JP6339562B2 - インビトロ診断装置及びその使用 - Google Patents
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Description
−支持、及び
−0.05mmから1.5mmの厚さで、孔の直径が2μmから30μmの疎水性の多孔質膜であって、上記膜が上記試料を受けるように意図された少なくとも一つの親水性の反応領域を備え、上記反応領域が疎水性の多孔質膜の表面よりも小さな表面を有する疎水性の多孔質膜を備えることを特徴とする。
−偽陽性の原因となる表出剤のリターンを防止する
−より小さな体積の使用からの高められた感度
−システムの小型化及び自動化
−装置の機械的な取扱いの必要なく、反応の反応速度の制御、によって改善する。
−支持12、及び
−試験される試料を受けるように意図される親水性の反応領域16を少なくとも1つ備える疎水性の多孔質膜14、を備える。
・Millipore C048、C068、C083、C248
・Whatman CF3、CF4、CF10、Grade 470、CF5、CF6、CF7、Grade 900、Grade 300
・Ahlstrom Grades 601、642、631、238、237、222、243、320
・Pall Grades 111、113、133、165、197、8975、8964、8301、Accuwik(登録商標) Ultra
・Cleanis Gelmax超吸収性パッド
・綿
D > Vtotal/C
−赤血球を表現型検査する、つまり、それらの表面の抗原を決定すること。
−アンチAまたはアンチB抗体の存在を同定するシモニン(Simonin)試験。
−特にアロ抗体、自己抗体、またはさらに寒冷凝集素の探索の点から赤血球の、細胞性抗原に対する抗体の探索または同定。
−抗体を探索するための装置の使用、またはシモニン試験のための、赤血球試験と呼ばれる既知の表現型の赤血球
−表現型検査用の装置の使用のために試験される試料中に含まれる赤血球、である。
−バッファ液中で、特に、選択的に、例えばpH6からpH8.5、好ましくはpH6.5からpH7.8、特にpH7からpH7.5のpHで安定化され、250mOsmから800mOsm、好ましくは300mOsmから600mOsmのモル浸透圧濃度の溶液を含むバッファなどの添加物を含む、免疫血液学的反応に望ましいと知られているバッファ液中で、表現型検査される赤血球を希釈するステップ。この溶液は、選択的に、低濃度の洗剤(特に0.01から0.05%m/vのTween 20)、飽和剤(例えばBSA)、及び/または抗原−抗体反応の可能性を持たせることが可能な作用物質を含み得る。このバッファは選択的にプロテアーゼ活性を有し得、例えばパパインまたはブロメラインなどの酵素を添加することによって得られ得る。このバッファは選択的に、反応の可能性を持たせ、赤血球の捕捉要素とのより長時間の接触を維持するために、ポリブレンまたはポリリジン等のポリカチオン性の作用物質を含み得る;
−表現型検査される赤血球を含むこの溶液を反応領域の中央16−1に加えるステップ;
−好ましくは15℃から40℃、特に18℃から25℃の温度で、60秒から15分、特に2分から10分の間、保温(incubate)するステップ;
−反応領域上にリンス液を堆積するステップ;リンス液は抗原−抗体反応に対して有害ではないと知られている溶液であり、赤血球の保全性を維持し、非特異的な相互作用を緩めることができ、例えばpH6からpH8.5、好ましくはpH6.5からpH7.8、特にpH7からpH7.5のpHで安定化され、250mOsmから800mOsm、好ましくは300mOsmから600mOsmのモル浸透圧濃度の溶液を含むバッファ等である。この溶液は、選択的に、低濃度の洗剤(特に0.01から0.05%m/vのTween 20)、飽和剤(例えばBSA)、及び/または抗原−抗体反応の可能性を持たせることが可能な作用物質を含み得る。ポリカチオン性の作用物質の先行する使用の場合、このバッファは、例えばこのタイプの添加物によって生じる非特異的な相互作用を緩めることが可能なように100mMより多いNaClを含むなど、強イオン性であろう。
−本発明に係る装置10の反応領域の中央で多孔質膜14を水和するために溶液を堆積するステップ。上記反応領域16は単一の親水性の領域を備え、抗体を含む捕捉剤を含み、膜の親水化のための溶液は、選択的に、例えばpH6からpH8.5、好ましくはpH6.5からpH7.8、特にpH7からpH7.5のpHで安定化され、250mOsmから800mOsm、好ましくは300mOsmから600mOsmのモル浸透圧濃度の溶液を含むバッファ等の添加物を含む、免疫血液学的反応に望ましいと知られている溶液である。この溶液は選択的に低濃度の洗剤(特に0.01から0.05%m/vのTween 20)、飽和剤(例えばBSA)、及び/または抗原−抗体反応の可能性を持たせることが可能な作用物質を含み得る。このバッファは選択的にプロテアーゼ活性を有し得、例えばパパインまたはブロメラインなどの酵素を添加することによって得られ得る。このバッファは選択的に、反応の可能性を持たせ、赤血球の捕捉要素とのより長時間の接触を維持するために、ポリブレンまたはポリリジン等のポリカチオン性の作用物質を含み得る。
−選択的に、バッファ液中で、特に、選択的に、例えばpH6からpH8.5、好ましくはpH6.5からpH7.8、特にpH7からpH7.5のpHで安定化され、250mOsmから800mOsm、好ましくは300mOsmから600mOsmのモル浸透圧濃度の溶液を含むバッファなどの添加物を含む、免疫血液学的反応に望ましいと知られているバッファ液中で、表現型検査される赤血球を希釈するステップ。この溶液は選択的に低濃度の洗剤(特に0.01から0.05%m/vのTween 20)、飽和剤(例えばBSA)、及び/または抗原−抗体反応の可能性を持たせることが可能な作用物質を含み得る。このバッファは選択的にプロテアーゼ活性を有し得、例えばパパインまたはブロメラインなどの酵素を添加することによって得られる。このバッファは選択的に、反応の可能性を持たせ、赤血球の捕捉要素とのより長時間の接触を維持するために、ポリブレンまたはポリリジン等のポリカチオン性の作用物質を含み得る。
−表現型検査される赤血球を含むこの溶液を反応領域の中央に添加するステップ。
−好ましくは15℃から40℃、特に18℃から25℃の温度で、2秒から15分、特に1分から10分の間、保温するステップ。
−抗原−抗体反応に有害ではないと知られている溶液であり、赤血球の保全性を維持し、非特異的な相互作用を緩めることができ、例えばpH6からpH8.5、好ましくはpH6.5からpH7.8、好ましくはpH7からpH7.5のpHで安定化され、250mOsmから800mOsm、好ましくは300mOsmから600mOsmのモル浸透圧濃度の溶液を含むバッファ等のリンス液を反応領域上に堆積するステップ。この溶液は選択的に低濃度の洗剤(特に0.01から0.05%m/vのTween 20)、飽和剤(例えばBSA)、及び/または抗原−抗体反応の可能性を持たせることが可能な作用物質を含み得る。ポリカチオン性の作用物質の先行する使用の場合、このバッファは、例えばこのタイプの添加物によって生じる非特異的な相互作用を緩めることが可能なように100mMより多いNaClを含むなど、強イオン性であろう。
−試験される試料を装置10の反応領域16上に堆積するステップであって、上記反応領域16が抗原を含む捕捉剤を含むステップ、
−捕捉剤と同じ抗原を備える、既知の表現型の赤血球試験を添加するステップ、
−混合物を親水性の領域を透過させるステップであって、上記親水性の領域が1分から45分、好ましくは3分から15分の通過時間を可能にする特性を有するステップ、
−例えばpH6からpH8.5、好ましくはpH6.5からpH7.8、特にpH7からpH7.5のpHで安定化され、250mOsmから800mOsm、好ましくは300mOsmから600mOsmのモル浸透圧濃度の溶液を含むバッファ等のリンス液を反応領域上に堆積するステップ。この溶液は選択的に低濃度の洗剤(特に0.01から0.05%m/vのTween 20)、飽和剤(例えばBSA)を含み得る。
−アロ抗体の探索のために、試験される試料を、バッファ、既知の表現型の赤血球試験、及び赤血球を凝集することが可能な作用物質とともに、15℃から40°C、好ましくは約37°Cの温度で、3分から60分、好ましくは5分から30分の間、予め保温するステップ。バッファは、LISSバッファ(例えば50mMより少ないNaClを含む)等の低イオン力のバッファである。自己抗体の探索のためには、予め保温しない試料の赤血球を含む試料を単に用いる。
−この混合物に小球を凝集させることが可能な作用物質、例えばヘキサジメトリンブロマイドの溶液を添加するステップ。
−好ましくは15秒から5分の期間の後、本発明に係る装置10の反応領域16上に混合物を堆積し、それを流すステップ;それはスポットの上にセルのボタンを形成する。
−クームス、人間の抗グロブリン、または抗補体試薬を反応領域上に堆積するステップ。
−例えばpH6からpH8.5、好ましくはpH6.5からpH7.8、好ましくはpH7からpH7.5のpHで安定化され、300mOsmから800mOsmのモル浸透圧濃度の高調食塩水等のリンス液を反応領域上に堆積するステップ。この溶液は、選択的に低濃度の洗剤(例えば0.01から0.05%m/vのTween 20)及び赤と対照的な色(青または緑)の色素を含み得る。
−ABO−D血液分類、
−Rhesus−Kell分類、
−異常な凝集素の探索(3つの赤血球表現型)、
−異常な凝集素の同定(10の赤血球表現型)、
−拡張表現型検査、
−抗グロブリンを伴う直接制御、
−直接互換性試験、のためのカードであり得る。
12 支持
14 多孔質膜
16 反応領域
16−1 中央
16−2 周辺
18 吸収性膜
20 開口部
Claims (22)
- 血液またはその成分の一つの試料から、赤血球の表現型の抗原と、特にこの抗原に対する抗体との少なくとも一つの反応を検出するためのインビトロ診断装置(10)であって、
−支持(12)、及び
−前記支持内に配され、0.05mmから1.5mmの厚さを有し、孔の直径が2μmから30μmの疎水性の多孔質膜(14)であって、前記膜が前記試料を受けるように意図された少なくとも一つの親水性の反応領域(16)を備え、前記親水性の反応領域(16)の表面が前記疎水性の多孔質膜(14)の表面よりも小さい、疎水性の多孔質膜(14)、を備え、
前記多孔質膜(14)の前記親水性の反応領域(16)が、前記多孔質膜の先行する化学的または物理的な処理によって多孔質基板の化学的機能を変更することなく、洗剤で親水性にされることを特徴とするインビトロ診断装置(10)。 - 前記洗剤が非イオン性の表面活性剤であることを特徴とする、請求項1に記載の診断装置(10)。
- 前記洗剤が0.01から2%(重量/体積)の量で使用されることを特徴とする、請求項1または2に記載の診断装置(10)。
- 前記多孔質膜(14)が前記支持(12)に配され、前記支持(12)が少なくとも一つの開口部(20)を備え、各開口部(20)が前記多孔質膜の各親水性の反応領域(16)に垂直であることを特徴とする、請求項1から3のいずれか一項に記載の診断装置(10)。
- 前記支持(12)が硬質プラスチック支持であることを特徴とする、請求項1から4のいずれか一項に記載の診断装置(10)。
- 前記多孔質膜(14)の下方に配された吸収性膜(18)も備えることを特徴とする、請求項1から5のいずれか一項に記載の診断装置(10)。
- 前記多孔質膜(14)の前記親水性の反応領域(16)が捕捉剤も備えることを特徴とする、請求項1から6のいずれか一項に記載の診断装置(10)。
- 前記捕捉剤が赤血球の型/表現型の抗原を備えることを特徴とする、請求項7に記載の診断装置(10)。
- 前記捕捉剤がヘモグロビンを欠いた赤血球であることを特徴とする、請求項8に記載の診断装置(10)。
- 前記捕捉剤が抗体であることを特徴とする、請求項7に記載の診断装置(10)。
- 前記捕捉剤がポリカチオン性のポリマーであることを特徴とする請求項7に記載の診断装置(10)。
- 前記反応領域(16)が前記多孔質膜の厚さに全体にわたって親水性であることを特徴とする、請求項1から11のいずれか一項に記載の診断装置(10)。
- 前記反応領域(16)が前記反応領域の表面で親水性であることを特徴とする、請求項1から12のいずれか一項に記載の診断装置(10)。
- 前記反応領域(16)が二つの親水性の領域(16−1、16−2)を備え、前記反応領域の中央(16−1)で、周辺(16−2)よりも親水化度が高いことを特徴とする、請求項1から13のいずれか一項に記載の診断装置(10)。
- 前記反応領域(16)が、異なる親水化度を有する二つの親水性の領域を有し、一方は表面、他方は厚さ中であることを特徴とする、請求項1から13の何れか一項に記載の診断装置(10)。
- 前記反応領域(16)が、前記多孔質膜の先行する化学的または物理的な処理によって多孔質基板の化学的機能を変更することなしに、二つの異なる洗剤で親水性にされることを特徴とする、請求項14または15に記載の診断装置(10)。
- 請求項1から16のいずれか一項に記載の装置(10)の製造方法であって、以下のステップを備えることを特徴とする製造方法:
−0.05mmから1.5mmの厚さで、孔の直径が2μmから30μmの疎水性の多孔質膜(14)を、少なくとも一つの洗剤によって、前記膜の少なくとも一つの領域(16)上で親水化するステップ、
−選択的に捕捉剤溶液を堆積するステップ、
−乾燥するステップ、
−前記多孔質膜(14)、及び選択的に、前記多孔質膜(14)の下方に配された吸収性膜(18)を、支持(12)と組み合わせるステップ。 - 血液またはその成分の一つの試料から、ABO血液型の同定及び決定、拡張Rhesus表現型検査、異常な凝集素の探索、自己抗体の探索、寒冷凝集素の探索、及び/またはクロス検証をするための、請求項1から16のいずれか一項に記載の装置の使用。
- 赤血球の試料から、抗原の二つの異なる分布の存在を検出するために、赤血球の血液型を表現型検査するプロセスであって、以下のステップを含むことを特徴とする表現型検査プロセス:
−請求項1から6のいずれか一項に記載の装置(10)の前記反応領域の中央で前記多孔質膜(14)を水和するために溶液を堆積するステップであって、前記反応領域(16)が二つの親水性の領域(16−1、16−2)を備え、前記反応領域の中央(16−1)で周辺(16−2)よりも親水化度が高く、前記中央で抗体を含む捕捉剤を備えるステップ、
−表現型検査される前記赤血球をバッファ液中で希釈するステップ、
−表現型検査される前記赤血球を含むこの溶液を、前記反応領域の前記中央で加えるステップ、
−保温するステップ、
−前記反応領域上にリンス液を堆積するステップ。 - 赤血球の試料からの、赤血球の血液型の表現型検査プロセスであって、以下のステップを備えることを特徴とする表現型検査プロセス:
−前記多孔質膜(14)を請求項1から6のいずれか一項に記載の装置(10)の前記反応領域(16)の位置で水和するために溶液を堆積するステップであって、前記反応領域(16)が単一の親水性の領域を備え、かつ、抗体を含む捕捉剤を備えるステップ、
−選択的に、表現型検査される前記赤血球をバッファ液中で希釈するステップ、
−表現型検査される前記赤血球を含むこの溶液を、前記反応領域の前記中央に加えるステップ、
−保温するステップ、
−前記反応領域上にリンス液を堆積するステップ。 - 血漿、血清、または完全の血液の試料から、血液中に存在する多価抗体を検出するためのプロセスであって、以下のステップを備えることを特徴とするプロセス:
−試験される試料を、請求項1から6のいずれか一項に記載の装置(10)の前記反応領域(16)上に堆積するステップであって、前記反応領域(16)が抗原を含む捕捉剤を備えるステップ、
−前記捕捉剤と同一の抗原を含む、既知の表現型の赤血球試験を加えるステップ、
−混合物を前記親水性の領域に通すステップ、
−リンス液を前記反応領域上に堆積するステップ。 - 血漿、血清、または完全の血液の試料から、血中に存在する抗赤血球抗体の検出、クロス検証、または自己抗体若しくは寒冷凝集素の探索のためのプロセスであって、以下のステップを備えることを特徴とするプロセス:
−バッファ、既知の表現型の赤血球試験とともに、試験される試料を保温するステップ、
−この混合物に赤血球を凝集させることが可能な作用物質を加えるステップ、
−請求項1から6のいずれか一項に記載の装置(10)の前記反応領域(16)上に、前記混合物を堆積するステップ、
−前記赤血球を凝集させることが可能な作用物質を含む溶液を、前記反応領域上に堆積するステップ、
−クームス、人間の抗グロブリン、または抗補体試薬を、前記反応領域上に堆積するステップ、及び
−前記反応領域上にリンス液を堆積するステップ。
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