JP6576170B2 - くし型電極を用いた糖化タンパク質の測定方法 - Google Patents
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Description
[1]試料中の糖化タンパク質の測定方法であって、(1)プロテアーゼにより糖化タンパク質から分解生成物質を生成せしめた試料と、酸化還元酵素と、を、電子メディエータの存在下で反応させ、還元された電子メディエータを生成せしめる工程と、(2)工程(1)における反応の状態を、くし型電極を使用して電気化学的方式で検出する工程と、を含む測定方法。
(1)プロテアーゼにより糖化タンパク質から分解生成物質を生成せしめた試料と、酸化還元酵素と、を、電子メディエータの存在下で反応させ、還元された電子メディエータを生成せしめる工程と、
(2)工程(1)における反応の状態を、くし型電極を使用して電気化学的方式で検出する工程と、
を含む測定方法である。
(1)電気絶縁性の基板上に貴金属の膜を形成し、その上にスクリーン印刷法によりレジストをくし型形状に印刷して、レジストで覆われていない部分の貴金属の膜をエッチングする。その後、レジストを除去することにより、くし型電極を形成する。
(2)電気絶縁性の基板上に貴金属の膜を形成し、その上にレジストを塗布又は貼付し、フォトマスクを介して露光を行なってくし型電極を形成する部分のレジストを硬化させる。その後、くし型電極を形成する部分以外のレジスト及び貴金属の膜をエッチングし、さらに、くし型電極を形成する部分のレジストを除去することにより、くし型電極を形成する。
(3)電気絶縁性の基板上に、製造すべきくし型電極パターンを抜いたテンプレートを重ね、テンプレートを介して電気絶縁性の基板上に貴金属の膜を形成した後、テンプレートを除去することにより、くし型電極を形成する。
(4)電気絶縁性の基板上に、スクリーン印刷法により、くし型電極を形成しない部分にレジストを印刷し、電気絶縁性の基板及びレジスト上に貴金属の膜を形成する。その後、レジスト及びレジスト上に形成された貴金属の膜を除去することにより、くし型電極を形成する。
電気絶縁性の基板の材料としては、例えば、ポリエステル樹脂、ポリエチレンテレフタレート、及びエンジニアリングプラスチック等が挙げられる。貴金属としては、例えば、金、白金、銀、パラジウム、ルテニウム、イリジウム、ロジウム、及びこれらの混合物が挙げられる。ただし、くし型電極の製造方法は、上記に限定されない。
(1)電子メディエータ及び酸化還元酵素を含む組成物と、
(2)くし型電極と、
を備え、プロテアーゼにより糖化タンパク質から生成せしめた分解生成物質を酸化還元酵素と反応させる、バイオセンサである。
(1)電気絶縁性の基板上に貴金属の膜を形成し、その上にスクリーン印刷法によりレジストをくし型形状に印刷して、レジストで覆われていない部分の貴金属の膜をエッチングする。その後、レジストを除去することにより、くし型電極を形成する。
(2)電気絶縁性の基板上に貴金属の膜を形成し、その上にレジストを塗布又は貼付し、フォトマスクを介して露光を行なってくし型電極を形成する部分のレジストを硬化させる。その後、くし型電極を形成する部分以外のレジスト及び貴金属の膜をエッチングし、さらに、くし型電極を形成する部分のレジストを除去することにより、くし型電極を形成する。
(3)電気絶縁性の基板上に、製造すべきくし型電極パターンを抜いたテンプレートを重ね、テンプレートを介して電気絶縁性の基板上に貴金属の膜を形成した後、テンプレートを除去することにより、くし型電極を形成する。
(4)電気絶縁性の基板上に、スクリーン印刷法により、くし型電極を形成しない部分にレジストを印刷し、電気絶縁性の基板及びレジスト上に貴金属の膜を形成する。その後、レジスト及びレジスト上に形成された貴金属の膜を除去することにより、くし型電極を形成する。
電気絶縁性の基板の材料としては、例えば、ポリエステル樹脂、ポリエチレンテレフタレート、及びエンジニアリングプラスチック等が挙げられる。貴金属としては、例えば、金、白金、銀、パラジウム、ルテニウム、イリジウム、ロジウム、及びこれらの混合物が挙げられる。ただし、くし型電極の製造方法は、上記に限定されない。
(1)試料溶液を加えられたときに300mmol/L以上となるよう設定されたヘキサアンミンルテニウム(III)塩化物及び試料溶液を加えられたときに12U/mL以上となるよう設定されたフルクトシルアミノ酸オキシダーゼを含む組成物と、
(2)総面積が1.8mm2〜4mm2であり、電極間距離が50μm未満であり、作用極の電極幅が5μm〜50μmであり、かつ対極の電極幅が5μm〜100μmであるくし型電極と、
を備え、フルクトシルアミノ酸オキシダーゼとヘキサアンミンルテニウム(III)塩化物を含む組成物がくし型電極に配置されており、プロテアーゼにより糖化タンパク質から生成せしめた分解生成物質をフルクトシルアミノ酸オキシダーゼと反応させる、バイオセンサであり得る。
<試薬(終濃度)>
・10mmol/L リン酸カリウム緩衝液(PPB) (pH8.0)
・FAOD(1.2〜240U/mL)
・ヘキサアンミンルテニウム(III)塩化物(100mmol/L)
<基質(終濃度)>
・Z−FK溶液(0〜500μmol/L)
<使用電極>
・くし型電極(国際公開第2014/112569号に記載の田中貴金属社開発のくし型電極)
<試薬(終濃度)>
・10mmol/L リン酸カリウム緩衝液(PPB) (pH8.0)
・FAOD (12U/mL)
・ヘキサアンミンルテニウム(III)塩化物(1〜400mmol/L)
<基質(終濃度)>
・Z−FK溶液(0〜500μmol/L)
<使用電極>
・くし型電極(国際公開第2014/112569号に記載の田中貴金属社開発のくし型電極)
FAODを120mmol/L PPBに144U/mLになるように溶解した。ヘキサアンミンルテニウム(III)塩化物を4、40、200、400、600、800、1200、1600mmol/Lになるように精製水に溶解した。Z−FKを75、150、450、750μmol/Lになるように精製水に溶解した。
<試薬(終濃度)>
・10mmol/L リン酸カリウム緩衝液(PPB) (pH8.0)
・FAOD (60U/mL)
・ヘキサアンミンルテニウム(III)塩化物(300mmol/L)
<基質(終濃度)>
・Z−FK水溶液(0〜500μmol/L)
<使用電極>
・くし型電極(国際公開第2014/112569号に記載の田中貴金属社開発のくし型電極)
・カーボン印刷電極(バイオデバイステクノロジー社製)
<試薬(終濃度)>
・10mmol/L リン酸カリウム緩衝液(PPB) (pH8.0)
・FAOD (60U/mL)
・ヘキサアンミンルテニウム(III)塩化物(300mmol/L)
・スクロース(0.25%)和光純薬工業製
<基質(終濃度)>
・Z−FK水溶液(0〜500μmol/L)
<使用電極>
・くし型電極(国際公開第2014/112569号に記載の田中貴金属社開発のくし型電極)
・カーボン印刷電極(バイオデバイステクノロジー社製)
<サンプル>
・糖化アルブミン(Low/High)
<試薬1(終濃度)>
・オリエンターゼ22BF(エイチビィアイ社製) (50mg/mL)
<試薬2(終濃度)>
・10mmol/L リン酸カリウム緩衝液(PPB) (pH8.0)
・FAOD (60U/mL)
・ヘキサアンミンルテニウム(III)塩化物(300mmol/L)
・スクロース(0.25%) 和光純薬工業社製
<使用電極>
・くし型電極(国際公開第2014/112569号に記載の田中貴金属社開発のくし型電極)
・カーボン印刷電極(バイオデバイステクノロジー社製)
Claims (5)
- 試料中の糖化アルブミンの測定方法であって、
(1)プロテアーゼにより糖化アルブミンから分解生成物質を生成せしめた試料と、12U/mL以上のフルクトシルアミノ酸オキシダーゼと、を、300mmol/L以上のヘキサアンミンルテニウム(III)塩化物の存在下で反応させ、還元されたヘキサアンミンルテニウム(III)塩化物を生成せしめる工程と、
(2)工程(1)における反応の状態を、くし型電極を使用して電気化学的方式で検出する工程と、
を含み、
前記くし型電極は、総面積が1.8mm 2 〜4mm 2 であり、電極間距離が50μm未満であり、作用極の電極幅が5μm〜50μmであり、かつ対極の電極幅が5μm〜100μmであり、
前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼと前記ヘキサアンミンルテニウム(III)塩化物を含む組成物が、前記くし型電極に配置されている、
測定方法。 - 試料中の糖化アルブミンの測定方法であって、
(1)プロテアーゼにより糖化アルブミンから分解生成物質を生成せしめた試料と、12U/mL以上のフルクトシルアミノ酸オキシダーゼと、を、200mmol/L以上のヘキサアンミンルテニウム(III)塩化物の存在下で反応させ、還元されたヘキサアンミンルテニウム(III)塩化物を生成せしめる工程と、
(2)工程(1)における反応の状態を、くし型電極を使用して電気化学的方式で検出する工程と、
を含み、
前記くし型電極は、総面積が1.8mm 2 〜4mm 2 であり、電極間距離が50μm未満であり、作用極の電極幅が5μm〜50μmであり、かつ対極の電極幅が5μm〜100μmであり、
前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼと前記ヘキサアンミンルテニウム(III)塩化物を含む組成物が、前記くし型電極に配置されている、
測定方法。 - 前記電気化学的方式が定電位電流測定方式である、請求項1又は2に記載の測定方法。
- 試料中の糖化アルブミンの測定用バイオセンサであって、
(1)300mmol/L以上のヘキサアンミンルテニウム(III)塩化物及び12U/mL以上のフルクトシルアミノ酸オキシダーゼを含む組成物と、
(2)総面積が1.8mm2〜4mm2であり、電極間距離が50μm未満であり、作用極の電極幅が5μm〜50μmであり、かつ対極の電極幅が5μm〜100μmであるくし型電極と、
を備え、
前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼと前記ヘキサアンミンルテニウム(III)塩化物を含む組成物が前記くし型電極に配置されており、
プロテアーゼを接触させた糖化アルブミンから生成せしめた分解生成物質が前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼと反応させられる、バイオセンサ。 - 試料中の糖化アルブミンの測定用バイオセンサであって、
(1)200mmol/L以上のヘキサアンミンルテニウム(III)塩化物及び12U/mL以上のフルクトシルアミノ酸オキシダーゼを含む組成物と、
(2)総面積が1.8mm 2 〜4mm 2 であり、電極間距離が50μm未満であり、作用極の電極幅が5μm〜50μmであり、かつ対極の電極幅が5μm〜100μmであるくし型電極と、
を備え、
前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼと前記ヘキサアンミンルテニウム(III)塩化物を含む組成物が前記くし型電極に配置されており、
プロテアーゼを接触させた糖化アルブミンから生成せしめた分解生成物質が前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼと反応させられる、バイオセンサ。
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