JP6588560B2 - オーバーラップするアンプリコンの選択的増幅 - Google Patents
オーバーラップするアンプリコンの選択的増幅 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6588560B2 JP6588560B2 JP2017543754A JP2017543754A JP6588560B2 JP 6588560 B2 JP6588560 B2 JP 6588560B2 JP 2017543754 A JP2017543754 A JP 2017543754A JP 2017543754 A JP2017543754 A JP 2017543754A JP 6588560 B2 JP6588560 B2 JP 6588560B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- pcr
- amplicon
- tag
- primer
- nucleic acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2525/00—Reactions involving modified oligonucleotides, nucleic acids, or nucleotides
- C12Q2525/10—Modifications characterised by
- C12Q2525/161—Modifications characterised by incorporating target specific and non-target specific sites
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2537/00—Reactions characterised by the reaction format or use of a specific feature
- C12Q2537/10—Reactions characterised by the reaction format or use of a specific feature the purpose or use of
- C12Q2537/143—Multiplexing, i.e. use of multiple primers or probes in a single reaction, usually for simultaneously analyse of multiple analysis
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oncology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
配列表は、本明細書とともに、EFS-Webを介してASCII形式のテキストファイルとして同時に提出され、ファイル名はSequence Listing.txtで、作成日は2016年2月23日、サイズは5.11キロバイトである。EFS-Webを介して提出された配列表は、本明細書の一部であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
「アンプリコン」は、天然または人工の増幅または複製イベントの供給源および/または産物であるDNAまたはRNAの断片である。これに関連して、「増幅」は、遺伝子断片または標的配列、特にアンプリコンの1つまたはそれ以上のコピーの産生を指す。増幅反応の産物としてのアンプリコンは、PCR産物のような共通の実験用語と互換的に使用される。
(h) 処理後または未処理のいずれかである(g)からの増幅産物を、それぞれt1およびt2に結合する第1および第2のユニバーサルPCRプライマーと、PCRを実施するために必要な試薬の有効量とを混合し、ここで、両方のユニバーサルPCRプライマーは、前記第一及び第二の標的特異的核酸配列と相補的である配列を含まず、そして
(i) (h)の混合物に対して、標準的なPCR温度及び当業者に既知の条件で、PCRの変性、アニーリングおよびプライマー伸長ステップを経るサイクルを行って、第2の増幅産物を得ること、を含む。
PCR増幅の第1ラウンド(遺伝子特異的プライマー)
25μLの代表的なPCR混合物は、以下の成分を含む: 12.5μLの2x Multiplex Master Mix (KAPA Biosystems、カタログ番号K5802)、low TE buffer (USB、カタログ番号75793)で5ng/μLに希釈した2μLのhuman genomic DNA (Promega、カタログ番号G3041)、6.5μLのヌクレアーゼを含まない水、および4μLの遺伝子特異的プライマーミックス(それぞれ1.25 μΜ、表3のマルチプレックスプライマーミックスレーン3〜8参照)。
1サイクル 95℃ 2分 酵素活性化および初期DNA変性
5サイクル 95℃ 30秒 変性
60℃ 90秒 アニーリング/伸長
30サイクル 95℃ 30秒 変性
72℃ 90秒 温度を上げてのアニーリング/伸長
1サイクル 72℃ 5分 最終伸長
1サイクル 8℃ ホールド
アガロースゲル電気泳動
実施例1の産物をE-ベース装置(Life Technologies)で分析した。2μLの産物をヌクレアーゼを含まない水で20μLの最終容量に希釈し、2%SizeSelect E-ゲルにロードした。希釈したPCR産物(レーン2〜8)および1KbプラスDNAラダー(Invitrogen、カタログ番号10488〜090、レーン1)のDNA電気泳動を行い、ランの最後にゲルのデジタル画像を捕捉したE-ゲルイメージャー(Life Technologies)によって測定した。結果を図4に示す。
BRCA2エキソン27(B2X27)の遺伝子特異的PCR増幅の第1ラウンド
25μLの代表的なPCR混合物は以下の成分を含む: 12.5μLの2x Multiplex Master Mix (KAPA Biosystems、カタログ番号K5802)、low TE buffer (USB、カタログ番号75793)で5ng/μLに希釈した6μLのhuman genomic DNA (Promega、カタログ番号G3041)、2.5μLのヌクレアーゼを含まない水、および4μLの遺伝子特異的プライマーミックス(それぞれ1.25μΜ)。
1サイクル 95℃ 2分 酵素活性化および初期DNA変性
5サイクル 95℃ 15秒 変性
60℃ 6分 アニーリング/伸長
25サイクル 95℃ 30秒 変性
72℃ 3分 温度を上げてのアニーリング/伸長
1サイクル 8℃ ホールド
第2ラウンドのPCR増幅(ユニバーサルプライマー)および精製
実施例3の遺伝子特異的産物を1000倍に希釈した。25μLの代表的なPCR混合物は、以下の成分を含む; 2.5μLの10x反応バッファー、0.5μLのdNTPs、0.25μLの酵素(Roche、カタログ番号12140314001)、2μLの実施例3からの希釈した産物、2μLのIllumina Indexフォワードプライマー、2μLのIllumina Indexリバースプライマー(TruSeq Custom Amplicon Index Kit、カタログ番号FC-130-1003からの25μMプライマーストック)および15.75μLのヌクレアーゼフリー水。
1サイクル 95℃ 4分 初期DNA変性
95℃ 30秒 変性
20サイクル 66℃ 30秒 アニーリング
72℃ 60秒 伸長
1サイクル 72℃ 5分 最終伸長
1サイクル 8℃ ホールド
アガロースゲル電気泳動
実施例3および実施例4の産物をE-ベース装置(Life Technologies)で分析した。2μLの産物をヌクレアーゼを含まない水で20μLの最終容量に希釈し、2%SizeSelect E-ゲル上にロードした。希釈PCR産物および50bp DNAラダー(Invitrogen、カタログ番号10488-043)でDNA電気泳動を行った。泳動の最後に、ゲルのデジタル画像をE-ゲル画像(Life Technologies)によって撮影した。結果を図6に示す。
NGSライブラリーの正規化とシーケンシング
実施例4の各産物を、10mM Tris-HCl(0.1%Tween 20)(Teknova、カタログ番号T7724)を用いて4mMに標準化した。実施例4からのすべての標準化産物を等量(各3μg)でライブラリーミックスを作製するために混合した。5μlのライブラリーミックスを5μLの0.2N NaOHに加えてライブラリーを変性させる。HT1バッファーを用いて20pMライブラリーを調製し、ロードし、250bpの対の末端の読み取り長さで配列決定する(Illumina、カタログ番号MS-102-2003)。その後、得られた各サンプルのFastqシーケンシングリードを、BWA-MEMによってhg19参照ゲノムにアライメントした。次いで、対末端読み取りを併合し、各アンプリコン領域のカバレージを分析した。カバレッジインフォメーションを図7に示す。
Claims (12)
- オーバーラップ領域を有する標的核酸断片を選択的に増幅する方法であって、以下のステップ:
(a) 第1のタグ(t2)および第1の標的核酸断片に相補的な第1のフォワードプライマー(F1)を含む第1のポリヌクレオチドを得、ここで、t2は、F1の5’末端にあり;
(b) 第2のタグ(t1)および第1の標的核酸断片に相補的な第1のリバースプライマー(R1)を含む第2のポリヌクレオチドを得、ここで、t1は、R1の5’末端にあり;
(c) 第2のタグ(t1)および第2の標的核酸断片に相補的な第2のフォワードプライマー(F2)を含む第3のポリヌクレオチドを得、ここで、t1は、F2の5’末端にあり;
(d) 第3のタグ(t3)および第2の核酸断片に相補的な第2のリバースプライマー(R2)を含む第4のポリヌクレオチドを得、ここで、t3は、R2の5’末端にあり; ここで前記第1および第2の標的核酸断片はオーバーラップ領域を有し、
(e) 前記第1および第2の標的核酸断片と、前記第1、第2、第3および第4のポリヌクレオチドと、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を実施するのに必要な試薬の有効量とを混合し、
(f) (e)の混合物に対して、変性、アニーリングおよびプライマー伸長ステップを経るPCRサイクルを少なくとも2回行い、そして
(g) (f)の混合物に対して、ステップ(f)におけるアニーリング温度より5〜25℃高いアニーリング温度で、変性、アニーリングおよびプライマー伸長ステップを経るPCRサイクルを行って、増幅産物を得ること、
を含む、方法。 - 前記第2のポリヌクレオチドが、前記第2のタグ(t1)と前記第1のリバースプライマー(R1)との間に、前記第2のフォワードプライマー(F2)の完全配列のポリヌクレオチドを更に含む、請求項1に記載の方法。
- 前記第2のポリヌクレオチドが、前記第2のタグ(t1)と前記第1のリバースプライマー(R1)との間に前記第2のフォワードプライマー(F2)の5'末端の部分配列であるF2^を更に含む、請求項1に記載の方法。
- 前記第2のフォワードプライマーの5'末端の部分配列がF2配列の10〜90%を含む、請求項3に記載の方法。
- ステップ(g)におけるアニーリング温度が、ステップ(f)におけるアニーリング温度より6〜20℃高い、請求項1に記載の方法。
- ステップ(f)におけるPCRサイクルが2〜10回繰り返される、請求項1に記載の方法。
- 前記第3のタグは、前記第2のタグと同一である、請求項1に記載の方法。
- (h) 処理後または未処理のいずれかであるステップ(g)からの増幅産物を、それぞれt1およびt2に結合するが、前記第1および第2の標的核酸断片には結合しない第1および第2のユニバーサルPCRプライマーと、PCRを実施するために必要な試薬の有効量とを混合し、そして
(i) ステップ(h)の混合物に対して、変性、アニーリングおよびプライマー伸長ステップを経るPCRサイクルを行って、第2の増幅産物を得ること、
を更に含む、請求項6に記載の方法。 - ステップ(g)からの産物が、希釈、一本鎖エキソヌクレアーゼ消化、精製またはアダプターライゲーションによって前処理される、請求項8に記載の方法。
- F2^が、2〜40ヌクレオチドを含む、請求項3に記載の方法。
- F2^が、4〜40ヌクレオチドを含む、請求項3に記載の方法。
- F2^が、F2より1〜5ヌクレオチド短い、請求項3に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201562129360P | 2015-03-06 | 2015-03-06 | |
US62/129,360 | 2015-03-06 | ||
PCT/US2016/020284 WO2016144619A1 (en) | 2015-03-06 | 2016-03-01 | Selective amplification of overlapping amplicons |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2018505684A JP2018505684A (ja) | 2018-03-01 |
JP6588560B2 true JP6588560B2 (ja) | 2019-10-09 |
Family
ID=56849621
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017543754A Active JP6588560B2 (ja) | 2015-03-06 | 2016-03-01 | オーバーラップするアンプリコンの選択的増幅 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10011869B2 (ja) |
EP (1) | EP3265590B1 (ja) |
JP (1) | JP6588560B2 (ja) |
KR (1) | KR102607479B1 (ja) |
CN (1) | CN107532203B (ja) |
AU (1) | AU2016229372B2 (ja) |
CA (1) | CA2978709C (ja) |
ES (1) | ES2718765T3 (ja) |
SG (1) | SG11201707154SA (ja) |
WO (1) | WO2016144619A1 (ja) |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2908644T3 (es) | 2014-01-31 | 2022-05-03 | Swift Biosciences Inc | Procedimientos mejorados para el procesamiento de sustratos de ADN |
US10221448B2 (en) * | 2015-03-06 | 2019-03-05 | Pillar Biosciences Inc. | Selective amplification of overlapping amplicons |
TR201908099T4 (tr) | 2016-01-27 | 2019-06-21 | Devyser Holding Ab | Bir hedef sekansta istenilen nükleik asit bölgelerinde seçici amplifikasyon. |
GB201621477D0 (en) | 2016-12-16 | 2017-02-01 | Multiplicom Nv | Modified multiplex and multistep amplification reactions and reagents therefor |
WO2019178337A1 (en) * | 2018-03-14 | 2019-09-19 | Luminex Corporation | Multiplex amplification of nucleic acids employing lowering of denaturation temperature and increasing the annealing temperature |
CN109486921A (zh) * | 2018-12-26 | 2019-03-19 | 山东艾克韦生物技术有限公司 | 一种增加多重pcr引物兼容性的方法 |
CN113227394A (zh) * | 2018-12-28 | 2021-08-06 | 卢米耐克斯公司 | 用于检测变体核苷酸的方法 |
CN110527713B (zh) * | 2019-07-02 | 2024-01-30 | 黄天谊 | 一种折叠引物的pcr扩增方法 |
US20230099193A1 (en) * | 2021-09-29 | 2023-03-30 | Pillar Biosciences Inc. | Personalized cancer liquid biopsies using primers from a primer bank |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DK0519338T3 (da) * | 1991-06-20 | 1996-10-28 | Hoffmann La Roche | Forbedrede fremgangsmåder til nukleinsyreamplifikation |
WO2004016811A2 (en) | 2002-08-19 | 2004-02-26 | Danmarks Tekniske Universitet (Dtu) | Methods and kit for genes shuffling using tagged primers |
US8293501B2 (en) * | 2006-09-12 | 2012-10-23 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and compositions for performing low background multiplex nucleic acid amplification reactions |
EP2201143B2 (en) * | 2007-09-21 | 2016-08-24 | Katholieke Universiteit Leuven | Tools and methods for genetic tests using next generation sequencing |
WO2010115044A2 (en) * | 2009-04-02 | 2010-10-07 | Fluidigm Corporation | Selective tagging of short nucleic acid fragments and selective protection of target sequences from degradation |
JP2014507950A (ja) * | 2011-02-28 | 2014-04-03 | トランスゲノミック,インク. | 混合個体群における標的dnaを配列決定するためのキットおよび方法 |
SG10201605049QA (en) * | 2011-05-20 | 2016-07-28 | Fluidigm Corp | Nucleic acid encoding reactions |
KR102146523B1 (ko) * | 2012-01-06 | 2020-08-20 | 조원창 | 표적 핵산의 향상된 증폭 |
IL285521B2 (en) | 2013-08-19 | 2023-03-01 | Singular Bio Inc | Methods for single molecule detection |
EP3197169A1 (en) * | 2016-01-25 | 2017-07-26 | Thomson Licensing | Method for audio detection and corresponding device |
-
2016
- 2016-03-01 CA CA2978709A patent/CA2978709C/en active Active
- 2016-03-01 KR KR1020177028257A patent/KR102607479B1/ko active IP Right Grant
- 2016-03-01 EP EP16762140.8A patent/EP3265590B1/en active Active
- 2016-03-01 ES ES16762140T patent/ES2718765T3/es active Active
- 2016-03-01 SG SG11201707154SA patent/SG11201707154SA/en unknown
- 2016-03-01 US US15/057,343 patent/US10011869B2/en active Active
- 2016-03-01 WO PCT/US2016/020284 patent/WO2016144619A1/en active Application Filing
- 2016-03-01 AU AU2016229372A patent/AU2016229372B2/en active Active
- 2016-03-01 JP JP2017543754A patent/JP6588560B2/ja active Active
- 2016-03-01 CN CN201680014257.XA patent/CN107532203B/zh active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2978709A1 (en) | 2016-09-15 |
US20160257994A1 (en) | 2016-09-08 |
AU2016229372A1 (en) | 2017-09-28 |
EP3265590A1 (en) | 2018-01-10 |
KR20170124589A (ko) | 2017-11-10 |
EP3265590B1 (en) | 2019-01-02 |
JP2018505684A (ja) | 2018-03-01 |
ES2718765T3 (es) | 2019-07-04 |
AU2016229372B2 (en) | 2020-01-30 |
CN107532203A (zh) | 2018-01-02 |
SG11201707154SA (en) | 2017-09-28 |
KR102607479B1 (ko) | 2023-11-28 |
CN107532203B (zh) | 2019-09-13 |
CA2978709C (en) | 2024-06-04 |
WO2016144619A1 (en) | 2016-09-15 |
US10011869B2 (en) | 2018-07-03 |
EP3265590A4 (en) | 2018-01-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6588560B2 (ja) | オーバーラップするアンプリコンの選択的増幅 | |
US11913069B2 (en) | Selective amplification of overlapping amplicons | |
ES2900102T3 (es) | Composiciones para la secuenciación de ácidos nucleicos en mezclas | |
JP2024010122A (ja) | 二本鎖配列決定のための改善されたアダプター、方法、及び組成物 | |
US8986958B2 (en) | Methods for generating target specific probes for solution based capture | |
US20120028814A1 (en) | Oligonucleotide ligation, barcoding and methods and compositions for improving data quality and throughput using massively parallel sequencing | |
US20120015821A1 (en) | Methods of Generating Gene Specific Libraries | |
WO2010030683A1 (en) | Methods of generating gene specific libraries | |
KR102625365B1 (ko) | 프라이머-다이머 증폭 감소 방법 | |
EP3781585A1 (en) | Sensitive in vitro assays for substrate preferences and sites of nucleic acid binding, modifying, and cleaving agents | |
CN108138175A (zh) | 用于分子条形码编码的试剂、试剂盒和方法 | |
US20140336058A1 (en) | Method and kit for characterizing rna in a composition | |
CN109517888B (zh) | 使用等位基因特异的反应性引物的核酸扩增方法 | |
EP3237635B1 (en) | Method for generating sequence ready fragments by the use of "bubble primers" | |
CN114364813B (zh) | 多重等温扩增核酸序列的方法 | |
JP5455243B2 (ja) | 未知の配列を含む増幅した二本鎖核酸の混合物を製造する方法 | |
JP7333171B2 (ja) | Rna検出方法、rna検出用核酸及びrna検出用キット | |
JP2022512414A (ja) | 核酸増幅及び識別方法 | |
CN111511927A (zh) | 核酸扩增中的可逆热力学陷阱(热陷阱) | |
TW201814051A (zh) | 減少引子二聚體擴增的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170911 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20170817 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180626 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20180627 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180921 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181213 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190402 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190426 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190903 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190912 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6588560 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |