JP6632999B2 - 神経疾患および大脳損傷の処置のための組成物および方法 - Google Patents
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Description
本出願は、神経疾患および全身疾患、タンパク質恒常性/リソゾーム障害などを処置するための組成物および方法に関する。詳細には本出願は、ニーマンピック病C型を処置する際のヒストン脱アセチル化阻害療法に適した組成物および方法に関する。
本出願は、内容全体が参照により本明細書に組み入れられる、2014年6月12日出願の米国特許仮出願第62/011,553号の優先権を主張するものである。
ヒストンデアセチラーゼ阻害剤(HDACi)は、3種の希少な癌に関して認可された重要な分類の新興治療薬である。HDACiは、HDAC酵素を遮断してヒストンと非ヒストンタンパク質の両方のアセチル化を促進することによって、複雑な細胞応答を誘発する。遺伝子障害において、HDACi誘導性ヒストン修飾は、該当する突然変異遺伝子(複数可)の転写発現を増加または減少させ得るが、シャペロンおよびタンパク質恒常性ネットワークを調整する非ヒストンタンパク質(転写因子およびヒートショックプロテインなど)を通して間接的利益も付与し得る。それらが転写に広範囲の影響を及ぼすため、用量を制限しながらHDACiの有効性を最大にすることが、HDACi療法における大きな難題である。HDACi投与量を減少させるが全身疾患および大脳疾患の両方の処置もする治療戦略を開発および検証する上で、後者はさらなる難題を提起する。なぜなら、それは血液脳関門を通過する効果的なHDACi透過を必要とし、一方で脳のHDAC機能、そして特に、HDAC3を要するプルキンエ細胞修復を可能にする必要があるからである。
幾つかの実施形態において、特に、ヒト疾患を綿密に模倣する、大脳および全身の両方の欠陥を伴う致命的小脳障害:ニーマンピック病C型(NPC)のネズミモデルの開発および検証に基づいた治療戦略が、本明細書に開示される。
疎水性薬物、そのプロドラッグ、その塩、そのアイソフォーム、またはその組み合わせと;
シクロデキストリン、そのプロドラッグ、その塩、またはその組み合わせと;
ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、またはその組み合わせと;
場合により、医薬的に許容し得る担体と、
を含む組成物を、対象に投与することを含む、疾患または損傷を処置または予防するための方法が、提供される。
疎水性薬物、そのプロドラッグ、その塩、そのアイソフォーム、またはその組み合わせと;
シクロデキストリン、そのプロドラッグ、その塩、またはその組み合わせと;
ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、またはその組み合わせと;
場合により、医薬的に許容し得る担体と、
を含む医薬組成物が、提供される。
疎水性薬物、そのプロドラッグ、その塩、そのアイソフォーム、またはその組み合わせと;
シクロデキストリン、そのプロドラッグ、その塩、またはその組み合わせと;
ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、またはその組み合わせと;
場合により、医薬的に許容し得る担体と、
を含む医薬組成物であって、
疎水性薬物が0.1〜500mg/kgの投与量で存在し;
シクロデキストリンが1000〜40,000mg/kgの投与量で存在する、医薬組成物が、提供される。
複数の利点を提供する組成物および方法が、本明細書に開示される。1つの利点は、有意に改善された脳タンパク質アセチル化ならびに神経突起およびプルキンエ細胞の保持、神経変性症状の大きな遅延、ならびにマウス寿命の4ヶ月からほぼ9ヶ月への延長に関係する。別の利点は、HDAC阻害剤の血漿濃度上昇に関係する。別の利点は、全身発現の指標である肝臓、および脳の両方におけるNpc1転写産物レベルの血漿濃度上昇に関係する。別の利点は、保持された小脳プルキンエ細胞内のNPC1タンパク質レベルの上昇に関係する。別の利点は、血液脳関門を通るHDACiアクセスの改善、ならびに大脳疾患と小脳プルキンエ細胞および神経突起に対する有意な随伴的利益に関する。別の利点は、HDACi療法における主な難題である、用量有効性の改善に関する。別の利点は、ニーマンピック病C型および他の難病における大脳疾患および全身疾患の両方の治療的処置の改善に関する。
材料と方法
試験計画
本試験では、特に、マウスモデルにおいて、ニーマンピック病C型の処置のためのHDACiであるボリノスタット(Vo)の有効性を評価した。Voは、インビトロで増殖させた皮膚線維芽細胞中の細胞内コレステロール負荷を減少させることに有効であることが見出されたが、NPCマウスに投与された場合に任意の生存利益を有さなかった。本発明者らは、Voの低い溶解度、低い血漿暴露および血液脳関門を通る少ない透過が、動物におけるその無効さの背後にある考えられる理由であると仮定した。これらの制限を克服するために、本発明者らは、HPBCDを賦形剤として使用し、Vo、HPBCDおよびポリエチレングリコール(PEG)を含有する配合剤を作製し、それを三剤併用配合剤(TCF)と命名した。TCFの影響を、示された月齢のNPCマウスにおいて異なる分子学的、生化学的、組織学的および神経行動学的測定を利用して評価した。生存および神経行動学的テストの場合、マウス8〜10匹を、薬物を注射する群で用いた。少なくとも6匹を、ビヒクル処置群で用いた。生存試験のエンドポイントは、30%以上の体重減少で設定した。分子学的、生化学的、組織学的分析では、少なくとも3〜4匹のマウスを、各アッセイにおいて少なくとも2つの技術的反復測定で使用した。動物は、無作為に処置群に割り付けた。各群に同数の雄および雌が含まれた。マウスにおける2つの独立したPK実験を、それぞれ1群あたり5匹のマウスを含んで実施した。神経行動学的スコアリングシステムの信頼性および頑健性は、2名の盲検化された研究者が評価した。研究者は、薬物注射に関して盲検化され、神経行動学的機能を評価した。血漿試料中のVoの測定は、米国インディアナ州パデュー大学のMetabolite Profiling Facilityにて、盲検化された研究者によって実行された。試料のサイズは、過去の実験または他者が実行した類似の試験に基づいて選択された。全てのデータポイントが統計解析で使用された。
HPBCD粉末(H107)およびPEG400を含む全てのファインケミカルは、他に断りがなければ、Sigma(米国ミズーリ州セントルイス所在)から得た。ボリノスタットは、Selleck Chemicals(米国テキサス州ヒューストン所在)から得た。DMEMおよびトリプシンは、Life Technologies(米国ニューヨーク州ニューヨーク所在)から得た。FBSは、ATCCから入手した。qPCRのためのオリゴヌクレオチドは、Invitrogen(米国カリフォルニア州カールスバッド所在)から購入した。
Npc1遺伝子における1005位(D1005G)のアスパラギン酸からグリシンへの突然変異を含むBALB/c系統であるNpc1nmf164を、NPC疾患モデルとして用いた(Maue, R.A., et al, Hum Mol Genet 21 : 730−750 (2012))。動物が病気に罹って、ホールダー上で提供される飼料に到達できない場合、通常飼料(2019 Teklad diet, Harlan Laboratories、インディアナ州インディアナポリス所在)を、DietGel 76A(Clear H2O、メイン州ポートランド所在)と置き換えた。マウスでの試験を、米国インディアナ州ノートルダム大学のInstitutional Animal Care and Use Committeeから認可および承認を受けて実施した。
ボリノスタット(50mg/Kg) − ボリノスタットを最初、DMSO(100mg/ml)中に溶解し、その後、9容量のポリエチレングリコール400(PEG)で希釈した。この薬物溶液を「溶液A」と命名した。溶液Aを同容量の水で希釈し、各成分の最終濃度を以下の通りにした;ボリノスタット 5mg/ml;DMSO 5%;PEG 45%。21日目から開始して週1回、マウスに腹腔内(i.p)注射した。ボリノスタット(100mg/Kg) − ボリノスタットを最初、DMSO(200mg/ml)中に溶解し、その後、9容量のPEGと混合した。方法および注射計画の残りは、先に記載された通りであった。HPBCD(4000mg/Kg) − 水で調製された40%HPBCD溶液。7日目から開始して週1回、マウスにi.p注射した。HPBCD(2000mg/Kg) − 水で調製された20%HPBCD溶液。7日目から開始して週1回、マウスにi.p注射した。TCF(ボリノスタット50mg/Kg+HPBCD 2000mg/Kg、DMSO 5%+PEG 45%) − 配合剤を調製するために、「溶液A」を先に記載された通り最初に調製し、同容量の40%HPBCD溶液を、その上に緩やかに層化させた。溶液を、中速に設定されたロッカー上で、室温で10分間穏やかに混合した。配合剤中の各成分の最終濃度は、以下の通りであった;ボリノスタット 5mg/ml;DMSO 5%;PEG 45%;およびHPBCD 20%。7日目および15日目に、マウスにHPBCD(2000mg/Kg)を2回i.p投与した。TCFのi.p注射を、21日から開始して週1回マウスに与えた。ビヒクル対照(5%DMSOおよび45%PEG) − 1容量のDMSOを9容量のPEGと混合しそれから同量の水で希釈することにより作製した。21日から開始して週1回、マウスにi.p注射を与えた。薬物溶液は全て、−80℃に貯蔵した。凍結原液の新しいバイアルを、異なる日に注射用に解凍した。処置群にわたり注射容量は、10ml/Kg体重であった。マーカ分析のために、マウスを100日目に殺処分し、臓器を採取した。生存試験のために、死亡するまで注射を継続した。死亡は、動物が死亡したまたは最大体重の30%以上を喪失した、またはDietGel 7A(Clear H2O、メイン州ポートランド所在)を提供した後でも摂食もしくは飲水が不可能であると見出された場合と定義した。
定量的PCR(qPCR)を、Power SYBR Green RNA−to−CT1−Step KitおよびABI Prism 7500 FastリアルタイムPCRシステム(Applied Biosystems、米国グランドアイランド所在)を用いて実施した。Gapdh(グリセルアルデヒド3−リン酸デヒドロゲナーゼ)を、内因性対照として用いた。転写産物の相対量を、比較CT法を利用して測定した。未処置Npc1+/−を参照として用いた。
CO2を用いる窒息により、マウスを殺処分した。採取された臓器は、10%中性緩衝ホルマリン(約4%ホルムアルデヒド)中に室温で24時間浸漬して固定した。その後、臓器は、パラフィンに移すまで、70%アルコール中に室温で貯蔵した。パラフィンに包埋された組織切片(4〜5μm)を、キシレンおよびアルコール中で脱ロウさせた。パラフィン除去された試料を50mM Tris−HCl(pH7.5)中で0.05%プロテイナーゼK(Dako、ドイツ所在)と共に室温で8分間プレインキュベートすることにより、カルビンジン抗原賦活化を実施した。切片を酸性条件で30分間煮沸させることにより、CTSSおよびNPC1を賦活化した。2%ヤギ血清(カルビンジンおよびNPC1の場合)または2%ウサギ血清(カテプシンSの場合)のいずれかを用いて、室温で30分間ブロッキングを実施した。切片を抗カルビンジン(1:1000、C9848、Sigma)、抗カテプシンS(20μg/ml、M−19、Santa Cruz Biotechnology)、抗−NPC1(ヒトNPC1タンパク質に対して特別に作製、20μg/ml)と共に4℃で一晩インキュベートした。適切なFITCまたはTRITCコンジュゲート二次IgG(MP Biomedicals、米国オハイオ州ソロン所在)抗体を、1:200希釈で使用した。切片を次に、DAPI(0.5μg/ml)を含有するPBSで洗浄した。Vectashield(Vector laboratories)を、封入剤として用い、蛍光顕微鏡測定用に処理した。
Npc1nmf164マウス(6〜7週齢)に、ボリノスタット(50mg/Kg)またはTCFのいずれかをi.p経路で注射した。マウスを、1hpi(注射後1時間目)にCO2を用いる窒息により殺処分した。組織をホモジナイズした後、製造業者の使用説明書により、ヒストンをEpiQuik Total Histone抽出キット(Epigentek、米国ニューヨーク州所在)を用いて抽出した。Millipore(米国カリフォルニア州所在)からのヒストンH3(Lys14)およびH4(Lys5/8/12/16)に対する抗体を、ウェスタンブロットで用いた。
耳介を70%アルコールで洗浄し、2〜3枚の小片(3×3mm)を切り出して70%アルコール中に2分間入れ、DMEMに移した。組織を小片に刻んで、0.25%トリプシン2mlを添加して2分間、激しくボルテックス処理し、10分ごとにボルテックス処理しながら37℃でインキュベートした。培地(DMEM+10%FBS)2mlを添加することによって、トリプシンを不活性化した。遠心分離(1000rpmで5分間)により細胞を回収して、ペニシリン(50U/ml)およびストレプトマイシン(50μg/ml)の存在下、DMEM+10%FBS中で増殖させた。ボリノスタットで処理するために、線維芽細胞(4×104)を、スライドガラスを含む24ウェルプレート中に入れた。Npc1nmf164線維芽細胞を、5μMボリノスタットで48時間処理した。0.025%DMSOと共にインキュベートされた細胞を、ビヒクル対照として用いた。細胞を4%パラホルムアルデヒドで固定した後、フィリピン(100μg/ml)と共にインキュベートしてコレステロールを染色した。Vectashield(Vector laboratories)を用いてスライドを封入し、蛍光顕微鏡測定用に処理した。
IFA後の組織切片およびフィリピン染色された線維芽細胞を、40倍油浸対物レンズ(NA1.35)で視覚化した。フィリピン染色を、DAPIフィルターを用いて視覚化した。デジタル画像の回収を、Olympus IX倒立蛍光顕微鏡およびApplied Precision(米国ワシントン州シアトル所在)からのDeltaVisionソフトウエアにより操作されるPhotometrix冷却CCDカメラ(CH350/LCCD)を用いて実施した。DeltaVisionソフトウエア(softWoRx)を用いて、これらの画像をデコンボルブした。画像は、単一の光学区分である。ImageJソフトウエア(NIH,米国メリーランド州所在)を用いて、画像を解析した。
Npcl+/nmf164マウス(6〜7週齢)に、i.p経路でPEG中のボリノスタット(50mg/Kg)またはTCFのいずれかを注射した。マウスを、CO2を用いる窒息により1hpiに殺処分した。全ての血液を、100μlヘパリンの存在下で心穿刺により採取し、K2EDTA Microtainer試験管(VWR International、米国イリノイ州シカゴ所在)に移した。直ちに血液を4℃、1500gで15分間遠心分離した。血漿を分離管に移して、直ちに液体窒素中で急速冷凍し、分析まで−80℃で貯蔵した。
過去に記載された方法(Carroll et al., 2010)の改変法を、マウスにおける神経行動学的機能を評価するために用いた。マウスの神経行動学的機能に関連する6つの異なるパラメータ(図3A)を、評価した。各マウスを、格子床の観察ボックス(長さ31.8cm、幅19.8cm、高さ10.5cm)中で個別に評価した。マウスを、振戦(0および2)、体位(0、1および2)、歩行(0、1および2)、グルーミング(0、1および2)、四肢の緊張度(0、1および2)、および体重減少(0、1、2および3)について評価した。同等のヒト症状と共に評価のより詳細な説明を、図3Aに示す。体重以外の各症状について、マウスは、症状が観察されなければスコア0を、機能において最も重度の損傷が観察されればスコア2を受けた。マウスは、5%未満の体重減少でスコア0を、5〜10%の減少なら1を、10%を超え20%以下なら2を、20%を超え30%以下なら3を与えられた。0〜3の累積スコアは神経行動学的損傷がないことに相関し、スコア13は最も損傷された神経行動学的機能である。オペレータ独立性のスコア付けも、NPC6匹(Npc1nmf164)および健常対照(Npcl+/nmf164)マウス4匹について、2名の独立した盲検化オペレータがテストした。
ログランク検定を行い、統計学的有意性を決定した。断りがなければ、示された結果は平均±SEMである。スチューデントt検定を実施し、両側解析を利用してデータの統計学的有意性を決定した。p<0.05を有意と見なした。
細胞試験は、HDACiが組織培養におけるNPC細胞中の細胞内コレステロールをNPC1の発現増加と同時に減少させることを過去に示しているが、動物全体における影響は、検証されていなかった。本発明者らは、C57BL/6Jにおいて近年記載されたNpc1nmf164(Maue et al., 2012)に由来するNpc1nmf164BALB/c系統(Alam et al., 2014)を使用した。突然変異は、1005位でアスパラギン酸からグリシンへの変化(D1005G)を生じる1つのヌクレオチド変化(cDNA bp3163でのAからGへ)であり、これがタンパク質を不安定化してその結果NPC1の活性およびレベルが一部損失する。このモデルにおける疾患進行(約120日間にわたってモニタリング)はヒト疾患を密接に模倣し、ここで神経変性が主な死因である。
A.野生型、Npc1+/nmf164(ヘテロ接合突然変異体)およびNpc1nmf164(NPC)マウスから単離された培養マウス皮膚線維芽細胞のウェスタンブロットで検出されたNPC1タンパク質、ローディング対照、チューブリン。
B.5μM Voで48時間処置されて、フィリピンで標識されたNpc1nmf164マウスからのインビトロ増殖皮膚線維芽細胞。コレステロール蓄積が、未処置のNPC細胞または溶媒単独に暴露されたNPC細胞で観察された。ボリノスタットは、NPC細胞内のコレステロールレベルを、対照(Npc1+/nmf164)マウスからの線維芽細胞で観察されたレベルまで低下させた。3つの独立した実験を、二重測定のウェルで実施した。
C.Npc1nmf164マウスに、50mg/kg(Vo、1×)または100mg/Kg(Vo、2×)のボリノスタット、ビヒクルを週に1回、i.p.投与するか、または注射しなかった。マウスの数は、示された通りである。
D.三剤併用配合剤(TCF)の概略図。
E.ウェスタンブロットで、薬物投与後60分以内のNpc1nmf164マウスの脳内ヒストン3および4のアセチル化を検出する。クーマシーブルー染色ゲル(CBB;ブルー)全試料で等しいローディングを確認する。
F.Eのデータの定量。Vo、45%PEG中ボリノスタット(50mg/kg);HPBCD、2−ヒドロキシプロピルβシクロデキストリン(2000mg/kg);TCF、三剤併用配合剤(ボリノスタット50mg/kg+HPBCD 2000mg/kg+45%PEG);ビヒクル、DMSO(5%)+PEG400(45%)。Un、未処置Npc1nmf164マウス。
A.100日目の薬物処置Npc1nmf164マウスの脳におけるカルビンジン1転写産物の相対的発現。未処置健常対照マウス(Npc1+/nmf164)におけるカルビンジン1転写産物のレベルを100%に設定し、他の動物での量をそれに相対的に示している。各群は、マウス4〜5匹からなった。
B1〜B5.100日目の異なる薬物で処置されたNpc1nmf164マウスの小脳切片におけるプルキンエ細胞およびカルビンジン陽性神経突起の存在を示す蛍光顕微鏡像。脳切片を、抗マウスカルビンジン抗体を用いて染色した。白色の矢印で示されるプルキンエ細胞(緑に染色)は、健常対照中で明らかである(B1)。未処置およびVo注射NPCマウスの小脳におけるプルキンエ細胞損失(B2&B3)。淡く染色されたわずかなプルキンエ細胞(矢印で示す)および小脳の分子層における軽微なカルビンジン陽性神経突起の染色が、HPBCD注射されたマウスで認められた(B4)。複数のプルキンエ細胞(矢印で示す)および分子層において増進したカルビンジン陽性神経突起が、TCF処置マウスで認められた(B5)。示された顕微鏡像は、各群のマウス4匹から得られた小脳の第IX小葉の代表的画像である。カルビンジン、緑色;DAPI、青色;本来の倍率 40倍;スケールバー、40μm。(B6)100日目の薬物処置されたNpc1nmf164マウスの小脳におけるプルキンエ細胞の半定量分析。カルビンジンで標識された小脳切片(4つ/マウス。各群4匹)におけるプルキンエ細胞の数をカウントした。データは、100%に設定された未処置健常対照(Npc1+/nmf164)に対するプルキンエ細胞の割合%を表す。
C〜E。未処置および薬物処置された(A)Npc1nmf164マウスの雄と雌と合わせたもの、(B)雄Npc1nmf164マウス、ならびに(C)雌Npc1nmf164マウス、のカプランマイヤー生存曲線。マウスにi.p経路を通して週に1回注射した(材料と方法を参照)。生存中央値(日)を、各群について示す。ログランク検定を実施して、統計学的有意性を決定した。*p<0.001対2×HPBCD;n、マウス数;d、日。
Vo、45%PEG中ボリノスタット(50mg/kg);HPBCD、2−ヒドロキシプロピルβシクロデキストリン(2000mg/kg);2×HPBCD、2−ヒドロキシプロピルβシクロデキストリン(4000mg/kg);TCF、三剤併用配合剤(ボリノスタット50mg/kg+HPBCD 2000mg/kg+45%PEG);ビヒクル、DMSO(5%)+PEG400(45%)。Un、未処置Npc1nmf164マウス。
A.Npc1nmf164マウスの神経行動学的機能をテストするのに用いられたパラメータのリスト(上のパネル)。曲線(下のパネル)は、マウスの累積神経行動学的スコアの進行を示す。マウスを異なる薬物で処置し、その神経行動学的機能を3週齢から開始して1週間おきに0〜13の累積スコアで評価した。
B.棒グラフは、未処置および薬物処置Npc1nmf164マウスにおける個々の症状の発生齢を示す。
Vo、45%PEG中ボリノスタット(50mg/kg);2×HPBCD、2−ヒドロキシプロピルβシクロデキストリン(4000mg/kg);TCF、三剤併用配合剤(HPBCD 2000mg/kg+ボリノスタット50mg/kg+45%PEG);ビヒクル、DMSO(5%)+PEG400(45%)。*p<0.05(処置対未処置)。**p<0.05(TCF対2×HPBCD)。
A.Npc1nmf164マウスの肝臓内マクロファージの標識を示す蛍光顕微鏡像。100日齢マウスから得られた肝臓切片(4〜5μm)を、抗CTSS抗体で染色してマクロファージを染色し(赤色)、白い矢印で示している。マクロファージは、未処置NPCマウスでは豊富に認められ、集団であることが多い。Voでの処置は、マクロファージの集団化を減少させた。泡沫状のマクロファージが、HPBCDおよびTCF処置NPCマウスにおいてわずかに認められた。CTSS、緑色;DAPI、青色。本来の倍率×40。
B〜E.100日目の薬物処置Npc1nmf164マウスの肝臓において示された様々な炎症マーカのqPCR分析。示された倍率変化は、未処置健常対照(Npc1+/nmf164)マウスにおいて検出された転写産物の平均レベルに対する値である。各群は、マウス4〜5匹からなった。データは、平均±SEMを表す。
Vo、45%PEG中ボリノスタット(50mg/kg);HPBCD、2−ヒドロキシプロピルβシクロデキストリン(2000mg/kg);TCF、三剤併用配合剤(HPBCD 2000mg/kg+ボリノスタット50mg/kg+45%PEG);ビヒクル、DMSO(5%)+PEG400(45%)。Un、未処置Npc1nmf164マウス。
A.マウスでの血漿Vo濃度。Npc1ヘテロ接合突然変異マウス(Npc1+/nmf164)に、i.p経路でVoまたはTCFを注射した。1hpiでの心穿刺により血液を採取して、血漿中のVo濃度を質量分析法により測定した。データは、2つの独立した実験(核実験において5匹/群)からの平均±SEMを表す。*p<0.05、TCF対Vo。
B〜C.100日目の薬物処置Npc1+/nmf164マウスの(B)肝臓および(C)脳内のNPC1転写産物量を示す定量PCR。倍率変化は、未処置健常対照(Npc1+/nmf164)マウスに相対的である。各群は、マウス4〜5匹からなった。*p<0.05、TCF対HPBCD。
D.プルキンエ細胞でのNPC1タンパク質の標識を示す小脳切片の免疫蛍光顕微鏡像。100日齢マウスから得られた脳切片を、抗NPC1抗体を用いて染色した。白い矢印で示されるプルキンエ細胞中に認められた顕著なNPC1染色(緑色で染色)が、健常対照において明白である(D1)。NPC1のわずかな染色が、Vo処置マウスで認められた(D2)。NPC1タンパク質を発現する数多くのプルキンエ細胞が、TCF処置マウスのプルキンエ細胞で認められた。示された顕微鏡像は、未処置のマウス2匹およびTCF処置マウス4匹から得られた小脳の第IX小葉の代表的画像である。各マウスから得られた4つの切片を分析した。NPC1、緑色;DAPI、青色;本来の倍率 40倍;D6。NPC1陽性プルキンエ細胞の半定量分析。小脳切片(4つ/マウス。未処置群2匹およびTCF処置群4匹)におけるNPC1陽性プルキンエ細胞の数をカウントした。データは、100%に設定された未処置健常対照マウス(Npc1+/nmf164)に対するNPC1陽性プルキンエ細胞の割合%を表す。
Vo、45%PEG中ボリノスタット(50mg/kg);HPBCD、2−ヒドロキシプロピルβシクロデキストリン(2000mg/kg);TCF、三剤併用配合剤(HPBCD 2000mg/kg+ボリノスタット50mg/kg+45%PEG);Un、未処置Npc1nmf164マウス。
Claims (12)
- ニーマンピック病C型の処置用の組成物であって、対象に前記組成物を投与することを含み、前記組成物は、
ボリノスタットと;
2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、その塩、またはその組み合わせと;
ポリエチレングリコール400と;
DMSOと;
水と;
を含み、
前記ポリエチレングリコール400は、組成物の重量に基づいて、30〜55重量%の量で存在し、
前記組成物が、1:1〜10:10〜70の:ボリノスタット:2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン:ポリエチレングリコール400のモル比を含む、
組成物。 - 前記ボリノスタットが、0.1〜500mg/kgの量で投与される、請求項1に記載の組成物。
- 前記2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンが、1000〜40,000mg/Kgの量で投与される、請求項1に記載の組成物。
- ボリノスタット:2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン:ポリエチレングリコール400のモル比が1:3〜10:15〜70である、請求項1に記載の組成物。
- ボリノスタット:2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン:ポリエチレングリコール400のモル比が1:3〜8:15〜70である、請求項1に記載の組成物。
- ボリノスタット:2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン:ポリエチレングリコール400のモル比が1:3〜8:15〜35である、請求項1に記載の組成物。
- 前記ポリエチレングリコール400が、組成物の重量に基づいて35〜55重量%の量で存在する、請求項1に記載の組成物。
- 前記ポリエチレングリコール400が、組成物の重量に基づいて35〜50重量%の量で存在する、請求項1に記載の組成物。
- 前記ポリエチレングリコール400が、組成物の重量に基づいて40〜50重量%の量で存在する、請求項1に記載の組成物。
- 前記2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンが1396Daの平均分子量を有する、請求項1に記載の組成物。
- 前記2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンが、グルコピラノース単位あたり0.67のヒドロキシプロピル基の平均置換数を有する、請求項1に記載の組成物。
- 前記DMSOが、組成物の重量に基づいて5重量%の量で存在する、請求項1に記載の組成物。
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