JP6636413B2 - がん幹細胞を標的とするペプチド及びその使用 - Google Patents
がん幹細胞を標的とするペプチド及びその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6636413B2 JP6636413B2 JP2016238819A JP2016238819A JP6636413B2 JP 6636413 B2 JP6636413 B2 JP 6636413B2 JP 2016238819 A JP2016238819 A JP 2016238819A JP 2016238819 A JP2016238819 A JP 2016238819A JP 6636413 B2 JP6636413 B2 JP 6636413B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- csc
- cancer
- cscs
- synthetic peptide
- cancer stem
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims description 71
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 67
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims description 56
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims description 37
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims description 14
- 230000008685 targeting Effects 0.000 title claims description 9
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 19
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 14
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 10
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 8
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims description 5
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 claims description 4
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 claims description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 claims description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims 5
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 claims 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 claims 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 34
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 31
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 13
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 13
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 10
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 10
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 9
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 7
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 6
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 6
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 5
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 5
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 4
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- LAQPKDLYOBZWBT-NYLDSJSYSA-N (2s,4s,5r,6r)-5-acetamido-2-{[(2s,3r,4s,5s,6r)-2-{[(2r,3r,4r,5r)-5-acetamido-1,2-dihydroxy-6-oxo-4-{[(2s,3s,4r,5s,6s)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy}hexan-3-yl]oxy}-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-4-hydroxy-6-[(1r,2r)-1,2,3-trihydrox Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]([C@@H](NC(C)=O)C=O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 LAQPKDLYOBZWBT-NYLDSJSYSA-N 0.000 description 3
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 3
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 238000010208 microarray analysis Methods 0.000 description 3
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940043267 rhodamine b Drugs 0.000 description 3
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241001524679 Escherichia virus M13 Species 0.000 description 2
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 2
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 2
- 101150071746 Pbsn gene Proteins 0.000 description 2
- SRHNADOZAAWYLV-XLMUYGLTSA-N alpha-L-Fucp-(1->2)-beta-D-Galp-(1->4)-[alpha-L-Fucp-(1->3)]-beta-D-GlcpNAc Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](NC(C)=O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)O[C@H]2[C@H]([C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O2)O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O SRHNADOZAAWYLV-XLMUYGLTSA-N 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 150000004044 tetrasaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 1
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-LUWBGTNYSA-N N-acetylneuraminic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)CC(O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-LUWBGTNYSA-N 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 230000037451 immune surveillance Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 201000008129 pancreatic ductal adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 108010091748 peptide A Proteins 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
- C12N15/1037—Screening libraries presented on the surface of microorganisms, e.g. phage display, E. coli display
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
- G01N33/5073—Stem cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oncology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Virology (AREA)
Description
本発明はがん幹細胞を標的とする合成ペプチドに関し、本発明はさらに、前記合成ペプチドを治療薬とともに含有する医薬組成物に関する。別の一態様において、本発明はがん幹細胞を特異的に標的とするペプチドのスクリーニング法に関する。
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）のがん幹細胞（ＣＳＣ）が初めて１９９４年に発見されて以来、ＣＳＣの同定はさらに乳がん、脳腫瘍、肝臓がん、結腸がん、肺がん、すい臓がんで行なわれた。正常な幹細胞の自己再生活性のほかに、ＣＳＣは化学療法、放射線療法、低酸素、免疫監視機構に対して耐性を持つ。さらに、ＣＳＣはがん再発の主な原因と考えられている。
治療、イメージング及びその他目的のために、がん幹細胞を特異的に標的とする薬剤が必要とされている
一態様において、本発明は、配列番号１〜配列番号１５までのいずれかのアミノ酸配列からなる、がん幹細胞を標的とする合成ペプチドを提供する。
本発明の一実施態様において、前記合成ペプチドはがんを診断することにおける使用のためのものである。本発明の別のいくつかの実施態様によれば、前記ペプチドは治療薬をがん幹細胞に標的化することにおける使用のためのものである。
本発明によれば、前記合成ペプチドは検出可能部分（ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ ｍｏｉｅｔｙ）に融合されて（ｆｕｓｅｄ）もよい。本発明の特定の実施態様において、前記検出可能部分は、放射標識、蛍光色素分子、または磁気撮像用造影剤である。
本発明によれば、前記合成ペプチドは治療薬に融合されてもよい。本発明の特定の好ましい実施態様において、前記治療薬は抗腫瘍薬である。前記抗腫瘍薬は、化学療法薬、放射線療法薬、または免疫療法薬を含むが、これらに限らない。
別の一態様において、本発明は、本発明に基づいた合成ペプチドと、薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む組成物を提供する。好ましくは、前記合成ペプチドが治療薬に融合される。
さらに一態様において、本発明はがん幹細胞を特異的に標的とするペプチドをスクリーニングする方法を提供し、前記方法は、ファージ発現システム（ｐｈａｇｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ）を使用してオリゴペプチドライブラリーを確立する工程と、前記ライブラリー中のファージをがん細胞株のバルク腫瘍細胞（ｂｕｌｋ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ）の培養物に接触させる工程と、バルク腫瘍細胞に結合しないファージを前記がん細胞株のがん幹細胞またはがん幹細胞様細胞の培養物に接触させる工程と、前記がん幹細胞またはがん幹細胞様細胞に結合するファージから、がん幹細胞を特異的に標的とするペプチドをスクリーニングする工程と、を含む。
前述の概要の説明と、以下の詳細な説明は、本発明を限定するものではなく、例示と説明のみを目的としていると理解されるべきである。
本発明の前述の概要、および以下の詳細な説明は、添付の図面を参照しながら読むことでより理解されるであろう。本発明の例示を目的として、現時点で好ましい実施形態が図面に記載されている。
別途定義されている場合を除き、ここで使用されるすべての技術的および科学的用語は、当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を持つ。
一態様において、本発明は、配列番号１〜配列番号１５までのいずれかのアミノ酸配列からなる、がん幹細胞を標的とする合成ペプチドを提供する。本発明の合成ペプチドは、選択的に、または特異的に、がん幹細胞にホーミングし、従って、全身投与された治療薬をがん幹細胞に選択的に標的化するためのコンジュゲートの形態で役立つ。そのような治療薬の選択的標的化は、がん幹細胞に送達される薬剤の有効量を増加すると同時に、体の他の細胞または他の部分にそのような薬剤が副作用を生じる可能性を減少する。
本明細書で使用される「がん幹細胞（ＣＳＣ）」という用語は、例えばマウスやヒトなど哺乳動物のがん幹細胞を指す。
本発明の合成ペプチドは、ＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合するが、（通常の）腫瘍細胞（ＣＣ）には結合しない、または非常に弱く結合する。前記がん幹細胞は、乳がん、肝臓がん、すい臓がん、結腸がんを含むがこれらに限らない、がんのものである。
本発明の一実施態様によれば、前記合成ペプチドは、アミノ酸配列ＳＱＰＴＷＭＦ（配列番号１）（ＣＳＣ ＨＰ-１とも呼ばれる）からなる。一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-１は、乳がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。別の一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-１は、結腸がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。
本発明の一実施態様によれば、前記合成ペプチドは、アミノ酸配列ＧＭＭＳＳＰＰ（配列番号２）（ＣＳＣ ＨＰ-２とも呼ばれる）からなる。一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-２は、乳がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。別の一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-２は、結腸がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。
本発明の一実施態様によれば、前記合成ペプチドは、アミノ酸配列ＦＳＧＧＧＮＨ（配列番号３）（ＣＳＣ ＨＰ-３とも呼ばれる）からなる。一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-３は、乳がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。別の一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-３は、結腸がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。別の一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-３は、肝臓がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。
本発明の一実施態様によれば、前記合成ペプチドは、アミノ酸配列ＦＰＦＴＫＮＬ（配列番号４）（ＣＳＣ ＨＰ-４とも呼ばれる）からなる。一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-４は、乳がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。
本発明の一実施態様によれば、前記合成ペプチドは、アミノ酸配列ＡＴＹＧＮＬＷ（配列番号５）（ＣＳＣ ＨＰ-５とも呼ばれる）からなる。一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-５は、乳がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。別の一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-５は、結腸がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。
本発明の一実施態様によれば、前記合成ペプチドは、アミノ酸配列ＹＨＭＰＡＬＭ（配列番号６）（ＣＳＣ ＨＰ-６とも呼ばれる）からなる。一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-６は、乳がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。別の一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-６は、結腸がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。
本発明の一実施態様によれば、前記合成ペプチドは、アミノ酸配列ＨＧＧＶＲＬＹ（配列番号７）（ＣＳＣ ＨＰ-７とも呼ばれる）からなる。一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-７は、乳がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。別の一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-７は、結腸がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。
本発明の一実施態様によれば、前記合成ペプチドは、アミノ酸配列ＥＬＴＰＬＴＬ（配列番号８）（ＣＳＣ ＨＰ-８とも呼ばれる）からなる。一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-８は、乳がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。別の一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-８は、結腸がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。
本発明の一実施態様によれば、前記合成ペプチドは、アミノ酸配列ＧＰＳＡＳＲＮ（配列番号９）（ＣＳＣ ＨＰ-１０とも呼ばれる）からなる。一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-１０は、乳がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。
本発明の一実施態様によれば、前記合成ペプチドは、アミノ酸配列ＧＬＡＰＦＮＡ（配列番号１０）（ＣＳＣ ＨＰ-１１とも呼ばれる）からなる。一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-１１は、乳がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。
本発明の一実施態様によれば、前記合成ペプチドは、アミノ酸配列ＫＩＹＴＴＬＤ（配列番号１１）（ＣＳＣ ＨＰ-９とも呼ばれる）からなる。
本発明の一実施態様によれば、前記合成ペプチドは、アミノ酸配列ＮＬＱＰＰＡＹ（配列番号１２）（ＣＳＣ ＨＰ-１２とも呼ばれる）からなる。
本発明の一実施態様によれば、前記合成ペプチドは、アミノ酸配列ＧＰＫＶＴＩＷ（配列番号１３）（ＣＳＣ ＨＰ-Ｈｐ１とも呼ばれる）からなる。一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-Ｈｐ１は、すい臓がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。
本発明の一実施態様によれば、前記合成ペプチドは、アミノ酸配列ＧＳＰＶＭＳＷ（配列番号１４）（ＣＳＣ ＨＰ-Ｈｐ２とも呼ばれる）からなる。一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-Ｈｐ２は、すい臓がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。
本発明の一実施態様によれば、前記合成ペプチドは、アミノ酸配列ＹＨＱＶＫＰＨ（配列番号１５）（ＣＳＣ ＨＰ-Ｈｐ３とも呼ばれる）からなる。一実施態様において、ＣＳＣ ＨＰ-Ｈｐ３は、すい臓がんのＣＳＣにホーミングする、ＣＳＣを標的とする、またはＣＳＣに特異的に結合する。
本発明の合成ペプチドは、例えば化学合成など、従来の方法で作製または合成することができる。
本発明の特定の実施態様によれば、前記合成ペプチドはがんを診断することにおける使用のためのものである。本発明の別のいくつかの実施態様によれば、前記合成ペプチドは治療薬をがん幹細胞に標的化することにおける使用のためのものである。
本発明によれば、前記合成ペプチドは検出可能部分（ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ ｍｏｉｅｔｙ）に融合されて（ｆｕｓｅｄ）もよい。本発明の特定の実施態様において、前記検出可能部分は、放射標識、蛍光色素分子、または磁気撮像用造影剤である。
本発明によれば、前記合成ペプチドは治療薬に融合されてもよい。本発明の特定の好ましい実施態様において、前記治療薬は抗腫瘍薬である。前記抗腫瘍薬は、化学療法薬、放射線療法薬、または免疫療法薬を含むが、これらに限らない。本明細書で使用される「免疫療法薬」という用語は、その薬剤によって治療される被験者の免疫系を治療的に強化または抑制する薬剤を指す。
前述の検出可能部分または治療薬は、例えば、共有結合、またはイオン結合を通じた結合により、本発明の合成ペプチドに直接または間接的に結合または融合することができる。
別の一態様において、本発明は、本発明に基づいた合成ペプチドと、薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む組成物を提供する。好ましくは、前記合成ペプチドが治療薬に融合される。前記組成物は医薬組成物として使用してもよい。前記組成物は、前記合成ペプチドを薬学的に許容可能な担体または希釈剤と混合する、または前記ペプチドを薬学的に許容可能な担体または希釈剤と化学的に結合させることで作製することができる。
本発明の合成ペプチドまたは組成物は、静脈投与により必要とする被験者に投与することができる。
さらに一態様において、本発明はがん幹細胞を特異的に標的とするペプチドをスクリーニングする方法を提供し、前記方法は、ファージ発現システム（ｐｈａｇｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ）を使用してオリゴペプチドライブラリーを確立する工程と、ライブラリー中のファージをがん細胞株のバルク（通常の）腫瘍細胞の培養物に接触させる工程と、バルク腫瘍細胞に結合しないファージを前記がん細胞株のがん幹細胞またはがん幹細胞様細胞の培養物に接触させる工程と、前記がん幹細胞に結合するファージから、がん幹細胞を特異的に標的とするペプチドをスクリーニングする工程と、を含む。
本発明の好ましい実施態様によれば、前記がん幹細胞またはがん幹細胞様細胞は、通常の腫瘍細胞から作製された腫瘍塊（ｔｕｍｏｒｏｓｐｈｅｒｅ）に由来する（Weiswald et al.、Neoplasia、17(1): 1-15(2015)）。前記腫瘍塊は無血清培養法により作製することができる。例えば、Eramo et al.、Cell Death Differentiation、15: 504-514(2008)；Cioce et al.、Cell Cycle、9: 2878-2887(2010)；Cao et al.、BMC Gastroenterol.、11: 71(2011)；またはChen et al.,、Clin.Exp.Metastasis、28(8): 751-763(2011)に方法が開示されている。
先行技術において、一つには細胞培養によって取得できるがん幹細胞の量が少ないため、（通常の）がん細胞を標的とするペプチドまたはその他物質がほとんどの注目を集めてきた。さらに、発明者の知る限りにおいて、通常のがん細胞には結合せず、がん幹細胞またはがん幹細胞様細胞に結合するペプチドをスクリーニングする方法が提示されたことはない。しかしながら、発明者は、前述の方法を通じ、腫瘍塊に由来するがん幹細胞またはがん幹細胞様細胞を使用して、がん幹細胞に特異的に結合するペプチドを効果的にスクリーニングできることを予期せず発見した。
以下、限定ではなく例示を目的として提供される次の実施例により、本発明についてさらに説明する。
材料および方法
１. がん細胞とがん幹細胞（ＣＳＣ）の培養
ＣＳＣはＣＤ４４やＣＤ１３３などの表面マーカーによってエンリッチできるが、研究にはＣＳＣを選択的に増殖できる実践的で簡潔な方法が不可欠であった。ヒト肺ＣＳＣを懸濁状態で選択的に増殖できる先駆的な無血清培養法が２００８年に開発された（Eramo et al.、Cell Death Differentiation、15: 504-514(2008)）。それ以降、乳房（Cioce et al.、Cell Cycle、9: 2878-2887(2010)）、肝臓（Cao et al.、BMC Gastroenterol.、11: 71(2011)）、結腸（Chen et al.、Clin.Exp.Metastasis、28(8): 751-763(2011)）のＣＳＣが報告された。ＣＳＣはスフィア様の凝集された形状で増殖し、腫瘍塊としての命名が示唆された（Weiswald et al.、Neoplasia、17(1): 1-15(2015)）。
組換え成長因子がＰｅｐｒｏＴｅｃｈより購入された。マウス乳がんＥＭＴ６、肝臓がんＨｅｐａ１-６、ヒト膵管腺がんＰＡＮＣ-１細胞株が１０％ＦＣＳを添加したＤＭＥＭで維持された。マウス結腸がんＣＴ２６細胞株が１０％ＦＣＳを添加したＲＰＭＩ１６４０で培養された。ＣＳＣ用基礎培地はグルタミン２ｍＭを添加したＤＭＥＭ／Ｆ１２で、ＥＭＴ６ ＣＳＣ用添加物は２５ｎｇ／ｍＬのｒｍＥＧＦ、２５ｎｇ／ｍＬのｒｍＦＧＦ２、５μｇ／ｍＬのインスリン、４μｇ／ｍＬのヘパリン、０.５μｇ／ｍＬのヒドロコルチゾン、１％のＢＳＡで、ＣＴ２６ ＣＳＣ用添加物は、２０ｎｇ／ｍＬのｒｍＥＧＦ、５μｇ／ｍＬのインスリン、２％のＢ２７、０.４％のＢＳＡで、Ｈｅｐａ１-６ ＣＳＣ用添加物は、２０ｎｇ／ｍＬのｒｍＥＧＦ、１０ｎｇ／ｍＬのｒｍＦＧＦ２、２％のＢ２７、１％のＮ２で、ＰＡＮＣ-１ ＣＳＣ用添加物は、２％のＢ２７と２０ｎｇ／ｍＬのｒｈＦＧＦ２であった。腫瘍塊を作製するために、がん細胞が無血清培地で、低密度（例：＜１０４ 細胞／ｍＬ）培養された。７日間のインキュベーション後、腫瘍塊が４０μmの細胞ろ過フィルターを使用して採取され、それらは室温で９００×ｇ、５分間遠心分離された。腫瘍塊のペレットがトリプシンによって単細胞に解離され、その後得られた細胞が再び７日間腫瘍塊に増殖された。成長因子が１日おきに補充され、増殖の３〜５ラウンド目で単離された腫瘍塊が実験に使用された。
２. Ｍ１３ファージディスプレイ
１０９の独立クローンを含むＭ１３ ＰｈＤ-７ライブラリー（ＮＥＢ、Ｅ８１００）がＮｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ Ｉｎｃ．より購入された。ＤＭＥＭ １０ ｍＬ中のＭ１３ ＰｈＤ-７ファージの１０１３プラーク形成単位（ｐｆｕ）が、Ｔ７５フラスコで２回、毎回１時間ずつ、がん細胞により吸着処理された。続いて、上清が５×１０６のＣＳＣを含むＴ２５フラスコに移され、１時間培養された。非結合および弱結合のファージが遠心分離と、ＤＭＥＭ／０／２％ＢＳＡ中での３回の懸濁で除去された。細胞ペレットが１０９の大腸菌ＥＲ２７３８を含む１ｍＬのＰＢＳ中で懸濁され、振とう機で１時間培養された。その後１０ｍＬのＬＢ／５ｍＭ ＭｇＣｌ２が添加された。３７℃でのオーバーナイト培養後、遠心分離で細胞が除去され、上清中のファージが滴定された。前述の選択手順がＥＭＴ６とＰＡＮＣ-１について３ラウンド実施され、それぞれプライマリＥＭＴ６ ＣＳＣホーミングペプチド（ＨＰ）-とＰＡＮＣ-１ ＣＳＣ ＨＰ-ライブラリーが取得された。その後、Ｍ１３プラークがピックアップされ、シークエンシングのためのＤＮＡが作製された。ＥＭＴ６ ＣＳＣ ＨＰ-ライブラリーがさらにＣＴ２６ ＣＳＣ、Ｈｅｐａ１-６ ＣＳＣ、およびマウス胚性幹細胞（ｍＥＳＣ）により再び選択され、セカンダリＣＴ２６ ＣＳＣ ＨＰ-、Ｈｅｐａ１-６ ＣＳＣ ＨＰ-、ＣＳＣ／ＥＳ ＨＰ-ライブラリーが作製された。ｍＥＳＣ吸着後の非結合分画が収集され、ＣＳＣ ＰＨ-ライブラリーとして割り当てられた。図４Ａと図４Ｂを参照する。
３. ＣＳＣ ＨＰのＣＳＣへの結合
２０μｇ／ｍＬのローダミンＢで標識されたＣＳＣ ＨＰ１（Ｒｄ-ＣＳＣ ＨＰ-１とＣＳＣ ＨＰ２（Ｒｄ-ＣＳＣ ＨＰ-２）、およびＦＩＴＣで標識されたＣＳＣ ＨＰ１１（ＦＩＴＣ-ＣＳＣ ＨＰ-１１）がＥＭＴ６ ＣＳＣとＣＣの染色に直接使用された。細胞はＤＡＰＩで対比染色された。
４. グリカンマイクロアレイ分析
下の表Ａに記載された配列を持つＮ末端ビオチン結合性ＣＳＣ ＨＰが純度９５％以上のＧｅｎｅＤｉｒｅｘにより合成された。ビオチン-ＣＳＣ ＨＰがＤＭＳＯ中で溶解され、１０ｍｇ／ｍＬのストックが作製された。
ビオチン標識されたＣＳＣ ＨＰ
Ｇｌｙｃａｎ Ａｒｒａｙ １００マイクロチップ（Ｃａｔ．＃ ＧＡ−Ｇｌｙｃａｎ−１００）がＲａｙＢｉｏｔｅｃｈより購入され、メーカーの指示に従い、かつ若干の変更を加えて処理された。簡単に説明すると、４００μＬのサンプル希釈剤（Ｓａｍｐｌｅ Ｄｉｌｕｅｎｔ）（Ｉｔｅｍ Ｅ）で、室温で３０分間ブロッキングした後、ビオチン結合性ＣＳＣ ＨＰがサンプル希釈剤１μｇ／４００μＬで希釈され、室温で２時間ハイブリダイゼーション反応が実施された。洗浄後、４００μＬの１×Ｃｙ３標識ストレプトアビジンが各ウェルに添加された。暗室での培養中光線への暴露を避けるため、培養チャンバがプラスチック粘着ストリップで覆われ、スライドがアルミホイルで覆われた。スライドがＣｙ３標識ストレプトアビジンとともに室温で１時間、そっと揺動または振とうさせながら培養された。しっかり洗浄した後、スライドは完全に流され、その上の蛍光シグナルがレーザースキャナーＡｘｏｎ ＧｅｎｅＰｉｘで読み取られた。グリカンＸの相対強度が（Ｘの平均 - 陰性対照）／（陽性対照 - 陰性対照）×１００％として定義された。
５. 免疫蛍光染色（ＩＦ）アッセイ
一次抗体ウサギポリクローナル抗ＣＤ４４（ＧＴＸ１０２１１１）、抗Ｅ-カドヘリン（ＧＴＸ６１８２３）、抗ＣＤＳＮ（ＧＴＸ１１００９３）およびマウスモノクローナル抗ＳＳＥＡ-１（ＩｇＭ、ＧＴＸ４８０３８）、抗ＳＳＥＡ-５（ＩｇＧ、ＧＴＸ７００１９）、抗ルイスＹ（ＩｇＭ、ＧＴＸ７５９０３）がＧｅｎｅＴｅｘより購入され、マウスモノクローナル抗ＳＳＥＡ-４（ＩｇＧ、９０２３０）、抗ＴＲＡ-１-６０およびＴＲＡ-１-８１（ＩｇＭ、９０２３２中）がＭｉｌｌｉｐｏｒｅより購入され、マウスモノクローナル抗ＧｂＨ（ＩｇＭ、ＡＬＸ-８０４-５５０）がＥｎｚｏより購入された。二次抗体ＤｙＬｉｇｈｔ５９４標識ヤギ抗ウサギＩｇＧ（１１１-５１５-１４４）とＤｙＬｉｇｈｔ４８８標識ロバ抗マウスＩｇＧ（７１５-４８５-１５１）がＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ．より取得され、ＤｙＬｉｇｈｔ５９４標識ヤギ抗マウスＩｇＭ（ＧＴＸ７６７５４）がＧｅｎｅＴｅｘより取得された。がん細胞と腫瘍塊が４％パラホルムアルデヒド／ＰＢＳにより固定され、０.５％ＮＰ-４０／１％ＢＳＡ／ＰＢＳ（ＰＢＳＮＢ）により透過処理された。その後、細胞はＰＢＳＮＢ中で５０〜１００倍希釈された一次抗体で２時間培養された。０.０５％ＮＰ-４０／ＰＢＳ（ＰＢＳＮ）で４回洗浄した後、細胞は二次抗体（ＰＢＳＮＢ中で１／２００希釈）で２時間培養された。ＰＢＳＮで４回洗浄し、水で１回簡単に洗浄した後、細胞はＤＡＰＩとともにマウントされた。
マウスＥＭＴ６、ＣＴ２６、Ｈｅｐａ１-６ ＣＳＣの同定
がん幹細胞に特異的なM１３ファージによってディスプレイされたペプチドを選択する基準は、ＣＳＣとがん細胞（ＣＣ）間の表面の特徴の違いに依存する。腫瘍塊の形態で作製されたマウスＥＭＴ６、ＣＴ２６、Ｈｅｐａ１-６ ＣＳＣ（データは示されていない）は、特異的な幹細胞表面マーカーによって同定された。幹細胞表面マーカーＴＲＡ-１-６０は３つすべてのＣＳＣで高度に発現されたが、対応するＣＣでの発現が少ない、または検出不能であった一方で、構成的に発現された表面タンパク質コルネデスモシン（ＣＤＳＮ）はＣＳＣとＣＣの両方で検出された（データは示されていない）。ＥＭＴ６ ＣＳＣで弱く発現されたものとして示されたＳＳＥＡ-４を除き、すべてのヒトＣＳＣ一般マーカー、ＣＤ４４とＥ-カドヘリン、及び多能性幹細胞マーカー、ＳＳＥＡ-１、ＳＳＥＡ-５、ＴＲＡ-１-６０、ＴＲＡ-１-８１が３つのマウスＣＳＣのすべてで強く発現されることが示された（データは示されていない）。
プライマリＥＭＴ６ ＣＳＣ ＨＰ-ライブラリー
ＣＳＣ特異的ＨＰを調べるために、Ｍ１３ ＰｈＤ７ヘプタペプチドライブラリーがＥＭＴ６ ＣＣにより吸着処理され、一般的がんＨＰが除去された後、自由なファージがポジティブセレクションのためにＥＭＴ６ ＣＳＣに移された。ＥＭＴ６ ＣＳＣに結合したファージが捕捉され、大腸菌ER２７３８で増幅された。前述の選択手順が３ラウンド実施され、エンリッチされたプライマリＥＭＴ６ ＣＳＣ ＨＰライブラリーが作製された。独立したプラークが無作為に選ばれ、３１の有効な配列が読み取られ、下の表１にまとめられた。
プライマリ及びセカンダリＣＳＣ ＨＰ-ライブラリーでＣＳＣ ＨＰ配列が検出された回数
ペプチドＳＱＰＴＷＭＦ（ＣＳＣ ＨＰ-１と呼ばれる）（配列番号１）、ＧＭＭＳＳＰＰ（ＣＳＣ ＨＰ-２と呼ばれる）（配列番号２）、ＦＳＧＧＧＮＨ（ＣＳＣ ＨＰ-３と呼ばれる）（配列番号３）、ＦＰＦＴＫＮＬ（ＣＳＣ ＨＰ-４と呼ばれる）（配列番号４）、ＡＴＹＧＮＬＷ（ＣＳＣ ＨＰ-５と呼ばれる）（配列番号５）はそれぞれ１０、６、５、３、２回見られた。ペプチドＹＨＭＰＡＬＭ（ＣＳＣ ＨＰ-６と呼ばれる）（配列番号６）、ＨＧＧＶＲＬＹ（ＣＳＣ ＨＰ-７と呼ばれる）（配列番号７）、ＥＬＴＰＬＴＬ（ＣＳＣ ＨＰ-８と呼ばれる）（配列番号８）、ＧＰＳＡＳＲＮ（ＣＳＣ ＨＰ-１０と呼ばれる）（配列番号９）、ＧＬＡＰＦＮＡ（ＣＳＣ ＨＰ-１１と呼ばれる）（配列番号１０) は１回見られた。Ｍ１３ ＰｈＤ７ライブラリーは１０９の独立クローンを含むと予測されたため、選択手順は非常に効果的であると結論付けることができる。
セカンダリＣＴ２６ ＣＳＣ ＨＰ-、Ｈｅｐａ１-６ ＣＳＣ ＨＰ-、ＣＳＣ／ＥＳＣ ＨＰ-、ＣＳＣ ＨＰ-ライブラリー
異なる種類のがんに対するＣＳＣ ＨＰアフィニティのバイアスを試験するためにプライマリＣＳＣ ＨＰ-ライブラリーがＣＴ２６またはＨｅｐａ１-６ ＣＳＣのいずれかにより直接一度選択された。表１に示すように、ＣＳＣ ＨＰ-８とＣＳＣ ＨＰ-３はそれぞれＣＴ２６とＨｅｐａ１-６ ＣＳＣにより特異的であった。ＣＳＣと胚性幹細胞（ＥＳＣ）間のＣＳＣ ＨＰアフィニティのバイアスはもう１つの興味深い問題であった。ＣＳＣ ＨＰ-１はＥＳＣ結合分画（ＣＳＣ／ＥＳＣ-ＨＰ-ライブラリー）でさらにエンリッチされた。２つの新しいペプチド配列、ＫＩＹＴＴＬＤ（ＣＳＣ ＨＰ-９）（配列番号１１）とＮＬＱＰＰＡＹ（ＣＳＣ ＨＰ-１２）（配列番号１２）がＥＳＣ非結合分画（ＣＳＣ ＨＰ-ライブラリー）で読み取られた（表１）。
ＣＳＣ ＨＰとＣＳＣ間の相互作用
上述の結果に従い、ＣＳＣ ＨＰ-１、ＣＳＣ ＨＰ-２、ＣＳＣ ＨＰ-３、ＣＳＣ ＨＰ-８、ＣＳＣ ＨＰ-９、ＣＳＣ ＨＰ-１０、ＣＳＣ ＨＰ-１１が選択され、Ｎ末端結合でローダミンＢまたはフルオレセインと化学合成された。これらペプチドのすべてがＥＭＴ６、ＣＴ２６、Ｈｅｐａ１-６ ＣＳＣと特異的に結合した。それらは並行ＣＣ実験では検出不能であった（図１Ａと図１Ｂ）。マウスのがんに由来するこれらＣＳＣ ＨＰがヒトＣＳＣを認識できるか否かの判定は興味を引いた。ヒトすい臓がん細胞株ＰＡＮＣ-１から作製された腫瘍塊は７つのペプチドに確実に結合することが分かった（図１Ｂ）。
プライマリＰＡＮＣ-１ ＣＳＣ ＨＰライブラリー
マウスＣＳＣによって選択されたＣＳＣ ＨＰがヒトＣＳＣとも交差反応するなら、ヒトＣＳＣにより選択されたＣＳＣ ＨＰはマウスＣＳＣと結合できるだろうか。ＥＭＴ６ ＣＳＣ ＨＰスクリーニングと類似した手順に従い、ヒトすい臓ＰＡＮＣ-１ ＣＣでのネガティブセレクションと、ＰＡＮＣ-１ ＣＳＣでのポジティブセレクション３ラウンド後、プライマリＰＡＮＣ-１ ＣＳＣ ＨＰ-ライブラリーが確立された。独立したプラークが無作為に選ばれ、２０の有効な配列が読み取られた。ペプチドＧＰＫＶＴＩＷ（ＣＳＣ ＨＰ-ｈＰ１と記載）、ＧＳＰＶＭＳＷ（ＣＳＣ ＨＰ-ｈＰ２）、ＹＨＱＶＫＰＨ（ＣＳＣ ＨＰ-ｈＰ３）がそれぞれ１７、２、１回見られた。下の表２に示す。
プライマリＰＡＮＣ-１ＣＳＣ ＨＰ-ライブラリーでＣＳＣ ＨＰ配列が検出された回数
ＣＳＣ ＨＰ-ｈＰ系のアミノ酸配列はマウスＣＳＣ ＨＰのそれと一致しなかった。ヒトとマウス両方のＣＳＣに選択的に結合できる（データを示さない）化学合成されたＦＩＴＣ-ＣＳＣ ＨＰ-ｈＰ１に加え、ＣＳＣ ＨＰ-ｈＰ１とＰＡＮＣ-１ ＣＳＣ間の相互作用がＣＳＣ ＨＰ-ｈＰ１ペプチドのC末端に融合された大きな分子カーゴの影響を受けるか否かを試験するため、ＣＳＣ ＨＰ-ｈＰ１-ＤｓＲｅｄ組換えタンパク質が作製された。ＣＳＣ ＨＰ-ｈＰ１-ＤｓＲｅｄ組換えタンパク質は、ＰＡＮＣ-１ ＣＳＣに選択的に結合することが示された一方で、ＣＣ内のいくつかの細胞も、図２の矢印で示されるように、組換えタンパク質により染色された。
ＣＳＣ ＨＰの標的
形成されたＣＳＣ ＨＰはＣＣからＣＳＣを区別することができ、この現象はヒトとマウスの異種間で確認された。これらＣＳＣ ＨＰの標的を見つけることに対する関心が高まった。ＳＤＳ ＰＡＧＥにより分離されたＣＳＣ膜タンパク質でブロットされた（データは示さない）ニトロセルロースメンブレン上に残留するＦＩＴＣ-ＣＳＣ ＨＰの検出可能な蛍光シグナルはなかった。オリゴ糖１００種類が４回スポットされたグリカンマイクロアレイ（Ｇｌｙｃａｎ Ａｒｒａｙ １００マイクロチップ）を使用してオリゴ糖とＣＳＣ ＨＰ間の相互作用の可能性を分析した。表２に記載されたビオチン-ＣＳＣ ＨＰがチップ上でグリカンとハイブリダイズされた。チップ上に捕捉されたビオチン-ＣＳＣ ＨＰがＣｙ３標識ストレプトアビジンで調べられ、その蛍光シグナルがレーザースキャナーで読み取られた。２つの主要なパターンを図３Ａ〜図３Ｆに示す。最初のものはグリカン１６（Gal−β-1,4-Glc-β-）、１８（Gal-α−1,4-Gal-β−1,4-Glc-β-）、２６（GalNAc-β-１,3-Gal-α−1,4-Gal-β−1,4-Glc-β-）グロボ系を含む（図３Ａ）。典型ケースはＣＳＣ ＨＰ-１とＣＨＣ ＨＰ-ｈＰ１であった（図３Ｃ）。グロボ系シグナルに加え、２つ目の主要なパターンは、グリカン２６のレベルに類似した、グリカン１９（GlcNAc−β-1,3-Gal−β-1,4-Glc-β-、すなわちラクト／イソラクト三糖主鎖）を含んだ（図３Ｂ）。典型ケースはＣＳＣ ＨＰ５、ＣＳＣ ＨＰ６、ＣＳＣ ＨＰ７、ＣＳＣ ＨＰ９であった（図３Ｃ）。２つの悪性腫瘍及び転移グリカンマーカー、グリカン６３（Fuc−α-1,2-Gal-β−1,4-(Fuc-α−1,3)-GlcNAc-β-、ルイスＹエピトープとも呼ばれる）と、グリカン６９（Neu5Ac−α-2,6-Gal−β-1,3-(Neu5Ac-α−2,6)-GalNAc-β-）も検出された。ＣＳＣ ＨＰ-１とＣＳＣ ＨＰ-ｈＰ１はグリカン６３においてより高いシグナルを示し、ＣＳＣ ＨＰ-９、ＣＳＣ ＨＰ-１０、ＣＳＣ ＨＰ-１１、ＣＳＣ ＨＰ-ｈＰ２、ＣＳＣ ＨＰ-ｈＰ３はグリカン６９においてより高いシグナルを示した（図３Ｄ）。２つのＮｅｕ５Ａｃ-α-２,６-残基両方がＣＳＣ ＨＰの結合に必要であった（図３Ｅ）。上述の結果によれば、ヒトすい臓がん細胞ＰＡＮＣ-１のＣＳＣが作製され、グロボ系のＣＳＣグリカンマーカー、ＳＳＥＡ-４とＧｂＨ、ラクト／イソラクト系のＳＳＥＡ-１とＳＳＥＡ-５、及びルイスＹのすべてが、図３Ｆに示すように、ＩＦアッセイによりＰＡＮＣ-１ ＣＳＣで示された。
グリカンマイクロアレイデータによれば、ＣＳＣ ＨＰ-１とＣＳＣ ＨＰ-ｈＰ１は強く、かつ特異的に、四糖のグロボ基本構造であるグリカン２６に結合した。一方で、ＣＳＣ ＨＰ５、ＣＳＣ ＨＰ６、ＣＳＣ ＨＰ７、ＣＳＣ ＨＰ９は、ラクト及びネオラクト基本構造四糖の母核三糖である、グリカン１９に強く結合した。それぞれ肝臓と結腸ＣＳＣに特異的と考えられたＣＳＣ ＨＰ-３とＣＳＣ ＨＰ-８は、グリカン２６に弱く結合することが分かった。ＣＳＣ ＨＰ-１とＣＳＣ ＨＰ-ｈＰ１は、グリカン６３、ルイスＹエピトープにより強く結合する２つのＣＳＣ ＨＰメンバーであった。
Claims (8)
- がん幹細胞を標的とする合成ペプチドであって、配列番号１〜６および８のアミノ酸配列からなる群から選択される、合成ペプチド。
- がんを診断することにおける使用のための、請求項１に記載の合成ペプチド。
- 治療薬をがん幹細胞に標的化することにおける使用のための、請求項１に記載の合成ペプチド。
- 請求項１に記載の合成ペプチドおよび検出可能部分を含む融合ペプチド。
- 請求項１に記載の合成ペプチドおよび治療薬を含む融合ペプチド。
- 前記検出可能部分が、放射標識、蛍光色素分子または磁気撮像用造影剤である、請求項４に記載の融合ペプチド。
- 前記治療薬が抗腫瘍薬である、請求項５に記載の融合ペプチド。
- 前記抗腫瘍薬が、化学療法薬、放射線療法薬または免疫療法薬である、請求項７に記載の融合ペプチド。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| TW104141210 | 2015-12-08 | ||
| TW104141210 | 2015-12-08 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2017141219A JP2017141219A (ja) | 2017-08-17 |
| JP6636413B2 true JP6636413B2 (ja) | 2020-01-29 |
Family
ID=57609670
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2016238819A Active JP6636413B2 (ja) | 2015-12-08 | 2016-12-08 | がん幹細胞を標的とするペプチド及びその使用 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US9856291B2 (ja) |
| EP (1) | EP3179251B1 (ja) |
| JP (1) | JP6636413B2 (ja) |
| CN (1) | CN107033216B (ja) |
| TW (1) | TWI623552B (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7017726B2 (ja) * | 2017-01-30 | 2022-02-09 | 国立研究開発法人国立循環器病研究センター | 血管内皮系細胞に特異的に結合するペプチドの使用、及びペプチド |
| CN113248569B (zh) * | 2021-06-18 | 2021-10-12 | 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所 | Leptin受体亲和肽及其应用 |
Family Cites Families (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6747137B1 (en) * | 1998-02-13 | 2004-06-08 | Genome Therapeutics Corporation | Nucleic acid sequences relating to Candida albicans for diagnostics and therapeutics |
| US6465229B2 (en) * | 1998-12-02 | 2002-10-15 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Plant caffeoyl-coa o-methyltransferase |
| EP1029917A1 (en) * | 1999-02-15 | 2000-08-23 | Bio Merieux | The LTR region of MSRV-1 and the proteins it encodes, and probes and methods for detecting MSRV-1 retrovirus |
| US7214786B2 (en) * | 2000-12-14 | 2007-05-08 | Kovalic David K | Nucleic acid molecules and other molecules associated with plants and uses thereof for plant improvement |
| US20040142325A1 (en) * | 2001-09-14 | 2004-07-22 | Liat Mintz | Methods and systems for annotating biomolecular sequences |
| US7314974B2 (en) * | 2002-02-21 | 2008-01-01 | Monsanto Technology, Llc | Expression of microbial proteins in plants for production of plants with improved properties |
| KR20060031809A (ko) * | 2003-06-09 | 2006-04-13 | 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 미시간 | 암 치료 및 진단용 조성물 및 방법 |
| WO2005041882A2 (en) * | 2003-10-31 | 2005-05-12 | The Burnham Institute | Molecules that selectively home to vasculature of premalignant or malignant lesions of the pancreas and other organs |
| EP1818405B1 (en) * | 2004-04-09 | 2015-06-03 | Monsanto Technology, LLC | Compositions and methods for control of insect infestations in plants |
| WO2006069610A2 (en) * | 2004-07-02 | 2006-07-06 | Metanomics Gmbh | Process for the production of fine chemicals |
| CA2599577A1 (en) * | 2005-03-04 | 2006-09-14 | Verenium Corporation | Nucleic acids and proteins and methods for making and using them |
| WO2009099580A2 (en) * | 2008-02-05 | 2009-08-13 | Monsanto Technology, Llc | Isolated novel nucleic acid and protein molecules from soy and methods of using those molecules to generate transgenic plants with enhanced agronomic traits |
| EP4012714A1 (en) * | 2010-03-23 | 2022-06-15 | Iogenetics, LLC. | Bioinformatic processes for determination of peptide binding |
| WO2011125015A2 (en) * | 2010-04-05 | 2011-10-13 | Bar-Ilan University | Protease-activatable pore-forming polypeptides |
| US9657077B2 (en) * | 2011-02-11 | 2017-05-23 | Board Of Supervisors Of Louisiana State | Carcinoma homing peptide (CHP), its analogs, and methods of using |
| WO2012118778A1 (en) * | 2011-02-28 | 2012-09-07 | Sanford-Burnham Medical Research Institute | Truncated car peptides and methods and compositions using truncated car peptides |
| WO2012142391A1 (en) * | 2011-04-15 | 2012-10-18 | Merck Patemt Gmbh | Anti- il-1r1 inhibitors for use in cancer |
| WO2013022594A1 (en) * | 2011-07-21 | 2013-02-14 | The Regents Of The University Of California | Transcription factors for the production of cellulose degrading enzymes |
| US10179801B2 (en) * | 2011-08-26 | 2019-01-15 | Sanford-Burnham Medical Research Institute | Truncated LYP-1 peptides and methods and compositions using truncated LYP-1 peptides |
| EP2771349B1 (en) * | 2011-09-16 | 2020-02-26 | Iogenetics, LLC. | Bioinformatic processes for determination of peptide binding |
| EP2886126B1 (en) * | 2013-12-23 | 2017-06-07 | Exchange Imaging Technologies GmbH | Nanoparticle conjugated to CD44 binding peptides |
| CN104592352B (zh) * | 2015-01-09 | 2017-08-15 | 东南大学 | 与缺血性脑卒中组织特异性结合的hgg多肽及其应用 |
-
2016
- 2016-12-08 JP JP2016238819A patent/JP6636413B2/ja active Active
- 2016-12-08 TW TW105140707A patent/TWI623552B/zh active
- 2016-12-08 EP EP16202967.2A patent/EP3179251B1/en active Active
- 2016-12-08 CN CN201611123249.7A patent/CN107033216B/zh active Active
- 2016-12-08 US US15/373,254 patent/US9856291B2/en active Active
-
2017
- 2017-11-22 US US15/820,825 patent/US10414798B2/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107033216B (zh) | 2021-08-03 |
| JP2017141219A (ja) | 2017-08-17 |
| EP3179251A1 (en) | 2017-06-14 |
| US20170158737A1 (en) | 2017-06-08 |
| US10414798B2 (en) | 2019-09-17 |
| TW201734032A (zh) | 2017-10-01 |
| CN107033216A (zh) | 2017-08-11 |
| TWI623552B (zh) | 2018-05-11 |
| US20180072773A1 (en) | 2018-03-15 |
| US9856291B2 (en) | 2018-01-02 |
| EP3179251B1 (en) | 2019-03-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wu et al. | Advancement and applications of peptide phage display technology in biomedical science | |
| US10584152B2 (en) | Binding proteins based on di-ubiquitin muteins and methods for generation | |
| KR20220107151A (ko) | 다가 및 다중특이적 나노입자 플랫폼 및 방법 | |
| Dane et al. | Isolation of cell specific peptide ligands using fluorescent bacterial display libraries | |
| TWI446920B (zh) | Ｔ細胞之死亡誘導表位 | |
| JP6636413B2 (ja) | がん幹細胞を標的とするペプチド及びその使用 | |
| JP2018529310A (ja) | ジユビキチン変異タンパク質に基づくＨｅｒ２結合タンパク質 | |
| CN111533785B (zh) | 靶向免疫检查点tim3结合肽及其应用 | |
| JP6985572B2 (ja) | 単鎖抗体のスクリーニング方法及び単鎖抗体 | |
| US20140235492A1 (en) | Methods for preparing single domain antibody microarrays | |
| WO2018103064A1 (en) | Cancer stem cell targeting peptide and use thereof | |
| KR20090091589A (ko) | 포스파티딜세린과 특이적으로 결합하는 폴리펩티드 및 이의용도 | |
| TWI683828B (zh) | 靶向癌幹細胞的胜肽及其用途 | |
| Su et al. | A set of cancer stem cell homing peptides associating with the glycan moieties of glycosphingolipids | |
| KR101864375B1 (ko) | 바이오 실리카를 이용한 물질의 검출, 분리 또는 정제 | |
| Jin et al. | Screening and identification of a specific peptide binding to breast cancer cells from a phage-displayed peptide library | |
| JP2019050737A (ja) | Ｃｄ４４陽性ｔｍｅｍ−１８０陽性のがん細胞由来微粒子、これを用いた抗ｔｍｅｍ−１８０抗体療法が有効ながん患者の選別方法、選別された患者に対する抗ｔｍｅｍ−１８０抗体を含む抗がん剤、および前記方法に用いるキット | |
| Samoylova et al. | Phage matrix for isolation of glioma cell membrane proteins | |
| Hortigüela et al. | Engineering recombinant antibodies for polymer biofunctionalization | |
| WO2015156644A1 (ko) | 환형의 β-헤어핀 기반 펩타이드 바인더 및 이의 제조방법 | |
| Itoh et al. | Identification of cell proliferation‐associated epitope on CD98 oncoprotein using phage display random peptide library | |
| Kellner et al. | The nuclear speckles protein SRRM2 is a new therapeutic target molecule on the surface of cancer cells | |
| EP3325515B1 (en) | Novel binding proteins based on di-ubiquitin muteins and methods for generation | |
| Isogai et al. | Extracellular vesicles adhere to cells predominantly through the interaction of CD151-associated integrin heterodimers and GM1 with laminin | |
| 성준식 | Development and Characterization of Monoclonal Antibody Specific to Oncogenic Variant AIMP2-DX2 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170328 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20170406 |
|
| AA79 | Non-delivery of priority document |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A24379 Effective date: 20170530 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180227 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180525 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180725 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190108 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190404 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190606 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190708 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20191203 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20191218 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6636413 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |