JP6232290B2 - 液胞atpアーゼのcサブユニットを標的とし、鞘翅目有害生物に対する抵抗性を付与する核酸分子 - Google Patents
液胞atpアーゼのcサブユニットを標的とし、鞘翅目有害生物に対する抵抗性を付与する核酸分子 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6232290B2 JP6232290B2 JP2013547700A JP2013547700A JP6232290B2 JP 6232290 B2 JP6232290 B2 JP 6232290B2 JP 2013547700 A JP2013547700 A JP 2013547700A JP 2013547700 A JP2013547700 A JP 2013547700A JP 6232290 B2 JP6232290 B2 JP 6232290B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- plant
- molecule
- nucleic acid
- sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N57/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds
- A01N57/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds having alternatively specified atoms bound to the phosphorus atom and not covered by a single one of groups A01N57/10, A01N57/18, A01N57/26, A01N57/34
- A01N57/08—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds having alternatively specified atoms bound to the phosphorus atom and not covered by a single one of groups A01N57/10, A01N57/18, A01N57/26, A01N57/34 containing heterocyclic radicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N57/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds
- A01N57/10—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds having phosphorus-to-oxygen bonds or phosphorus-to-sulfur bonds
- A01N57/16—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds having phosphorus-to-oxygen bonds or phosphorus-to-sulfur bonds containing heterocyclic radicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
- C07K14/43563—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from insects
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
- C12N15/8218—Antisense, co-suppression, viral induced gene silencing [VIGS], post-transcriptional induced gene silencing [PTGS]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
- C12N15/8286—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for insect resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/50—Physical structure
- C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
- C12N2310/531—Stem-loop; Hairpin
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
- Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants
Description
本出願は、「液胞ATPアーゼのCサブユニットを標的とし、鞘翅目有害生物に対する抵抗性を付与する核酸分子」について、2010年12月30日に出願された米国特許仮出願第61/428,608号の出願日の利益を主張する。
本明細書では、鞘翅目有害生物の発生を遺伝子的に防除するための方法および組成物が開示される。また、鞘翅目有害生物の集団のRNAiを介する防除のための標的遺伝子として用いられる、鞘翅目有害生物の生活環に不可欠な1または複数の遺伝子を同定する方法も提供される。成長、生存、発育、および/または生殖に不可欠な1または複数の標的遺伝子を抑制するために、dsRNA分子をコードするDNAプラスミドベクターをデザインすることができる。一部の実施形態では、鞘翅目有害生物における標的遺伝子のコード配列または非コード配列と相補的な核酸分子を介する、標的遺伝子の発現の転写後抑制または標的遺伝子の阻害のための方法が提供される。これらの実施形態およびさらなる実施形態では、鞘翅目有害生物に、標的遺伝子のコード配列または非コード配列と相補的な核酸分子の全部または一部から転写される、1または複数のdsRNA、siRNA、miRNA、および/またはhpRNA分子を摂取させ、これにより、植物保護効果をもたらすことができる。
dsRNA 二本鎖リボ核酸
GI 成長阻害
NCBI National Center for Biotechnology Information
gDNA ゲノムDNA
iRNA 阻害的リボ核酸
ORF オープンリーディングフレーム
RNAi リボ核酸干渉
miRNA 阻害性マイクロリボ核酸
siRNA 低分子阻害性リボ核酸
hpRNA ヘアピンリボ核酸
UTR 非翻訳領域
WCR セイヨウトウモロコシ根虫(western corn rootworm(Diabrotica virgifera virgifera LeConte))
NCR ノーザンコーンルートワーム(northern corn rootworm(Diabrotica barberi Smith and Lawrence))
MCR メキシカンコーンルートワーム(Mexican corn rootworm(Diabrotica virgifera zeae Krysan and Smith))
PCR ポリメラーゼ連鎖反応
RISC RNA誘導サイレンシング複合体
SCR サザンコーンルートワーム(southern corn rootworm(Diabrotica undecimpunctata howardi Barber))
後続する記載および表では、多数の用語を用いる。このような用語により与えられる範囲を含め、本明細書および特許請求の範囲の明確で一貫した理解をもたらすために、以下の定義が提供される。
A.概観
本明細書では、鞘翅目有害生物の防除に有用な核酸分子が記載される。記載される核酸分子には、標的配列(例えば、天然遺伝子および非コード配列)、dsRNA、siRNA、hpRNA、およびmiRNAが含まれる。例えば、一部の実施形態では、鞘翅目有害生物における1または複数の天然の核酸配列の全部または一部と特異的に相補的でありうるdsRNA、siRNA、miRNA、および/またはhpRNA分子が記載される。これらの実施形態およびさらなる実施形態では、天然の核酸配列(複数可)が、1または複数の標的遺伝子であることが可能であり、例えば、かつ、限定せずに述べると、その産物は、代謝過程に関与する場合もあり、生殖過程に関与する場合もあり、幼虫の発育に関与する場合もある。本明細書で説明される核酸分子は、この核酸分子が特異的に相補的である少なくとも1つの天然の核酸配列を含む細胞に導入されると、細胞においてRNAiを誘発し、結果的に天然の核酸配列(複数可)の発現を低減する場合もあり、これを消失させる場合もある。一部の例では、それと特異的に相補的な配列を含む核酸分子による標的遺伝子の発現の低減または消失は、鞘翅目有害生物において致死性の場合もあり、成長および/または生殖の減殺を結果としてもたらす場合もある。
本発明はとりわけ、鞘翅目有害生物の細胞、組織、または器官における標的遺伝子の発現を阻害するiRNA(例えば、dsRNA、siRNA、miRNA、およびhpRNA)分子;および細胞または微生物においてiRNA分子として発現して、鞘翅目有害生物の細胞、組織、または器官における標的遺伝子の発現を阻害することが可能なDNA分子を提供する。
鞘翅目有害生物における多様な天然配列は、iRNAなどの本発明の核酸分子およびiRNAをコードするDNA分子をデザインするための標的配列として用いることができる。しかし、天然配列の選択は、単純な過程ではない。鞘翅目有害生物における少数の天然配列だけが、効果的な標的となる。例えば、本発明の核酸分子により特定の天然配列を効果的に下方制御しうるかどうか、または特定の天然配列の下方制御が鞘翅目有害生物の成長、生存能力、増殖、および/もしくは生殖に対して妨害的効果を及ぼすかどうかを確実に予測することはできない。ESTなど、鞘翅目有害生物から単離される大半の鞘翅目有害生物の天然配列(例えば、米国特許第7,612,194号および米国特許第7,943,819号で列挙される天然配列)は、WCRまたはNCRなどの鞘翅目有害生物の成長、生存能力、増殖、および/または生殖に対して妨害的効果を及ぼさない。鞘翅目有害生物に対して妨害的効果を及ぼしうる天然配列のうちのいずれを、宿主植物体におけるこのような天然配列と相補的な核酸分子を発現させる組換え法において用い、宿主植物体に害をもたらすことなく、摂食されると鞘翅目有害生物に対する妨害的効果をもたらしうるのかも予測できない。
一部の実施形態では、本発明また、細胞(例えば、細菌細胞、酵母細胞、または植物細胞)へと導入されるDNA分子であって、RNAへと発現し、鞘翅目有害生物により摂取されると、鞘翅目有害生物の細胞、組織、または器官における標的遺伝子の抑制を達成するヌクレオチド配列を含むDNA分子も提供する。したがって、一部の実施形態は、植物細胞においてiRNA(例えば、dsRNA、siRNA、miRNA、およびhpRNA)分子として発現して、鞘翅目有害生物における標的遺伝子の発現を阻害することが可能な核酸配列を含む組換え核酸分子を提供する。発現を誘発または増強するために、このような組換え核酸分子は、1または複数の調節配列を含むことが可能であり、これらの調節配列は、iRNAとして発現することが可能な核酸配列に作動可能に連結することができる。植物において遺伝子抑制分子を発現させる方法は知られており、本発明のヌクレオチド配列を発現させるのに用いることができる。例えば、国際PCT公開第WO06073727号;および米国特許公開第2006/0200878A1号を参照されたい。
A.概観
本発明の一部の実施形態では、鞘翅目有害生物の防除に有用な少なくとも1つの核酸分子であって、鞘翅目有害生物におけるRNAiを介する遺伝子サイレンシングをもたらす核酸分子を鞘翅目有害生物へと施すことができる。具体的な実施形態では、iRNA分子(例えば、dsRNA、siRNA、miRNA、およびhpRNA)を、鞘翅目宿主へと施すことができる。一部の実施形態では、鞘翅目有害生物の防除に有用な核酸分子を、この核酸分子を鞘翅目有害生物と接触させることにより鞘翅目有害生物へと施すことができる。これらの実施形態およびさらなる実施形態では、鞘翅目有害生物の防除に有用な核酸分子を、鞘翅目有害生物への給餌基質、例えば、栄養組成物で提供することができる。これらの実施形態およびさらなる実施形態では、鞘翅目有害生物の防除に有用な核酸分子を、鞘翅目有害生物に摂取させる核酸分子を含む植物物質の摂取を介して施すことができる。特定の実施形態では、核酸分子が、例えば、組換え核酸配列を含むベクターによる植物細胞の形質転換および形質転換された植物細胞からの植物物質または全植物体の再生を介して植物物質へと導入された組換え核酸配列の発現を経て植物物質中に存在する。
実施形態では、本発明は、例えば、標的配列と特異的に相補的なヌクレオチド配列を含む、少なくとも1つの鎖を含むiRNA分子をデザインすることにより、鞘翅目有害生物(例えば、WCRまたはNCR)のゲノムおよび/またはcDNAライブラリーにおいて不可欠な天然のヌクレオチド配列(例えば、不可欠な遺伝子)を標的とするようにデザインしうるiRNA分子(例えば、dsRNA、siRNA、miRNA、およびhpRNA)を提供する。このようにデザインされたiRNA分子の配列は、標的配列と同一な場合もあり、iRNA分子とその標的配列との特異的なハイブリダイゼーションを阻止しないミスマッチを組み込む場合もある。
鞘翅目有害生物におけるRNAiを介する遺伝子阻害のためのiRNA分子の発現は、多くのin vitroフォーマットまたはin vivoフォーマットのうちの任意の1つにより実施することができる。次いで、例えば、iRNA分子を有害生物と接触させることによりiRNA分子を鞘翅目有害生物へと施すこともでき、有害生物にiRNA分子を摂取させることによりこれを施すこともでき、iRNA分子を他の形で内部化することによりこれを施すこともできる。本発明の一部の実施形態は、鞘翅目有害生物の形質転換された宿主植物体、形質転換された植物細胞、および形質転換された植物体の後代を包含する。形質転換された植物細胞および形質転換された植物体を操作して、例えば、異種プロモーターの制御下で、iRNA分子のうちの1または複数を発現させて、有害生物からの保護効果をもたらすことができる。したがって、摂食時の鞘翅目有害生物にトランスジェニック植物体またはトランスジェニック植物細胞を摂取させると、有害生物に、トランスジェニック植物体またはトランスジェニック細胞において発現したiRNA分子を摂取させることができる。本発明のヌクレオチド配列はまた、多種多様な原核生物および真核生物の微生物宿主に導入して、iRNA分子を生成させることもできる。「微生物」という用語は、細菌および真菌などの原核生物種および真核生物種を包含する。
(実施例)
試料の調製およびバイオアッセイ
MEGAscript(登録商標)RNAiキット(AMBION、Foster City、CA)を用いて、多数のdsRNA分子(Caf1−180;液胞ATPアーゼ(v−ATPアーゼ)サブユニットC領域1;v−ATPアーゼサブユニットC領域2;v−ATPアーゼサブユニットH領域1;v−ATPアーゼサブユニットH領域2;およびRho1を含めた)を合成および精製した。精製されたdsRNA分子はTE緩衝液中で調製し、全てのバイオアッセイは、この緩衝液からなる対照処置であって、WCRの死滅または成長阻害についてのバックグラウンドの基準として用いられる対照処置を含有した。バイオアッセイ緩衝液中のdsRNA分子の濃度は、NanoDrop(商標)8000分光光度計(Thermo Scientific、Wilmington、DE)を用いて測定した。
GI=[1−(TWIT/TNIT)/(TWIBC/TNIBC)]
[式中、TWITは、処置時における生存害虫の全体重であり;TNITは、処置時における害虫の総数であり;TWIBCは、バックグラウンドの基準(緩衝液対照)時における生存害虫の全体重であり;TNIBCは、バックグラウンドの基準(緩衝液対照)時における害虫の総数である]。
初齢WCR幼虫は、この成長段階におけるトランスジェニック昆虫抵抗法による防除であれば有利であるため、トランスクリプトーム解析のために選択した。
PCRを介して、各標的遺伝子のコード領域の一部を増幅するためのプライマーをデザインした。表1を参照されたい。必要な場合は、T7ファージのプロモーター配列(TTAATACGACTCACTATAGGGAGA(配列番号12))を、増幅されたセンス鎖またはアンチセンス鎖の5’端へと組み込んだ。表1を参照されたい。WCRからゲノムDNAを抽出し、PCR反応を介してゲノムDNAから天然の標的遺伝子配列の全部または一部を増幅するのにPCRプライマーを用いた。
PCRを介する鋳型の調製およびdsRNAの合成
in vitroにおいてdsRNAを生成させるための特異的な鋳型をもたらすのに用いた戦略を図1に示す。dsRNAの合成において用いることを意図する鋳型DNAは、表1のプライマー対およびWCRの初齢幼虫から単離された全RNAから調製した第1鎖のcDNAを(PCR鋳型として)用いるPCRを介して調製した。選択された各標的遺伝子領域について、2つの個別のPCR増幅を実施した。第1のPCR増幅では、T7プロモーター配列を、増幅されたセンス鎖の5’端に導入した。第2の反応では、T7プロモーター配列を、アンチセンス鎖の5’端に組み込んだ。次いで、標的遺伝子の各領域についてPCR増幅した2つの断片をほぼ等量で混合し、dsRNAを生成させるための転写鋳型として混合物を用いた(図1)。製造元(Foster City、CA)の指示書に従い、Ambion(登録商標)MEGAscript(登録商標)RNAiキットを用いて、二本鎖RNAを合成および精製した。特定のプライマーにより増幅されるdsRNA鋳型の配列は、配列番号86(Caf1−180);配列番号7および8(VatpaseC);配列番号10および11(VatpaseH);ならびに配列番号87(Rho1)であった。dsRNAの濃度は、NanoDrop(商標)8000分光光度計(Thermo Scientific、Wilmington、DE)を用いて測定した。
標準的なMultiSite Gateway(登録商標)(Invitrogen)クローニング法を用いて、WHISKERS(商標)を介してトウモロコシ細胞を形質転換するためのヘアピンRNA(hpRNA)発現ベクターを構築した。形質転換の後でトウモロコシ細胞をスクリーニング/選択するのに利用する2つのマーカー遺伝子である、黄色蛍光タンパク質遺伝子(YFP;Shaginら(2004)、Mol. Biol. Evol. 21(5): 841〜50)および除草剤耐性遺伝子(ホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼ(PAT);Wehrmannら(1996)、Nat. Biotechnol. 14(10): 1274〜8)のために、個別のエントリーベクターを構築した。これらの各々の発現は、コメアクチン1プロモーター(OsAct1;米国特許第5,641,876号)のコピーにより制御した。トウモロコシペルオキシダーゼ5遺伝子に由来する3’側非翻訳領域を含む断片(ZmPer5の3’UTR v2;米国特許第6,699,984号)を用いて、遺伝子の転写を終結させた。
WHISKERS(商標)デスティネーションベクター:標準的な一部位GATEWAY(登録商標)(INVITROGEN)クローニング法を用いて、WHISKERS(商標)を介してトウモロコシ細胞を形質転換するためのヘアピンRNA(hpRNA)発現ベクターを構築した。2つのマーカー遺伝子を、デスティネーションベクター(pDAB108916と称する)へと組み込み、形質転換の後でトウモロコシ細胞をスクリーニングおよび選択するのに利用した。黄色蛍光タンパク質遺伝子(YFP;Shaginら(2004)、Mol. Biol. Evol. 21(5): 841〜50)を目視によるスクリーニングに用い、除草剤耐性遺伝子(ホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼ(PAT);Wehrmannら(1996)、Nat. Biotechnol. 14(10): 1274〜8)を形質転換細胞の選択に用いた。2つのマーカー遺伝子の各々の発現は、トウモロコシ条斑ウイルスコートタンパク質遺伝子の5’UTRの一部(GENBANK受託番号:X01633)およびトウモロコシアルコールデヒドロゲナーゼ1遺伝子に由来するイントロン1(GENBANK受託番号:X04049)から編成されたキメラ5’UTR配列を含む、サトウキビ桿状バドナウイルス(SCBV)プロモーター(米国特許第6,489,462号)の個別のコピーにより制御した。トウモロコシリパーゼ遺伝子に由来する3’UTR(ZmLipの3’UTR;米国特許第7,179,902号)を含む断片およびジャガイモ(バレイショ(Solanum tuberosum))StPinIIの3’UTRに由来する3’UTRを含む断片(Anら(1989)、Plant Cell. 1: 115〜122)を用いて、それぞれYFP遺伝子およびPAT遺伝子の転写を終結させた。
実施例2において同定された標的遺伝子配列の一部は阻害するが全ては阻害しないようにデザインした合成dsRNAを食餌ベースのアッセイにおいてWCRへと投与したところ、死滅および成長阻害を引き起こした。このアッセイにおいて、Caf1−180、VatpaseC、VatpaseH、およびRho1は、スクリーニングされた他のdsRNAを上回る有効性の大幅な増大を呈示することが観察された。
349〜500bpのサイズにわたる液胞ATPアーゼサブユニットC(VatpaseC)によるdsRNAは、給餌アッセイにおいて、セイヨウトウモロコシ根虫の幼虫に対して活性であった(表3)。dsRNA分子の有効性の長さへの依存性を決定するため、Vatpase C dsRNAの長さを変化させて調べた。配列は、VatpaseCのコード配列(配列番号2)の174塩基対のセグメントのうち、5’末端の15、25、50、および100塩基、ならびに3’末端の100、50、25、および15塩基を表すように選択した。
標的配列と完全に相補的なわけではない(例えば、標的のmRNAとの同一性が95%にとどまる)dsRNA分子も、鞘翅目有害生物を防除するのに効果的である。非相補的な塩基をVatpaseCによるdsRNAのセンス鎖またはアンチセンス鎖に導入した結果として、dsRNAのセンス鎖とアンチセンス鎖との間のミスマッチがもたらされた(かつ、結果的に、dsRNAとin vivoにおける標的のmRNAとの間のミスマッチがもたらされた)。マッチが不完全なdsRNAの、セイヨウトウモロコシ根虫の幼虫に対する殺虫活性への効果を、食餌バイオアッセイにより測定した。
穂の滅菌および胚の単離:未成熟のトウモロコシ胚を、温室において成長させ、自家受粉または近親受粉させて穂を生成させたトウモロコシ(Zea mays)の近交系であるB104植物体から得た。穂は、受粉の約9〜12日後に採取した。実験日において、穂を次亜塩素酸ナトリウムの20%溶液(6.15%)中に浸漬することにより表面滅菌し、20〜30分間にわたり振とうした後、滅菌水中で3回にわたりすすいだ。滅菌の後、未成熟の接合胚(1.5〜2.4mm)を各穂から無菌的に切開し、液体の接種用培地(2.2gm/LのMS用塩(Frameら、2011、前出);1XのISU Modified MS Vitamins(Frameら(2011)、「Genetic Transformation Using Maize Immature Zygotic Embryos」、Plant Embryo Culture Methods and Protocols: Methods in Molecular Biology、T. A. ThorpeおよびE. C. Yeung(編)、SPRINGER SCIENCE AND BUSINESS MEDIA, LLC.、327〜341ページ);68.4gm/Lのスクロース;36gm/Lのグルコース;115mg/LのL−プロリン;100mg/Lのミオイノシトール;および200μMのアセトシリンゴン(DMSO中で調製した);pH5.4)を含有するマイクロ遠心分離管へと無作為的に分配した。所与の実験セットについて、プールされた穂に由来する胚を、各回の形質転換に用いた。
植物ゲノムへと安定的に組み込んだキメラ遺伝子の発現を介して、1または複数の殺虫性dsRNA分子(例えば、配列番号1〜4のうちの1つを含む遺伝子を標的とするdsRNA分子を含めた少なくとも1つのdsRNA分子)を生成させる植物体を生成させた。植物を形質転換するためのDNA分子は、実施例4において記載される通りに調製し、WHISKERSを介する形質転換(米国特許第5,302,523号および同第5,464,765号;米国特許公開第2008/0182332号;ならびにPetolinoおよびArnold(2009)、M. Paul Scott(編)、Methods in Molecular Biology: Transgenic Maize、526巻、Humana Press、NY、59〜67ページにおいて本質的に記載されている)により、Hi−IIの懸濁細胞培養物中のトウモロコシ細胞へと送達した。
プラスミドであるpDAB109828およびpDAB109838による形質転換(実施例4)を介して、VatpaseC v3ヘアピンdsRNAまたはVatpaseC v4ヘアピンdsRNAを発現させるHiIIトウモロコシのトランスジェニック植物体をもたらすために、実施例9で記載した形質転換法を用いた。実施例9で記載したスクリーニング法に従い、分子スクリーニングを実施し、実施例12で記載されるバイオアッセイ法に従い、セイヨウトウモロコシ根虫バイオアッセイを実施した。
プラスミドであるpDAB109829による形質転換(実施例4)を介して、VatpaseH v1ヘアピンdsRNAを発現させるHiIIトウモロコシのトランスジェニック植物体をもたらすために、実施例9で記載した形質転換法を用いた。実施例9で記載したスクリーニング法に従い、分子スクリーニングを実施し、実施例12で記載されるバイオアッセイ法に従い、セイヨウトウモロコシ根虫バイオアッセイを実施した。
セイヨウトウモロコシ根虫(WCR:Diabrotica virgifera virgifera LeConte)の卵は、土壌中のものをCrop Characteristics(Farmington、MN)から受領した。卵は、28℃で10〜11日間にわたりインキュベートした。卵から土壌を洗い落とし、0.15%の寒天溶液に入れ、濃度を、0.25mLのアリコート1つ当たりの卵約75〜100個へと調整した。孵化プレートを卵懸濁液のアリコートを伴うペトリディッシュ内で調製して、孵化速度をモニタリングした。
実施例8および9で記載した通りに、10〜20体のT0のトランスジェニックトウモロコシ(Zea mays)植物体を生成させる。さらに10〜20体の、配列番号1〜4に示されるRNAi構築物のためのヘアピンdsRNAを発現させる独立のT1トウモロコシ(Zea mays)系列を、コーンルートワーム攻撃のために得る。これらは、RT−PCRを介して確認する。場合によって、独立のT1系列から選択される全RNAを、RNAi構築物の各々におけるヘアピンカセットのpdkイントロンに結合するようにデザインしたプライマーを伴うRT−PCRに用いる。加えて、場合によって、RNAi構築物における各標的遺伝子に特異的なプライマーは、in plantaにおけるsiRNAの生成に要請されるあらかじめプロセシングされたmRNAを増幅し、その生成を確認するのに用いる。各標的遺伝子に所望されるバンドの増幅により、各トランスジェニックトウモロコシ(Zea mays)におけるヘアピンRNAの発現が確認される。その後、場合によって、標的遺伝子のdsRNAヘアピンのsiRNAへのプロセシングは、RNAブロットハイブリダイゼーションを用いて、独立のトランスジェニック系列において確認する。
鞘翅目有害生物のヘアピンdsRNAを創出するために選択された標的遺伝子または標的配列は、任意の知られた植物遺伝子または植物配列との類似性を有さない。よって、これらの遺伝子または配列を標的とする構築物による(植物体全体にわたる)RNAiの生成または活性化がトランスジェニック植物体に対して有害効果を及ぼすことは予測されない。しかし、トランスジェニック系列の発達および形態的特徴は、野生型の植物体のほか、空のヘアピンベクターで形質転換されたトランスジェニック系列の植物体と比較される。植物体の根、シュート、茎葉、および生殖特徴が比較される。トランスジェニック植物体および野生型植物体の根の長さおよび成長パターンには観察可能な差違が見られない。草高、葉の枚数およびサイズ、開花時期、花のサイズ、ならびに外観などの植物体のシュート特徴は同様である。一般に、in vitroおよび温室内の土壌中で培養した場合、トランスジェニック系列と標的iRNA分子の発現を伴わない系列とでは、観察可能な形態的差違が見られない。
鞘翅目有害生物以外の生物を標的とするiRNA分子へと転写されるそのゲノムにおける異種コード配列を含むトランスジェニックトウモロコシ(Zea mays)の植物体を、アグロバクテリウム(Agrobacterium)属またはWHISKERS(商標)を介する形質転換を介して形質転換して、1または複数の殺虫性dsRNA分子(例えば、配列番号1〜4のうちの1つを含む遺伝子を標的とするdsRNA分子を含めた少なくとも1つのdsRNA分子)を生成させる。本質的に実施例4で記載される通りに調製される植物体の形質転換用のDNA分子の調製物を、鞘翅目有害生物以外の生物を標的とするiRNA分子へと転写されるそのゲノムにおける異種コード配列を含むトランスジェニックトウモロコシ(Zea mays)の植物体から得られるHi−IIトウモロコシの懸濁細胞培養物へと送達する。
in plantaにおいて標的遺伝子に対応するdsRNA、siRNA、またはmiRNAを送達し、その後、摂食を介してこれを鞘翅目有害生物に取り込ませる結果として、RNAを介する遺伝子サイレンシングによる標的遺伝子の下方制御がもたらされる。標的遺伝子の機能が重要であれば、鞘翅目有害生物の成長、発育、および生殖が影響を受け、WCR、NCR、SCR、MCR、D.バルテアータ(D. balteata LeConte)、D.u.テネラ(D. u. tenella)、およびジュウイチホシウリハムシ(D. u. undecimpunctata Mannerheim)のうちの少なくとも1つの場合であれば、寄生、摂食、発育、および/もしくは生殖の成功に失敗することがもたらされるか、または発育の1もしくは複数の段階における鞘翅目有害生物の死滅がもたらされる。次いで、標的遺伝子の選択およびRNAiの成功裏の適用を用いて、鞘翅目有害生物を防除する。各RNAi構築物について10〜20体ずつの独立のT1トウモロコシ(Z. mays)トランスジェニック系列を、5〜10連でコーンルートワーム種に攻撃させる。攻撃は、各コーンルートワーム種について2連ずつとする。RNAi系列のT1種子を発芽させ、抵抗性の植物を、発芽後10〜15日間にわたり改変Knop培地へと移す。野生型対照トウモロコシ(Z. mays)の種子も同時に発芽させ、コーンルートワーム感染に用いる。
本発明は、以下の態様を含む。
[1]
配列番号2;配列番号2の相補体;配列番号5;配列番号5の相補体;配列番号6;配列番号6の相補体;配列番号7;配列番号7の相補体;配列番号8;配列番号8の相補体;配列番号112;配列番号112の相補体;配列番号113;配列番号113の相補体;配列番号5および6のうちのいずれかの全部または一部を含む、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;配列番号5および6のうちのいずれかの全部または一部を含む、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体;配列番号2、5〜8、112、および/または113のうちのいずれかを含む、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列;配列番号2、5〜8、112、および/または113のうちのいずれかを含む、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の相補体;配列番号2、5〜8、112、および/または113のうちのいずれかを含む、天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列;配列番号2、5〜8、112、および/または113のうちのいずれかを含む、天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の相補体;配列番号5および6のうちのいずれかの全部または一部を含む、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;配列番号5および6のうちのいずれかの全部または一部を含む、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体;配列番号5および6のうちのいずれかの全部または一部を含む、天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;ならびに配列番号5および6のうちのいずれかの全部または一部を含む、天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体からなる群から選択される少なくとも1つのヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド。
[2]
配列番号1の全部または一部;配列番号1の相補体の全部または一部;配列番号3;配列番号3の相補体;配列番号4;配列番号4の相補体;配列番号1、3、または4のうちのいずれかの少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;配列番号1、3、または4のうちのいずれかの少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体;配列番号1、3、または4のうちのいずれかを含む、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列;配列番号1、3、または4のうちのいずれかを含む、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の相補体;配列番号1、3、または4のうちのいずれかを含む、天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列;配列番号1、3、または4のうちのいずれかを含む、天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の相補体;配列番号1、3、または4のうちのいずれかを含む、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;配列番号1、3、または4のうちのいずれかを含む、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体;配列番号1、3、または4のうちのいずれかを含む、天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;および配列番号1、3、または4のうちのいずれかを含む、天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体からなる群から選択される少なくとも1つのヌクレオチド配列をさらに含む、[1]に記載の単離ポリヌクレオチド。
[3]
少なくとも1つのヌクレオチド配列が、異種プロモーターに作動可能に連結された、[1]に記載の単離ポリヌクレオチド。
[4]
配列番号50、配列番号93、配列番号94、配列番号98、配列番号99、配列番号100、配列番号101、配列番号102、配列番号103、配列番号111、配列番号112、配列番号113、配列番号127、配列番号128、配列番号129、配列番号130、および配列番号131からなる群から選択される、[1]に記載の単離ポリヌクレオチド。
[5]
少なくとも約50ヌクレオチドの長さである、[1]に記載の単離ポリヌクレオチド。
[6]
少なくとも約100ヌクレオチドの長さである、[1]に記載の単離ポリヌクレオチド。
[7]
少なくとも約100ヌクレオチドの長さである、[6]に記載の単離ポリヌクレオチド。
[8]
[1]に記載の単離ポリヌクレオチドを含む、植物体の形質転換ベクター。
[9]
ディアブロティカ(Diabrotica)属生物が、セイヨウトウモロコシ根虫(D. v. virgifera LeConte);ノーザンコーンルートワーム(D. barberi Smith and Lawrence);サザンコーンルートワーム(D. u. howardi);メキシカンコーンルートワーム(D. v. zeae);D.バルテアータ(D. balteata LeConte);D.u.テネラ(D. u. tenella);およびジュウイチホシウリハムシ(D. u. undecimpunctata Mannerheim)からなる群から選択される、[1]に記載の単離ポリヌクレオチド。
[10]
リボ核酸(RNA)分子である、[1]に記載の単離ポリヌクレオチド。
[11]
デオキシリボ核酸(DNA)分子である、[1]に記載の単離ポリヌクレオチド。
[12]
配列番号136を含む、[11]に記載の単離ポリヌクレオチド。
[13]
[11]に記載の単離ポリヌクレオチドの発現から生成させる二本鎖リボ核酸分子。
[14]
[12に記載の単離ポリヌクレオチドの発現から生成させる二本鎖リボ核酸分子。
[15]
ポリヌクレオチド配列を鞘翅目有害生物と接触させることにより、[1]に記載の単離ポリヌクレオチド配列と特異的に相補的な内因性のヌクレオチド配列の発現を阻害する、[13に記載の二本鎖リボ核酸分子。
[16]
前記リボヌクレオチド分子を鞘翅目有害生物と接触させることにより、鞘翅目有害生物を死滅させるか、またはこれらの成長、生殖、および/もしくは摂食を阻害する、[15]に記載の二本鎖リボ核酸分子。
[17]
第1のポリヌクレオチド配列、第2のポリヌクレオチド配列、および第3のポリヌクレオチド配列を含み、第1のポリヌクレオチド配列が、[1]に記載のポリヌクレオチドを含み、第3のポリヌクレオチド配列が、第2のポリヌクレオチド配列を介して第1のポリヌクレオチド配列に連結され、第3のポリヌクレオチド配列が、実質的に第1のポリヌクレオチド配列の逆相補体であり、リボ核酸へと転写されるとき、第1のポリヌクレオチド配列と第3のポリヌクレオチド配列とがハイブリダイズして二本鎖リボヌクレオチド分子を形成するようになる、[13]に記載の二本鎖リボ核酸分子。
[18]
第2のポリヌクレオチド配列が、配列番号136を含む、[17]に記載の二本鎖リボ核酸分子。
[19]
約50〜約300ヌクレオチドの間の長さの二本鎖リボ核酸分子および一本鎖リボ核酸分子からなる群から選択される、[10]に記載の単離ポリヌクレオチド。
[20]
約50〜約300ヌクレオチドの間の長さの二本鎖リボ核酸分子および一本鎖リボ核酸分子からなる群から選択される、[11]に記載の単離ポリヌクレオチドの発現から生成させるリボ核酸分子。
[21]
少なくとも1つのヌクレオチド配列が、植物細胞において機能的な異種プロモーターに作動可能に連結された、[1]に記載の単離ポリヌクレオチドを含む植物体の形質転換ベクター。
[22]
[1]に記載の単離ポリヌクレオチドで形質転換された細胞。
[23]
原核細胞である、[22]に記載の細胞。
[24]
真核細胞である、[22]に記載の細胞。
[25]
植物細胞である、[24]に記載の細胞。
[26]
[1]に記載の単離ポリヌクレオチドで形質転換された植物体。
[27]
単離ポリヌクレオチドを含む、[26]に記載の植物体の種子。
[28]
少なくとも1つのヌクレオチド配列を、二本鎖リボ核酸分子としてその中で発現させる、[26]に記載の植物体。
[29]
トウモロコシ(Zea mays)細胞である、[25]に記載の細胞。
[30]
トウモロコシ(Zea mays)である、[26]に記載の植物体。
[31]
少なくとも1つのヌクレオチド配列を、植物体においてリボ核酸分子として発現させ、鞘翅目有害生物が植物体の一部を摂取すると、リボ核酸分子が、少なくとも1つのヌクレオチド配列と特異的に相補的な内因性の鞘翅目有害生物のヌクレオチド配列の発現を阻害する、[26]に記載の植物体。
[32]
配列番号2;配列番号2の相補体;配列番号5;配列番号5の相補体;配列番号6;配列番号6の相補体;配列番号7;配列番号7の相補体;配列番号8;配列番号8の相補体;配列番号112;配列番号112の相補体;配列番号113;配列番号113の相補体;配列番号5および6のうちのいずれかの全部または一部を含む、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;配列番号5および6のうちのいずれかの全部または一部を含む、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体;配列番号2、5〜8、112、および/または113のうちのいずれかを含む、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列;配列番号2、5〜8、112、および/または113のうちのいずれかを含む、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の相補体;配列番号2、5〜8、112、および/または113のうちのいずれかを含む、天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列;配列番号2、5〜8、112、および/または113のうちのいずれかを含む、天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の相補体;配列番号5および6のうちのいずれかの全部または一部を含む、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;配列番号5および6のうちのいずれかの全部または一部を含む、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体;配列番号5および6のうちのいずれかの全部または一部を含む、天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;ならびに配列番号5および6のうちのいずれかの全部または一部を含む、天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体からなる群から選択される複数のヌクレオチド配列を含む、[1]に記載の単離ポリヌクレオチド。
[33]
ヌクレオチド配列の各々が、植物細胞において機能的な異種プロモーターに作動可能に連結された、[32]に記載の単離ポリヌクレオチドを含む植物体の形質転換ベクター。
[34]
[32]に記載の単離ポリヌクレオチドで形質転換された細胞。
[35]
[32]に記載の単離ポリヌクレオチドで形質転換された植物体。
[36]
複数のヌクレオチド配列を、二本鎖リボ核酸分子として植物細胞内で発現させる、[35]に記載の植物体。
[37]
トウモロコシ(Zea mays)細胞である、[34]に記載の細胞。
[38]
トウモロコシ(Zea mays)である、[36]に記載の植物体。
[39]
鞘翅目有害生物がディアブロティカ(Diabrotica)属種である、[31]に記載の植物体。
[40]
鞘翅目有害生物が、セイヨウトウモロコシ根虫(D. virgifera virgifera LeConte)、ノーザンコーンルートワーム(D. barberi Smith and Lawrence)、メキシカンコーンルートワーム(D. virgifera zeae Krysan and Smith)、サザンコーンルートワーム(D. undecimpunctata howardi Barber)、D.バルテアータ(D. balteata LeConte)、D.ウンデキンプンクタタテネラ(D. undecimpunctata tenella)、およびジュウイチホシウリハムシ(D. undecimpunctata undecimpunctata Mannerheim)からなる群から選択される、[39]に記載の植物体。
[41]
[30]に記載の植物体から生成させる作物生成物であって、検出可能量の、[1]に記載の単離ポリヌクレオチドを含む作物生成物。
[42]
鞘翅目有害生物の集団を防除する方法であって、鞘翅目有害生物と接触させると鞘翅目有害生物における生物学的機能を阻害するように機能する二本鎖リボ核酸分子を含む作用物質を施すステップを含み、作用物質が、配列番号2;配列番号2の相補体;配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体;配列番号2を含むディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列;配列番号2を含むディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の相補体;配列番号2を含む天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列;配列番号2を含む天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の相補体;配列番号2を含むディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;配列番号2を含むディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体;配列番号2を含む天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;および配列番号2を含む天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む方法。
[43]
鞘翅目有害生物の集団を防除する方法であって、鞘翅目有害生物と接触させると、鞘翅目有害生物における生物学的機能を阻害するように機能する、第1のポリヌクレオチド配列および第2のポリヌクレオチド配列を含む作用物質を施すステップを含み、第1のポリヌクレオチド配列が、配列番号2の約19〜約30の連続ヌクレオチドに対する約90%〜約100%の配列同一性を呈示する領域を含み、第1のポリヌクレオチド配列が、第2のポリヌクレオチド配列と特異的にハイブリダイズする方法。
[44]
第1のポリヌクレオチド配列が、配列番号1を含むディアブロティカ(Diabrotica)属遺伝子;液胞ATPアーゼのHサブユニット;およびRho1低分子GTP結合タンパク質からなる群から選択される鞘翅目有害生物遺伝子の約19〜約30の連続ヌクレオチドに対する約90%〜約100%の配列同一性を呈示する領域をさらに含む、[39]に記載の方法。
[45]
鞘翅目有害生物の集団を防除する方法であって、配列番号2;配列番号2の相補体;配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体;配列番号2を含むディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列;配列番号2を含むディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の相補体;配列番号2を含む天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列;配列番号2を含む天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の相補体;配列番号2を含むディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;配列番号2を含むディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体;配列番号2を含む天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;および配列番号2を含む天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体からなる群から選択される少なくとも1つのヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む形質転換された植物細胞を、鞘翅目有害生物の宿主植物体に施すステップを含み、ポリヌクレオチドを発現させて、集団に属する鞘翅目有害生物と接触させると鞘翅目有害生物における標的配列の発現を阻害するように機能し、鞘翅目有害生物または鞘翅目有害生物の集団の成長の、形質転換された植物細胞を欠く同じ種の宿主植物体における成長と比べた減殺を結果としてもたらすリボ核酸分子を生成させる方法。
[46]
リボ核酸分子が二本鎖リボ核酸分子である、[45]に記載の方法。
[47]
鞘翅目有害生物の集団が、形質転換された植物細胞を欠く同じ種の宿主植物体に発生する鞘翅目有害生物の集団と比べて低減される、[45]に記載の方法。
[48]
植物体における植物鞘翅目有害生物の発生を防除する方法であって、鞘翅目有害生物の食餌中に、配列番号2;配列番号2の相補体;配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体;配列番号2を含むディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列;配列番号2を含むディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の相補体;配列番号2を含む天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列;配列番号2を含む天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の相補体;配列番号2を含むディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;配列番号2を含むディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体;配列番号2を含む天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;および配列番号2を含む天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体からなる群から選択される少なくとも1つのヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを施すステップを含む方法。
[49]
食餌が、ポリヌクレオチドを発現させるように形質転換された植物細胞を含む、[48]に記載の方法。
[50]
穀物トウモロコシの収率を改善する方法であって、配列番号2;配列番号2の相補体;配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体;配列番号2を含むディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列;配列番号2を含むディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の相補体;配列番号2を含む天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列;配列番号2を含む天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の相補体;配列番号2を含むディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;配列番号2を含むディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体;配列番号2を含む天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;および配列番号2を含む天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体からなる群から選択される少なくとも1つのヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドをトウモロコシ植物体へと導入して、トランスジェニックのトウモロコシ植物体を生成させるステップと;トウモロコシ植物体を栽培して、少なくとも1つのヌクレオチド配列を発現させるステップとを含み、少なくとも1つのヌクレオチド配列の発現により、鞘翅目有害生物の感染または成長および鞘翅目有害生物の感染に起因する収率の損失を阻害する方法。
[51]
少なくとも1つのヌクレオチド配列の発現により、トウモロコシ植物体の一部に接触した鞘翅目有害生物における、少なくとも第1の標的遺伝子を抑制するRNA分子を生成させる、[50]に記載の方法。
[52]
トランスジェニック植物細胞を生成させる方法であって、植物細胞を、プロモーターおよび転写終結配列に作動的に連結されたポリヌクレオチドであって、配列番号2;配列番号2の相補体;配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体;配列番号2を含むディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列;配列番号2を含むディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の相補体;配列番号2を含む天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列;配列番号2を含む天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の相補体;配列番号2を含むディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;配列番号2を含むディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体;配列番号2を含む天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;および配列番号2を含む天然のRNA分子へと転写される、ディアブロティカ(Diabrotica)属生物の天然の非コード配列の、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体からなる群から選択される少なくとも1つのヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクターで形質転換するステップと、形質転換された植物細胞を、複数の形質転換された植物細胞を含む植物細胞培養物を生じさせるのに十分な条件下で培養するステップと;少なくとも1つのヌクレオチド配列をそれらのゲノムへと組み込んだ形質転換植物細胞を選択するステップと;形質転換された植物細胞を、少なくとも1つのヌクレオチド配列によりコードされるリボ核酸分子の発現についてスクリーニングするステップと;dsRNAを発現させる植物細胞を選択するステップとを含む方法。
[53]
鞘翅目有害生物抵抗性のトランスジェニック植物体を生成させる方法であって、 [52]に記載の方法を介して生成させたトランスジェニック植物細胞をもたらすステップと; トランスジェニック植物体をトランスジェニック植物細胞から再生させるステップとを含み、少なくとも1つのヌクレオチド配列によりコードされるリボ核酸分子の発現が、形質転換された植物体に接触する鞘翅目有害生物における標的遺伝子の発現をモジュレートするのに十分な方法。
[54]
配列番号2;配列番号5;配列番号6;配列番号7;配列番号8;配列番号112;配列番号113;および配列番号5および6のうちのいずれかの全部または一部を含み、ディアブロティカ(Diabrotica)属遺伝子の少なくとも19の連続ヌクレオチドを有する断片からなる群から選択される基準ポリヌクレオチドと実質的に相同な少なくとも1つのポリヌクレオチドを含む単離核酸。
[55]
ポリヌクレオチドが、参照ポリヌクレオチドと少なくとも80%同一な、[54]に記載の単離核酸。
[56]
ポリヌクレオチドが、参照ポリヌクレオチドと少なくとも90%同一な、[54]に記載の単離核酸。
[57]
ポリヌクレオチドが、参照ポリヌクレオチドと少なくとも95%同一な、[54]に記載の単離核酸。
[58]
配列番号2が、中程度の厳密性の条件下で少なくとも1つのポリヌクレオチドとハイブリダイズする、[54]に記載の単離核酸。
[59]
配列番号2が、高度な厳密性の条件下で少なくとも1つのポリヌクレオチドとハイブリダイズする、[54]に記載の単離核酸。
[60]
[54]に記載の単離核酸を含む、植物細胞、植物組織、植物部分、または植物体。
Claims (45)
- 異種プロモーターに作動可能に連結された少なくとも一つのポリヌクレオチドを含む単離核酸分子であって、
前記ポリヌクレオチドは少なくとも19の連続ヌクレオチドの長さであり、
前記ポリヌクレオチドは、配列番号2;配列番号2の相補体;配列番号5;配列番号5の相補体;配列番号6;配列番号6の相補体;配列番号7;配列番号7の相補体;配列番号112;配列番号112の相補体;配列番号113;配列番号113の相補体;配列番号5および6のうちのいずれかの全部または一部を含む配列番号2の断片;ならびに配列番号5および6のうちのいずれかの全部または一部を含む配列番号2の断片の相補体からなる群から選択され、
前記核酸分子が、鞘翅目有害生物に接触すると内因性の鞘翅目有害生物の遺伝子の発現を阻害するリボ核酸(RNA)分子、をコードする、単離核酸分子。 - 配列番号1の全部または一部;配列番号1の相補体の全部または一部;配列番号3;配列番号3の相補体;配列番号4;配列番号4の相補体;配列番号1、3、または4のうちのいずれかの少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;および配列番号1、3、または4のうちのいずれかの少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体からなる群から選択される少なくとも1つのポリヌクレオチドをさらに含む、請求項1に記載の単離核酸分子。
- 配列番号50、配列番号93、配列番号94、配列番号98、配列番号99、配列番号100、配列番号101、配列番号102、配列番号103、配列番号111、配列番号112、配列番号127、配列番号128、配列番号129、配列番号130、および配列番号131からなる群から選択されるポリヌクレオチドを含む、請求項1に記載の単離核酸分子。
- 前記ポリヌクレオチドが少なくとも50ヌクレオチドの長さである、請求項1に記載の単離核酸分子。
- 前記ポリヌクレオチドが少なくとも100ヌクレオチドの長さである、請求項1に記載の単離核酸分子。
- 前記異種プロモーターが植物細胞において機能的であり、前記核酸分子が植物体の形質転換ベクターである、請求項1に記載の単離核酸分子。
- 請求項1に記載の核酸分子中に含まれるポリヌクレオチドからコードされたポリリボヌクレオチドを含む、リボ核酸(RNA)分子。
- 配列番号136を含む、請求項1に記載の単離核酸分子。
- 請求項1に記載の単離核酸分子中に含まれるポリヌクレオチドからコードされたポリリボヌクレオチドを含む、二本鎖リボ核酸(dsRNA)分子。
- ポリヌクレオチドを鞘翅目有害生物と接触させることにより、前記単離ポリヌクレオチドと特異的に相補的な内因性の鞘翅目有害生物の細胞の発現を阻害する、請求項9に記載のdsRNA分子。
- 前記dsRNA分子を鞘翅目有害生物と接触させることにより、鞘翅目有害生物を死滅させるか、またはこれらの成長、生殖、および/もしくは摂食を阻害する、請求項10に記載のdsRNA分子。
- 第1のポリリボヌクレオチド、第2のポリリボヌクレオチド、および第3のポリリボヌクレオチドを含み、第1のポリリボヌクレオチドが、請求項1に記載のポリヌクレオチドの転写物を含み、第3のポリリボヌクレオチドが、第2のポリリボヌクレオチドを介して第1のポリリボヌクレオチドに連結され、第3のポリリボヌクレオチドが、転写されてdsRNA分子を形成するとき、第1のポリリボヌクレオチドと第3のポリリボヌクレオチドとがハイブリダイズするのに十分な、第1のポリリボヌクレオチドに対する逆相補性を有する、請求項9に記載のdsRNA分子。
- 第2のポリリボヌクレオチドが、配列番号136の転写物を含む、請求項12に記載のdsRNA分子。
- 50〜300ヌクレオチドの間の長さの二本鎖リボ核酸分子および一本鎖リボ核酸分子からなる群から選択される、請求項7に記載のRNA分子。
- 前記異種プロモーターが植物細胞において機能的である、請求項1に記載の単離核酸分子。
- 請求項1に記載の単離核酸分子を含む細胞。
- 原核細胞である、請求項16に記載の細胞。
- 真核細胞である、請求項16に記載の細胞。
- 植物細胞である、請求項18に記載の細胞。
- 請求項1に記載の単離核酸分子を含む植物体。
- 単離ポリヌクレオチドを含む、請求項20に記載の植物体の種子。
- 前記ポリヌクレオチドを、二本鎖リボ核酸(dsRNA)分子としてその中で発現させる、請求項20に記載の植物体。
- トウモロコシ(Zea mays)細胞である、請求項19に記載の細胞。
- トウモロコシ(Zea mays)である、請求項20に記載の植物体。
- ポリヌクレオチドを植物体においてリボ核酸(RNA)分子として発現させ、鞘翅目有害生物が植物体の一部を摂取すると、該リボ核酸分子が、前記ポリヌクレオチドと特異的に相補的な内因性の鞘翅目有害生物の遺伝子の発現を阻害する、請求項20に記載の植物体。
- 配列番号2;配列番号2の相補体;配列番号5;配列番号5の相補体;配列番号6;配列番号6の相補体;配列番号7;配列番号7の相補体;配列番号8;配列番号8の相補体;配列番号112;配列番号112の相補体;配列番号113;配列番号113の相補体;配列番号5および6のうちのいずれかの全部または一部を含む、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;ならびに配列番号5および6のうちのいずれかの全部または一部を含む、少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体からなる群から選択されるポリヌクレオチドをさらに含む、請求項1に記載の単離核酸分子。
- 前記核酸分子が、植物体の形質転換ベクターであり、かつ、上記の更なるポリヌクレオチドが植物細胞において機能的な異種プロモーターに作動可能に連結された、請求項26に記載の単離核酸分子。
- 請求項26に記載の単離核酸分子を含む細胞。
- 請求項26に記載の単離核酸分子を含む植物体。
- 前記更なるポリヌクレオチドを、二本鎖リボ核酸(dsRNA)分子として植物細胞内で発現させる、請求項29に記載の植物体。
- トウモロコシ(Zea mays)細胞である、請求項28に記載の細胞。
- トウモロコシ(Zea mays)である、請求項30に記載の植物体。
- 鞘翅目有害生物がディアブロティカ(Diabrotica)属種である、請求項25に記載の植物体。
- 鞘翅目有害生物が、セイヨウトウモロコシ根虫(D. virgifera virgifera LeConte)、ノーザンコーンルートワーム(D. barberi Smith and Lawrence)、メキシカンコーンルートワーム(D. virgifera zeae Krysan and Smith)、サザンコーンルートワーム(D. undecimpunctata howardi Barber)、D.バルテアータ(D. balteata LeConte)、D.ウンデキンプンクタタテネラ(D. undecimpunctata tenella)、およびジュウイチホシウリハムシ(D. undecimpunctata undecimpunctata Mannerheim)からなる群から選択される、請求項33に記載の植物体。
- 請求項20に記載の植物体から生成させる作物生成物であって、検出可能量の、前記単離核酸分子に含まれるポリヌクレオチドを含む作物生成物。
- 鞘翅目有害生物の集団を防除する方法であって、鞘翅目有害生物と接触させると鞘翅目有害生物における生物学的機能を阻害するように機能する二本鎖リボ核酸(dsRNA)分子を含む作用物質を施すステップを含み、前記dsRNAが、配列番号2;配列番号2の相補体;配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;ならびに配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体からなる群から選択されるポリヌクレオチドからコードされるポリリボヌクレオチドを含む方法。
- 鞘翅目有害生物の集団を防除する方法であって、配列番号2;配列番号2の相補体;配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;ならびに配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体からなる群から選択される少なくとも1つのポリヌクレオチドを含むトランスジェニック植物細胞を、鞘翅目有害生物の宿主植物体に施すステップを含み、
ポリヌクレオチドを発現させて、集団に属する鞘翅目有害生物と接触させると鞘翅目有害生物における標的配列の発現を阻害するように機能し、鞘翅目有害生物または鞘翅目有害生物の集団の成長の、形質転換された植物細胞を欠く同じ種の宿主植物体における成長と比べた減殺を結果としてもたらすリボ核酸(RNA)分子を生成させる方法。 - リボ核酸(RNA)分子が二本鎖リボ核酸(dsRNA)分子である、請求項37に記載の方法。
- 鞘翅目有害生物の集団が、トランスジェニック植物細胞を欠く同じ種の宿主植物体に発生する鞘翅目有害生物の集団と比べて低減される、請求項37に記載の方法。
- 鞘翅目有害生物を死滅させるかまたはその成長を低減させるための方法であって、鞘翅目有害生物の食餌中に、配列番号2;配列番号2の相補体;配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;ならびに配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体からなる群から選択される少なくとも1つのポリヌクレオチドからコードされたポリリボヌクレオチドを施すステップを含む方法。
- 食餌が、ポリリボヌクレオチドを発現させる植物細胞を含む、請求項40に記載の方法。
- 鞘翅目有害生物に群棲された穀物トウモロコシの収率を改善する方法であって、
穀物トウモロコシにおいてトランスジェニックトウモロコシ植物体を栽培し、
ここで、前記トランスジェニックトウモロコシ植物体を、植物において作動的な異種プロモーターに作動可能に連結されたポリヌクレオチドを含み、前記ポリヌクレオチドが、配列番号2;配列番号2の相補体;配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;ならびに配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体からなる群から選択して、前記ポリヌクレオチドを発現させ、
ポリヌクレオチドの発現により、前記トウモロコシ植物に群棲している鞘翅目有害生物の標的遺伝子を抑制するRNA分子を生成する、方法。 - 前記RNA分子が鞘翅目有害生物の群棲または成長および鞘翅目有害生物の群棲に起因する収率の減少を阻害する、請求項43に記載の方法。
- トランスジェニック植物細胞を生成させる方法であって、
植物細胞を、プロモーターおよび転写終結配列に作動的に連結されたポリヌクレオチドを含むベクターで形質転換するステップであって、前記ポリヌクレオチドが配列番号2;配列番号2の相補体;配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;ならびに配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体からなる群から選択されるステップと、
形質転換された植物細胞を、複数の形質転換された植物細胞を含む植物細胞培養物を生じさせるのに十分な条件下で培養するステップと;
前記ポリヌクレオチドをそれらのゲノムへと組み込んだ形質転換植物細胞を選択するステップと;
形質転換された植物細胞を、少なくとも1つのヌクレオチド配列によりコードされるリボ核酸(RNA)分子の発現についてスクリーニングするステップと;
RNAを発現させる植物細胞を選択するステップとを含む方法。 - 鞘翅目有害生物抵抗性のトランスジェニック植物体を生成させる方法であって、
トランスジェニック植物体を、植物において作動的な異種プロモーターに作動可能に連結されたポリヌクレオチドを含むトランスジェニック植物細胞から再生させるステップを含み、
前記ポリヌクレオチドが、配列番号2;配列番号2の相補体;配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片;ならびに配列番号2の少なくとも19の連続ヌクレオチドによる断片の相補体からなる群から選択され、
前記ポリヌクレオチドの発現により、トランスジェニック植物体に接触する鞘翅目有害生物における標的遺伝子の発現を阻害するリボ核酸(RNA)を生成する、方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201061428608P | 2010-12-30 | 2010-12-30 | |
US61/428,608 | 2010-12-30 | ||
PCT/US2011/068144 WO2012092573A2 (en) | 2010-12-30 | 2011-12-30 | Nucleic acid molecules that target the vacuolar atpase c subunit and confer resistance to coleopteran pests |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014504863A JP2014504863A (ja) | 2014-02-27 |
JP6232290B2 true JP6232290B2 (ja) | 2017-11-15 |
Family
ID=46382058
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013547700A Expired - Fee Related JP6232290B2 (ja) | 2010-12-30 | 2011-12-30 | 液胞atpアーゼのcサブユニットを標的とし、鞘翅目有害生物に対する抵抗性を付与する核酸分子 |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9050363B2 (ja) |
EP (2) | EP3339440A1 (ja) |
JP (1) | JP6232290B2 (ja) |
KR (1) | KR20130130804A (ja) |
CN (3) | CN105779450A (ja) |
AP (1) | AP2013007020A0 (ja) |
AR (1) | AR084775A1 (ja) |
AU (2) | AU2011351946B2 (ja) |
BR (1) | BRPI1107332A2 (ja) |
CA (1) | CA2822959A1 (ja) |
CL (1) | CL2013001933A1 (ja) |
CO (1) | CO6731142A2 (ja) |
MX (2) | MX353321B (ja) |
NZ (2) | NZ715007A (ja) |
RU (1) | RU2644669C2 (ja) |
UY (1) | UY33854A (ja) |
WO (1) | WO2012092573A2 (ja) |
ZA (1) | ZA201304742B (ja) |
Families Citing this family (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
BRPI1107329A2 (pt) * | 2010-12-30 | 2019-11-19 | Dow Agrosciences Llc | moléculas de ácido nucléico que direcionadas à subunidade h de atpase vacuolar que conferem resistência a pragas de coleópteros, vetor de transformação de planta, célula transformada, bem como métodos para controlar uma população de praga de coleóptero, controlar uma infestação pela dita praga, melhorar o rendimento de uma safra e para produzir uma célula transgênica |
EP3354735A1 (en) | 2010-12-30 | 2018-08-01 | Dow AgroSciences LLC | Nucleic acid molecules that target the rho1 small gtp-binding protein and confer resistance to coleopteran pests |
BRPI1107332A2 (pt) * | 2010-12-30 | 2018-10-30 | Dow Agrosciences Llc | polinucleotídeo, vetor de transformação, moléculas de ácido nucleico, célula, bem como métodos para controle de praga coleóptera, para aperfeiçoamento do rendimento de cultura de milho, e para produção de célula e planta resistentes à praga coleóptera |
UY33851A (es) | 2010-12-30 | 2012-07-31 | Dow Agrosciences Llc | Moléculas de ácido nucleico que confieren resistencia a las plagas de coleópteros |
MX2016008263A (es) | 2013-12-20 | 2017-05-09 | Dow Agrosciences Llc | Moleculas de acido nucleico rnapii 140 que confieren resistencia a plagas de coleopteros. |
BR102014031844A2 (pt) | 2013-12-20 | 2015-10-06 | Dow Agrosciences Llc | ras oposto (rop) e moléculas de ácido nucleico relacionadas que conferem resistência a pragas de coleópteros e hemípteros |
MX366975B (es) | 2014-03-12 | 2019-08-01 | Univ Sydney | Produccion de arn en plantas superiores. |
AU2015255995B2 (en) | 2014-05-07 | 2018-05-10 | Dow Agrosciences Llc | Dre4 nucleic acid molecules that confer resistance to coleopteran pests |
TW201629220A (zh) * | 2014-12-16 | 2016-08-16 | 陶氏農業科學公司 | 以駝背基因之親代RNA干擾(RNAi)抑制作用來控制鞘翅目害蟲之技術 |
US20160194658A1 (en) | 2014-12-22 | 2016-07-07 | Dow Agrosciences Llc | Nucampholin nucleic acid molecules to control coleopteran insect pests |
CN107406849A (zh) * | 2015-02-27 | 2017-11-28 | 先锋国际良种公司 | 用以防治昆虫有害生物的组合物和方法 |
EP3067424A1 (en) | 2015-03-13 | 2016-09-14 | Dow AgroSciences LLC | Rna polymerase i1 nucleic acid molecules to control insect pests |
BR102016012010A2 (pt) | 2015-05-29 | 2020-03-24 | Dow Agrosciences Llc | Molécula de ácido nucleico, de ácido ribonucleico (rna) e de ácido ribonucleico de filamento duplo (dsrna), usos de célula, planta e semente, produto primário, bem como métodos para controlar uma população de pragas coleópteras e/ou hemípteras, para melhorar o rendimento de uma cultura, e para produzir uma célula vegetal transgênica e uma planta transgênica |
MX2017014989A (es) * | 2015-05-29 | 2018-08-15 | Dow Agrosciences Llc | Moleculas de acidos nucleicos de spt6 para controlar plagas de insectos. |
AR109205A1 (es) * | 2016-08-05 | 2018-11-07 | Syngenta Participations Ag | Control de plagas de coleópteros utilizando moléculas de arn |
EP3342780A1 (en) | 2016-12-30 | 2018-07-04 | Dow AgroSciences LLC | Pre-mrna processing factor 8 (prp8) nucleic acid molecules to control insect pests |
CN111394371B (zh) * | 2020-03-31 | 2022-01-28 | 山西大学 | 飞蝗V-ATPase-V1结构域基因及其dsRNA在害虫防治中的应用 |
Family Cites Families (93)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4458066A (en) | 1980-02-29 | 1984-07-03 | University Patents, Inc. | Process for preparing polynucleotides |
US4415732A (en) | 1981-03-27 | 1983-11-15 | University Patents, Inc. | Phosphoramidite compounds and processes |
US4973679A (en) | 1981-03-27 | 1990-11-27 | University Patents, Inc. | Process for oligonucleo tide synthesis using phosphormidite intermediates |
US4693977A (en) | 1982-08-23 | 1987-09-15 | Queen's University At Kingston | Enzyme immobilization for producing cephalosporin antibiotics |
US4536475A (en) | 1982-10-05 | 1985-08-20 | Phytogen | Plant vector |
US5352605A (en) | 1983-01-17 | 1994-10-04 | Monsanto Company | Chimeric genes for transforming plant cells using viral promoters |
DE3329892A1 (de) | 1983-08-18 | 1985-03-07 | Köster, Hubert, Prof. Dr., 2000 Hamburg | Verfahren zur herstellung von oligonucleotiden |
US4886937A (en) | 1985-05-20 | 1989-12-12 | North Carolina State University | Method for transforming pine |
US5453566A (en) | 1986-03-28 | 1995-09-26 | Calgene, Inc. | Antisense regulation of gene expression in plant/cells |
US5107065A (en) | 1986-03-28 | 1992-04-21 | Calgene, Inc. | Anti-sense regulation of gene expression in plant cells |
FR2596761B1 (fr) | 1986-04-08 | 1988-05-20 | Commissariat Energie Atomique | Derives de nucleosides et leur utilisation pour la synthese d'oligonucleotides |
ATE87032T1 (de) | 1986-12-05 | 1993-04-15 | Ciba Geigy Ag | Verbessertes verfahren zur transformation von pflanzlichen protoplasten. |
US5015580A (en) | 1987-07-29 | 1991-05-14 | Agracetus | Particle-mediated transformation of soybean plants and lines |
US5322938A (en) | 1987-01-13 | 1994-06-21 | Monsanto Company | DNA sequence for enhancing the efficiency of transcription |
US5359142A (en) | 1987-01-13 | 1994-10-25 | Monsanto Company | Method for enhanced expression of a protein |
US5614395A (en) | 1988-03-08 | 1997-03-25 | Ciba-Geigy Corporation | Chemically regulatable and anti-pathogenic DNA sequences and uses thereof |
US5789214A (en) | 1988-03-08 | 1998-08-04 | Novartis Finance Corporation | Method of inducing gene transcription in a plant |
ES2060765T3 (es) | 1988-05-17 | 1994-12-01 | Lubrizol Genetics Inc | Sistema promotor de ubiquitina en plantas. |
US5416011A (en) | 1988-07-22 | 1995-05-16 | Monsanto Company | Method for soybean transformation and regeneration |
US5110732A (en) | 1989-03-14 | 1992-05-05 | The Rockefeller University | Selective gene expression in plants |
US5231020A (en) | 1989-03-30 | 1993-07-27 | Dna Plant Technology Corporation | Genetic engineering of novel plant phenotypes |
US5302523A (en) | 1989-06-21 | 1994-04-12 | Zeneca Limited | Transformation of plant cells |
US5501967A (en) | 1989-07-26 | 1996-03-26 | Mogen International, N.V./Rijksuniversiteit Te Leiden | Process for the site-directed integration of DNA into the genome of plants |
US5550318A (en) | 1990-04-17 | 1996-08-27 | Dekalb Genetics Corporation | Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof |
US7705215B1 (en) | 1990-04-17 | 2010-04-27 | Dekalb Genetics Corporation | Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof |
US6051753A (en) | 1989-09-07 | 2000-04-18 | Calgene, Inc. | Figwort mosaic virus promoter and uses |
ES2150900T3 (es) | 1989-10-31 | 2000-12-16 | Monsanto Co | Promotor para plantas transgenicas. |
US5641876A (en) | 1990-01-05 | 1997-06-24 | Cornell Research Foundation, Inc. | Rice actin gene and promoter |
US5484956A (en) | 1990-01-22 | 1996-01-16 | Dekalb Genetics Corporation | Fertile transgenic Zea mays plant comprising heterologous DNA encoding Bacillus thuringiensis endotoxin |
WO1991010725A1 (en) | 1990-01-22 | 1991-07-25 | Dekalb Plant Genetics | Fertile transgenic corn plants |
US5837848A (en) | 1990-03-16 | 1998-11-17 | Zeneca Limited | Root-specific promoter |
US5639949A (en) | 1990-08-20 | 1997-06-17 | Ciba-Geigy Corporation | Genes for the synthesis of antipathogenic substances |
US6403865B1 (en) | 1990-08-24 | 2002-06-11 | Syngenta Investment Corp. | Method of producing transgenic maize using direct transformation of commercially important genotypes |
US5633435A (en) | 1990-08-31 | 1997-05-27 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases |
JP3234598B2 (ja) | 1990-11-23 | 2001-12-04 | プラント・ジエネテイツク・システムズ・エヌ・ベー | 単子葉植物の形質転換方法 |
US5384253A (en) | 1990-12-28 | 1995-01-24 | Dekalb Genetics Corporation | Genetic transformation of maize cells by electroporation of cells pretreated with pectin degrading enzymes |
US5459252A (en) | 1991-01-31 | 1995-10-17 | North Carolina State University | Root specific gene promoter |
US5593874A (en) | 1992-03-19 | 1997-01-14 | Monsanto Company | Enhanced expression in plants |
NZ255028A (en) | 1992-07-02 | 1997-03-24 | Hybridon Inc | Antisense oligonucleotides resistant to nucleolytic degradation |
US7060876B2 (en) | 1992-07-07 | 2006-06-13 | Japan Tobacco Inc. | Method for transforming monocotyledons |
US5591616A (en) | 1992-07-07 | 1997-01-07 | Japan Tobacco, Inc. | Method for transforming monocotyledons |
HUT70467A (en) | 1992-07-27 | 1995-10-30 | Pioneer Hi Bred Int | An improved method of agrobactenium-mediated transformation of cultvred soyhean cells |
US6118047A (en) | 1993-08-25 | 2000-09-12 | Dekalb Genetic Corporation | Anthranilate synthase gene and method of use thereof for conferring tryptophan overproduction |
US5362865A (en) | 1993-09-02 | 1994-11-08 | Monsanto Company | Enhanced expression in plants using non-translated leader sequences |
ES2220913T3 (es) | 1993-09-03 | 2004-12-16 | Japan Tobacco Inc. | Procedimiento para la transformacion de monocotiledonas utilizando el escutelo de un embrio inmaduro. |
US5659026A (en) | 1995-03-24 | 1997-08-19 | Pioneer Hi-Bred International | ALS3 promoter |
US5693512A (en) | 1996-03-01 | 1997-12-02 | The Ohio State Research Foundation | Method for transforming plant tissue by sonication |
US5850019A (en) | 1996-08-06 | 1998-12-15 | University Of Kentucky Research Foundation | Promoter (FLt) for the full-length transcript of peanut chlorotic streak caulimovirus (PCLSV) and expression of chimeric genes in plants |
DE19631919C2 (de) | 1996-08-07 | 1998-07-16 | Deutsches Krebsforsch | Anti-Sinn-RNA mit Sekundärstruktur |
US6489462B1 (en) | 1996-08-09 | 2002-12-03 | Regents Of The University Of Minnesota | Sugarcane bacilliform virus promoter |
CA2236770A1 (en) | 1996-09-05 | 1998-03-12 | Unilever Plc | Salt-inducible promoter derivable from a lactic acid bacterium, and its use in a lactic acid bacterium for production of a desired protein |
CA2275491A1 (en) | 1997-01-20 | 1998-07-23 | Plant Genetic Systems, N.V. | Pathogen-induced plant promoters |
US5981840A (en) | 1997-01-24 | 1999-11-09 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods for agrobacterium-mediated transformation |
US5922564A (en) | 1997-02-24 | 1999-07-13 | Performance Plants, Inc. | Phosphate-deficiency inducible promoter |
US6972197B1 (en) * | 1999-03-18 | 2005-12-06 | The University Of Chicago | Plant chromosome compositions and methods |
EP0991764B1 (en) | 1997-06-12 | 2006-07-12 | Dow AgroSciences LLC | Regulatory sequences for transgenic plants |
EP1056862A1 (en) | 1998-02-26 | 2000-12-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Family of maize pr-1 genes and promoters |
DE69920879T2 (de) | 1998-02-26 | 2005-10-13 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Konstitutive maispromotoren |
US6635806B1 (en) | 1998-05-14 | 2003-10-21 | Dekalb Genetics Corporation | Methods and compositions for expression of transgenes in plants |
US6307123B1 (en) | 1998-05-18 | 2001-10-23 | Dekalb Genetics Corporation | Methods and compositions for transgene identification |
JP2000083680A (ja) | 1998-07-16 | 2000-03-28 | Nippon Paper Industries Co Ltd | 光誘導型プロモ―タ―の制御下に置かれた不定芽再分化遺伝子を選抜マ―カ―遺伝子とする植物への遺伝子導入方法及びこれに用いる植物への遺伝子導入用ベクタ― |
AU2848800A (en) | 1999-01-14 | 2000-08-01 | Monsanto Technology Llc | Soybean transformation method |
DE60028195T2 (de) * | 1999-04-09 | 2007-03-15 | Heska Corp., Fort Collins | Proteine und nukleinsäuremoleküle des kopfes, des nervenkords, der tieferen darmabschnitte und des malpighi-gefässes des flohs und ihre verwendungen |
US6232526B1 (en) | 1999-05-14 | 2001-05-15 | Dekalb Genetics Corp. | Maize A3 promoter and methods for use thereof |
US6429357B1 (en) | 1999-05-14 | 2002-08-06 | Dekalb Genetics Corp. | Rice actin 2 promoter and intron and methods for use thereof |
US6207879B1 (en) | 1999-05-14 | 2001-03-27 | Dekalb Genetics Corporation | Maize RS81 promoter and methods for use thereof |
US6194636B1 (en) | 1999-05-14 | 2001-02-27 | Dekalb Genetics Corp. | Maize RS324 promoter and methods for use thereof |
US6677503B1 (en) | 1999-06-23 | 2004-01-13 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Sunflower anti-pathogene proteins and genes and their uses |
US7365185B2 (en) * | 2000-07-19 | 2008-04-29 | Monsanto Technology Llc | Genomic plant sequences and uses thereof |
US6388170B1 (en) | 2000-04-07 | 2002-05-14 | University Of Kentucky Research Foundation | Bidirectional promoters and methods related thereto |
US7109393B2 (en) | 2000-08-15 | 2006-09-19 | Mendel Biotechnology, Inc. | Methods of gene silencing using inverted repeat sequences |
US20020048814A1 (en) | 2000-08-15 | 2002-04-25 | Dna Plant Technology Corporation | Methods of gene silencing using poly-dT sequences |
US7612194B2 (en) | 2001-07-24 | 2009-11-03 | Monsanto Technology Llc | Nucleic acid sequences from Diabrotica virgifera virgifera LeConte and uses thereof |
AU2003256373A1 (en) | 2002-06-27 | 2004-01-19 | Dow Agrosciences Llc | Use of regulatory sequences in transgenic plants |
US8796026B2 (en) * | 2003-07-07 | 2014-08-05 | Monsanto Technology Llc | Insecticidal proteins secreted from Bacillus thuringiensis and uses therefor |
US8344211B2 (en) * | 2008-08-13 | 2013-01-01 | Ceres, Inc. | Plant nucleotide sequences and corresponding polypeptides |
WO2005049841A1 (en) * | 2003-11-17 | 2005-06-02 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Insect resistance using inhibition of gene expression |
US20060021087A1 (en) * | 2004-04-09 | 2006-01-26 | Baum James A | Compositions and methods for control of insect infestations in plants |
CN101422167A (zh) * | 2004-04-09 | 2009-05-06 | 孟山都技术有限公司 | 用于在植物中控制昆虫侵袭的组合物和方法 |
BRPI0509460B8 (pt) | 2004-04-30 | 2022-06-28 | Dow Agrosciences Llc | genes de resistência a herbicidas |
US20060200878A1 (en) * | 2004-12-21 | 2006-09-07 | Linda Lutfiyya | Recombinant DNA constructs and methods for controlling gene expression |
EP1824967B1 (en) | 2004-12-21 | 2014-11-05 | Monsanto Technology, LLC | Recombinant dna constructs and methods for controlling gene expression |
CA2599577A1 (en) * | 2005-03-04 | 2006-09-14 | Verenium Corporation | Nucleic acids and proteins and methods for making and using them |
PL2431473T3 (pl) * | 2005-09-16 | 2017-05-31 | Monsanto Technology Llc | Sposoby genetycznej kontroli inwazji owadów u roślin i kompozycje do tego przeznaczone |
ZA200803234B (en) * | 2005-10-13 | 2009-01-28 | Monsanto Technology Llc | Methods for producing hybrid seed |
JP2008069646A (ja) | 2006-09-12 | 2008-03-27 | Yamaha Marine Co Ltd | 船舶推進機およびその運転方法 |
EP3070169B1 (en) | 2006-12-14 | 2018-05-09 | Dow AgroSciences LLC | Optimized non-canonical zinc finger proteins |
EP2282629A1 (en) * | 2008-05-23 | 2011-02-16 | E. I. du Pont de Nemours and Company | Dgat genes from yarrowia lipolytica combined with plastidic phosphoglucomutase down regulation for increased seed storage lipid production and altered fatty acid profiles in oilseed plants |
NZ596658A (en) * | 2009-06-16 | 2013-12-20 | Dow Agrosciences Llc | Dig-10 insecticidal cry toxins |
EP3354735A1 (en) | 2010-12-30 | 2018-08-01 | Dow AgroSciences LLC | Nucleic acid molecules that target the rho1 small gtp-binding protein and confer resistance to coleopteran pests |
BRPI1107329A2 (pt) | 2010-12-30 | 2019-11-19 | Dow Agrosciences Llc | moléculas de ácido nucléico que direcionadas à subunidade h de atpase vacuolar que conferem resistência a pragas de coleópteros, vetor de transformação de planta, célula transformada, bem como métodos para controlar uma população de praga de coleóptero, controlar uma infestação pela dita praga, melhorar o rendimento de uma safra e para produzir uma célula transgênica |
BRPI1107332A2 (pt) * | 2010-12-30 | 2018-10-30 | Dow Agrosciences Llc | polinucleotídeo, vetor de transformação, moléculas de ácido nucleico, célula, bem como métodos para controle de praga coleóptera, para aperfeiçoamento do rendimento de cultura de milho, e para produção de célula e planta resistentes à praga coleóptera |
UY33851A (es) | 2010-12-30 | 2012-07-31 | Dow Agrosciences Llc | Moléculas de ácido nucleico que confieren resistencia a las plagas de coleópteros |
-
2011
- 2011-12-30 BR BRPI1107332A patent/BRPI1107332A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2011-12-30 CA CA2822959A patent/CA2822959A1/en not_active Abandoned
- 2011-12-30 AP AP2013007020A patent/AP2013007020A0/xx unknown
- 2011-12-30 EP EP18153855.4A patent/EP3339440A1/en not_active Withdrawn
- 2011-12-30 JP JP2013547700A patent/JP6232290B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2011-12-30 RU RU2013135476A patent/RU2644669C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2011-12-30 AU AU2011351946A patent/AU2011351946B2/en not_active Ceased
- 2011-12-30 NZ NZ715007A patent/NZ715007A/en not_active IP Right Cessation
- 2011-12-30 MX MX2016009100A patent/MX353321B/es unknown
- 2011-12-30 CN CN201610119178.7A patent/CN105779450A/zh active Pending
- 2011-12-30 CN CN201180068838.9A patent/CN103403163B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2011-12-30 UY UY0001033854A patent/UY33854A/es not_active Application Discontinuation
- 2011-12-30 EP EP11853866.9A patent/EP2658977A4/en not_active Withdrawn
- 2011-12-30 WO PCT/US2011/068144 patent/WO2012092573A2/en active Application Filing
- 2011-12-30 NZ NZ612405A patent/NZ612405A/en not_active IP Right Cessation
- 2011-12-30 CN CN201410696597.8A patent/CN104542694B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2011-12-30 US US13/341,613 patent/US9050363B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-12-30 KR KR1020137020038A patent/KR20130130804A/ko not_active Application Discontinuation
- 2011-12-30 MX MX2013007582A patent/MX342845B/es active IP Right Grant
-
2012
- 2012-01-04 AR ARP120100015A patent/AR084775A1/es unknown
-
2013
- 2013-06-25 ZA ZA2013/04742A patent/ZA201304742B/en unknown
- 2013-06-28 CL CL2013001933A patent/CL2013001933A1/es unknown
- 2013-07-30 CO CO13180370A patent/CO6731142A2/es unknown
-
2015
- 2015-05-04 US US14/703,693 patent/US9803204B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2017
- 2017-08-17 AU AU2017216544A patent/AU2017216544A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6223187B2 (ja) | 鞘翅目有害生物に対する抵抗性を付与する核酸分子 | |
JP6232290B2 (ja) | 液胞atpアーゼのcサブユニットを標的とし、鞘翅目有害生物に対する抵抗性を付与する核酸分子 | |
US8987552B2 (en) | Nucleic acid molecules that target the vacuolar ATPase H subunit and confer resistance to coleopteran pests | |
US9012722B2 (en) | Nucleic acid molecules that target the RHO1 small GTP-binding protein and confer resistance to coleopteran pests | |
US20200299699A1 (en) | Nucleic acid molecules that confer resistance to coleopteran pests | |
JP2017514492A (ja) | 鞘翅目害虫に対する抵抗性を付与するdre4核酸分子 | |
JP2017510245A (ja) | 鞘翅目および/または半翅目害虫に対する抵抗性を付与するRas opposite(ROP)および関連核酸分子 | |
JP2018513675A (ja) | 害虫を制御するためのrnaポリメラーゼii33核酸分子 | |
JP2018524004A (ja) | 害虫を制御するためのprp8核酸分子 | |
US9688983B2 (en) | Nucleic acid molecules that confer resistance to coleopteran pests | |
JP2018509150A (ja) | 害虫を制御するためのrnaポリメラーゼii215核酸分子 | |
EP3037432B1 (en) | Nucampholin nucleic acid molecules to control coleopteran insect pests | |
US20170107535A1 (en) | Pre-mrna processing factor 8 (prp8) nucleic acid molecules to control insect pests | |
JP2018531579A (ja) | 害虫を制御するためのsnap25核酸分子 | |
US20190161770A1 (en) | Cactus nucleic acid molecules to control coleopteran pests | |
EP3342780A1 (en) | Pre-mrna processing factor 8 (prp8) nucleic acid molecules to control insect pests | |
JP2018520655A (ja) | 害虫を制御するためのspt6核酸分子 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20141216 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160112 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20160411 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20160610 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160706 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20161206 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20170306 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170502 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170926 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20171023 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6232290 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |