JP6267715B2

JP6267715B2 - ミリセチンを有効成分として含む運動遂行能力の増強用または疲労回復用の組成物

Info

Publication number: JP6267715B2
Application number: JP2015536673A
Authority: JP
Inventors: キム、キョン−テ; チェ、ボ−ファ; チョン、フェ−ユン; シン、チェ−チョン; オ、サン−テク; カン、ミョン−ソ
Original assignee: バイオコーゲンカンパニーリミテッド
Priority date: 2012-10-11
Filing date: 2013-09-16
Publication date: 2018-01-24
Anticipated expiration: 2033-09-16
Also published as: JP2015535218A; KR101454425B1; CN104755089A; EP2907517A4; EP2907517A1; US9675580B2; US20150283112A1; KR20140048402A; US20160175277A1; WO2014058160A1

Description

本発明はミリセチン（ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含む運動遂行能力の増強用または疲労回復用の組成物に関するものである。

現代人は美容と健康に高い関心を寄せるが、肥満、高血圧及びその他成人病に苦しんでおり、老化防止のための大きな努力にも関わらず、大気汚染及び過重なストレスなどが原因でこれらを防ぐことができない実情である。このような各種の成人病及び老化を予防するためには運動をたゆまずにすることが最も効果的かつ経済的であるが、運動をする時間が制限されているので、運動の効果を高めるようにする各種製剤が市販されている。また、運動選手は、新記録を樹立するために運動種目による科学的な訓練、食療法及び運動能力向上のサプリメント（ｅｒｇｏｇｅｎｉｃａｉｄｓ）などを並行している。この中で運動能力向上のサプリメントは運動遂行能力を向上させるだけでなく、身体活動の際に体内に蓄積されて疲労を発生させる疲労要素の除去にも効果があるため、一般の人たちにもよく利用されている。

運動能力向上のための機能性サプリメントに関連する研究は、東洋と西洋を問わず活発に行われている。現在市販される製品はほとんどステロイド、カフェイン、炭酸水素ナトリウムおよびクエン酸ナトリウムなどが含まれている。しかし、これらの成分の効果は一時的な現象に過ぎず、耐性が生じてより多くの量の成分が含まれている製品を欲しがるようになって、健康に致命的な副作用を引き起こすこともある。したがって、最近では、植物抽出物などの安全性が保証された天然物を使用して、機能性サプリメントを開発しようとする研究が活発に進められている。

天然物を用いた疲労回復や運動能力の向上と関連して、従来に特許登録された技術を見てみると、韓国産のヤドリギ抽出物を含有した機能性黒ニンニクトマト飲料組成物（大韓民国特許登録第１０−１１２１７３７号）、ジンセノサイドＲｇ３とＲｇ２を含む運動能力の増進及び疲労回復の増進用組成物（大韓民国特許登録第１０−１１２０９９６号）、運動遂行能力の増強用組成物（大韓民国特許登録第１０−０５２６１６４号）などがあるが、その効果や利用には限界があるのが実情である。

ミリセチン（Ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）はフラボノール（ｆｌａｖｏｎｏｌ）の誘導体として、漢方薬材のヤマモモの樹皮の主な成分で口内炎、利尿薬、血圧降下薬などで用いられている。ヤマモモ以外にもシロツメクサの種、蜈蚣草の葉、ツツジの花、ハゼノキなどもミリセチンを含んでいることが知られている。ミリセチンは、抗がん、アルツハイマー病の予防及び治療、抗炎症、糖尿病の予防及び治療などの様々な効果があることが報告されている。韓国でも、ミリセチンのいくつかの用途に関する発明が特許登録されている状態である。例えば、肝炎の予防または治療用の薬学的組成物（大韓民国特許登録第１００５９９４９６００００号）、３β−ヒドロキシステロイド−デヒドロゲナーゼ活性抑制用皮膚化粧料組成物（大韓民国特許登録第１００６９２０９９００００号）、白髪抑制と黒毛誘発促進用組成物（大韓民国特許登録第１００７０１２７２００００号）などがある。しかし、運動遂行能力の増強または疲労回復機能については、現在までに明らかになったことはなかった。

本発明者らは、副作用がなく、安全な天然物由来の運動遂行能力増強剤及び体力増進剤について研究している中で、ミリセチンが優れた運動遂行能力の増強及び体力増進に優れた効果があることを最初に発見し、本発明を完成するに至った。

大韓民国特許登録第１０−１１２０９９６号大韓民国特許登録第１０−０５２６１６４号大韓民国特許登録第１００５９９４９６００００号大韓民国特許登録第１００６９２０９９００００号大韓民国特許登録第１００７０１２７２００００号

本発明は、ミリセチンまたはその薬学的に許容される塩を有効成分として含む運動遂行能力増強用または疲労回復用の組成物を提供することを目的とする。また、本発明は、ミリセチンまたはその薬学的に許容される塩を有効成分として含む老化防止用組成物および抗肥満用組成物を提供することを目的とする。

しかし、本発明が解決しようとする技術的課題は、以上で言及した課題に制限されず、言及されていない他の課題は、以下の記載から当業者に明確に理解されるだろう。

本発明は、ミリセチン（ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含む運動遂行能力増強用または疲労回復用の薬学的組成物および食品組成物を提供する。

また、本発明は、ミリセチン（ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む抗肥満用薬学的組成物および食品組成物を提供する。

上記の組成物を個体に投与することができる。本発明で個体とは、疾病の治療を必要とする対象を意味し、より具体的には、人間または非人間である霊長類、マウス（ｍｏｕｓｅ）、ラット（ｒａｔ）、犬、猫、馬、および牛などの哺乳類を意味する。

本発明の薬学的組成物は、投与のために、上記に記載した有効成分の以外に、追加で薬学的に許容可能な担体を１種以上含めて製造することができるし、様々な剤形で製造することができる。

本発明の薬学的組成物は、目的とする方法に応じて、経口投与するか、または非経口投与（例えば、静脈内、皮下、腹腔内または局所に適用）することができるし、投与量は、患者の体重、年齢、性別、健康状態、食事、投与時間、投与方法、排泄率および疾患の重症度などに応じて、その範囲が多様である。

本発明の薬学的組成物の好ましい投与量は、患者の状態や体重、疾病の程度、薬物形態、投与経路、および期間に応じて異なるが、当業者によって適切に選択することができる。しかし、好ましくは、１日０．００１ないし１００ｍｇ／体重ｋｇで、より好ましくは０．０１ないし３０ｍｇ／体重ｋｇで投与する。投与は、１日１回投与することもできるし、複数回に分けて投与することもできる。

本発明の食品組成物は運動能力増強または疲労回復などを目的で健康機能食品に添加されることができる。本発明のミリセチンまたはこれの薬学的に許容可能な塩を食品添加物に用いる場合、そのまま添加したり、他の食品、または、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオシド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄ１−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料または保存剤などの食品添加物と一緒に用いることができ、通常の方法によって適切に使用することができる。有効成分の混合量は使用目的（予防、健康または治療的処置）によって適合するように決定することができる。一般的に、食品または飲料の製造の際に本発明のミリセチンまたはこれの薬学的に許容可能な塩は、原料に対して１５重量％以下、望ましくは１０重量％以下の量で添加される。しかし、健康及び衛生を目的にしたり、または健康の調節を目的とする長期間の摂取の場合、上記の量は、上記の範囲以下であることができるし、安全性の面で何の問題がないため有効成分は上記の範囲以上の量でも用いられる。

上記の食品の種類には特に制限はない。乳製品、各種スープ、飲料、お茶、ドリンク剤、アルコール飲料及びビタミン複合剤などが可能であり、その他の通常の意味での健康機能食品をすべて含む。

本発明の一実施例として、上記の組成物は、運動遂行可能時間（ｅｘｅｒｃｉｓｅｅｎｄｕｒａｎｃｅ）を増加させて、力を強化し、バランス感覚を増進させて、運動協調能力（ｅｘｅｒｃｉｓｅａｄａｐｔａｔｉｏｎ）を増加させることを特徴とする。

本発明の他の実施例として、上記のミリセチンは、ミトコンドリアの酸化的代謝機能を増加させることを特徴とし、これはＰＧＣ−１α、ＮＲＦ−１またはＰＰＡＲ−δ遺伝子の発現を増加させることによって行うことができる。

本発明は、ミリセチン（ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む疲労回復や老化防止用薬学的組成物および食品組成物を提供することを目的とする。このとき、疲労回復や老化防止は、ＳＩＲＴ−１遺伝子の発現を増加させることによって行うことができる。

本発明のミリセチンはヤマモモの樹皮、シロツメクサの種、蜈蚣草の葉、ツツジの花、ハゼノキ及びクルミなどの原料から抽出することができるし、精製されたミリセチンを市販で購入することも可能である。しかし、ミリセチンの出処は、これに限定されない。

本発明のミリセチンまたはその薬学的に許容される塩を有効成分として含む組成物は、運動遂行能力の増強を増加させて、体力を増進させる。また、抗老化機能および疲労を回復させる機能がある。本発明の組成物は、ミトコンドリアの機能を向上させて、エネルギー効率を高め、エネルギー消費を増加させるため、抗肥満効果も有する。

図１はミリセチンの摂取によるマウスの持久性運動の遂行能力の増進効果を示したグラフである。図２ａはミリセチンの摂取によるマウスの握力増進の効果を示したグラフである。図２ｂはミリセチンの摂取によるマウスの握力増進の効果を示したグラフである。図３はミリセチンの摂取によるマウスの感覚運動機能の増進を示したグラフである。図４はミリセチンによるマウスのＣ ₂ Ｃ ₁₂ 筋管細胞への影響を示した図である。図４ａはミリセチンによるマウスのＣ ₂ Ｃ ₁₂ 筋管細胞のＰＧＣ−１ａ遺伝子の発現量を示したグラフである。図４ｂはミリセチンによるマウスのＣ ₂ Ｃ ₁₂ 筋管細胞のＮＲＦ−１遺伝子の発現量を示したグラフである。図４ｃはミリセチンによるマウスのＣ ₂ Ｃ ₁₂ 筋管細胞のＰＰＡＲ−δ遺伝子の発現量を示したグラフである。図４ｄはミリセチンによるマウスのＣ ₂ Ｃ ₁₂ 筋管細胞のＳＩＲＴ−１遺伝子の発現量を示したグラフである。図５はＳＤラットでミリセチンの投与の際に体重及び食欲に及ぶ効果を確認したグラフである。図５ａはミリセチンによる体重の減少効果を示したグラフである。図５ｂはミリセチンによる餌の摂取量の変化を示したグラフである。

本発明の化合物であるミリセチン（ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）のＩＵＡＰＣｎａｍｅは３，５，７−Ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ−２−（３，４，５−ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）− ４−ｃｈｒｏｍｅｎｏｎｅであり、構造は下記の化学式１の通りである。

ミリセチンはヤマモモ、シロツメクサ、蜈蚣草、ツツジの花、ハゼノキなどから分離して用いることができるが、本実験例で用いたミリセチンはシグマアルドリッチ（株）から購入して用いた。

実施例１から４は、ミリセチンをマウスに投与した後の効果を観察したものであり、実施例１では、体力増進と持久力強化の能力を確認し、実施例２で筋肉の最大の強さを測定した。実施例３で感覚運動の効果を測定し、実施例４では、ミトコンドリア生合成および機能に関連する遺伝子の発現、運動遂行能力及び抗老化活性を測定した。実施例５では、ミリセチンの抗肥満効果を測定した。上記の実施例１から５を通じてミリセチンの効果と用途を確認した。

以下、本発明の理解を助けるために好ましい実施例を提示する。しかし、下記の実施例は、本発明をより理解しやすくするために提供されているものであり、下記の実施例により本発明の内容が限定されるものではない。

実施例１：ミリセチンによるマウスの体力強化の効果測定
１−１．ミリセチン投与群及び陰性対照群の用意
８週齢のＩＣＲマウス１０匹を（株）コアテック（ＫＯＡＴＥＣＨ、韓国）から購入して、１週間の予備飼育した後、５匹ずつ２つのグループに分けた。
一つ目のグループは、リン酸緩衝食塩水を投与して陰性対照群として設定して、二つ目のグループは、ミリセチンを５０ｍｇ／ｋｇの濃度で２週間毎日経口投与した。

１−２．マウスの持久性運動遂行の能力強化の効果及び体力の強化効果の測定
ミリセチンの持久性の運動遂行能力の変化を測定するために、陰性対照群とミリセチン投与群の動物にトレッドミル運動（Ｐａｎｌａｂ＆Ｈａｒｖａｒｄ、Ｓｐａｉｎ）をさせた。

運動遂行プロトコルは、傾斜５°で２５ｃｍ／秒の速度で２０分、３０ｃｍ／秒の速度で２０分、３３ｃｍ／秒の速度で２０分、３６ｃｍ／秒の速度で２０分、３６ｃｍ／秒の速度で１５分、傾斜１０°で３８ｃｍ／秒の速度で１５分、そして４１ｃｍ／秒の速度で疲れるまで走るように構成された。

実験前日トレッドミルランニングに適応させるために傾斜５°から２７ｃｍ／秒の速度で１０分間の運動をさせた。

実験当日、トレッドミル運動の２時間前から絶食させた後、トレッドミル運動をさせて、実験動物の最大運動遂行能力を測定した。最大の運動遂行能力の決定時点は運動遂行開始の後、実験動物がトレッドミルの速度を２０秒以上追いつかない現象が発生したり、電気ショックの累積数が５分以内に１００回を超える時点と定義した。上記の実験結果は、実験群と対照群のｔ検定を実施して、その有意性を検証し、統計学的に有意な差を示した（＊＊＊ｐ＜０．０００５）。

実験の結果、図１に示すように、ミリセチンを投与されたマウスは、より長い間トレッドミル運動を行うことができたことがわかった。このことから、本発明のミリセチンの摂取が体力の増進に大きく寄与することが確認できた。したがって、上記のミリセチンを体力強化補助剤として用いられるが分かった。

実施例２：ミリセチンによるマウスの握力強化の効果測定
２−１．ミリセチン投与群及び陰性対照群の用意
ミリセチンによるマウスの持久性の運動遂行能力の強化の効果を測定するために、生後８週になった体重３０±５ｇのＩＣＲ系列１０匹を用いた。実施例１と同様に実験動物を２つのグループに分けた後、一つ目のグループを陰性対照群と設定して、二つ目のグループは、ミリセチンを５０ｍｇ／ｋｇの濃度で２週間毎日経口投与した。

２−２．マウスの握力強化の効果測定
ミリセチンの筋肉最高力の変化を測定するために、対照群とミリセチン投与群の動物に握力テスト（Ｂｉｏｓｅｂ、Ｆｒａｎｃｅ）を実施した。

マウスの尾をつかんで、マウスが握力試験装置を握るようにした後、尾を後ろに引っ張る際に示される前足と後足の最大握力を測定した。握力は３回繰り返し測定した後、平均値を用いた。上記の実験結果は、実験群と対照群の集団ごとにｔ検定を実施して、その有意性を検証し、統計学的に有意な差があった（＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊＊ｐ＜０．００００５）。

実験の結果、図２ａおよび２ｂに示すように、ミリセチンの投与を受けた動物たちの最大筋力が増加されたことがわかった。このことから、本発明ミリセチンの摂取が筋力増進に大きく寄与することが確認できた。

実施例３：ミリセチンによる感覚運動機能の効果測定
３−１．ミリセチン投与群及び陰性対照群の用意
ミリセチンがマウスの感覚運動機能に及ぼす効果を確認するために、８週齢のＩＣＲを（株）コアテック（ＫＯＡＴＥＣＨ、韓国）から購入し、１週間の予備飼育した後、５匹ずつ２つのグループに分けた。実施例１と同様に実験動物を２つのグループに分けた後、一つ目のグループを陰性対照群に設定して、二つ目のグループは、ミリセチンを５０ｍｇ／ｋｇの濃度で２週間、毎日１ｍｌを注射器を用いて経口投与した。

運動協応
３−２．マウスの感覚運動機能の効果測定
ミリセチンが感覚運動機能に及ぼす効果を測定するために、対照群とミリセチン投与群の動物にロータロッド（Ｐａｎｌａｂ＆Ｈａｒｖａｒｄ、Ｓｐａｉｎ）を実施した。ロータロッド実験は、動物の運動協調（ｅｘｅｒｃｉｓｅａｄａｐｔａｔｉｏｎ）とバランスを測定するものである（Ｍｉｃｈｅｌｐｒａｔｔｅｅｔａｌ．、Ｂｅｈａｖｉｏｕｒａｌｂｒａｉｎｒｅｓｅａｒｃｈ２１６：３１３−３２０、２０１１; ＭｅｄｉｎａＲ．ｅｔａｌ．、ＦＥＢＳＬｅｔｔ．１８０（１）：７７−８０、１９８５）。
マウスの尾をつかんでロータロッドに乗せた後、最初のスピードは４ｒｐｍから開始して３０秒間隔で４ｒｐｍずつ上げて５分以内に４０ｒｐｍまで至るようにしてマウスがロータロッドに留まる時間を測定した。総５回繰り返してロータロッドに最もとどまった時間を結果の値として用いた。上記の実験結果は、実験群と対照群の集団ごとにｔ検定を実施し、その有意性を検証し、統計学的に有意な差が見えた（＊＊ｐ＜０．００５）。
実験の結果、図３に示すように、ミリセチンの投与を受けた動物たちがロータロッドに長く滞在することができていることがわかった。したがって、上記の結果から、ミリセチンが運動協調とバランス感覚を増進させる効果があることが分かった。

実施例４：ミリセチン処理による細胞内のミトコンドリアの生合成及び機能関連遺伝子の発現の測定
４−１．各遺伝子の機能
ＰＧＣ−１α（ＰｅｒｏｘｉｓｏｍｅＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ＡｃｔｉｖａｔｅｄＲｅｃｅｐｔｏｒ γ Ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ−１α）とＮＲＦ−１（Ｎｕｃｌｅａｒｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒ−１）遺伝子は、ミトコンドリアの生合成と機能を調節する代表的な転写関連遺伝子として、活性化されると、ミトコンドリアの機能と酸化的代謝を調節することが知られている（ＣｈｒｉｓｔｏｐｈＨａｎｄｓｃｈｉｎｅｔａｌ．、ＥｎｄｏｃｒｉｎｅＲｅｖｉｅｗｓ、２７：７２８−７３５、２００６）。したがって、上記のＰＧＣ−１αとＮＲＦ−１遺伝子の発現量を測定すると、ミトコンドリア生合成および機能の増進を把握することができる。そこで、本実験例では、ミリセチンを処理する場合、マウスのＣ ₂ Ｃ ₁₂ 筋管細胞からＰＧＣ−１αとＮＲＦ−１遺伝子の発現量を観察した。
ＰＰＡＲ−δ（Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒ−δ）遺伝子は、運動をしていない場合でも、運動遂行性を増進するターゲットとして、よく知られている（ＶｉｈａｎｇＡ．Ｎａｒｋａｒｅｔａｌ．、Ｃｅｌｌ、１３４：４０５−４１５、２００８）。したがって、上記のＰＰＡＲ−δ遺伝子の発現量を測定すると、運動遂行性の増進効能作用剤としての可否を把握することができる。そこで、本実施例では、ミリセチンを処理した場合、マウスのＣ ₂ Ｃ ₁₂ 筋管細胞でＰＰＡＲ−δ遺伝子の発現量を観察した。

ＳＩＲＴ−１（Ｓｉｒｔｕｉｎ−１、ｓｉｌｅｎｔｍａｔｉｎｇｔｙｐｅｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ−２ｈｏｍｏｌｏｇ１）遺伝子は、代表的な抗老化関連遺伝子として、エネルギーと代謝恒常性の主要な調節因子として関与すると知られている（ＪｏｈａｎＡｕｗｅｒｘｅｔａｌ．、Ｃｅｌｌ、１２７：１１０９−１１２２、２００６）。したがって、上記のＳＩＲＴ−１遺伝子の発現量を測定すると、細胞の老化速度を把握することができる。そこで、本実施例では、ミリセチンを処理した場合、ＳＩＲＴ−１遺伝子の発現量を観察した。

また、ミトコンドリアの機能が増進されると、エネルギーの生産が増加して、疲労回復効果もあるので、ＰＧＣ−１α、ＮＲＦ−１、ＰＰＡＲ−δ、ＳＩＲＴ−１の発現量を測定すると、疲労回復の効果を把握することができる。
ミトコンドリアの機能が増進されるということは、エネルギーの消費が増加して、エネルギー効率が良くなるということを意味するので、抗肥満効果を有することができる。したがって、ＰＧＣ−１α、ＮＲＦ−１、ＰＰＡＲ−δ、ＳＩＲＴ−１の発現量を測定すると、抗肥満効果を把握することができる。

４−２．リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ、ＲＴ−ＰＣＲ）
マウス筋芽細胞を韓国細胞株銀行から購入して、β−ａｃｔｉｎ、ＳＩＲＴ−１、ＰＧＣ−１α、ＮＲＦ−１、ＰＰＡＲ−δ遺伝子に関するプライマーの塩基配列は、それぞれ以下のとおりである。

＜β―ａｃｔｉｎ＞
ｆｏｒｗａｒｄ：ＧＧＧＡＡＧＧＴＧＡＣＡＧＣＡＴＴＧ（配列番号１）
ｒｅｖｅｒｓｅ：ＡＴＧＡＡＧＴＡＴＴＡＡＧＧＣＧＧＡＡＧＡＴＴ（配列番号２）
＜ＳＩＲＴ−１＞
ｆｏｒｗａｒｄ：ＧＴＴＡＧＣＣＴＴＧＴＡＴＴＡＴＧＧＡＧＡＴＧＡ（配列番号３）
ｒｅｖｅｒｓｅ：ＴＧＡＧＧＴＡＡＣＴＧＴＴＴＧＡＡＡ（配列番号４）
＜ＰＧＣ−１α＞
ｆｏｒｗａｒｄ：ＡＡＧＧＡＣＴＣＴＧＡＧＡＡＣＡＣＴＴＧ（配列番号５）
ｒｅｖｅｒｓｅ:ＣＡＡＣＴＧＡＣＣＣＡＡＡＣＡＣＴＴＴＡＣ（配列番号６）
＜ＮＲＦ−１＞
ｆｏｒｗａｒｄ：ＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＴＣＴＴＣＴ（配列番号７）
ｒｅｖｅｒｓｅ：ＧＡＣＣＴＴＡＣＡＡＣＣＡＡＧＣＡＡＣＴ（配列番号８）
＜ＰＰＡＲ−δ＞
ｆｏｒｗａｒｄ：ＣＣＴＣＴＣＴＣＣＣＡＣＴＣＡＣＴＴ（配列番号９）
ｒｅｖｅｒｓｅ:ＣＣＡＣＴＴＧＡＡＧＣＡＧＣＡＧＡＴ（配列番号１０）

１Ｘ１０^７のＣ_２Ｃ_１２（マウス筋芽細胞）を２％ウマ血清で分化させて、筋管細胞を作った。マウスＣ _２Ｃ _１２筋管細胞にミリセチンを濃度別に処理して、１６時間培養した後、Ｔｒｉｚｏｌを用いて筋管細胞からＲＮＡを抽出して、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応を用いてｃＤＮＡを合成した。

コントロールとしてβ−アクチン（β−ａｃｔｉｎ）を用いて、それぞれの遺伝子のプライマーを用いてリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応を行った（９５℃ ３分、＜９５℃ １０秒、６０℃ １０秒、７２℃ ３０秒＞−３９回、９５℃ １０秒、６５℃ ５秒）。ＰＧＣ−１α、ＮＲＦ−１、ＰＰＡＲ−δ、ＳＩＲＴ−１をβ−アクチンで補正して、結果の値を出した。上記の実験結果は、実験群と対照群の一元配置分散分析法（ｏｎｅｗａｙＡＮＯＶＡ）で比較検定し、事後検定でＴｕｒｋｅｙ法（Ｔｕｒｋｅｙ‘ｓｍｕｌｔｉｐｌｅｓｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｔｅｓｔ）を実施して、その有意性を検証し、統計学的に有意な差を見せた（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５）。
実験の結果、図４ａ、４ｂ、４ｃ、４ｄに示すように、ミリセチン１０、３０、１００μＭを処理した実験群では、対照群に比べてＳＩＲＴ−１、ＰＧＣ−１α、ＮＲＦ−１、ＰＰＡＲ−δの発現が２〜３倍以上増加した。

上記の結果から、本発明のミリセチンの処理がミトコンドリア生合成および機能を調節するＰＧＣ−１α およびＮＲＦ−１遺伝子の発現を増加させて、運動遂行性の増進ターゲットであるＰＰＡＲ−δ を活性化させ、抗老化に関連する遺伝子であるＳＩＲＴ−１遺伝子を活性化させることがわかった。したがって、ミリセチンが細胞内のエネルギー生産機関であるミトコンドリアの機能を増進させて体力増強効果があると判断された。

実施例５：ミリセチンによる抗肥満効果の測定
本発明者は、ミリセチンの運動機能および感覚機能増進効果を確認するための実験の実行中に、ミリセチンを投与したマウスたちが、体重の減少を示すことを発見して、これを確認するために、ラットを対象にする下記の追加実験を行った。
７週齢のＳＤラットを（株）コアテック（ＫＯＡＴＥＣＨ、韓国）から購入して、１週間の予備飼育した後、５匹ずつランダムで２グループに分けた。まず、実験群には、ミリセチン５０ｍｇ／ｋｇを、対照群には、リン酸緩衝食塩水を５日間投与した。

５−１．ミリセチン摂取マウスの体重変化の測定
体重変化の調査は、電子スケール（ＣＡＳ、中国）を用いて体重を測定した。投与前の各群のラットの体重は平均２２５ｇで同じであったが、実験終了の後、対照群の体重は平均２８５ｇ、ミリセチン投与群の体重は平均２７５ｇであった（図５ａ）。実験の結果、図５ａに示すように、ミリセチン投与群のマウスの体重は、リン酸緩衝食塩水投与マウスの体重よりも減少することが観察できた。

５−２．ミリセチン摂取マウスの餌摂取量の測定
餌摂取量の調査は、リン酸緩衝食塩水投与マウスとミリセチン投与群のマウスを行動代謝測定器（Ｐａｎｌａｂ＆Ｈａｒｖａｒｄ、Ｓｐａｉｎ）に毎日餌摂取量を自動的に測定した。餌の摂取量の平均は、グループごとに５匹ずつ２つに分けて、それぞれの平均餌摂取量とした。実験の結果、図５ｂに示すように、ミリセチン投与マウスの餌摂取量がリン酸緩衝食塩水投与のマウスの餌摂取量よりも減少することを観察することができた。

上記の結果は、ミリセチン投与が食欲抑制を通じて、マウスの体重を減少させる効果があり、したがって、上記のミリセチンが抗肥満医薬品として用いられることを示している。

前述した本発明の説明は例示のためのものであり、本発明が属する技術分野の通常の知識を有する者は、本発明の技術的思想や必須の特徴を変更せず、他の具体的な形で容易に変形できることを理解することができるだろう。したがって、以上で記述した実施例は、すべての面で例示的なものであり限定的ではないものと理解するべきである。

本発明のミリセチンまたはその薬学的に許容される塩を有効成分として含む組成物は、運動遂行能力と体力を増進させ、抗老化機能および疲労を回復させる機能があり、ミトコンドリアの機能を向上させ、エネルギー効率を高めることによって、エネルギー消費を増加させるため、抗肥満効果も有するので、機能性食品または医薬の分野で重要に応用できると期待される。

＜２１０＞１
＜２１１＞１８
＜２１２＞ＤＮＡ
＜２１３＞ＡｒｔｉｆｉｃｉａｌＳｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ｐｒｉｍｅｒ
＜４００＞１
ｇｇｇａａｇｇｔｇａｃａｇｃａｔｔｇ１８

＜２１０＞２
＜２１１＞２３
＜２１２＞ＤＮＡ
＜２１３＞ＡｒｔｉｆｉｃｉａｌＳｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ｐｒｉｍｅｒ
＜４００＞２
ａｔｇａａｇｔａｔｔａａｇｇｃｇｇａａｇａｔｔ２３

＜２１０＞３
＜２１１＞２４
＜２１２＞ＤＮＡ
＜２１３＞ＡｒｔｉｆｉｃｉａｌＳｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ｐｒｉｍｅｒ
＜４００＞３
ｇｔｔａｇｃｃｔｔｇｔａｔｔａｔｇｇａｇａｔｇａ２４

＜２１０＞４
＜２１１＞１８
＜２１２＞ＤＮＡ
＜２１３＞ＡｒｔｉｆｉｃｉａｌＳｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ｐｒｉｍｅｒ
＜４００＞４
ｔｇａｇｇｔａａｃｔｇｔｔｔｇａａａ１８

＜２１０＞５
＜２１１＞２０
＜２１２＞ＤＮＡ
＜２１３＞ＡｒｔｉｆｉｃｉａｌＳｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ｐｒｉｍｅｒ
＜４００＞５
ａａｇｇａｃｔｃｔｇａｇａａｃａｃｔｔｇ２０

＜２１０＞６
＜２１１＞２１
＜２１２＞ＤＮＡ
＜２１３＞ＡｒｔｉｆｉｃｉａｌＳｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ｐｒｉｍｅｒ
＜４００＞６
ｃａａｃｔｇａｃｃｃａａａｃａｃｔｔｔａｃ２１

＜２１０＞７
＜２１１＞１８
＜２１２＞ＤＮＡ
＜２１３＞ＡｒｔｉｆｉｃｉａｌＳｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ｐｒｉｍｅｒ
＜４００＞７
ｃｃｔｃａｇｃｃｔｃｃａｔｃｔｔｃｔ１８

＜２１０＞８
＜２１１＞２０
＜２１２＞ＤＮＡ
＜２１３＞ＡｒｔｉｆｉｃｉａｌＳｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ｐｒｉｍｅｒ
＜４００＞８
ｇａｃｃｔｔａｃａａｃｃａａｇｃａａｃｔ２０

＜２１０＞９
＜２１１＞１８
＜２１２＞ＤＮＡ
＜２１３＞ＡｒｔｉｆｉｃｉａｌＳｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ｐｒｉｍｅｒ
＜４００＞９
ｃｃｔｃｔｃｔｃｃｃａｃｔｃａｃｔｔ１８

＜２１０＞１０
＜２１１＞１８
＜２１２＞ＤＮＡ
＜２１３＞ＡｒｔｉｆｉｃｉａｌＳｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ｐｒｉｍｅｒ
＜４００＞１０
ｃｃａｃｔｔｇａａｇｃａｇｃａｇａｔ１８

Claims

ミリセチン（ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含む運動遂行能力の増強用の薬学的組成物であって、
該運動遂行能力の増強は、筋力強化、バランス感覚の増進、及び／又は運動協調能力（ｅｘｅｒｃｉｓｅａｄａｐｔａｔｉｏｎ）の増進である、薬学的組成物。
ミリセチン（ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含む運動遂行能力の増強用の食品組成物であって、
該運動遂行能力の増強は、筋力強化、バランス感覚の増進、及び／又は運動協調能力（ｅｘｅｒｃｉｓｅａｄａｐｔａｔｉｏｎ）の増進である、食品組成物。
ミトコンドリアの酸化的な代謝の機能を増加させるための、請求項１または２記載の組成物。
前記ミトコンドリアの酸化的な代謝の機能を増加させることが、ＰＧＣ−１α（ＰｅｒｏｘｉｓｏｍｅＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ＡｃｔｉｖａｔｅｄＲｅｃｅｐｔｏｒ γ Ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ−１α）、ＮＲＦ−１（Ｎｕｃｌｅａｒｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒ−１）、またはＰＰＡＲ−δ（Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒ−δ）遺伝子の発現を増加させることで遂行される、請求項３記載の組成物。
前記ミリセチンはヤマモモの樹皮、シロツメクサの種、蜈蚣草の葉、ツツジの花、ハゼノキ及びクルミで構成される群より選択された原料から抽出されたものであることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項記載の組成物。