JP6482773B2 - 3d高解像度局在顕微鏡法のための方法 - Google Patents
3d高解像度局在顕微鏡法のための方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6482773B2 JP6482773B2 JP2014091187A JP2014091187A JP6482773B2 JP 6482773 B2 JP6482773 B2 JP 6482773B2 JP 2014091187 A JP2014091187 A JP 2014091187A JP 2014091187 A JP2014091187 A JP 2014091187A JP 6482773 B2 JP6482773 B2 JP 6482773B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- image
- sample
- imaging
- fluorescent marker
- fluorescent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 52
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 title claims description 13
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 113
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 64
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims description 54
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 46
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims description 26
- 238000005562 fading Methods 0.000 claims description 19
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 claims description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims 1
- KZMAWJRXKGLWGS-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-n-[4-(4-methoxyphenyl)-1,3-thiazol-2-yl]-n-(3-methoxypropyl)acetamide Chemical compound S1C(N(C(=O)CCl)CCCOC)=NC(C=2C=CC(OC)=CC=2)=C1 KZMAWJRXKGLWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 19
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 description 10
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 6
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 101001109518 Homo sapiens N-acetylneuraminate lyase Proteins 0.000 description 1
- 102100022686 N-acetylneuraminate lyase Human genes 0.000 description 1
- 201000009310 astigmatism Diseases 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000000295 emission spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012634 optical imaging Methods 0.000 description 1
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 1
- 210000001747 pupil Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000979 synthetic dye Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/645—Specially adapted constructive features of fluorimeters
- G01N21/6456—Spatial resolved fluorescence measurements; Imaging
- G01N21/6458—Fluorescence microscopy
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
-
- G—PHYSICS
- G02—OPTICS
- G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
- G02B21/00—Microscopes
- G02B21/0004—Microscopes specially adapted for specific applications
- G02B21/002—Scanning microscopes
- G02B21/0024—Confocal scanning microscopes (CSOMs) or confocal "macroscopes"; Accessories which are not restricted to use with CSOMs, e.g. sample holders
- G02B21/0052—Optical details of the image generation
- G02B21/0076—Optical details of the image generation arrangements using fluorescence or luminescence
-
- G—PHYSICS
- G02—OPTICS
- G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
- G02B21/00—Microscopes
- G02B21/16—Microscopes adapted for ultraviolet illumination ; Fluorescence microscopes
-
- G—PHYSICS
- G02—OPTICS
- G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
- G02B21/00—Microscopes
- G02B21/36—Microscopes arranged for photographic purposes or projection purposes or digital imaging or video purposes including associated control and data processing arrangements
- G02B21/365—Control or image processing arrangements for digital or video microscopes
- G02B21/367—Control or image processing arrangements for digital or video microscopes providing an output produced by processing a plurality of individual source images, e.g. image tiling, montage, composite images, depth sectioning, image comparison
-
- G—PHYSICS
- G02—OPTICS
- G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
- G02B27/00—Optical systems or apparatus not provided for by any of the groups G02B1/00 - G02B26/00, G02B30/00
- G02B27/58—Optics for apodization or superresolution; Optical synthetic aperture systems
-
- G—PHYSICS
- G02—OPTICS
- G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
- G02B21/00—Microscopes
- G02B21/36—Microscopes arranged for photographic purposes or projection purposes or digital imaging or video purposes including associated control and data processing arrangements
- G02B21/361—Optical details, e.g. image relay to the camera or image sensor
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Multimedia (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Computer Vision & Pattern Recognition (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Microscoopes, Condenser (AREA)
Description
特に厳密なサイズの評価では、撮像の点画像退色関数が考慮される。この点画像退色関数は、従来技術においても既に記載したように、点発光体の像を決定することによって実験的に作成することができる。これは、実験的にまたはモデリングによって行うことができ、発光する点発光体の放射線がその中で散乱する体積が得られる。次に、この点退色画像において、実際の発光する蛍光マーカーの像に可能な限り近接した断面が求められる。この断面の位置が深度位置を示す。したがって、任意でx、y座標を確定してもよい。
以下では本発明を、図面を参照しながら、例示的にさらにより詳しく説明する。
図1aは、蛍光を発するように励起されたマーカー分子1を概略的に示している。発光するマーカー分子1は、顕微鏡において物理的原理に基づいて、限られた光学的解像度のみで検出することができる。顕微鏡が光学的解像度の回折限界に達した場合でも、発光するマーカー分子1の光子は、依然として回折を制限されて散乱され、マーカー分子1がエアリー・ディスク2として検出される。つまり、顕微鏡は原理的に、図1に概略的に黒い円として描かれたマーカー分子1の幾何学的広がりの代わりに、図1にエアリー・ディスク2として視覚化された、より大きい対象物を像として再現する。エアリー・ディスク2のサイズは、使用される顕微鏡装置の品質によって左右され、光学的撮像の点画像退色関数の半値幅によって定義される。しかし、使用される光学系は、それが好ましいとしても、必ずしも回折限界で動作する必要はない。像つまりエアリー・ディスク2のサイズは、さらに焦点調節にも左右される。撮像されるマーカー分子1が正確に焦点になければ、エアリー・ディスク2が図1bに示されているように大きくなる。
図2は、単一画像5内の例示的な状況の概略平面図である。単一画像5は、撮像の光軸に直交するx/y平面で図示されている。図から分かるように、隣接する2つのマーカー分子のエアリー・ディスク2が部分的に重なった範囲3がある。しかし、この場合、図2の左側の範囲3から分かるように、先に活性化されていたマーカー分子1のみが重要である。活性化されていないマーカー分子1’は、単一画像5に捕えられた特定の蛍光放射線を放出しないので、何の影響も及ぼさない。
第1の工程S1では、切替信号を用いてマーカー分子の部分集合を活性化する。これらのマーカー分子は、特定の蛍光放射線を放出するように励起可能ではない第1の状態から、特定の蛍光放射線を放射するように励起可能な第2の状態に切り替えられる。もちろん、活性化信号によって選択的な非活性化作用をもたらしてもよい。つまり、工程S1では、逆の手段を用いてもよい。工程S1の後に、マーカー分子の一部のみが、特定の蛍光放射線を放出するように励起可能であることが重要である。活性化あるいは非活性化(以下では簡略化するために活性化の場合のみについて説明する)は、使用されるマーカー分子または固有の試料分子に応じて行われる。例えばDRONPA、PA−GEPのような色素または可逆に切替可能な合成色素(例えばアレクサ/シアン構造体(Alexa/Cyan-Konstrukten))の場合、活性化は光学的放射線によって行われ、つまり、切替信号は切替放射線である。
第3の工程S3において、このように放出された蛍光放射線が、例えば記録された蛍光光子の積分によって検出され、その結果、図3の下方にある図4の部分図bに図示された単一画像5の状況が生じる。図から分かるように、理想的には、全ての発光するマーカー分子1のエアリー・ディスク2が重複していない。次に、全ての活性化されたマーカー分子1が隔離される(isoliert)。エアリー・ディスクのサイズは、撮像の光学的解像度およびマーカー分子の深度位置によって規定される。加えて、図4の部分図bでは、活性化されていない集合l_n+1に属する蛍光分子の(理論上の)エアリー・ディスクが示されている。この活性化されていないマーカー分子は蛍光放射線を放出しないので、これらの分子の(理論上の)エアリー・ディスクに位置する蛍光放射線は、発光するマーカー分子の集合l_nの蛍光放射線の検出を妨げない。
Claims (7)
- 3D高解像度局在顕微鏡法のための方法であって、
撮像側の境界面(22)を有する試料(7)が提供され、該試料(7)は、前記撮像側において透光部材と隣接し、前記境界面(22)は、前記試料(7)と、前記透光部材との間の境界面(22)であり、
励起工程において、該試料(7)を励起放射線で照射することによって、該試料(7)内に蛍光マーカーを励起して発光させ、
撮像工程において、該試料(7)を、撮像光学系(15、17)を用いて撮像方向に沿って単一画像(5)に撮像し、該単一画像は、発光する蛍光マーカー(1)の像(2)を含み、該撮像光学系(15、17)は、焦点面(24)と光学的解像度とを有し、
前記励起工程および前記撮像工程を複数回繰り返すことによって、複数の画像(5)が生成され、前記励起工程を、発光する前記蛍光マーカー(1)の少なくとも一部について、発光する前記蛍光マーカー(1)の像(2)が前記複数の画像(5)のそれぞれにおいて隔離されるように行い、
生成される複数の画像(5)において、発光する前記蛍光マーカー(1)の隔離された像(2)から、光学的解像度を超えた精度を有するそれぞれの対応する前記蛍光マーカー(1)の位置情報が確定され、
確定された前記位置情報から、高解像度の全体画像を生成する、前記方法において、
前記撮像光学系(15、17)を、前記焦点面(24)が該透光部材内に位置するように調節し、
前記単一画像(5)において、発光する前記蛍光マーカー(1)の隔離された像(2)をそのサイズ(25)に関して分析し、該サイズ(25)から、対応する発光する前記蛍光マーカー(1)が撮像方向に沿って、前記境界面(22)のどれほど下流に位置しているかを示す深度位置に関する情報を導出し、
最小のサイズ(26)を有する発光する前記蛍光マーカー(1)の隔離された像(2)を求め、この蛍光マーカー(1)の深度位置は、前記境界面(22)上に位置していることを示し、
前記最小のサイズ(26)を超える前記サイズ(25)を有する発光する前記蛍光マーカー(1)の隔離された像(2)について、深度位置に関する情報が、前記境界面(22)を参照する、方法。 - 前記励起放射線を、光シート(27)として照射することを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記撮像光学系は、対物レンズ(15)を含み、
前記撮像光学系が、該対物レンズ(15)を通して前記励起放射線を照射することを特徴とする、請求項1または2に記載の方法。 - 前記励起放射線を広範囲照射として照射することを特徴とする、請求項3に記載の方法。
- 前記透光部材は、カバー・ガラス(23)を含み、
前記試料(7)を前記カバー・ガラス(23)で覆い、前記撮像光学系(15、17)を、前記焦点面(24)が該カバー・ガラス(23)内に位置するように調節することを特徴とする、請求項1乃至4のいずれか1項に記載の方法。 - 前記像(2)の面積と前記像(2)の最大寸法または最小寸法とのうちの少なくとも一方を確定し、確定された前記像(2)の面積と前記像(2)の最大寸法または最小寸法とのうちの少なくとも一方を前記サイズ(25)の尺度として用いることによって、前記像(2)を、前記像(2)のサイズ(25)に関して分析することを特徴とする、請求項1乃至5のいずれか1項に記載の方法。
- 先に決定された実験的なデータまたはモデルから、点画像退色関数を評価し、点状の発光する要素の点画像退色像を決定し、該点画像退色像の断面が、対応する前記発光する蛍光マーカー(1)の前記像(2)と最良に一致するまで、該点画像退色像を撮像方向に移動させることを特徴とする、請求項1乃至5のいずれか1項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE102013208927.9 | 2013-05-14 | ||
DE201310208927 DE102013208927A1 (de) | 2013-05-14 | 2013-05-14 | Verfahren zur 3D-hochauflösenden Lokalisierungsmikroskopie |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014224813A JP2014224813A (ja) | 2014-12-04 |
JP6482773B2 true JP6482773B2 (ja) | 2019-03-13 |
Family
ID=50731928
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014091187A Active JP6482773B2 (ja) | 2013-05-14 | 2014-04-25 | 3d高解像度局在顕微鏡法のための方法 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20140339439A1 (ja) |
EP (1) | EP2803978B1 (ja) |
JP (1) | JP6482773B2 (ja) |
DE (1) | DE102013208927A1 (ja) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016109579A (ja) * | 2014-12-08 | 2016-06-20 | ソニー株式会社 | 情報処理装置、画像取得システム、情報処理方法、画像情報取得方法及びプログラム |
JP2016206652A (ja) * | 2015-04-21 | 2016-12-08 | オリンパス株式会社 | 試料の3次元構造の撮像方法及び顕微鏡装置 |
EP3382439A4 (en) * | 2015-11-27 | 2019-12-11 | Nikon Corporation | MICROSCOPE, OBSERVATION METHOD, AND IMAGE PROCESSING PROGRAM |
DE102017211031A1 (de) * | 2016-11-21 | 2018-05-24 | Carl Zeiss Microscopy Gmbh | Verfahren und Mikroskop zum Ermitteln einer Fluoreszenzintensität |
US10908072B2 (en) | 2016-12-15 | 2021-02-02 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Total internal reflection and transmission illumination fluorescence microscopy imaging system with improved background suppression |
US10928621B2 (en) * | 2017-10-31 | 2021-02-23 | Samantree Medical Sa | Sample dishes for use in microscopy and methods of their use |
CN108470099B (zh) * | 2018-03-15 | 2021-11-02 | 长沙天玖卫星科技有限公司 | 光学成像类小卫星成像能力分析与姿态控制指标分析方法 |
Family Cites Families (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5199407B2 (ja) * | 2003-09-29 | 2013-05-15 | オリンパス株式会社 | 顕微鏡システム及び観察方法 |
EP1623735A1 (de) | 2004-08-05 | 2006-02-08 | Gemü GmbH | Durchflussregelventil |
EP2453239B1 (en) | 2005-05-23 | 2017-04-26 | Harald F. Hess | Optical microscopy with transformable optical labels |
EP1944600B1 (de) | 2005-07-22 | 2016-01-27 | Carl Zeiss Microscopy GmbH | Laser-Scanning-Mikroskop |
DE102006021317B3 (de) | 2006-05-06 | 2007-10-11 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Verfahren und Fluoreszenzlichtmikroskop zum räumlich hochauflösenden Abbilden einer Struktur einer Probe |
EP2023127B1 (en) * | 2006-05-31 | 2017-12-20 | Olympus Corporation | Biological specimen imaging method and biological specimen imaging apparatus |
JP5070995B2 (ja) * | 2007-08-29 | 2012-11-14 | 横河電機株式会社 | 共焦点顕微鏡装置 |
US8564792B2 (en) * | 2007-12-21 | 2013-10-22 | President And Fellows Of Harvard College | Sub-diffraction limit image resolution in three dimensions |
DE102009043744A1 (de) * | 2009-09-30 | 2011-03-31 | Carl Zeiss Microlmaging Gmbh | Verfahren und Mikroskop zur dreidimensional auflösungsgesteigerten Mikroskopie |
US8570649B2 (en) * | 2009-10-29 | 2013-10-29 | California Institute Of Technology | Dual-mode raster point scanning/light sheet illumination microscope |
DE102009060793A1 (de) * | 2009-12-22 | 2011-07-28 | Carl Zeiss Microlmaging GmbH, 07745 | Hochauflösendes Mikroskop und Verfahren zur zwei- oder dreidimensionalen Positionsbestimmung von Objekten |
DE102009060490A1 (de) | 2009-12-22 | 2011-06-30 | Carl Zeiss Microlmaging GmbH, 07745 | Hochauflösendes Mikroskop und Bildteileranordnung |
US9523846B2 (en) | 2010-09-24 | 2016-12-20 | Carl Zeiss Microscopy Gmbh | 3D localisation microscopy and 4D localisation microscopy and tracking methods and systems |
DE102010044013A1 (de) * | 2010-11-16 | 2012-05-16 | Carl Zeiss Microimaging Gmbh | Tiefenauflösungsgesteigerte Mikroskopie |
DE102010044031A1 (de) | 2010-11-17 | 2012-05-24 | Robert Bosch Gmbh | Ultraschallbasierte Richtungsbestimmung von Objekten in einer Fahrzeugumgebung |
JP5278489B2 (ja) * | 2011-05-09 | 2013-09-04 | 株式会社ニコン | 顕微鏡、顕微鏡の焦点調節制御方法 |
FR2978254B1 (fr) * | 2011-07-21 | 2014-01-24 | Imagine Optic | Methode et dispositif optique pour la localisation d'une particule en super resolution |
-
2013
- 2013-05-14 DE DE201310208927 patent/DE102013208927A1/de active Pending
-
2014
- 2014-04-25 JP JP2014091187A patent/JP6482773B2/ja active Active
- 2014-05-13 US US14/276,335 patent/US20140339439A1/en not_active Abandoned
- 2014-05-13 EP EP14167997.7A patent/EP2803978B1/de active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2803978A1 (de) | 2014-11-19 |
US20140339439A1 (en) | 2014-11-20 |
EP2803978B1 (de) | 2022-12-21 |
JP2014224813A (ja) | 2014-12-04 |
DE102013208927A1 (de) | 2014-11-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6482773B2 (ja) | 3d高解像度局在顕微鏡法のための方法 | |
JP6441587B2 (ja) | 3d高解像度局在顕微鏡法のための方法 | |
JP5894180B2 (ja) | 深さ分解能が向上した顕微鏡検査 | |
JP5485289B2 (ja) | 分解能増進顕微鏡法 | |
JP5335744B2 (ja) | 光変換可能な光学標識を用いる光学顕微鏡法 | |
JP6603403B2 (ja) | 分光顕微鏡及びその方法 | |
US8773758B2 (en) | Microscope apparatus with an imaging system including an astigmatic difference changing device | |
JP2016529876A (ja) | 画像形成サイトメータ | |
JP2013515249A (ja) | 物体の2次元または3次元の位置調整のための高解像度顕微鏡および方法 | |
WO2014180566A1 (en) | Method and apparatus for combination of localization microscopy and structured illumination microscopy | |
JP6148256B2 (ja) | 高分解能3d蛍光顕微鏡法のための顕微鏡および方法 | |
US20140333750A1 (en) | High resolution dual-objective microscopy | |
WO2011132584A1 (ja) | 膜電位変化検出装置および膜電位変化検出方法 | |
JP6393474B2 (ja) | 高分解能3d位置特定顕微鏡検査方法 | |
JP5914242B2 (ja) | 観察装置 | |
JP2015506498A (ja) | 高分解能3d蛍光顕微鏡法のための顕微鏡および方法 | |
CN110114709A (zh) | 确定荧光强度的方法和显微镜 | |
JP7472134B2 (ja) | 試料の3次元領域の蛍光信号を検出するための方法および装置 | |
JP2015064462A (ja) | 共焦点顕微鏡 | |
US20230384224A1 (en) | Methods and apparatus for light-microscopic multicscale recording of biological specimens | |
JP6131568B2 (ja) | 顕微鏡装置及び画像形成方法 | |
KR101603726B1 (ko) | 멀티모달 현미경 | |
US11391937B2 (en) | Method and device for determining a property of an object | |
US10883940B2 (en) | Fluctuation-based fluorescence microscopy | |
Meijering et al. | Implementation of 3D Multi-Color Fluorescence Microscopy in a Quadruple Trap Optical Tweezers System |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20170413 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20180227 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180313 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180612 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180720 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20181225 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190122 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190213 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6482773 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |