JP6417120B2

JP6417120B2 - 経口紫外線抵抗性向上剤

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Publication number: JP6417120B2
Application number: JP2014122336A
Authority: JP
Inventors: 哲矢桑野; 大治加川; 早和子中島; 村瀬　孝利; 孝利村瀬
Original assignee: Kao Corp
Current assignee: Kao Corp
Priority date: 2013-07-05
Filing date: 2014-06-13
Publication date: 2018-10-31
Anticipated expiration: 2034-06-13
Also published as: WO2015002239A1; JP2015027996A; CN105579040A; US20160136130A1

Description

本発明は、経口摂取により、皮膚の紫外線抵抗性を向上させる経口紫外線抵抗性向上剤に関する。

近年、オゾン層の減少が一要因となり、紫外線による皮膚障害が問題になっている。例えば、紫外線の暴露により、皮膚の紅斑や浮腫が発生したり、色素沈着を形成し、肝斑や雀卵斑の増悪化を招いたり、角層水分量の減少や、皮膚バリア機能の低下、皮膚弾力性の低下やそれに伴う皺の形成、日光弾性症や項部菱形皮膚等の光老化、更には皮膚腫瘍を引き起こす。

これらの紫外線による皮膚障害に対して、従来の外用剤での治療又は予防ではなく、素材の経口摂取により、皮膚の紫外線に対する抵抗力を向上させることが試みられている。例えば、ラクトバチルス属菌を経口摂取した場合に紫外線照射による皮膚バリア機能の損傷を抑制すること（特許文献１）、カロチノイドにエラスチンやセラミドを配合した組成物を経口摂取した場合に、紫外線に誘発される皮膚の紅斑を効果的に抑制し得ること（特許文献２）が報告されている。

グルコン酸無水物であるグルコノ−δ−ラクトン（ＧＤＬ）は、グルコースの１位のヒドロキシル基がケトンに置き換わった代表的な糖ラクトンである。グルコノ−δ−ラクトンは、生体内ではグルコース−１−デヒドロゲナーゼの作用によりグルコースから変換され、その６−リン酸誘導体はペントースリン酸回路の代謝中間体でもある。グルコノ−δ−ラクトン及びグルコン酸は、我が国ではともに医薬品、食品添加物として指定され、安定化剤、矯味剤、pＨ調整剤、粘着剤、酸味料、膨張剤、豆腐の凝固剤等として使われている。
また、近年、グルコン酸を皮膚に塗布した場合に、ＩＧＦ−１分泌が促進され、育毛促進、皮膚の皺、たるみの軽減等の効果を発揮すること（特許文献３）、グルコノ‐δ‐ラクトンをマウス皮膚に塗布することにより、皮膚表面が酸性側に傾き、角層構造が強化されバリア機能が向上すること（非特許文献１）等が報告されている。

しかしながら、グルコノ-δ-ラクトンやグルコン酸を経口摂取した場合に、紫外線による皮膚障害に対して如何なる効果を有するのかはこれまでに知られていない。

特開２００８−１７９６０１号公報特開２００４−２２９６１１号公報特開２００８−１００９４３号公報

Journal of investigative dermatology 2010;130:500-510

本発明は、経口摂取により、皮膚の紫外線に対する抵抗力を高め、紫外線の暴露により生じる皮膚のダメージを軽減又は抑制できる、経口紫外線抵抗性向上剤を提供することに関する。さらに、当該紫外線抵抗性向上剤を経口投与又は摂取する、非治療的紫外線抵抗性向上方法を提供することに関する。

本発明者らは、皮膚の紫外線抵抗性を向上させる経口摂取可能な素材について検討した。その結果、グルコノ-δ-ラクトンを経口摂取した場合に、紫外線暴露による皮膚紅斑の発症及び表皮肥厚が抑制されることを見出した。更に、当該紫外線により発現誘導される炎症関連分子、メラニン合成関連分子、増殖関連分子、及び真皮変性関連因子の発現が抑制され、グルコノ-δ-ラクトンが経口紫外線抵抗性向上剤として有用であることを見出した。

すなわち、本発明は、グルコノ-δ-ラクトンを有効成分とする経口紫外線抵抗性向上剤に係るものである。さらに、当該紫外線抵抗性向上剤を経口投与又は摂取する、非治療的紫外線抵抗性向上方法に係るものである。

本発明の紫外線抵抗性向上剤等は、経口摂取により、例えば、皮膚への紫外線の暴露によって生じる、紅斑や浮腫等の皮膚の炎症、色素沈着の形成、肝斑や雀卵斑等の増悪化、角層機能の低下、皮膚バリア機能の低下、皮膚弾力性の低下やそれに伴う皺の形成、日光弾性症や項部菱形皮膚、皮膚腫瘍等種々の皮膚障害、光老化の軽減又は抑制に有効である。

グルコノ-δ-ラクトンの紫外線誘導紅斑及び色素沈着抑制効果を示す図。グルコノ-δ-ラクトンの抗炎症（炎症性サイトカイン抑制）効果を示す図。グルコノ-δ-ラクトンの抗炎症（リンパ球浸潤に関与する接着因子抑制）効果を示す図。グルコノ-δ-ラクトンのメラニン合成関連分子抑制効果を示す図。グルコノ-δ-ラクトンの増殖関連分子抑制効果を示す図。グルコノ-δ-ラクトンの真皮変性関連分子抑制効果を示す図。グルコノ-δ-ラクトンの色素沈着抑制効果を示す図。グルコノ-δ-ラクトンの皮膚バリア機能低下抑制効果を示す図。グルコノ-δ-ラクトンの角層水分量低下抑制効果を示す図。グルコノ-δ-ラクトンの皮膚粘弾性低下抑制効果を示す図。ヒト試験におけるグルコノ-δ-ラクトンの紫外線抵抗性向上、ＵＶＢ誘導紅斑及び色素沈着抑制効果を示す図。ヒト試験におけるグルコノ-δ-ラクトンおよびビタミン剤組み合わせ処方での紫外線抵抗性向上、紫外線誘導紅斑及び色素沈着抑制効果を示す図。

本発明の紫外線抵抗性向上剤において用いられるグルコノ-δ-ラクトン（グルコノ−１，５−ラクトン）は、グルコン酸から１分子の水が脱水された分子内エステルである。グルコノ-δ-ラクトンを水に溶解すると徐々にグルコン酸に変化し、グルコノ-δ-ラクトンとグルコン酸の平衡状態に達する。したがって、本発明において、グルコノ-δ-ラクトンが好ましいが、グルコン酸を使用することもできる。グルコン酸を使用する場合は、グルコン酸の非毒性塩を使用することができ、斯かる塩としては、例えばナトリウムおよびカリウムのようなアルカリ金属との塩、カルシウムおよびマグネシウムのようなアルカリ土類金属との塩が挙げられる。

グルコノ-δ-ラクトン或いはグルコン酸は、公知の方法、例えば、グルコースを有機溶媒存在下にパラジウム触媒を用い、分子状酸素とともに反応させることにより製造できる（特開昭５５−４０６０６号公報）。また、ある種のカビ（Penicillium luteum purpurogenum, Penicillium chrysogenum, Aspergillus niger等）または細菌（Bacterium suboxydans, Bacterium puridum）によってブドウ糖を発酵酸化させることによってグルコン酸液を製造することができ、当該グルコン酸液を減圧濃縮することによりグルコノ-δ-ラクトンを製造することができる（第８版食品添加物公定書解説書（廣川書店））。さらに、グルコノ-δ-ラクトン或いはグルコン酸は、医薬品添加物、食品添加物等として流通している、市販品を購入して使用することができる。

後記実施例に示すように、グルコノ-δ-ラクトンをヒトが経口摂取した後に皮膚に紫外線を照射された場合、当該紫外線照射による皮膚紅斑の発症及び色素沈着が抑制される。また、グルコノ-δ-ラクトンをマウスに経口摂取した後に皮膚に紫外線照射した場合、当該紫外線により発現誘導される炎症関連分子（ＩＬ−１β，ＩＬ−６，ＧＭ−ＣＳＦ，ＴＮＦα，ＣＯＸ−２，ＴＬＲ３，ＳＯＣＳ３，ＶＣＡＭ−１，ＩＣＡＭ−１，Ｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ）、メラニン合成関連分子（ＥＤＮ１，ｃ−Ｋｉｔ，ＬＩＦ，ＦＧＦ２，ＨＧＦ）、増殖関連分子（ＰＣＮＡやＣｙｃｌｉｎＤ）、真皮変性関連因子（コラゲナーゼ（ＭＭＰ１３），ゼラチナーゼ（ＭＭＰ２，ＭＭＰ９），膜型ＭＭＰ（ＭＭＰ１４））の発現が抑制される。

紫外線が皮膚に照射されるとＩＬ−１βやＩＬ−６，ＴＮＦα等の炎症性サイトカインの発現が上昇し、ＣＯＸ−２の発現が誘導される。その結果、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）が産生され、血管が拡張し、血流が増加することで、皮膚に赤味が現れる。また、炎症性サイトカインとともに、紫外線照射によりケラチノサイトからエンドセリン（ＥＤＮ１）やＳＣＦ、ＬＩＦ、ＦＧＦ２、ＨＧＦ、ＧＭ−ＣＳＦ等が産生され、メラノサイトの細胞膜上のレセプター（例えばｃ−Ｋｉｔ：ＳＣＦレセプター）へ結合し、メラニン合成が促進される（Pigment Cell Research. 2004;18:2-12, The FASEB Journal. 2007;21:976-994）。このように紫外線照射によりメラニン合成が促進された結果、皮膚において色素沈着が引き起こされる。また紫外線照射によりＰＣＮＡやＣｙｃｌｉｎＤ１といったＤＮＡ合成や細胞周期に関与する増殖関連分子の発現も誘導され、細胞増殖が活発化し、表皮の肥厚が起こる。これに伴い、皮膚バリア機能の低下や角層水分量の低下が引き起こされる。一方、紫外線照射によって誘導されるＭＭＰ（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）は、コラーゲンやエラスチン等の真皮マトリックスを分解する。そのため慢性的な紫外線照射によって皮膚粘弾性の低下やそれに伴う皺の形成といった、いわゆる光老化が引き起こされる。更に、紫外線によってＤＮＡ損傷が誘導されるが、その修復が正常に行われずに細胞増殖が起こると皮膚腫瘍へとつながる。

したがって、グルコノ-δ-ラクトンの経口摂取によって、斯かる炎症関連分子、メラニン合成関連分子、増殖関連分子及び真皮変性関連分子の発現が抑制されたことは、グルコノ-δ-ラクトンが、紫外線暴露によって誘発される、皮膚の紅斑や浮腫等の皮膚の炎症、色素沈着、皮膚バリア機能の低下、角層機能の低下、皮膚バリア機能の低下、皮膚弾力性の低下やそれに伴う皺の形成、皮膚弾力性の低下といった、皮膚老化又は皮膚劣化等の皮膚障害を軽減又は抑制に有効であることを示している。

斯様に、グルコノ-δ-ラクトンは、皮膚の紫外線に対する抵抗力を高めるために使用すること、すなわち紫外線抵抗性向上剤として使用することができる。または、グルコノ-δ-ラクトンは、当該紫外線抵抗性向上剤を製造するために使用することができる。尚、当該紫外線抵抗性向上剤の使用は、ヒト若しくは非ヒト動物に対する使用（経口投与又は摂取）であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。ここで、「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。
従って、本発明の経口紫外線抵抗性向上剤を含む組成物は、皮膚の紫外線に対する抵抗性を向上させるための経口医薬品、医薬部外品、サプリメント又は食品となり、すなわち経口紫外線抵抗性向上剤は、経口医薬品、医薬部外品、サプリメント又は食品へ配合するための素材又は製剤として有用である。さらに、本発明の経口紫外線抵抗性向上剤を含む組成物は、紫外線暴露によって誘発される、皮膚の紅斑や浮腫等の皮膚の炎症、色素沈着の形成、肝斑や雀卵斑等の増悪化、角層機能の低下、皮膚バリア機能の低下、皮膚弾力性の低下やそれに伴う皺の形成、日光弾性症や項部菱形皮膚、皮膚腫瘍といった皮膚障害又は光老化を軽減又は抑制するための経口医薬品、医薬部外品、サプリメント又は食品となり、すなわち経口紫外線抵抗性向上剤は、経口医薬品、医薬部外品、サプリメント又は食品へ配合するための素材又は製剤として有用である。

上記医薬品、医薬部外品或いはサプリメントの剤型は、固形製剤又は液体製剤の何れでもよく、具体的には、錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉剤、徐放性製剤、懸濁液、エマルジョン剤、内服液、糖衣錠、丸剤、細粒剤、シロップ剤、エリキシル剤等が挙げられる。

上記製剤には、薬学的に許容される担体を配合することができる。斯かる担体としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤、浸透圧調整剤、流動性促進剤、吸収助剤、ｐＨ調整剤、乳化剤、防腐剤、安定化剤、酸化防止剤、着色剤、湿潤剤、増粘剤、光沢剤、活性増強剤、抗炎症剤、殺菌剤、矯味剤、矯臭剤、増量剤、界面活性剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、固着剤、香料、被膜剤等が挙げられる。また、当該製剤には公知の薬効成分を適宜配合することもできる。斯かる成分としては、例えば、各種ビタミン類（好ましくは、ビタミンＢ、ビタミンＣ若しくはビタミンＥ、又はこれらの組み合わせ（例えば、ビタミンＣ及びＥ等））、アミノ酸やペプチドおよびその誘導体、核酸およびその誘導体、糖類及びその誘導体、その他、カロチノイド、大豆イソフラボン、カテキン類、クロロゲン酸等の抗酸化剤等が挙げられる。

上記製剤におけるグルコノ-δ-ラクトンの含有量は、通常、製剤全質量の０．０１質量％以上、好ましくは０．１質量％以上であり、より好ましくは０．５質量％以上であり、さらに好ましくは１質量％以上であり、そして９０質量％以下、好ましくは６０質量％以下である。例えば０．０１〜９０質量％、好ましくは０．１〜６０質量％、より好ましくは０．５〜６０質量％、さらに好ましくは１〜６０質量％が挙げられる。

また、上記食品には、一般飲食品のほか、紫外線によって生じる、皮膚の紅斑や浮腫等の皮膚の炎症、色素沈着の形成、肝斑や雀卵斑等の増悪化、角層機能の低下、皮膚バリア機能の低下、皮膚弾力性の低下やそれに伴う皺の形成、日光弾性症や項部菱形皮膚といった皮膚障害又は光老化を軽減又は抑制することをコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した病者用食品、栄養機能食品、保健食品又は特定保健用食品等の機能性食品が包含される。これらの機能性食品は表示により一般の食品と区別される食品である。

食品の形態は、固形、半固形または液状であり得る。食品の例としては、パン類、麺類、クッキー等の菓子類、ゼリー類、乳製品、冷凍食品、インスタント食品、でんぷん加工製品、加工肉製品、その他加工食品、炭酸飲料、果汁飲料、茶系飲料、清涼飲料、野菜飲料、コーヒー飲料等の飲料、スープ類、調味料、栄養補助食品等、及びそれらの原料が挙げられる。また、上記の経口投与製剤と同様、錠剤形態、丸剤形態、カプセル形態、液剤形態、シロップ形態、粉末形態、顆粒形態等であってもよい。

斯かる食品は、任意の飲食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤、固着剤、分散剤、湿潤剤等を適宜組み合わせて配合し、調製することができる。
また、各種ビタミン類（好ましくは、ビタミンＢ、ビタミンＣ若しくはビタミンＥ、又はこれらの組み合わせ（例えば、ビタミンＣ及びＥ等））、アミノ酸やペプチド及びその誘導体、核酸及びその誘導体、糖類及びその誘導体、その他、カロチノイド、大豆イソフラボン、カテキン類、クロロゲン酸等の抗酸化成分等も適宜配合することができる。

上記の飲食品中のグルコノ-δ-ラクトンの含有量は、その使用形態により異なるが、通常、０．０１質量％以上、好ましくは０．１質量％以上であり、より好ましくは０．２質量％以上であり、更に好ましくは０．４質量％以上であり、そして５０質量％以下であり、好ましくは２０質量％以下であり、更に好ましくは１０質量％以下である。例えば、０．０１〜５０質量％、好ましくは０．１〜１０質量％、より好ましくは０．２〜１０質量％、更に好ましくは０．４〜１０質量％が挙げられる。

本発明の経口紫外線抵抗性向上剤を医薬品として、或いは医薬品又は食品に配合して使用する場合の投与量又は摂取量は、ヒトの状態、体重、性別、年齢又はその他の要因に従って変動し得るが、経口投与の場合の成人１人当たりの１日の投与量は、通常、グルコノ-δ-ラクトンとして０．０１ｇ以上、好ましくは０．０５ｇ以上であり、より好ましくは１ｇ以上であり、更に好ましくは２ｇ以上であり、そして１０ｇ以下であり、好ましくは５ｇ以下である。成人１人当たりの１日の投与量は、例えば０．０１〜１０ｇ、好ましくは０．０５〜１０ｇ、より好ましくは１ｇ〜１０ｇ、さらに好ましくは２ｇ〜５ｇが挙げられる。
また、上記製剤は、任意の投与計画に従って投与され得るが、１日１回〜数回に分け、数週間〜数ヶ月間継続して投与することが好ましい。例えば１日１回から１０回に分け１週間以上継続して投与又は摂取することが好ましい。１日１回から５回に分け、２週間以上継続して投与又は摂取することがさらに好ましい。
また、投与又は摂取対象としては、それを必要としている若しくは希望している動物であれば特に限定されないが、紫外線暴露により誘発される皮膚障害又は光老化、例えば皮膚の紅斑や浮腫等の皮膚の炎症、色素沈着の形成、肝斑や雀卵斑等の増悪化、角層機能の低下、皮膚バリア機能の低下、皮膚弾力性の低下やそれに伴う皺の形成、日光弾性症や項部菱形皮膚、皮膚腫瘍を軽減又は抑制を必要とする若しくは希望するヒトが挙げられる。

上述した実施形態に関し、本発明においてはさらに以下の態様が開示される。
＜１＞グルコノ-δ-ラクトンを有効成分とする経口紫外線抵抗性向上剤。
＜２＞経口紫外線抵抗性向上剤を製造するためのグルコノ-δ-ラクトンの使用。
＜３＞経口紫外線抵抗性向上に使用するためのグルコノ-δ-ラクトン。
＜４＞グルコノ-δ-ラクトンの有効量を経口投与又は摂取する紫外線抵抗性向上方法。
＜５＞前記＜１＞〜＜４＞において、紫外線抵抗性向上は、紫外線暴露により誘発される皮膚障害を軽減又は抑制するものである。
＜６＞前記＜５＞において、紫外線暴露により誘発される皮膚障害は、皮膚の炎症又は皮膚光老化である。
＜７＞前記＜５＞において、紫外線暴露により誘発される皮膚障害は、皮膚の紅斑や浮腫等の皮膚の炎症、色素沈着、肝斑や雀卵斑等の増悪化、角層機能の低下、皮膚バリア機能の低下、皮膚弾力性の低下、日光弾性症、項部菱形皮膚及び皮膚腫瘍から選ばれる１種以上である。
＜８＞前記＜３＞において、使用は非治療的使用である。
＜９＞病者用食品、栄養機能食品、保健食品又は特定保健用食品としての使用である、＜８＞記載の非治療的使用。
＜１０＞前記＜４＞において、方法は非治療的方法である。
＜１１＞経口投与又は摂取が、病者用食品、栄養機能食品、保健食品又は特定保健用食品の経口投与又は摂取である、＜１０＞記載の非治療的方法。
＜１２＞前記＜４＞において、投与又は摂取の対象は、紫外線暴露により誘発される皮膚障害、例えば皮膚の紅斑や浮腫等の皮膚の炎症、色素沈着、肝斑や雀卵斑等の増悪化、角層機能の低下、皮膚バリア機能の低下、皮膚弾力性の低下、日光弾性症、項部菱形皮膚、又は皮膚腫瘍を軽減又は抑制を必要とする若しくは希望する動物、好ましくはヒトである。
＜１３＞前記＜４＞において、投与又は摂取の対象は、日焼け止め外用剤の塗布を好まないヒト、日焼け止め外用剤が肌に合わない体質のヒト、紫外線に対して感受性の高いヒトである。
＜１４＞成人１人当たりの１日の投与量又は摂取量を、グルコノ-δ-ラクトンとして０．０１ｇ以上、好ましくは０．０５ｇ以上であり、より好ましくは１ｇ以上であり、更に好ましくは２ｇ以上であり、そして１０ｇ以下であり、好ましくは５ｇ以下とするために用いる、＜１＞又は＜２＞に記載の経口紫外線抵抗性向上剤。
＜１５＞成人１人当たりの１日の投与量又は摂取量が、グルコノ-δ-ラクトンとして０．０１ｇ以上、好ましくは０．０５ｇ以上であり、より好ましくは１ｇ以上であり、更に好ましくは２ｇ以上であり、そして１０ｇ以下であり、好ましくは５ｇ以下である、＜３＞及び＜５＞〜＜９＞のいずれかに記載の使用、又は＜４＞〜＜７＞及び＜１０＞〜＜１３＞のいずれかに記載の方法。
＜１６＞グルコノ-δ-ラクトンの含有量が、製剤全質量の０．０１質量％以上、好ましくは０．１質量％以上であり、より好ましくは０．５質量％以上であり、さらに好ましくは１質量％以上であり、そして９０質量％以下、好ましくは６０質量％以下である、＜１＞、＜２＞、及び＜５＞〜＜７＞のいずれかに記載の経口紫外線抵抗性向上剤。
＜１７＞＜９＞又は＜１１＞に記載の食品において、グルコノ-δ-ラクトンの含有量が、０．０１質量％以上、好ましくは０．１質量％以上であり、より好ましくは０．２質量％以上であり、更に好ましくは０．４質量％以上であり、そして５０質量％以下であり、好ましくは２０質量％以下であり、更に好ましくは１０質量％以下である、使用又は方法。
＜１８＞投与又は摂取が、１日１回から５回に分け、２週間以上継続して投与又は摂取することである、＜１５＞又は＜１７＞のいずれかに記載の使用又は方法。

実施例１紫外線誘導紅斑及び表皮肥厚抑制効果
１）方法
ＨＲ−１ヘアレスマウス（雌性、８週齢）（日本ＳＬＣ）に、試験期間中、飼料および水を自由摂取させ、温度２３±１℃、湿度５０±１％、照明時間７：００−１９：００の条件下で飼育した。１週間の予備飼育後、コントロール群、０．５％グルコノ−δ−ラクトン混餌群（０.５％ＧＤＬ群）、１．０％グルコノ−δ−ラクトン混餌群（１％ＧＤＬ群）に分け、それぞれ表１記載の組成の餌を２週間与えた。摂取２週後に、ペントバルビタール麻酔下にて、マウス背部に１．５ｃｍ×１．０ｃｍの部位を近接して２ヶ所（照射部位及び未照射部位）設定し、照射部位には１ｍＷ／ｃｍ^２のＵＶＢ照射線量で、４０秒間（４０ｍＪ／ｃｍ^２）照射した。照射２日後の紅斑の程度を、分光式色差計ＳＥ−６０００（日本電色工業）を用いた皮膚色（ａ＊値）測定により評価した。ａ＊値は皮膚色の赤味を表す指標であり、ａ＊値が大きいほど皮膚が赤色に変化、すなわち紅斑が生じていると言える。
測定後、深麻酔下で心採血し、ＵＶＢ未照射部位および照射部位の皮膚を採取した後、ＨＥ染色標本を作製し、顕微鏡で観察した。表皮厚は１組織当たり、任意の１５ヶ所の表皮厚の平均値をその組織の表皮厚とした。得られた値はＡｖｅ．±Ｓ．Ｄ．、ｎ＝８で示し、多群間の統計学的有意差検定はＤｕｎｎｅｔｔによる多重比較検定を行った（＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１（ｖｓＧＤＬ（−）ＵＶＢ（＋））。

２）結果
結果を図１に示した。ＧＤＬ群ではＵＶＢ照射によるａ＊値の上昇を濃度依存的に抑制し、１％ＧＤＬ群の照射部位ではコントロール群の照射部位に比べ有意なａ＊値の抑制が認められた。また、コントロール群の照射部位と比較してＧＤＬ群の照射部位では、有意に表皮肥厚が抑制された。以上のことから、ＧＤＬは紫外線抵抗性向上作用を有することが明らかとなった。

実施例２紫外線誘導炎症関連分子、メラニン合成関連分子、増殖関連分子及び真皮変性因子の発現抑制効果
１）方法
ＨＲ−１ヘアレスマウス（雌性、８週齢）（日本ＳＬＣ）に、試験期間中、飼料および水を自由摂取させ、温度２３±１℃、湿度５０±１％、照明時間７：００−１９：００の条件下で飼育した。１週間の予備飼育後、コントロール群、１．０％ＧＤＬ群に分け、それぞれ表１記載の組成の餌を２週間与えた。摂取２週後に、ペントバルビタール麻酔下にて、マウス背部に１．５ｃｍ×１．０ｃｍの部位を近接して２ヶ所（照射部位及び未照射部位）設定し、照射部位には１ｍＷ／ｃｍ^２のＵＶＢ照射線量で、４０秒間（４０ｍＪ／ｃｍ^２）照射した。照射２４時間後に心採血し、ＵＶＢ未照射部位および照射部位の皮膚を採取し、ＲＮＡを抽出した。抽出したＲＮＡからｑＲＴ−ＰＣＲにより下記に示す分子の遺伝子発現量を定量した。目的の遺伝子を特異的に検出するTaqMan Gene Expression Assay (Applied Biosystems)プローブはIl-1b（Mm01336189_m1; IL-1b）、Il-6（Mm00446190_m1; IL-6）、Gm-csf（Mm01290062_m1; GM-CSF）、Tnf（Mm00443258_m1; TNFa）、Ptgs2（Mm01307329_m1; COX-2）、Tlr3（Mm01207404_m1; TLR3）、Socs3（Mm00545913_s1; SOCS3）、Vcam1（Mm01320970_m1; VCAM-1）、Icam1（Mm00516023_m1; ICAM-1）、Sele（Mm00441278_m1; E-selectin）、Edn1（Mm00438656_m1; EDN1）、Kitl（Mm00442972_m1; SCF）、C-kit（Mm00445212_m1; c-Kit）、Lif（Mm00434761_m1; LIF）、Fgf2（Mm00433287_m1; FGF2）、Hgf（Mm01135185_m1; HGF）、Pcna（Mm00448100_g1; PCNA）、Ccnd1（Mm00432359_m1; CyclinD1）、Mmp13（Mm00439491_m1; MMP13）、Mmp2（Mm00439506_m1; MMP2）、Mmp9（Mm00442991_m1; MMP9）、Mmp14（Mm00485054_m1; MMP14）を用いた。目的遺伝子発現量は内部標準遺伝子Rplp0（Mm01974474_gH; RPLP0）の発現量で補正した。解析には7500 Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems)を用いた。得られた値はＡｖｅ．±Ｓ．Ｄ．、ｎ＝１０で示し、多群間の統計学的有意差検定はＤｕｎｎｅｔｔによる多重比較検定を行った（＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１（ｖｓＣｏｎｔＵＶＢ＋））。

ＩＬ−１β：Interleukin-1β
ＩＬ−６：Interleukin-6
ＧＭ−ＣＳＦ：Granulocyte macrophage colony-stimulating factor
ＴＮＦα：Tumor necrosis factor α
ＣＯＸ−２：Cyclooxygenase-2
ＴＬＲ３：Toll-like receptor 3
ＳＯＣＳ３：Suppressor of cytokine signaling 3
ＶＣＡＭ−１：Vascular cell adhesion molecule-1
ＩＣＡＭ−１：Intercellular adhesion molecule-1
Ｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ
ＥＤＮ１：Endothelin 1
ＳＣＦ：Stem cell factor (kit-ligand)
ｃ−Ｋｉｔ
ＬＩＦ：Leukemia inhibitory factor
ＦＧＦ２：Fibroblast growth factor 2 (basic)
ＨＧＦ：Hepatocyte growth factor
ＰＣＮＡ：Proliferating cell nuclear antigen
ＣｙｃｌｉｎＤ１
ＭＭＰ１３: Matrix metallopeptidase 13 (Collagenase 3)
ＭＭＰ２: Matrix metallopeptidase 2 (Gelatinase A)
ＭＭＰ９: Matrix metallopeptidase 9 (Gelatinase B)
ＭＭＰ１４：Matrix metallopeptidase 14 (membrane-inserted)

２）結果
結果を図２〜６に示した。ＵＶＢ照射によりＩＬ−１β，ＩＬ−６，ＧＭ−ＣＳＦ，ＴＮＦα，ＣＯＸ−２，ＴＬＲ３，ＳＯＣＳ３の遺伝子発現が上昇した。ＧＤＬ群の照射部位ではコントロール群の照射部位に比べ、これら炎症関連遺伝子の発現が有意に抑制されることが明らかとなった。また炎症時に誘導される接着因子ＶＣＡＭ−１，ＩＣＡＭ−１，Ｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｎもＧＤＬ群では発現抑制が認められた。メラニン合成関連分子も同様に発現解析を行ったところ、ＥＤＮ１，ｃ−Ｋｉｔ，ＬＩＦ，ＦＧＦ２，ＨＧＦの発現がＵＶＢによって上昇し、ＧＤＬ群では有意に低下することが明らかとなった。更に、細胞の増殖マーカーであるＰＣＮＡやＣｙｃｌｉｎＤ１の発現も抑制された。真皮変性との関連が示唆されているコラゲナーゼ（ＭＭＰ１３），ゼラチナーゼ（ＭＭＰ２，ＭＭＰ９）、膜型ＭＭＰ（ＭＭＰ１４）についてもＧＤＬ摂取群で発現の抑制が認められた。

実施例３紫外線による色素沈着、皮膚角層機能低下、皮膚弾力性低下の抑制効果
１）方法
ＨＲＭ−２ヘアレスマウス(雄性、６週齢)（日本ＳＬＣ）を用い、体重、明度(Ｌ*値)、赤色度(ａ*値)、経皮水分蒸散量(ＴＥＷＬ値)、角層水分量(Ｃａｐａｃｉｔａｎｃｅ)が均等になるように群分けし、コントロール未照射群(Ｃｏｎｔ)、コントロールＵＶＢ照射群(Ｃｏｎｔ（ＵＶＢ＋）)、２．０％ＧＤＬＵＶＢ照射群(ＧＤＬ（ＵＶＢ＋）)の３群とした。試験試料を３週間前摂取させた後、ＵＶＢ照射群には１日１回、２０週間、ＵＶＢを照射した。連続照射により紫外線抵抗性が付くためＵＶＢ照射強度は４０から１３０ｍＪ／ｃｍ²へと段階的に上げていった（照射０〜１週;４０ｍＪ／ｃｍ²、照射２〜４週;５４ｍＪ／ｃｍ²、照射５〜７週;７２ｍＪ／ｃｍ²、照射８〜１２週；１０８ｍＪ／ｃｍ²、照射１３〜１４週;１２０ｍＪ／ｃｍ²、照射１５〜２０週;１３０ｍＪ／ｃｍ²）。なお、ＵＶＢ照射期間中も試験試料を摂取させた。群分け時と、照射０、４、８、１２、１６、２０週目に、色差計でＬ*値、ＴｅｗａｍｅｔｅｒでＴＥＷＬ値、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒで角層水分量（Ｃａｐａｃｉｔａｎｃｅ値）の測定を行った。また、照射２０週目にＣｕｔｏｍｅｔｅｒで皮膚物性パラメータを測定した。得られた値はＡｖｅ.±Ｓ.Ｄ.、ｎ＝１０−１１で示し、Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒによる多重比較検定を行った。

２）結果
結果を図７〜１０に示した。ＵＶ照射８または１２週目以降に置いて、ＧＤＬ摂取により、ＵＶＢ照射によるＬ＊値低下、ＴＥＷＬ値上昇、角層水分量（Ｃａｐａｃｉｔａｎｃｅ値）低下を抑制した。さらに、皮膚の粘弾性（Ｕｖ／Ｕｅ）の低下を抑制した。以上よりＧＤＬは、長期反復紫外線照射によって生じる種々の皮膚障害を抑制することが明らかとなった。

実施例４ヒトにおける紫外線誘導紅斑及び色素沈着抑制効果１
１）方法
健常男性１０名（２０〜４０歳代）を対象とし、同一の試験参加者がグルコノ−δ−ラクトンを含有するカプセル剤（１日の摂取量がグルコノ−δ−ラクトン２０００ｍｇ）とプラセボカプセル剤を、時期を変えて４週間連続摂取するクロスオーバー試験を行った。クロスオーバー前半と後半の間に４週間の摂取休止期間を設けた。被験品であるグルコノ−δ−ラクトンは食品添加物（扶桑化学工業）であり、各摂取量を１日２回に分けて摂取した。摂取３週後において、上腕内側部に１ｍＷ／ｃｍ^２のＵＶＢ強度で照射時間を７点振って照射した（１部位当たりの照射面積０．６ｃｍ×１．０ｃｍ）。ＵＶＢ照射２４時間後に、目視によりＭＥＤ値（最小紅斑量）を判定した。
また、摂取３週後に、上腕内側部に１．５ｃｍ×１．５ｃｍの範囲で１ｍＷ／ｃｍ^２のＵＶＢ強度で２ＭＥＤ相当の線量を照射した。ＵＶＢ照射２４時間後に、色差計を用いてΔａ＊値（紅斑強度；未照射部位との差）を測定した。さらに、ＵＶＢ照射１週後に、各照射部位について、色差計を用いてΔＬ＊値（色素沈着度；未照射部位との差）を測定した。得られた値はＡｖｅ．±Ｓ．Ｄ．、ｎ＝１０で示し、２群間の統計学的有意差検定はｐａｉｒｅｄｔ−ｔｅｓｔを行った（＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１）。

２）結果
結果を図１１に示した。ＧＤＬ群は、プラセボ群に比べＭＥＤ値が有意に高く、紫外線抵抗性が向上していることが明らかとなった。実際に、ＵＶＢ照射２４時間後のΔａ＊値は、プラセボ群と比べてＧＤＬ群において有意に低下しており、紫外線誘導性の紅斑形成を抑制した。また、ＵＶＢ照射１週間後のΔＬ＊値も、プラセボ群と比較してＧＤＬ群において有意に低下し、色素沈着を抑制していることが明らかとなった。

実施例５ヒトにおける紫外線誘導紅斑及び色素沈着抑制効果２
１）方法
健常男性１０名（２０〜４０歳代）を対象とし、同一の試験参加者がグルコノ−δ−ラクトン、ビタミン類を含有するカプセル剤（１日の摂取量がグルコノ−δ−ラクトン２０００ｍｇ、ｄ−α−トコフェロール２００ｍｇ、Ｌ−アスコルビン酸６６６ｍｇ）とプラセボカプセル剤を、時期を変えて４週間連続摂取するクロスオーバー試験を行った。クロスオーバー前半と後半の間に４週間の摂取休止期間を設けた。被験品であるグルコノ−δ−ラクトンは食品添加物（扶桑化学工業）であり、各摂取量を１日２回に分けて摂取した。摂取３週後において、上腕内側部に１ｍＷ／ｃｍ^２のＵＶＢ照射線量で照射時間を７点振って照射した（１部位当たりの照射面積０．６ｃｍ×１．０ｃｍ）。
ＵＶＢ照射２４時間後に、目視によりＭＥＤ値（最小紅斑量）を判定し、各照射部位について、写真撮影と色差計を用いてΔａ＊値（紅斑強度；未照射部位との差）を測定した。さらに、ＵＶＢ照射１週後に、各照射部位について、写真撮影と色差計を用いてΔＬ＊値（色素沈着度；未照射部位との差）を測定した。Δａ＊値とΔＬ＊値は、各被験者がプラセボ摂取時に１ＭＥＤと定めたＵＶ線量における結果を示した。得られた値はＡｖｅ．±Ｓ．Ｄ．、ｎ＝１０で示し、２群間の統計学的有意差検定はｐａｉｒｅｄｔ−ｔｅｓｔを行った（＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１）。

２）結果
結果を図１２に示した。ＧＤＬ群は、プラセボ群に比べＭＥＤ値が有意に高く、紫外線抵抗性が向上していることが明らかとなった。実際に、ＵＶＢ照射２４時間後のΔａ＊値は、プラセボ群と比べてＧＤＬ群において有意に低下しており、紫外線誘導性の紅斑形成を抑制した。また、ＵＶＢ照射１週間後のΔＬ＊値も、プラセボ群と比較してＧＤＬ群において有意に低下し、色素沈着を抑制していることが明らかとなった。

Claims

グルコノ-δ-ラクトンを有効成分とする経口紫外線抵抗性向上剤。
グルコノ-δ-ラクトンを有効成分とする紫外線抵抗性向上用サプリメント又は食品。
紫外線暴露により誘発される皮膚障害を軽減又は抑制する請求項１記載の経口紫外線抵抗性向上剤又は請求項２記載の紫外線抵抗性向上用サプリメント又は食品。
紫外線暴露により誘発される皮膚障害が、皮膚の炎症又は皮膚光老化である請求項３記載の経口紫外線抵抗性向上剤又は紫外線抵抗性向上用サプリメント又は食品。
紫外線暴露により誘発される皮膚障害が、皮膚の炎症、色素沈着、肝斑や雀卵斑の増悪化、角層機能の低下、皮膚バリア機能の低下、皮膚弾力性の低下、日光弾性症、項部菱形皮膚及び皮膚腫瘍から選ばれる１種以上である請求項３記載の経口紫外線抵抗性向上剤又は紫外線抵抗性向上用サプリメント又は食品。