JP6359970B2 - 植物の不定胚誘導方法、植物の再生方法及び植物の増殖方法 - Google Patents
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Description
誘導工程では、例えば、植物の組織片を植物生長ホルモン及び炭素源を含む誘導培地中で培養することによりカルスを誘導する。
また、乳液の含有量が少ない組織、具体的には、花弁、葯、種子を使用することも好ましい。
なお、本明細書において、固体培地のpHは、固形化剤を除く全成分を添加した培地のpHを意味する。また、本明細書において、暗所とは、照度が0〜0.1lxであることを意味し、明所とは、照度が0.1lxを超えていることを意味する。
再生誘導工程では、植物生長ホルモン及び炭素源を含む再生誘導培地中でカルスを培養することにより不定胚及びシュートを形成させる。カルスから不定胚を誘導(形成)し、不定胚を培養することにより、安定的にシュートの形成を行うことができるため、再生誘導工程の培養条件は、カルスから不定胚を誘導できる条件であれば、特に限定されない。
伸長工程では、形成されたシュートを伸長培地で培養することによりシュートを伸長させる。
発根工程では、シュートを発根培地で培養することにより発根させる。ここで、シュートとしては、伸長工程により伸長させたシュートを使用してもよく、再生誘導工程により形成されたシュートを直接使用してもよい。
培養は、暗所で行っても明所で行ってもよいが、24時間中10〜16時間明所で培養を行うことが好ましく、明所の照度は、2000〜25000lxが好ましい。培養時間は、特に限定されないが、4〜10週間培養することが好ましい。
NAA:ナフタレン酢酸
BA:ベンジルアデニン
ノゲシ:神戸市灘区で自生しているノゲシの種子から、無菌的に発芽させた植物体を使用した
ノゲシから葉及び茎を採取した。次に、採取した葉及び茎の表面を流水で洗浄し、さらに70%エタノールで洗浄した後、約5〜10%に希釈した次亜塩素酸ナトリウム溶液で滅菌し、再度流水で洗浄した。
次に、誘導されたカルスを用いて、カルスから不定胚及びシュートを形成させるための培地(再生誘導培地)条件の検討を基本培地であるMS培地を用いて行った。具体的には、MS培地に、オーキシン系植物ホルモンであるNAA、サイトカイニン系植物ホルモンであるBA、糖類であるスクロースを種々の濃度となるように添加した培地を用いて検討を行った(表1参照)。また、pHは、5.7〜5.8に調整した。なお、固形化剤であるゲランガムは0.2質量%となるように培地に添加した。そして、調製した各固体培地(滅菌済み)を用いて、誘導工程により誘導されたカルスを培養温度23℃、24時間中12時間の照明下(10000lx)で8週間培養した。8週間培養した後の不定胚の形成率を表1に示す。不定胚が形成された培地では、不定胚の形成後にシュートの形成も観察された。一方、不定胚が形成されなかった培地では、シュートも形成されなかった。このことから、カルスから不定胚を誘導することにより、安定的にシュートが形成されることが分かった。
なお、不定胚の形成率は、不定胚を形成したカルスの個数を、再生誘導培地に移植したカルスの個数で割ることにより算出した。
次に、シュート伸長のために、形成されたシュートを、植物生長ホルモンを含まないMS培地に移植した。該培地のpHは、5.7に調整した。0.4%のゲランガムを含む固体培地(滅菌済み)を用い、培養温度23℃、24時間中12時間の照明下(10000lx)で8週間培養した。植物生長ホルモンを含まない培地で培養することにより、良好にシュート伸長が観察された。結果を表1に示す。
次に、発根のために、3cm程度に成長したシュートを、植物成長ホルモンを含まないB5培地に移植した。該培地のpHは、5.8に調整した。0.4%のゲランガムを含む固体培地(滅菌済み)を用い、培養温度23℃、24時間中12時間の照明下(10000lx)で8週間培養した。植物生長ホルモンを含まない培地で培養することにより、良好に発根が観察された。結果を表1に示す。
なお、表1において、以下の基準でシュートの伸長、発根を評価した。
○:10%以上でシュートの伸長・発根が見られる
△:10%未満でシュートの伸長・発根が見られる
×:シュート伸長なし
NAA:ナフタレン酢酸
2,4−D:2,4−ジクロロフェノキシ酢酸
IBA:インドール酪酸
BA:ベンジルアデニン
KI:カイネチン
ゲル化剤:ゲルライト、ゲランガム
パラゴムノキ:東京大学大学院農学生命科学研究科附属 科学の森教育研究センター 樹芸研究所より入手
パラゴムノキから葉を採取した。次に、採取した葉の表面を流水で洗浄し、さらに70%エタノールで洗浄した後、約5〜10%に希釈した次亜塩素酸ナトリウム溶液で滅菌し、再度流水で洗浄した。
次に、誘導されたカルスを用いて、カルスから不定胚及びシュートを形成させるための培地(再生誘導培地)条件の検討を基本培地であるMS培地を用いて行った。具体的には、MS培地に、オーキシン系植物ホルモンであるNAA、サイトカイニン系植物ホルモンであるBA、糖類であるスクロースを種々の濃度となるように添加し、必要に応じてFeNaEDTA、ジベレリンも添加した培地を用いて検討を行った(表2参照)。また、pHは、5.7〜5.8に調整した。なお、固形化剤であるゲランガムは0.4質量%となるように培地に添加した。そして、調製した各固体培地(滅菌済み)を用いて、誘導工程により誘導されたカルスを培養温度25℃、24時間中12時間の照明下(10000lx)で3〜6ヶ月培養した。なお、1ヶ月培養する毎に培地を交換した。3〜6ヶ月間培養した後の不定胚の形成率を表2に示す。不定胚が形成された培地では、不定胚の形成後にシュートの形成も観察された。一方、不定胚が形成されなかった培地では、シュートも形成されなかった。このことから、カルスから不定胚を誘導することにより、安定的にシュートが形成されることが分かった。
なお、不定胚の形成率は、不定胚を形成したカルスの個数を、再生誘導培地に移植したカルスの個数で割ることにより算出した。
次に、シュート伸長のために、形成されたシュートを、再生誘導培地と同様の組成の培地で継代培養した。培養温度25℃、24時間中12時間の照明下(10000lx)で8週間培養した。良好にシュート伸長が観察された。結果を表2に示す。
次に、発根のために、3cm程度に成長したシュートを、植物成長ホルモンを含まない1/2MS培地又は植物成長ホルモンを含む1/2MS培地に移植した。該培地のpHは、5.7に調整した。0.4%のゲランガムを含む固体培地(滅菌済み)を用い、培養温度25℃、24時間中12時間の照明下(10000lx)で8週間培養した。上記培地で培養することにより、良好に発根が観察された。結果を表2に示す。
なお、表2において、以下の基準でシュートの伸長、発根を評価した。
○:10%以上でシュートの伸長・発根が見られる
△:10%未満でシュートの伸長・発根が見られる
×:シュート伸長なし
Claims (16)
- 1×10 −3 〜0.1mg/lのナフタレン酢酸及び0.8〜1.2mg/lのベンジルアデニンを含む再生誘導培地中でカルスから不定胚を誘導する工程を含む植物の再生方法であって、
前記植物がキク科に属する植物である植物の再生方法。 - 不定胚を誘導した後に、シュートを形成させる請求項1記載の植物の再生方法。
- ナフタレン酢酸、ベンジルアデニン、及び炭素源を含む再生誘導培地中でカルスを培養することにより不定胚及びシュートを形成させる再生誘導工程と、シュートを発根培地で培養することにより発根させる発根工程とを含む請求項1記載の植物の再生方法。
- ナフタレン酢酸、ベンジルアデニン、及び炭素源を含む再生誘導培地中でカルスを培養することにより不定胚及びシュートを形成させる再生誘導工程と、形成されたシュートを伸長培地で培養することにより伸長させる伸長工程と、伸長させたシュートを発根培地で培養することにより発根させる発根工程とを含む請求項1記載の植物の再生方法。
- 前記伸長培地及び前記発根培地が、植物生長ホルモンを含まない培地である請求項4記載の植物の再生方法。
- 前記植物がSonchus属に属する植物である請求項1〜5のいずれかに記載の植物の再生方法。
- 前記植物がノゲシである請求項1〜5のいずれかに記載の植物の再生方法。
- 1×10 −3 〜0.1mg/lのナフタレン酢酸及び0.8〜1.2mg/lのベンジルアデニンを含む再生誘導培地中でカルスから不定胚を誘導する工程を含む植物の増殖方法であって、
前記植物がキク科に属する植物である植物の増殖方法。 - 植物の組織片からカルスを誘導する工程を含む請求項8記載の植物の増殖方法。
- 不定胚を誘導した後に、シュートを形成させる請求項8又は9記載の植物の増殖方法。
- 植物の組織片を植物生長ホルモン及び炭素源を含む誘導培地中で培養することによりカルスを誘導する誘導工程と、ナフタレン酢酸、ベンジルアデニン、及び炭素源を含む再生誘導培地中でカルスを培養することにより不定胚及びシュートを形成させる再生誘導工程と、シュートを発根培地で培養することにより発根させる発根工程とを含む請求項8記載の植物の増殖方法。
- 植物の組織片を植物生長ホルモン及び炭素源を含む誘導培地中で培養することによりカルスを誘導する誘導工程と、ナフタレン酢酸、ベンジルアデニン、及び炭素源を含む再生誘導培地中でカルスを培養することにより不定胚及びシュートを形成させる再生誘導工程と、形成されたシュートを伸長培地で培養することにより伸長させる伸長工程と、伸長させたシュートを発根培地で培養することにより発根させる発根工程とを含む請求項8記載の植物の増殖方法。
- 前記植物がSonchus属に属する植物である請求項8〜12のいずれかに記載の植物の増殖方法。
- 前記植物がノゲシである請求項8〜12のいずれかに記載の植物の増殖方法。
- 1×10 −3 〜0.1mg/lのナフタレン酢酸、0.8〜1.2mg/lのベンジルアデニン、及び炭素源を含む培地中でキク科に属する植物のカルスを培養することにより不定胚を誘導する不定胚誘導方法。
- 培地中の固形化剤の濃度が0.1〜2質量%であり、培養温度が0〜40℃である請求項15記載の不定胚誘導方法。
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