＶＢ照射した時の細胞増殖率をそれぞれコントロール２、コントロール３とした。これらを対照として（細胞増殖率＝１００％）、それぞれの試料を作用させた時の細胞増殖率を算出した。各条件につき、６以上のウェル数の結果を用いて細胞増殖率の平均値を算出し、後述の統計解析を用いて、有意な差をもって細胞増殖を抑制した場合、表皮肥厚抑制効果があったと判断した。
検量線をもとに、得られた吸光度からタンパク量を算出した。検量線の作成にはウシ血清アルブミン（ＢＳＡ；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社）を用いた。ＢＳＡ濃度は２、１、０．５、０．２５、０．１２５、０ｍｇ／ｍＬの５点とした。後述の結果（１）では、ＵＶＡまたはＵＶＢを照射していない時の細胞増殖率をコントロール１、後述の結果（２）では、試料なし且つＵＶＡあるいはＵＶＢ照射した時の細胞増殖率をそれぞれコントロール２、コントロール３とした。これらを対照として（細胞増殖率＝１００％）、それぞれの試料を作用させた時の細胞増殖率を算出した。各条件につき、６以上のウェル数の結果を用いて細胞増殖率の平均値を算出し、後述の統計解析を用いて、有意な差をもって細胞増殖を抑制した場合、表皮肥厚抑制効果があったと判断した。
［５．統計解析］
試験における統計学的有意差検定にはスチューデントのｔ検定を用いて、対応のない、両側検定の条件で実施した。有意水準は５％とした（ｐ＜０．０５）。
試験における統計学的有意差検定にはスチューデントのｔ検定を用いて、対応のない、両側検定の条件で実施した。有意水準は５％とした（ｐ＜０．０５）。
［６．結果（１）］
最初に、ＵＶＡまたはＵＶＢを照射した影響により細胞増殖が誘導されるかどうか検討した結果、後述の表１に示すように、ＵＶＡまたはＵＶＢ非照射（コントロール１）と比較して、ＵＶＡまたはＵＶＢ照射により細胞増殖率が有意に高まることを確認した。
最初に、ＵＶＡまたはＵＶＢを照射した影響により細胞増殖が誘導されるかどうか検討した結果、後述の表１に示すように、ＵＶＡまたはＵＶＢ非照射（コントロール１）と比較して、ＵＶＡまたはＵＶＢ照射により細胞増殖率が有意に高まることを確認した。
［６．結果（２）］
次に、被験溶液添加時のＵＶＡまたはＵＶＢ照射下における細胞増殖率を算出した結果、後述の表２に示すように、試料なし且つＵＶＡあるいはＵＶＢ照射（コントロール２及び３）と比較して、実施例１はＵＶＡまたはＵＶＢを照射した影響により誘導される細胞増殖を有意に抑制した。しかし、比較例１は有意な細胞増殖抑制効果は見られなかった。なお、使用した被験溶液の培養細胞に対する毒性は認められなかった。表１及び２が示すように、実施例１の被験溶液はＵＶＡまたはＵＶＢ照射の影響による細胞の増殖を有意に抑制した。
次に、被験溶液添加時のＵＶＡまたはＵＶＢ照射下における細胞増殖率を算出した結果、後述の表２に示すように、試料なし且つＵＶＡあるいはＵＶＢ照射（コントロール２及び３）と比較して、実施例１はＵＶＡまたはＵＶＢを照射した影響により誘導される細胞増殖を有意に抑制した。しかし、比較例１は有意な細胞増殖抑制効果は見られなかった。なお、使用した被験溶液の培養細胞に対する毒性は認められなかった。表１及び２が示すように、実施例１の被験溶液はＵＶＡまたはＵＶＢ照射の影響による細胞の増殖を有意に抑制した。
以下に本発明の種々の処方例を挙げるが、本発明の技術的範囲はこれらの処方例に限定されない。
（処方例１〜４）化粧水
（処方例５〜８）クリーム
（処方例９〜１２）乳液
（処方例１３〜１６）美容液
本発明は、紫外線曝露により生じる表皮肥厚を抑制することが可能であることから、表皮肥厚に基づく人体への悪影響を軽減することが期待される。
Claims (4)
- リンゴ果実抽出物を有効成分として含有することを特徴とする、
紫外線曝露により生じるヒト表皮細胞の増殖抑制剤。
- 前記ヒト表皮細胞は、基底細胞である、
請求項１に記載のヒト表皮細胞の増殖抑制剤。
- 前記ヒト表皮細胞の増殖抑制剤は、局所用外用剤であることを特徴とする
請求項１又は２に記載のヒト表皮細胞の増殖抑制剤。
- 前記リンゴ果実抽出物がリンゴポリフェノールであり、該リンゴポリフェノールを組成物全量に対して０．０００５〜１質量％含有する、
請求項１から３のいずれか１項に記載のヒト表皮細胞の増殖抑制剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2017126924A JP6845755B2 (ja) | 2017-06-29 | 2017-06-29 | 表皮肥厚抑制用皮膚外用剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2017126924A JP6845755B2 (ja) | 2017-06-29 | 2017-06-29 | 表皮肥厚抑制用皮膚外用剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2019011256A JP2019011256A (ja) | 2019-01-24 |
| JP6845755B2 true JP6845755B2 (ja) | 2021-03-24 |
Family
ID=65227311
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2017126924A Active JP6845755B2 (ja) | 2017-06-29 | 2017-06-29 | 表皮肥厚抑制用皮膚外用剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP6845755B2 (ja) |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010254667A (ja) * | 2009-03-31 | 2010-11-11 | Fancl Corp | コラーゲンゲル収縮剤 |
| JP6158471B2 (ja) * | 2011-12-28 | 2017-07-05 | 片倉コープアグリ株式会社 | 皮膚老化抑制剤 |
| JP2013209302A (ja) * | 2012-03-30 | 2013-10-10 | Kose Corp | リンゴ幼果抽出物を含む表皮幹細胞性維持剤 |
-
2017
- 2017-06-29 JP JP2017126924A patent/JP6845755B2/ja active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2019011256A (ja) | 2019-01-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103479538B (zh) | 含有人参的花或人参的种子提取物的皮肤外用剂组合物 | |
| US10092495B2 (en) | Use of a composition comprising avocado perseose in the protection of epidermal stem cells | |
| CN102421412B (zh) | 含有日本扁柏多糖的皮肤外用组合物 | |
| KR101824770B1 (ko) | 적하수오 부정근 추출물을 함유하는 피부 주름개선 기능성 화장료 조성물 | |
| KR20230147028A (ko) | 대마 줄기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항노화, 항염 또는 피부재생용 조성물 | |
| JP5921056B2 (ja) | 美容用組成物 | |
| US20220249355A1 (en) | Cosmetic care method based on photoactive extracts of microalgae | |
| KR20130088997A (ko) | 생캐비어 추출물 및 발효추출물을 이용한 육모, 발모, 탈모방지 및 두피 개선용 화장료 조성물 | |
| JP6845755B2 (ja) | 表皮肥厚抑制用皮膚外用剤 | |
| JP2012206957A (ja) | コラーゲン産生促進剤 | |
| KR101303807B1 (ko) | 항노화 화장료 조성물 | |
| KR20140095122A (ko) | 보리 추출물 또는 에리오딕티올을 포함하는 콜라겐 분해 방지 또는 콜라겐 합성 촉진용 조성물 | |
| KR101172058B1 (ko) | 피부주름 개선 및 탄력 증진용 피부 외용제 조성물 | |
| CN102056585B (zh) | 用于改善皮肤皱纹或皮肤增白的皮肤外用组合物 | |
| JP5144362B2 (ja) | 皮膚外用剤 | |
| JP5259127B2 (ja) | ツツジ科エリカ属植物由来成分を少なくとも含む外皮系組織用組成物 | |
| US20210338755A1 (en) | Aqueous extract from cells of fitzroya cupressoides (alerce) with anti- aging and skin regeneration properties | |
| JP5689552B1 (ja) | 特定の波長域を有する光を照射して栽培したカモミールの抽出物を含有する皮膚外用剤や内用剤。 | |
| KR101618595B1 (ko) | 토마티딘을 함유하는 미숙 토마토 분해물 제조 방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물 | |
| CN103491943A (zh) | 包含榕树、莲属植物和三叶草浆液级分的组合物(老化) | |
| Heo et al. | Pre-Clinical evaluation of proprietary lutein, zeaxanthin, and rosemary formulation for its dermal protective activity in male swiss albino mice | |
| JP2019011253A (ja) | 表皮肥厚抑制剤 | |
| JP2019011252A (ja) | 表皮肥厚抑制剤 | |
| KR102109829B1 (ko) | 화장료 조성물 | |
| KR20130057534A (ko) | 아사이베리 추출물 및 새싹 추출물을 함유하는 화장료 조성물 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190621 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200707 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200904 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20200907 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210202 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210226 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6845755 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |