JP6750630B2 - リナロール組成物の製造方法 - Google Patents

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Description

本発明は、リナロール組成物およびその製造方法に関する。
芳香物質として知られるリナロールは、ラベンダーやオレンジをはじめ、様々な植物の精油中に含まれるモノテルペンアルコールの一種である。リナロールは、香水、化粧品、シャンプーや石鹸といった香粧品に使われる他に、食品や飲料へのフレーバー付加のための添加物としても利用されている。また、リナロールは、他のモノテルペン系香料の原料になるほか、ビタミンＡやＥの中間体としても重要な化合物である。リナロールにはエナンチオマーが存在し、（３Ｒ）−（−）−ｌｉｎａｌｏｏｌ（（３Ｒ）−３，７−ジメチルオクタ−１，６−ジエン−３−オール、Ｒ−リナロール）、及び（３Ｓ）−（＋）−ｌｉｎａｌｏｏｌ（（３Ｓ）−３，７−ジメチルオクタ―１，６−ジエン−３−オール、Ｓ−リナロール）はそれぞれリカレオール、コリアンドロールと呼ばれている。リカレオールとコリアンドロールは異なる香りを呈することが知られており、リカレオールはウッディーなラベンダー様香気を、コリアンドロールはプチグレンに近い甘い柑橘系の香気を呈するとされている（非特許文献１及び２参照）。２つのエナンチオマーは香気の性質に加えて匂いの閾値も異なり、リカレオールはコリアンドロールの９倍程度低い閾値を示すとされる（例えば、非特許文献３を参照）。リナロールは最もその機能の研究が進んでいる香気成分の一つであり、鎮静作用、抗炎症作用、抗酸化作用など、比較的多くの生物活性を有することが明らかとなってきている。近年、健康志向の高まりから機能性の植物由来素材が添加された食品及び飲料のニーズが高まってきており、リナロールを添加することでリナロールが有する機能を訴求した商品の開発も行われている。今後もこのような食品や飲料のニーズが高まると予想され、それに伴いリナロールの需要も高まることが考えられることから、効率的にリナロールを生産できる製法の確立が望まれている。
リナロールはリナロールシンターゼによって、モノテルペンの共通前駆体であるゲラニル二リン酸（ＧＰＰ）より合成される。ＧＰＰはイソペンテニル二リン酸（ＩＰＰ）、及びその異性体であるジメチルアリル二リン酸（ＤＭＡＰＰ）の縮合によって生成する。ＩＰＰやＤＭＡＰＰの生合成経路として、メバロン酸経路、及び非メバロン酸経路（ＭＥＰ経路）の存在が知られている。メバロン酸経路は植物、動物、酵母などの真核生物や一部の放線菌や古細菌に存在している。一方、ＭＥＰ経路はバクテリアや植物のプラスチドに存在している。従来、リナロールをはじめとした植物の精油成分は様々な抽出法によって植物から抽出することで製造されている。抽出法として例えば特許文献１には水蒸気蒸留法が、特許文献２には減圧蒸留法が、それぞれ記載されている。また、特許文献３には植物材料と溶媒の混合物を超高温処理することで植物成分を抽出する方法の記載がある。一方で、化学合成による製法も確立されており、例えば、非特許文献４にはα−ピネンを原料に触媒を利用した化学合成によるリナロールの製造法が記載されている。さらに近年では遺伝子組換え技術を用いて酵母や大腸菌でのリナロール生産が報告されている（例えば、特許文献４、及び非特許文献５〜８を参照）。しかしながら、遺伝子組換え酵母によるリナロール生産量は非常に微量なレベルに止まっており、必ずしも効率的な生産方法とはいえない。
リナロールには、上述のとおりＲ−リナロール、Ｓ−リナロールのエナンチオマーが存在し、Ｒ−リナロールはラベンダーの香り、Ｓ−リナロールはオレンジ様の香りがし、用途が異なることからそれぞれ高い鏡像体過剰率で取得されることが好ましい。化学合成法によりαピネンより製造されるリナロールは、ほぼラセミ体である。また、化学合成による光学活性リナロールの製造法が幾つか知られているが、高価な試薬や複雑な工程を必要とし、実用的とは言えない（非特許文献９及び１０、特許文献５）。リパーゼを用いた不斉加水分解法が知られているが、ラセミ体のリナロールから脂肪酸エステルを調整後に不斉加水分解を行うため、基質の調整に複雑な工程を要する（特許文献６）。一方植物から抽出した場合は、一般的にＲ−及びＳ−リナロール混合物として抽出されるものが多く（非特許文献１１）、そのため、高い鏡像体過剰率で片方のエナンチオマーを得る為には光学分割等の高度な精製技術が要求されることが多い。また、植物由来抽出物には酢酸リナリル、リモネン、カリオフィレン等のイソプレノイド化合物が不純物として多く抽出され、揮発性成分（香気成分）中の目的成分の含有量が少ないといった課題があった。
鏡像体過剰率の高いリナロールは、不斉を提供できることから化学合成や医薬品の原料として使用される。また、食品、酒類等のフレーバーや、化粧品及び香水、防虫剤に至る工業製品にまで、幅広く利用されている。
特開２００５−２９８５８０号公報 特開２００６−２９１００７号公報 特表２０１１−５０６７１３号公報 中国特許出願公開第１０２０７１１５５号明細書 特開平５−１７０６８２号公報 特開平９−０００２７８号公報
Ａｌｅｊａｎｄｒｏ Ｃａｒｒａｓｃｏ，Ｒａｍｉｒｏ Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ Ｔｏｍａｓ，Ｊｏｓｅ Ｔｕｄｅｌａ，Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄｉｃａ ２０１６；８２：１６３−１７０ Ｍｅｌｌｉｏｕ Ｅｌｅｎｉ，Ｍｉｃｈａｅｌａｋｉｓ Ａｎｔｏｎｉｏｓ，Ｋｏｌｉｏｐｏｕｌｏｓ Ｇｅｏｒｇｅ，Ｓｋａｌｔｓｏｕｎｉｓ Ａｌｅｘｉｏｓ−Ｌｅａｎｄｒｏｓ ａｎｄ Ｍａｇｉａｔｉｓ Ｐｒｏｋｏｐｉｏｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２００９，１４（２），８３９−８４９ Ａｎａ Ｃｌａｒａ Ａｐｒｏｔｏｓｏａｉｅ， Ｍｏｎｉｃａ Ｈａｎｃｉａｎｕ， Ｉｒｉｎａ−Ｉｕｌｉａｎａ Ｃｏｓｔａｃｈｅ Ａｎｃａ Ｍｉｒｏｎ，Ｆｌａｖｏｕｒ ａｎｄ Ｆｒａｇｒａｎｃｅ Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１４，２９，１９３−２１９ Ｖ．Ａ．Ｓｅｍｉｋｏｌｅｎｏｖ，Ｉ．Ｉ．Ｉｌｙｎａ，ａｎｄ Ｉ．Ｌ．Ｓｉｍａｋｏｖａ， Ａｐｐｌｉｅｄ Ｃａｔａｌｙｓｉｓ Ａ，Ｇｅｎｅｒａｌ，２００１，２１１：９１−１０７ Ｓｕｎ ＭＸ， Ｌｉｕ ＪＤ， Ｄｕ ＧＣ，Ｚｈｏｕ Ｊ，ａｎｄ Ｃｈｅｎ Ｊ．，Ｃｈｉｎ Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈ，２０１３，２９（６）： ７５１−７５９ Ｈｅｒｒｅｒｏ Ｏ，Ｒａｍｏｎ Ｄ，ａｎｄ Ｏｒｅｊａｓ Ｍ，，Ｍｅｔａｂ Ｅｎｇ，２００８，１０，７８−８６ Ｒｉｃｏ Ｊ，Ｐａｒｄｏ Ｅ，ａｎｄ Ｏｒｅｊａｓ Ｍ，Ａｐｐｌ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１０，７６， ６４４９−６４５４ Ｒａｔａｎａ Ｔｈａｎａｓｏｍｂｏｏｎ，Ｄｕｊｄｕａｎ Ｗａｒａｈｏ，Ｓｕｐａｐｏｎ Ｃｈｅｅｖａｄｈａｎａｒａｋ，ａｎｄ Ａｓａｗｉｎ Ｍｅｅｃｈａｉａ，Ｐｒｏｃｅｄｉａ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ １１（２０１２）８８−９５ Ｒｉｃｈａｒｄ Ｂａｒｎｅｒ， ａｎｄ Ｊｏｓｅｆ Ｈｕｂｓｃｈｅｒ，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，Ｖｏｌ．６６，ｐｐ．８８０−８９０（１９８３） Ｍａｓａｋｉ Ｏｈｗａ，Ｔｅｔｓｕｏ Ｋｏｇｕｒｅ，ａｎｄ Ｅｒｎｅｓｔ Ｌ．Ｅｌｉｅｌ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．５１，ｐｐ．２５９９−２６０１（１９８６） Ｔｅｍｅｌ Ｏｚｅｋ，Ｎｕｒｈａｙａｔ Ｔａｂａｎｃａ，Ｆａｔｉｈ Ｄｅｍｉｒｃｉ，Ｄａｖｉｄ Ｅ．Ｗｅｄｇｅ ａｎｄ Ｋ．Ｈｕｓｎｕ Ｃａｎ Ｂａｓｅｒ，Ｒｅｃｏｒｄｓ ｏｆ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ２０１０，４（４），１８０−１９２
しかしながら、従来の方法で得られるリナロールは、Ｒ−及びＳ−リナロールの混合物であり、またその他のイソプレノイド系不純物も多く含まれていたため、鏡像体過剰率の高いＲ−リナロール、Ｓ−リナロール等のリナロールを含み、リナロール含有率の高い組成物及びその製造方法は知られていなかった。本発明は、リナロール組成物、及びその製造方法を提供することを目的とする。
すなわち、本発明は、以下のとおりである。
〔１〕リナロールを含有し、組成物中の揮発性成分の合計含量中のリナロール含量が６０％以上であり、
かつＲ−リナロール又はＳ−リナロールの鏡像体過剰率が５０％以上である組成物。
〔２〕前記揮発性成分が３−メチル−２−ブテン−１−オールを含む、〔１〕記載の組成物。
〔３〕組成物中の揮発性成分の合計含量中の３−メチル−２−ブテン−１−オール含量が４０％未満である、〔２〕記載の組成物。
〔４〕Ｒ−リナロール又はＳ−リナロールの鏡像体過剰率が８０％以上である、〔１〕〜〔３〕のいずれか１項記載の組成物。
〔５〕組成物中の揮発性成分の合計含量中のＲ−リナロール含量が６０％以上である〔１〕〜〔４〕のいずれか１項記載の組成物。
〔６〕組成物中の揮発性成分の合計含量中のＳ−リナロール含量が６０％以上である〔１〕〜〔４〕のいずれか１項記載の組成物。
〔７〕組成物中のリナロール含量が２００ｍｇ／Ｌ以上である、〔１〕〜〔６〕のいずれか１項記載の組成物。
〔８〕前記揮発性成分が酢酸リナリル、リモネン、カリオフィリン、３−メチル−１−ブタノール、β−シトロネロール、及びゲラニオールからなる群より選択される１又は２以上の成分を含む、〔１〕〜〔７〕のいずれか１項記載の組成物。
〔９〕リナロールシンターゼを発現する微生物を培地中で培養し、該培地中に〔１〕〜〔８〕のいずれか１項記載の組成物を蓄積させる、
〔１〕〜〔８〕記載のいずれか１項の組成物の製造方法。
〔１０〕リナロールシンターゼは、アミノ酸配列中に以下の式で表されるモチーフ：
ＤＤＸ1［ＦＹ］［ＤＹ］Ｘ2Ｘ3Ｇ
（式中、Ｄはアスパラギン酸を示し、Ｆはフェニルアラニンを示し、Ｙはチロシンを示し、Ｇはグリシンを示し、Ｘ1、Ｘ2及びＸ3はそれぞれ独立して任意のアミノ酸を示し、［ＦＹ］はＦ又はＹを示し、［ＤＹ］はＤ又はＹを示す。）
を少なくとも１つ有する
〔９〕記載の方法。
〔１１〕前記リナロールシンターゼが、アラビドプシス属、ミカン属、シソ属、ブドウ属、メンタ属、メボウキ属、ラベンデュラ属、トウヒ属、ナス属、リンゴ属、バクホウシア属、アクチニジア属、サンジソウ属、又はヨモギ属に属する植物、若しくは放線菌に由来する、〔９〕又は〔１０〕記載の方法。
〔１２〕放線菌は、ストレプトマイセス属に属する微生物である、〔１１〕記載の方法。
〔１３〕前記植物が、アラビドプシス・タリアナ、シトラス・ウンシュウ、マルス・ドメスティカ、ペリラ・フルテセンス・バー・クリスパ、ビティス・ビニフェラ、ラベンデュラ・アングスティフォリア、メンタ・シトラータ、オシマム・バシリカム、クラルキア・ブリュワリ、アクチニジア・アルグータである、〔１１〕記載の方法。
〔１４〕前記微生物が、腸内細菌科、酵母、コリネ型細菌、及び藍藻からなる群より選択される微生物である、〔９〕〜〔１３〕のいずれか１項記載の方法。
〔１５〕前記微生物は、エシェリヒア属、パントエア属、シネコシスティス属、又はコリネバクテリウム属に属する細菌である、〔９〕〜〔１４〕のいずれか１項記載の方法。
〔１６〕前記微生物は、エシェリヒア・コリ、パントエア・アナナティス、シネコシスティス ｓｐ．、又はコリネバクテリウム・グルタミカムである、〔９〕〜〔１５〕のいずれか１項記載の方法。
〔１７〕前記微生物は、リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む異種発現単位を含む、〔９〕〜〔１６〕のいずれか１項記載の方法。
〔１８〕ポリヌクレオチドは、以下の（ａ１）〜（ｃ２０）からなる群より選ばれる１又は２以上のポリヌクレオチドである、〔１７〕記載の方法：
（ａ１）（ｉ１）配列番号２で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１）配列番号３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１）前記（ｉ１）もしくは（ｉｉ１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１）前記（ｉ１）もしくは（ｉｉ１）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２）（ｉ２）配列番号６２で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２）配列番号６３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２）前記（ｉ２）もしくは（ｉｉ２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２）前記（ｉ２）もしくは（ｉｉ２）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ３）（ｉ３）配列番号６５で表される塩基配列もしくは（ｉｉ３）配列番号６６で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ３）前記（ｉ３）もしくは（ｉｉ３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ３）前記（ｉ３）もしくは（ｉｉ３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ４）（ｉ４）配列番号６８で表される塩基配列もしくは（ｉｉ４）配列番号６９で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ４）前記（ｉ４）もしくは（ｉｉ４）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ４）前記（ｉ４）もしくは（ｉｉ４）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ５）（ｉ５）配列番号７１で表される塩基配列もしくは（ｉｉ５）配列番号７２で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ５）前記（ｉ５）もしくは（ｉｉ５）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ５）前記（ｉ５）もしくは（ｉｉ５）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ６）（ｉ６）配列番号７４で表される塩基配列もしくは（ｉｉ６）配列番号７５で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ６）前記（ｉ６）もしくは（ｉｉ６）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ６）前記（ｉ６）もしくは（ｉｉ６）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ７）（ｉ７）配列番号７９で表される塩基配列、（ｉｉ７）配列番号７９で表される塩基配列中の７９〜１７２５番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ７）配列番号８０で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ７）前記（ｉ７）、（ｉｉ７）もしくは（ｉｉｉ７）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ７）前記（ｉ７）、（ｉｉ７）もしくは（ｉｉｉ７）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ８）（ｉ８）配列番号８５（Ｍ１）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ８）配列番号９８（Ｍ１４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ８）前記（ｉ８）もしくは（ｉｉ８）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ８）前記（ｉ８）もしくは（ｉｉ８）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ９）（ｉ９）配列番号８６（Ｍ２）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ９）配列番号１００（Ｍ１６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ９）前記（ｉ９）もしくは（ｉｉ９）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ９）前記（ｉ９）もしくは（ｉｉ９）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１０）（ｉ１０）配列番号８７（Ｍ３）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１０）配列番号１０２（Ｍ１８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１０）前記（ｉ１０）もしくは（ｉｉ１０）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１０）前記（ｉ１０）もしくは（ｉｉ１０）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１１）（ｉ１１）配列番号８８（Ｍ４）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１１）配列番号１０４（Ｍ２０）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１１）前記（ｉ１１）もしくは（ｉｉ１１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１１）前記（ｉ１１）もしくは（ｉｉ１１）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１２）（ｉ１２）配列番号８９（Ｍ５）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１２）配列番号１０６（Ｍ２２）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１２）前記（ｉ１２）もしくは（ｉｉ１２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１２）前記（ｉ１２）もしくは（ｉｉ１２）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１３）（ｉ１３）配列番号９０（Ｍ６）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１３）配列番号１０８（Ｍ２４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１３）前記（ｉ１３）もしくは（ｉｉ１３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１３）前記（ｉ１３）もしくは（ｉｉ１３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１４）（ｉ１４）配列番号９１（Ｍ７）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１４）配列番号１１０（Ｍ２６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１４）前記（ｉ１４）もしくは（ｉｉ１４）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１４）前記（ｉ１４）もしくは（ｉｉ１４）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１５）（ｉ１５）配列番号９２（Ｍ８）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１５）配列番号１１２（Ｍ２８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１５）前記（ｉ１５）もしくは（ｉｉ１５）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１５）前記（ｉ１５）もしくは（ｉｉ１５）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１６）（ｉ１６）配列番号９３（Ｍ９）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１６）配列番号１１４（Ｍ３０）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１６）前記（ｉ１６）もしくは（ｉｉ１６）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１６）前記（ｉ１６）もしくは（ｉｉ１６）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１７）（ｉ１７）配列番号９４（Ｍ１０）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１７）配列番号１１６（Ｍ３２）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１７）前記（ｉ１７）もしくは（ｉｉ１７）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１７）前記（ｉ１７）もしくは（ｉｉ１７）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１８）（ｉ１８）配列番号９５（Ｍ１１）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１８）配列番号１１８（Ｍ３４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１８）前記（ｉ１８）もしくは（ｉｉ１８）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１８）前記（ｉ１８）もしくは（ｉｉ１８）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
（ａ１９）（ｉ１９）配列番号９６（Ｍ１２）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１９）配列番号１２０（Ｍ３６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１９）前記（ｉ１９）もしくは（ｉｉ１９）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１９）前記（ｉ１９）もしくは（ｉｉ１９）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２０）（ｉ２０）配列番号９７（Ｍ１３）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ２０）配列番号１２２（Ｍ３８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２０）前記（ｉ２０）もしくは（ｉｉ２０）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；及び
（ｃ２０）前記（ｉ２０）もしくは（ｉｉ２０）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
〔１９〕リナロールシンターゼは、以下の（Ａ１）〜（Ｃ２８）からなる群より選ばれる１又は２以上のタンパク質である、〔９〕〜〔１８〕のいずれか１項記載の方法：
（Ａ１）（ｉ１’）配列番号１で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１）前記（ｉ１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１）前記（ｉ１’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２）（ｉ２’）配列番号６１で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２）前記（ｉ２’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２）前記（ｉ２’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ３）（ｉ３’）配列番号６４で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ３）前記（ｉ３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ３）前記（ｉ３’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ４）（ｉ４’）配列番号６７で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ４）前記（ｉ４’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ４）前記（ｉ４’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ５）（ｉ５’）配列番号７０で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ５）前記（ｉ５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ５）前記（ｉ５’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ６）（ｉ６’）配列番号７３で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ６）前記（ｉ６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ６）前記（ｉ６’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ７）（ｉ７’）配列番号７８で表される全長アミノ酸配列、もしくは（ｉｉ７’）配列番号１で表されるアミノ酸配列中の２７〜５７４番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ７）前記（ｉ７’）もしくは（ｉｉ７’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ７）前記（ｉ７’）もしくは（ｉｉ７’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ８）（ｉ８’）配列番号９９（Ｍ１５）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ８）前記（ｉ８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ８）前記（ｉ８’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ９）（ｉ９’）配列番号１０１（Ｍ１７）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ９）前記（ｉ９’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ９）前記（ｉ９’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１０）（ｉ１０’）配列番号１０３（Ｍ１９）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１０）前記（ｉ１０’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１０）前記（ｉ１０’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１１）（ｉ１１’）配列番号１０５（Ｍ２１）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１１）前記（ｉ１１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１１）前記（ｉ１１’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１２）（ｉ１２’）配列番号１０７（Ｍ２３）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１２）前記（ｉ１２’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１２）前記（ｉ１２’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１３）（ｉ１３’）配列番号１０９（Ｍ２５）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１３）前記（ｉ１３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１３）前記（ｉ１３’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１４）（ｉ１４’）配列番号１１１（Ｍ２７）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１４）前記（ｉ１４’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１４）前記（ｉ１４’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１５）（ｉ１５’）配列番号１１３（Ｍ２９）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１５）前記（ｉ１５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１５）前記（ｉ１５’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１６）（ｉ１６’）配列番号１１５（Ｍ３１）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１６）前記（ｉ１６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１６）前記（ｉ１６’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１７）（ｉ１７’）配列番号１１７（Ｍ３３）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１７）前記（ｉ１７’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１７）前記（ｉ１７’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１８）（ｉ１８’）配列番号１１９（Ｍ３５）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１８）前記（ｉ１８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１８）前記（ｉ１８’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１９）（ｉ１９’）配列番号１２１（Ｍ３７）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１９）前記（ｉ１９’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１９）前記（ｉ１９’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２０）（ｉ２０’）配列番号１２３（Ｍ３９）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２０）前記（ｉ２０’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２０）前記（ｉ２０’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２１）（ｉ２１’）配列番号１５７で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２１）前記（ｉ２１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２１）前記（ｉ２１’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２２）（ｉ２２’）配列番号１５８で表される全長アミノ酸配列列を含むタンパク質；
（Ｂ２２）前記（ｉ２２’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２２）前記（ｉ２２’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２３）（ｉ２３’）配列番号１５９で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２３）前記（ｉ２３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２３）前記（ｉ２３’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２４）（ｉ２４’）配列番号１６０で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２４）前記（ｉ２４’）ものアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２４）前記（ｉ２４’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２５）（ｉ２５’）配列番号１６１で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２５）前記（ｉ２５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２５）前記（ｉ２５’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２６）（ｉ２６’）配列番号１６２で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２６）前記（ｉ２６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２６）前記（ｉ２６’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２７）（ｉ２７’）配列番号１６３で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２７）前記（ｉ２７’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２７）前記（ｉ２７’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２８）（ｉ２８’）配列番号１６４で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２８）前記（ｉ２８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；及び
（Ｃ２８）前記（ｉ２８’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質。
〔２０〕微生物は、さらにゲラニル二リン酸シンターゼを発現する細菌である〔９〕〜〔１９〕のいずれか１項記載の方法。
〔２１〕微生物が、メチルエリスリトールリン酸経路によるジメチルアリル二リン酸の合成能を有する、〔９〕〜〔２０〕のいずれか１項記載の方法。
〔２２〕微生物が、メバロン酸経路によるジメチルアリル二リン酸の合成能を有する、〔９〕〜〔２１〕のいずれか１項記載の方法。
〔２３〕前記微生物は、２−ケトグルコン酸生成経路が遮断されている微生物である、〔９〕〜〔２２〕のいずれか１項記載の方法。
〔２４〕２−ケトグルコン酸生成経路が、グルコース脱水素酵素活性の低減により遮断されている、〔９〕〜〔２３〕のいずれか１項記載の方法。
〔２５〕前記微生物において、グルコース脱水素酵素遺伝子であるポリヌクレオチドが破壊されている、〔２４〕記載の方法。
〔２６〕前記ポリヌクレオチドは、以下の（ｘ）〜（ｚ）からなる群より選ばれる１又は２以上のポリヌクレオチドである、〔２５〕記載の方法。
（ｘ）〔ｉ〕配列番号９で表される塩基配列、もしくは〔ｉｉ〕配列番号９で表される塩基配列中３０１〜２６９１番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｙ）前記〔ｉ〕もしくは〔ｉｉ〕の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；又は
（ｚ）前記〔ｉ〕もしくは〔ｉｉ〕の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
〔２７〕前記グルコース脱水素酵素は、以下の（Ｘ）〜（Ｚ）からなる群より選ばれる１又は２以上のタンパク質である、〔２４〕〜〔２６〕のいずれか１項記載の方法。
（Ｘ）配列番号１０で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｙ）配列番号１０で表されるアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質；及び
（Ｚ）配列番号１０で表されるアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質。
本発明の好ましい態様は、以下のとおりである。
［１−１］Ｒ−リナロールを含有し、Ｒ−リナロールの鏡像体過剰率が１％以上である、微生物発酵液由来のリナロール組成物。
［１−２］前記鏡像体過剰率が１０％以上である、［１−１］記載の組成物。
［１−３］前記鏡像体過剰率が５０％以上である、［１−１］又は［１−２］記載の組成物。
［１−４］１種以上の香気成分をさらに含み、リナロールと香気成分の合計含量中のＲ−リナロール含量が９０％以上である、［１−１］〜［１−３］のいずれか１項記載の組成物。
［１−５］前記香気成分の含量が、植物抽出物中の香気成分と比べて少量である、［１−４］記載の組成物。
［１−６］前記香気成分が、酢酸リナリル、リモネン、及びカリオフィリンからなる群より選択され１種以上である、［１−４］又は［１−５］記載の組成物。
［１−７］前記微生物発酵液が、リナロールシンターゼを発現する微生物を培養培地中で培養して得られる培養液である、［１−１］〜［１−６］のいずれか１項記載の組成物。
［１−８］前記リナロールシンターゼが、Ｒ−リナロールシンターゼである、［１−７］記載の組成物。
［１−９］前記リナロールシンターゼが、植物または微生物由来の酵素である、［１−７］又は［１−８］記載の組成物。
［１−１０］前記リナロールシンターゼが、アラビドプシス属、シソ属、ブドウ属、メンタ属、メボウキ属、又はラベンデュラ属に属する植物、若しくは放線菌由来の酵素である、［１−７］〜［１−９］のいずれか１項記載の組成物。
［１−１１］放線菌は、ストレプトマイセス属に属する微生物である、［１−１０］記載の組成物。
［１−１２］前記微生物発酵液が、腸内細菌科、酵母、コリネ型細菌、及び藍藻からなる群より選択される微生物の発酵液である、［１−１］〜［１−１１］のいずれか１項記載の組成物。
［１−１３］前記微生物発酵液は、エシェリヒア属、パントエア属、シネコシスティス属、又はコリネバクテリウム属に属する細菌由来の発酵液である、［１−１２］記載の組成物。
［１−１４］リナロールシンターゼを発現する微生物を培養培地中で培養して、Ｒ−リナロールを含み、Ｒ−リナロールの鏡像体過剰率が１％以上である、微生物発酵液由来のリナロール組成物を生成することを含む、リナロール組成物の製造方法。
［１−１５］前記微生物は、前記リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む異種発現単位を含む、［１−１４］記載の方法。
［１−１６］前記リナロールシンターゼが、植物又は微生物由来である、［１−１４］又は［１−１５］記載の方法。
［１−１７］前記リナロールシンターゼは、アラビドプシス属、シソ属、ブドウ属、メンタ属、メボウキ属、又はラベンデュラ属に属する植物由来の、若しくは放線菌由来の酵素である、［１−１４］〜［１−１６］のいずれか１項記載の方法。
［１−１８］放線菌は、ストレプトマイセス属に属する微生物である、［１−１７］記載の方法。
［１−１９］前記ポリヌクレオチドは、以下の（ａ１）〜（ｃ６）、（ａ９）〜（ｃ９）、（ａ１４）〜（ｃ１４）、（ａ１６）〜（ｃ１６）及び（ａ１８）〜（ｃ１９）からなる群より選ばれる１又は２以上のポリヌクレオチドである、［１−１８］記載の方法：
（ａ１）（ｉ１）配列番号２で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１）配列番号３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１）前記（ｉ１）もしくは（ｉｉ１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１）前記（ｉ１）もしくは（ｉｉ１）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２）（ｉ２）配列番号６２で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２）配列番号６３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２）前記（ｉ２）もしくは（ｉｉ２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２）前記（ｉ２）もしくは（ｉｉ２）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ３）（ｉ３）配列番号６５で表される塩基配列もしくは（ｉｉ３）配列番号６６で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ３）前記（ｉ３）もしくは（ｉｉ３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ３）前記（ｉ３）もしくは（ｉｉ３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ４）（ｉ４）配列番号６８で表される塩基配列もしくは（ｉｉ４）配列番号６９で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ４）前記（ｉ４）もしくは（ｉｉ４）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ４）前記（ｉ４）もしくは（ｉｉ４）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ５）（ｉ５）配列番号７１で表される塩基配列もしくは（ｉｉ５）配列番号７２で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ５）前記（ｉ５）もしくは（ｉｉ５）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ５）前記（ｉ５）もしくは（ｉｉ５）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ６）（ｉ６）配列番号７４で表される塩基配列もしくは（ｉｉ６）配列番号７５で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ６）前記（ｉ６）もしくは（ｉｉ６）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ６）前記（ｉ６）もしくは（ｉｉ６）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ９）（ｉ９）配列番号８６（Ｍ２）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ９）配列番号１００（Ｍ１６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ９）前記（ｉ９）もしくは（ｉｉ９）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ９）前記（ｉ９）もしくは（ｉｉ９）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１４）（ｉ１４）配列番号９１（Ｍ７）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１４）配列番号１１０（Ｍ２６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１４）前記（ｉ１４）もしくは（ｉｉ１４）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１４）前記（ｉ１４）もしくは（ｉｉ１４）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１６）（ｉ１６）配列番号９３（Ｍ９）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１６）配列番号１１４（Ｍ３０）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１６）前記（ｉ１６）もしくは（ｉｉ１６）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１６）前記（ｉ１６）もしくは（ｉｉ１６）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１８）（ｉ１８）配列番号９５（Ｍ１１）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１８）配列番号１１８（Ｍ３４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１８）前記（ｉ１８）もしくは（ｉｉ１８）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１８）前記（ｉ１８）もしくは（ｉｉ１８）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１９）（ｉ１９）配列番号９６（Ｍ１２）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１９）配列番号１２０（Ｍ３６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１９）前記（ｉ１９）もしくは（ｉｉ１９）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；及び
（ｃ１９）前記（ｉ１９）もしくは（ｉｉ１９）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
［１−２０］前記リナロールシンターゼは、以下の（Ａ１）〜（Ｃ６）、（Ａ９）〜（Ｃ９）、（Ａ１４）〜（Ｃ１４）、（Ａ１６）〜（Ｃ１６）、（Ａ１８）〜（Ｃ１９）、（Ａ２１）〜（Ｃ２１）及び（Ａ２３）〜（Ｃ２４）からなる群より選ばれる１又は２以上のタンパク質である、［１−１４］〜［１−１９］のいずれか１項記載の方法：
（Ａ１）（ｉ１’）配列番号１で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１）前記（ｉ１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１）前記（ｉ１’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２）（ｉ２’）配列番号６１で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２）前記（ｉ２’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２）前記（ｉ２’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ３）（ｉ３’）配列番号６４で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ３）前記（ｉ３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ３）前記（ｉ３’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ４）（ｉ４’）配列番号６７で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ４）前記（ｉ４’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ４）前記（ｉ４’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ５）（ｉ５’）配列番号７０で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ５）前記（ｉ５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ５）前記（ｉ５’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ６）（ｉ６’）配列番号７３で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ６）前記（ｉ６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ６）前記（ｉ６’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ９）（ｉ９’）配列番号１０１（Ｍ１７）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ９）前記（ｉ９’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ９）前記（ｉ９’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１４）（ｉ１４’）配列番号１１１（Ｍ２７）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１４）前記（ｉ１４’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１４）前記（ｉ１４’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１６）（ｉ１６’）配列番号１１５（Ｍ３１）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１６）前記（ｉ１６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１６）前記（ｉ１６’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１８）（ｉ１８’）配列番号１１９（Ｍ３５）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１８）前記（ｉ１８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１８）前記（ｉ１８’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１９）（ｉ１９’）配列番号１２１（Ｍ３７）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１９）前記（ｉ１９’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１９）前記（ｉ１９’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２１）（ｉ２１’）配列番号１５７で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２１）前記（ｉ２１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２１）前記（ｉ２１’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２３）（ｉ２３’）配列番号１５９で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２３）前記（ｉ２３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２３）前記（ｉ２３’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２４）（ｉ２４’）配列番号１６０で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２４）前記（ｉ２４’）ものアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；及び
（Ｃ２４）前記（ｉ２４’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質。
［１−２１］前記微生物は、さらにゲラニル二リン酸シンターゼを発現する細菌である［１−１５］〜［１−２０］のいずれか１項記載の方法。
［１−２２］前記微生物が、メチルエリスリトールリン酸経路によるジメチルアリル二リン酸の合成能を有する、［１−１５］〜［１−２１］のいずれか１項記載の方法。
［１−２３］前記微生物が、メバロン酸経路によるジメチルアリル二リン酸の合成能を有する、［１−１４］〜［１−２２］のいずれか１項記載の方法。
［１−２４］前記微生物は、腸内細菌科又はラン藻に属する微生物である、［１−１４］〜［１−２３］のいずれか１項記載の方法。
［１−２５］前記微生物は、エシェリヒア属、パントエア属、シネコシスティス属、又はコリネバクテリウム属に属する細菌である、［１−２４］記載の方法。
［１−２６］前記微生物は、エシェリヒア・コリ、パントエア・アナナティス、又はシネコシスティス ｓｐ．、又はコリネバクテリウム・グルタミカムである、［１−２５］記載の方法。
［１−２７］前記微生物は、２−ケトグルコン酸生成経路が遮断されている微生物である、［１−１４］〜［１−２６］のいずれか１項記載の方法。
［１−２８］２−ケトグルコン酸生成経路が、グルコース脱水素酵素活性の低減により遮断されている、［１−１４］〜［１−２７］のいずれか１項記載の方法。
［１−２９］前記微生物において、グルコース脱水素酵素遺伝子であるポリヌクレオチドが破壊されている、［１−２８］記載の方法。
［１−３０］前記ポリヌクレオチドは、以下の（ｘ）〜（ｚ）からなる群より選ばれる１又は２以上のポリヌクレオチドである、［１−２９］記載の方法。
（ｘ）〔ｉ〕配列番号９で表される塩基配列、もしくは〔ｉｉ〕配列番号９で表される塩基配列中３０１〜２６９１番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｙ）前記〔ｉ〕もしくは〔ｉｉ〕の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；又は
（ｚ）前記〔ｉ〕もしくは〔ｉｉ〕の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
［１−３１］前記グルコース脱水素酵素は、以下の（Ｘ）〜（Ｚ）からなる群より選ばれる１又は２以上のタンパク質である、［１−２９］又は［１−３０］記載の方法。
（Ｘ）配列番号１０で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｙ）配列番号１０で表されるアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質；及び
（Ｚ）配列番号１０で表されるアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質。
〔２−１〕Ｓ−リナロールを含み、Ｓ−リナロールの鏡像体過剰率が１％以上である、微生物発酵液由来のリナロール組成物。
〔２−２〕前記鏡像体過剰率が１０％以上である、〔２−１〕記載の組成物。
〔２−３〕前記鏡像体過剰率が５０％以上である、〔２−１〕又は〔２−２〕記載の組成物。
〔２−４〕１種以上の香気成分を更に含み、リナロールと香気成分の合計含量中のＳ−リナロール含量が９０％以上である、〔２−１〕〜〔２−３〕のいずれか１項記載の組成物。
〔２−５〕前記香気成分の含量が、植物抽出物中の香気成分の含量と比べて少量である、〔２−１〕〜〔２−４〕のいずれか１項記載の組成物。
〔２−６〕前記香気成分が、酢酸リナリル、リモネン、及びカリオフィリンからなる群より選択される１種以上の物質である、〔２−１〕〜〔２−５〕のいずれか１項記載の組成物。
〔２−７〕前記微生物発酵液が、リナロールシンターゼを発現する微生物を培養培地中で培養して得られる培養液である、〔２−１〕〜〔２−６〕のいずれか１項記載の組成物。
〔２−８〕前記リナロールシンターゼが、Ｓ−リナロールシンターゼである、〔２−７〕記載の組成物。
〔２−９〕前記リナロールシンターゼが、植物又は微生物由来の酵素である、〔２−７〕又は〔２−８〕記載の組成物。
〔２−１０〕前記リナロールシンターゼが、アクチニジア属に属する植物由来の酵素である、〔２−７〕〜〔２−９〕のいずれか１項記載の組成物。
〔２−１１〕前記植物が、アクチニジア・アルグータである、〔２−１０〕記載の組成物。
〔２−１２〕前記微生物発酵液が、腸内細菌科、酵母、コリネ型細菌、及び藍藻からなる群より選択される微生物の発酵液である、〔２−１〕〜〔２−１１〕のいずれか１項記載の組成物。
〔２−１３〕前記微生物発酵液は、エシェリヒア属、パントエア属、シネコシスティス属、又はコリネバクテリウム属に属する細菌由来の発酵液である、〔２−１２〕記載の組成物。
〔２−１４〕前記組成物が、フレーバー及び／又はフレグランス組成物である、〔２−１〕〜〔２−１３〕のいずれか１項記載の組成物。
〔２−１５〕リナロールシンターゼを発現する微生物を培養培地中で培養して、Ｓ−リナロールを含み、Ｓ−リナロールの鏡像体過剰率が１％以上である、微生物発酵液由来のリナロール組成物を生成することを含む、リナロール組成物の製造方法。
〔２−１６〕前記微生物は、前記リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む異種発現単位を含む、〔２−１５〕記載の方法。
〔２−１７〕前記リナロールシンターゼが、植物又は微生物由来である、〔２−１５〕又は〔２−１６〕記載の方法。
〔２−１８〕前記リナロールシンターゼが、アクチニジア属に属する植物由来の酵素である、〔２−１５〕〜〔２−１７〕のいずれか１項記載の方法。
〔２−１９〕前記植物が、アクチニジア・アルグータである、〔２−１８〕記載の方法。
〔２−２０〕前記ポリヌクレオチドは、以下の（ａ７）〜（ｃ８）、（ａ１３）〜（ｃ１３）、（ａ１５）〜（ｃ１５）及び（ａ２０）〜（ｃ２０）からなる群より選ばれる１又は２以上のポリヌクレオチドである、〔２−１５〕〜〔２−１９〕のいずれか１項記載の方法：
（ａ７）（ｉ７）配列番号７９で表される塩基配列、（ｉｉ７）配列番号７９で表される塩基配列中の７９〜１７２５番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ７）配列番号８０で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ７）前記（ｉ７）、（ｉｉ７）もしくは（ｉｉｉ７）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ７）前記（ｉ７）、（ｉｉ７）もしくは（ｉｉｉ７）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ８）（ｉ８）配列番号８５（Ｍ１）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉｉ８）配列番号９８（Ｍ１４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ８）前記（ｉ８）もしくは（ｉｉ８）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ８）前記（ｉ８）もしくは（ｉｉ８）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１３）（ｉ１３）配列番号９０（Ｍ６）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１３）配列番号１０８（Ｍ２４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１３）前記（ｉ１３）もしくは（ｉｉ１３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１３）前記（ｉ１３）もしくは（ｉｉ１３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１５）（ｉ１５）配列番号９２（Ｍ８）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１５）配列番号１１２（Ｍ２８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１５）前記（ｉ１５）もしくは（ｉｉ１５）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１５）前記（ｉ１５）もしくは（ｉｉ１５）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２０）（ｉ２０）配列番号９７（Ｍ１３）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ２０）配列番号１２２（Ｍ３８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２０）前記（ｉ２０）もしくは（ｉｉ２０）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；及び
（ｃ２０）前記（ｉ２０）もしくは（ｉｉ２０）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
〔２−２１〕前記リナロールシンターゼは、以下の（Ａ７）〜（Ｃ８）、（Ａ１３）〜（Ｃ１３）、（Ａ１５）〜（Ｃ１５）、（Ａ２０）〜（Ｃ２０）及び（Ａ２５）〜（Ｃ２８）からなる群より選ばれる１又は２以上のタンパク質である、〔２−１５〕〜〔２−２０〕のいずれか１項記載の方法：
（Ａ７）（ｉ７’）配列番号７８で表される全長アミノ酸配列、もしくは（ｉｉ７’）配列番号７８で表されるアミノ酸配列中の２７〜５７４番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ７）前記（ｉ７’）もしくは（ｉｉ７’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ７）前記（ｉ７’）もしくは（ｉｉ７’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ８）（ｉ８’）配列番号９９（Ｍ１５）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ８）前記（ｉ８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ８）前記（ｉ８’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１３）（ｉ１３’）配列番号１０９（Ｍ２５）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１３）前記（ｉ１３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１３）前記（ｉ１３’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１５）（ｉ１５’）配列番号１１３（Ｍ２９）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１５）前記（ｉ１５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１５）前記（ｉ１５’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２０）（ｉ２０’）配列番号１２３（Ｍ３９）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２０）前記（ｉ２０’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２０）前記（ｉ２０’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２５）（ｉ２５’）配列番号１６１で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２５）前記（ｉ２５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２５）前記（ｉ２５’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２６）（ｉ２６’）配列番号１６２で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２６）前記（ｉ２６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２６）前記（ｉ２６’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２７）（ｉ２７’）配列番号１６３で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２７）前記（ｉ２７’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２７）前記（ｉ２７’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２８）（ｉ２８’）配列番号１６４で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２８）前記（ｉ２８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；及び
（Ｃ２８）前記（ｉ２８’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質。
〔２−２２〕前記微生物は、さらにゲラニル二リン酸シンターゼを発現する細菌である〔２−１５〕〜〔２−２１〕のいずれか１項記載の方法。
〔２−２３〕前記微生物が、メチルエリスリトールリン酸経路によるジメチルアリル二リン酸の合成能を有する、〔２−１５〕〜〔２−２２〕のいずれか１項記載の方法。
〔２−２４〕前記微生物が、メバロン酸経路によるジメチルアリル二リン酸の合成能を有する、〔２−１５〕〜〔２−２３〕のいずれか１項記載の方法。
〔２−２５〕前記微生物は、腸内細菌科又はラン藻に属する微生物である、〔２−１５〕〜〔２−２４〕のいずれか１項記載の方法。
〔２−２６〕前記微生物は、エシェリヒア属、パントエア属、又はシネコシスティス属、若しくはコリネバクテリウム属に属する細菌である、〔２−２５〕記載の方法。
〔２−２７〕前記微生物は、エシェリヒア・コリ、パントエア・アナナティス、シネコシスティス ｓｐ．、又はコリネバクテリウム・グルタミカムである、〔２−２６〕記載の方法。
〔２−２８〕前記微生物は、２−ケトグルコン酸生成経路が遮断されている微生物である、〔２−１５〕〜〔２−２７〕のいずれか１項記載の方法。
〔２−２９〕２−ケトグルコン酸生成経路が、グルコース脱水素酵素活性の低減により遮断されている、〔２−２８〕記載の方法。
〔２−３０〕前記微生物において、グルコース脱水素酵素遺伝子であるポリヌクレオチドが破壊されている、〔２−２８〕又は〔２−２９〕記載の方法。
〔２−３１〕前記ポリヌクレオチドは、以下の（ｘ）〜（ｚ）からなる群より選ばれる１又は２以上のポリヌクレオチドである、〔２−３０〕記載の方法。
（ｘ）〔ｉ〕配列番号９で表される塩基配列、もしくは〔ｉｉ〕配列番号９で表される塩基配列中３０１〜２６９１番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｙ）前記〔ｉ〕もしくは〔ｉｉ〕の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつグルコ及びース脱水素酵素活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；及び
（ｚ）前記〔ｉ〕もしくは〔ｉｉ〕の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
〔２−３２〕前記グルコース脱水素酵素は、以下の（Ｘ）〜（Ｚ）からなる群より選ばれる１又は２以上のタンパク質である、〔２−２９〕〜〔２−３１〕のいずれか１項記載の方法。
（Ｘ）配列番号１０で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｙ）配列番号１０で表されるアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質；及び
（Ｚ）配列番号１０で表されるアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質。
本発明によれば、鏡像体過剰率の高いリナロール組成物およびそれらの製造方法が提供され、中でも、鏡像体過剰率の高いＲ−リナロールを含むリナロール組成物、鏡像体過剰率の高いＳ−リナロールを含むリナロール組成物、リナロール含有率の高いリナロール組成物、及びそれらの製造方法が提供される。
図１は、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｐａｒａプロモーター及びリプレッサー遺伝子ａｒａＣの制御下にあるＥ．ｆａｅｃａｌｉｓ由来ｍｖａＥＳオペロンを保有するｐＡＨ１６２−Ｐａｒａ−ｍｖａＥＳプラスミドを示す図である。 図２は、ｐＡＨ１６２−ｍｖａＥＳのマップを示す図である。 図３は、ｐＡＨ１６２−ＭＣＳ−ｍｖａＥＳ染色体固定用プラスミドを示す図である。 図４は、（Ａ）ＰｌｌｄＤ、（Ｂ）ＰｐｈｏＣ、又は（Ｃ）ＰｐｓｔＳの転写制御下にあるｍｖａＥＳ遺伝子を保持する染色体固定用プラスミドのセットを示す図である。 図５は、ｐＡＨ１６２−λａｔｔＬ−ＫｍＲ−λａｔｔＲベクターの構築の概要を示す図である。 図６は、ｐＡＨ１６２−Ｐｔａｃ染色体固定用発現ベクターを示す図である。 図７は、化学合成により得られたＫＤｙＩオペロン中のコドン最適化を示す図である。 図８は、コドン最適化したＫＤｙＩオペロンを保持する、（Ａ）ｐＡＨ１６２−Ｔｃ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩ、及び（Ｂ）ｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩの染色体固定プラスミドを示す図である。 図９は、Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ由来のメバロン酸キナーゼ遺伝子を保持する染色体固定プラスミドを示す図である。 図１０は、（Ａ）ΔａｍｐＣ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０、（Ｂ）ΔａｍｐＨ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０、及び（Ｃ）Δｃｒｔ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０のゲノム改変体のマップを示す図である。 図１１は、（Ａ）Δｃｒｔ：：ｐＡＨ１６２−Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｘ）、及び（Ｂ）Δｃｒｔ：：Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｘ）のゲノム改変物のマップを示す図である。 図１２は、（Ａ）ΔａｍｐＨ：：ｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩ、（Ｂ）ΔａｍｐＣ：：ｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩ、及び（Ｃ）ΔａｍｐＣ：：Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩの染色体改変物のマップを示す図である。 図１３は、（Ａ）ΔａｍｐＨ：：ｐＡＨ１６２−Ｐｘ−ｍｖａＥＳ、及び（Ｂ）ΔａｍｐＣ：：ｐＡＨ１６２−Ｐｘ−ｍｖａＥＳの染色体改変物のマップを示す図である。 図１４は、Ｒ−とＳ−リナロールの混合リナロール標準液のクロマトグラムを示す図である。 図１５は、Ｒ−リナロールの標準液のクロマトグラムを示す図である。 図１６は、Ｓ．ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ由来リナロールシンターゼ発現株より生成されたリナロールサンプルのクロマトグラムを示す図である。 図１７は、Ｃ．ｓａｔｉｖｕｍ由来リナロールシンターゼ発現株より生成されたリナロールサンプルのクロマトグラムを示す図である。 図１８は、Ｒ−とＳ−リナロールの混合リナロール標準液のトータルイオンクロマトグラムを示す図である。 図１９は、Ｓ．ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ由来リナロールシンターゼ発現株より生成されたリナロールサンプルのトータルイオンクロマトグラムを示す図である。 図２０は、Ｒ−とＳ−リナロールの混合リナロール標準液のクロマトグラムを示す図である。 図２１は、Ｒ−リナロールの標準液のクロマトグラムを示す図である。 図２２は、Ａ．ａｒｇｕｔａ由来リナロールシンターゼ発現株より生成されたリナロールサンプルのクロマトグラムを示す図である。 図２３は、Ｃ．ｓａｔｉｖｕｍ由来リナロールシンターゼ発現株より生成されたリナロールサンプルのクロマトグラムを示す図である。 図２４は、Ｒ−とＳ−リナロールの混合リナロール標準液のトータルイオンクロマトグラムを示す図である。 図２５は、Ａ．ａｒｇｕｔａ由来リナロールシンターゼ発現株より生成されたリナロールサンプルのトータルイオンクロマトグラムを示す図である。 図２６は、モチーフ１のシーケンスロゴを示す図である。 図２７は、モチーフ２のシーケンスロゴを示す図である。 図２８は、モチーフ３のシーケンスロゴを示す図である。 図２９は、モチーフ４のシーケンスロゴを示す図である。 図３０は、モチーフ５のシーケンスロゴを示す図である。 図３１は、モチーフ１のアラインメントを示す図である。 図３２は、モチーフ２のアラインメントを示す図である。 図３３は、モチーフ３のアラインメントを示す図である。 図３４は、モチーフ４のアラインメントを示す図である。 図３５は、モチーフ５のアラインメントを示す図である。 図３６は、モチーフ１〜５の入力配列における分布を示す図である。 図３７は、テルペンシンターゼ１４（配列番号９９（Ｍ１５））におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図３８は、Ａｔ２ｇ２４２１０、テルペンシンターゼ１０（ＴＰＳ１０）（配列番号１０１（Ｍ１７））におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図３９は、リナロールシンターゼ（配列番号１０３（Ｍ１９））におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図４０は、リナロールシンターゼ（配列番号１０５（Ｍ２１））におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図４１は、リナロールシンターゼ（配列番号１０７（Ｍ２３））におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図４２は、リナロールシンターゼ（配列番号１０９（Ｍ２５））におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図４３は、リナロールシンターゼ（配列番号１１１（Ｍ２７））におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図４４は、（３Ｓ）−リナロール／（Ｅ）−ネロリドールシンターゼ（配列番号１１３（Ｍ２９））におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図４５は、（３Ｒ）−リナロールシンターゼ（配列番号１１５（Ｍ３１））におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図４６は、リナロールシンターゼ（配列番号１１７（Ｍ３３））におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図４７は、リナロールシンターゼ（配列番号１１９（Ｍ３５））におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図４８は、Ｒ−リナロールシンターゼ（配列番号１２１（Ｍ３７））におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図４９は、Ｓ−リナロールシンターゼ（配列番号１２３（Ｍ３９））におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図５０は、Ｒ−リナロールシンターゼ（配列番号１５７）におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図５１は、リナロールシンターゼ（配列番号１５８）におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図５２は、（３Ｒ）―リナロールシンターゼ（配列番号１５９）におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図５３は、（３Ｒ）―リナロールシンターゼ（配列番号１６０）におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図５４は、Ｓ−リナロールシンターゼ（配列番号１６１）におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図５５は、Ｓ−リナロールシンターゼ（配列番号１６２）におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図５６は、Ｓ−リナロールシンターゼ（配列番号１６３）におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図５７は、Ｓ−リナロールシンターゼ（配列番号１６４）におけるモチーフ１の分布を示す図である。 図５８は、リナロール添加試験の結果を示す図である。 図５９は、リナロール蓄積の経時変化の結果を示す図である。 図６０は、Ｏ．Ｄ．６２０ｎｍの経時変化の結果を示す図である。
本発明は、リナロール組成物及びその製造方法を提供する。
本発明のリナロール組成物は、リナロールを含む。
リナロールは、Ｃ10Ｈ18Ｏで表されるイソプレノイド化合物の１種である。ＣＡＳ番号７８−７０−６で表され、Ｒ−リナロールは１２６−９１−０、Ｓ−リナロールは１２６−９０−９で表記される。リナロールはエナンチオマーを有し、植物由来のリナロールは、通常、Ｒ−リナロール、Ｓ−リナロールから構成される。
本発明のリナロール組成物は、リナロールのみから構成されていてもよいし、リナロール以外の成分を含んでいてもよい。斯かる他の成分としては例えば、揮発性成分が挙げられる。本発明において揮発性成分とは、揮発性を有する有機化合物（揮発性有機化合物、ＶＯＣ）であり、２種以上の組み合わせであってもよい。揮発性を有する有機化合物とは、沸点の下限が０℃〜５℃かつ上限が１００℃の高揮発性有機化合物、沸点の下限が５０℃〜１００℃かつ上限が２４０℃〜２６０℃の揮発性有機化合物、２９３．１５Ｋで０．０１ｋＰａ以上の蒸気圧を持つ有機化合物、及び特定の使用条件下で前記の何れかの化合物と同等の揮発性を有する有機化合物からなる群から選ばれる有機化合物を意味する。有機化合物の蒸気圧は、気体流通法、静止法、沸点法等の一般的な手法により測定可能である（第５版 実験化学講座６ 温度・熱、圧力 日本化学会 編 丸善出版（株）〔ＩＳＢＮコード〕９７８−４−６２１−０７３０５−６ 〔発行年月〕２００５年０７月）。
揮発性成分としては、例えば、３−メチル−１−ブタノール、１−ペンタノール、３−メチル−２−ブテン−１−オール、β−シトロネロール、（Ｒ）−（＋）−β−シトロネロール、ゲラニオール、ネロール、トランス−ネロリドール、ネロリジル酢酸、酢酸リナリル、リモネン、カリオフィリン等の揮発性成分（香気成分）が挙げられる。本発明のリナロール組成物は、これらのうち、３−メチル−２−ブテン−１−オール、酢酸リナリル、リモネン、カリオフィリン、３−メチル−１−ブタノール、β−シトロネロール、及びゲラニオールからなる群より選ばれる１以上を含むことが好ましく、少なくとも３−メチル−２−ブテン−１−オールを含むことがより好ましく、３−メチル−２−ブテン−１−オールと酢酸リナリル、リモネン、カリオフィリン、３−メチル−１−ブタノール、β−シトロネロール、及びゲラニオールからなる群より選択される成分とを含むことがより好ましい。
リナロール組成物中の揮発性成分の合計含量中のリナロールの含量は、通常は６０％以上、好ましくは７０％以上又は８０％以上、より好ましくは８５％以上、より好ましくは８８％以上である。上限は特に限定されず、リナロール組成物がリナロール以外の揮発性成分を含まない場合には１００％であってもよい。
リナロール組成物中の揮発性成分の合計含量中の３−メチル−２−ブテン−１−オール含量は、４０％以下が好ましく、１０％以下がより好ましく、５％以下がさらに好ましい。下限は特に限定はなく、０％（含まない）でもよい。リナロール組成物中の３−メチル−２−ブテン−１−オール含量が上記範囲外である場合、調整してもよい。調整（例えば低減）方法としては、例えば、精密蒸留、カラムクロマトグラフィー等の一般的な精製方法が挙げられる。カラムクロマトグフィーによる低減の場合の実施条件（例えば、カラムの充填剤の種類、充填剤の重量割合、精製時間）は特に限定されないが、例示すると以下のとおりである。カラムの充填剤（固相）としては、例えば、活性炭、活性アルミナ、シリカゲル、モレキュラーシーブ、還元銅等が挙げられる。リナロールに対する充填剤の重量割合は、０．１〜２．０が好ましく、０．５〜１．０がより好ましい。精製時間は、２〜８時間が好ましく、４〜６時間がより好ましい。
リナロール組成物中のリナロール含量は特に限定されないが、２００ｍｇ／Ｌ以上であることが好ましく、５００ｍｇ／Ｌ以上であることがより好ましい。リナロールはリナロールを生産する微生物に対して通常毒性を示し、多量にリナロールが蓄積した条件ではほとんど生育ができない。一方、本発明では、培地中にリナロールが蓄積していてもよく、蓄積量が２００ｍｇ／Ｌ以上、又は５００ｍｇ／Ｌ以上であっても、細菌は生育することができる。本発明の方法においては、リナロール組成物中のリナロール含量が２００ｍｇ／Ｌ以上又は５００ｍｇ／Ｌ以上、好ましくは６００ｍｇ／Ｌ以上、さらに好ましくは６２５ｍｇ／Ｌ、７００ｍｇ／Ｌ以上蓄積していてもよく、むしろ高い濃度で蓄積していることが好ましい。培養培地に含まれてもよい成分の例等、培養条件については後段にて説明する。
リナロール組成物中の揮発性成分の合計含量とは、組成物に含まれる揮発性有機化合物の総重量を意味する。リナロール組成物中のリナロール含量とは、リナロール組成物１Ｌあたりのリナロールの含量（ｍｇ）を意味する。リナロール組成物に含まれる揮発性有機化合物及びリナロールの同定、定量方法としては、例えば、ガスクロマトグラフィー、ヘッドスペース法が挙げられる。
ヘッドスペース法は、一般的に揮発性成分を分析するのに広く使用されている方法である（長井 裕美、酒類の香気成分分析におけるヘッドスペースＧＣ法の改良、日本食品工業学会誌、３９（３），２６４−２７０，１９９２）。ヘッドスペース法によりリナロール組成物中の揮発性成分の合計含量を測定する場合、例えば以下の手順で行えばよい。リナロール組成物を含む溶液をヘッドスペースバイアルに封入し、一定条件の下で加温の後、ガスクロマトグラフにより分離、質量分析によりその種類を同定する。同定された化合物について検量線を作成することにより、溶液中に含まれる濃度に換算することができ、そこから、揮発性成分の合計含量と、各成分の構成比を求めることができる。このようにして、組成物中の揮発性成分の合計含量を測定することができる。
ガスクロマトグラフィーによりリナロール組成物中の揮発性成分の合計含量を測定する場合、例えば以下の手順で行えばよい。揮発性成分を、例えば、Ｔｅｎａｘ ＴＡ（登録商標）吸着剤（ジーエルサイエンス株式会社）を用いてサンプリングし、水素炎イオン化検出器又は質量分析計を用いて無極性のキャピラリーカラムでｎ−ヘキサンとｎ−ヘキサデカンの範囲で溶出及び検出される、クロマトグラムピーク面積の合計をトルエン相当量に換算する方法（日本工業規格ＪＩＳ Ａ １９６５）等が知られている。
本発明のリナロール組成物は、植物抽出物と比べてリナロール以外の少なくとも１つの揮発性成分の含量、好ましくは、酢酸リナリル、リモネン及びカリオフィリンから選ばれる１種以上の揮発性成分の含量が少ない又は実質的に含まれないことが好ましい。なお、２種以上の揮発性成分が選択される場合、それぞれの揮発性成分含量が植物抽出物と比べて少ない又は実質的に含まれないことが好ましい。少ない又は実質的に含まれないとは、組成物中の上記成分の含量が、植物抽出物の対応する成分の含量と比較して少ないことを意味し、通常はリナロールの含量に対する不純物の含量の比率に対し、例えば４０％以下、３０％以下、２０％以下または１０％以下、好ましくは７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、又は１％以下、より好ましくは０．５％以下、０．３％以下、０．１％以下、検出不能または０％である。植物抽出物とは、通常、ラベンダー（Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）を蒸留して得られる抽出物（例えば、Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄ ２０１６；８２（０１／０２）：１６３−１７０に記載の方法で得られるラベンダー精油）、またはベルガモット果実（Ｃｉｔｒｕｓ ａｕｒａｎｔｉｕｍ ｓｕｂｓｐ．Ｂｅｒｇａｍｉａ）を蒸溜して得られる抽出物（例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２００９，１４（２），８３９−８４９に記載のベルガモット精油）である。
本発明のリナロール組成物は、フレーバー及び／又はフレグランス組成物として使用できる。
本発明のリナロール組成物は、Ｒ−リナロールを含有し、Ｒ−リナロールの鏡像体過剰率が１％以上であるリナロール組成物（以下、Ｒ−リナロール組成物という）か、又はＳ−リナロールを含有し、Ｓ−リナロールの鏡像体過剰率が１％以上であるリナロール組成物（以下、Ｓ−リナロール組成物という）であることが好ましい。
Ｒ−リナロール組成物は、Ｒ−リナロールの鏡像体過剰率（Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｉｃ Ｅｘｃｅｓｓ：ｅ．ｅ．）が１％以上である。鏡像体過剰率は、例えば１０％以上、２０％以上、４０％以上、又は５０％以上であり、好ましくは６０％以上、より好ましくは７０％以上、更に好ましくは７４％以上、更により好ましくは８０％以上、８４％以上、８６％以上、又は８８％以上、とりわけ好ましくは９０％以上であり、更にとりわけ好ましくは１００％である。これにより、組成物は、鏡像体過剰率の高いＲ−リナロールを含む組成物となり得る。
本発明においてＲ−リナロールの鏡像体過剰率（Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｉｃ Ｅｘｃｅｓｓ：ｅ．ｅ．）は、ｅ．ｅ．＝（ＡＲ−ＡＳ）／（ＡＲ＋ＡＳ）により定義される。ここでＡＲはＲ−リナロールのモル分率、ＡＳはＳ−リナロールのモル分率を表す。キラルカラムを用いるガスクロマトグラフィーにおけるＲ−リナロール、及びＳ−リナロールそれぞれのピークのエリア面積比はモル比とほぼ同義で扱うことができる。合計面積を１００％とし、Ｒ−とＳ−リナロールのそれぞれのピークのエリア面積比がモル分率に相当する。
Ｒ−リナロール組成物中のＲ−リナロールとＳ−リナロールのモル比率は、Ｒ−リナロールがＳ−リナロールより高いこと、すなわちラセミ体ではないことが好ましい。モル比率は、キラルカラムを用いたガスクロマトグラフィーによって得られたＲ−リナロール、及びＳ−リナロールそれぞれのピークのエリア面積比（百分率）から算出される。クロマトグラムの各ピークの面積値は、物質量に比例するため、各ピークのエリア面積比は、Ｒ−リナロール、及びＳ−リナロールの重量比とも言い換えられる。また、モル比率は、組成物に含まれるリナロールの旋光度からも求めることができる。
Ｒ−リナロール組成物において、Ｒ−リナロールの含量の、リナロールと揮発性成分の総含量に占める比率は、好ましくは６０％以上、７０％以上又は８０％以上、より好ましくは８５％以上、より好ましくは８８％以上である。
Ｓ−リナロール組成物は、Ｓ−リナロールの鏡像体過剰率（Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｉｃ Ｅｘｃｅｓｓ：ｅ．ｅ．）が１％以上である。鏡像体過剰率は、例えば１０％以上、２０％以上、４０％以上、又は５０％以上であり、好ましくは６０％以上、より好ましくは７０％以上、更に好ましくは７５％以上、更により好ましくは８０％以上、８４％以上、８６％以上、又は８８％以上、とりわけ好ましくは９０％以上であり、更にとりわけ好ましくは１００％である。これにより、組成物は、鏡像体過剰率の高いＳ−リナロールを含む組成物となり得る。
本発明においてＳ−リナロールの鏡像体過剰率（Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｉｃ Ｅｘｃｅｓｓ：ｅ．ｅ．）は、ｅ．ｅ．＝（ＡＳ−ＡＲ）／（ＡＲ＋ＡＳ）により定義される。符号は、Ｒ−リナロールの鏡像体過剰率の定義において説明したのと同様である。
Ｓ−リナロール組成物中のＲ−リナロールとＳ−リナロールのモル比率は、Ｓ−リナロールがＲ−リナロールより高いこと、すなわちラセミ体ではないことが好ましい。モル比率は、キラルカラムを用いたガスクロマトグラフィーによって得られたＲ−リナロール、及びＳ−リナロールそれぞれのピークのエリア面積比（百分率）から算出される。クロマトグラムの各ピークの面積値は、物質量に比例するため、各ピークのエリア面積比は、Ｒ−リナロール、及びＳ−リナロールの重量比とも言い換えられる。また、モル比率は、組成物に含まれるリナロールの旋光度からも求めることができる。
Ｓ−リナロール組成物において、Ｓ−リナロールの含量の、リナロールと揮発性成分の総含量に占める比率は、好ましくは６０％以上、７０％以上又は８０％以上、より好ましくは８５％以上、より好ましくは８８％以上である。
Ｒ−リナロール組成物中のＲ−リナロール含量、及びＳ−リナロール組成物中のＳ−リナロール含量の測定方法としては例えば、上述したリナロール含量の測定方法の具体例として挙げた方法と、上述したモル比率の測定方法の具体例として挙げた方法との組み合わせが挙げられる。
本明細書における「フレーバー組成物」とは、経口投与および経口消費に適した溶媒と組み合わせたときに、所望のテイストを与えるような１種または複数の化合物（例えば、香料原料）を含む組成物を指す。
本発明における「フレグランス組成物」とは、１種または複数のフレグランス成分（いかなる形態のものであってもよい）、および１種または複数の溶媒または香料原料を含む混合物を指す。当業者には公知のように、フレグランス組成物には、１種または複数のフレグランス成分（例えば、香料原料）が含まれていて、それが添加された組成物（例えば、家庭用洗剤、パヒューム、またはその他の市販の商品）に香気を与える。
本発明のリナロール組成物は、単独または他の共存成分との組合せで、フレグランス組成物、フレーバー組成物、溶媒、媒体などの中に採用することができる。例えば以下の組成物との組み合わせで採用することができ、例えば、：ロウソク；エアフレッシュナー；パヒューム；コロン；パーソナルケア製品たとえば、セッケン、デオドラント、シャンプー、コンディショナー、シャワージェル、およびシェービングローション；化粧料たとえば、ローションおよび化粧クリーム；さらには洗剤；ファブリックケア製品および家庭用洗剤／クリーニング剤。そのような化合物の使用は、フレーバー産業の中の広く各種の製品に適用することが可能であるが、そのような製品としてはたとえば以下のものが挙げられる（これらに限定される訳ではない）：食料品たとえば、焼き菓子、乳製品、デザートなど；飲料たとえば、ジュース、ソーダ水、茶飲料、フレーバーウォーター、フルーツベースの「スムージー（ｓｍｏｏｔｈｙ）」飲料、ミルクベースの飲料など；菓子類たとえば、スイーツ、ハードキャンディ、ガム；ならびにゼリー状物、スナック、医薬品、オーラルケア製品などが挙げられる。
本発明のリナロール組成物は、通常、微生物発酵液から製造されるか、あるいは微生物発酵液から精製されて製造され得る。微生物発酵液とは、微生物の発酵産物であり、通常は液状である。発酵とは、微生物が有機化合物を資化することであり、これにより、エネルギーを得るとともにＲ−リナロール、Ｓ−リナロール等のリナロールが生成され得る。
微生物は、リナロールを含む微生物発酵液を生産できる微生物であればよく、細菌又は真菌であり得る。細菌は、グラム陽性菌であってもグラム陰性菌であってもよい。微生物としては例えば、腸内細菌科に属する微生物及びラン藻を含む後述する微生物が挙げられ、腸内細菌科又はラン藻がより好ましい。
グラム陽性細菌としては、例えば、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属細菌、リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）属細菌、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）属細菌、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属細菌、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属細菌、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）属細菌、コリネ型細菌（コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属細菌）、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属細菌等が挙げられ、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属細菌、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属細菌が好ましい。
バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属細菌としては、例えば、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、セレウス菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）等が挙げられ、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）がより好ましい。
コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属細菌としては、例えば、コリネバクテリウム・グルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）、コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）、コリネバクテリウム・カルナエ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｌｌｕｎａｅ）等が挙げられ、コリネバクテリウム・グルタミカムがより好ましい。
グラム陰性細菌としては、例えば、エシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属細菌、パントエア（Ｐａｎｔｏｅａ）属細菌、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属細菌、ビブリオ（Ｖｉｖｒｉｏ）属細菌、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）属細菌、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属細菌、ラン藻（Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）等が挙げられ、エシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属細菌、パントエア（Ｐａｎｔｏｅａ）属細菌、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属細菌、ラン藻（Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）が好ましい。
エシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属細菌としては、エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）が好ましい。例えば、エシェリヒア・コリＭＧ１６５５、エシェリヒア・コリＷ３１１０等が挙げられる。
パントエア（Ｐａｎｔｏｅａ）属細菌としては、例えば、パントエア・アナナティス（Ｐａｎｔｏｅａ ａｎａｎａｔｉｓ）、パントエア・スチューアルティ（Ｐａｎｔｏｅａ ｓｔｅｗａｒｔｉｉ）、パントエア・アグロメランス（Ｐａｎｔｏｅａ ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）、パントエア・シトレア（Ｐａｎｔｏｅａ ｃｉｔｒｅａ）等が挙げられ、パントエア・アナナティス（Ｐａｎｔｏｅａ ａｎａｎａｔｉｓ）、パントエア・シトレア（Ｐａｎｔｏｅａ ｃｉｔｒｅａ）が好ましい。また、パントエア属細菌としては、欧州特許出願公開第０９５２２２１号明細書に例示された株を使用してもよい。パントエア属細菌の代表的な株としては、例えば、欧州特許出願公開第０９５２２２１号明細書に開示されるパントエア・アナナティスＡＪ１３３５５株（ＦＥＲＭ ＢＰ−６６１４）及びパントエア・アナナティスＡＪ１３３５６株（ＦＥＲＭ ＢＰ−６６１５）、パントエア・アナナティスＳＣ１７株（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１０９１）、パントエア・アナナティスＳＣ１７（０）株（Ｋａｔａｓｈｋｉｎａ ＪＩ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．，２００９；１０：３４ ＶＫＰＭ Ｂ−９２４６）が挙げられる。
エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属細菌としては、例えば、エンテロバクター・アグロメランス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）等が挙げられ、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｇｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）が好ましい。また、エンテロバクター属細菌としては、欧州特許出願公開第０９５２２２１号明細書に例示された菌株を使用してもよい。エンテロバクター属細菌の代表的な株としては、例えば、エンテロバクター・アグロメランスＡＴＣＣ１２２８７株、エンテロバクター・アエロゲネスＡＴＣＣ１３０４８株、エンテロバクター・アエロゲネスＮＢＲＣ１２０１０株（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ． ２００７ Ｍａｒ ２７；９８（２）：３４０−３４８）、エンテロバクター・アエロゲネスＡＪ１１０６３７（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５５）株等が挙げられる。エンテロバクター・アエロゲネスＡＪ１１０６３７株は、２００７年８月２２日付で独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター（〒３０５−８５６６ 日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６；現在は、独立行政法人製品評価技術基盤機構 バイオテクノロジーセンター 特許生物寄託センター(ＮＩＴＥ−ＩＰＯＤ)（〒２９２−０８１８ 日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２０号室））に受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−２１３４８として寄託され、２００８年３月１３日にブダペスト条約に基づく国際寄託に移管され、ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５５の受領番号が付与されている。
ラン藻（Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）としては、例えば、アナベナ（Ａｎａｂａｅｎａ）属ラン藻、アルスロスピラ（Ａｒｔｈｒｏｓｐｉｒａ）属ラン藻、シアノテーセ（Ｃｙａｎｏｔｈｅｃｅ）属ラン藻、ノストック（Ｎｏｓｔｏｃ）属ラン藻、プロクロロコッカス（Ｐｒｏｃｈｌｏｒｏｃｏｃｃｕｓ）属ラン藻、シネココッカス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）属ラン藻、サーモシネココッカス（Ｔｈｅｒｍｏｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）属ラン藻等が挙げられ、シネコシスティス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ）属ラン藻が好ましい。
シネコシスティス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ）属細菌としては、例えば、Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ． ｓｐ．（例：Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ． ｓｐ． ＰＣＣ６８０３、ＰＣＣ６７０１、ＰＣＣ６７１４、ＰＣＣ６９０２、ＰＣＣ７００８等が挙げられ、Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ．ＰＣＣ６８０３が好ましい。シネコシスティス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ）属細菌の代表的な株としては、Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ．ＰＣＣ６８０３ ＧＴ株（国際公開第２０１４／１４２０５１Ａ１号）が挙げられる。
Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ．ＰＣＣ６８０３はフランスのパスツール研究所、あるいはＡＴＣＣ２７１８４はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手でき、Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ． ＰＣＣ６８０３ ＧＴ株等の株は、Ｑｉｎｇｌｏｎｇ Ｄ．，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．２０１５，１６，２４０８１−２４０９３に記載の方法に基づき前記ＰＣＣ６８０３株から派生させ得る。
真菌としては、例えば、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、シゾサッカロミセス（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、ヤロウイア（Ｙａｒｒｏｗｉａ）属、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）属の微生物等が挙げられ、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、シゾサッカロミセス（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、ヤロウイア（Ｙａｒｒｏｗｉａ）属、又はトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属の微生物が好ましい。
サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属の微生物としては、例えば、サッカロミセス・カールスベルゲンシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ）、サッカロミセス・セレビシエー（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロミセス・ディアスタティクス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ）、サッカロミセス・ドウグラシー（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｄｏｕｇｌａｓｉｉ）、サッカロミセス・クルイベラ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｋｌｕｙｖｅｒｉ）、サッカロミセス・ノルベンシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｎｏｒｂｅｎｓｉｓ）、サッカロミセス・オビフォルミス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｏｖｉｆｏｒｍｉｓ）が挙げられ、サッカロミセス・セレビシエー（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）が好ましい。
シゾサッカロミセス（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属の微生物としては、シゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）が好ましい。
ヤロウイア（Ｙａｒｒｏｗｉａ）属の微生物としては、ヤロウィア・リポリティカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）が好ましい。
トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属の微生物としては、例えば、トリコデルマ・ハルジアヌム（Ｔｔｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ）、トリコデルマ・コニンギー（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｋｏｎｉｎｇｉｉ）、トリコデルマ・ロンギフラキアム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ）、トリコデルマ・リーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）、トリコデルマ・ビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｉｄｅ）が挙げられ、トリコデルマ・リーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）が好ましい。
上述の微生物は、リナロールシンターゼを発現する微生物であることが好ましく、リナロールシンターゼ遺伝子を増幅させた微生物であることが好ましい。リナロールシンターゼによっては、下述するとおり他の酵素と共に微生物中で発現させることが好ましい。
リナロールシンターゼとは、ゲラニル二リン酸（ＧＰＰ）からのリナロールの合成に関与する１つ以上の酵素をいう。リナロールシンターゼ活性は、本発明のリナロール組成物がＲ−リナロール組成物の場合、好ましくはＲ−リナロール、及びＳ，Ｒ−リナロールの混合物からなる群より選ばれる少なくとも１つを生成する活性、より好ましくは、Ｒ−リナロールの鏡像体過剰率が例えば１％以上、１０％以上、２０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７４％以上、８０％以上、８４％以上、８６％以上、８８％以上、９０％以上、又は１００％以上であるリナロールを生成する活性、さらに好ましくは、Ｒ−リナロールシンターゼ活性、すなわち、実質的にＲ−リナロールのみを生成する活性をいう。実質的にＲ−リナロールのみを生成する活性とは、生成するリナロールに占めるＲ−リナロールの鏡像体過剰率が、通常は８０％以上、好ましくは８４％以上、より好ましくは８６％以上、更に好ましくは８８％以上、更により好ましくは９０％以上である。
リナロールシンターゼ活性は、本発明のリナロール組成物がＳ−リナロール組成物の場合、好ましくはＳ−リナロール、及びＳ，Ｒ−リナロールの混合物からなる群より選ばれる少なくとも１つを生成する活性、より好ましくは、Ｓ−リナロールの鏡像体過剰率が例えば１％以上、１０％以上、２０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、８０％．以上、８０％以上、８４％以上、８６％以上、８８％以上、９０％以上、又は１００％．以上であるリナロールを生成する活性、さらに好ましくは、Ｓ−リナロールシンターゼ活性、すなわち、実質的にＳ−リナロールのみを生成する活性をいう。実質的にＳ−リナロールのみを生成する活性とは、生成するリナロールに占めるＳ−リナロールの鏡像体過剰率が、通常は８０％以上、好ましくは８４％以上、より好ましくは８６％以上、更に好ましくは８８％以上、更により好ましくは９０％以上である。
リナロールシンターゼは例えば、以下の式で表されるモチーフ：
ＤＤＸ1［ＦＹ］［ＤＹ］Ｘ2Ｘ3Ｇ
を少なくとも１つ有するリナロールシンターゼであってもよい。
式中、Ｄはアスパラギン酸を示す。［ＦＹ］はフェニルアラニン（Ｆ）又はチロシン（Ｙ）を示す。［ＤＹ］はＤ又はＹを示す。Ｘ1、Ｘ2、Ｘ及びＸ3はそれぞれ独立して任意のアミノ酸を示す。Ｘ1としては例えば、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、メチオニン（Ｍ）、Ｆが挙げられ、Ｉ又はＶが好ましい。Ｘ2としては例えば、Ｖ、Ｉ、アラニン（Ａ）、トレオニン（Ｔ）が挙げられ、Ｖが好ましい。Ｘ3としては例えば、Ｙ、システイン（Ｃ）、ヒスチジン（Ｈ）、グルタミン酸（Ｅ）、Ｆが挙げられ、Ｙが好ましい。
リナロールシンターゼは、前記モチーフを１つ、または複数有するリナロールシンターゼでもよいが、１つ有するリナロールシンターゼが好ましい。
前記モチーフとしては例えば、以下のものが挙げられる：
・Ｘ1がＩ、［ＦＹ］がＦ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＶ、Ｘ3がＹの組み合わせ；
・Ｘ1がＩ、［ＦＹ］がＦ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＶ、Ｘ3がＹの組み合わせ；
・Ｘ1がＩ、［ＦＹ］がＦ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＶ、Ｘ3がＨの組み合わせ；
・Ｘ1がＩ、［ＦＹ］がＦ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＴ、Ｘ3がＹの組み合わせ；
・Ｘ1がＩ、［ＦＹ］がＦ、［ＤＹ］がＹ、Ｘ2がＶ、Ｘ3がＣの組み合わせ；
・Ｘ1がＩ、［ＦＹ］がＹ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＩ、Ｘ3がＹの組み合わせ；
・Ｘ1がＩ、［ＦＹ］がＹ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＡ、Ｘ3がＹの組み合わせ；
・Ｘ1がＩ、［ＦＹ］がＹ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＶ、Ｘ3がＹの組み合わせ；
・Ｘ1がＶ、［ＦＹ］がＹ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＩ、Ｘ3がＹの組み合わせ；
・Ｘ1がＶ、［ＦＹ］がＹ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＶ、Ｘ3がＦの組み合わせ；
・Ｘ1がＭ、［ＦＹ］がＹ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＩ、Ｘ3がＹの組み合わせ；及び
・Ｘ1がＦ、［ＦＹ］がＦ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＶ、Ｘ3がＥの組み合わせ。
リナロールシンターゼはどの生物に由来するものであってもよい。リナロールシンターゼを有する生物としては、例えば、アクチニジア属、コリアンドラム属、ヨモギ属、フラガリア属、サンジソウ属、アラビドプシス属（シロイヌナズナ属）、ミカン属、シソ属、メンタ属、ラベンデュラ属、トウヒ属、ナス属、ブドウ属、リンゴ属、メボウキ属、バクホウシア属に属する植物、放線菌が挙げられる。本発明のリナロール組成物がＲ−リナロール組成物の場合、リナロールシンターゼは、上述のＲ−リナロールシンターゼ活性を有するもの（Ｒ−リナロールシンターゼ）が好ましく、例えばアラビドプシス属（シロイヌナズナ属）、シソ属、ブドウ属、メンタ属、ナス属、ラベンデュラ属、メボウキ属に属する植物、放線菌由来のリナロールシンターゼがより好ましく、アラビドプシス属、シソ属、ブドウ属、メンタ属、メボウキ属植物、又は放線菌由来のリナロールシンターゼがさらに好ましい。本発明のリナロール組成物がＳ−リナロール組成物の場合、リナロールシンターゼは、上記のＳ−リナロールシンターゼ活性を有するもの（Ｓ−リナロールシンターゼ）が好ましく、例えば、アクチニジア属、サンジソウ属、シロイヌナズナ属、リンゴ属、ブドウ属又はシソ属に属する植物由来のリナロールシンターゼがより好ましく、アクチニジア属、アラビドプシス属、シソ属、リンゴ属、サンジソウ属植物由来のリナロールシンターゼがさらに好ましい。
アクチニジア属に属する植物としては例えば、サルナシ（アクチニジア・アルグータ；Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ａｒｇｕｔａ）、マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）が挙げられ、サルナシが好ましい。コリアンドラム属に属する植物としては例えば、コリアンダー（コリアンドラム・サティバム；Ｃｏｒｉａｎｄｒｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ）が挙げられる。ヨモギ属に属する植物としては例えば、クソニンジン（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ ａｎｎｕａ）が挙げられる。バクホウシア属に属する植物としては例えば、レモンマートル（Ｂａｃｋｈｏｕｓｉａ ｃｉｔｒｉｏｄｏｒａ）が挙げられる。フラガリア属に属する植物としては例えば、イチゴ（Ｆｒａｇａｒｉａ ｘ ａｎａｎａｓｓａ）が挙げられる。サンジソウ属に属する植物としては例えば、サンジソウ（Ｃｌａｒｋｉａ ｂｒｅｗｅｒｉ）が挙げられる。シロイヌナズナ属に属する植物としては例えば、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）が挙げられる。ミカン属に属する植物としては例えば、ウンシュウミカン（Ｃｉｔｒｕｓ ｕｎｓｈｉｕ）が挙げられる。シソ属に属する植物としては例えば、シソ（Ｐｅｒｉｌｌａ ｈｉｒｔｅｌｌａ；Ｐｅｒｉｌｌａ ｓｅｔｏｅｎｓｉｓ；Ｐｅｒｉｌｌａ ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ ｖａｒ．ｃｒｉｓｐａ；Ｐｅｒｉｌｌａ ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ ｖａｒ．ｈｉｒｔｅｌｌａ）が挙げられ、Ｐｅｒｉｌｌａ ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ ｖａｒ．ｃｒｉｓｐａが好ましい。メンタ属に属する植物としては例えば、ベルガモットミント（Ｍｅｎｔｈａ ｃｉｔｒａｔａ）、ウォーターミント（Ｍｅｎｔｈａ ａｑｕａｔｉｃａ）が挙げられ、ベルガモットミントが好ましい。ラベンデュラ属に属する植物としては例えば、ラベンダー（Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）が挙げられる。トウヒ属に属する植物としては例えば、ベイトウヒ（Ｐｉｃｅａ ｓｉｔｃｈｅｎｓｉｓ）、ドイツトウヒ（Ｐｉｃｅａ ａｂｉｅｓ）が挙げられる。ナス属に属する植物としては例えばトマト（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ）が挙げられる。リンゴ属に属する植物としては例えば、リンゴ（Ｍａｌｕｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ）が挙げられる。ブドウ属に属する植物としては例えばヨーロッパブドウ（Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ）が挙げられる。メボウキ属に属する植物としては例えばバジリコ（Ｏｃｉｍｕｍ ｂａｓｉｌｉｃｕｍ）が挙げられる。
放線菌としては例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属、Ｋｉｔａｓａｔｏｓｐｏｒａ属、Ｓｔｒｅｐｔａｃｉｄｉｐｈｉｌｕｓ属、Ｐｓｅｕｄｏｎｏｃａｒｄｉａ属、Ａｃｔｉｎｏａｌｌｏｔｅｉｃｈｕｓ属、Ａｃｔｉｎｏｋｉｎｅｏｓｐｏｒａ属、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｏｓｐｏｒａ属、Ａｃｔｉｎｏｐｈｙｔｏｃｏｌａ属、Ａｃｔｉｎｏｓｙｎｎｅｍａ属、Ａｌｌｏａｃｔｉｎｏｓｙｎｎｅｍａ属、Ａｌｌｏｋｕｔｚｎｅｒｉａ属、Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ属、Ｃｒｏｓｓｉｅｌｌａ属、Ｇｏｏｄｆｅｌｌｏｗｉｅｌｌａ属、Ｈａｌｏｅｃｈｉｎｏｔｈｒｉｘ属、Ｋｉｂｄｅｌｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ属、Ｋｕｔｚｎｅｒｉａ属、Ｌａｂｅｄａｅａ属、Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒｉａ属、Ｌｅｎｔｚｅａ属、Ｌｏｎｇｉｍｙｃｅｌｉｕｍ属、Ｐｒａｕｓｅｒｅｌｌａ属、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ属、Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ属、Ｓａｃｃｈａｒｏｔｈｒｉｘ属、Ｓｃｉｓｃｉｏｎｅｌｌａ属、Ｓｔｒｅｐｔｏａｌｌｏｔｅｉｃｈｕｓ属、Ｔａｍａｒｉｃｉｈａｂｉｔａｎｓ属、Ｔｈｅｒｍｏｂｉｓｐｏｒａ属、Ｔｈｅｒｍｏｃｒｉｓｐｕｍ属、Ｔｈｅｒｍｏｔｕｎｉｃａ属、Ｕｍｅｚａｗａｅａ属、Ｙｕｈｕｓｈｉｅｌｌａ属等の微生物が挙げられ、好ましくはＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属微生物（例：Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｒｉｓｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐｅｕｃｅｔｉｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ、Ｓｔｅｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ ｖａｒ．ｌｉｍｏｎｅｕｓ）である。
リナロールシンターゼを発現する微生物は、例えば、上記モチーフを有するリナロールシンターゼ、上記生物由来のリナロールシンターゼ、又は上記モチーフを有する上記生物由来のリナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む異種発現単位を含む発現ベクターで微生物を形質転換することにより得ることができる。
遺伝子、プロモーター等の核酸配列、又はタンパク質等のアミノ酸配列について本明細書中で用いられる語句「由来」は、微生物により天然又はネイティブに合成される、あるいは天然又は野生型の微生物から単離され得るヌクレオチド配列又はアミノ酸配列を意味し得る。
リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチドとしては、例えば以下の（ａ１）〜（ｃ２０）からなる群より選ばれる１以上のポリヌクレオチドが挙げられる。本発明のリナロール組成物がＲ−リナロール組成物の場合、（ａ１）〜（ｃ６）、（ａ９）〜（ｃ９）、（ａ１４）〜（ｃ１４）、（ａ１６）〜（ｃ１６）、（ａ１８）〜（ｃ１９）からなる群より選ばれる１以上のポリヌクレオチドが好ましく、（ａ１）〜（ｃ１）、（ａ８）〜（ａ８）、（ａ１３）〜（ｃ１３）、（ａ１５）〜（ｃ１６）、（ａ１８）〜（ｃ１８）からなる群より選ばれる１以上のポリヌクレオチドがより好ましい。本発明のリナロール組成物がＳ−リナロール組成物の場合、（ａ７）〜（ｃ８）、（ａ１３）〜（ｃ１３）、（ａ１５）〜（ｃ１５）及び（ａ２０）〜（ｃ２０）からなる群より選ばれる１以上のポリヌクレオチドが好ましい。
（ａ１）（ｉ１）配列番号２で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１）配列番号３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１）前記（ｉ１）もしくは（ｉｉ１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１）前記（ｉ１）もしくは（ｉｉ１）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２）（ｉ２）配列番号６２で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２）配列番号６３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２）前記（ｉ２）もしくは（ｉｉ２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２）前記（ｉ２）もしくは（ｉｉ２）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ３）（ｉ３）配列番号６５で表される塩基配列もしくは（ｉｉ３）配列番号６６で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ３）前記（ｉ３）もしくは（ｉｉ３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ３）前記（ｉ３）もしくは（ｉｉ３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ４）（ｉ４）配列番号６８で表される塩基配列もしくは（ｉｉ４）配列番号６９で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ４）前記（ｉ１）もしくは（ｉｉ４）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ４）前記（ｉ４）もしくは（ｉｉ４）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ５）（ｉ５）配列番号７１で表される塩基配列もしくは（ｉｉ）配列番号７２で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ５）前記（ｉ５）もしくは（ｉｉ５）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ５）前記（ｉ５）もしくは（ｉｉ５）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ６）（ｉ６）配列番号７４で表される塩基配列もしくは（ｉｉ６）配列番号７５で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ６）前記（ｉ６）もしくは（ｉｉ６）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ６）前記（ｉ６）もしくは（ｉｉ６）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ７）（ｉ７）配列番号７９で表される塩基配列、（ｉｉ７）配列番号７９で表される塩基配列中の７９〜１７２５番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ２）配列番号８０で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ７）前記（ｉ７）、（ｉｉ７）もしくは（ｉｉｉ７）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ７）前記（ｉ７）、（ｉｉ７）もしくは（ｉｉｉ７）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ８）（ｉ８）配列番号８５（Ｍ１）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ８）配列番号９８（Ｍ１４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ８）前記（ｉ８）もしくは（ｉｉ８）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ８）前記（ｉ８）もしくは（ｉｉ８）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ９）（ｉ９）配列番号８６（Ｍ２）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ９）配列番号１００（Ｍ１６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ９）前記（ｉ９）もしくは（ｉｉ９）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ９）前記（ｉ９）もしくは（ｉｉ９）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１０）（ｉ１０）配列番号８７（Ｍ３）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１０）配列番号１０２（Ｍ１８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１０）前記（ｉ１０）もしくは（ｉｉ１０）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１０）前記（ｉ１０）もしくは（ｉｉ１０）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１１）（ｉ１１）配列番号８８（Ｍ４）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１１）配列番号１０４（Ｍ２０）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１１）前記（ｉ１１）もしくは（ｉｉ１１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１１）前記（ｉ１１）もしくは（ｉｉ１１）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１２）（ｉ１２）配列番号８９（Ｍ５）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１２）配列番号１０６（Ｍ２２）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１２）前記（ｉ１２）もしくは（ｉｉ１２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１２）前記（ｉ１２）もしくは（ｉｉ１２）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１３）（ｉ１３）配列番号９０（Ｍ６）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１３）配列番号１０８（Ｍ２４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１３）前記（ｉ１３）もしくは（ｉｉ１３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１３）前記（ｉ１３）もしくは（ｉｉ１３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１４）（ｉ１４）配列番号９１（Ｍ７）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１４）配列番号１１０（Ｍ２６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１４）前記（ｉ１４）もしくは（ｉｉ１４）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１４）前記（ｉ１４）もしくは（ｉｉ１４）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１５）（ｉ１５）配列番号９２（Ｍ８）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１５）配列番号１１２（Ｍ２８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１５）前記（ｉ１５）もしくは（ｉｉ１５）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１５）前記（ｉ１５）もしくは（ｉｉ１５）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１６）（ｉ１６）配列番号９３（Ｍ９）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１６）配列番号１１４（Ｍ３０）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１６）前記（ｉ１６）もしくは（ｉｉ１６）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１６）前記（ｉ１６）もしくは（ｉｉ１６）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１７）（ｉ１７）配列番号９４（Ｍ１０）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１７）配列番号１１６（Ｍ３２）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１７）前記（ｉ１７）もしくは（ｉｉ１７）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１７）前記（ｉ１７）もしくは（ｉｉ１７）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１８）（ｉ１８）配列番号９５（Ｍ１１）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１８）配列番号１１８（Ｍ３４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１８）前記（ｉ１８）もしくは（ｉｉ１８）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１８）前記（ｉ１８）もしくは（ｉｉ１８）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１９）（ｉ１９）配列番号９６（Ｍ１２）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１９）配列番号１２０（Ｍ３６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１９）前記（ｉ１９）もしくは（ｉｉ１９）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１９）前記（ｉ１９）もしくは（ｉｉ１９）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２０）（ｉ２０）配列番号９７（Ｍ１３）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ２０）配列番号１２２（Ｍ３８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２０）前記（ｉ２０）もしくは（ｉｉ２０）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；及び
（ｃ２０）前記（ｉ２０）もしくは（ｉｉ２０）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
配列番号２で表される塩基配列は、ストレプトマイセス・クラブリゲルス由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号２で表される塩基配列は、配列番号１で表されるアミノ酸配列をコードし、成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列のコーディング領域を含み得る。配列番号３で表される塩基配列は、配列番号２で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。なお、ストレプトマイセス・クラブリゲルスのリナロールシンターゼには、推定上の葉緑体移行シグナルは存在しない。
配列番号６２で表される塩基配列は、アラビドプシス・タリアナ（シロイヌナズナ）由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号６２で表される塩基配列は、配列番号６１で表されるアミノ酸配列をコードし、成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列のコーディング領域を含み得る。配列番号６３で表される塩基配列は、配列番号６２で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。なお、配列番号６１〜６３で表される各配列には、推定上の葉緑体移行シグナルに対応する配列部分は含まれていない。
配列番号６５で表される塩基配列は、ペリラ・フルテセンス・バー・クリスパ（シソ）由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号６５で表される塩基配列は、配列番号６４で表されるアミノ酸配列をコードし、成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列のコーディング領域を含み得る。配列番号６６で表される塩基配列は、配列番号６５で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。なお、配列番号６４〜６６で表される配列には、推定上の葉緑体移行シグナルに対応する配列部分は含まれていない。
配列番号６８で表される塩基配列は、ビティス・ビニフェラ（ヨーロッパブドウ）由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号６８で表される塩基配列は、配列番号６７で表されるアミノ酸配列をコードし、成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列のコーディング領域を含み得る。配列番号６９で表される塩基配列は、配列番号６８で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。なお、配列番号６７〜６９で表される配列には、推定上の葉緑体移行シグナルに対応する配列部分は含まれていない。
配列番号７１で表される塩基配列は、メンタ・シトラータ（ベルガモットミント）由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号７１で表される塩基配列は、配列番号７０で表されるアミノ酸配列をコードし、成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列のコーディング領域を含み得る。配列番号７２で表される塩基配列は、配列番号７１で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。なお、配列番号７０〜７２で表される配列には、推定上の葉緑体移行シグナルに対応する配列部分は含まれていない。
配列番号７４で表される塩基配列は、オシマム・バシリクム（バジリコ）由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号７４で表される塩基配列は、配列番号７３で表されるアミノ酸配列をコードし、成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列のコーディング領域を含み得る。配列番号７５で表される塩基配列は、配列番号７４で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。なお、配列番号７３〜７５で表される配列には、推定上の葉緑体移行シグナルに対応する配列部分は含まれていない。
配列番号７９で表される塩基配列は、サルナシ由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長の塩基配列である。配列番号７９で表される塩基配列は、配列番号７８で表されるアミノ酸配列をコードし、１〜７８番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列は、推定上の葉緑体移行シグナルをコードし、７９〜１７２５（１７２２）番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列は、成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号８０で表される塩基配列は、配列番号７９で表される塩基配列における７９〜１７２５（１７２２）番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列にあるコドンが改変されており、さらに５’末端にメチオニンコドンが付加されているヌクレオチド配列からなる。
配列番号８５（Ｍ１）で表される塩基配列は、シロイヌナズナ由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号８５（Ｍ１）で表される塩基配列は、配列番号９９（Ｍ１５）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号９８（Ｍ１４）で表される塩基配列は、配列番号８５（Ｍ１）で表される塩基配列における７０〜１６４４（１６４１）番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列にあるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
配列番号８６（Ｍ２）で表される塩基配列は、シロイヌナズナ由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号８６（Ｍ２）で表される塩基配列は、配列番号１０１（Ｍ１７）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１００（Ｍ１６）で表される塩基配列は、配列番号８６（Ｍ２）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
配列番号８７（Ｍ３）で表される塩基配列は、ウンシュウミカン由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号８７（Ｍ３）で表される塩基配列は、配列番号１０３（Ｍ１９）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１０２（Ｍ１８）で表される塩基配列は、配列番号８７（Ｍ３）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
配列番号８８（Ｍ４）で表される塩基配列は、ウンシュウミカン由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号８８（Ｍ４）で表される塩基配列は、配列番号１０５（Ｍ２１）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１０４（Ｍ２０）で表される塩基配列は、配列番号８８（Ｍ４）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
配列番号８９（Ｍ５）で表される塩基配列は、ウンシュウミカン由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号８９（Ｍ５）で表される塩基配列は、配列番号１０７（Ｍ２３）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１０６（Ｍ２２）で表される塩基配列は、配列番号８９（Ｍ５）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
配列番号９０（Ｍ６）で表される塩基配列は、リンゴ由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号９０（Ｍ６）で表される塩基配列は、配列番号１０９（Ｍ２５）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１０８（Ｍ２４）で表される塩基配列は、配列番号９０（Ｍ６）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
配列番号９１（Ｍ７）で表される塩基配列は、シソ由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号９１（Ｍ７）で表される塩基配列は、配列番号１１１（Ｍ２７）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１１０（Ｍ２６）で表される塩基配列は、配列番号９１（Ｍ７）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
配列番号９２（Ｍ８）で表される塩基配列は、ヨーロッパブドウ由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号９２（Ｍ８）で表される塩基配列は、配列番号１１３（Ｍ２９）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１１２（Ｍ２８）で表される塩基配列は、配列番号９２（Ｍ８）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
配列番号９３（Ｍ９）で表される塩基配列は、ヨーロッパブドウ由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号９３（Ｍ９）で表される塩基配列は、配列番号１１５（Ｍ３１）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１１４（Ｍ３０）で表される塩基配列は、配列番号９３（Ｍ９）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
配列番号９４（Ｍ１０）で表される塩基配列は、ラベンダー由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号９４（Ｍ１０）で表される塩基配列は、配列番号１１７（Ｍ３３）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１１６（Ｍ３２）で表される塩基配列は、配列番号９４（Ｍ１０）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
配列番号９５（Ｍ１１）で表される塩基配列は、ベルガモットミント由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号９５（Ｍ１１）で表される塩基配列は、配列番号１１９（Ｍ３５）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１１８（Ｍ３４）で表される塩基配列は、配列番号９５（Ｍ１１）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
配列番号９６（Ｍ１２）で表される塩基配列は、バジリコ由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号９６（Ｍ１２）で表される塩基配列は、配列番号１２１（Ｍ３７）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１２０（Ｍ３６）で表される塩基配列は、配列番号９６（Ｍ１２）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
配列番号９７（Ｍ１３）で表される塩基配列は、サンジソウ由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号９７（Ｍ１３）で表される塩基配列は、配列番号１２３（Ｍ３９）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１２２（Ｍ３８）で表される塩基配列は、配列番号９７（Ｍ１３）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
塩基配列との同一性％は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％以上であってもよい。
塩基配列の同一性％及び後述するようなアミノ酸配列の同一性％は、例えばＫａｒｌｉｎ及びＡｌｔｓｃｈｕｌによるアルゴリズムＢＬＡＳＴ（Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０，５８７３（１９９３））、ＰｅａｒｓｏｎによるＦＡＳＴＡ（ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ．，１８３，６３（１９９０））を用いて決定することができる。このアルゴリズムＢＬＡＳＴに基づいて、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮとよばれるプログラムが開発されているので（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ参照）、これらのプログラムをデフォルト設定で用いて、塩基配列及びアミノ酸配列の同一性％を計算してもよい。また、アミノ酸配列の相同性としては、例えば、Ｌｉｐｍａｎ−Ｐｅａｒｓｏｎ法を採用している株式会社ゼネティックスのソフトウェアＧＥＮＥＴＹＸ Ｖｅｒ７．０．９を使用し、ＯＲＦにコードされるポリペプチド部分全長を用いて、Ｕｎｉｔ Ｓｉｚｅ ｔｏ Ｃｏｍｐａｒｅ＝２の設定でＳｉｍｉｌａｒｉｔｙをｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ計算させた際の数値を用いてもよい。塩基配列及びアミノ酸配列の同一性％として、これらの計算で導き出される値のうち、最も低い値を採用してもよい。
「ストリンジェントな条件」とは、いわゆる特異的なハイブリッドが形成され、非特異的なハイブリッドが形成されない条件をいう。このような条件を明確に数値化することは困難であるが、一例を示せば、高い同一性を有する実質的に同一のポリヌクレオチド同士、例えば上述した同一性％を有するポリヌクレオチド同士がハイブリダイズし、それより低い相同性を示すポリヌクレオチド同士がハイブリダイズしない条件である。具体的には、このような条件としては、６×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、続いて、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、５０〜６５℃での１又は２回以上の洗浄が挙げられる。ハイブリッドが形成されるＤＮＡの同一性は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％以上であってもよい。
上記（ａ１）〜（ｃ２０）のポリヌクレオチドは、ＤＮＡであっても、チミン塩基をウラシル塩基に置換することにより対応するＤＮＡから得られるＲＮＡであってもよいが、ＤＮＡであることが好ましい。
リナロールシンターゼは、以下の（Ａ１）〜（Ｃ２８）からなる群より選ばれる１以上のタンパク質であることが好ましい。本発明のリナロール組成物がＲ−リナロール組成物の場合、（Ａ１）〜（Ｃ６）、（Ａ９）〜（Ｃ９）、（Ａ１４）〜（Ｃ１４）、（Ａ１６）〜（Ｃ１６）、（Ａ１８）〜（Ｃ１９）、（Ａ２１）〜（Ｃ２１）、（Ａ２３）〜（Ｃ２４）からなる群より選ばれる１以上のタンパク質が好ましく、（Ａ１）〜（Ｃ６）、（Ａ９）〜（Ｃ９）、（Ａ１４）〜（Ｃ１４）、（Ａ１６）〜（Ｃ１６）、（Ａ１８）〜（Ｃ１９）からなる群より選ばれる１以上のポリヌクレオチドがより好ましい。本発明のリナロール組成物がＳ−リナロール組成物の場合、（Ａ７）〜（Ｃ７）、（Ａ８）〜（Ｃ８）、（Ａ１３）〜（Ｃ１３）、（Ａ１５）〜（Ｃ１５）、（Ａ２０）〜（Ｃ２０）及び（Ａ２５）〜（Ｃ２８）からなる群より選ばれる１以上のポリヌクレオチドが好ましく、（Ａ７）〜（Ｃ７）、（Ａ８）〜（Ｃ８）、（Ａ１３）〜（Ｃ１３）、（Ａ１５）〜（Ｃ１５）及び（Ａ２０）〜（Ｃ２０）からなる群より選ばれる１以上のポリヌクレオチドがより好ましい。
（Ａ１）（ｉ１’）配列番号１で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１）前記（ｉ１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１）前記（ｉ１’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２）（ｉ２’）配列番号６１で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２）前記（ｉ２’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２）前記（ｉ２’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ３）（ｉ３’）配列番号６４で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ３）前記（ｉ３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ３）前記（ｉ３’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ４）（ｉ４’）配列番号６７で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ４）前記（ｉ４’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ４）前記（ｉ４’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ５）（ｉ５’）配列番号７０で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ５）前記（ｉ５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ５）前記（ｉ５’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ６）（ｉ６’）配列番号７３で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ６）前記（ｉ６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ６）前記（ｉ６’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ７）（ｉ７’）配列番号７８で表される全長アミノ酸配列、もしくは（ｉｉ７’）配列番号７８で表されるアミノ酸配列中の２７〜５７４番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ７）前記（ｉ７’）もしくは（ｉｉ７’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ７）前記（ｉ７’）もしくは（ｉｉ７’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ８）（ｉ８’）配列番号９９（Ｍ１５）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ８）前記（ｉ８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ８）前記（ｉ８’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ９）（ｉ９’）配列番号１０１（Ｍ１７）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ９）前記（ｉ９’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；又は
（Ｃ９）前記（ｉ９’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１０）（ｉ１０’）配列番号１０３（Ｍ１９）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１０）前記（ｉ１０’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；又は
（Ｃ１０）前記（ｉ１０’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１１）（ｉ１１’）配列番号１０５（Ｍ２１）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１１）前記（ｉ１１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；又は
（Ｃ１１）前記（ｉ１１’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１２）（ｉ１２’）配列番号１０７（Ｍ２３）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１２）前記（ｉ１２’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；又は
（Ｃ１２）前記（ｉ１２’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１３）（ｉ１３’）配列番号１０９（Ｍ２５）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１３）前記（ｉ１３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；又は
（Ｃ１３）前記（ｉ１３’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１４）（ｉ１４’）配列番号１１１（Ｍ２７）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１４）前記（ｉ１４’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；又は
（Ｃ１４）前記（ｉ１４’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１５）（ｉ１５’）配列番号１１３（Ｍ２９）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１５）前記（ｉ１５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；又は
（Ｃ１５）前記（ｉ１５’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質。
（Ａ１６）（ｉ１６’）配列番号１１５（Ｍ３１）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１６）前記（ｉ１６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；又は
（Ｃ１６）前記（ｉ１６’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１７）（ｉ１７’）配列番号１１７（Ｍ３３）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１７）前記（ｉ１７’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；又は
（Ｃ１７）前記（ｉ１７’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１８）（ｉ１８’）配列番号１１９（Ｍ３５）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１８）前記（ｉ１８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；又は
（Ｃ１８）前記（ｉ１８’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１９）（ｉ１９’）配列番号１２１（Ｍ３７）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１９）前記（ｉ１９’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；又は
（Ｃ１９）前記（ｉ１９’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２０）（ｉ２０’）配列番号１２３（Ｍ３９）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２０）前記（ｉ２０’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２０）前記（ｉ２０’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２１）（ｉ２１’）配列番号１５７で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２１）前記（ｉ２１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２１）前記（ｉ２１’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２２）（ｉ２２’）配列番号１５８で表される全長アミノ酸配列列を含むタンパク質；
（Ｂ２２）前記（ｉ２２’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；又は
（Ｃ２２）前記（ｉ２２’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２３）（ｉ２３’）配列番号１５９で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２３）前記（ｉ２３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；又は
（Ｃ２３）前記（ｉ２３’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２４）（ｉ２４’）配列番号１６０で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２４）前記（ｉ２４’）ものアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２４）前記（ｉ２４’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２５）（ｉ２５’）配列番号１６１で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２５）前記（ｉ２５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２５）前記（ｉ２５’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２６）（ｉ２６’）配列番号１６２で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２６）前記（ｉ２６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２６）前記（ｉ２６’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２７）（ｉ２７’）配列番号１６３で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２７）前記（ｉ２７’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２７）前記（ｉ２７’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２８）（ｉ２８’）配列番号１６４で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２８）前記（ｉ２８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；及び
（Ｃ２８）前記（ｉ２８’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質。
配列番号１、６１、６４、６７、７０及び７３で表される全長アミノ酸配列は、それぞれ、ストレプトマイセス・クラブリゲラス（放線菌）、アラビドプシス・タリアナ（シロイヌナズナ）、ペリラ・フルテセンス・バー・クリスパ（シソ）、ビティス・ビニフェラ（ヨーロッパブドウ）、メンタ・シトラータ（ベルガモットミント）及びオシマム・バシリクム（バジリコ）由来の成熟リナロールシンターゼを含み得る。
配列番号７８で表されるアミノ酸配列中の１〜２６番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は、推定上の葉緑体移行シグナルを含み得る。２７〜５７４番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は、成熟リナロールシンターゼを含み得る。微生物で成熟リナロールシンターゼの発現を実施する際には、通常、Ｎ末端にメチオニン残基を付与した配列を用いる。
配列番号９９および１０１（Ｍ１５、Ｍ１７）で表される全長アミノ酸配列はそれぞれ、アラビドプシス・タリアナ（シロイヌナズナ）由来の成熟リナロールシンターゼ（配列番号Ｍ１５はテルペンシンターゼ１４、配列番号Ｍ１７はテルペンシンターゼ１０）を含み得る。配列番号１０３、１０５及び１０７（Ｍ１９、Ｍ２１及びＭ２３）で表されるアミノ酸配列はそれぞれ、シトラス・ウンシュウ（ウンシュウミカン）由来の成熟リナロールシンターゼを含み得る。配列番号１０９（Ｍ２５）で表されるアミノ酸配列は、マルス・ドメスティカ（リンゴ）由来の成熟リナロールシンターゼを含み得る。配列番号１１１（Ｍ２７）で表されるアミノ酸配列は、ペリラ・フルテセンス・バー・クリスパ（シソ）由来の成熟リナロールシンターゼを含み得る。配列番号１１３及び１１５（Ｍ２９及びＭ３１）で表されるアミノ酸配列はそれぞれ、ビティス・ビニフェラ（ヨーロッパブドウ）由来の成熟リナロールシンターゼ（それぞれ（３Ｓ）−リナロール／（Ｅ）−ネロリドールシンターゼ、（３Ｒ）−リナロールシンターゼ）の成熟アミノ酸配列を含み得る。配列番号１１７（Ｍ３３）で表されるアミノ酸配列は、ラベンデュラ・アングスティフォリア（ラベンダー）の成熟リナロールシンターゼを含み得る。配列番号１１９（Ｍ３５）で表されるアミノ酸配列は、メンタ・シトラータ（ベルガモットミント）の成熟リナロールシンターゼを含み得る。配列番号１２１（Ｍ３７）で表されるアミノ酸配列は、オシマム・バシリカム（バジリコ）の成熟リナロールシンターゼ（Ｒ−リナロールシンターゼ）を含み得る。配列番号１２３（Ｍ３９）で表されるアミノ酸配列は、クラルキア・ブリュワリ（サンジソウ）の成熟リナロールシンターゼ（Ｓ−リナロールシンターゼ）を含む。配列番号１５７のアミノ酸配列は、ソラナム・リコペルシクム（トマト）の成熟リナロールシンターゼ（Ｒ−リナロールシンターゼ）を含み得る。配列番号１５８のアミノ酸配列は、バクホウシア・シトリオドーラ（レモンマートル）の成熟リナロールシンターゼを含み得る。配列番号１５９及び１６０のアミノ酸配列は、アルテミシア・アヌア（クソニンジン）の成熟リナロールシンターゼを含み得る。配列番号１６１のアミノ酸配列は、アクチニジア・アルグータ（サルナシ）の成熟リナロールシンターゼ（Ｓ−リナロールシンターゼ）を含み得る。配列番号１６２のアミノ酸配列は、アクチニジア・ポリガマ（マタタビ）の成熟リナロールシンターゼ（Ｓ−リナロールシンターゼ）を含む。配列番号１６３のアミノ酸配列は、ペリラ・フルテセンス・バー・ヒルテラ（シソ）の成熟アミノ酸シンターゼ（Ｓ−リナロールシンターゼ）を含み得る。配列番号１６４のアミノ酸配列は、ペリラ・セトエンシス（シソ）の成熟アミノ酸シンターゼ（Ｓ−リナロールシンターゼ）を含み得る。
配列番号９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３（Ｍ１５、Ｍ１７、Ｍ１９、Ｍ２１、Ｍ２３、Ｍ２５、Ｍ２７、Ｍ２９、Ｍ３１、Ｍ３３、Ｍ３５、Ｍ３７、Ｍ３９）及び１５７〜１６４のアミノ酸配列は、それぞれ式ＤＤＸ1［ＦＹ］［ＤＹ］Ｘ2Ｘ3Ｇで表されるモチーフを有する。
アミノ酸配列との同一性％は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％以上であってもよい。
アミノ酸残基の変異としては、例えば、アミノ酸残基の欠失、置換、付加及び挿入が挙げられる。１個もしくは数個のアミノ酸残基の変異は、アミノ酸配列中の１つの領域に導入されてもよいが、複数の異なる領域に導入されてもよい。用語「１個もしくは数個」は、タンパク質の立体構造や活性を大きく損なわない範囲を示すものである。タンパク質の場合における用語「１もしくは数個」が示す数は、例えば、１〜１００個、好ましくは１〜８０個、より好ましくは１〜５０個、１〜３０個、１〜２０個、１〜１０個又は１〜５個である。上記のタンパク質は、Ｎ末端に開始メチオニン残基を有していてもよい。上記のタンパク質は、Ｃ末端にヒスチジンタグ等の精製用タグを有していてもよい。
（Ｂ１）及び（Ｃ１）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ１）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ２）及び（Ｃ２）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ２）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ３）及び（Ｃ３）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ３）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ４）及び（Ｃ４）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ４）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ５）及び（Ｃ５）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ５）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ６）及び（Ｃ６）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ６）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。
（Ｂ２）及び（Ｃ２）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ２’）もしくは（ｉｉ２’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。
（Ｂ７）及び（Ｃ７）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ７）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ８）及び（Ｃ８）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ８）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ９）及び（Ｃ９）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ９）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ１０）及び（Ｃ１０）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ１０）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ１１）及び（Ｃ１１）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ１１）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ１２）及び（Ｃ１２）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ１２）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ１３）及び（Ｃ１３）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ１３）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ１４）及び（Ｃ１４）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ１４）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ１５）及び（Ｃ１５）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ１５）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ１６）及び（Ｃ１６）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ１６）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ１７）及び（Ｃ１７）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ１７）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ１８）及び（Ｃ１８）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ１８）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ１９）及び（Ｃ１９）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ１９）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ２０）及び（Ｃ２０）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ２０）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ２１）及び（Ｃ２１）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ２１）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ２２）及び（Ｂ２２）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ２２）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ２３）及び（Ｃ２３）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ２３）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ２４）及び（Ｃ２４）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ２４）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ２５）及び（Ｃ２５）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ２５）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ２６）及び（Ｃ２６）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（Ａ２６）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。
上記タンパク質は、目的活性を保持し得る限り、触媒ドメイン中の部位、及び触媒ドメイン以外の部位に変異が導入されていてもよい。目的活性を保持し得る、タンパク質中の変異が導入されてもよいアミノ酸残基の位置は、当業者に自明である。具体的には、当業者は、１）同種の活性を有する複数のタンパク質のアミノ酸配列（例、配列番号１又は４により表されるアミノ酸配列、及び他のリナロールシンターゼのアミノ酸配列）を比較し、２）相対的に保存されている領域、及び相対的に保存されていない領域を明らかにし、次いで、３）相対的に保存されている領域及び相対的に保存されていない領域から、それぞれ、機能に重要な役割を果たし得る領域及び機能に重要な役割を果たし得ない領域を予測できるので、構造・機能の相関性を認識できる。したがって、当業者は、リナロールシンターゼのアミノ酸配列において変異が導入されてもよいアミノ酸残基の位置を特定できる。
アミノ酸残基が置換により変異される場合、アミノ酸残基の置換は、保存的置換であってもよい。本明細書中で用いられる場合、用語「保存的置換」とは、所定のアミノ酸残基を、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換することをいう。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該分野で周知である。例えば、このようなファミリーとしては、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電性極性側鎖を有するアミノ酸（例、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β位分岐側鎖を有するアミノ酸（例、スレオニン、バリン、イソロイシン）、芳香族側鎖を有するアミノ酸（例、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）、ヒドロキシル基含有側鎖（例、アルコール、フェノキシ基含有側鎖）を有するアミノ酸（例、セリン、スレオニン、チロシン）、及び硫黄含有側鎖を有するアミノ酸（例、システイン、メチオニン）が挙げられる。好ましくは、アミノ酸の保存的置換は、アスパラギン酸とグルタミン酸との間での置換、アルギニンとリジンとヒスチジンとの間での置換、トリプトファンとフェニルアラニンとの間での置換、フェニルアラニンとバリンとの間での置換、ロイシンとイソロイシンとアラニンとの間での置換、及びグリシンとアラニンとの間での置換であってもよい。
リナロールシンターゼを発現する微生物は、ゲラニル二リン酸シンターゼも発現してもよく、導入されるリナロールシンターゼによっては発現することが好ましい。ジメチルアリル二リン酸（ＤＭＡＰＰ、ｄｉｍｅｔｈｙｌａｌｌｙｌ ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ）は、ペプチドグリカンや電子受容体（メナキノン等）の前駆体であり、微生物の増殖に必須であることが知られている（Ｆｕｊｉｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９８６；９９：１１３７−１１４６）。ゲラニル二リン酸シンターゼ活性とは、ＩＰＰ及びＤＭＡＰＰからゲラニル二リン酸を生成する活性をいう。ゲラニル二リン酸シンターゼとしては、例えば、エシェリヒア・コリ由来のゲラニル二リン酸シンターゼが挙げられる。もしくは、バチルス・ステアロサーモフィラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）（例えば、特開２０００−２４５４８２号公報）、パントエア・アナナティス（Ｐａｎｔｏｅａ ａｎａｎａｔｉｓ）（例えば、国際公開第２００７／０２９５７７Ａ１号）由来、放線菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）（例えば、国際公開第２００７／０２９５７７Ａ１号）、ゲオバチルス・ステアロサーモフィルス（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）等の微生物由来のゲラニル二リン酸シンターゼが挙げられる。また、アメリカオオモミ（Ａｂｉｅｓ ｇｒａｎｄｉｓ）、ペパーミント（Ｍｅｎｔｈａ × ｐｉｐｅｒｉｔａ）、オウシュウトウヒ（Ｐｉｃｅａ ａｂｉｅｓ）、ニチニチソウ（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ ｒｏｓｅｕｓ）、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）、キンギョソウ（Ａｎｔｉｒｒｈｉｎｕｍ ｍａｊｕｓ）由来、ホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓ ｌｕｐｕｌｕｓ）等の植物由来のゲラニル二リン酸シンターゼが挙げられる。
ゲラニル二リン酸シンターゼをコードするポリヌクレオチドは、以下の〔ｐ〕、〔ｑ〕及び〔ｒ〕からなる群より選ばれる１以上のポリヌクレオチドであることが好ましい。
〔ｐ〕〔ｘｉ〕配列番号７で表される塩基配列、もしくは〔ｘｉｉ〕配列番号８で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
〔ｑ〕前記〔ｘｉ〕、もしくは〔ｘｉｉ〕の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつゲラニル二リン酸シンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；又は
〔ｒ〕前記〔ｘｉ〕、もしくは〔ｘｉｉ〕の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつゲラニル二リン酸シンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
配列番号７で表される塩基配列は、エシェリヒア・コリ由来ファルネシル二リン酸／ゲラニル二リン酸シンターゼ遺伝子の塩基配列である。配列番号７で表される塩基配列は、配列番号７６で表されるアミノ酸配列をコードし、成熟ファルネシル二リン酸／ゲラニル二リン酸シンターゼ遺伝子のコーディング領域を含み得る。配列番号８で表される塩基配列は、配列番号７で表される塩基配列にあるコドンが改変されており、配列番号７３で表されるタンパク質の８０番目のセリンをコードするコドンがフェニルアラニンをコードするコドンに変異している（Ｓ８０Ｆ変異）。すなわち、配列番号８で表される塩基配列は、配列番号７７で表されるアミノ酸配列をコードし、配列番号７７で示されるタンパク質は、配列番号７６で表されるタンパク質の８０番目のセリン残基がフェニルアラニン残基に置換されている（Ｓ８０Ｆ）変異タンパク質である。このＳ８０Ｆ変異を有するファルネシル二リン酸シンターゼは、ゲラニル二リン酸シンターゼとしての機能が向上していることが知られている（Ｒｅｉｌｉｎｇ ＫＫ ｅｔ ａｌ．（２００４） Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ．８７（２） ２００−２１２）。ゲラニル二リン酸シンターゼをコードするポリヌクレオチドは上記〔ｑ〕または〔ｒ〕でもよいことから、上記のＳ８０Ｆ変異に限らず、同様の効果が得られる変異を有していてもよく、変異はＳ８０Ｆ変異に限定されるものではない。また、ファルネシル二リン酸シンターゼ遺伝子の由来はエシェリヒア・コリに限定されるものではなく、例えばバチルス・ステアロサーモフィルス由来のファルネシル二リン酸シンターゼにおいて、菌体内のゲラニル二リン酸の濃度を高める変異が明らかにされている（Ｎａｒｉｔａ Ｋ．，ｅｔ ａｌ．（１９９９） Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １２６（３） ５６６−５７１．）。また、ファルネシル二リン酸シンターゼ遺伝子への変異導入によって得られるゲラニル二リン酸シンターゼに限らず、本来ゲラニル二リン酸シンターゼとして機能する遺伝子を用いてもよい。例えば、ニチニチソウ由来ゲラニル二リン酸シンターゼ遺伝子（Ｒａｉ Ａ．，ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｍｏｌ Ｐｌａｎｔ．６（５）１５３１−４９）、シロイヌナズナ由来ゲラニル二リン酸シンターゼ遺伝子（Ｃａｍａｒａ Ｂ，．（２０００）Ｐｌａｎｔ Ｊ．２４（２），２４１−２５２）、放線菌由来ゲラニル二リン酸シンターゼ遺伝子（国際公開第２００７／０２９５７７Ａ１号）等を用いてもよい。ファルネシル二リン酸シンターゼ活性とは、ゲラニル二リン酸（ＧＰＰ）、及びＩＰＰからファルネシル二リン酸を生成する活性をいう。塩基配列の同一性、ストリンジェントな条件、ポリヌクレオチドの定義は、上記（ａ１）〜（ｃ２０）のポリヌクレオチドにて説明したのと同様である。
ゲラニル二リン酸シンターゼは、以下の〔Ｐ〕〜〔Ｒ〕からなる群より選ばれる１以上のタンパク質であることが好ましい。
〔Ｐ〕配列番号７６又は７７で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
〔Ｑ〕前記アミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつゲラニル二リン酸シンターゼ活性を有するタンパク質；及び
〔Ｒ〕前記アミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつゲラニル二リン酸シンターゼ活性を有するタンパク質。
配列番号７６で表されるアミノ酸配列は、成熟ファルネシル二リン酸／ゲラニル二リン酸シンターゼを含み得る。配列番号７７で表されるアミノ酸配列は、変異型成熟ファルネシル二リン酸／ゲラニル二リン酸シンターゼを含み得る。〔Ｑ〕及び〔Ｒ〕のタンパク質は、同一条件で測定された場合、配列番号７６又は７７で表されるアミノ酸配列を含むタンパク質のゲラニル二リン酸シンターゼ活性の、好ましくはゲラニル二リン酸シンターゼ活性及びファルネシル二リン酸シンターゼ活性の、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上または９５％以上の活性を有することが好ましい。欠失、置換、付加もしくは挿入の定義、アミノ酸の同一性等については、（Ａ１）〜（Ｃ２８）のタンパク質にて説明したのと同様である。
本発明で用いられる微生物が含み得る発現単位では、所望のタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及びプロモーターの一方は、宿主細胞に固有のものではない。したがって、発現単位は、異種発現単位であり得る。好ましくは、リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド、及びプロモーターの双方が、宿主細胞に固有のものではない。プロモーターは、所望のタンパク質をコードするポリヌクレオチドに対して同種であっても異種であってもよい。発現単位はさらに、ターミネーター、リボソーム結合部位、及び薬物耐性遺伝子等のさらなるエレメントを含んでいてもよい。発現単位はＤＮＡであってもＲＮＡであってもよいが、好ましくはＤＮＡである。異種発現単位は、リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド以外のタンパク質をコードする遺伝子を含んでもよい。斯かるタンパク質としては、例えば、リナロールシンターゼ、メバロン酸経路に関与する１以上の酵素、イソプレンシンターゼ、及びメチルエリスリトールリン酸経路に関与する１以上の酵素が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明で用いられる微生物は、例えば、以下の発現ベクターで形質転換することにより得ることができる：リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む発現単位を含む発現ベクター；リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド、ゲラニル二リン酸シンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む発現単位を含む発現ベクター；リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む第１の発現単位と、ゲラニル二リン酸シンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む第２の発現単位とを含む発現ベクター；及び、リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む第１の発現ベクターと、ゲラニル二リン酸シンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む発現単位を含む第２の発現ベクターの組み合わせ。発現ベクターは、組込み型（ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ）ベクターであっても、非組込み型ベクターであってもよい。発現ベクターにおいて、前記リナロールシンターゼをコードする遺伝子は、構成型プロモーター、又は誘導型プロモーターの制御下に配置され得る。構成型プロモーターとしては、例えば、ｔａｃプロモーター、ｌａｃプロモーター、ｔｒｐプロモーター、ｔｒｃプロモーター、Ｔ７プロモーター、Ｔ５プロモーター、Ｔ３プロモーター、及びＳＰ６プロモーターが挙げられる。誘導型プロモーターとしては、例えば、後述の増殖促進剤逆依存プロモーターが挙げられる。用語「作動可能に連結された」とは、調節領域のヌクレオチド配列が核酸分子又は遺伝子（すなわち、ポリヌクレオチド）のヌクレオチド配列にポリヌクレオチドの発現（例、増強された、向上された、構成的な、基礎的な、抗転写終結の、弱毒化された、調節解除された、減少した、又は抑制された、発現）が可能な形式で連結しており、これによりヌクレオチド配列によりコードされるポリヌクレオチドの発現産物が生産されることを意味する。
リナロールシンターゼを発現する微生物は、効率的なリナロールの製造のためのＩＰＰ及びＤＭＡＰＰの供給の観点から、ジメチルアリル二リン酸供給経路によるジメチル二リン酸の合成能を有することが好ましい。ジメチルアリル二リン酸供給経路としては、例えば、メチルエリスリトールリン酸（ＭＥＰ）経路及びメバロン酸（ＭＶＡ）経路が挙げられる。
メチルエリスリトールリン酸（ＭＥＰ）経路とは、非メバロン酸経路とも呼ばれ、リナロールの前駆体であるイソペンテニル二リン酸（ＩＰＰ）とジメチルアリル二リン酸（ＤＭＡＰＰ）の生合成経路である。メチルエリスリトールリン酸（ＭＥＰ）経路に関与する酵素としては、例えば、１−デオキシ−Ｄ−キシルロース−５−リン酸シンターゼ（ＥＣ：２．２．１．７、例１、Ｄｘｓ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿４１４９５４；例２、ＡＴ３Ｇ２１５００、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿５６６６８６；例３、ＡＴ４Ｇ１５５６０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿１９３２９１；例４、ＡＴ５Ｇ１１３８０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿００１０７８５７０）、１−デオキシ−Ｄ−キシルロース−５−リン酸リダクトイソメラーゼ（ＥＣ：１．１．１．２６７；例１、Ｄｘｒ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿４１４７１５；例２、ＡＴ５Ｇ６２７９０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿００１１９０６００）、４−ジホスホシチジル−２−Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトールシンターゼ（ＥＣ：２．７．７．６０；例１、ＩｓｐＤ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿４１７２２７；例２、ＡＴ２Ｇ０２５００、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿５６５２８６）、４−ジホスホシチジル−２−Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトールキナーゼ（ＥＣ：２．７．１．１４８；例１、ＩｓｐＥ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿４１５７２６；例２、ＡＴ２Ｇ２６９３０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿１８０２６１）、２−Ｃ−メチル―Ｄ−エリスリトール−２，４−シクロ二リン酸シンターゼ（ＥＣ：４．６．１．１２；例１、ＩｓｐＦ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿４１７２２６；例２、ＡＴ１Ｇ６３９７０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿５６４８１９）、１−ヒドロキシ−２−メチル−２−（Ｅ）−ブテニル−４−二リン酸シンターゼ（ＥＣ：１．１７．７．１；例１、ＩｓｐＧ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿４１７０１０；例２、ＡＴ５Ｇ６０６００、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿００１１１９４６７）、４−ヒドロキシ−３−メチル−２−ブテニル二リン酸レダクターゼ（ＥＣ：１．１７．１．２；例１、ＩｓｐＨ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿４１４５７０；例２、ＡＴ４Ｇ３４３５０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿５６７９６５）が挙げられる。
メバロン酸（ＭＶＡ）経路に関与する酵素としては、例えば、メバロン酸キナーゼ（ＥＣ：２．７．１．３６；例１、Ｅｒｇ１２ｐ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿０１３９３５；例２、ＡＴ５Ｇ２７４５０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿００１１９０４１１）、ホスホメバロン酸キナーゼ（ＥＣ：２．７．４．２；例１、Ｅｒｇ８ｐ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿０１３９４７；例２、ＡＴ１Ｇ３１９１０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿００１１８５１２４）、ジホスホメバロン酸デカルボキシラーゼ（ＥＣ：４．１．１．３３；例１、Ｍｖｄ１ｐ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿０１４４４１；例２、ＡＴ２Ｇ３８７００、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿１８１４０４；例３、ＡＴ３Ｇ５４２５０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿５６６９９５）、アセチル−ＣｏＡ−Ｃ−アセチルトランスフェラーゼ（ＥＣ：２．３．１．９；例１、Ｅｒｇ１０ｐ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿０１５２９７；例２、ＡＴ５Ｇ４７７２０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿００１０３２０２８；例３、ＡＴ５Ｇ４８２３０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿５６８６９４）、ヒドロキシメチルグルタリル−ＣｏＡシンターゼ（ＥＣ：２．３．３．１０；例１、Ｅｒｇ１３ｐ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿０１３５８０；例２、ＡＴ４Ｇ１１８２０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿１９２９１９；例３、ＭｖａＳ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＡＡＧ０２４３８）、ヒドロキシメチルグルタリル−ＣｏＡリダクターゼ（ＥＣ：１．１．１．３４；例１、Ｈｍｇ２ｐ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿０１３５５５；例２、Ｈｍｇ１ｐ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿０１３６３６；例３、ＡＴ１Ｇ７６４９０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿１７７７７５；例４、ＡＴ２Ｇ１７３７０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿１７９３２９、ＥＣ：１．１．１．８８、例、ＭｖａＡ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ Ｐ１３７０２）、アセチル−ＣｏＡ−Ｃ−アセチルトランスフェラーゼ／ヒドロキシメチルグルタリル−ＣｏＡリダクターゼ（ＥＣ：２．３．１．９／１．１．１．３４、例、ＭｖａＥ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＡＡＧ０２４３９）が挙げられる。
リナロールの材料であるＩＰＰ及びＤＭＡＰＰは、上記のとおり通常、微生物が固有又はネイティブに有するメチルエリスリトールリン酸経路又はメバロン酸経路のいずれかにより生合成される。したがって、効率的なＲ−リナロール又はＳ−リナロールの製造のためのＩＰＰ及びＤＭＡＰＰの供給の観点から、本発明で用いられる微生物は、メチルエリスリトールリン酸経路及び／又はメバロン酸経路が強化されていてもよい。
このような強化のため、本発明で用いられる微生物は、リナロールシンターゼに加えて、メバロン酸経路又はメチルエリスリトールリン酸経路の酵素、例えばメバロン酸キナーゼをさらに発現していてもよい。したがって、リナロールシンターゼを発現する微生物は、メバロン酸経路又はメチルエリスリトールリン酸経路に関与する１以上の酵素が導入されていてもよい。言い換えれば、メバロン酸経路又はメチルエリスリトールリン酸経路に関与する１以上の酵素をコードする遺伝子及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む発現単位を含んでいてもよい。メバロン酸キナーゼ遺伝子としては、例えば、メタノサルシナ・マゼイ（Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ ｍａｚｅｉ）等のメタノサルシナ（Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ）属、メタノセラ・パルディコラ（Ｍｅｔｈａｎｏｃｅｌｌａ ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）等のメタノセラ（Ｍｅｔｈａｎｏｃｅｌｌａ）属、コリネバクテリウム・ヴァリアビル（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖａｒｉａｂｉｌｅ）等のコリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、メタノセタ・コンキリ（Ｍｅｔｈａｎｏｓａｅｔａ ｃｏｎｃｉｌｉｉ）等のメタノセタ（Ｍｅｔｈａｎｏｓａｅｔａ）属、及びニトロソプミラス・マリチマス（Ｎｉｔｒｏｓｏｐｕｍｉｌｕｓ ｍａｒｉｔｉｍｕｓ）等のニトロソプミラス（Ｎｉｔｒｏｓｏｐｕｍｉｌｕｓ）属に属する微生物の遺伝子が挙げられる。
リナロールシンターゼを発現する微生物は、メバロン酸経路又はメチルエリスリトールリン酸経路に関与する１以上の酵素発現ベクターにより形質転換されていてもよい。発現ベクターは、組込み型（ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ）ベクターであっても、非組込み型ベクターであってもよい。発現ベクターにおいて、メバロン酸キナーゼをコードする遺伝子は、構成型プロモーター、又は誘導型プロモーター（例、増殖促進剤逆依存プロモーター）の制御下に配置され得る。具体的には、メバロン酸キナーゼをコードする遺伝子は、構成型プロモーターの制御下に配置され得る。構成型プロモーターとしては、例えば、ｔａｃプロモーター、ｌａｃプロモーター、ｔｒｐプロモーター、ｔｒｃプロモーター、Ｔ７プロモーター、Ｔ５プロモーター、Ｔ３プロモーター、及びＳＰ６プロモーターが挙げられる。誘導型プロモーターとしては、例えば、後述の増殖促進剤逆依存プロモーターが挙げられる。
発現ベクターはさらに、メバロン酸経路及び／又はメチルエリスリトールリン酸経路に関与する複数の酵素（例、１種、２種、３種又は４種以上）を一緒又は個別に発現するものであってもよく、例えば、ポリシストロニックｍＲＮＡの発現ベクターであってもよい。
メバロン酸経路及び／又はメチルエリスリトールリン酸経路に関与する１以上の酵素の由来は、宿主に対して同種であってもよいし、異種であってもよい。メバロン酸経路及び／又はメチルエリスリトールリン酸経路に関与する酵素の由来が宿主に対して異種である場合、例えば、宿主が上述したような細菌（例、大腸菌）であり、かつ、メバロン酸経路に関与する酵素が真菌（例、サッカロミセス・セレビシエ）に由来するものであってもよい。また、宿主が、メチルエリスリトールリン酸経路に関与する酵素を固有に産生するものである場合、宿主に導入される発現ベクターは、メバロン酸経路に関与する酵素を発現するものであってもよい。
発現ベクターにおいて、メバロン酸（ＭＶＡ）経路及び／又はメチルエリスリトールリン酸（ＭＥＰ）経路に関与する１以上の酵素をコードする遺伝子は、増殖促進剤逆依存プロモーターの制御下に配置されてもよい。
また、メチルエリスリトールリン酸経路及び／又はメバロン酸経路強化のため、イソペンテニル二リン酸（ＩＰＰ）からジメチルアリル二リン酸（ＤＭＡＰＰ）への変換能を有するイソペンテニル二リン酸デルタイソメラーゼが、微生物に導入されてもよい。
イソペンテニル二リン酸デルタイソメラーゼ（ＥＣ:５．３．３．２）としては、例えば、Ｉｄｉ１ｐ（ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿０１５２０８）、ＡＴ３Ｇ０２７８０（ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿１８６９２７）、ＡＴ５Ｇ１６４４０（ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿１９７１４８）、及びＩｄｉ（ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＩＤ ＮＰ＿４１７３６５）が挙げられる。発現ベクターにおいて、イソペンテニル二リン酸デルタイソメラーゼをコードする遺伝子は、増殖促進剤逆依存プロモーターの制御下に配置されてもよい。
発現ベクターによる宿主の形質転換は、１以上の公知の方法を用いて行うことができる。このような方法としては、例えば、カルシウム処理された菌体を用いるコンピテント細胞法や、エレクトロポレーション法等が挙げられる。また、プラスミドベクター以外にもファージベクターを用いて、菌体内に感染させ導入する方法によってもよい。
リナロールシンターゼ（例えば、アラビドプシス属、シソ属、ブドウ属、メンタ属、メボウキ属、ラベンデュラ属、トウヒ属、ナス属、リンゴ属、バクホウシア属、アクチニジア属、サンジソウ属に属する植物、若しくは放線菌由来のリナロールシンターゼ）を発現する微生物は、ジメチルアリル二リン酸供給経路を有し、かつ２−ケトグルコン酸生成経路が遮断されていることが好ましい。
本発明で用いる微生物は、２−ケトグルコン酸生成経路が遮断されている微生物であることが好ましい。２−ケトグルコン酸生成経路においては、グルコースがグルコース脱水素酵素により酸化されてグルコン酸が生成され、次いでグルコン酸がグルコン酸２−ケト脱水素酵素により酸化されてＮＡＤＰＨと２−ケトグルコン酸が生成される。よって、２−ケトグルコン酸生成経路が遮断されている微生物は、グルコース脱水素酵素（ＧＣＤ）及びグルコン酸２−ケト脱水素酵素からなる群より選ばれる１以上の酵素の活性を低減させることにより得ることができる。好ましくは、２−ケトグルコン酸生成経路は、酵素活性の低減により遮断される。すなわち、本発明で用いる微生物は、グルコースデヒドロゲナーゼ及びグルコン酸２−ケト−デヒドロゲナーゼからなる群より選ばれる１以上の酵素の酵素活性が低減しており、これにより微生物内で２−ケトグルコン酸生成経路が遮断されている。
微生物における酵素活性の低減は、例えば、酵素活性の低下及び完全消失を含む。また、微生物における酵素活性の低減は、例えば、微生物における酵素の発現の低下及び完全消失を含む。微生物における酵素の発現の低下又は完全消失は、微生物が保有する活性の低下又は完全消失につながるためである。微生物における酵素活性の低減は、例えば、酵素をコードする遺伝子、酵素の発現又は活性を調節し得る因子をコードする遺伝子、又はこれらの遺伝子の上流に位置する転写調節領域、翻訳調節領域等の発現調節領域（例、プロモーター、シャインダルガルノ（ＳＤ）配列）、非翻訳領域を破壊することにより達成することができる。上記の遺伝子又は領域の破壊は、酵素の発現又は活性を低下又は完全消失させるように、上記の遺伝子又は領域に対応するゲノム領域を改変することにより行うことができる。このような改変としては、例えば、上記ゲノム領域の一部又は全ての欠失、上記ゲノム領域へのポリヌクレオチドの挿入、及び上記ゲノム領域の別のポリヌクレオチドへの交換が挙げられるが、これらに限定されない。
リナロールシンターゼを発現する微生物は、ピロロキノリンキノン（ＰＱＱ）を合成する能力のある、あるいは、培養環境中に含まれるＰＱＱを利用する能力のある微生物であることが好ましい。
リナロールシンターゼを発現する微生物は、グルコース脱水素酵素の活性が低減していることが好ましく、ＰＱＱを補酵素として利用するグルコース脱水素酵素の活性が低減していることがより好ましい。
リナロールシンターゼを発現する微生物が、リナロールシンターゼの発現ベクターで、本来的に２−ケトグルコン酸経路を有している腸内細菌科に属する微生物等の宿主を形質転換して得られる微生物である場合には、該微生物は２−ケトグルコン酸経路を遮断するための改変がなされることが好ましい。
例えば、エシェリヒア・コリ等の腸内細菌科に属する微生物はグルコースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子を持ち、ＧＣＤアポ酵素を産生するが、ＰＱＱ産生能を有していないため、ＰＱＱ非添加ではＧＣＤ活性を有しない。しかしながらある外来遺伝子を菌体内で発現させるとＰＱＱを代替する物質が生成し、ＧＣＤ活性を発現することが知られている（国際公開第２００６／１３３８９８号）。ＧＣＤ活性を後天的に獲得した上述の腸内細菌科に属する微生物等の微生物は、本発明における「本来的に２−ケトグルコン酸経路を有する微生物」に含まれる。
２−ケトグルコン酸生成経路を遮断するための改変は、グルコース脱水素酵素活性を低減するための改変であることが好ましく、ＰＱＱを補酵素として利用するグルコース脱水素酵素活性を低減するための改変であることが好ましい。改変は、微生物の細胞あたりのＧＣＤ活性が、非改変株、例えば野生型の腸内細菌科に属する菌株よりも低くなるように行い得る。例えば、改変株の細胞あたりのＧＣＤの分子数、又は分子あたりのＧＣＤ活性が、野生株のそれよりも低下すればよい。細胞あたりのＧＣＤ活性の比較は、例えば、同じ条件で培養した改変株と野生株の細胞抽出液に含まれるＧＣＤ活性を比較することによって、行うことができる。比較の対照となり得る野生型のパントエア属細菌としては、例えば、パントエア・アナナティスＡＪ１３３５５株（ＦＥＲＭ ＢＰ−６６１４）、パントエア・アナナティスＳＣ１７株（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１０９１）、パントエア・アナナティス ＳＣ１７（０）株（Ｋａｔａｓｈｋｉｎａ ＪＩ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．，２００９；１０：３４ ＶＫＰＭ Ｂ−９２４６）が挙げられる。
ＰＱＱを補酵素とするＧＣＤの活性は、下記反応を触媒する活性をいう。
β−Ｄ−グルコース＋酸化型ＰＱＱ→Ｄ−δ−グルコノラクトン＋還元型ＰＱＱ
ＧＣＤ活性は、例えば、以下の反応を介した還元型ＤＣＰＩＰの生成を６００ｎｍの吸光度を測定による検出に基づき、測定することができる（特開２００７−１２９９６５号公報）。
Ｄ−グルコース＋酸化型ＰＭＳ→Ｄ−グルコノ−１，５−ラクトン＋還元型ＰＭＳ
還元型ＰＭＳ＋酸化型ＤＣＰＩＰ→酸化型ＰＭＳ＋還元型ＤＣＰＩＰ
ＰＭＳ：フェナジンメトサルフェート
ＤＣＰＩＰ：２，６−ジクロロフェノール−インドフェノール
ＧＣＤの活性は、ＧＣＤをコードする遺伝子（ｇｃｄ遺伝子）、ＧＣＤの発現又は活性を調節し得る因子をコードする遺伝子、又はこれらの遺伝子の上流に位置する転写調節領域を破壊することにより低減させることができる。
ｇｃｄ遺伝子としては、以下の（ｘ）〜（ｚ）からなる群より選ばれる１以上のポリヌクレオチドであることが好ましい。
（ｘ）〔ｉ〕配列番号９で表される塩基配列、もしくは〔ｉｉ〕配列番号９で表される塩基配列中３０１〜２６９１番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｙ）前記〔ｉ〕もしくは〔ｉｉ〕の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつＧＣＤ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；又は
（ｚ）前記〔ｉ〕もしくは〔ｉｉ〕の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＧＣＤ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
配列番号９に示す塩基配列は、パントエア・アナナティスのｇｃｄ遺伝子の完全長の塩基配列である。配列番号９で表される塩基配列は、配列番号１０で表されるアミノ酸配列をコードし、３０１〜２６９１（２６８８）番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列は、成熟ＧＣＤのアミノ酸配列をコードし得る。塩基配列の同一性、ストリンジェントな条件、ポリヌクレオチドの定義は、上記（ａ１）〜（ｃ２０）のポリヌクレオチドにて説明したのと同様である。
ＧＣＤは、以下の（Ｘ）〜（Ｚ）からなる群より選ばれる１以上のタンパク質であることが好ましい。
（Ｘ）配列番号１０で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｙ）配列番号１０で表されるアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつＧＣＤ活性を有するタンパク質；及び
（Ｚ）配列番号１０で表されるアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつＧＣＤ活性を有するタンパク質。
配列番号１０で表されるアミノ酸配列は、成熟ＧＣＤを含み得る。（Ｙ）及び（Ｚ）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、配列番号１０で表されるアミノ酸配列を含むタンパク質のＧＣＤ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上または９５％以上の活性を有することが好ましい。欠失、置換、付加もしくは挿入の定義、アミノ酸の同一性等については、（Ａ１）〜（Ｃ２８）のタンパク質にて説明したのと同様である。
ｇｃｄ遺伝子は、これらの配列に基づき、オリゴヌクレオチドを合成し、パントエア・アナナティスの染色体を鋳型としてＰＣＲ反応を行うことによってクローニングすることができる。ｇｃｄ遺伝子の破壊は、相同組換えにより行ってもよい。この場合、染色体上のｇｃｄ遺伝子と一定以上の相同性、例えば、８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上の相同性を有する遺伝子を用いてもよい。また、染色体上のｇｃｄ遺伝子とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする遺伝子を用いてもよい。ストリンジェントな条件としては、例えば、６０℃、１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、好ましくは、０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳに相当する塩濃度で、１回より好ましくは２〜３回洗浄する条件が挙げられる。
ｇｃｄ遺伝子の破壊は、例えば、染色体上の標的遺伝子の上下流の配列を含めた標的遺伝子全体の欠失、ｇｃｄ遺伝子の不活化は、染色体上のｇｃｄ遺伝子のコード領域にアミノ酸置換（ミスセンス変異）の導入、終始コドンの導入（ナンセンス変異）、あるいは一〜二塩基付加・欠失するフレームシフト変異の導入によっても達成出来る（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７２：８６１１−８６１７（１９９７），Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＵＳＡ ９５ ５５１１−５５１５（１９９８），Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６６，２０８３３−２０８３９（１９９１））。
各遺伝子の破壊は、遺伝子組換えにより行われることが好ましい。遺伝子組換えによる方法としては例えば、相同組換えを利用して、染色体上の標的遺伝子の発現調節配列（例、プロモーター領域、又はコード領域、もしくは非コード領域）の一部又は全部を欠失させること、又はこれらの領域にポリヌクレオチドを挿入することが挙げられる。
発現調節配列の破壊は、好ましくは１塩基以上、より好ましくは２塩基以上、更に好ましくは３塩基以上につき行われる。また、コード領域を欠失させる場合は、各遺伝子が産生するタンパク質の機能が低減するのであれば、欠失させる領域は、Ｎ末端領域、内部領域、Ｃ末端領域のいずれの領域であってもよく、コード領域全体であってもよい。通常、欠失させる領域は長い方が確実に標的遺伝子を破壊することができる。欠失させる領域の上流と下流のリーディングフレームは一致しないことが好ましい。
コード領域にポリヌクレオチドを挿入する場合、挿入位置は、標的遺伝子のいずれの領域であってもよいが、挿入する配列は長い方が、確実に標的遺伝子を破壊することができる。挿入部位の前後の配列は、リーディングフレームが一致しないことが好ましい。ポリヌクレオチドとしては、標的遺伝子によりコードされるタンパク質の機能を低減させるものであれば特に制限されないが、例えば、抗生物質耐性遺伝子を又はＬ−アミノ酸生産に有用な遺伝子を搭載したトランスポゾン等が挙げられる。
染色体上の標的遺伝子を上記のように改変する方法としては、例えば以下の方法が挙げられる。まず、標的遺伝子の部分配列を欠失し、正常に機能するタンパク質を産生できない変異遺伝子を作製する。次に、該遺伝子を含むＤＮＡで細菌を形質転換して、変異遺伝子と染色体上の標的遺伝子とで相同組換えを起こさせることにより、染色体上の標的遺伝子を変異遺伝子に置換する。得られる欠失型標的遺伝子によってコードされるタンパク質は、生成したとしても、野生型タンパク質とは異なる立体構造を有し、その活性が低減する。このような相同組換えを利用した遺伝子置換による遺伝子破壊は既に確立している。例えば、「Ｒｅｄドリブンインテグレーション(Ｒｅｄ−ｄｒｉｖｅｎ ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ)」と呼ばれる方法（Ｄａｔｓｅｎｋｏ，Ｋ．Ａ，ａｎｄ Ｗａｎｎｅｒ，Ｂ．Ｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９７：６６４０−６６４５（２０００））、又は、Ｒｅｄドリブンインテグレーション法とλファージ由来の切り出しシステム（Ｃｈｏ，Ｅ．Ｈ．，Ｇｕｍｐｏｒｔ，Ｒ．Ｉ．，Ｇａｒｄｎｅｒ，Ｊ．Ｆ．Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１８４：５２００−５２０３（２００２））とを組み合わせた方法（国際公開第２００５／０１０１７５号）等の直鎖状ＤＮＡを用いる方法や、温度感受性複製起点を含むプラスミド、接合伝達能力を有するプラスミドを用いる方法、宿主内で複製起点を持たないスイサイドベクターを利用する方法などが挙げられる（米国特許第６３０３３８３号明細書、又は特開平０５−００７４９１号公報）。
標的遺伝子の転写が低下するか否かの確認は、標的遺伝子から転写されるｍＲＮＡの量を野生株、あるいは非改変株と比較することによって行うことが出来る。ｍＲＮＡの量を評価する方法としては、ノーザンハイブリダイゼーション、ＲＴ−ＰＣＲ等が挙げられる（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ（ＵＳＡ），２００１））。転写量は、野生株あるいは非改変株のいずれかと比較して低下していればよいが、例えば野生株、非改変株と比べて少なくとも７５％以下、５０％以下、２５％以下、又は１０％以下に低下していることが好ましく、全く発現していないことがより好ましい。
標的遺伝子がコードするタンパク質の量が低下したことの確認は、同タンパク質に結合する抗体を用いてウェスタンブロットによって行うことが出来る（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ（ＵＳＡ），２００１））。タンパク質量の低下は、野生株あるいは非改変株と比較して、低下していればいずれでもよいが、例えば、野生株あるいは非改変株と比べて少なくとも７５％以下、５０％以下、２５％以下、又は１０％以下に減少していることが好ましく、全くタンパク質を産生していない（完全に活性が消失している）ことがより好ましい。
ＧＣＤの活性を低下させるには、上述の遺伝子操作法以外に、例えば、パントエア属に属する細菌等の腸内細菌科に属する微生物を紫外線照射又は、Ｎ−メチル−Ｎ'−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）もしくは亜硝酸等の通常変異処理に用いられている変異剤によって処理し、ＧＣＤの活性が低下した菌株を選択する方法が挙げられる。
ＧＣＤの活性は、ＰＱＱの合成能の低減によっても低減させることができる。ＰＱＱの合成能は、例えば、ＰＱＱ生合成に必要なオペロンであるｐｑｑＡＢＣＤＥＦの一部又は全部を欠失させることによって、低下させることができる（Ｊ．Ｓ．Ｖｅｌｔｅｒｏｐ，Ｐ．Ｗ．Ｐｏｓｔｍａ，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ １７７（１７）：５０８８−５０９８（１９９５））。
本発明の方法は、以下の工程１）〜３）を含むことが好ましい。
１）十分な濃度の増殖促進剤の存在下でリナロールシンターゼを発現する微生物を培養して、リナロールを含む生成微生物を増殖させること；
２）増殖促進剤の濃度を減少させて、前記微生物によるリナロールの生成を誘導すること；及び
３）前記微生物を培養してリナロールを生成すること。
効率的なリナロール組成物（例えば、Ｒ−リナロール組成物、Ｓ−リナロール組成物）の製造の観点から、微生物の増殖期に対応する上記工程１）、及びリナロールの生成期に対応する上記工程３）が分離される。また、上記工程２）は、微生物の増殖期からリナロールの生成期に移行させるため、リナロール生成の誘導期に対応する。
増殖促進剤とは、微生物により消費され得る、微生物の増殖に必須の因子又は微生物の増殖の促進作用を有する因子であって、微生物により消費され培地中の量が減少すると微生物の増殖が喪失又は低減するものをいう。例えば、ある量の増殖促進剤を用いた場合、その量の増殖促進剤が消費されるまで微生物は増殖し続けるが、一旦増殖促進剤が全て消費されると、微生物は増殖し得ず、又は増殖速度が低下し得る。したがって、増殖促進剤により、微生物の増殖の程度を調節することができる。このような増殖促進剤としては、例えば、酸素（ガス）等の物質；鉄、マグネシウム、カリウム、カルシウムのイオン等のミネラル；リン酸（例、モノリン酸、二リン酸、ポリリン酸）又はその塩等のリン化合物；アンモニア、硝酸、亜硝酸、尿素等の窒素化合物（ガス）；硫酸アンモニウム、チオ硫酸等の硫黄化合物；ビタミン（例、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ナイアシン、パントテン酸、ビオチン、アスコルビン酸）、及びアミノ酸（例、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチヂン、ロイシン、イソロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、セレノシステイン）等の栄養素が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法では、１種の増殖促進剤を用いてもよいし、２種以上の増殖促進剤を組み合わせて用いてもよい。
本発明の方法が上記工程１）〜３）を含む場合、リナロールシンターゼを発現する微生物は、増殖促進剤に依存して増殖する能力、及び増殖促進剤逆依存プロモーターに依存してリナロールを生成する能力を有する、酵素反応によるリナロール合成能を付与された微生物であることが好ましい。斯かる微生物は、微生物の増殖に十分な濃度の増殖促進剤の存在下で、増殖できる。ここで、「十分な濃度」とは、微生物の増殖に有効な濃度で増殖促進剤が用いられることをいい得る。表現「増殖促進剤逆依存プロモーターに依存してリナロールを生成する能力」とは、相対的に高い濃度の増殖促進剤の存在下では、リナロールを少しも生成できず、又はリナロールの生成効率が低いが、相対的に低い濃度の増殖促進剤の存在下又は増殖促進剤の不在下では、リナロールを生成できること、若しくはＲ−リナロール又はＳ−リナロールの生成効率が高いことを意味し得る。したがって、本発明で好ましく用いられる微生物は、十分な濃度の増殖促進剤の存在下では、良好に増殖し得るが、リナロールを生成できず、若しくはＲ−リナロール又はＳ−リナロールの生成効率が低い。本発明で用いられる微生物はまた、不十分な濃度の増殖促進剤の存在下又は増殖促進剤の不在下では、良好に増殖し得ないが、リナロールを生成でき、又はリナロールの生成効率が高いことが好ましく、Ｒ−リナロールを生成でき、又はＲ−リナロールの生成効率が高いこと、若しくはＳ−リナロールを生成でき、又はＳ−リナロールの生成効率が高いことがより好ましい。
本発明の方法が上記工程１）〜３）を含む場合、リナロールシンターゼを発現する微生物のリナロールシンターゼ遺伝子は、増殖促進剤逆依存プロモーターの制御下にあり得る。表現「増殖促進剤逆依存プロモーター」とは、相対的に高い濃度の増殖促進剤の存在下では、転写活性を有しない、又は低い転写活性を有するが、相対的に低い濃度の増殖促進剤の存在下又は増殖促進剤の不在下では、転写活性を有する、又は高い転写活性を有するプロモーターを意味し得る。したがって、増殖促進剤逆依存プロモーターは、微生物の増殖に十分な濃度の増殖促進剤の存在下では、リナロールシンターゼ遺伝子の発現を抑制でき、一方、微生物の増殖に不十分な濃度の増殖促進剤の存在下では、前記リナロールシンターゼ遺伝子の発現を促進できる。具体的には、微生物は、増殖促進剤逆依存プロモーターの制御下にある。
例えば、増殖促進剤がリン化合物である場合、リン欠乏誘導型プロモーターを利用することができる。表現「リン欠乏誘導型プロモーター」とは、低濃度のリン化合物で下流遺伝子の発現を促進できるプロモーターをいい得る。低濃度のリン化合物とは、（遊離）リン濃度１００ｍｇ／Ｌ以下の条件をいい得る。表現「リン」は、表現「リン化合物」と同義であり、それらは交換可能な様式で使用され得る。総リン濃度は、溶液中の全種のリン化合物を、強酸あるいは酸化剤によってオルトリン酸態リンに分解して定量可能である。リン欠乏条件下の総リン濃度は、１００ｍｇ／Ｌ以下、５０ｍｇ／Ｌ以下、１０ｍｇ／Ｌ以下、５ｍｇ／Ｌ以下、１ｍｇ／Ｌ以下、０．１ｍｇ／Ｌ以下、又は０．０１ｍｇ／Ｌ以下であってもよい。リン欠乏誘導型プロモーターとしては、例えば、アルカリフォスファターゼをコードする遺伝子（例、ｐｈｏＡ）のプロモーター、酸性フォスファターゼをコードする遺伝子（例、ｐｈｏＣ）のプロモーター、センサーヒスチジンキナーゼをコードする遺伝子（例、ｐｈｏＲ）のプロモーター、レスポンスレギュレーターをコードする遺伝子（例、ｐｈｏＢ）のプロモーター、及びリン取り込み担体をコードする遺伝子（例、ｐｓｔＳ）のプロモーターが挙げられる。
上記工程１）では、リナロールシンターゼを発現する微生物が、十分な濃度の増殖促進剤の存在下で増殖される。より具体的には、リナロールシンターゼを発現する微生物の増殖は、十分な濃度の増殖促進剤の存在下で、培地中でリナロールシンターゼを発現する微生物を培養することにより行うことができる。
例えば、リン化合物が増殖促進剤として用いられる場合、リナロールシンターゼを発現する微生物は、十分な濃度のリン化合物の存在下で良好に増殖することができるので、リン化合物は、増殖促進剤として作用することができる。増殖促進剤がリン化合物である場合、１）において、増殖に十分なリン化合物の濃度は、特に限定されないが、例えば２００ｍｇ／Ｌ以上、３００ｍｇ／Ｌ以上、５００ｍｇ／Ｌ以上、１０００ｍｇ／Ｌ以上、又は２０００ｍｇ／Ｌ以上であってもよい。増殖のためのリン化合物の濃度はまた、例えば２０ｇ／Ｌ以下、１０ｇ／Ｌ以下、又は５ｇ／Ｌ以下であってもよい。
上記工程２）では、微生物によるリナロールの生成の誘導が、増殖促進剤の濃度を減少させることにより行われる。より具体的には、増殖促進剤の濃度の減少は、培地中への増殖促進剤の供給量を低下させることにより、行うことができる。増殖促進剤の濃度の減少はまた、培地中への増殖促進剤の供給量を工程１）及び２）を通じて一定にした場合であっても、微生物の増殖を利用して行うことができる。工程１）における微生物の増殖の初期では、微生物が十分に増殖しておらず、培地中の微生物数が少ないため、微生物による増殖促進剤の消費も相対的に少ない。したがって、増殖の初期では、培地中の増殖促進剤の濃度は、相対的に高い。一方、工程１）における微生物の増殖の後期では、微生物が十分に増殖しており、培地中の微生物数が多いため、微生物による増殖促進剤の消費も相対的に多い。したがって、増殖の後期では、培地中の増殖促進剤の濃度は、相対的に低くなる。このように、一定量の増殖促進剤を、工程１）及び２）を通じて培地中に供給し続けた場合、微生物の増殖と反比例して、培地中の増殖促進剤の濃度は減少する。この減少した濃度をトリガーとして、微生物によるリナロールの生成を誘導することができる。
例えば、リン化合物又はアミノ酸が増殖促進剤として用いられる場合、微生物によるリナロールの生成を誘導できる培地中のリン化合物又はアミノ酸の培地中の濃度は、例えば１００ｍｇ／Ｌ以下、５０ｍｇ／Ｌ以下、又は１０ｍｇ／Ｌ以下であり得る。
上記工程３）では、リナロールの生成が、微生物を培養することにより行われる。より具体的には、Ｒ−リナロール又はＳ−リナロールの生成は、増殖促進剤の濃度が減少した工程２）の条件下において培地中で微生物を培養することにより行うことができる。培地中の増殖促進剤の濃度は、微生物によるＲ−リナロール又はＳ−リナロールの生成を可能にするため、工程２）で上述したような濃度に維持され得る。
本発明の方法では、工程３）における微生物の培養期間を、工程１）のその期間よりも長く設定することも可能である。誘導剤を利用する従来の方法では、より多量のリナロールを得るためには、リナロールの生成期において誘導剤を用いて微生物を長期培養する必要があった。しかし、長期培養すると誘導剤が分解することから、微生物がＲ−リナロール又はＳ−リナロールの生産能を維持できなくなる。そのため、誘導剤を継続的に培養培地に添加する必要があるが、誘導剤は高価であり得、リナロール製造費が上昇し得る。したがって、リナロールの生成期において誘導剤を用いる微生物の長期培養は、その培養期間の長さに応じて、リナロールの製造費が上昇し得るという問題があった。一方、工程３）において誘導剤等の特定物質を用いない本発明の方法では、当該特定物質の分解を考慮する必要がなく、リナロールの生成期における長期培養がリナロール製造費の上昇を引き起こすという従来の問題も生じない。したがって、本発明の方法は、誘導剤を用いる従来の方法とは異なり、工程３）の期間を長く設定し易い。本発明の方法では、工程３）の期間を長く設定すればするほど、より多量のＲ−リナロール又はＳ−リナロールを製造することができる。
本発明の方法は、リナロールの生成量をさらに向上させる観点等から、他の方法と併用されてもよい。このような方法としては、例えば、光（Ｐｉａ Ｌｉｎｄｂｅｒｇ，Ｓｕｎｇｓｏｏｎ Ｐａｒｋ，Ａｎａｓｔａｓｉｏｓ Ｍｅｌｉｓ，Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １２（２０１０）：７０−７９）又は温度（Ｎｏｒｍａ Ａ Ｖａｌｄｅｚ−Ｃｒｕｚ，Ｌｕｉｓ Ｃａｓｐｅｔａ，Ｎｅｓｔｏｒ Ｏ Ｐｅｒｅｚ，Ｏｃｔａｖｉｏ Ｔ Ｒａｍｉｒｅｚ，Ｍａｕｒｉｃｉｏ Ａ Ｔｒｕｊｉｌｌｏ−Ｒｏｌｄａｎ，Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒｉｅｓ ２０１０，９：１）等の環境因子を利用する方法、ｐＨの変化（欧州特許公開第１２３３０６８Ａ２号明細書）、界面活性剤の添加（特開平１１−００９２９６Ａ号公報）、自己誘導法（国際公開第２０１３／１５１１７４号）が挙げられる。
本発明の方法で用いられる培地は、リナロール生成のための炭素源を含んでいてもよい。炭素源としては、単糖類、二糖類、オリゴ糖類、多糖類等の炭水化物；ショ糖を加水分解した転化糖；グリセロール；メタノール、ホルムアルデヒド、ギ酸塩、一酸化炭素、二酸化炭素等の炭素数が１の化合物（以下、Ｃ１化合物という。）；コーン油、パーム油、大豆油等のオイル；アセテート；動物油脂；動物オイル；飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸等の脂肪酸；脂質；リン脂質；グリセロ脂質；モノグリセライド、ジグリセライド、トリグリセライド等のグリセリン脂肪酸エステル；微生物性タンパク質、植物性タンパク質等のポリペプチド；加水分解されたバイオマス炭素源等の再生可能な炭素源；酵母エキス；又はこれらを組み合わせたものが挙げられる。窒素源としては、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機アンモニウム塩、大豆加水分解物などの有機窒素、アンモニアガス、アンモニア水等を用いることができる。有機微量栄養源としては、ビタミンＢ１、Ｌ−ホモセリンなどの要求物質又は酵母エキス等を適量含有させることが好ましい。これらの他に、必要に応じて、リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、鉄イオン、マンガンイオン等が少量添加される。なお、本発明で用いる培地は、炭素源、窒素源、無機イオン及び必要に応じてその他の有機微量成分を含む培地であれば、天然培地、合成培地のいずれでもよい。
単糖類としては、ケトトリオース（ジヒドロキシアセトン）、アルドトリオース（グリセルアルデヒド）等のトリオース；ケトテトロース（エリトルロース）、アルドテトロース（エリトロース、トレオース）等のテトロース；ケトペントース（リブロース、キシルロース）、アルドペントース（リボース、アラビノース、キシロース、リキソース）、デオキシ糖（デオキシリボース）等のペントース；ケトヘキソース（プシコース、フルクトース、ソルボース、タガトース）、アルドヘキソース（アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース、タロース）、デオキシ糖（フコース、フクロース、ラムノース）等のヘキソース；セドヘプツロース等のヘプトースが挙げられ、フルクトース、マンノース、ガラクトース、グルコース等のＣ６糖；キシロース、アラビノース等のＣ５糖の炭水化物が好ましい。
二糖類としては、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、ツラノース、セロビオース等が挙げられ、スクロース、ラクトースが好ましい。
オリゴ糖類としては、ラフィノース、メレジトース、マルトトリオース等の三糖類；アカルボース、スタキオース等の四糖類；フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、マンナンオリゴ糖（ＭＯＳ）等のその他のオリゴ糖類が挙げられる。
多糖類としては、グリコーゲン、デンプン（アミロース、アミロペクチン）、セルロース、デキストリン、グルカン（β−１，３−グルカン）が挙げられ、デンプン、セルロースが好ましい。
微生物性タンパク質としては、酵母又は細菌由来のポリペプチドが挙げられる。
植物性タンパク質としては、大豆、コーン、キャノーラ、ジャトロファ、パーム、ピーナッツ、ヒマワリ、ココナッツ、マスタード、綿実、パーム核油、オリーブ、紅花、ゴマ、亜麻仁由来のポリペプチドが挙げられる。
脂質としては、Ｃ４以上の飽和、不飽和脂肪酸を１以上含む物質が挙げられる。
オイルとしては、Ｃ４以上の飽和、不飽和脂肪酸を１以上含み、室温で液体の脂質であり得、大豆、コーン、キャノーラ、ジャトロファ、パーム、ピーナッツ、ヒマワリ、ココナッツ、マスタード、綿実、パーム核油、オリーブ、紅花、ゴマ、亜麻仁、油性微生物細胞、ナンキンハゼ、又はこれらの２以上の組み合わせからなるものが挙げられる。
脂肪酸としては、式ＲＣＯＯＨ（「Ｒ」は２以上の炭素原子を有する炭化水素基を表す。）で表される化合物が挙げられる。
不飽和脂肪酸は、上記の基「Ｒ」における２つの炭素原子間に少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する化合物であり、オレイン酸、バクセン酸、リノール酸、パルミテライジン酸、アラキドン酸等が挙げられる。
飽和脂肪酸は、「Ｒ」が飽和脂肪族基である化合物であり、ドコサン酸、イコサン酸、オクタデカン酸、ヘキサデカン酸、テトラデカン酸、ドデカン酸等が挙げられる。
中でも、脂肪酸としては、１以上のＣ２からＣ２２の脂肪酸が含まれるものが好ましく、Ｃ１２脂肪酸、Ｃ１４脂肪酸、Ｃ１６脂肪酸、Ｃ１８脂肪酸、Ｃ２０脂肪酸、Ｃ２２脂肪酸が含まれるものがより好ましい。
また、炭素源としては、これら脂肪酸の塩、誘導体、誘導体の塩も挙げられる。塩としては、リチウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩等が挙げられる。
また、炭素源としては、脂質、オイル、油脂、脂肪酸、グリセロール脂肪酸エステルとグルコース等の炭水化物との組み合わせが挙げられる。
再生可能な炭素源としては、加水分解されたバイオマス炭素源が挙げられる。
バイオマス炭素源としては、木、紙、及びパルプの廃材、葉状植物、果肉等のセルロース系基質；柄、穀粒、根、塊茎等の植物の一部分が挙げられる。
バイオマス炭素源として用いられる植物としては、コーン、小麦、ライ麦、ソルガム、トリティケイト、コメ、アワ、大麦、キャッサバ、エンドウマメ等のマメ科植物、ジャガイモ、サツマイモ、バナナ、サトウキビ、タピオカ等が挙げられる。
バイオマス等の再生可能な炭素源を細胞培地に添加する際には、炭素源は、前処理され得る。前処理としては、酵素的前処理、化学的前処理、酵素的前処理と化学的前処理の組み合わせが挙げられる。
再生可能な炭素源を細胞培地に添加する前に、その全部又は一部を加水分解することが好ましい。
また、炭素源としては、酵母エキス、又は酵母エキスと、グルコース等の他の炭素源との組み合わせが挙げられ、酵母エキスと、二酸化炭素やメタノール等のＣ１化合物との組み合わせが好ましい。
本発明の方法では、リナロールシンターゼを発現する微生物を生理食塩水と栄養源を含む標準的培地で培養することが好ましい。
培養培地としては、特に限定されず、Ｌｕｒｉａ Ｂｅｒｔａｎｉ（ＬＢ）ブロス、Ｓａｂｏｕｒａｕｄ Ｄｅｘｔｒｏｓｅ（ＳＤ）ブロス、Ｙｅａｓｔ ｍｅｄｉｕｍ（ＹＭ）ブロス等の一般的に市販されている既成の培地が挙げられる。特定の宿主細胞の培養に適した培地を適宜選択して用いることができる。
培地には適切な炭素源の他に、適切なミネラル、塩、補助因子、緩衝液、及び培養に適していること、リナロール（好ましくは、Ｒ−リナロール及びＳ−リナロールのいずれか）の産出を促進することが当業者にとって公知の成分が含まれていることが好ましい。
微生物の培養条件としては、標準的な培養条件を用いることができる。
培養温度としては、２０℃〜４０℃であり得、ｐＨが、約４．５〜約９．５であり得る。
また、微生物の宿主の性質に応じて好気性、無酸素性、又は嫌気性条件下で培養を行うことが好ましい。培養方法としては、バッチ培養法、流加培養法、連続培養法等の公知の発酵方法を適宜用いることができる。
なお、Ｒ−リナロール及びＳ−リナロールは水に対する溶解度が低く、培地中に有機層を形成させ、二相で培養することにより、有機層に溶解させて回収することができる。有機層を形成させるために添加する物質としては例えば、ドデカン、オレイン酸メチル、オレイルアルコール、フタル酸ジブチル、又はイソプロピルミリステート等を使用することができる。
本発明のリナロール組成物は、リナロールを豊富に含むことから、そのまま、又は必要に応じて精製して、フレーバー及び／又はフレグランス組成物として利用することができる。
次に実施例を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
実施例１：リナロールシンターゼ発現プラスミドの構築
１−１）Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ由来リナロールシンターゼ遺伝子の取得
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ由来リナロールシンターゼ（ＳｃＬＩＮＳ）遺伝子の塩基配列（ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ：ＤＳ５７０６９２）、及びアミノ酸配列（ＧｅｎＰｅｐｔ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ：ＥＤＹ５２２６３）は既に知られている（Ｎａｋａｎｏ Ｃ ｅｔ ａｌ．（２０１１）ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ．Ｖｏｌｕｍｅ １２，Ｉｓｓｕｅ １６，ｐａｇｅｓ ２４０３−２４０７）。Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ由来リナロールシンターゼタンパク質のアミノ酸配列、及び遺伝子の塩基配列を配列番号１、及び配列番号２に示す。ＳｃＬＩＮＳ遺伝子を効率的に発現させる為、コドンを最適化し、これをｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳと名付けた。ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳの塩基配列を配列番号３に示す。ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳ遺伝子にｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）を付加したＤＮＡは化学合成された後、ｐＭＷ１１９（株式会社ニッポンジーン製）にクローニングされ、得られたプラスミドをｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳと名付けた。
１−２）Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ由来変異型ファルネシル二リン酸シンターゼ遺伝子の取得
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉのファルネシル二リン酸シンターゼは、ｉｓｐＡ遺伝子（配列番号７）によりコードされている（Ｆｕｊｉｓａｋｉ Ｓ．， ｅｔ ａｌ．（１９９０） Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（Ｔｏｋｙｏ） １０８：９９５−１０００．）。Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ由来のファルネシル二リン酸シンターゼにおいて、菌体内のゲラニル二リン酸の濃度を高める変異が明らかにされている（Ｎａｒｉｔａ Ｋ．，ｅｔ ａｌ．（１９９９） Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １２６（３）：５６６−５７１．）。本知見を基にＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉのファルネシル二リン酸シンターゼにおいても、同様の変異体が作出されている（Ｒｅｉｌｉｎｇ ＫＫ ｅｔ ａｌ．（２００４） Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ．８７（２） ２００−２１２．）。ゲラニル二リン酸生成活性の高いｉｓｐＡ変異体（Ｓ８０Ｆ）遺伝子を効率的に発現させるため、コドンを最適化した配列を設計し、これをｉｓｐＡ*と名付けた。ｉｓｐＡ*の塩基配列を配列番号８に示す。ｉｓｐＡ＊遺伝子は化学合成された後、ｐＭＷ１１９（株式会社ニッポンジーン製）にクローニングされ、得られたプラスミドをｐＭＷ１１９−ｉｓｐＡ*と名付けた。
１−３）ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ＊遺伝子の同時発現プラスミドの構築
配列番号１４に示したプライマーと配列番号１１に示したプライマーを用いてｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳ断片を得た。さらに、配列番号１２に示したプライマーと配列番号１５に示したプライマーを用いてｐＭＷ１１９−ｉｓｐＡ＊を鋳型にＰＣＲを行い、ｉｓｐＡ＊断片を得た。精製したＰｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳ断片、及びｉｓｐＡ＊断片を制限酵素ＰｓｔＩとＳｃａＩで消化したｐＡＣＹＣ１７７（株式会社ニッポンジーン製）にＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊を構築した。
１−４）Ｃｏｒｉａｎｄｒｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ（コリアンダー）由来リナロールシンターゼ遺伝子の取得
Ｃｏｒｉａｎｄｒｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ由来リナロールシンターゼ（ＣｓＬＩＮＳ）遺伝子の塩基配列（ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ：ＫＦ７００７００）、及びアミノ酸配列（ＧｅｎＰｅｐｔ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ： ＡＨＣ５４０５１）は既に知られている（Ｇａｌａｔａ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１０２，６４−７３）。Ｃｏｒｉａｎｄｒｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ由来リナロールシンターゼタンパク質のアミノ酸配列、及び遺伝子配列を配列番号４、及び配列番号５に示す。ＣｓＬＩＮＳ遺伝子を効率的に発現させる為、コドンを最適化し、さらに葉緑体移行シグナルが切断されたＣｓＬＩＮＳ遺伝子を設計し、これをｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳと名付けた。ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳの塩基配列を配列番号６に示す。ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ遺伝子にｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ， ｅｔ ａｌ．，（１９８３） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）を付加したＤＮＡは化学合成された後、ｐＭＷ１１９（株式会社ニッポンジーン製）にクローニングされ、得られたプラスミドをｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳと名付けた。
１−５）ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現用プラスミドの構築
配列番号１４に示したプライマーと配列番号１６に示したプライマーを用いてｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ断片を得た。さらに、配列番号１７に示したプライマーと配列番号１５に示したプライマーを用いてｐＭＷ１１９−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｉｓｐＡ＊断片を得た。精製したＰｔａｃ−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ断片、及びｉｓｐＡ＊断片を制限酵素ＰｓｔＩとＳｃａＩで消化したｐＡＣＹＣ１７７（株式会社ニッポンジーン製）にＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。
１−６）発現量を至適化したｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ＊遺伝子の同時発現プラスミドの構築
配列番号１３に示したプライマーと配列番号１５に示したプライマーを用いて１−５で構築したｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊を鋳型にＰＣＲを行い、ＣｓＬＩＮＳ上流の配列が一部変更されたｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*断片を得た。精製したＣｓＬＩＮＳ上流の配列が一部変更されたｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊断片を制限酵素ＰｓｔＩとＳｃａＩで消化したｐＡＣＹＣ１７７（株式会社ニッポンジーン製）にＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、構築されたｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊発現プラスミドをｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ２−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊と名付けた。
参考実施例１：微好気誘導型イソプレノイド化合物生成微生物（ＳＷＩＴＣＨ−Ｐｌｌｄ／ＩｓｐＳＭ）及びリン酸欠乏誘導型イソプレノイド化合物生成微生物（ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ／ＩｓｐＳＭ，ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｓｔＳ／ＩｓｐＳＭ）、アラビノース誘導型イソプレノイド化合物生成微生物（ＳＷＩＴＣＨ−Ｐａｒａ／ＩｓｐＳＭ）の構築
１−１）ｐＭＷ−Ｐａｒａ−ｍｖａＥＳ−Ｔｔｒｐの構築
１−１−１）Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ由来ｍｖａＥ遺伝子の化学合成
ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ ａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅとｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｌｇｌｕｔａｒｙｌ−ＣｏＡｒｅｄｕｃｔａｓｅをコードするＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ由来ｍｖａＥの塩基配列、及びアミノ酸配列はすでに知られている（塩基配列のＡＣＣＥＳＳＩＯＮ番号：ＡＦ２９００９２．１、（１４７９．．３８９０）、アミノ酸配列のＡＣＣＥＳＳＩＯＮ番号：ＡＡＧ０２４３９）（Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１８２（１５），４３１９−４３２７（２０００））。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ由来ｍｖａＥタンパク質のアミノ酸配列、及び遺伝子の塩基配列を配列番号２２、及び配列番号２３にそれぞれ示す。ｍｖａＥ遺伝子をＥ．ｃｏｌｉで効率的に発現させるためにＥ．ｃｏｌｉのコドン使用頻度に最適化したｍｖａＥ遺伝子を設計し、これをＥＦｍｖａＥと名付けた。この塩基配列を配列番号２４に示す。ｍｖａＥ遺伝子は化学合成された後、ｐＵＣ５７（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社製）にクローニングされ、得られたプラスミドをｐＵＣ５７−ＥＦｍｖａＥと名付けた。
１−１−２）Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ由来ｍｖａＳ遺伝子の化学合成
ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ−ＣｏＡ ｓｙｎｔｈａｓｅをコードするＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ由来ｍｖａＳの塩基配列、及びアミノ酸配列はすでに知られている（塩基配列のＡＣＣＥＳＳＩＯＮ番号：ＡＦ２９００９２．１、ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ（１４２．．１２９３）、アミノ酸配列のＡＣＣＥＳＳＩＯＮ番号：ＡＡＧ０２４３８）（Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１８２（１５），４３１９−４３２７（２０００））。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ由来ｍｖａＳタンパク質のアミノ酸配列、及び遺伝子の塩基配列を配列番号２５、及び配列番号２６にそれぞれ示す。ｍｖａＳ遺伝子をＥ．ｃｏｌｉで効率的に発現させるためにＥ．ｃｏｌｉのコドン使用頻度に最適化したｍｖａＳ遺伝子を設計し、これをＥＦｍｖａＳと名付けた。この塩基配列を配列番号２７に示す。ｍｖａＳ遺伝子は化学合成された後、ｐＵＣ５７（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社製）にクローニングされ、得られたプラスミドをｐＵＣ５７−ＥＦｍｖａＳと名付けた。
１−１−３）アラビノース誘導型ｍｖａＥＳ発現ベクターの構築
アラビノース誘導型メバロン酸経路上流遺伝子発現ベクターは次の手順で構築した。プラスミドｐＫＤ４６を鋳型として配列番号２８と配列番号２９に示す合成オリゴヌクレオチドをプライマーとしたＰＣＲによりＥ．ｃｏｌｉ由来ａｒａＣとａｒａＢＡＤプロモーター配列からなるＰａｒａを含むＰＣＲ断片を得た。プラスミドｐＵＣ５７−ＥＦｍｖａＥを鋳型として配列番号３０と配列番号３１に示す合成オリゴヌクレオチドをプライマーとしたＰＣＲによりＥＦｍｖａＥ遺伝子を含むＰＣＲ断片を得た。プラスミドｐＵＣ５７−ＥＦｍｖａＳを鋳型として配列番号３２と配列番号３３に示す合成オリゴヌクレオチドをプライマーとしたＰＣＲによりＥＦｍｖａＳ遺伝子を含むＰＣＲ断片を得た。プラスミドｐＳＴＶ−Ｐｔａｃ−Ｔｔｒｐ（国際公開第２０１３／０６９６３４Ａ１号）を鋳型として配列番号３４と配列番号３５に示す合成オリゴヌクレオチドをプライマーとしたＰＣＲによりＴｔｒｐ配列を含むＰＣＲ断片を取得した。これら４つのＰＣＲ断片を得るためのＰＣＲにはＰｒｉｍｅ Ｓｔａｒポリメラーゼ（タカラバイオ株式会社製）を用いた。反応溶液はキットに添付された組成に従って調製し、９８℃にて１０秒、５５℃にて５秒、７２℃にて１分／ｋｂの反応を３０サイクル行った。精製したＰａｒａを含むＰＣＲ産物とＥＦｍｖａＥ遺伝子を含むＰＣＲ産物を鋳型として配列番号２８と配列番号３１に示す合成オリゴヌクレオチドを、精製したＥＦｍｖａＳ遺伝子を含むＰＣＲ産物とＴｔｒｐを含むＰＣＲ産物を鋳型として配列番号３２と配列番号３５に示す合成オリゴヌクレオチドをプライマーとしてＰＣＲを行った。その結果、ＰａｒａとＥＦｍｖａＥ遺伝子、ＥＦｍｖａＳとＴｔｒｐ含むＰＣＲ産物を取得した。プラスミドｐＭＷ２１９（株式会社ニッポンジーン製）は常法に従ってＳｍａＩ消化した。ＳｍａＩ消化後ｐＭＷ２１９と精製したＰａｒａとＥＦｍｖａＥ遺伝子を含むＰＣＲ産物、ＥＦｍｖａＳ遺伝子とＴｔｒｐを含むＰＣＲ産物はＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社製）を用いて連結した。得られたプラスミドは、ｐＭＷ−Ｐａｒａ−ｍｖａＥＳ−Ｔｔｒｐと命名した。
１−２）メバロン酸経路の上流及び下流遺伝子を保有する組込み型コンディショナル複製プラスミドの構築
１−２−１）異なるプロモーターの制御下にあるｍｖａＥＳ遺伝子を含むプラスミドの構築
メバロン酸経路の上流及び下流遺伝子を保有する組込み型プラスミドを構築するため、ｐＡＨ１６２−λａｔｔＬ−ＴｃＲ−λａｔｔＲ ｖｅｃｔｏｒ（Ｍｉｎａｅｖａ ＮＩ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００８；８：６３）を用いた。
ｐＭＷ−Ｐａｒａ−ｍｖａＥＳ−ＴｔｒｐのＫｐｎＩ−ＳａｌＩフラグメントを、ｐＡＨ１６２−λａｔｔＬ−ＴｃＲ−λａｔｔＲのＳｐｈＩ−ＳａｌＩ認識部位中にクローニングした。その結果、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｐａｒａプロモーター及びリプレッサー遺伝子ａｒａＣの制御下にあるＥ．ｆａｅｃａｌｉｓ由来ｍｖａＥＳオペロンを保有するｐＡＨ１６２−Ｐａｒａ−ｍｖａＥＳプラスミドを構築した（図１）。
オペロンのプロモーター欠損バリアントを得るために、ｐＭＷ２１９−Ｐａｒａ−ｍｖａＥＳ−ＴｔｒｐのＥｃｌ１３６ＩＩ−ＳａｌＩフラグメントを、同じ組込み型ベクター中にサブクローニングした。得られたプラスミドのマップを、図２に示す。
異なるプロモーターの制御下にあるｍｖａＥＳ遺伝子を保持する染色体固定用プラスミドのセットを構築した。この目的のために、Ｉ−ＳｃｅＩ、ＸｈｏＩ、ＰｓｔＩ及びＳｐｈＩ認識部位を含むポリリンカーを、ｍｖａＥＳ遺伝子の上流に位置する唯一のＨｉｎｄＩＩＩ認識部位中に挿入した。この目的を達成するために、プライマー１及び２（表１）とポリヌクレオチドキナーゼを用いてアニーリングを行った。得られた二本鎖ＤＮＡフラグメントを、ポリヌクレオチドキナーゼで５’リン酸化し、得られたリン酸化フラグメントをＨｉｎｄＩＩＩにて切断したｐＡＨ１６２−ｍｖａＥＳプラスミドにライゲーション反応により挿入した。得られたｐＡＨ１６２−ＭＣＳ−ｍｖａＥＳプラスミド（図３）は、ｍｖａＥＳ遺伝子の前で所望の配向性を保ちながらプロモーターをクローニングするのに都合が良いものである。ｌｌｄＤ、ｐｈｏＣ及びｐｓｔＳ遺伝子の調節領域を保持するＤＮＡフラグメントを、Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ ＳＣ１７（０）株（Ｋａｔａｓｈｋｉｎａ ＪＩ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．，２００９；１０：３４）のゲノムＤＮＡを鋳型として、ならびにプライマー３及び４、プライマー５及び６、ならびにプライマー７及び８（表１）をそれぞれ用いて、ＰＣＲにより生成し、ｐＡＨ１６２−ＭＣＳ−ｍｖａＥＳの適切な制限酵素認識部位中にクローニングした。得られたプラスミドを、図４に示す。クローニングされたプロモーターフラグメントの配列決定を行い、予想されるヌクレオチド配列に正確に対応することを確認した。
１−２−２）ｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩ染色体固定用プラスミドの構築
ｔｅｔＡＲ遺伝子を含むｐＡＨ１６２−λａｔｔＬ−ＴｃＲ−λａｔｔＲ（Ｍｉｎａｅｖａ ＮＩ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００８；８：６３）のＡａｔＩＩ−ＡｐａＩフラグメントを、プライマー９及び１０（表１）、ならびにｐＵＣ４Ｋプラスミド（Ｔａｙｌｏｒ ＬＡ及びＲｏｓｅ ＲＥ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１６，３５８，１９８８）を鋳型として用いたＰＣＲで得られたＤＮＡフラグメントと置換した。その結果、ｐＡＨ１６２−λａｔｔＬ−ＫｍＲ−λａｔｔＲが得られた（図５）。
Ｐｔａｃプロモーターを、ｐＡＨ１６２−λａｔｔＬ−ＴｃＲ−λａｔｔＲベクター（Ｍｉｎａｅｖａ ＮＩ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００８；８：６３）のＨｉｎｄＩＩＩ−ＳｐｈＩ認識部位に挿入した。その結果、染色体固定用発現ベクターｐＡＨ１６２−Ｐｔａｃが構築された。クローニングしたプロモーターフラグメントの配列を決定し、設計通りの配列であることを確認した。ｐＡＨ１６２−Ｐｔａｃのマップを、図６に示す。
ＡＴＧ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｇｅｎｅ（ロシア）により化学合成された、レアコドンを同義コドンに置換したＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ由来ＰＭＫ、ＭＶＤ及びｙＩｄＩ遺伝子を保持するＤＮＡフラグメント（図７）を、染色体固定用ベクターｐＡＨ１６２−ＰｔａｃのＳｐｈＩ−ＫｐｎＩ制限酵素認識部位中にサブクローニングした。化学合成されたＫＤｙＩオペロンを含むＤＮＡ配列を配列番号６０に示す。Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩ発現カセットを保持する得られたプラスミドｐＡＨ１６２−Ｔｃ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩを、図８（Ａ）に示す。その後、薬剤耐性マーカー遺伝子を置換する目的でｔｅｔＡＲ遺伝子を保持するｐＡＨ１６２−Ｔｃ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩのＮｏｔＩ−ＫｐｎＩフラグメントを、ｐＡＨ１６２−λａｔｔＬ−ＫｍＲ−λａｔｔＲにて対応するフラグメントにより置換した。その結果、カナマイシン耐性遺伝子ｋａｎをマーカーとするｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩプラスミドを得た（図８（Ｂ））。
古典的ＳＤ配列に連結された、メタノセラ・パルディコラ（Ｍｅｔｈａｎｏｃｅｌｌａ ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）株であるＳＡＮＡＥ［完全ゲノム配列については、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＰ０１１５３２を参照］由来の推定ｍｖｋ遺伝子のコーディング部分を含む化学合成ＤＮＡフラグメントを、上記組込み型発現ベクターｐＡＨ１６２−ＰｔａｃのＰｓｔＩ−ＫｐｎＩ認識部位中にクローニングした。ｍｖｋ遺伝子を保持する染色体固定プラスミドのマップを、図９に示す。
１−３）レシピエント株ＳＣ１７（０） ΔａｍｐＣ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０ ΔａｍｐＨ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０ Δｃｒｔ：：Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）の構築
ａｔｔＬｐｈｉ８０及びａｔｔＲｐｈｉ８０に隣接したｋａｎ遺伝子、ならびに標的染色体部位に相同な４０ｂｐ配列を含むＰＣＲ増幅ＤＮＡフラグメントのλＲｅｄ依存的な組込み（Ｋａｔａｓｈｋｉｎａ ＪＩ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．，２００９；１０：３４）、続いて、カナマイシン耐性マーカーのファージｐｈｉ８０ Ｉｎｔ／Ｘｉｓ依存的な除去（Ａｎｄｒｅｅｖａ ＩＧ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｌｅｔｔ．，２０１１；３１８（１）：５５−６０）を含む２段階の手法を用いて、ΔａｍｐＨ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０及びΔａｍｐＣ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０染色体改変を、Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ ＳＣ１７（０）株に段階的に導入した。ＳＣ１７（０）は、Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ ＡＪ１３３５５のλＲｅｄ耐性誘導体である（Ｋａｔａｓｈｋｉｎａ ＪＩ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．，２００９；１０：３４）；Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ ＡＪ１３３５５の注釈付完全ゲノム配列は、ＰＲＪＤＡ１６２０７３又はＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＰ０１２０３２．１及びＡＰ０１２０３３．１として利用可能である。ｐＭＷａｔｔｐｈｉプラスミド［Ｍｉｎａｅｖａ ＮＩ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００８；８：６３］を鋳型として用いて、プライマー１１及び１２、ならびにプライマー１３及び１４（表１）をプライマーとして用いて、それぞれａｍｐＨ及びａｍｐＣ遺伝子領域への組込みに使用されるＤＮＡフラグメントを生成した。プライマー１５及び１６、ならびにプライマー１７及び１８（表１）を、得られた染色体改変物のＰＣＲ検証に用いた。
並行して、Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ ＡＪ１３３５５ゲノムの一部である、ｐＥＡ３２０ ３２０ｋｂメガプラスミド上に位置するｃｒｔオペロンの代わりにｐｈｉ８０ファージのａｔｔＢ部位を保持するＰ．ａｎａｎａｔｉｓ ＳＣ１７（０）の誘導体を構築した。この株を得るために、ゲノム中の標的部位に相同な４０ｂｐ領域に隣接したａｔｔＬｐｈｉ８０−ｋａｎ−ａｔｔＲｐｈｉ８０を保持するＰＣＲ増幅ＤＮＡフラグメントのλＲｅｄ依存的な組込みを、以前に記載された手法（Ｋａｔａｓｈｋｉｎａ ＪＩ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．，２００９；１０：３４）にしたがって行った。ａｔｔＬｐｈｉ８０−ｋａｎ−ａｔｔＲｐｈｉ８０によるｃｒｔオペロンの置換に用いられるＤＮＡフラグメントを、プライマー１９及び２０（表１）を用いる反応で増幅した。ｐＭＷａｔｔｐｈｉプラスミド（Ｍｉｎａｅｖａ ＮＩ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００８；８：６３）を、この反応で鋳型として用いた。得られた組込み体を、ＳＣ１７（０）Δｃｒｔ：：ａｔｔＬｐｈｉ８０−ｋａｎ−ａｔｔＲｐｈｉ８０と名付けた。プライマー２１及び２２（表１）を、ＳＣ１７（０）Δｃｒｔ：：ａｔｔＬｐｈｉ８０−ｋａｎ−ａｔｔＲｐｈｉ８０．の染色体構造のＰＣＲ検証に用いた。構築株からのカナマイシン耐性マーカーの除去を、既報の手法に従いｐＡＨ１２９−ｃａｔヘルパープラスミドを用いて行った（Ａｎｄｒｅｅｖａ ＩＧ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｌｅｔｔ．，２０１１；３１８（１）：５５−６０）。オリゴヌクレオチド２１及び２２を、得られたＳＣ１７（０）Δｃｒｔ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０株のＰＣＲ検証に用いた。得られたΔａｍｐＣ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０、ΔａｍｐＨ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０及びΔｃｒｔ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０ゲノム改変物のマップをそれぞれ、図１０（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）に示す。
上記ｐＡＨ１６２−Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）プラスミドを、既報のプロトコル（Ａｎｄｒｅｅｖａ ＩＧ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｌｅｔｔ．，２０１１；３１８（１）：５５−６０）にしたがってＳＣ１７（０）Δｃｒｔ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０のａｔｔＢｐｈｉ８０部位に組み込んだ。プラスミドの組込みを、プライマー２１及び２３、ならびにプライマー２２及び２４（表１）を用いたポリメラーゼ連鎖反応で確認した。その結果、ＳＣ１７（０）Δｃｒｔ：：ｐＡＨ１６２−Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）株を得た。Δｃｒｔ：：ｐＡＨ１６２−Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）改変物のマップを、図１１（Ａ）に示す。
その後、ゲノムＤＮＡエレクトロポレーション手法（Ｋａｔａｓｈｋｉｎａ ＪＩ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．，２００９；１０：３４）を介してＳＣ１７（０）Δｃｒｔ：：ｐＡＨ１６２−Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）の遺伝形質をＳＣ１７（０） ΔａｍｐＣ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０ ΔａｍｐＨ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０へ移行させた。得られた株はテトラサイクリン耐性遺伝子ｔｅｔＲＡをマーカーとして利用している。ｔｅｔＲＡマーカー遺伝子を含むｐＡＨ１６２−Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）組込み型プラスミドのベクター部分を、既報のｐＭＷ−ｉｎｔｘｉｓ−ｃａｔヘルパープラスミド［Ｋａｔａｓｈｋｉｎａ ＪＩ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．，２００９；１０：３４］を用いて除去した。その結果、マーカー遺伝子欠損株ＳＣ１７（０） ΔａｍｐＨ：：ａｔｔＢφ８０ ΔａｍｐＣ：：ａｔｔＢφ８０ Δｃｒｔ：：Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）を得た。Δｃｒｔ：：Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）ゲノム改変物のマップを、図１１（Ｂ）に示す。
１−４）ＳＷＩＴＣＨ株のセットの構築
ｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩプラスミドを、既報のプロトコル（Ａｎｄｒｅｅｖａ ＩＧ ｅｔ ａｌ． ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｌｅｔｔ． ２０１１；３１８（１）：５５−６０）にしたがい、ＳＣ１７（０）ΔａｍｐＨ：：ａｔｔＢφ８０ ΔａｍｐＣ：：ａｔｔＢφ８０ Δｃｒｔ：：Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）／ｐＡＨ１２３−ｃａｔ株の染色体に組み込んだ。５０ｍｇ／Ｌカナマイシンを含むＬＢアガー上に細胞を撒いた。増殖したＫｍＲクローンを、プライマー１１及び１５、ならびにプライマー１１及び１７（表１）を用いたＰＣＲ反応で試験した。ΔａｍｐＨ：：ａｔｔＢφ８０又はΔａｍｐＣ：：ａｔｔＢφ８０ｍに組み込まれたｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩプラスミドを保持する株を選択した。ΔａｍｐＨ：：ｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩ、ΔａｍｐＣ：：ｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩ、ΔａｍｐＣ：：Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩ染色体改変物のマップを、図１２（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）に示す。
ｐＡＨ１６２−Ｐｘ−ｍｖａＥＳ（ここで、Ｐｘは、以下の調節領域のうちの一つである：ａｒａＣ−Ｐａｒａ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、ＰｌｌｄＤ、ＰｐｈｏＣ、ＰｐｓｔＳ）を、既報のプロトコル［Ａｎｄｒｅｅｖａ ＩＧ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｌｅｔｔ．，２０１１；３１８（１）：５５−６０］にしたがってｐＡＨ１２３−ｃａｔヘルパープラスミドを用いてＳＣ１７（０） ΔａｍｐＣ：：ｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩ ΔａｍｐＨ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０ Δｃｒｔ：：Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）及びＳＣ１７（０） ΔａｍｐＣ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０ ΔａｍｐＨ：：ｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩ Δｃｒｔ：：Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）レシピエント株のａｔｔＢｐｈｉ８０部位に挿入した。その結果、ＳＷＩＴＣＨ−Ｐｘ−１及びＳＷＩＴＣＨ−Ｐｘ−２とそれぞれ名付けられた２セットの株を得た。ΔａｍｐＨ：：ｐＡＨ１６２−Ｐｘ−ｍｖａＥＳ及びΔａｍｐＣ：：ｐＡＨ１６２−Ｐｘ−ｍｖａＥＳ染色体改変物のマップを図１３に示す。
Figure 0006750630
実施例２：ＳＣ１７（０）ΔｇｃｄとＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣΔｇｃｄの構築
Ｐ．アナナティスのｇｃｄ遺伝子は、グルコースデヒドロゲナーゼをコードしており、Ｐ．アナナティスは好気性増殖中にグルコン酸を蓄積することが知られている（Ａｎｄｒｅｅｖａ ＩＧら，ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｌｅｔｔ．２０１１ Ｍａｙ；３１８（１）：５５−６０）。
プライマーｇｃｄ−ａｔｔＬ及びｇｃｄ−ａｔｔＲ（表２）及び鋳型としてｐＭＷ１１８−ａｔｔＬ−ｋａｎ−ａｔｔＲプラスミドを用いるＰＣＲで得られたＤＮＡフラグメントのλＲｅｄ依存的な組込み（Ｍｉｎａｅｖａ ＮＩら，ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００８；８：６３）を用いて、ｇｃｄ遺伝子が破壊されたＳＣ１７（０）Δｇｃｄ株を構築する。組込み体を確認するため、プライマーｇｃｄ−ｔ１及びｇｃｄ−ｔ２（表２）を用いる。
ＳＣ１７（０）Δｇｃｄ株のゲノムＤＮＡを、Ｗｉｚａｒｄ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（プロメガ）を用いて単離し、既報の方法〔Ｋａｔａｓｈｋｉｎａ ＪＩら，ＢＭＣ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００９；１０：３４〕にしたがってＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ株のマーカーを含まない誘導体中に電気形質転換する。その結果、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ−Δｇｃｄ（ＫｍＲ）株を得る。プライマーｇｃｄ−ｔ１及びｇｃｄ−ｔ２（表２）を、得られた組込み体のＰＣＲ解析に用いる。カナマイシン耐性マーカー遺伝子を、標準的なλＩｎｔ／Ｘｉｓ媒介手法〔Ｋａｔａｓｈｋｉｎａ ＪＩら，ＢＭＣ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００９；１０：３４〕にしたがって得る。得られた株を、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ株と命名する。
Figure 0006750630
実施例３：ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
３−１）ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ株へのリナロールシンターゼ発現プラスミドの導入
実施例２で得られたＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ株のコンピテントセルを調製し、エレクトロポレーション法により実施例１で構築したｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ２−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊、あるいはｐＡＣＹＣ１７７を導入した。得られた株をそれぞれ、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、及びＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ｐＡＣＹＣ１７７株と命名した。
上記で得られた株を５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートにて３４℃、１６時間培養した後、プレート上の菌体をイノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて適当量掻き取り、２０％グリセロール溶液に懸濁し、適当量ずつ分注した上で−８０℃に保存した。
３−２）ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、及びＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ｐＡＣＹＣ１７７株のグリセロールストックを融解し、各株の菌体懸濁液５０μＬを５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートに均一に塗布し、３４℃にて１６時間培養した。得られたプレート上の菌体を、イノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）のループ部分１／４程度の量を掻き取り、ＡＧＣテクノグラス株式会社製試験管（直径×長さ×肉厚（ｍｍ）＝２５×２００×１．２）中の、５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含む以下に記載の発酵培地（表３）５ｍＬに接種し、往復振とう培養装置で３０℃、１２０ｒｐｍの条件にて２４時間培養した。ミリスチン酸イソプロピル添加条件の発酵用培地を表３に示し、ミリスチン酸イソプロピル無添加条件の発酵培地組成を表４に示す。
Figure 0006750630
Figure 0006750630
滅菌完了後に上記Ａ区、Ｂ区、Ｃ区を混合した。試験管に分注した５ｍＬの発酵培地に対して、植菌後に１ｍＬのミリスチン酸イソプロピル（東京化成工業株式会社製）を添加した。一方で、ミリスチン酸イソプロピル無添加の条件での培養も合わせて行った。
培養開始から２４時間後に、ミリスチン酸イソプロピル、及び培養上清中のリナロール濃度をガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（株式会社島津製作所製）を用いて以下の条件にて測定した。カラムはＤＢ−５（アジレント・テクノロジー株式会社製 長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）を使用し、リナロール標準液は試薬リナロール（和光純薬工業株式会社製）を用いて調製した。測定用のサンプルは適宜エタノール（和光純薬工業株式会社製）で希釈した。
気化室温度 ３６０．０℃
注入量 １．０μＬ
注入モード スプリット １：１０
キャリアガス Ｈｅ
制御モード 線速度
圧力 １２５．５ｋＰａ
全流量 ２０．５ｍＬ／ｍｉｎ
カラム流量 １．５９ｍＬ／ｍｉｎ
線速度 ３６．３ｃｍ／ｓｅｃ
パージ流量 ３．０ｍＬ／ｍｉｎ
カラムオーブン温度プログラム 合計時間 ２１．５ｍｉｎ
レート（℃／ｍｉｎ） 温度（℃） ホールド時間（ｍｉｎ）
６５．０ ５．０
５．０ １０５．０ ０．５
３５．０ ２９７．５ ２．５
検出器温度 ３７５．０℃
検出器 ＦＩＤ
メイクアップガス Ｈｅ（３０．０ｍＬ／ｍｉｎ）
水素流量 ４０．０ｍＬ／ｍｉｎ
空気 ４００．０ｍＬ／ｍｉｎ
リナロールは発酵液中の蓄積濃度に換算した値として示す。ミリスチン酸イソプロピル添加条件の試験管２本の結果の平均値を表５に示し、ミリスチン酸イソプロピル無添加条件の結果を表６に示す。
Figure 0006750630
Figure 0006750630
実施例４：ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ株由来リナロールシンターゼ発現株によって生産されたリナロールの光学異性体分割カラムを用いたＧＣ分析
実施例３で得られたＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株によって生産されたリナロールの鏡像異性体の分析を実施した。分析にはミリスチン酸イソプロピル添加条件の培養サンプルを使用した。ガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（株式会社島津製作所製）を用いて以下の条件にて測定した。カラムは光学異性体分割カラムであるＲｔ（登録商標）−ｂＤＥＸｓｍ（ＲＥＳＴＥＫ社製 長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）を使用し、Ｒ−とＳ−の混合リナロール標準液は和光純薬工業株式会社製の試薬リナロール（カタログコード：１２６−００９９３）を用い、Ｒ−リナロールの標準液はシグマアルドリッチ社製の試薬リナロール（カタログコード：６２１３９−２５ＭＬ）を用いて調整した。Ｓ−リナロールの試薬は入手可能な物が存在しなかったため、Ｒ−とＳ−の混合リナロール標準液とＲ−リナロールの標準液のクロマトグラムを比較することでＳ−リナロールのピークを同定した。測定用のサンプルは適宜エタノール（和光純薬工業株式会社製）で希釈した。
気化室温度 ３５０．０℃
注入量 １．０μＬ
注入モード スプリット １：１０
キャリアガス Ｈｅ
制御モード 線速度
圧力 １５３．３ｋＰａ
全流量 ２１．５ｍＬ／ｍｉｎ
カラム流量 １．６８ｍＬ／ｍｉｎ
線速度 ４０ｃｍ／ｓｅｃ
パージ流量 ３．０ｍＬ／ｍｉｎ
カラムオーブン温度プログラム 合計時間 ３０．０ｍｉｎ
レート（℃／ｍｉｎ） 温度（℃） ホールド時間（ｍｉｎ）
１１５．０ １０．０
１０．０ ２２５．０ ９．０
検出器温度 ３６５．０℃
検出器 ＦＩＤ
メイクアップガス Ｈｅ（３０．０ｍＬ／ｍｉｎ）
水素流量 ４０．０ｍＬ／ｍｉｎ
空気 ４００．０ｍＬ／ｍｉｎ
Ｒ−とＳ−の混合リナロール標準液、及びＲ−リナロールの標準液のクロマトグラムをそれぞれ図１４、１５に示す。Ｓ．ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ、及びＣ．ｓａｔｉｖｕｍ由来リナロールシンターゼ発現株より生成されたリナロールサンプルのクロマトグラムをそれぞれ図１６、１７に示す。
Ｓ．ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ由来リナロールシンターゼによって生成されたリナロールはＲ−リナロールのピークのみが検出された。Ｓ．ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ由来リナロールシンターゼを利用する事によりリナロールとしてＲ−リナロールのみを得られることが示された。この時のＲ−リナロールの鏡像体過剰率（Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｉｃ Ｅｘｃｅｓｓ）は１００％ｅ．ｅ．であった。一方で、Ｃ．ｓａｔｉｖｕｍ由来リナロールシンターゼより生成されたリナロールはＲ−、Ｓ−リナロールのいずれのピークも検出された。それぞれのピーク面積から大まかな生成比を算出すると、Ｃ．ｓａｔｉｖｕｍ由来リナロールシンターゼではＲ−：Ｓ−＝１：７の比であった。
実施例５：ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ株由来リナロールシンターゼ発現株によって生産されたリナロールのヘッドスペース（ＨＳ）−ＧＣ／ＭＳ分析
実施例３で得られたＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株のミリスチン酸イソプロピル無添加条件の培養サンプルを用いて、それぞれの培養液中の揮発性成分におけるリナロール純度をＨＳ−ＧＣ／ＭＳによって測定した。分析にはミリスチン酸イソプロピル無添加条件の培養サンプルを使用した。ガスクロマトグラフ質量分析計ＧＣＭＳ−ＴＱ８０３０（株式会社島津製作所製）を用いて以下の条件にて測定した。カラムはＨＰ-５ｍｓ（アジレント・テクノロジー株式会社製 長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）を使用し、リナロール標準液は試薬リナロール（カタログコード：１２６−００９９３）を用いて調整した。ＨＳ用バイアルは窒素置換した上で使用し、測定用の試薬標準液、及び培養サンプルは適宜超純水で希釈した。
［ＧＣ条件］
気化室温度 ２００．０℃
注入量 １ｍＬ
注入モード スプリット １：３０
キャリアガス Ｈｅ
制御モード 線速度
圧力 ５３．５ｋＰａ
全流量 ３４．０ｍＬ／ｍｉｎ
カラム流量 １．０ｍＬ／ｍｉｎ
線速度 ３６．３ｃｍ／ｓｅｃ
パージ流量 ３．０ｍＬ／ｍｉｎ
平衡時間 ３．０ｍｉｎ
カラムオーブン温度プログラム 合計時間 ３３．０ｍｉｎ
レート（℃／ｍｉｎ） 温度（℃） ホールド時間（ｍｉｎ）
５０．０ １０．０
１０．０ ２３０．０ ５．０
［ＭＳ条件］
イオン源温度 ２５０．０℃
インターフェイス温度 ２８０℃
溶媒溶出時間 ２．０ｍｉｎ
開始ｍ／ｚ ５０
終了ｍ／ｚ ２００
［ＨＳ条件］
バイアル加温温度 ８０．０℃
バイアル加温時間 １８００ｓｅｃ
シリンジ加温温度 ９５．０℃
シリンジコンディショニング ２４０ｓｅｃ
サイクルタイム ２５８０ｓｅｃ
Ｒ−とＳ−の混合リナロール標準液のトータルイオンクロマトグラム（ＴＩＣ）を図１８に示し、同定された物質を表７に示す。標品を分析したリナロール以外はフラグメントイオンピークから推定された物質名を示した。また、Ｓ．ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓの培養サンプルのＴＩＣを図１９に示し、同定された化合物を表８に示す。比較対象として、ラベンダー由来（Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄ ２０１６；８２（０１／０２）：１６３−１７０）、ベルガモット由来（Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２００９，１４（２），８３９−８４９；）の精油成分中のリナロール、及び比較的多く含まれているリナロール以外の物質の精油成分中の割合を表９に示した。
Figure 0006750630
Figure 0006750630
Figure 0006750630
（表９の脚注）
ａ）Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ由来抽出物（Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄ ２０１６；８２（０１／０２）：１６３−１７０）
ｂ）Ｃｉｔｒｕｓ ａｕｒａｎｔｉｕｍ ｓｕｂｓｐ．Ｂｅｒｇａｍｉａ由来抽出物（（Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２００９，１４（２），８３９−８４９；）
以上の結果より、発酵液に含まれる揮発性成分（香気成分）の面積百分率法による含量について、Ｒ−リナロールが８９．５％と非常に高い事が明らかとなった。また、酢酸リナリル、リモネン、カリオフィリンはリナロールを含む植物由来の抽出物に含まれる事が知られている。発酵液に含まれる揮発性成分（香気成分）として、酢酸リナリル、リモネン、カリオフィリンの生成は検出されなかった。このことから、本発明による製法を利用する事により、揮発性成分（香気成分）中でＲ−リナロールの純度の高いリナロール組成物を生産できることが明らかになった。
本結果より、Ｓ．ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ由来リナロールシンターゼ発現株は、その揮発成分において面積比率で８５％以上の高い比率でリナロールを生成していることが示された。また、本結果は、放線菌由来リナロールシンターゼを発現する微生物を培養することにより、鏡像体過剰率が高く、発酵液の揮発成分中のリナロール純度が高いＲ−リナロールを得ることができることを示している。
実施例６：リナロールシンターゼ発現プラスミドの構築
６−１）Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ａｒｇｕｔａ（サルナシ）由来リナロールシンターゼ遺伝子の取得
Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ａｒｇｕｔａ由来リナロールシンターゼ（ＡａＬＩＮＳ）遺伝子の塩基配列（ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ：ＧＱ３３８１５３）、及びアミノ酸配列（ＧｅｎＰｅｐｔ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ： ＡＤＤ８１２９４）は既に知られている（Ｃｈｅｎ，Ｘ．ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３７，２３２−２４３）。Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ａｒｇｕｔａ由来リナロールシンターゼタンパク質のアミノ酸配列、及び遺伝子の塩基配列を配列番号７８、及び配列番号７９に示す。ＡａＬＩＮＳ遺伝子を効率的に発現させる為、コドンを最適化し、さらに葉緑体移行シグナルが切断されたＡａＬＩＮＳ遺伝子を設計し、これをｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳと名付けた。ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳの塩基配列を配列番号３に示す。ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ遺伝子にｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）を付加したＤＮＡは化学合成された後、ｐＭＷ１１９（株式会社ニッポンジーン製）にクローニングされ、得られたプラスミドをｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳと名付けた。
６−２）ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現プラスミドの構築
配列番号８１に示したプライマーと配列番号８２に示したプライマーを用いてｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ断片を得た。さらに、配列番号８３に示したプライマーと配列番号８４に示したプライマーを用いてｐＭＷ１１９−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｉｓｐＡ＊断片を得た。精製したＰｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ断片、及びｉｓｐＡ*断片を制限酵素ＰｓｔＩとＳｃａＩで消化したｐＡＣＹＣ１７７（株式会社ニッポンジーン製）にＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。
実施例７：ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
７−１）ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ株へのリナロールシンターゼ発現プラスミドの導入
実施例２で得られたＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ株のコンピテントセルを調製し、エレクトロポレーション法により実施例６で構築したｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊、実施例１で構築したｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ２−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊ｘ、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ２−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ、あるいはｐＡＣＹＣ１７７を導入した。得られた株をそれぞれ、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、及びＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ｐＡＣＹＣ１７７株と命名した。
上記で得られた株を５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートにて３４℃、１６時間培養した後、プレート上の菌体をイノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて適当量掻き取り、２０％グリセロール溶液に懸濁し、適当量ずつ分注した上で−８０℃に保存した。
７−２）ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ株、及びＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ｐＡＣＹＣ１７７株のグリセロールストックを融解し、各株の菌体懸濁液５０μＬを５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートに均一に塗布し、３４℃にて１６時間培養した。得られたプレート上の菌体を、イノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）のループ部分１／４程度の量を掻き取り、ＡＧＣテクノグラス株式会社製試験管（直径×長さ×肉厚（ｍｍ）＝２５×２００×１．２）中の、５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含む実施例３に記載の発酵培地（組成は表３に記載）５ｍＬに接種し、実施例３と同様にして往復振とう培養装置で３０℃、１２０ｒｐｍの条件にて２４時間培養した。
培養開始から２４時間後に、ミリスチン酸イソプロピル、及び培養上清中のリナロール濃度をガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（株式会社島津製作所製）を用いて実施例３に記載の条件にて測定した。
リナロールは発酵液中の蓄積濃度に換算した値として示す。ミリスチン酸イソプロピル添加条件の試験管２本の結果の平均値を表１０に示し、ミリスチン酸イソプロピル無添加条件の結果を表１１に示す。
Figure 0006750630
Figure 0006750630
実施例８：ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ株由来リナロールシンターゼ発現株によって生産されたリナロールの光学異性体分割カラムを用いたＧＣ分析
実施例７で得られたＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株によって生産されたリナロールの鏡像異性体の分析を実施した。分析にはミリスチン酸イソプロピル添加条件の培養サンプルを使用した。ガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（株式会社島津製作所製）を用いて実施例４に記載の条件にて測定した。
Ｒ体とＳ体の混合リナロール標準液、Ｒ−リナロールの標準液のクロマトグラムをそれぞれ図２０、２１に示す。Ａ．ａｒｇｕｔａ、及びＣ．ｓａｔｉｖｕｍ由来リナロールシンターゼ発現株より生成されたリナロールサンプルのクロマトグラムをそれぞれ図２２、２３に示す。
Ａ．ａｒｇｕｔａ由来リナロールシンターゼによって生成されたリナロールはＳ体のピークのみが検出された。Ａ．ａｒｇｕｔａ由来リナロールシンターゼを利用することによりリナロールとしてＳ−リナロールのみを得られることが示された。このときのＳ体の鏡像過剰率（Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｉｃ Ｅｘｃｅｓｓ）は１００％である。一方で、Ｃ．ｓａｔｉｖｕｍ由来リナロールシンターゼより生成されたリナロールはＲ体、Ｓ体いずれのピークも検出された。それぞれのピーク面積から大まかな生成比を算出すると、Ｒ体：Ｓ体＝１：７の比であった。
実施例９：ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ株由来リナロールシンターゼ発現株によって生産されたリナロールのヘッドスペース（ＨＳ）−ＧＣ／ＭＳ分析
実施例７で得られたＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株のミリスチン酸イソプロピル無添加条件の培養サンプルを用いて、それぞれの培養液中の揮発性成分におけるリナロール純度を、ＨＳ−ＧＣ／ＭＳによって測定した。ガスクロマトグラフ質量分析計ＧＣＭＳ−ＴＱ８０３０（株式会社島津製作所製）を用いて実施例５に記載の条件にて測定した。カラムはＨＰ−５ｍｓ（アジレント・テクノロジー株式会社製 長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）を使用し、リナロール標準液は試薬リナロール（カタログコード：１２６−００９９３）を用いて調整した。ＨＳ用バイアルは窒素で置換して使用し、測定用の試薬標準液、及び培養サンプルは適宜超純水で希釈した。
Ｒ−とＳ−の混合リナロール標準液のトータルイオンクロマトグラム（ＴＩＣ）を図２４に示し、同定された物質を表１２に示す。標品を分析したリナロール以外はフラグメントイオンピークから推定された物質名を示した。また、Ａ． ａｒｇｕｔａ由来リナロールシンターゼ発現株の培養サンプルのＴＩＣを図２５に示し、同定された化合物を表１３に示す。比較対象として、ラベンダー由来（Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄ ２０１６；８２（０１／０２）：１６３−１７０）、ベルガモット由来（Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２００９，１４（２），８３９−８４９；）の精油成分中のリナロール、及び比較的多く含まれているリナロール以外の物質の精油成分中の割合を表１４に示した。
Figure 0006750630
Figure 0006750630
Figure 0006750630
（表１４の脚注）
ａ）Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ由来抽出物（Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄ ２０１６；８２（０１／０２）：１６３−１７０）
ｂ）Ｃｉｔｒｕｓ ａｕｒａｎｔｉｕｍ ｓｕｂｓｐ．Ｂｅｒｇａｍｉａ由来抽出物（（Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２００９，１４（２），８３９−８４９；）
以上の結果より、発酵液に含まれる揮発性成分（香気成分）の面積百分率法による含量について、Ｓ−リナロールが９６．４５％と非常に高い事が明らかとなった。また、酢酸リナリル、リモネン、カリオフィリンはリナロールを含む植物由来の抽出物に含まれることが知られている。発酵液に含まれる揮発性成分（香気成分）として、酢酸リナリル、リモネン、カリオフィリンの生成は検出されなかった。この事から、本発明による製法を利用する事により、揮発性成分（香気成分）中でＳ−リナロールの純度の高いリナロール組成物を生産できることが明らかになった。
本結果より、Ａ．ａｒｇｕｔａ由来リナロールシンターゼ発現株は、その揮発成分において面積比率で９５％以上の高い比率でリナロールを生成していることが示された。また、本結果は、Ａ．ａｒｇｕｔａ由来リナロールシンターゼを発現する微生物を培養することにより、鏡像体過剰率が高く、発酵液の揮発成分中のリナロール純度が高いＳ−リナロールを得ることができることを示している。
Figure 0006750630
Figure 0006750630
実施例１０：リナロールシンターゼのデータベース検索
サルナシ由来リナロールシンターゼ（ＧｅｎＰｅｐｔ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ＡＤＤ８１２９４．１）のアミノ酸配列を問い合わせ配列とし、ＢＬＡＳＴＰプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，"Ｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌ．"Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３−４１０，１９９０）によりｎｏｎ ｒｅｄｕｎｄａｎｔデータベースに対して相同性検索を行った。また、Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏｉｌデータベース（Ｋｕｍａｒｉ Ｓ．ｅｔ ａｌ．，“ＥｓｓＯｉｌＤＢ：ａ ｄａｔａｂａｓｅ ｏｆ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏｉｌｓ ｒｅｆｌｅｃｔｉｎｇ ｔｅｒｐｅｎｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ ｐｌａｎｔ ｋｉｎｇｄｏｍ”Ｄａｔａｂａｓｅ，２０１４，１−１２ ｄｏｉ：１０．１０９３／ｄａｔａｂａｓｅ／ｂａｕ１２０）よりリナロールを産生する事が報告されている植物名を検索した。二つの結果を照らし合わせる事で、リナロール生産能が知られた植物種よりリナロールシンターゼの候補を抽出した。更に、候補となる配列の参照文献を確認し、リナロールシンターゼとしての機能が期待された１３種の酵素を抽出した（表１７）。これら１３種の酵素のアミノ酸配列について、葉緑体移行シグナル配列をＳｉｇｎａｌＰあるいは表１８に記載のある文献情報に従い調査した。シグナル配列の存在が示唆されるものについては、予想されるシグナル配列を除き、成熟体のアミノ酸配列を得た。これらのアミノ酸配列をコードする遺伝子配列を配列番号８５〜９７（Ｍ１〜Ｍ１３）に示す（表１７）。これらについて、コドン利用をＰａｎｔｏｅａ ａｎａｎａｔｉｓに最適化した配列に基づき遺伝子合成を行った。コドン利用最適化後のＤＮＡ配列を配列番号９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２（Ｍ１４，Ｍ１６，Ｍ１８，Ｍ２０，Ｍ２２，Ｍ２４，Ｍ２６，Ｍ２８，Ｍ３０，Ｍ３２，Ｍ３４，Ｍ３６，Ｍ３８）に示す（表１８）。これらのＤＮＡ配列に対し、表１８に示す遺伝子名を付与した。これらのＤＮＡ配列によりコードされるアミノ酸配列を配列番号９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１及び１２３（Ｍ１５，Ｍ１７，Ｍ１９，Ｍ２１，Ｍ２３，Ｍ２５，Ｍ２７，Ｍ２９，Ｍ３１，Ｍ３３，Ｍ３５，Ｍ３７，Ｍ３９）に示す（表１８）。コドン利用最適化後の各遺伝子のＤＮＡを化学合成により得た後、ｐＵＣ５７にクローニングした。得られたプラスミドの名称を表１９に記す。
Figure 0006750630
Figure 0006750630
Figure 0006750630
実施例１１：各種リナロールシンターゼ発現プラスミドの構築
１１−１）Ａｔ１ＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現プラスミドの構築
プライマーＱ２８（配列番号１２４）とプライマーＱ２９（配列番号１２５）に示したを用いて、表１９に記載のｐＵＣ５７−Ａｔ１ＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、Ａｔ１ＬＩＮＳ断片を得た。さらにプライマーＱ４６（配列番号１４２）とプライマーＱ４７（配列番号１４３）を用いて、実施例６で構築したプラスミドｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｐＡＣＹＣ１７７とｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）およびｉｓｐＡ*を含むＤＮＡ断片を得た。これら２種のＤＮＡ断片をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−Ａｔ１ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。
１１−２）Ａｔ２ＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現プラスミドの構築
プライマーＱ３０（配列番号１２６）とプライマーＱ３１（配列番号１２７）を用いて、表１９に記載のｐＵＣ５７−ＡＴ２ＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、Ａｔ２ＬＩＮＳ断片を得た。さらにプライマーＱ４６（配列番号１４２）とプライマーＱ４７（配列番号１４３）を用いて、実施例１で構築したプラスミドｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｐＡＣＹＣ１７７とｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）およびｉｓｐＡ*を含む断片を得た。これら２種のＤＮＡ断片をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−Ａｔ２ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。
１１−３）ＭｄＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現プラスミドの構築
プライマーＱ３２（配列番号１２８）とプライマーＱ３３（配列番号１２９）に示したを用いて、表１９に記載のｐＵＣ５７−ＭｄＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、ＭｄＬＩＮＳ断片を得た。さらにプライマーＱ４６（配列番号１４２）とプライマーＱ４７（配列番号１４３）を用いて、実施例６で構築したプラスミドｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｐＡＣＹＣ１７７とｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）およびｉｓｐＡ*を含む断片を得た。これら２種のＤＮＡ断片をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−ＭｄＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。
１１−４）ＰｆＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現プラスミドの構築
プライマーＱ３４（配列番号１３０）とプライマーＱ３５（配列番号１３１）を用いて、表１９に記載のｐＵＣ５７−ＰｆＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、ＰｆＬＩＮＳ断片を得た。さらにプライマーＱ４６（配列番号１４２）とプライマーＱ４７（配列番号１４３）を用いて、実施例６で構築したプラスミドｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｐＡＣＹＣ１７７とｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）およびｉｓｐＡ*を含む断片を得た。これら２種のＤＮＡ断片をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−ＰｆＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。
１１−５）Ｖｖ１ＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現プラスミドの構築
プライマーＱ３６（配列番号１３２）とプライマーＱ３７（配列番号１３３）を用いて、表１９に記載のｐＵＣ５７−Ｖｖ１ＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、Ｖｖ１ＬＩＮＳ断片を得た。さらにプライマーＱ４６（配列番号１４２）とプライマーＱ４７（配列番号１４３）を用いて、実施例６で構築したプラスミドｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｐＡＣＹＣ１７７とｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）およびｉｓｐＡ*を含む断片を得た。これら２種のＤＮＡ断片をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｖｖ１ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。
１１−６）Ｖｖ２ＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現プラスミドの構築
プライマーＱ３８（配列番号１３４）とプライマーＱ３９（配列番号１３５）を用いて、表１９に記載のｐＵＣ５７−Ｖｖ２ＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、Ｖｖ２ＬＩＮＳ断片を得た。さらにプライマーＱ４６（配列番号１４２）とプライマーＱ４７（配列番号１４３）を用いて、実施例６で構築したプラスミドｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｐＡＣＹＣ１７７とｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）およびｉｓｐＡ*を含む断片を得た。これら２種のＤＮＡ断片をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｖｖ２ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。
１１−７）ＭｃＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現プラスミドの構築
プライマーＱ４０（配列番号１３６）とプライマーＱ４１（配列番号１３７）を用いて、表１９に記載のｐＵＣ５７−ＭｃＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、ＭｃＬＩＮＳ断片を得た。さらにプライマーＱ４６（配列番号１４２）とプライマーＱ４７（配列番号１４３）を用いて、実施例６で構築したプラスミドｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｐＡＣＹＣ１７７とｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）およびｉｓｐＡ*を含む断片を得た。これら２種のＤＮＡ断片をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−ＭｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。
１１−８）ＯｂＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現プラスミドの構築
プライマーＱ４２（配列番号１３８）とプライマーＱ４３（配列番号１３９）を用いて、表１９に記載のｐＵＣ５７−ＯｂＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、ＯｂＬＩＮＳ断片を得た。さらにプライマーＱ４６（配列番号１４２）とプライマーＱ４７（配列番号１４３）を用いて、実施例６で構築したプラスミドｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｐＡＣＹＣ１７７とｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）およびｉｓｐＡ*を含む断片を得た。これら２種のＤＮＡ断片をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−ＯｂＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。
１１−９）ＣｂＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現プラスミドの構築
プライマーＱ４４（配列番号１４０）とプライマーＱ４５（配列番号１４１）を用いて、表１９に記載のｐＵＣ５７−ＣｂＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、ＣｂＬＩＮＳ断片を得た。さらにプライマーＱ４６（配列番号１４２）とプライマーＱ４７（配列番号１４３）を用いて、実施例６で構築したプラスミドｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｐＡＣＹＣ１７７とｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）およびｉｓｐＡ*を含む断片を得た。これら２種のＤＮＡ断片をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−ＣｂＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。
実施例１２：ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
１２−１）ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ株へのリナロールシンターゼ発現プラスミドの導入
実施例２で得られたＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ株のコンピテントセルを調製し、エレクトロポレーション法により実施例１１で構築したｐＡＣＹＣ１７７−Ａｔ１ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*、ｐＡＣＹＣ１７７−Ａｔ２ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*、ｐＡＣＹＣ１７７−ＭｄＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*、ｐＡＣＹＣ１７７−ＰｆＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｖｖ１ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｖｖ２ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*、ｐＡＣＹＣ１７７−ＭｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*、ｐＡＣＹＣ１７７−ＯｂＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*、ｐＡＣＹＣ１７７−ＣｂＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*あるいはｐＡＣＹＣ１７７を導入した。得られた株をそれぞれ、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／Ａｔ１ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／Ａｔ２ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＭｄＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＰｆＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／Ｖｖ１ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／Ｖｖ２ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＭｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＯｂＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＣｂＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、及びＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ｐＡＣＹＣ１７７株と命名した。
上記で得られた株を５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートにて３４℃、１６時間培養した後、プレート上の菌体をイノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて適当量掻き取り、２０％グリセロール溶液に懸濁し、適当量ずつ分注した上で−８０℃に保存した。
１２−２）ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／Ａｔ１ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／Ａｔ２ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＭｄＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＰｆＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／Ｖｖ１ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／Ｖｖ２ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＭｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＯｂＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＣｂＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、及びＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ｐＡＣＹＣ１７７株のグリセロールストックを融解し、各株の菌体懸濁液５０μＬを５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートに均一に塗布し、３４℃にて１６時間培養した。得られたプレート上の菌体を、イノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）のループ部分１／４程度の量を掻き取り、ＡＧＣテクノグラス株式会社製試験管（直径×長さ×肉厚（ｍｍ）＝２５×２００×１．２）中の、５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含む実施例３で用いた発酵培地（表３）５ｍＬに接種し、往復振とう培養装置で３０℃、１２０ｒｐｍの条件にて２４時間培養した。発酵培地は滅菌完了後に上記Ａ区、Ｂ区、Ｃ区を混合して調製した。試験管に分注した５ｍＬの発酵培地に対して、植菌後に１ｍＬのミリスチン酸イソプロピル（東京化成工業株式会社製）を添加した。
培養開始から２４時間後に、ミリスチン酸イソプロピル、及び培養上清中のリナロール濃度をガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（株式会社島津製作所製）を用いて実施例３に記載の条件にて測定した。
リナロールは発酵液中の蓄積濃度に換算した値として示す。ミリスチン酸イソプロピル添加条件の試験管２本の結果の平均値を表２０に示す。
Figure 0006750630
実施例１３：ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ株由来リナロールシンターゼ発現株によって生産されたリナロールの光学異性体分割カラムを用いたＧＣ分析
実施例１２で得られたＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／Ａｔ１ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／Ａｔ２ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＭｄＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＰｆＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／Ｖｖ１ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／Ｖｖ２ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＭｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＯｂＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＣｂＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株によって生産されたリナロールの鏡像異性体の分析を実施した。分析には実施例１２と同条件の培養サンプルを使用した。ガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（株式会社島津製作所製）を用いて実施例４と同条件にて測定した。
それぞれの株の培養サンプルで検出されたＳ−リナロールのピーク面積とＲ−リナロールのピーク面積の和に対するＳ−リナロールのピーク面積、またはＲ−リナロールのピーク面積の割合を表２１に示す。
Figure 0006750630
Ｍａｌｕｓ ｘ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ由来リナロールシンターゼによって生成されたリナロールはＳ体のピークのみが検出された。Ｍａｌｕｓ ｘ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ由来リナロールシンターゼを利用することによりＳ体の鏡像体過剰率が１００％のリナロールを得られることが示された。Ｏｃｉｍｕｍ ｂａｓｉｌｉｃｕｍ由来リナロールシンターゼによって生成されたリナロールはＲ体のピークのみが検出された。Ｏｃｉｍｕｍ ｂａｓｉｌｉｃｕｍ由来リナロールシンターゼを利用することによりＲ体の鏡像体過剰率が１００％のリナロールを得られることが示された。それ以外のリナロールシンターゼより生成されたリナロールはＲ体、Ｓ体いずれのピークも検出された。
実施例１４：リナロールシンターゼ発現プラスミドの構築
コリネ型細菌としてＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ（Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）２２５６株（ＡＴＣＣ１３８６９）を利用した（Ｏｋｕｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，１９６２，Ｓａｎｔａｍａｒｉａ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｔｓｕｃｈｉｄａ ｅｔ ａｌ．，１９８６）。Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍでｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ遺伝子とｉｓｐＡ遺伝子を発現させる為のプラスミドは次の手順で構築した。配列番号１４４及び１４５に示したプライマー８１４と８１５を用いて、実施例１で取得したｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｏｐｔＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*断片を取得した。次にＥｌｏｎｇａｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ Ｔｕのプロモーター配列（以下、Ｐ０４８０）（国際公開２０１３／１７９７２２Ａ１号）を取得する目的でＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ ２２５６株の染色体ＤＮＡを鋳型として、配列番号１４６及び１４７に示したプライマー８１２と８１３を用いてＰＣＲを行い、Ｐ０４８０断片を取得した。続いてＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍとＥ．ｃｏｌｉのシャトルベクター・ｐＶＫ９（国際公開２０１３／１７９７２２Ａ１号）を制限酵素ＸｂａＩ（タカラバイオ社製）にて消化した（Ｍｉｗａ ｅｔ ａｌ．，１９８５）。精製したｏｐｔＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*断片と、Ｐ０４８０のＰＣＲ産物、ＸｂａＩにて消化後精製したｐＶＫ９を、Ｉｎ−Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社製）を用いて連結した。得られたｏｐｔＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*遺伝子発現用プラスミドをｐＶＫ９−Ｐ０４８０−ｏｐｔＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*と命名し、このプラスミドの配列情報をそれぞれ配列番号１４８に示した。
実施例１５：Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ ２２５６株におけるリナロール生産
１５−１）Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ ２２５６株へのｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*遺伝子発現プラスミドの導入
Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ ２２５６株を既報に従い形質転換を行った（国際公開２０１３／１７９７２２Ａ１号）。ｐＶＫ９、ｐＶＫ９−Ｐ０４８０−ｏｐｔＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*の各プラスミドＤＮＡを導入し、カナマイシン２５μｇ／ｍｌを含むＣＭ−Ｄｅｘプレート培地（国際公開２０１３／１７９７２２Ａ１号）に塗布し、３０℃にて４８時間培養した。培養後のプレートから、カナマイシン耐性を示す形質転換体を取得し、Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ ２２５６株にｐＶＫ９が導入された株を２２５６／ｐＶＫ９株、ｐＶＫ９−Ｐ０４８０−ｏｐｔＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*が導入された株を２２５６／ｐＶＫ９−Ｐ０４８０−ｏｐｔＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*と命名した。
１５−２）Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ ２２５６株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
２２５６／ｐＶＫ９株、２２５６／ｐＶＫ９−Ｐ０４８０−ｏｐｔＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株を、２５（ｍｇ／Ｌ）のカナマイシンを含むＣＭ−Ｄｅｘプレートに均一に塗布し、３０℃にて約１８時間培養した。培養後のプレートから、１／６プレート分の菌体を２５（ｍｇ／Ｌ）のカナマイシンを含むコリネ＿リナロール生産用培地（表２２）５ｍｌを張り込んだ太試験管に接種し、３０℃にて２４時間培養した。
Figure 0006750630
太試験管に分注した５ｍＬのコリネ＿リナロール生産用培地（表２２）に対して１ｍＬのミリスチン酸イソプロピル（東京化成工業社製）を添加した。
培養開始から２４時間後に、培養液およびミリスチン酸イソプロピルに含まれるリナロール濃度をガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（島津製作所社製）を用いて実施例３と同じ条件にて測定した。カラムはＤＢ−５（アジレント社製、長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）を使用し、リナロール標準液は試薬リナロール（和光純薬社製）を用いて調整した。
リナロール濃度は培地量に換算した値として示す。太試験管３本の結果の平均値を表２３に示す。対照株の２２５６／ｐＶＫ９株ではリナロール生産は認められなかったが、２２５６／ｐＶＫ９−Ｐ０４８０−ｏｐｔＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株においてリナロール生産が確認された（表２３）。
Figure 0006750630
実施例１６：リナロールシンターゼ発現プラスミドの構築
１６−１）Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ． ＰＣＣ６８０３ ＧＴ株へ形質転換可能なプラスミド
Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ． ＰＣＣ６８０３は自然形質転換が可能であることは既に知られている。プラスミドｐＴＫＨＴ０８４６−ｓｌｒ０８４６、ｐＵＣ５７−ｓｌｒ０８４６には、ｓｌｌ０８２２、ｓｌｒ０８４６、ｓｌｌ０８２１のコーディング領域の一部の配列、カナマイシン耐性遺伝子の配列等が含まれており、ｓｌｒ０８４６、ｓｌｌ０８２１のコーディング領域を相同配列とすることでＳｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ． ＰＣＣ６８０３株のゲノム組換えが可能である（Ｍｉｄｏｒｉｋａｗａ Ｔ．，ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．５３（１）：１６４−１７２）。ｐＴＫＨＴ０８４６−ｓｌｒ０８４６のプラスミドは東京大学大学院総合文化研究科の池内昌彦教授から分譲いただき、ｐＵＣ５７−ｓｌｒ０８４６はＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社製に全合成を依頼した。
１６−２）ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ遺伝子発現プラスミドの構築
配列番号１４９に示したプライマー６７１と配列番号１５０に示したプライマー６９１を用いて、実施例６で取得されたｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ断片を得た。精製したＰｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ断片及び制限酵素ＡａｔＩＩとＨｐａＩで消化したｐＴＫＨＴ０８４６−ｓｌｒ０８４６にＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＴＫＨＴ０８４６−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳを構築した。
１６−３）ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊遺伝子発現用プラスミドの構築
配列番号１５１に示したプライマー７１９と配列番号１５２に示したプライマー７２１を用いて、実施例６で取得されたｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊断片を得た。精製したｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊断片及び制限酵素ＮｈｅＩで消化したｐＵＣ５７−ｓｌｒ０８４６−ＰｐｓｂＡ２にＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＵＣ５７−ｓｌｒ０８４６−ＰｐｓｂＡ２−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊を構築した。
実施例１７：Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ． ＰＣＣ６８０３ ＧＴ株におけるリナロール生産
１７−１）Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ． ＰＣＣ６８０３ ＧＴ株へのｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ遺伝子発現プラスミドの導入
Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ． ＰＣＣ６８０３ ＧＴ株を既報に従い形質転換を行った（国際公開２０１５／１１５５２０Ａ１号）。Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ． ＰＣＣ６８０３ ＧＴ株のＯ．Ｄ７３０＝０．５〜１．０の培養液１ｍＬに対し、構築したプラスミドｐＴＫＨＴ０８４６−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳを１〜２μｇ混合し、これを細胞−ＤＮＡ混合液とした。Ｏ．Ｄ．値は９６穴プレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ Ｍ２ｅ）によって７２０ｎｍで測定した。以下、Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ． ＰＣＣ６８０３ ＧＴ株を用いた培養のＯ．Ｄ．値は本機器で測定した。薬剤無添加のＢＧ−１１寒天培地（表２４）にニトロセルロース膜（ミリポア、界面活性剤フリー、孔径０．２μｍ、型番：ＨＡＴＦ０８２５０）をのせ、細胞−ＤＮＡ混合液を塗布した。１８〜２４時間、３４℃、ＣＯ２濃度１％、光強度５０μＥ／ｍ２／ｓの条件で培養した後、カナマイシンが２０ｍｇ／Ｌ添加されたＢＧ−１１寒天培地（表２４）にニトロセルロース膜を移した。その後２〜４週間、３４℃、ＣＯ２濃度１％、光強度５０μＥ／ｍ2／ｓの条件で培養し、出現したコロニーを新しいカナマイシンが２０ｍｇ／Ｌ添加されたＢＧ−１１寒天培地（表２４）へ植え継いだ。この植え継ぎ操作を３〜４回繰り返し、得られたコロニーについて、配列番号１５３に示したプライマー６８３と配列番号１５４に示したプライマー６８４を用いてコロニーＰＣＲを行った。ゲノム中の目的の場所に目的の大きさのＤＮＡ断片が挿入されていることを確認し、得られた株をＧＴ０８４６Ｋ−Ｐｔａｃ−ＡａＬＩＮＳ株と命名した。
上記で得られた株を、カナマイシンが２０ｍｇ／Ｌ添加されたＢＧ−１１寒天培地（表２４）で生育させた。ＬＥＤ光照射ユニット（ＬＣ−ＬＥＤ ４５０Ｗ（白色））を設置した旋回振とう培養装置（タイテック株式会社 ＮＲ−２０あるいはＮＲ−３０）で６０ｒｐｍ、３４℃、ＣＯ2濃度１％、光強度５０μＥ／ｍ２／ｓの条件で約３日間培養した。その培養液約１ｍＬを７０００ｒｐｍ、５ｍｉｎ、室温で遠心して集菌し、上清を除去しＢＧ−１１液体培地（表２４）にジメチルスルホキシドを終濃度５％になるように加えて調製したストック溶液を添加し懸濁した後、適当量ずつ分注し、フリーズストックとして−８０℃に保存した。
Figure 0006750630
液体培地は、ＩＩ液を５０ｍＬ、ＩＩＩ液を２ｍＬ、ＩＶ液を１ｍＬ、Ａ６液を１ｍＬ，１Ｍ ＴＥＳ−ＫＯＨ（ｐＨ８．２）を２０ｍＬ，ＲＯ水を９２６ｍＬ混合し、ＡＣ１２１℃、２０分し、同じくＡＣ１２１℃、２０分したＩ液を２ｍＬ混合した。
寒天培地は、Ｉ液を１ｍＬ、ＩＩ液を２５ｍＬ、ＩＩＩ液を１ｍＬ、ＩＶ液を０．５ｍＬ、Ａ６液を０．５ｍＬ、チオ硫酸ナトリウム（無水）を１．５ｇ、１Ｍ ＴＥＳ−ＫＯＨ（ｐＨ ７．８）を１０ｍＬ、ＲＯ水を２６１ｍＬ混合し、ＡＣ１２１℃、２０分した溶液と、同じくＡＣ１２１℃、２０分したＢａｃｔｏＡｇａｒ（日本ベクトン・ディッキンソン株式会社製）７．５ｇとＲＯ水２００ｍＬの混合液を全量混合した。
１７−２）Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ． ＰＣＣ６８０３ ＧＴ株へのｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊遺伝子発現プラスミドの導入
１７−１と同様の方法で形質転換を行った。ｐＵＣ５７−ｓｌｒ０８４６−ＰｐｓｂＡ２−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊が導入された形質転換体の選抜のための薬剤としてカナマイシン２０ｍｇ／Ｌが添加された培地（表２４）を使用した。得られたコロニーについて、配列番号１５３に示したプライマー６８３と配列番号１５４に示したプライマー６８４を用いてコロニーＰＣＲを行った。ゲノム中の目的の場所に目的の大きさのＤＮＡ断片が挿入されていることを確認し、得られた株をＧＴ０８４６Ｋ−ＰｐｓｂＡ２−ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株と命名した。
上記で得られた株を、カナマイシンが２０ｍｇ／Ｌ添加されたＢＧ−１１寒天培地（表２４）で生育させた。１７−１に記載した方法でフリーズストックを作製し、−８０℃に保存した。
１７−３）Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ． ＰＣＣ６８０３ ＧＴ株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ． ＰＣＣ６８０３ ＧＴ株、ＧＴ０８４６Ｋ−Ｐｔａｃ−ＡａＬＩＮＳ株、ＧＴ０８４６Ｋ−ＰｐｓｂＡ２−ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株について、リナロール生産能の評価を行った。すなわちフリーズストックを融解し、５０μＬを必要な薬剤を含むＢＧ−１１寒天培地（表２４）に均一に塗布し、３４℃、ＣＯ２濃度１％、光強度５０μＥ／ｍ２／ｓの条件で約７日間培養した。Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ． ＰＣＣ６８０３ ＧＴ株は薬剤無添加で培養し、ＧＴ０８４６Ｋ−Ｐｔａｃ−ＡａＬＩＮＳ株、ＧＴ０８４６Ｋ−ＰｐｓｂＡ２−ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株はカナマイシンを２０ｍｇ／Ｌ添加した上で培養を実施した。得られた寒天培地上の菌体を、イノキュレーティングループ１μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）のループを用いて適当量掻き取り、６穴プレート（コーニング社製、型番：３５１１４６）中の必要な薬剤を含むＢＧ−１１液体培地（表２４）５ｍＬへ接種した。培養条件は、ＬＥＤ光照射ユニット（ＬＣ−ＬＥＤ ４５０Ｗ（白色））を設置した旋回振とう培養装置（タイテック株式会社 ＮＲ−２０あるいはＮＲ−３０）で６０ｒｐｍ、３０℃、ＣＯ２濃度１％、光強度５０μＥ／ｍ２／ｓとし、約３日間培養した。この培養液を用いてＯ．Ｄ７３０＝０．０５になるように５０ｍＬ容三角フラスコ（ＨＡＲＩＯ）中の必要な薬剤を含む培養用ＢＧ−１１液体培地（表２４）１０ｍＬへ接種し、ＬＥＤ光照射ユニット（ＬＣ−ＬＥＤ ４５０Ｗ（白色））を設置した旋回振とう培養装置（タイテック株式会社 ＮＲ−２０あるいはＮＲ−３０）で６０ｒｐｍ、３０℃、ＣＯ２濃度１％、光強度１００μＥ／ｍ２／ｓの条件で約６日間培養した。
三角フラスコに分注した１０ｍＬの培養用ＢＧ−１１液体培地（表２４）に対して２ｍＬのミリスチン酸イソプロピル（東京化成工業株式会社製）を添加した。
培養開始から約６日後に、ミリスチン酸イソプロピルのリナロール濃度をガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（株式会社島津製作所製）を用いて実施例３に記載の条件にて測定した。カラムはＤＢ−５（アジレント・テクノロジー株式会社製、長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）を使用し、リナロール標準液は試薬リナロール（和光純薬工業株式会社製）を用いて調製した。
リナロールは培養液中の蓄積濃度に換算した値として示す。三角フラスコ３本の結果の平均値を表２５に示す。対照株のＳｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ． ＰＣＣ６８０３ ＧＴ株ではリナロール生産は認められなかったが、ＧＴ０８４６Ｋ−Ｐｔａｃ−ＡａＬＩＮＳ株、ＧＴ０８４６Ｋ−ＰｐｓｂＡ２−ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株においてリナロール生産が確認された。
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実施例１８：酵母からのＡｃｔｉｎｉｄｉａ ａｒｇｕｔａ（サルナシ）由来リナロールシンターゼ発現プラスミド導入株の構築
１８−１）酵母でＡｃｔｉｎｉｄｉａ ａｒｇｕｔａ由来リナロールシンターゼを発現するプラスミドの構築
プライマーＱ４８（配列番号１５５）とプライマーＱ４９（配列番１５６）を用いて、実施例６で構築したプラスミドｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊断片を得た。精製したＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*断片を制限酵素ＫｐｎＩとＢａｍＨＩで消化したベクターｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製）にＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＹＥＳ２−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。
１８−２）酵母へのＡｃｔｉｎｉｄｉａ ａｒｇｕｔａ由来リナロール発現プラスミド導入
特許第５８５７９７３号公報に記載があるＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＳ２８８Ｃ ｕｒａ３Δ０株にｐＹＥＳ２−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を導入した。
Ｓ２８８Ｃ ｕｒａ３Δ０株は、ＹＰＤ液体培地に植菌して３０℃で１６時間培養した後に、その培養液０．６ｍｌを１０ｍｌに植え継いでさらに３０℃で２時間培養した後に全量を集菌してＦｒｏｚｅｎ−ＥＺ Ｙｅａｓｔ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ＩＩＴＭキット（ＺＹＭＯ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＣＯＲＰ．製）を用いてコンピテントセルを調製した。作製したコンピテントセルをｐＹＥＳ２−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*で形質転換し、ＳＤ−Ｕｒａプレートに塗布した後に３０℃で３日間培養して形質転換体を得た。得られた株はＳ２８８Ｃ ｕｒａ３Δ０／ｐＹＥＳ２−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*と命名した。ＹＰＤ培地の組成を表２６に、ＳＤ−Ｕｒａ培地の組成を表２７に示す。
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実施例１９：酵母におけるリナロール生産
実施例１８で得られたＳ２８８Ｃ ｕｒａ３Δ０／ｐＹＥＳ２−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株を、表３３に組成を示したＳＤ−Ｕｒａプレートに均一に塗布し、３０℃にて約２４時間培養する。得られたプレート上の菌体を、イノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）のループ部分１／２程度の量を掻き取り、ＡＧＣテクノグラス株式会社製試験管（直径×長さ×肉厚（ｍｍ）＝２５×２００×１．２）中のＳＤ−Ｕｒａ−Ｇａｌ培地５ｍＬに接種し、往復振とう培養装置で３０℃、１２０ｒｐｍの条件にて４８時間培養することでリナロールを得ることができる。ＳＤ−Ｕｒａ−Ｇａｌ培地の組成を表２８に示す。
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試験管に分注した５ｍＬのＳＤ−Ｕｒａ−Ｇａｌ培地に対して、植菌後に１ｍＬのミリスチン酸イソプロピル（東京化成工業株式会社製）を添加する。
実施例２０：ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ由来リナロールシンターゼ発現株の培養液に含まれる揮発性成分中のリナロールの割合（％）
実施例７で構築したＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、実施例３で構築したＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、及び実施例３で構築したＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株を実施例３表４に記載のミリスチン酸イソプロピル無添加条件で培養を行った。フィルター除菌後の培養サンプルと表２９に示す試薬標準液を用いて実施例５に記載の条件で分析を実施し、得られた試薬標準液のピーク面積値より検量線を作成した。試薬標準液より作成された検量線を利用して培養サンプルで検出されたピークの定量を行った。検出されたリナロール、及び培養サンプル中のリナロール以外の揮発性の副生物のうち、ピーク面積値が大きく、主要成分といえるものについては、揮発性成分全体に対するそれぞれの含量を％で示し、その結果を表３０に示した。
Figure 0006750630
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実施例２１：リナロールシンターゼに局所的に保存されたアミノ酸配列モチーフの探索
遺伝子合成をおこなった１３種のリナロールシンターゼを入力配列とし、局所的に保存されている配列を見出すことができるＭＥＭＥ（Ｔｉｍｏｔｈｙ Ｌ．Ｂａｉｌｅｙ ａｎｄ Ｃｈａｒｌｅｓ Ｅｌｋａｎ，"Ｆｉｔｔｉｎｇ ａ ｍｉｘｔｕｒｅ ｍｏｄｅｌ ｂｙ ｅｘｐｅｃｔａｔｉｏｎ ｍａｘｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｔｏ ｄｉｓｃｏｖｅｒ ｍｏｔｉｆｓ ｉｎ ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ"，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ ｆｏｒ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｐｐ．２８−３６，ＡＡＡＩ Ｐｒｅｓｓ，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，１９９４、ｈｔｔｐ：／／ｍｅｍｅ−ｓｕｉｔｅ．ｏｒｇ．）を用い、モチーフ探索を行った。ＭＥＭＥの検索オプションとして、部位の分布（ｓｉｔｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）条件は各配列に類似のモチーフが一つ存在する（Ｏｎｅ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ（ｏｆ ａ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｎｇ ｍｏｔｉｆ ｓｉｔｅ）ｐｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）、という条件を採用し、これ以外はデフォルト条件を利用して検索を行った。その結果、５つのモチーフを出力として得た（図２６〜３０）。各モチーフ配列を構成するアラインメントを図３１〜３５に示す。１３種のリナロールシンターゼにおいて、各モチーフの分布位置を図３６に示す。
続いて、見いだされたモチーフを文字列として規定する為に、モチーフを構成するアミノ酸残基が一意に決まる残基、或いは二種類のアミノ酸のみで規定される残基とそれ以外の残基に分類した。その後、モチーフ長が８から２０アミノ酸となるように規定し、表３１に示す６種のアミノ酸配列モチーフを得た。
これら６種類のアミノ酸配列モチーフについて検出感度を調べた。偽陰性の調査として、ＧｅｎＰｅｐｔデータベースより”ｌｉｎａｌｏｏｌ ｓｙｎｔｈａｓｅ”のキーワード検索で抽出された１６８種のアミノ酸配列に対して６種のアミノ酸モチーフ配列の保存性をｆｕｚｚｐｒｏにより調べた。偽陽性の調査として、ＧｅｎＰｅｐｔデータベースより”ｌｉｍｏｎｅｎｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ”のキーワード検索で抽出された１５１種のアミノ酸配列に対して６種のアミノ酸モチーフ様配列が保存されているかをｆｕｚｚｐｒｏにより調べた（表３１）。
Figure 0006750630
リナロールシンターゼのキーワード検索により抽出された配列のうちのいくつかは、極端に配列が短い、あるいは、実際にはリナロールシンターゼとは異なる酵素がおよそ１０から２０含まれる。一方表１８に示す各リナロールシンターゼは、ＤＤｘ［ＦＹ］［ＤＹ］ｘｘＧモチーフを含むことが明らかとなった（図３７〜４９）。表１８には示していない他のリナロールシンターゼ（表３２）においても、ＤＤｘ［ＦＹ］［ＤＹ］ｘｘＧモチーフが観察された（図５０〜５７）。これらのことから、今回得られたＤＤｘ［ＦＹ］［ＤＹ］ｘｘＧはリナロールシンターゼを検出可能なアミノ酸配列モチーフであることがわかった。一方、偽陽性が８６／１６１（５７％）と高いことから、ＤＤｘ［ＦＹ］［ＤＹ］ｘｘＧモチーフを有することだけではリナロールシンターゼのみを的確に予測することはできない。Ｌｘｘ［ＦＬ］［ＴＡ］ｘ（４）［ＲＮ］Ｗ［ＤＥ］、［ＥＶ］Ｙｘｘｘ［ＡＧ］ｘｘ［ＳＴ］、Ｒ［ＬＩ］ｘ［ＤＮ］Ｄ［ＬＩ］ｘ［ＳＴ］ｘｘｘＥｘｘｘＧについても、偽陽性が多い点ではＤＤｘ［ＦＹ］［ＤＹ］ｘｘＧと同様の特徴があると言える。
テルペンシンターゼに分布しているモチーフとして、ＤＤｘｘＤモチーフ、ＮＳＥモチーフ、ＤｘＤＤモチーフが知られている（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｊｏｕｒｎａｌ（２０１１）６６，２１２−２２９）。今回見出されたＤＤｘ［ＦＹ］［ＤＹ］ｘｘＧモチーフは、ＤＤｘｘＤモチーフを含むが、それに限定されず、より細かく配列を規定することのできるモチーフである。
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参考例１：リナロール添加試験
実施例２で構築したＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ株を市販のプラスミドベクターｐＳＴＶ２８（タカラバイオ株式会社製）にて形質転換したＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ｐＳＴＶ２８株のグリセロールストックを融解し、菌体懸濁液５０μＬを６０ｍｇ／Ｌのクロラムフェニコールを含むＬＢプレートに均一に塗布し、３４℃にて１８時間静置培養した。得られたプレート上の菌体を回収し、６０ｍｇ／Ｌのクロラムフェニコールを含む以下に記載の培地４ｍＬを注入した小型Ｌ型培養管（型式：ＴＶ１０００３０、アドバンテック東洋株式会社製）に開始Ｏ．Ｄ．が０．０１から０．０２の範囲になるように植菌し、キャップ式のシリコ栓を培養栓として用いた。生育培地は最少培地とし、表３５記載の１０×Ｍ９ ｓａｌｔｓ ５０ｍＬに対して、別殺菌（ＡＣ １２０℃、２０分、１Ｍ ＣａＣｌ2はフィルトレーション）した２０％（ｗ／ｖ）グルコース１０ｍＬ、１Ｍ ＣａＣｌ2 ０．０５ｍＬ、１Ｍ ＭｇＳＯ4 １．０ｍＬを冷却後（５０℃以下）添加し、滅菌水で５００ｍＬになるよう混合調製した。培養温度を３４℃、振盪速度を７０ｒｐｍとし、小型振盪培養装置ＴＶＳ０６２ＣＡ（アドバンテック東洋株式会社製）を用いて２３時間培養し、１５分毎に５．０ｓｅｃ振盪を停止し、Ｏ．Ｄ．値を自動計測した。
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培養開始後、Ｏ．Ｄ．値が０．６−０．７に達した時点で、それぞれ培地中の試薬リナロール濃度が１２５１、８３７、６２６、４１７ｍｇ／Ｌとなるようリナロール溶液を各小型Ｌ型培養管に添加した。リナロール溶液は試薬リナロール（和光純薬工業株式会社製）を１５％、１０％、７．５％、５．０％、０．０％（ｖ／ｖ）となるようエタノール（和光純薬工業株式会社製）で希釈し、各小型Ｌ型培養管に４０μＬ添加した。培地中のリナロール濃度は試薬リナロールの比重０．８６（２０／４℃）（引用文献：和光純薬工業株式会社実績値）から算出した。
ＴＶＳ０６２ＣＡ通信ソフト（ＴＶ１０００７０、アドバンテック東洋株式会社製）を用いて測定した培養経時のＯ．Ｄ．値の経時変化のグラフを図５８に示す。
一般的に、リナロールをはじめとした複数種のモノテルペノイドは抗菌性を示すことが知られている（Ｐａｒｋ ＳＮ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｅｒｏｂｅ，１８（３），３６９−３７２，２０１２）。ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ｐＳＴＶ２８株において、培地へ６２６ｍｇ／Ｌ以上のリナロールを添加することによってＯ．Ｄ．値の減少が認められた（図５８）。これらの結果は、菌体生育の阻害を抑制するためには培地中のリナロール濃度が６２６ｍｇ／Ｌ未満であることが好ましいことを示している。
実施例２２：ジャーファーメンターを用いたミリスチン酸イソプロピル無添加条件（単相条件）でのリナロール発酵
実施例３で構築したＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ｐＡＣＹＣ１７７株、実施例７で構築したＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、及び実施例３で構築したＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株を試験に用いた。グリセロールストックを融解し、各株の菌体懸濁液５０μＬを５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートに均一に塗布し、３４℃にて１８時間培養した。得られた菌体をプレートより回収した。続いて、５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含む以下に記載の発酵培地（表２０）３００ｍＬを１Ｌ容積のジャーファーメンターに注入した。そして、開始Ｏ．Ｄ．が０．１になるように植菌した。発酵培地は滅菌完了後に表３６に記載のＡ区、Ｂ区を混合した。培養温度を３０℃、通気量を１ｖｖｍとし、撹拌により溶存酸素濃度を６％以上に、アンモニアガスを用いて培養ｐＨを６．５に制御しながら３０時間培養した。
Figure 0006750630
培養開始後、適宜サンプリングし、Ｏ．Ｄ．値とリナロールの分析を実施した。リナロール濃度はガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（株式会社島津製作所製）を用いて実施例８に記載の条件にて測定した。カラムはＤＢ−５（アジレント・テクノロジー株式会社製 長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）を使用し、リナロール標準液は試薬リナロール（和光純薬工業株式会社製）を用いて調製した。測定用のサンプルは適宜エタノール（和光純薬工業株式会社製）で希釈した。
培養終了時のリナロール濃度とＯ．Ｄ．値を表３７に示し、経時変化のグラフをそれぞれ図５９及び図６０に示す。
Figure 0006750630
表３７、図５９及び６０（ジャー培養の結果）からＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ株に対して生育阻害を起こす６２６ｍｇ／Ｌのリナロール濃度に達してもリナロール発酵は可能であることが示された。参考例１において培地中のリナロールを６２５ｍｇ／Ｌ以下に抑えて培養することが好ましいことが示唆されていたが、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ Δｇｃｄ／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株は宿主に毒性を与える濃度以上のリナロールを蓄積し、十分な生育を伴いながら培養が可能であった。これらの結果は、培養条件に拘らず生育阻害が起きにくく、効率的なリナロール発酵が可能であることを示している。
その好ましい実施形態を参照して本発明を詳細に記述したが、本発明の範囲を逸脱することなく、種々の変更が為され得ること、及び均等物が採用され得ることは、当業者に明らかである。本明細書中の全ての引用文献は、本願の一部として参照により援用される。
本発明によれば鏡像体過剰率の高いリナロール組成物、中でも鏡像体過剰率の高いＲ−リナロールを含むリナロール組成物、鏡像体過剰率の高いＳ−リナロールを含むリナロール組成物を製造できる。そのため、リナロール、中でもＲ−リナロール又はＳ−リナロールを用いる分野、例えば香料、化粧料、食品、医薬等の化学産業の分野において有用である。

Claims (25)

  1. リナロールシンターゼを発現し、グルコース脱水素酵素及びグルコン酸２−ケト脱水素酵素からなる群より選ばれる１以上の酵素の活性が低減されている微生物を培地中で培養し、該培地中に、
    リナロールを含有し、組成物中の揮発性成分の合計含量中のリナロール含量が６０％以上であり、
    かつＲ−リナロール又はＳ−リナロールの鏡像体過剰率が５０％以上である
    組成物を蓄積させる、
    前記組成物の製造方法。
  2. 前記揮発性成分が３−メチル−２−ブテン−１−オールを含む、請求項１記載の方法。
  3. 組成物中の揮発性成分の合計含量中の３−メチル−２−ブテン−１−オール含量が４０％未満である、請求項２記載の方法。
  4. Ｒ−リナロール又はＳ−リナロールの鏡像体過剰率が８０％以上である、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
  5. 組成物中の揮発性成分の合計含量中のＲ−リナロール含量が６０％以上である請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
  6. 組成物中の揮発性成分の合計含量中のＳ−リナロール含量が６０％以上である請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
  7. 組成物中のリナロール含量が２００ｍｇ／Ｌ以上である、請求項１〜６のいずれか１項記載の方法。
  8. 前記揮発性成分が酢酸リナリル、リモネン、カリオフィリン、３−メチル−１−ブタノール、β−シトロネロール、及びゲラニオールからなる群より選択される１又は２以上の成分を含む、請求項１〜７のいずれか１項記載の方法。
  9. リナロールシンターゼは、アミノ酸配列中に以下の式で表されるモチーフ：
    ＤＤＸ1［ＦＹ］［ＤＹ］Ｘ2Ｘ3Ｇ
    （式中、Ｄはアスパラギン酸を示し、Ｆはフェニルアラニンを示し、Ｙはチロシンを示し、Ｇはグリシンを示し、Ｘ1、Ｘ2及びＸ3はそれぞれ独立して任意のアミノ酸を示し、［ＦＹ］はＦ又はＹを示し、［ＤＹ］はＤ又はＹを示す。）
    を少なくとも１つ有する
    請求項１〜８のいずれか１項記載の方法。
  10. 前記リナロールシンターゼが、アラビドプシス属、ミカン属、シソ属、ブドウ属、メンタ属、メボウキ属、ラベンデュラ属、トウヒ属、ナス属、リンゴ属、バクホウシア属、アクチニジア属、サンジソウ属、又はヨモギ属に属する植物、若しくは放線菌に由来する、請求項１〜９のいずれか１項記載の方法。
  11. 放線菌は、ストレプトマイセス属に属する微生物である、請求項１０記載の方法。
  12. 前記リナロールシンターゼが、アラビドプシス・タリアナ、シトラス・ウンシュウ、マルス・ドメスティカ、ペリラ・フルテセンス・バー・クリスパ、ビティス・ビニフェラ、ラベンデュラ・アングスティフォリア、メンタ・シトラータ、オシマム・バシリカム、クラルキア・ブリュワリ、アクチニジア・アルグータ、バクホウシア・シトリオドーラ、アルテミシア・アヌア、又はストレプトマイセス・クラブリゲルスに由来する、請求項１〜１０のいずれか１項記載の方法。
  13. 前記微生物が、腸内細菌科、酵母、コリネ型細菌、及び藍藻からなる群より選択される微生物である、請求項１〜１２のいずれか１項記載の方法。
  14. 前記微生物は、エシェリヒア属、パントエア属、シネコシスティス属、又はコリネバクテリウム属に属する細菌である、請求項１〜１３のいずれか１項記載の方法。
  15. 前記微生物は、エシェリヒア・コリ、パントエア・アナナティス、シネコシスティス ｓｐ．、又はコリネバクテリウム・グルタミカムである、請求項１〜１４のいずれか１項記載の方法。
  16. 前記微生物は、リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む異種発現単位を含む、請求項１〜１５のいずれか１項記載の方法。
  17. ポリヌクレオチドは、以下の（ａ１）〜（ｂ２０）からなる群より選ばれる１又は２以上のポリヌクレオチドである、請求項１６記載の方法：
    （ａ１）（ｉ１）配列番号２で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１）配列番号３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ１）前記（ｉ１）もしくは（ｉｉ１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
    （ａ２）（ｉ２）配列番号６２で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２）配列番号６３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ２）前記（ｉ２）もしくは（ｉｉ２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
    （ａ３）（ｉ３）配列番号６５で表される塩基配列もしくは（ｉｉ３）配列番号６６で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ３）前記（ｉ３）もしくは（ｉｉ３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
    （ａ４）（ｉ４）配列番号６８で表される塩基配列もしくは（ｉｉ４）配列番号６９で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ４）前記（ｉ４）もしくは（ｉｉ４）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
    （ａ５）（ｉ５）配列番号７１で表される塩基配列もしくは（ｉｉ５）配列番号７２で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ５）前記（ｉ５）もしくは（ｉｉ５）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
    （ａ６）（ｉ６）配列番号７４で表される塩基配列もしくは（ｉｉ６）配列番号７５で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ６）前記（ｉ６）もしくは（ｉｉ６）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
    （ａ７）（ｉ７）配列番号７９で表される塩基配列、（ｉｉ７）配列番号７９で表される塩基配列中の７９〜１７２５番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ７）配列番号８０で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ７）前記（ｉ７）、（ｉｉ７）もしくは（ｉｉｉ７）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
    （ａ８）（ｉ８）配列番号８５（Ｍ１）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ８）配列番号９８（Ｍ１４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ８）前記（ｉ８）もしくは（ｉｉ８）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
    （ａ９）（ｉ９）配列番号８６（Ｍ２）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ９）配列番号１００（Ｍ１６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ９）前記（ｉ９）もしくは（ｉｉ９）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
    （ａ１０）（ｉ１０）配列番号８７（Ｍ３）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１０）配列番号１０２（Ｍ１８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ１０）前記（ｉ１０）もしくは（ｉｉ１０）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
    （ａ１１）（ｉ１１）配列番号８８（Ｍ４）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１１）配列番号１０４（Ｍ２０）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ１１）前記（ｉ１１）もしくは（ｉｉ１１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
    （ａ１２）（ｉ１２）配列番号８９（Ｍ５）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１２）配列番号１０６（Ｍ２２）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ１２）前記（ｉ１２）もしくは（ｉｉ１２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
    （ａ１３）（ｉ１３）配列番号９０（Ｍ６）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１３）配列番号１０８（Ｍ２４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ１３）前記（ｉ１３）もしくは（ｉｉ１３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
    （ａ１４）（ｉ１４）配列番号９１（Ｍ７）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１４）配列番号１１０（Ｍ２６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ１４）前記（ｉ１４）もしくは（ｉｉ１４）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
    （ａ１５）（ｉ１５）配列番号９２（Ｍ８）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１５）配列番号１１２（Ｍ２８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ１５）前記（ｉ１５）もしくは（ｉｉ１５）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
    （ａ１６）（ｉ１６）配列番号９３（Ｍ９）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１６）配列番号１１４（Ｍ３０）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ１６）前記（ｉ１６）もしくは（ｉｉ１６）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
    （ａ１７）（ｉ１７）配列番号９４（Ｍ１０）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１７）配列番号１１６（Ｍ３２）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ１７）前記（ｉ１７）もしくは（ｉｉ１７）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
    （ａ１８）（ｉ１８）配列番号９５（Ｍ１１）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１８）配列番号１１８（Ｍ３４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ１８）前記（ｉ１８）もしくは（ｉｉ１８）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
    （ａ１９）（ｉ１９）配列番号９６（Ｍ１２）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１９）配列番号１２０（Ｍ３６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ１９）前記（ｉ１９）もしくは（ｉｉ１９）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
    （ａ２０）（ｉ２０）配列番号９７（Ｍ１３）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ２０）配列番号１２２（Ｍ３８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；及び
    （ｂ２０）前記（ｉ２０）もしくは（ｉｉ２０）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
  18. リナロールシンターゼは、以下の（Ａ１）〜（Ｂ２８）からなる群より選ばれる１又は２以上のタンパク質である、請求項１〜１７のいずれか１項記載の方法：
    （Ａ１）（ｉ１’）配列番号１で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ１）前記（ｉ１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ２）（ｉ２’）配列番号６１で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ２）前記（ｉ２’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ３）（ｉ３’）配列番号６４で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ３）前記（ｉ３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ４）（ｉ４’）配列番号６７で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ４）前記（ｉ４’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ５）（ｉ５’）配列番号７０で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ５）前記（ｉ５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ６）（ｉ６’）配列番号７３で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ６）前記（ｉ６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ７）（ｉ７’）配列番号７８で表される全長アミノ酸配列、もしくは（ｉｉ７’）配列番号１で表されるアミノ酸配列中の２７〜５７４番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ７）前記（ｉ７’）もしくは（ｉｉ７’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ８）（ｉ８’）配列番号９９（Ｍ１５）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ８）前記（ｉ８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ９）（ｉ９’）配列番号１０１（Ｍ１７）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ９）前記（ｉ９’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ１０）（ｉ１０’）配列番号１０３（Ｍ１９）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ１０）前記（ｉ１０’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ１１）（ｉ１１’）配列番号１０５（Ｍ２１）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ１１）前記（ｉ１１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ１２）（ｉ１２’）配列番号１０７（Ｍ２３）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ１２）前記（ｉ１２’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ１３）（ｉ１３’）配列番号１０９（Ｍ２５）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ１３）前記（ｉ１３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ１４）（ｉ１４’）配列番号１１１（Ｍ２７）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ１４）前記（ｉ１４’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ１５）（ｉ１５’）配列番号１１３（Ｍ２９）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ１５）前記（ｉ１５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ１６）（ｉ１６’）配列番号１１５（Ｍ３１）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ１６）前記（ｉ１６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ１７）（ｉ１７’）配列番号１１７（Ｍ３３）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ１７）前記（ｉ１７’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ１８）（ｉ１８’）配列番号１１９（Ｍ３５）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ１８）前記（ｉ１８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ１９）（ｉ１９’）配列番号１２１（Ｍ３７）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ１９）前記（ｉ１９’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ２０）（ｉ２０’）配列番号１２３（Ｍ３９）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ２０）前記（ｉ２０’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ２１）（ｉ２１’）配列番号１５７で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ２１）前記（ｉ２１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ２２）（ｉ２２’）配列番号１５８で表される全長アミノ酸配列列を含むタンパク質；
    （Ｂ２２）前記（ｉ２２’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ２３）（ｉ２３’）配列番号１５９で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ２３）前記（ｉ２３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ２４）（ｉ２４’）配列番号１６０で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ２４）前記（ｉ２４’）ものアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ２５）（ｉ２５’）配列番号１６１で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ２５）前記（ｉ２５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ２６）（ｉ２６’）配列番号１６２で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ２６）前記（ｉ２６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ２７）（ｉ２７’）配列番号１６３で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
    （Ｂ２７）前記（ｉ２７’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
    （Ａ２８）（ｉ２８’）配列番号１６４で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；及び
    （Ｂ２８）前記（ｉ２８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質。
  19. 微生物は、さらにゲラニル二リン酸シンターゼを発現する細菌である請求項１〜１８のいずれか１項記載の方法。
  20. 微生物が、メチルエリスリトールリン酸経路によるジメチルアリル二リン酸の合成能を有する、請求項１〜１９のいずれか１項記載の方法。
  21. 微生物が、メバロン酸経路によるジメチルアリル二リン酸の合成能を有する、請求項１〜２０のいずれか１項記載の方法。
  22. ２−ケトグルコン酸生成経路が、グルコース脱水素酵素活性の低減により遮断されている、請求項１〜２１のいずれか１項記載の方法。
  23. 前記微生物において、グルコース脱水素酵素遺伝子であるポリヌクレオチドが破壊されている、請求項２２記載の方法。
  24. 前記グルコース脱水素酵素遺伝子であるポリヌクレオチドは、以下の（ｘ）〜（ｙ）からなる群より選ばれる１又は２以上のポリヌクレオチドである、請求項２３記載の方法。
    （ｘ）〔ｉ〕配列番号９で表される塩基配列、もしくは〔ｉｉ〕配列番号９で表される塩基配列中３０１〜２６９１番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
    （ｙ）前記〔ｉ〕もしくは〔ｉｉ〕の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
  25. 前記グルコース脱水素酵素は、以下の（Ｘ）〜（Ｙ）からなる群より選ばれる１又は２以上のタンパク質である、請求項２２〜２４のいずれか１項記載の方法。
    （Ｘ）配列番号１０で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；及び
    （Ｙ）配列番号１０で表されるアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質。
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