JP6215455B2 - 化合物投与前駆体及び薬物担体製剤 - Google Patents
化合物投与前駆体及び薬物担体製剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6215455B2 JP6215455B2 JP2016514264A JP2016514264A JP6215455B2 JP 6215455 B2 JP6215455 B2 JP 6215455B2 JP 2016514264 A JP2016514264 A JP 2016514264A JP 2016514264 A JP2016514264 A JP 2016514264A JP 6215455 B2 JP6215455 B2 JP 6215455B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- compound
- rna
- dna
- compound administration
- administration precursor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 130
- 239000002243 precursor Substances 0.000 title claims description 84
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 33
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 title claims description 30
- 238000009472 formulation Methods 0.000 title claims description 12
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 32
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 23
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 12
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 11
- 239000012466 permeate Substances 0.000 claims description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 10
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims description 9
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 44
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 32
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 26
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 24
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 24
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 16
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 14
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 12
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 12
- QERYCTSHXKAMIS-UHFFFAOYSA-N thiophene-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CS1 QERYCTSHXKAMIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 108010015847 Non-Receptor Type 1 Protein Tyrosine Phosphatase Proteins 0.000 description 11
- 102100033001 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 1 Human genes 0.000 description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 10
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 10
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- UICIJOHWFFTRLI-UHFFFAOYSA-N n-phenylpiperidine-1-carboxamide Chemical compound C1CCCCN1C(=O)NC1=CC=CC=C1 UICIJOHWFFTRLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 9
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 9
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 8
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical group N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 239000012124 Opti-MEM Substances 0.000 description 7
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 7
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 7
- -1 cationic lipid Chemical class 0.000 description 7
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 7
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 7
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 7
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 6
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 5
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 5
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 5
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 5
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 4
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 4
- 102100025087 Insulin receptor substrate 1 Human genes 0.000 description 4
- 101710201824 Insulin receptor substrate 1 Proteins 0.000 description 4
- PGBFYLVIMDQYMS-UHFFFAOYSA-N Methyl thiophene-2-carboxylate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CS1 PGBFYLVIMDQYMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000002727 Protein Tyrosine Phosphatase Human genes 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 4
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 4
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 108020000494 protein-tyrosine phosphatase Proteins 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M sodium ascorbate Substances [Na+].OC[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M 0.000 description 4
- 235000010378 sodium ascorbate Nutrition 0.000 description 4
- 229960005055 sodium ascorbate Drugs 0.000 description 4
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 4
- PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M sodium-L-ascorbate Chemical compound [Na+].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M 0.000 description 4
- ZKCVIWAHVMYDIM-UHFFFAOYSA-N 4-azidobenzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 ZKCVIWAHVMYDIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 244000089409 Erythrina poeppigiana Species 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 3
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 3
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000009776 Rathbunia alamosensis Nutrition 0.000 description 3
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 3
- 239000003801 protein tyrosine phosphatase 1B inhibitor Substances 0.000 description 3
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 150000003462 sulfoxides Chemical class 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- WKGZJBVXZWCZQC-UHFFFAOYSA-N 1-(1-benzyltriazol-4-yl)-n,n-bis[(1-benzyltriazol-4-yl)methyl]methanamine Chemical compound C=1N(CC=2C=CC=CC=2)N=NC=1CN(CC=1N=NN(CC=2C=CC=CC=2)C=1)CC(N=N1)=CN1CC1=CC=CC=C1 WKGZJBVXZWCZQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PPXUUPXQWDQNGO-UHFFFAOYSA-N 2-azidoacetic acid Chemical compound OC(=O)CN=[N+]=[N-] PPXUUPXQWDQNGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BMTZEAOGFDXDAD-UHFFFAOYSA-M 4-(4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholin-4-ium;chloride Chemical compound [Cl-].COC1=NC(OC)=NC([N+]2(C)CCOCC2)=N1 BMTZEAOGFDXDAD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- PQXPAFTXDVNANI-UHFFFAOYSA-N 4-azidobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 PQXPAFTXDVNANI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 2
- 108090000430 Phosphatidylinositol 3-kinases Proteins 0.000 description 2
- 102000003993 Phosphatidylinositol 3-kinases Human genes 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 2
- KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N caprylic alcohol Natural products CCCCCCCCO KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000012650 click reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 2
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- YORCIIVHUBAYBQ-UHFFFAOYSA-N propargyl bromide Chemical compound BrCC#C YORCIIVHUBAYBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical class O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- MJLVLHNXEOQASX-UHFFFAOYSA-N 2-bromo-3,3-dimethylbutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)C(Br)C(O)=O MJLVLHNXEOQASX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150041968 CDC13 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 101100015729 Drosophila melanogaster drk gene Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 1
- 101710089384 Extracellular protease Proteins 0.000 description 1
- 102100022086 GRB2-related adapter protein 2 Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 101000900690 Homo sapiens GRB2-related adapter protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- 102100025092 Insulin receptor substrate 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710201820 Insulin receptor substrate 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000003939 Membrane transport proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000301 Membrane transport proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000900711 Mus musculus GRB2-related adaptor protein 2 Proteins 0.000 description 1
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-diisopropylethylamine Substances CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 150000001345 alkine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 1
- 230000030609 dephosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006209 dephosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N dihydromaleimide Natural products O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VIYFPAMJCJLZKD-UHFFFAOYSA-L disodium;(4-nitrophenyl) phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][N+](=O)C1=CC=C(OP([O-])([O-])=O)C=C1 VIYFPAMJCJLZKD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- PQVSTLUFSYVLTO-UHFFFAOYSA-N ethyl n-ethoxycarbonylcarbamate Chemical compound CCOC(=O)NC(=O)OCC PQVSTLUFSYVLTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- HHLFWLYXYJOTON-UHFFFAOYSA-N glyoxylic acid Chemical compound OC(=O)C=O HHLFWLYXYJOTON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150098203 grb2 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 150000004687 hexahydrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- GLXDVVHUTZTUQK-UHFFFAOYSA-M lithium hydroxide monohydrate Substances [Li+].O.[OH-] GLXDVVHUTZTUQK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940040692 lithium hydroxide monohydrate Drugs 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000009061 membrane transport Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 1
- 230000004784 molecular pathogenesis Effects 0.000 description 1
- TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N n-Octanol Natural products CCCCCCCC TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N potassium tert-butoxide Chemical compound [K+].CC(C)(C)[O-] LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/545—Heterocyclic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/351—Conjugate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
- C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
ただし、Xは細胞膜を透過することができない化合物であり、linkerはXとDNA又はRNAとの間の連結基である。
(1)化合物X及び1つの反応官能基を有するDNA又はRNAを取る原料取得のステップと、
(2)化合物Xが二官能基試薬の1つの官能基と選択的に反応し、化合物X1が得られる化合物Xの共有結合準備のステップと、
(3)1つの反応官能基を有するDNA又はRNAに対して二官能基試薬で修飾され、前記化合物Xの共有結合に合わせた修飾DNA又はRNAが得られるDNA又はRNAの共有結合準備のステップと、
(4)化合物X1とそれに合わせた修飾DNA又はRNAとを共有結合させ、分離・純化して化合物投与前駆体が得られ、或いは化合物X1とステップ(1)において1つの反応官能基を有するDNA又はRNAとを共有結合させ、分離・純化して化合物投与前駆体が得えられ、或いは化合物Xとステップ(3)における修飾DNA又はRNAとを共有結合させ、分離・純化して化合物投与前駆体が得られる共有結合のステップと、を含む。
(1)1:10−100(W/V)の割合で化合物投与前駆体及び薬物担体を取る原料取得のステップと、
(2)化合物投与前駆体を取り、バッファーと均一に混合して溶液Aが得られ、薬物担体を取り、バッファーを加入して均一に混合して溶液Bが得られ、溶液Aと溶液Bとを混合させ、チップでピペットし、室温にてインキュベーションし、薬物担体製剤が得られるインキュベーションのステップと、を含む。
化合物1は参考文献の方法(D.P.Wilson et al,J.Med.Chem.2007,50,4681−4698)に従って本会社で合成する。5'−アミノ、3'−フルオレセイン修飾のポリアデニル酸(5'−(CH2)12−A19−3'−FITC)は英い捷基(上海)貿易有限会社(Invitrogen Trading Shanghai Co.,Ltd)で受託合成され、その他の化学合成は使用した試薬がそれぞれAldrich又はTCIから購入する。
PTP1B抑制剤の投与前駆体の合成は以下の経路で合成する。
4−ブロム−3−オキソ酢酸tert‐ブチル−5−(3−((1−フェニルカルバモイルピペリジン)−4−メチル)フェニル)チオフェン−2−カルボン酸メチルエステル(1)(250mg,0.4mmol)、臭化プロパルギル(70mg,0.5mmol)及びΝ,Ν−ジイソプロピルエチルアミン(1.5mL)を20mLのΝ,Ν−ジメチルホルムアミドに溶解し、かつ90°Cにて5時間攪拌し、室温まで冷却して減圧して蒸留して粗生成物が得られ、カラムクロマトグラフィーによって4−ブロム−3−オキソ酢酸tert‐ブチル−5−(3−(((1−フェニルカルバモイルピペリジン)−4−メチル)−N−プロパルギルアミン)フェニル)チオフェン−2−カルボン酸メチルエステル(白色固体,130mg,49%収率)が得られる。MS m/z(ESI):668,670(M+H)+;690,692(M+Na)+。水酸化リチウム(200mg,2.38mmol)を4−ブロム−3−オキソ酢酸tert‐ブチル−5−(3−(((1−フェニルカルバモイルピペリジン)−4−メチル:)−N−プロパルギルアミン)フェニル)チオフェン−2−カルボン酸メチルエステル(100mg,0.15mmol)の5mLテトラヒドロフランと5mL水溶液に加入し、室温にて終夜攪拌する。反応液に2N塩酸を加入してかつpH2に酸性化され、濃縮して粗生成物が得られる。粗生成物がHPLCによって調製した後に4−ブロム−3−オキソ酢酸−5−(3−(((1−フェニルカルバモイルピペリジン)−4−メチル)−N−プロパルギルアミン)フェニル)チオフェン−2−カルボン酸(2)(白色固体,40mg,42%収率)が得られる。MS m/z(ESI):626,628(M+H)+;1H NMR(CDC13):δ8.45(s,1H),7.43(m,2H),7.33(t,J=7.6Ηz,1Η),7.21(m,2H),7.03(s,1H),6.92(m,3H),4.88(s,2H),4.15(m,4H),3.28(m,2H),3.20(m,1H),2.70(m,2H),1.82(m,1H),1.73(m,2H),1.24(m,3H).
氷浴で、1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(EDCI,570mg,3.7mmol)を4−アジド安息香酸(500mg,3.06mmol)を含有した10mL Ν,Ν−ジメチルホルムアミドに加入し、その後にΝ−ヒドロキシこはく酸イミド(440mg,3.7mmol)を加入する。反応が遮光及び窒素雰囲気で1時間反応し、その後に室温まで加温して終夜遮光攪拌する。減圧して蒸留してΝ,Ν−ジメチルホルムアミドが除去され、その後に残部が酢酸エチルに溶解され、水で3回洗浄し、有機相が無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、粗生成物が得られる。カラムクロマトグラフィーによって生成物である4−アジド安息香酸スクシンイミドエステル(5)(白色固体,780mg,97.5%収率)が得られる。1H NMR(DMSO−d6):δ8.11(d,J=8.4Hz,2H),7.37(d,J=8.4Hz,2H),7.37(s,4H)。
5'−アミノ、3'−フルオレセイン修飾のポリアデニル酸(5'−CH2)12−A19−3'−FITC)(50nmol)及び4−アジド安息香酸スクシンイミドエステル(3)(5μmol,100eq.)の500μL 0.5Μ炭酸ナトリウム/炭酸水素ナトリウム緩衝液(pH9)と500μLジメチル・スルホキシド混合溶液を室温にて低速に終夜振動する。その後、反応系は直接的に逆相HPLCカラムで分離され、凍結乾燥して4−アジドベンズアミド12−アルキル19ポリアデニル化フルオレセイン(4)(淡黄色固体、90%収率以上)が得られる。
30μの溶液Α(硫酸銅とトリス[(1−ベンジル−1Η−1,2,3−トリアゾール−4−イル)メチル]アミンがモル比1:2で体積比4:3:1の水/ジメチル・スルホキシド/tert−ブタノールの溶液に溶解し、濃度が10mMである)を溶液B(4−アジドベンズアミド12−アルキル19ポリアデニル化フルオレセイン(4)(15nmol)の200μL水溶液と4−ブロム−3−オキソ酢酸−5−(3−(((1−フェニルカルバモイルピペリジン)−4−メチル)−Ν−プロパルギルアミン)フェニル)チオフェン−2−カルボン酸(2)(960nmol)の5μL DMSO溶液)に加入し、ボルテックスして遠心分離された後に、6μLの調製したばかりのアスコルビン酸ナトリウム(600nmol)水溶液を上記反応系に加入し、室温にて低速に終夜振動する。その後に、反応液は直接的に逆相HPLCカラムで分離・純化して生成物である4−ブロム−3−オキソ酢酸−5−(3−(((1−(4−(フルオレセイン19ポリアデニル酸)12−アルキルイソアミドフェニル)−1H−1,2,3−トリアゾール−4−イルメチル)((1−フェニルカルバモイルピペリジン)−4−メチル)アミノ)フェニル)チオフェン−2−カルボン酸(5)(淡黄色固体,約80%収率,純度が約97%、HPLCスペクトル3 参照)が得られる。質量スペクトルが図4参照する。
ただし、FITCが蛍光標識物であり、本発明においてFITCを加入する目的はただ実験において化合物投与前駆体を観察することであり、この標識物は本発明の化合物投与前駆体の必要である構成ではない。以下でも同様である。
ヒト完全長PTP1Bタンパク質はSigma会社(Cat#SRP0215,Lot#3000920322)から購入し、基質(4−ニトロフェニルりん酸二ナトリウム(六水和物))はSigma会社(Cat#71768)から購入し、DNA−FITC標準品(5'−アミノ、3'−フルオレセイン修飾のポリアデニル酸(5'−(CH2)12−A19−3'−FITO)は英い捷基(上海)貿易有限会社(Invitrogen Trading Shanghai Co.,Ltd)で受託合成され、実験用の緩衝液などはSigmaから購入する。
化学修飾の有効成分の活性に対する影響を追跡するために、本発明は化合物2のPTP1Bに対する活性を試験する。10μL化合物を90μLの基質含有の、PTP1Bの反応系に加入し、終濃度がそれぞれ10、3、1、0.3、0.1、0.03、0.01、0.003、0.001、0.0003、0μΜであり、室温にて15min反応し、60sごとに405nm箇所にその吸収値を測定する。化合物を含有しない反応レート(吸光値増加量/反応時間)100%で、各濃度点の反応レートの相対パーセントを計算する。GraphPad Prism作図ソフトウェアを採用してsigmoidal dose−response(variable slope) モデルで曲線適合を行い、検出待ち化合物のIC50値を計算する。(化合物2のIC50曲線が図5に参照する)。
DNA−FITC標準品(100μΜ)を為20,10,5,2.5,1.25,0.625,0.3125μΜに希釈し、TECANマイクロプレートリーダーにおいてOD260吸光度値を検出し、測定値を縦軸とし、標準品濃度を横軸として標準曲線を描出する。サンプル測定値を標準曲線に代入して濃度を求める(図6)。
10μL化合物を90μLの基質含有の、PTP1Bの反応系に加入し、終濃度はそれぞれ10、3、1、0.3、0.1、0.03、0.01、0.003、0.001、0.0003、0μΜであり、室温にて15min反応し、60sごとに405nm箇所にその吸収値を測定する。化合物を含有しない反応レート(吸光値増加量/反応時間)100%で、各濃度点の反応レートの相対パーセントを計算する。GraphPad Prism作図ソフトウェアを採用してsigmoidal dose−response(variable slope) モデルで曲線適合を行い、検出待ちIC50値を計算する(図7)。
HepG2細胞株は中国科学院上海生命科学研究院から購入し、RPMI−1640培地はHycloneから購入し、ウシ胎仔血清は天津こう洋生物製品科技有限会社から購入し、トリプシンとOpti−MEMとはInvitrogenから購入し、X−tremeGENEsiRNAトランスフェクション試薬はRocheから購入し、そのほかの細胞インキュベーションディッシュなどの用品はいずれもComingから購入する。
(1)原料取得:1:10−100(W/V)の割合で化合物投与前駆体及び薬物担体を取る。
(2)インキュベーション:25nM化合物投与前駆体をトランスファーする薬物担体の調製を例とし、一つの1.5mL無菌遠心分離管(管A)を取り、0.125μg化合物投与前駆体を加入し、相応体積のOpti−MEMと均一に混合し、総体積が100μLになるように調整する。X−tremeGENEsiRNA試薬をゆっくりと均一に揺動し、2.5μLX−tremeGENEsiNA試薬を取って他管(管B)における97.5μL Opti−MEMと混合し、総体積が100μLになるように調整する。A管とB管とを混合させ、チップでゆっくりピペットし、室温にて20minインキュベーションする。25nM化合物投与前駆体に基づく薬物担体が得られる。
HepG2細胞株は中国科学院上海生命科学研究院から購入し、RPMI−1640培地は上海前塵生物科技有限会社(Hyclone Shanghai)から購入し、ウシ胎仔血清は天津こう洋生物製品科技有限会社から購入し、トリプシンとOpti−ΜΕΜとは上海英駿生物技術有限会社(Invitrogen Shanghai)から購入し、X−tremeGENEsiRNAトランスフェクション試薬は羅氏中国会社(Roche)から購入し、そのほかの細胞インキュベーションディッシュなどの用品はいずれも康寧中国会社(Corning China)から購入し、化合物5は実施例1に提供される。
トランスファー前の24hに、トリプシンで対数期成長期のHepG2細胞を消化し、10%血清を含有した培地で細胞密度が1.0×107細胞/20mLになるように調整し、新たに15cm細胞インキュベーションディッシュに接種し、37°Cで、5%CO2インキュベーション箱でインキュベーションする。24hに細胞密度が60%−70%に達すると実験に用いられる。
1つの15mL無菌遠心分離管(管A)を取り、4nmolの化合物5を加入し、相応体積のOpti−MEMと均一に混合し、総体積が2mLになるように調整する。X−tremeGENEsiRNA試薬をゆっくりと均一に揺動し、160μL X−tremeGENEsiNA試薬を取って他管(管B)における1.84mL Opti−MEMと混合する。A管とB管とを混合させ、チップでゆっくりピペットし、室温にて20minインキュベーションする。
結果は図8に示すように、原化合物2が蛍光標識に接続した後に細胞内に進入することができず(図8A)、投与前駆体化合物5がX−tremesiRNAに細胞にトランスファーされることができ、大部分の化合物5が細胞質にあり、少数の化合物5が細胞核に進入し(図8B)、かつ、トランスファー効率は80%以上に達することができる(図9)。
HepG2細胞株は中国科学院上海生命科学研究院から購入し、RPMI−1640培地はHycloneから購入し、ウシ胎仔血清は天津こう洋生物製品科技有限会社から購入し、トリプシンはInvitrogenから購入し、細胞溶解液とプロテアーゼ抑制剤とはPierceから購入し、P−IRS−1ELSAキットはbio−swampから購入し、そのほかの細胞インキュベーションディッシュなどの用品はいずれもCorningから購入する。
タンパク質チロシンホスファターゼ1B(PTP1B)はタンパク質チロシンホスファターゼ(PTPs)族に属し、膜貫通受容体様タンパク質と細胞内酵素という2種の形式で存在し、タンパク質のリン酸化チロシン残基の脱リン酸化反応を触媒し、哺乳動物体内の最も早く同定され、純化されるPTPs[2,3]である。PTP1Bはインスリン受容体(IR)、インスリン受容体基質1、2(IRS−1、IRS−2)、成長因子受容体結合タンパク質2(Grb2)、ホスファチジルイノシトール3キナーゼ(PI−3K)などのインスリン信号変換に関するタンパク質に作用し、それらのリン酸化チロシン残基を脱リン酸化させ、インスリン信号変換を減衰させ、従って受容体後のインスリン抵抗性を発生する[4]。そのため、本発明は薬物がトランスファーされた後に細胞内のIRS−1リン酸化レベルの変化を測定することで、薬物が細胞に進入した後に細胞内のインスリン信号チャネル機能に対する影響を評価する。試験方法は以下の通りである。
図10に示すように、異なる濃度の薬物がHepG2細胞にトランスファーされた後に、薬物が添加されない空白制御と比べて、細胞内のIRS−1のリン酸化レベルが向上し、それは、本発明は投与前駆体と薬物担体の方式で細胞膜を透過することが困難である薬物を細胞にトランスファーさせ、かつ原薬は細胞内に作用を発揮することを保証することができることを示す。
カリウムtert−ブトキシド(336mg,3mmol)を15mL化合物(2−1)(372mg,2mmol)のtert−ブタノール溶液に加入し、30度で15分間攪拌する。その後にt− ブチルブロモ酢酸(780mg、4mmol)を以上の体系に加入し、30度で終夜攪拌する。減圧して蒸留して粗生成物が得られる。30mLのジクロロメタンに溶解し、順次に水で3回洗浄し、飽和塩水で3回洗浄し、有機相が無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、化合物(2−2)(無色油状液体,466mg,70%収率)が得られる。MS m/z(ESI):250(M−tBu−N2+H)+;278(M−tBu+H)+
トリフルオロ酢酸(1mL)を化合物(2−2)(466mg,1.4mmol)の5mLジクロロメタン溶液に加入し、室温にて2時間攪拌する。濃縮して粗生成物である化合物(2−3)(無色油状,370mg,95%収率)が得られる。MS m/z(ESI):250(M−N2+H)+;278(M+H)+。
5'−アミノ、3'−フルオレセイン修飾のポリアデニル酸(5'−(CH2)12−A19−3'−FITC)(80nmol)、化合物(2−3)(1.6μmol、200eq.)、4−(4,6−ジメトキシトリアジン−2−イル)−4−メチルモルホリン塩酸塩(DMT−MM,1.6μmol,200eq.)の80μL 0.5Μ炭酸ナトリウム/炭酸水素ナトリウム緩衝液(pH9)、16μL脱イオン水及び16μLジメチル・スルホキシド混合溶液を室温にて低速に終夜振動する。その後に、反応系は直接的に逆相HPLCカラムで分離され、凍結乾燥して化合物(2−4)(白色固体)が得られる。MS m/z(TOF):6896
6μLの溶液A(硫酸銅とトリス[(1−ベンジル−1H−1,2,3−トリアゾール−4−イル)メチル]アミンがモル比1:2で体積比4:3:1の水/ジメチル・スルホキシド/tert−ブタノールの溶液に溶解し、濃度が10mMである)を溶液B(化合物(24)(50nmol)の400μL水溶液と4−ブロム−3−オキソ酢酸−5−(3−(((1−フェニルカルバモイルピペリジン)−4−メチル)−Ν−プロパルギルアミン)フェニル)チオフェン−2−カルボン酸(1−3)(3umol)の100μL DMSO溶液)に加入し、ボルテックスして遠心分離された後に、120μLの調製したばかりのアスコルビン酸ナトリウム(1200nmol)水溶液を上記反応系に加入し、室温にて低速に終夜振動する。その後に、反応液は直接的に逆相HPLCカラムで分離・純化して生成物(投与前駆体2)(淡黄色固体)が得られる。MS m/z(TOF):7521
5'−アミノ、3'−フルオレセイン修飾のポリアデニル酸(5'−(CH2)12−A19−3'−FITC)(80nmol)、アジド酢酸(3−1)(1.6μmol、200eq.)、4−(4,6−ジメトキシトリアジン−2−イル)−4−メチルモルホリン塩酸塩(DMT−MM,1.6μmol,200eq.)の80μL 0.5M炭酸ナトリウム/炭酸水素ナトリウム緩衝液pH9)、160μL脱イオン水及び160μLジメチル・スルホキシド混合溶液を室温にて低速に終夜振動する。その後に、反応系は直接的に逆相HPLCカラムで分離され、凍結乾燥して化合物(4)(白色固体)が得られる。MS m/z(TOF):6720
60μLの溶液Α(硫酸銅とトリス[(1−ベンジル−1H−1,2,3−トリアゾール−4−イル)メチル]アミンがモル比1:2で体積比4:3:1の水/ジメチル・スルホキシド/tert−ブタノールの溶液に溶解され、濃度が10mMである)を溶液B(化合物(3−2)(50nmol)の400μL水溶液と4−ブロム−3−オキソ酢酸−5−(3−(((1−フェニルカルバモイルピペリジン)−4−メチル)−Ν−プロパルギルアミン)フェニル)チオフェン−2−カルボン酸(1−3)(3umol)の100μL DMSO溶液)に加入し、ボルテックスして遠心分離された後に、120μLの調製したばかりのアスコルビン酸ナトリウム(1200nmol)水溶液を上記反応系に加入し、室温にて低速に終夜振動する。その後に、反応液は直接的に逆相HPLCカラムで分離・純化して生成物(投与前駆体3)(淡黄色固体)が得られる。MS m/z(TOF):7345
化合物(4−1)(441mg,1mmol)、臭化プロパルギル(95mg,0.8mmol)、炭酸カリウム(138mg,1mmol)を20mLのΝ,Ν−ジメチルホルムアミドに溶解し、室温にて終夜攪拌する。減圧して蒸留して粗生成物が得られる。50mLのジクロロメタンに溶解し、順次に水で3回洗浄し、飽和塩水で3回洗浄し、有機相が無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、化合物(4−2)(黄色固体,287mg,60%収率)が得られる。MS m/z(ESI):424(M−tBu+H)+;480(M+H)+。
化合物(4−2)(87mg,0.6mmol)、水酸化リチウム一水化合物(126mg,3mmol)を5mLのメタノールと5mLの水に溶解し、回流して終夜攪拌する。蒸留してアルコールが除去される。20mLの水で希釈し、1N HClでpH2.0程度に酸性化され、凍結乾燥して粗生成物が得られ、直接的に逆相高速液体分離で(4−3)(黄色固体,216mg,80%収率)が得られる。MSm/z(ESI):410(M+H)+。
60μの溶液Α(硫酸銅とトリス[(1−ベンジル−1Η−1,2,3−トリアゾール−4−イル)メチル]アミンがモル比1:2で体積比4:3:1の水/ジメチル・スルホキシド/tert−ブタノールの溶液に溶解し、濃度が10mMである)を溶液B(化合物(4−4)(50nmol)の400μL水溶液と化合物(4−3)(3umol)の100μL DMSO溶液)に加入し、ボルテックスして遠心分離された後に、120μLの調製したばかりのアスコルビン酸ナトリウム(1200nmol)水溶液を上記反応系に加入し、室温にて低速に終夜振動する。その後に、反応液は直接的に逆相HPLCカラムで分離・純化して生成物(投与前駆体4)(淡黄色固体)が得られる。MS m/z(TOF):7191
HepG2細胞株は中国科学院上海生命科学研究院から購入し、RPMI−1640培地は上海前塵生物科技有限会社(Hyclone Shanghai)から購入し、ウシ胎仔血清は天津こう洋生物製品科技有限会社から購入し、トリプシンとΟpti−ΜΕΜは上海英駿生物技術有限会社(Invitrogen Shanghai)から購入し、X−tremeGENEsiRNAトランスフェクション試薬は羅氏中国会社(Roche)から購入し、そのほかの細胞インキュベーションディッシュなどの用品はいずれも康寧中国会社(Corning China)から購入し、5bpのpolyA 5'−NH2−(CH2)12−PO4−A5−3'-FITC、19bpのpolyA 5'−NH2−(CH2)12−PO4−A19−3'−FITC、38bpのpolyA5'−NH2−(CH2)12−PO4−A38−3'一FITC、ランダム19bp一本鎖5'−NH2−(CH2)12−PO4−TGGGCTGGCCAAACTGCTG−3'−FITCとランダム19bp二本鎖(5'−NH2−(CH2)12−PO4−TGGGCTGGCCAAACTGCTG−3'−FITC:
5'−CAGCAGTTTGGCCAGCCCA−3')はいずれも英い捷基(上海)貿易有限会社で合成し、投与前駆体2〜4は実施例6〜8で調製してなる。
トランスファー前の24hに、トリプシンで対数期成長期のHepG2細胞を消化し、10%血清を含有した培地で細胞密度が0.5×106細胞/mLになるように調整し、新たに15cm細胞インキュベーションディッシュに接種し、37°Cにて、5%CO2インキュベーション箱でインキュベーションする。24hに細胞密度が60%−70%に達すると実験に用いられる。
1つの15mL無菌遠心分離管(管A)を取り、それぞれ4nmol以上の異なる配列の一本鎖又は二本鎖DNA/NAフラグメント及び異なる投与前駆体を取り、相応体積のOpti−MEMと均一に混合し、総体積が2mLになるように調整する。X−tremeGENEsiRNA試薬をゆっくりと均一に揺動し、160μL X−tremeGENEsiRNA試薬を取って他管(管B)における1.84mL Opti−MEMと混合する。A管とB管とを混合させ、チップでゆっくりとピペットし、室温にて20minインキュベーションする。
結果は図11に示すように、5bp以上の一本鎖、二本鎖DNA又はRNAランダム又はpolyAフラグメント(例えば5bpのpolyA、19bpのpolyA、38bpのpolyA、19bpの一本鎖ランダム配列又は19bpの二本鎖ランダム配列フラグメント)、及び本発明は調製した各種の投与前駆体は、X−tremesiRNAに細胞にトランスファーされることができ、大部分が細胞質にあり、少数が細胞核に進入する。
1)Klopman G,ZhuH.Recent methodologies for the estimation of n−octanol/water partition coefficients and their use in the prediction of membrane transport properties of drugs[J].MiniRev Med Chem,2005,5(2):127−133
2).A.R.Saltiel,New perspectives into the molecular pathogenesis and treatment of type2 diabetes[J],Cell,2001;104:517−529.
3).Ζ.Y.Zhang,Protein tyrosine phosphatases:structure and function,substrate specificity,and inhibitor development[J].Annu.Rev.Pharmacol.Toxil.2002;42:209−234.
4).H.Charbonneau,N.K.Tonks,S.Kumar,et al.Human placenta protein tyrosine phosphatase:amino acid sequence and relationship to a family of receptor−like proteins[J].Proc.Natl.Acad.Sci.USA.1989;86:5252−5256.
Claims (13)
- 化合物投与前駆体であって、前記化合物投与前駆体の一般式は
ただし、Xは細胞膜を透過することの困難であり、linkerはXとDNA又はRNAとの間の連結基であり、前記化合物投与前駆体の構造式は、
であることを特徴とする化合物投与前駆体。 - 前記DNA又はRNAは一本鎖又は二本鎖であることを特徴とする請求項1に記載の化合物投与前駆体。
- 前記DNA又はRNAの一本鎖又は二本鎖の長さは5個以上塩基対又は塩基であることを特徴とする請求項2に記載の化合物投与前駆体。
- 前記DNA又はRNAは定義される長さ範囲における任意の配列であることを特徴とする請求項3に記載の化合物投与前駆体。
- 前記DNA又はRNAは1つの共有結合するための官能基を有することを特徴とする請求項1に記載の化合物投与前駆体。
- 前記DNA又はRNAにビオチン、蛍光、同位素又はその他のトレースするための標識が付けられたことを特徴とする請求項1乃至5のいずれか一項に記載の化合物投与前駆体。
- 前記linkerの化合物Xにおける接続部位はXの生物活性を影響しないことを特徴とする請求項1に記載の化合物投与前駆体。
- 前記linkerは化合物Xと直接的に共有結合し、或いは予め修飾された化合物Xで接続されることを特徴とする請求項1に記載の化合物投与前駆体。
- (1)化合物X及び1つの反応官能基を有するDNA又はRNAを取る原料取得のステップと、
(2)化合物Xが選択的に二官能基試薬の1つの官能基と反応して、化合物X1が得られる、化合物X共有結合準備のステップと、
(3)1つの反応官能基を有するDNA又はRNAに対して二官能基試薬で修飾され、ステップ(2)における化合物Xの共有結合に合わせた修飾DNA又はRNAが得られる、DNA又はRNA共有結合準備のステップと、
(4)化合物X1とそれに合わせた修飾DNA又はRNAとを共有結合させ、分離・純化して化合物投与前駆体が得られる;或いは化合物X1とステップ(1)において1つの反応官能基を有するDNA又はRNAとを共有結合させ、分離・純化して化合物投与前駆体が得られる;或いは化合物Xとステップ(3)における修飾DNA又はRNAとを共有結合させ、分離・純化して化合物投与前駆体が得られる共有結合ステップと、を含むことを特徴とする請求項1に記載の化合物投与前駆体の調製方法。 - 請求項1乃至8のいずれか一項に記載の化合物投与前駆体に担体を加入して調製してなることを特徴とする化合物投与前駆体に基づく薬物担体製剤。
- 前記担体はDNA又はRNAトランスファー生物材料であることを特徴とする請求項10に記載の化合物投与前駆体に基づく薬物担体製剤。
- (1)1:10−100(W/V)の割合で化合物投与前駆体及び薬物担体を取る原料取得のステップと、
(2)化合物投与前駆体を取り、バッファーと均一に混合して溶液Aが得られ、薬物担体を取り、バッファーを加入して均一に混合して溶液Bが得られ、溶液Aと溶液Bとを混合させ、チップでピペットされ、室温にてインキュベーションされ、薬物担体製剤が得られるインキュベーションのステップと、を含むことを特徴とする請求項10に記載の化合物投与前駆体に基づく薬物担体製剤の調製方法。 - ステップ(2)において、室温にてインキュベーションする時間が20minであることを特徴とする請求項12に記載の調製方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310190218 | 2013-05-21 | ||
CN201310190218.3 | 2013-05-21 | ||
PCT/CN2014/077974 WO2014187315A1 (zh) | 2013-05-21 | 2014-05-21 | 一种化合物给药前体及药物载体制剂 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016523836A JP2016523836A (ja) | 2016-08-12 |
JP6215455B2 true JP6215455B2 (ja) | 2017-10-18 |
Family
ID=51932876
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016514264A Active JP6215455B2 (ja) | 2013-05-21 | 2014-05-21 | 化合物投与前駆体及び薬物担体製剤 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20160152976A1 (ja) |
EP (1) | EP3029059B1 (ja) |
JP (1) | JP6215455B2 (ja) |
CN (1) | CN104177465B (ja) |
WO (1) | WO2014187315A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105111265B (zh) * | 2014-08-28 | 2018-04-06 | 成都先导药物开发有限公司 | 一种使用“一锅法”标记修饰生物大分子的方法 |
Family Cites Families (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5118802A (en) * | 1983-12-20 | 1992-06-02 | California Institute Of Technology | DNA-reporter conjugates linked via the 2' or 5'-primary amino group of the 5'-terminal nucleoside |
US5457183A (en) * | 1989-03-06 | 1995-10-10 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Hydroxylated texaphyrins |
EP1237581A1 (en) * | 1999-12-17 | 2002-09-11 | Gene Therapy Systems, Inc. | Use of cationic lipids for intracellular protein delivery |
WO2006019430A2 (en) * | 2004-04-20 | 2006-02-23 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Methods and compositions for enhancing delivery of double-stranded rna or a double-stranded hybrid nucleic acid to regulate gene expression in mammalian cells |
US8680062B2 (en) * | 2004-07-06 | 2014-03-25 | Deliversir Ltd. | System for delivering therapeutic agents into living cells and cells nuclei |
US8252756B2 (en) * | 2005-06-14 | 2012-08-28 | Northwestern University | Nucleic acid functionalized nanoparticles for therapeutic applications |
CN101874111B (zh) * | 2007-11-28 | 2013-06-05 | 国立大学法人东京医科齿科大学 | 利用内源性乳糜微粒递送用于抑制靶基因表达的核酸的体系 |
CN101980725B (zh) * | 2008-02-01 | 2013-06-12 | 阿森迪斯药物股份有限公司 | 包含可自裂解的连接体的前药 |
CN101899092B (zh) * | 2009-06-01 | 2013-07-24 | 北京大学 | 一种新型肽-链接基-缀合物及其固相合成方法 |
WO2011071078A1 (ja) * | 2009-12-08 | 2011-06-16 | 国立大学法人岐阜大学 | 芳香族化合物、並びに、それを用いたオリゴヌクレオチド誘導体合成用修飾担体、オリゴヌクレオチド誘導体及びオリゴヌクレオチド構築物 |
CN102724967A (zh) * | 2009-12-31 | 2012-10-10 | 安龙制药公司 | 包括可释放的脲连接体的含芳香胺化合物的聚合缀合物 |
ES2638309T3 (es) * | 2010-04-19 | 2017-10-19 | Nlife Therapeutics S.L. | Composiciones y métodos para la distribución selectiva de moléculas de oligonucleótidos a tipos específicos de neuronas |
CN101891804B (zh) * | 2010-06-21 | 2012-12-26 | 中国人民解放军第四军医大学 | 透膜肽介导的抗细菌RNA聚合酶σ70因子基因rpoD的反义肽核酸 |
CN103121959B (zh) * | 2011-11-21 | 2016-09-21 | 昆山市工业技术研究院小核酸生物技术研究所有限责任公司 | 化合物和核酸复合分子与核酸复合物及其制备方法和应用 |
CN102827251B (zh) * | 2012-09-12 | 2014-06-18 | 中国人民解放军第四军医大学 | 一种透膜肽介导的反义抗菌剂及其制备方法和应用 |
WO2014187313A1 (zh) * | 2013-05-21 | 2014-11-27 | 成都先导药物开发有限公司 | 一种化合物的细胞透膜的方法 |
-
2014
- 2014-05-21 WO PCT/CN2014/077974 patent/WO2014187315A1/zh active Application Filing
- 2014-05-21 JP JP2016514264A patent/JP6215455B2/ja active Active
- 2014-05-21 CN CN201410215068.1A patent/CN104177465B/zh active Active
- 2014-05-21 EP EP14801111.7A patent/EP3029059B1/en active Active
-
2015
- 2015-11-20 US US14/948,193 patent/US20160152976A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3029059A4 (en) | 2016-06-08 |
US20160152976A1 (en) | 2016-06-02 |
EP3029059B1 (en) | 2018-07-04 |
CN104177465B (zh) | 2017-09-29 |
CN104177465A (zh) | 2014-12-03 |
JP2016523836A (ja) | 2016-08-12 |
EP3029059A1 (en) | 2016-06-08 |
WO2014187315A1 (zh) | 2014-11-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Sicari et al. | A guide to assessing endoplasmic reticulum homeostasis and stress in mammalian systems | |
CN104342488B (zh) | 葡萄糖醛酸转移酶ugt1a1的特异性荧光探针及其应用 | |
Kawaguchi et al. | Fluorescence probe for lysophospholipase C/NPP6 activity and a potent NPP6 inhibitor | |
CN108395443A (zh) | 抑制程序性死亡受体配体1的环状化合物及其用途 | |
US20210322456A1 (en) | Benzimidazoles that enhance the activity of oligonucleotides | |
WO2016049998A1 (zh) | 一种人肠道羧酸酯酶活性检测的荧光探针底物及其应用 | |
WO2017041403A1 (zh) | 一种测定二肽基肽酶iv活性的荧光探针底物及其应用 | |
EP3000898A1 (en) | Drug target capturing method | |
Makowski et al. | Sudemycin K: a synthetic antitumor splicing inhibitor variant with improved activity and versatile chemistry | |
CN107011324A (zh) | 二肽基肽酶iv酶近红外荧光探针底物及其制备方法与应用 | |
US20190284560A1 (en) | Dna aptamers binding to molecular targeted agents and detection method of molecular targeted medicine using the same | |
JP7140398B2 (ja) | ニトロベンゼン誘導体またはその塩およびそれらの用途 | |
JP6215455B2 (ja) | 化合物投与前駆体及び薬物担体製剤 | |
EP2382205B1 (fr) | Dérivés de 2-pyridin-2-yl-pyrazol-3(2h)-one, leur préparation et leur application en thérapeutique comme activateurs de hif | |
JP6276390B2 (ja) | 化合物の細胞膜透過の方法 | |
CN104592986B (zh) | 一种葡萄糖醛酸转移酶ugt1a1的特异性荧光探针及其应用 | |
US20200207989A1 (en) | Fluorescent probe for aldh3a1 detection | |
CA3210771A1 (en) | Compounds for programmable protein degradation and methods of use for the disease treatment | |
US11119095B2 (en) | Method for measuring tyrosine phosphatase and tyrosine kinase activity | |
US20230121031A1 (en) | Masked fluorogenic compounds and methods of using the same | |
Zou et al. | Photocaged probes for spatiotemporal imaging | |
Chuong et al. | Selective Smurf1 E3 ligase inhibitors that prevent transthiolation | |
CN104342106B (zh) | 一种人羧酸酯酶亚型的特异性荧光探针底物及其应用 | |
JP6772422B2 (ja) | 脂質膜非透過性指示薬 | |
CN115872994A (zh) | 一种靶向magi2 gk结构域的小分子及其用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20161101 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170126 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170328 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20170628 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170629 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170905 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170920 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6215455 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |