JP6175078B2 - 新規のシステインプロテアーゼ阻害剤及びその使用 - Google Patents

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Description

本出願は、その内容が全体として参照によって本明細書に組み入れられる２０１２年２月１日に出願された米国仮特許出願番号６１／５９３，６６４の利益及びそれに対する優先権を主張する。
本明細書で引用される特許、特許出願及び出版物はすべてその全体が参照によって本明細書に組み入れられる。本明細書で記載され、主張される本発明の日付の時点で当業者に既知であるような技術の最先端をさらに完全に記載するために、これらの出版物の開示はその全体が参照によって本明細書に組み入れられる。
本発明の開示は、著作権保護に従う材料を含有する。著作権所有者は、それが米国特許商標局の特許ファイル又は記録に出現するので、特許文書又は特許開示の誰かによるファクシミリ複製に異存はないが、別の面では、著作権の権利のいずれか及びすべてを保有する。
政府の支援
本発明は、国立衛生研究所によって付与されたＮＩＨ助成金番号Ｕ０１ ＡＧ０２８７１３のもとでの政府の支援によって為された。政府は本発明にて特定の権利を有する。
カルパインは、多数の細胞内シグナル伝達カスケードを調節する普遍的に発現されるカルシウム依存性システインプロテアーゼの部類であり、細胞骨格の動態及びリモデリングに関わるタンパク質キナーゼを調節することに基本的に関与する。生理的な条件下で細胞内又は細胞外のカルシウム貯蔵からの一時的で局在化したＣａ2+の流動は、局所のカルパイン集団の制御された活性化を生じる。いったん活性化されると、カルパインは、選択的な内在性のペプチジル阻害剤であるカルパスタチン（ＣＡＰＮ）によって厳しく調節される。局所のカルパインのタンパク質分解活性はネイティブのＣａ2+シグナル伝達及び細胞骨格のリモデリングに必須である一方で、病的状態はＣａ2+の過剰なレベルを生じ、広いカルパインの活性化及び調節されないタンパク質分解を生じ、病的状態の増悪を招き得る。カルパイン１の過剰活性化は、アルツハイマー病を含む様々な苦痛及び神経変性状態における主要な又は二次的な病的事象に関係があるとされる。カルパイン１は主としてシナプスに局在し、アルツハイマー病患者の死後の脳で異常に活性化されている一方で、カルパスタチンは有意に少量で見いだされる。
アルツハイマー病（ＡＤ）は、消耗性の記憶喪失及び認知能力や機能能力の広範な劣化を特徴とする進行性及び末期的な状態である。ＡＤのための現在利用可能な治療法は一時しのぎであり、疾患の進行を遅らせる又は停止させることはない。たとえば、ラザダイン（登録商標）（ガランタミン）、エクセロン（登録商標）（リバスチグミン）、アリセプト（登録商標）（ドネペジル）及びコグネックス（登録商標）（タクリン）のようなコリンエステラーゼ阻害剤は、ＡＤの早期段階に処方されており、症状の進行を一時的に遅らせ、休止し得る。しかしながら、ＡＤが進行するにつれて、脳は少ないアセチルコリンを失い、それによってコリンエステラーゼ阻害剤が無効になる。Ｎ−メチルＤ−アスパルテート（ＮＭＤＡ）拮抗剤であるナメンダ（登録商標）（メマンチン）も、中程度から重度のアルツハイマー病に処方されているが、一時的な利益しか実感されない。
新規のカルパイン阻害剤に対するニーズがある。カルパイン１が関与する種々の疾患状態のための新規の治療に対するニーズもある。
態様の１つでは、本発明は式Ｉ：
（Ｉ）
のエポキシド誘導体の部類又は薬学上許容可能なその塩を指向し、
式中、
Ｒ1は、−ＣＯ2Ｈ、−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ4）−アルキル、又はアリールであり；
Ｒ2は、水素又は−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキルであり；
Ｒ3は、水素、−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキル、−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキル−アリール−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキル−ＯＲ10、又は
であり；
Ｒ4は−（Ｃ1--Ｃ4）−アルキル、−（ＣＨ2）−ヘテロアリールであり、その際、前記ヘテロアリールは、１以上の−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル基によって任意で置換され、又はＲ4はそれが結合する炭素原子と共に−（Ｃ4--Ｃ8）−シクロアルキル環を形成し；
Ｒ5は、−（Ｃ1--Ｃ6）−アルキル−Ｒ6、−（Ｃ2-Ｃ5）−アルケニル、−（Ｃ2-Ｃ5）−アルキニル、−（ＣＨ2）n−アリール、又は−（ＣＨ2）n−ヘテロアリールであり、その際、前記アリール又はヘテロアリールは任意で、１以上のＲ7基によって置換され；
Ｒ6は、−Ｎ（Ｒ10）Ｃ（Ｏ）Ｒ8、−Ｎ（Ｒ10）Ｓ（Ｏ）2Ｒ8、−Ｎ（Ｒ10）Ｃ（ＮＨ）Ｎ（Ｒ10）2であり；
Ｒ7は独立して、ハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ3）−アルキル、アリール、メチレンジオキシフェニル、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2であり、その際、前記アリールは任意で、１以上のＲ9基によって置換され；
Ｒ8は、−（Ｃ1--Ｃ6）−アルキル−Ｒ11又はアリールであり、その際、アリールは任意で、１以上のＲ9基によって置換され；
Ｒ9は独立して、水素、ハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ4）−アルキル、−（Ｃ1--Ｃ4）−ハロアルキル、−（Ｃ2-Ｃ4）−アルキニル、ＣＮ、ＮＯ2、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は
であり；
Ｒ10は独立して、水素又は−（Ｃ1--Ｃ4）−アルキルであり；
Ｒ11は水素、

であり；
ｎは０〜４の整数であり、
ｐは０〜３の整数である。
一部の実施形態では、Ｒ2が水素であってＲ3がイソプロピル、
である場合、Ｒ1は−ＣＯ2Ｈではなく、及びＲ2及びＲ3が双方とも水素である場合、Ｒ1は−ＣＯ2−エチルではない。
別の態様では、本発明は式（Ｉ）の化合物及び薬学上許容可能な担体を含む組成物を指向する。
別の態様では、本発明は、システインプロテアーゼを式（Ｉ）の化合物又は式（Ｉ）の化合物を含む組成物に接触させることを含むシステインプロテアーゼを阻害する方法を指向する。一部の実施形態では、システインプロテアーゼはカルパインである。
別の態様では、本発明は、治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物の投与を含む、対象において神経変性疾患を治療する方法を指向する。一部の実施形態では、疾患はアルツハイマー病である。
別の態様では、本発明は、治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物の投与を含む、対象において長期増強を高める方法を指向する。
別の態様では、本発明は、治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物の投与を含む、対象において記憶を改善する方法を指向する。一部の実施形態では、対象は神経変性疾患を有する。一部の実施形態では、神経変性疾患はアルツハイマー病である。
別の態様では、本発明は、治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物の投与を含む、対象においてシナプス機能を改善する方法を指向する。一部の実施形態では、対象は神経変性疾患を有する。一部の実施形態では、神経変性疾患はアルツハイマー病である。
本発明のさらに他の目的及び利点は、単に説明に役立つものであり、限定するものではない本明細書での開示から当業者に明らかになるであろう。従って、他の実施形態は本発明の精神及び範囲から逸脱することなく技量のある熟練者によって認識されるであろう。
種々の生物過程におけるカルパインの関与を示す図である。 切断し得る結合から伸びるアミノ酸残基に従ってプロテアーゼ基質が命名されることを示す図である。「活性化されていない」及び「活性化されている」基質残基はそれぞれ、Ｐ１、Ｐ２等及びＰ１’、Ｐ２’等と命名する。糸口としてＥ−６４を用いて設計の論理的根拠を説明する。 エポキシスクシネート阻害剤によるＣａｌ１の活性部位Ｃｙｓの共有結合修飾の確認を示す図である。（図３Ａ）ヨードアセトアミド（ＩＡＡ）による遊離のシステインのキャッピング及びゲル内消化の後、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによってペプチド断片を解析した。（図３Ｂ）阻害剤（１０μＭ）の非存在下又は存在下での組換えＣａｌ１cat（５μＭ）のインキュベートについての全イオンクロマトグラム（ＴＩＣ）である。非活性部位及びＩＡＡでキャップしたペプチド断片（Ｒｔ＝４１．３分）はＥＩＣ定量の内部標準として用いた。（図３Ｃ）Ｃａｌ１catの活性部位Ｃｙｓの修飾は、Ｃａｌ１cat（１μＭ）と種々の濃度の阻害剤を含有するインキュベートにて濃度依存性だった。（図３Ｄ）Ｃａｌ１cat（１μＭ）の阻害剤混合物（５μＭ）との同時インキュベートは、２４ａ及びＥ−６４による活性部位の競合修飾を示した。 ビオチン化プローブ２７による活性部位の修飾の競合阻止によって測定されるＣａｔｈＢに対するＣａｌ１catの競合阻害を示す。２７とインキュベートした後のＣａｌ１cat（レーン６）又はＣａｔｈＢ（レーン７）の抗ビオチンウエスタンブロットは、共有結合で修飾されたタンパク質の予想された免疫活性を示す。Ｃａｌ１cat＋ＣａｔｈＢの混合物の２７とのインキュベートは双方のタンパク質の修飾を示す（レーン１）。阻害剤との事前インキュベート（レーン２〜５）は２７による修飾から活性部位を遮断する各阻害剤の能力を示す。３つ組免疫ブロットからの手段を用いた濃度解析を用いて対照に対して阻害剤の存在下での２７による各タンパク質の修飾を推定した（レーン１：比＝１．０）。ＣａｔｈＢ／Ｃａｌ１cat免疫反応性の比は、最高の選択性を示す３０ａ（レーン３）及び３３（レーン５）によってＣａｌ１に向かう選択性の推定である。 Ｃａｌ１cat［ＰＤＢ：２ＮＱＧ］のＸ線構造の中でドッキングした選択された阻害剤（化合物２４ａ、３０ａ及び３３）を示す図である。（図５Ａ）推定上のドッキング孔の構造的重なり合い。（図５Ｂ）保存されたＨ2Ｏ分子とＰ２部分の間で形成される提唱されたＨ結合を説明する拡大したＳ２ポケット。Ｓｙｂｙｌ分子モデリングソフトウエアを用いてＧＯＬＤドッキング基本骨格を介してドッキングを実施した。ＵＣＳＦキメラ分子モデリングソフトウエアを用いてドッキング孔が表示された。 Ｃａｌ１の活性部位に結合したエポキシド阻害剤の結晶構造は弛緩した開環構造を示すが、エポキシドの開環のための一時的な状態は、ＳN２置換のためにＣｙｓ求核試薬及びＨｉｓ一般酸が整列することが必要であることを示す図である。トリアゾール系の阻害剤は、２Å近づく距離に向かって偏向したドッキングスコアに基づいて設計した。比較のために、結晶構造では２ＮＱＧ ｄ１＝４．６０６及びｄ２＝１．８１０；及び１ＴＬＯ（Ｅ６４、Ｈｉｓ及びＣｙｓ求核試薬によって示される）ｄ１＝４．７７５、ｄ２＝１．８３３。 表４で報告した詳細な動態パラメータを導き出すのに使用したパパイン（図７Ａ）及びＣａｌ１（図７Ｂ）の阻害についての二次的な及び一次的な動態データのプロットを示す図である：Ｅ−６４（菱形−実線）、２４ａ（黒丸−破線）、３３（四角形−実線）、５０（白丸−点線）。二重逆数プロットで示された観察された速度定数（Ｋobs）は、基質からの生成物形成についての「プログレス曲線」の曲線の非線形適合から測定した。例となるプログレス曲線をＥ６４によるＣａｌ１阻害について示す（図７Ｃ）。 Ｃａｌ１catのアミノ酸配列の配列比較（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ（一番上の配列；配列番号１）；Ｓｕｓ ｓｃｒｏｆａ（上から２番目の配列；配列番号２）；Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ（上から３番目の配列；配列番号３）；及びＲａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ（一番下の配列；配列番号４））を示す図である。活性部位のシステインは「ミニカルパインの配列比較」における１１５であり、「全体のカルパインの配列比較」における１３２である。Ｐｕｂｍｅｄからダウンロードした配列を用いてＣＬＣ配列ビューアー（フリーバージョン）によって配列比較を行った。 エポキシドの投与の直後５分間の間での増強の残留レベルを示す図である。増強の残留レベルをＬＴＰの直後５分間の間で平均した。Ａβが誘導したＬＴＰの損傷を救済する能力について化合物を調べた（ｐ＜０．０５）。 マウス（群当たりｎ＝３マウス）における選択した化合物について時間に対する血漿濃度の曲線を示す図である。 媒体、３０ａ、３３及び５０によって処理した動物から得られた海馬ホモジネートのウエスタンブロットを示す図である。 ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおける２ヵ月齢から３ヵ月齢までの６７、３０ａ、３３及び５０による毎日の処理が文脈的恐怖記憶（Ａ）及び参照記憶（Ｂ）における損傷を改善したことを示す図である。ＡＰＰ／ＰＳ１−ビヒクル：ｎ＝１５；ＡＰＰ／ＰＳ１−６７：ｎ＝６；ＡＰＰ／ＰＳ１−３０ａ：ｎ＝１０；ＷＴ−媒体：ｎ＝１５；ＷＴ−６７＝５；ＷＴ−３０ａ：ｎ＝８，ＡＰＰ／ＰＳ１−３３：ｎ＝１１；ＷＴ−３３：ｎ＝８，ＡＰＰ／ＰＳ１−５０：ｎ＝１０；ＷＴ−５０：ｎ＝８．各ビヒクル処理した遺伝子導入動物群と比べた化合物で処理した遺伝子導入動物群すべてにてｐ＜０．０５. ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおける２ヵ月齢から７ヵ月齢までの６７、３０ａ、３３及び５０による毎日の処理が文脈的恐怖記憶（Ａ）及び参照記憶（Ｂ）における損傷を改善したことを示す図である。ＡＰＰ／ＰＳ１−ビヒクル：ｎ＝１７；ＡＰＰ／ＰＳ１−６７：ｎ＝９；ＡＰＰ／ＰＳ１−３０ａ：ｎ＝１０；ＷＴ−ビヒクル：ｎ＝１８；ＷＴ−６７＝９；ＷＴ−３０ａ：ｎ＝９，ＡＰＰ／ＰＳ１−３３：ｎ＝１０；ＷＴ−３３：ｎ＝９，ＡＰＰ／ＰＳ１−５０：ｎ＝１１；ＷＴ−５０：ｎ＝９．各ビヒクル処理した遺伝子導入動物群と比べた化合物で処理した遺伝子導入動物群すべてにてｐ＜０．０５（有意でなかった６７の参照記憶を除く）。 クリックコンジュゲートを用いた解析を示す図である。アルキニルエポキシドをマウスに投与し、１０分及び３０分で屠殺し、その後潅流して脳を切除した。アルキニルエポキシドによって修飾されたものを含むタンパク質を脳組織から単離し、アビジンカラムを介して濾過した後、アジ化ビオチニルにクリックした。ストレプトアビジン−ＨＲＰによるウエスタンブロットによって薬剤が修飾したタンパク質を視覚化する。ゲル内消化及びＬＣ−ＭＳ／ＭＳプロテオーム解析によって修飾されたタンパク質標的を同定する。 ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおける２ヵ月齢から３ヵ月齢までの８９による毎日の処理がＬＴＰ（Ａ）、文脈的恐怖記憶（Ｂ）及び参照記憶（Ｃ）の損傷を改善したことを示す図である。指示されない限り、全群でｎ＝１０だった。各ビヒクル処理した遺伝子導入動物群と比べた化合物で処理した遺伝子導入動物群にてｐ＜０．０５ ３３（Ａ）及び８９（Ｂ）による処理後の５ヵ月齢のＡＰＰ／ＰＳ１マウスの海馬におけるＡβ４０及びＡβ４２のレベルを示す図である（種々の群についてｎ＝５）。
カルパインは、多数の細胞内シグナル伝達カスケードを調節する普遍的に発現されるカルシウム依存性システインプロテアーゼであり、細胞骨格の動態及びリモデリングに関わるタンパク質キナーゼを調節することに基本的に関与する（それぞれ参照によってその全体が本明細書に組み入れられるGoll, D. E. et al., Physiological Reviews 2003, 83, 731-801; Perlmutter, L. S. et al., Synapse 1988, 2, 79-88; Veeranna et al., Am J Pathol 2004, 165, 795-805; Shea, T. B. J Neurosci Res 1997, 48, 543-50）。生理的な条件下で細胞内又は細胞外のカルシウム貯蔵からの一時的で局在化したＣａ2+の流動は、局所のカルパイン集団の制御された活性化を生じる（図１）。いったん活性化されると、カルパインは、選択的な４７ｋＤａの内在性のペプチジル阻害剤であるカルパスタチン（ＣＡＰＮ）によって厳しく調節される（それぞれ参照によってその全体が本明細書に組み入れられるGoll, D. E. et al., Physiological Reviews 2003, 83, 731-801; Hanna, R. A. et al., Nature 2008, 456, 409-412; Takashi, M. Trends in Biochemical Sciences 1983, 8, 167-169）。
局所のカルパインのタンパク質分解活性はネイティブのＣａ2+シグナル伝達及び細胞骨格のリモデリングに必須である一方で、病的状態はＣａ2+の過剰なレベルを生じ、広いカルパインの活性化及び調節されないタンパク質分解を生じ、病的状態の増悪を招き得る（それぞれ参照によってその全体が本明細書に組み入れられるDi Rosa, G. et al., J Mol Neurosci 2002, 19, 135-41; Huang, Y. et al., Trends in Molecular Medicine 2001, 7, 355-362）。カルパインのタンパク質分解活性は、心筋虚血、脳虚血及び外傷性脳損傷に続く急性の細胞ストレスの状況における二次的な変性に寄与する（それぞれ参照によってその全体が本明細書に組み入れられるSaatman, K. et al., Neurotherapeutics 2010, 7, 31-42; Hong, S. C. et al., Stroke 1994, 25, 663-9; Yamashima, T. Cell Calcium 2004, 36, 285-293; Pike, B. R. et al., J Cereb Blood Flow Metab 2004, 24, 98-106）。さらに、カルパインの過剰活性化は、ハンチントン病、パーキンソン病（ＰＤ）、白内障形成、緑内障、多発性硬化症（ＭＳ）及びアルツハイマー病（ＡＤ）を含むＣａ2+恒常性の変化に関連する広い範囲の生理的状態における主要な寄与因子であることが示唆されている（それぞれ参照によってその全体が本明細書に組み入れられるDi Rosa, G. et al., J Mol Neurosci 2002, 19, 135-41; Shields, D. C. et al., Proceedings of the National Academy of Sciences 1999, 96, 11486-11491; Dufty, B. M. et al., The American Journal of Pathology 2007, 170, 1725-1738; Vosler, P. et al., Molecular Neurobiology 2008, 38, 78-100; Robertson, L. J. G. et al., Investigative Ophthalmology & Visual Science 2005, 46, 4634-4640; Robertson, L. J. G. et al., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2004, 45, 2653-B288; Govindarajan, B. et al., CNS Neurological Disorders - Drug Targets (Formerly Current Drug Targets - CNS & Neurological Disorders) 2008, 7, 295-304）。血小板における高いカルパイン活性はアテローム血栓症及び糖尿病の病理に対する寄与因子である（それぞれ参照によってその全体が本明細書に組み入れられるRandriamboavonjy, V. et al., Vascul Pharmacol 2012, 56, 210-5; Randriamboavonjy, V. et al., Blood 2012, 120, 415-23）。カルパインのタンパクの直接的な遮断は、グルタミン酸興奮毒性からニューロンを解放することが示されている。カルパインの過剰活性化は、記憶に関連する転写因子ＣＲＥＢのリン酸化の下方調節に関与し、シナプス伝達の弱化及び認知損傷を生じる。この文脈で、選択的で強力なカルパイン阻害剤は様々な疾患状態について治療の可能性を保持し得る。
カルパイン阻害剤を開発する試みは以前から目録に載せられている（参照によってその全体が本明細書に組み入れられるDonkor, I. O., Current Medicinal Chemistry 2000, 7, 1171）。システインプロテアーゼの基質及び阻害剤の構造的命名法は図２に紹介する。報告されたカルパイン阻害剤の大半は、カルパインの活性部位システインを可逆的に又は不可逆的に修飾する求電子反応性基又は「弾頭部」の能力に依存する。天然物のＬ−トランス−エポキシスクシニル−ロイシルアミド（４−グアニジノ）ブタン（図２）であるＥ−６４は、活性部位の修飾にエポキシドを利用する初期に同定されたシステインプロテアーゼ阻害剤だった（それぞれ参照によってその全体が本明細書に組み入れられるParkes, C. et al., Biochem. J. 1985, 230, 509-516; Sugita, H. et al., Journal of Biochemistry 1980, 87, 339-341）。他のプロテアーゼのスーパーファミリー（すなわち、アスパラギン酸、セリン等）に向って非反応性である一方で、Ｅ−６４は生体利用効率の乏しい高親和性で非選択性の不可逆的なカルパイン阻害剤として役立つ（それぞれ参照によってその全体が本明細書に組み入れられるK. Hanada, M. T. et al., Agricultural and Biological Chemistry 1978, 42, 523-528; Barrett, A. J. et al., Biochem. J. 1982, 201, 189-198）。
ＣＡ族システインプロテアーゼ（すなわち、パパイン、カルパイン、及びリソソームのカテプシン）は類似のＰ１−Ｐ３基質結合のポケットを有し、それはＳ２亜部位での疎水性残基（すなわち、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ）について共通の優先性を生じる（それぞれ参照によってその全体が本明細書に組み入れられるGreenbaum, D. et al., Chem Biol 2000, 7, 569-81; Greenbaum, D. C. et al., Chemistry & Biology 2002, 9, 1085-1094）。Ｓ，Ｓエポキシドの立体化学を含有する阻害剤はＣＡ族プロテアーゼのＰ１−Ｐ３ポケットに優先的に結合することが示唆されている（それぞれ参照によってその全体が本明細書に組み入れられるMladenovic, M. et al., The Journal of Physical Chemistry B 2008, 112, 11798-11808; Otto, H. H. et al., Chem Rev 1997, 97, 133-172）。従って、Ｅ−６４及びＰ２位で疎水性残基を含有する関連するＳ，Ｓエポキシドは、これらのプロテアーゼに対して乏しい選択性と高い有効性を示していた。最近の取り組みによって、Ｃａｌ１、Ｃａｌ１cat（カルパイン−１の触媒ドメイン）、リソソームのシステインプロテアーゼカテプシン（Ｃａｔｈ）及びパパインを含むＣＡ族プロテアーゼに対する阻害活性について数々のＰ４−Ｐ３−Ｐ２エポキシスクシネートペプチドが調べられた（参照によってその全体が本明細書に組み入れられるCuerrier, D. et al., J Biol Chem 2007, 282, 9600-11）。これらのペプチドは薬剤のような特性は乏しい一方で、その活性特性は、ペプチド模倣体エポキシド用いた新規の選択的なカルパイン阻害剤の設計及び開発に関する価値ある洞察をもたらす。本明細書では、我々はそのような強力で、選択的なカルパイン阻害剤の開発を記載する。コンピュータで割り当てた設計及びＣａｌ１の阻害データを用いて３つの連続する世代の阻害剤を合成した。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ用いて活性部位システインの修飾を確認し、相対的な選択性は（ｉ）新規のビオチン化プローブを用いてＣａｔｈＢに対して及び（ｉｉ）酵素動態解析を用いてパパインに対して評価した。
Ｅ−６４のエポキシスクシネート部分が強力なシステインプロテアーゼ阻害にとって必須であると考えられる。アルケン及びアジリジン類似体のようなエポキシド弾頭に対する代替は弱い阻害活性を持つ（それぞれ参照によってその全体が本明細書に組み入れられるParkes, C. et al., Biochem. J. 1985, 230, 509-516; Schirmeister, T. Journal of Medicinal Chemistry 1999, 42, 560-572）。エポキシスクシネート部分の取り込みに起因するＡＤＭＥＴの複雑さの可能性に関する懸念にもかかわらず、Ｅ−６４及び誘導体は臨床試験について認可されており（それぞれ参照によってその全体が本明細書に組み入れられるMiyahara, T. et al., Rinsho Yakuri 1985, 16, 537-546; Satoyashi, E. Intern. Med. 1992, 31, 841-846; Scrip. 1992, 1765）、マウスにおけるＥ−６４及び関連するエポキシスクシネート類似体による生体内での有効性及び安全性の複数の報告がある（それぞれ参照によってその全体が本明細書に組み入れられる(M. Tamai, K. M. et al., J. Pharmacobiodyn. 1986, 9, 672-677; Towatari, T. et al., FEBS Letters 1991, 280, 311-15; Hook, G. et al., Biol Chem 2007, 388, 979-83; Masaharu Tamai, S. O. et al., Journal of Pharmacobio-Dynamics 1987, 10, 678-681）。エポキシスクシネート基の保持はまた、有効性に寄与し得るオフターゲットのタンパク質を特定するための活性に基づくプローブの設計も円滑にする。これらの検討を考えると、我々はエポキシスクシネート基を保持することを選択し、ペプチド模倣体の足場の２つの主な部分：（１）Ｐ３／Ｐ４キャップ基及び（２）Ｅ−６４におけるＬ−ロイシンによって占有されるＰ２部位（図２）を修飾し、評価することに関する最適化の取り組みに焦点を当てた。
態様の１つでは、本発明は式（Ｉ）のエポキシド誘導体の部類を指向する。
式（Ｉ）の一部の実施形態では、
Ｒ1は、−ＣＯ2Ｈ又はＣＯ2（Ｃ1−Ｃ4）−アルキルであり；
Ｒ2は、水素又は（Ｃ1−Ｃ4）−アルキルであり、；
Ｒ3は、
であり；
Ｒ4は、−（Ｃ1--Ｃ4）−アルキル、−（ＣＨ2）−ヘテロアリールであり、その際、前記ヘテロアリールは任意で１以上の−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル基によって置換され、又はＲ4はそれが結合する炭素原子と共に−（Ｃ4--Ｃ8）−シクロアルキル環を形成し；
Ｒ5は、−（Ｃ1--Ｃ6）−アルキル−Ｒ6、−（Ｃ2-Ｃ5）−アルケニル、−（Ｃ2-Ｃ5）−アルキニル、−（ＣＨ2）n−アリール、又は−（ＣＨ2）n−ヘテロアリールであり、その際、前記アリール又はヘテロアリールは１以上のＲ7基によって置換され；
Ｒ6は、−Ｎ（Ｒ10）Ｃ（Ｏ）Ｒ8又は−Ｎ（Ｒ10）Ｓ（Ｏ）2Ｒ8であり；
Ｒ7は独立してハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ3）−アルキル、アリール、メチレンジオキシフェニル、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2であり、その際前記アリールは任意で１以上のＲ9基によって置換され；
Ｒ8は、−（Ｃ1--Ｃ6）−アルキル−Ｒ11又はアリールであり、その際、アリールは任意で１以上のＲ9基によって置換され；
Ｒ9は独立して水素、ハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ4）−アルキル、−（Ｃ1--Ｃ4）−ハロアルキル、−（Ｃ2-Ｃ4）−アルキニル、ＣＮ、ＮＯ2、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は
であり；
Ｒ10は独立して水素又は−（Ｃ1--Ｃ4）−アルキルであり；
Ｒ11は、水素又は
であり；
ｎは０〜４の整数であり；
ｐは０〜３の整数である。
一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は式（Ｉ−ａ）の化合物であり、
（Ｉ−ａ）
式中、
Ｒ1は、−ＣＯ2Ｈ又は−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ4）−アルキルであり；
Ｒ2は、水素又は−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキルであり；
Ｒ4は、−（Ｃ1--Ｃ4）−アルキル、−（ＣＨ2）−ヘテロアリールであり、その際、前記ヘテロアリールは任意で１以上の−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル基によって置換され、又はＲ4はそれが結合する炭素原子とともに−（Ｃ4--Ｃ8）−シクロアルキル環を形成し；
Ｒ5は、−（Ｃ1--Ｃ6）−アルキル−Ｒ6、−（Ｃ2-Ｃ5）−アルケニル、−（Ｃ2-Ｃ5）−アルキニル、−（ＣＨ2）n−アリール、又は−（ＣＨ2）n−ヘテロアリールであり、その際、前記アリール又はヘテロアリールは１以上のＲ7基によって置換され；
Ｒ6は、−Ｎ（Ｒ10）Ｃ（Ｏ）Ｒ8又は−Ｎ（Ｒ10）Ｓ（Ｏ）2Ｒ8であり；
Ｒ7は独立してハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ3）−アルキル、アリール、メチレンジオキシフェニル、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2であり、その際、前記アリールは任意で１以上のＲ9基によって置換され；
Ｒ8は、（Ｃ1--Ｃ6）−アルキル−Ｒ11又はアリールであり、その際、アリールは任意で１以上のＲ9基によって置換され；
Ｒ9は独立して水素、ハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ4）−アルキル、−（Ｃ1--Ｃ4）−ハロアルキル、−（Ｃ2-Ｃ4）−アルキニル、ＣＮ、ＮＯ2、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は
であり；
Ｒ10は独立して水素又は−（Ｃ1--Ｃ4）−アルキルであり；
Ｒ11は、水素又は
であり；
ｎは０〜４の整数であり；
ｐは０〜３の整数である。
略語及び定義
用語「本発明の化合物」は本明細書で使用されるとき、式（Ｉ）の化合物又はその亜属若しくは種を意味する。その用語はその塩、水和物及び溶媒和物を包含するように意図される。
用語「本発明の組成物」は本明細書で使用されるとき、本発明の化合物を含む組成物を意味する。本発明の組成物はさらに、たとえば、担体、賦形剤、接触増強剤、潤滑剤、溶媒等のような他の剤を含み得る。
「医薬組成物」は、本発明の１以上の化合物の、たとえば、生理的に許容可能な担体及び賦形剤のような他の化学成分との混合物を指す。医薬組成物の目的は化合物の生物又は対象への投与を円滑にすることである。
用語「薬学上許容可能な塩」は、たとえば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、リン酸、ギ酸、酢酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、酒石酸、グリコール酸、サリチル酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、マロン酸、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、ナフタレン−２−スルホン酸、及び他の酸を含む無機酸又は有機酸に由来する塩、並びに、たとえば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム又はテトラフルオロボレートを含む無機塩基又は有機塩基に由来する塩を含むように意図される。例となる薬学上許容可能な塩は、たとえば、Ｂｅｒｇｅら (その全体が参照によって本明細書に組み入れられるJ. Pharm. Sci. 1977, 66(1))にて見いだされる。
本明細書で使用されるとき、用語「約」はおよそ、おおまかに、前後で又は範囲内で、を意味するように本明細書で使用される。用語「約」を数的範囲と併せて使用する場合、それは言及される数値の上下で境界を広げることによってその範囲を修正する。一般に、用語「約」は、２０％上下（高い又は低い）の分散によって言及された値の上下に数値を修正するのに本明細書で使用される。
用語「担体」は化合物が一緒に投与される希釈剤、補助剤、賦形剤又はビヒクルを指す。そのような医薬担体の非限定例には、たとえば、水及び、ピーナッツ油、大豆油、鉱物油、ゴマ油等のような石油、動物、植物又は合成の起源のものを含む油のような液体が挙げられる。医薬担体はまた、生理食塩水、アカシアゴム、ゼラチン、デンプンペースト、タルク、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素等であってもよい。加えて、補助剤、安定剤、増粘剤、潤滑剤及び着色剤が使用され得る。好適な医薬担体の他の例は、それぞれ参照によってその全体が本明細書に組み入れられるＲｅｍｉｎｇｔｏｎのＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ａｌｆｏｎｓｏ Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｄ．，Ｋｒｉｅｇｅｒ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ （１９９７）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎの：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，第２１版（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００５）；Ｍｏｄｅｒｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，第１２１巻（Ｇｉｌｂｅｒｔ Ｂａｎｋｅｒ ａｎｄ Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ Ｒｈｏｄｅｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（２００２）に記載されている。
一部の実施形態では、Ｒ1は、−ＣＯ2Ｈ又は−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ4）−アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ1は、−ＣＯ2Ｈ又は−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ2）−アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ1は、−ＣＯ2Ｈである。
一部の実施形態では、Ｒ2は、水素又は−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ2は、水素又は−（Ｃ1−Ｃ2）−アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ2は、水素又はメチルである。一部の実施形態では、Ｒ2は、水素である。
一部の実施形態では、Ｒ3は、水素、−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキル、−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキル−アリール−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキル−ＯＲ10、又は
である。一部の実施形態では、Ｒ3は、水素、−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキル又は
である。一部の実施形態では、Ｒ3は、水素、−（Ｃ1−Ｃ2）−アルキル又は
である。一部の実施形態では、Ｒ3は、
である。
一部の実施形態では、Ｒ4は、−（Ｃ1--Ｃ4）−アルキル、−（ＣＨ2）−ヘテロアリールであり、その際、前記ヘテロアリールは任意で１以上の−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル基によって置換され、又はＲ4はそれが結合する炭素原子とともに−（Ｃ4--Ｃ8）−シクロアルキル環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ4は、−（Ｃ1--Ｃ4）−アルキル、−（ＣＨ2）−ヘテロアリールであり、その際、前記ヘテロアリールは任意で１以上の−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル基によって置換される。一部の実施形態では、Ｒ4は、−（Ｃ2-Ｃ4）−アルキル、−（ＣＨ2）−ヘテロアリールであり、その際、前記ヘテロアリールは任意で１以上の−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル基によって置換される。一部の実施形態では、Ｒ4は、−ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）2、−（ＣＨ2）−チアゾリル、−（ＣＨ2）−イミダゾリルであり、その際、前記チアゾリル又はイミダゾリルは任意で１以上の−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル基によって置換される。一部の実施形態では、Ｒ4は、−ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）2、−（ＣＨ2）−チアゾリル、−（ＣＨ2）−イミダゾリルであり、その際、前記チアゾリル又はイミダゾリルは任意で１以上の−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル基によって置換される。一部の実施形態では、Ｒ4は、−（ＣＨ2）−チアゾリル、−（ＣＨ2）−イミダゾリルであり、その際、前記イミダゾリルは、任意でメチル基によって置換される。一部の実施形態では、Ｒ4は、
である。一部の実施形態では、Ｒ4は、
である。一部の実施形態では、Ｒ4は、
である。一部の実施形態では、Ｒ4は、
である。一部の実施形態では、Ｒ4は、
である。一部の実施形態では、Ｒ4は、
である。一部の実施形態では、Ｒ4は、
である。
一部の実施形態では、Ｒ5は、−（Ｃ1--Ｃ6）−アルキル−Ｒ6、−（Ｃ2-Ｃ5）−アルケニル、−（Ｃ2-Ｃ5）−アルキニル、−（ＣＨ2）n−アリール、又は−（ＣＨ2）n−ヘテロアリールであり、その際、前記アリール又はヘテロアリールは任意で１以上のＲ7基によって置換される。一部の実施形態では、Ｒ5は、−（Ｃ1--Ｃ6）−アルキル−Ｒ6、−（Ｃ2-Ｃ5）−アルケニル、−（Ｃ2-Ｃ5）−アルキニル、−（ＣＨ2）n−アリール、又は−（ＣＨ2）n−ヘテロアリールであり、その際、前記アリール又はヘテロアリールは１以上のＲ7基によって置換される。一部の実施形態では、Ｒ5は、−（Ｃ1--Ｃ4）−アルキル−Ｒ6、−（ＣＨ2）n−アリール、又は−（ＣＨ2）n−ヘテロアリールであり、その際、前記アリール又はヘテロアリールは１以上のＲ7基によって置換される。一部の実施形態では、Ｒ5は−（ＣＨ2）n−アリール、又は−（ＣＨ2）n−ヘテロアリールであり、その際、前記アリール又はヘテロアリールは１以上のＲ7基によって置換される。一部の実施形態では、Ｒ5は−（ＣＨ2）n−フェニル、又は−（ＣＨ2）n−ヘテロアリールであり、その際、前記フェニル又はヘテロアリールは１以上のＲ7基によって置換される。一部の実施形態では、Ｒ5はチアゾリル又は−（ＣＨ2）−トリアゾリルであり、その際、前記チアゾリル又はトリアゾリルはＲ7基によって置換される。一部の実施形態では、Ｒ5は
である。一部の実施形態では、Ｒ5は
である。一部の実施形態では、Ｒ5は
である。
一部の実施形態では、Ｒ6は−Ｎ（Ｒ10）Ｃ（Ｏ）Ｒ8、−Ｎ（Ｒ10）Ｓ（Ｏ）2Ｒ8、−Ｎ（Ｒ10）Ｃ（ＮＨ）Ｎ（Ｒ10）2である。一部の実施形態では、Ｒ6は−Ｎ（Ｒ10）Ｃ（Ｏ）Ｒ8である。一部の実施形態では、Ｒ6は−Ｎ（Ｒ10）Ｓ（Ｏ）2Ｒ8である。
一部の実施形態では、Ｒ7は独立してハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ3）−アルキル、アリール、メチレンジオキシフェニル、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2であり、その際、前記アリールは任意で１以上のＲ9基によって置換される。一部の実施形態では、Ｒ7は独立してハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ3）−アルキル、フェニル、メチレンジオキシフェニル、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は-Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2であり、その際、前記フェニルは任意で１以上のＲ9基によって置換される。一部の実施形態では、Ｒ7は、任意で１以上のＲ9基によって置換されるフェニルである。
一部の実施形態では、Ｒ8は−（Ｃ1--Ｃ6）−アルキル−Ｒ11又はアリールであり、その際、アリールは任意で１以上のＲ9基によって置換される。一部の実施形態では、Ｒ8は−（Ｃ1--Ｃ6）−アルキル−Ｒ11又はフェニルであり、その際、フェニルは任意で１以上のＲ9基によって置換される。
一部の実施形態では、Ｒ9は独立して水素、ハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ4）−アルキル、−（Ｃ1--Ｃ4）−ハロアルキル、−（Ｃ2-Ｃ4）−アルキニル、ＣＮ、ＮＯ2、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は
である。一部の実施形態では、Ｒ9は独立して水素、ハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル、−（Ｃ1--Ｃ2）−ハロアルキル、−（Ｃ2-Ｃ4）−アルキニル、ＣＮ、ＮＯ2、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は
である。一部の実施形態では、Ｒ9は独立してハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル、−（Ｃ1--Ｃ2）−ハロアルキル、−（Ｃ2-Ｃ4）−アルキニル、ＣＮ、ＮＯ2、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は
である。一部の実施形態では、Ｒ9は独立してハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル、−（Ｃ1--Ｃ2）−ハロアルキル、−（Ｃ2-Ｃ4）−アルキニル、ＮＯ2、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2又は
である。一部の実施形態では、Ｒ9は独立してハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル、−（Ｃ1--Ｃ2）−ハロアルキル、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は
である。一部の実施形態では、Ｒ9は独立してハロゲン、メチル、ハロメチル、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は
である。一部の実施形態では、Ｒ9は独立してＦ、Ｂｒ、Ｃｌ、メチル、トリフルオロメチル、−Ｓ（Ｏ）2ＮＨ2、又は
である。一部の実施形態では、Ｒ9は独立してＦ、Ｂｒ、Ｃｌ、メチル、トリフルオロメチル、又は
である。一部の実施形態では、Ｒ9は独立してＦ、Ｂｒ、Ｃｌ、メチル、又はトリフルオロメチルである。一部の実施形態では、Ｒ9は独立してＦ、Ｂｒ、Ｃｌ、又はトリフルオロメチルである。一部の実施形態では、Ｒ9はハロゲンである。一部の実施形態では、Ｒ9は独立してＦ、Ｂｒ、又はＣｌである。一部の実施形態では、Ｒ9は独立してＦ又はＢｒである。一部の実施形態では、Ｒ9はＦである。
一部の実施形態では、Ｒ10は独立して水素又は−（Ｃ1--Ｃ4）−アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ10は独立して水素又は−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ10は独立して水素又はメチルである。一部の実施形態では、Ｒ10は水素である。一部の実施形態では、Ｒ10はメチルである。
一部の実施形態では、Ｒ11は水素又は
である。一部の実施形態では、Ｒ11は水素である。一部の実施形態では、Ｒ11は
である。
一部の実施形態では、ｎは、０〜４の整数である。一部の実施形態では、ｎは、０〜３の整数である。一部の実施形態では、ｎは、０〜２の整数である。一部の実施形態では、ｎは、０又は１である。一部の実施形態では、ｎは、１〜４の整数である。一部の実施形態では、ｎは、１〜３の整数である。一部の実施形態では、ｎは、０である。一部の実施形態では、ｎは、１である。一部の実施形態では、ｎは、２である。
一部の実施形態では、ｐは、０〜３の整数である。一部の実施形態では、ｐは、０〜２の整数である。一部の実施形態では、ｐは０又は１である。一部の実施形態では、ｐは０である。一部の実施形態では、ｐは１である。
一部の実施形態では、化合物はＲ4が結合する炭素原子にて（Ｓ）−立体配置である。一部の実施形態では、化合物はＲ4が結合する炭素原子にて（Ｒ）−立体配置である。
一部の実施形態では、化合物はエポキシドにて（Ｓ，Ｓ）−立体配置である。一部の実施形態では、化合物はエポキシドにて（Ｒ，Ｒ）−立体配置である。
一部の実施形態では、
Ｒ1は、−ＣＯ2Ｈ又は−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ4）−アルキルであり；
Ｒ2は、水素又は−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキルであり；
Ｒ4は、−（Ｃ1--Ｃ4）−アルキル、−（ＣＨ2）−ヘテロアリールであり、その際、前記ヘテロアリールは任意で１以上の−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル基によって置換され；
Ｒ5は、−（Ｃ1--Ｃ4）−アルキル−Ｒ6、−（ＣＨ2）n−アリール、又は−（ＣＨ2）n−ヘテロアリールであり、その際、前記アリール又はヘテロアリールは１以上のＲ7基によって置換され；
Ｒ6は、−Ｎ（Ｒ10）Ｃ（Ｏ）Ｒ8又は−Ｎ（Ｒ10）Ｓ（Ｏ）2Ｒ8であり；
Ｒ7は独立してハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ3）−アルキル、アリール、メチレンジオキシフェニル、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2であり、その際、前記アリールは任意で１以上のＲ9基によって置換され；
Ｒ8は、−（Ｃ1--Ｃ6）−アルキル−Ｒ11又はアリールであり、その際、アリールは任意で１以上のＲ9基によって置換され；
Ｒ9は独立して水素、ハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル、−（Ｃ1--Ｃ2）−ｈａｌｏアルキル、−（Ｃ2-Ｃ4）−アルキニル、ＣＮ、ＮＯ2、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は
であり；
Ｒ10は独立して水素又は−（Ｃ1--Ｃ4）−アルキルであり；
Ｒ11は水素又は
であり；
ｎは０〜２の整数であり、
ｐは０〜１の整数である。
一部の実施形態では、
Ｒ1は、−ＣＯ2Ｈ又は−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ4）−アルキルであり；
Ｒ2は水素又は−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキルであり；
Ｒ4は、−（Ｃ1--Ｃ4）−アルキル、−（ＣＨ2）−チアゾリル、−（ＣＨ2）−イミダゾリルであり、その際、前記チアゾリル又はイミダゾリルは任意で１以上の−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル基によって置換され；
Ｒ5は、−（ＣＨ2）n−アリール、又は−（ＣＨ2）n−ヘテロアリールであり、その際、前記アリール又はヘテロアリールは１以上のＲ7基によって置換され；
Ｒ7は独立してハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ3）−アルキル、アリール、メチレンジオキシフェニル、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2であり、その際、前記アリールは任意で以上のＲ9基によって置換され；
Ｒ9は独立して水素、ハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル、−（Ｃ1--Ｃ2）−ハロアルキル、−（Ｃ2-Ｃ4）−アルキニル、ＣＮ、ＮＯ2、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は
であり；
Ｒ10は独立して水素又は−（Ｃ1--Ｃ4）−アルキルであり；
ｎは０〜２の整数であり；
ｐは０〜１の整数である。
一部の実施形態では、
Ｒ1は、−ＣＯ2Ｈ又は−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ2）−アルキルであり；
Ｒ2は水素又は−（Ｃ1−Ｃ2）−アルキルであり；
Ｒ4は、−ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）2、−（ＣＨ2）−チアゾリル、−（ＣＨ2）−イミダゾリルであり、その際、前記チアゾリル又はイミダゾリルは任意で１以上の−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル基によって置換され；
Ｒ5は、−（ＣＨ2）n−フェニル、又は−（ＣＨ2）n−ヘテロアリールであり、その際、前記フェニル又はヘテロアリールは１以上のＲ7基によって置換され；
Ｒ7は独立してハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ3）−アルキル、フェニル、メチレンジオキシフェニル、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は -Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2であり、その際、前記フェニルは任意で１以上のＲ9基によって置換され；
Ｒ9は独立して水素、ハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル、−（Ｃ1--Ｃ2）−ハロアルキル、−（Ｃ2-Ｃ4）−アルキニル、ＣＮ、ＮＯ2、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は
であり；
Ｒ10は独立して水素又は−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキルであり；
ｎは０〜２の整数であり；
ｐは０〜１の整数である。
一部の実施形態では、
Ｒ1は、−ＣＯ2Ｈ又は−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ2）−アルキルであり；
Ｒ2は水素又は−（Ｃ1−Ｃ2）−アルキルであり；
Ｒ4は、−ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）2、−（ＣＨ2）−チアゾリル、−（ＣＨ2）−イミダゾリルであり、その際、前記チアゾリル又はイミダゾリルは任意で１以上の−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル基によって置換され；
Ｒ5はチアゾリル又は−（ＣＨ2）−トリアゾリルであり、その際、前記チアゾリル又はトリアゾリルＲ7基によって置換され；
Ｒ7は任意で１以上のＲ9基によって置換されるフェニルであり；
Ｒ9は独立して水素、ハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル、−（Ｃ1--Ｃ2）−ハロアルキル、−（Ｃ2-Ｃ4）−アルキニル、ＣＮ、ＮＯ2、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は
であり；
Ｒ10は独立して水素又は−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキルであり；
ｐは０〜１の整数である。
一部の実施形態では、
Ｒ1は、−ＣＯ2Ｈ又は−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ2）−アルキルであり；
Ｒ2は水素又は−（Ｃ1−Ｃ2）−アルキルであり；
Ｒ4は、−（ＣＨ2）−チアゾリル、−（ＣＨ2）−イミダゾリルであり、その際、前記イミダゾリルは任意でメチル基によって置換され；
Ｒ5はチアゾリル又は−（ＣＨ2）−トリアゾリルであり、その際、前記チアゾリル又はトリアゾリルＲ7基によって置換され；
Ｒ7は任意で１以上のＲ9基によって置換されるフェニルであり；
Ｒ9は独立して、ハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル、−（Ｃ1--Ｃ2）−ハロアルキル、−（Ｃ2-Ｃ4）−アルキニル、ＣＮ、ＮＯ2、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は
であり；
Ｒ10は独立して水素又はメチルであり；
ｐは０〜１の整数である。
一部の実施形態では、
Ｒ1は、−ＣＯ2Ｈ又は−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ2）−アルキルであり；
Ｒ2は水素であり；
Ｒ4は
であり;
Ｒ5は
であり;
Ｒ7は任意で１以上のＲ9基によって置換されるフェニルであり；
Ｒ9は独立して、ハロゲン、−（Ｃ1--Ｃ2）−アルキル、−（Ｃ1--Ｃ2）−ハロアルキル、−（Ｃ2-Ｃ3）−アルキニル、ＮＯ2、−Ｓ（Ｏ）2ＮＨ2、又は
であり；
ｐは０〜１の整数である。
一部の実施形態では、化合物は、
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（２，６−ジフルオロフェニルアミノ）−４−メチル−１−オキソペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−４−メチル−１−オキソペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；
（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−４−メチル−１−オキソペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）ｐｒｏｐａｎ−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−エチニルフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−３−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（（１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；及び
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（（１−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸から選択される。
一部の実施形態では、化合物は、
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（２，６−ジフルオロフェニルアミノ）−４−メチル−１−オキソペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−４−メチル−１−オキソペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−エチニルフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（（１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；及び
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（（１−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸から選択される。
一部の実施形態では、化合物は、
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（（１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；及び
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（（１−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸から選択される。
別の態様では、本発明は式（Ｉ）の化合物及び薬学上許容可能な担体を含む組成物を指向する。
別の態様では、本発明は、治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物の投与を含む対象において疾患を治療する方法を指向する。一部の実施形態では、疾患はカルパインの過剰活性化を特徴とする。一部の実施形態では、疾患は、白内障形成、緑内障、アテローム血栓症、又は糖尿病である。一部の実施形態では、疾患は神経障害である。一部の実施形態では、疾患は神経変性疾患である。一部の実施形態では、神経変性疾患はハンチントン病、パーキンソン病、多発性硬化症又はアルツハイマー病である。一部の実施形態では、疾患はアルツハイマー病である。
別の態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物を含む、治療上有効な量の組成物の投与を含む対象において神経変性疾患を治療する方法を指向する。一部の実施形態では、疾患はアルツハイマー病である。
別の態様では、本発明は、治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物の投与を含む対象において長期増強を高める方法を指向する。一部の実施形態では、対象は神経変性疾患を有する。一部の実施形態では、神経変性疾患はアルツハイマー病である。
別の態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物を含む、治療上有効な量の組成物の投与を含む対象において長期増強を高める方法を指向する。一部の実施形態では、対象は神経変性疾患を有する。一部の実施形態では、神経変性疾患はアルツハイマー病である。
別の態様では、本発明は、治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物の投与を含む対象において記憶を改善する方法を指向する。一部の実施形態では、対象は神経変性疾患を有する。一部の実施形態では、神経変性疾患はアルツハイマー病である。
別の態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物を含む、治療上有効な量の組成物の投与を含む対象において記憶を改善する方法を指向する。一部の実施形態では、対象は神経変性疾患を有する。一部の実施形態では、神経変性疾患はアルツハイマー病である。
別の態様では、本発明は、治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物の投与を含む対象においてシナプス機能を改善する方法を指向する。一部の実施形態では、シナプス機能はシナプスの可塑性を含む。一部の実施形態では、シナプスの可塑性は学習、記憶又はその組み合わせを含む。一部の実施形態では、シナプスの可塑性は長期増強（ＬＴＰ）を含む。一部の実施形態では、対象は神経変性疾患を有する。一部の実施形態では、神経変性疾患はアルツハイマー病である。
別の態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物を含む、治療上有効な量の組成物の投与を含む対象においてシナプス機能を改善する方法を指向する。一部の実施形態では、シナプス機能はシナプスの可塑性を含む。一部の実施形態では、シナプスの可塑性は学習、記憶又はその組み合わせを含む。一部の実施形態では、シナプスの可塑性は長期増強（ＬＴＰ）を含む。一部の実施形態では、対象は神経変性疾患を有する。一部の実施形態では、神経変性疾患はアルツハイマー病である。
本発明の別の態様は、神経変性疾患を患う対象にて記憶保持を高める方法を提供し、該方法は式（Ｉ）の化合物又は式（Ｉ）の化合物を含む組成物の治療上有効な量を対象に投与することを含む。
一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物が投与される。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物を含む組成物が投与される。
例となる神経変性疾患及びそれを治療する方法は、それぞれその全体が参照によって本明細書に組み入れられるＷＯ２０１０／０７４７８３、ＷＯ２０１１／０７２２４３及びＷＯ２０１２／０８８４２０にも記載されている。
投与に好適な医薬組成物に式（Ｉ）の化合物を組み入れることができる。そのような組成物は式（Ｉ）の化合物及び薬学上許容可能な担体を含むことができる。従って、一部の実施形態では、本発明の化合物は医薬組成物に存在する。
本発明によれば、薬学上許容可能な担体は、医薬投与に適合性の任意の溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤等及びそのすべてを含むことができる。薬学上有効な物質に対するそのような媒体及び剤の使用は当該技術で周知である。活性化合物に適合性である任意の従来の媒体又は剤を使用することができる。補完的な活性化合物も組成物に組み入れることができる。
本明細書で記載される治療応用のいずれかを、たとえば、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ウサギ、サル、ブタ、ヒツジ、ヤギ又はヒトのような哺乳類を含む、そのような治療を必要とする対象に適用することができる。一部の実施形態では、対象はマウス、ラット又はヒトである。一部の実施形態では、対象はマウスである。一部の実施形態では、対象はラットである。一部の実施形態では、対象はヒトである。
本発明の医薬組成物は意図される投与経路に適合するように製剤化される。投与経路の例には、非経口、たとえば、静脈内、皮内、皮下、経口（たとえば、吸入）、経皮（局所）、経粘膜及び直腸の投与が挙げられる。非経口、皮内又は皮下に適用するために使用される溶液又は懸濁液は、以下の成分：たとえば、注射用水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒のような無菌の希釈剤；たとえば、ベンジルアルコール又はメチルパラベンのような抗菌剤；たとえば、アスコルビン酸又は重亜硫酸ナトリウムのような抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸のようなキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩のような緩衝液；たとえば、塩化ナトリウム又はデキストロースのような浸透圧の調整用の剤を含むことができる。ｐＨは、たとえば、塩酸又は水酸化ナトリウムのような酸又は塩基によって調整することができる。非経口製剤は、アンプル、使い捨ての注射器又はガラス製若しくはプラスチック製の複数回用量のバイアルに被包することができる。
注射使用に好適な医薬組成物は、無菌の水溶液（水溶性の場合）又は分散液及び無菌の注射用の溶液又は分散液の即時調製のための無菌の粉末を含むことができる。静脈内投与については、無菌の担体には、生理的な生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＭ（商標）（ニュージャージー州、パーシッパニーのＢＡＳＦ）、又はリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。あらゆる場合において、組成物は無菌でなければならず、容易な注射可能性が存在する程度に流動性であるべきである。それは、製造及び保存の条件下で安定でなければならず、細菌や真菌のような微生物の汚染作用に対して守られなければならない。担体は、たとえば、水、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールのような薬学上許容可能なポリオール、及びそれらの好適な混合物を含有する溶媒又は分散媒であることができる。適切な流動性は、レシチンのようなコーティングの使用によって、分散液の場合、要求される粒度を維持することによって及び界面活性剤の使用によって、維持することができる。微生物の作用の予防は、種々の抗菌剤及び真菌剤、たとえば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸及びチメロサールによって達成することができる。多くの場合、等張剤、たとえば、糖類、マンニトール、ソルビトールのような多価アルコール、塩化ナトリウムを組成物に含めることが有用であり得る。注射用組成物の延長した吸収は、吸収を遅らせる剤、たとえば、モノステアリン酸アンモニウム及びゼラチンを組成物に含めることによってもたらすことができる。
無菌の注射用溶液は、必要に応じて、単独で又は本明細書で列挙される成分の組み合わせで、必要な量の化合物を適当な溶媒に組み入れ、その後、濾過滅菌することによって調製することができる。一般に、分散液は、基本的な分散媒及び本明細書で列挙されるものからの必要とされる他の成分を含有する無菌ビヒクルに活性化合物を組み入れることによって調製される。無菌の注射溶液を調製するための無菌の粉末の場合、有用な調製方法の例は、以前滅菌濾過したその溶液から有効成分プラス追加の所望の成分の粉末を得る真空乾燥及び凍結乾燥である。
経口組成物は一般に不活性の希釈剤又は食用担体を含む。それらはゼラチンカプセルに被包することができ、又は錠剤に圧縮することができる。経口の治療投与の目的で、活性化合物を賦形剤とともに組み入れ、錠剤、トローチ又はカプセルの形状で使用することができる。口洗剤として使用するために流体担体を用いて経口組成物を調製することもでき、その際、流体担体中の化合物を経口で適用し、口の中で回す、喀出する又は飲み込む。
薬学上相溶性の結合剤及び／又は補助剤物質を組成物の一部として含めることができる。錠剤、丸薬、カプセル、トローチ等は以下の成分又は類似の性質の化合物：たとえば、微細結晶セルロース、トラガカントゴム又はゼラチンのような結合剤；たとえば、デンプン又はラクトースのような賦形剤、たとえば、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ又はコーンスターチのような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム又はステロートのような潤滑剤；コロイド状の二酸化ケイ素のような流動促進剤；スクロース又はサッカリンのような甘味剤；ペパーミント、サリチル酸メチル又はオレンジ風味のような風味剤のいずれかを含有することができる。
経粘膜又は経皮の手段によって全身性投与を行うことができる。経粘膜又は経皮の投与については、浸透されるべきバリアに適当な浸透剤を製剤で使用する。そのような浸透剤は一般に当該技術で既知であり、それには、たとえば、経粘膜投与については、界面活性剤、胆汁塩及びフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は鼻内スプレー又は座薬の使用を介して達成することができる。経皮投与については、一般に当該技術で知られるように、活性化合物を軟膏剤、軟膏、ジェル又はクリームに製剤化する。
エポキシド系のシステインプロテアーゼ阻害剤を当業者の視野の範囲内の方法によって合成する。そのような好適な誘導体を合成することができる例となる方法は以下のとおりである。スキーム１にてＰ２位におけるＲ1置換基と称する天然の又は非天然のペプチド模倣体残基を持ち、Ｒ2と称されるＰ３／Ｐ４キャップ基を変化させるペプチド模倣体エポキシドのライブラリの生成。
スキーム１.本発明の化合物の例となる合成
最初に、たとえば、ＨＯＢＴ及びＥＤＣＩのような例となるカップリング試薬を用いて又はＣＤＩの存在下で典型的なペプチドカップリング手順に従って、Ｒ2−アミン（Ａ）を市販の保護された（ＰＧは保護基を意味する）アミノ酸（Ｂ）にカップリングさせ、相当する保護されたペプチド模倣体の足場（Ｃ）（スキーム１）を得ることができる。エポキシスクシネートＤは、公開された手順（その全体が参照によって本明細書に組み入れられるSaito, S. et al., Organic Syntheses 1996, 73, 184）に従ってＬ−ＤＥＴ又はＤ−ＤＥＴのいずれかから出発する３工程で合成することができる。保護基の取り外しに続いて、たとえば、ＥＤＣＩ及びＨＯＢＴのようなカップリング試薬を用いて適当なペプチド模倣体をエポキシスクシネートとカップリングさせて相当するエポキシドエステル（Ｅ）を得ることができる。たとえば、ＬｉＯＨのような塩基を用いたエステルの鹸化によって類似のエポキシ酸Ｆを提供する。
主要な最適化の間、ライブラリの開発には分岐合成のアプローチが好まれるけれども、エポキシ官能性が誘導体化の後に組み入れられる代替の収束合成を採用することもできる（スキーム２）。例となる収束経路は従来の手段によるＧの合成を伴い、その後エポキシドＤを導入し、化合物Ｆに最終的に変換する。Ｇ’のようなカギとなる中間体を用いて化合物Ｆ’のライブラリを開発する分岐法も開発されている。
スキーム２．本発明の化合物の合成のための例となる収束法及び分岐法
たとえば、銅が触媒するヒュスゲン環状付加、ａ．ｋ．ａ．「クリックケミストリー」のような双極性環状付加反応は、他の官能基との交差反応性の低さゆえに過去１０年大きく注目され、本発明のエポキシド化合物のライブラリの生成のために有用なツールとなっている。たとえば、ＴＢＴＡの助けを借りて銅が触媒するヒュスゲン環状付加（スキーム３）を用いてアジドとともにＧ”のようなカギとなるアルキニル中間体を官能化して相当するトリアゾール−エポキシエステルを得、その後鹸化してＦ”を得ることができる。
スキーム３．本発明のトリアゾールを含有する化合物へのクリックケミストリー経路
一部の実施形態では、本発明の化合物は以下から選択される。




一部の実施形態では、本発明の化合物は約１μＭ未満のＩＣ50にてシステインプロテアーゼの阻害を示す。一部の実施形態では、ＩＣ50は約５００ｎＭ未満である。一部の実施形態では、ＩＣ50は約２５０ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、又は約１ｎＭ未満である。
一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物はシステインプロテアーゼの選択的阻害剤である。一部の実施形態では、化合物はカルパインを阻害する。
本明細書で開示される実施形態の１以上の特徴が本発明の範囲内で組み合わせられ及び／又は再構成されて本発明の範囲内であるさらなる実施形態を生じてもよいことが認識されるであろう。当業者は、単なる日常の実験を用いて、本明細書で記載される本発明の特定の実施形態に対する多数の同等物を認識するであろうし、解明することができるであろう。そのような同等物は本発明の範囲内であることが意図される。
以下の非限定の実施例によって本発明をさらに説明する。
＜実施例＞
本発明のさらに完全な理解を円滑にするために実施例を以下に提供する。以下の実施例は本発明を行う及び実践する例となる方法を説明する。しかしながら、本発明の範囲はこれらの実施例で開示される特定の実施形態に限定されることはなく、代わりの方法を利用して類似の結果を得ることができるので、それらは単に説明に役立つだけである。
実施例１：エポキシドの選択
幾つかの新規の化合物を先ず合成し、遊離のチオールとの反応に向かって安定であり、マイクロモル以下の能力でＣａｌ１阻害剤を提供することを認めた。４５のエポキシドのセットを合成し、Ｃａｌ１の阻害についてアッセイした（＜１００ｎＭのＩＣ50を持つ化合物を選択するために）。この段階の主な目標は、パラメータ化のためのトレーニングセットのデータ及び計算法の補正を提供することだった。Ｐ２認識基はＣａｔｈＢ対してＣａｌ１に向かう選択性にとって重要である。従って、Ｐ３認識基の修飾を用いて多様化を可能にした。第３世代の阻害剤の最終的な改良として、合成を開発してクリックケミストリーを用いてＰ３認識基の多様化を可能にした。複数のＣａｌ１結晶構造に対するドッキングスコアと共有結合修飾についての一時的な状態に関連する幾何パラメータの組み合わせを用いて幾つかの化合物をコンピュータでスクリーニングした。このＱＳＡＲ解析によってＮｓｉｇ値を得て、合成と酵素アッセイのために、それから阻害剤を選択した。貧弱な阻害剤であると予想された化合物は高いＩＣ50値を持つが、高いＮｓｉｇ値を持つ５つの化合物のうち４つはマイクロモル以下の阻害剤だった。
実施例２：合成方法
特に言及されない限り、反応はすべてオーブンで乾燥したガラス器具にて乾燥アルゴンの雰囲気下で行った。示した反応温度は反応槽のものを指す一方で、室温（ｒｔ）は２５℃として言及される。ジクロロメタン（ＣＨ2Ｃｌ2）はＣａＨ2上で蒸留し、ＴＨＦはＮａ（ｓ）上で蒸留した。他の溶媒はすべてＡｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ社から購入した無水品質のものであり、受け取ったとおりに使用した。純粋な反応生成物は通常、五酸化リンの存在下で高真空下にて乾燥させた。市販の出発物質及び試薬はＡｌｄｒｉｃｈ、ＴＣＩ及びＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入し、特定されない限り、受け取ったとおりに使用した。（５×２０ｃｍ、６０Å、２５０μｍ）の分析用薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）を行った。２５４ｎｍのＵＶランプを用いて視覚化を達成した。1Ｈ及び13ＣのＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ４００ＭＨｚの分光計又はＢｒｕｋｅｒ ＤＰＸ４００ＭＨｚの分光光度計のいずれかにて記録した。内部標準（それぞれ1Ｈ、13Ｃについて［ＣＤＣｌ3７．２７ｐｐｍ，７７．２３ｐｐｍ］［ＤＭＳＯ−ｄ6 ２．５ｐｐｍ，３９．５１ｐｐｍ］及び［ＭｅＯＤ−ｄ4 ４．７８，４９．０］）として溶媒共鳴と共に化学シフトをｐｐｍで報告した。データは以下のように報告した：化学シフト、多重度（ｓ＝一重項、ｄ＝二重項、ｄｄ＝二重項の二重項、ｔ＝三重項、ｑ＝四重項、ｂｒ＝広い、ｍ＝多重項、ａｂｑ＝ａｂ四重項）、プロトンの数、及びカップリング定数。低分解能質量スペクトルはＡｇｉｌｅｎｔ６３００イオン−トラップＬＣ／ＭＳにて取得した。高分解能質量スペクトルのデータはＳｈｉｍａｄｚｕ ＱＴＯＦ６５００を用いて社内で採取した。生物試験に提出した化合物はすべて分析用ＨＰＬＣによって＞９５％純粋であることを確認した。
アリールアミンのＮ保護ペプチド模倣体へのカップリング
アルゴンのもとで０℃に維持した最少量のＤＭＦ（約３ｍＬ／ミリモル）に溶解した適当なＢｏｃ保護したカルボン酸（１．０当量）を丸底フラスコに充填した。次いでＥＤＣＩ（１．２当量）を一気に加え、懸濁液を均質になるまで撹拌し（通常、＜５分間）、その後ＨＯＢｔ（１．５当量）を加えた。さらに１５分間撹拌した後、ＤＭＦ（約２ｍＬ／ミリモル）中のアミン（１．０当量）を一滴ずつ加え、反応物を室温に温め、ＴＬＣによってモニターした。８時間後アミンがＴＬＣ上に残っていた場合、反応を再び０℃にし、追加のＥＤＣＩ（０．５当量）を加え、その後さらに４時間撹拌した。１ＮのＨＣｌで反応物をｐＨ約４に酸性化し、ＣＨ2Ｃｌ2で抽出した（３×）。合わせた有機抽出物を１ＮのＨＣｌ（２×）及びブライン（１×）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させ、真空で濃縮し、カラムクロマトグラフィで精製して所望のペプチド模倣体の足場を得た。
エポキシドの合成
ブロモヒドリン（２ａ＆２ｂ）の大量生産のための一般的手順
スキーム４．エポキシド弾頭部の合成
試薬：ｉ）酢酸中のＨＢｒ（３３％）、ｒ．ｔ、１２ｈ、次いで塩化アセチル、還流、１２ｈ、７５−８０％；ｉｉ）ＤＢＵ、Ｅｔ2Ｏ、０℃、１２ｈ、７０−８０％；ｉｉｉ）エタノール性ＫＯＨ、０℃、６ｈ、７５−８５％
ＨＢｒ（酢酸中３３％、１７５ｍｌ、９７０ミリモル）を０℃で１時間かけて一滴ずつＤ−ＤＥＴ（５０ｇ、２４２ミリモル）に加え、反応物を室温に温め、１２時間撹拌した（スキーム４）。反応混合物を次いで氷（約５００ｇ）に注ぎ、得られた水性層をＥｔ2Ｏ（４×２００ｍｌ）にて抽出した。合わせた有機抽出物をＨ2Ｏ（２×３００ｍｌ）、ブライン（２×２００ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。得られた浅黄色の油を無水ＥｔＯＨ（３００ｍｌ）に溶解し、塩化アセチル（８ｍｌ、２４２ミリモル）を一滴ずつ加えた。溶液を穏やかな還流下で７時間加熱し、室温に冷却し、減圧下で濃縮して黄色の油を得た。減圧下によって分別真空蒸留により粗生成物を精製して透明な無色の油として所望のブロモヒドリンを得た（２ａ、５４．０ｇ、９９．１％；２ｂ、５１．２ｇ、９４．０％）。
（２Ｒ，３Ｒ）−ジエチル２−ブロモ−３−ヒドロキシスクシネート（２ａ）．1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ４．７３−４．７２（ｄ，１Ｈ，４．０Ｈｚ）；４．６９−４．６８（ｂｔ，１Ｈ）；４．３４−４．２４（ｍ，４Ｈ）；３．４３−３．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）；１．３５−１．３１（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：１７０．２７，１６６．６２，７２．５１，６２．８４，６２．６２，４７．７０，１４．０３，１３．９２
（２Ｓ，３Ｓ）−ジエチル２−ブロモ−３−ヒドロキシスクシネート（２ｂ）．1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ４．７３−４．７２（ｄ，１Ｈ，４．０Ｈｚ）；４．６９−４．６８（ｂｔ，１Ｈ）；４．３４−４．２４（ｍ，４Ｈ）；３．４３−３．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）；１．３５−１．３１（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：１７０．２７，１６６．６２，７２．５１，６２．８４，６２．６２，４７．７０，１４．０３，１３．９２
（２Ｓ，３Ｓ）−ジエチルオキシラン−２，３−ジカルボキシレート（３ａ）。２ａ（３８．１ｇ，１４２ミリモル）を無水Ｅｔ2Ｏ（１００ｍｌ）に溶解し、０℃にて１時間一滴ずつＤＢＵ（Ｅｔ2Ｏ［５０ｍｌ］中３２．３ｇ，２１２．４ミリモル）を加えた。反応物を室温に温め、さらに４時間撹拌した。ｐＨ約５までの冷たい１ＮのＨＣｌによって反応を止めた。得られた水性層をＥｔ2Ｏ（３×１５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（２×１００ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濃縮してわずかに黄色の油として（２１.５ｇ、８０．７％収率）純粋な生成物を得た。生成物の純度は通常、ブロモヒドリン出発物質のそれを反映する。必要に応じて精製には分別真空蒸留を使用することができる。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ４．３６−４．２２（ｍ，４Ｈ）；３．６７（ｓ，２Ｈ）；１．３５−１．３１（ｔ，６Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：１６６．７５，６２．２１，５２．０１，１４．０１
（２Ｒ，３Ｒ）−ジエチルオキシラン−２，３−ジカルボキシレート（３ｂ）。以下の量：２ｂ（３４．６ｇ，１２９ミリモル）；Ｅｔ2Ｏ（１００ｍｌ）；ＤＢＵ（Ｅｔ2Ｏ［５０ｍｌ］中２９．４ｇ，１９３ミリモル）用いて３ａについての一般的な手順に従って；無色の油として３ｂを得た（１８．１ｇ，７４．８％）．1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ４．３６−４．２２（ｍ，４Ｈ）；３．６７（ｓ，２Ｈ）；１．３５−１．３１（ｔ，６Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：１６６．７５，６２．２１，５２．０１，１４．０１．
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（エトキシカルボニル）オキシラン−２−カルボン酸（４）。ＫＯＨ（ＥｔＯＨ［５０ｍｌ］中４．２ｇ，６４ミリモル）のエタノール性溶液を３ａ（ＥｔＯＨ（２０ｍｌ）中９．７ｇ，６３ミリモル）に０℃にて３０分間一滴ずつ加え、次いで反応を室温で８時間継続した。得られた粘性溶液を冷水（１５０ｍｌ）で希釈し、ＥＡ（２×２００ｍｌ）で抽出した。水性層を１ＮのＨＣｌによってｐＨ約４に酸性化し、ＥＡで抽出した（３×１５０ｍｌ）。合わせた有機抽出物をブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濃縮して無色の油として純粋なエポキシドモノエステル４を得た（８．９ｇ、８６．９％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ７．５７（ｂｒ，１Ｈ）；４．３５−４．２４（ｍ，２Ｈ）；３．７３（ｓ，１Ｈ）；３．７２（ｓ，１Ｈ）；１．３６−１．３２（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：１７１．６１，１６６．４０，６２．４５，５２．２０，５１．４５，１３．８９
（２Ｒ，３Ｒ）−３−（エトキシカルボニル）オキシラン−２−カルボン酸（５）。以下の量：３ｂ（１５．２ｇ，８１ミリモル）；ＫＯＨ（ＥｔＯＨ［５０ｍｌ］中４．５３ｇ，８１ミリモル）を用いて４についての一般的な手順に従って；無色の油として５（９．５ｇ，７３．５％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ７．５７（ｂｒ，１Ｈ）；４．３５−４．２４（ｍ，２Ｈ）；３．７３（ｓ，１Ｈ）；３．７２（ｓ，１Ｈ）；１．３６−１．３２（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：１７１．６１，１６６．４０，６２．４５，５２．２０，５１．４５，１３．８９
合成は、スキーム５にてＲ1置換基と呼ばれるＰ２位における天然の又は非天然のペプチド模倣体残基を持ち、スキーム５にてＲ2と呼ばれるＰ３／Ｐ４キャップ基を変化させるペプチド模倣体エポキシドのライブラリの生成に向けられた。
スキーム５．ペプチド模倣体エポキシドの合成
試薬：ｉ）ＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、ＤＩＰＥＡ、ＣＨ2Ｃｌ2、０℃；ｉｉ）ＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、０℃；ｉｉｉ）ＬｉＯＨ、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ、Ｈ2Ｏ、０℃。
先ず、ＨＯＢＴ及びＥＤＣＩを用いて又はＣＤＩの存在下で典型的なカップリング手順に従って、Ｒ2アミンを市販のＢｏｃ保護したアミノ酸にカップリングさせてＢｏｃ保護したペプチド模倣体の足場を得た（１２〜１６）（スキーム５）。公開された手順に従ってＬ−ＤＥＴ又はＤ−ＤＥＴいずれかから出発する３工程でエポキシスクシネート部分を合成し、それぞれ明白なエポキシスクシネートＲ，Ｒ（４）及びＳ，Ｓ（５）を得た（その全体が参照によって本明細書に組み入れられるSaito, S. et al., Organic Syntheses 1996, 73, 184）。ＴＦＡの脱保護に続いて、ＤＩＰＥＡの存在下でＥＤＣＩ及びＨＯＢＴを用いて適当なペプチド模倣体の足場を４又は５にカップリングさせ、相当するエポキシドエステル（１７〜２１及び３７）を得た。０℃にてＬｉＯＨを用いたエステルの鹸化によって類似のエポキシ酸２２〜３６を得た（表３）。４つの例（３０ａ、ｂ及び３１ａ、ｂ）では、ヒスチジン含有の類似体が、ＣＤＩを用いた最初のペプチドのカップリングの間でのペプチジルα炭素のラセミ化の結果生じたジアステレオマー混合物（Ｌ／Ｄ，Ｓ，Ｓ）及び（Ｌ／Ｄ，Ｒ，Ｒ）であることが分かった。
エポキシドを組み入れる阻害剤の合成において考えられる出来事は、開環を受けるエポキシドの傾向である。従って、収束合成が一般に利用され、分岐合成法は主な最適化の間でのライブラリの開発には好ましいけれども、エポキシドの官能性は誘導体化が生じた後に組み入れられる（スキーム２）。
エポキシドモノエステルのペプチド模倣体アミンとのカップリング
０℃にて、ＴＦＡ（１０当量）を新しく蒸留したＣＨ2Ｃｌ2（１０ｍｌ／１ミリモルのペプチド模倣体）中のＢＯＣ−保護したペプチド模倣体（１当量）の懸濁液に加え、反応混合物を同じ温度で６時間撹拌した。必要に応じて、出発物質がＴＬＣ上に残らなくなるまで追加のＴＦＡ（５当量）を０℃にて３０分ごとに加えた。次いで反応物を真空下で濃縮し、残留ＴＦＡ塩をＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ3溶液を用いて約７のｐＨにし、その後、ＣＨ2Ｃｌ2（３×５０ｍｌ）で抽出し、真空で溶液の除去を行い、純粋な遊離のアミンを得たが、それを高真空下で乾燥させ、さらに精製することなく次の反応に使用した。アルゴンのもとで０℃に維持したＤＩＰＥＡ（１．１当量）を伴った最少量のＤＭＦ（約３ｍＬ／ミリモル）に溶解したエポキシド一酸（１．０当量）を丸底フラスコに充填した。次いでＥＤＣＩ（１．０当量）を一気に加え、均質になるまで懸濁液を撹拌し（通常＜５分間）、その後、ＨＯＢｔ（１．２当量）を加えた。さらに１５分間撹拌した後、ＤＭＦ（約３ｍｌ／ミリモル）中の遊離のアミン（１．０当量）を一滴ずつ加え、反応物を室温に温め、ＴＬＣによってモニターした。１２時間後、１ＮのＨＣｌで反応を止め、ｐＨ約４に酸性化し、ＣＨ2Ｃｌ2（３×）で抽出した。合わせた有機抽出物を１ＮのＨＣｌ（２×）及びブライン（１×）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させ、真空で濃縮し、カラムクロマトグラフィによって精製して所望のペプチド模倣体の足場を得た。
エポキシドモノエステルのペプチド模倣体アミンとのカップリングのための代替手順
０℃にて、ＴＦＡ（１０当量）をＣＨ2Ｃｌ2（２０ｍｌ／１ミリモルのペプチド模倣体）中のＢＯＣ−保護したペプチド模倣体（１当量）に加え、反応混合物を同じ温度で２時間撹拌した。過剰のＴＦＡ及びＣＨ2Ｃｌ2を真空下で除き、残留するＴＦＡ−塩は高真空下で乾燥させ、さらに精製することなく、次の反応に供したか、又はＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ3を用いて約７のｐＨにし、その後、ＣＨ2Ｃｌ2（３×５０ｍｌ）で抽出し、真空で溶液の除去を行い、純粋な遊離のアミンを得、それをさらに精製することなく次の反応に使用した。中間体の脱保護されたアミン（１当量）、エポキシドモノエステル（１当量）及びＨＯＢｔ（１．１当量）を最少量のＤＭＦに溶解し、次いでＤＩＰＥＡ（１ｍＬ，５．６ミリモル）及びＥＤＣＩ（３２６ｍｇ，１．７ミリモル）を加えた。常温で１２時間撹拌した後、反応混合物に水を加え、２００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2で希釈した。有機層を分離し、１ＭのＨＣｌ（２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ3溶液（１０ｍＬ）、水（３０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させ、真空で濃縮した。粗精製の混合物のクロマトグラフィ精製によって表題の化合物を得た。
エポキシドモノエステルのペプチド模倣体アミンとのカップリング
Ｂｏｃ−脱保護：０℃にて、ＴＦＡ（１０当量）を新しく蒸留したＣＨ2Ｃｌ2（１０ｍｌ／１ミリモルのペプチド模倣体）中の適当なＢＯＣ−保護したペプチド模倣体（１当量）の懸濁液に加え、反応混合物を同じ温度で６時間撹拌した。必要に応じて、出発物質がＴＬＣ上に残らなくなるまで追加のＴＦＡ（５当量）を０℃にて３０分ごとに加えた。次いで反応物を真空下で濃縮し、残留ＴＦＡ塩をＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ3溶液を用いて約７のｐＨにし、その後、ＣＨ2Ｃｌ2（３×５０ｍｌ）で抽出し、真空で溶液の除去を行い、純粋な遊離のアミンを得たが、それを高真空下で乾燥させ、さらに精製することなく次の反応に使用した。
カップリング：アルゴンのもとで０℃に維持したＤＩＰＥＡ（１．１当量）を伴った最少量のＤＭＦ（約２ｍＬ／ミリモル）に溶解した適当なエポキシド一酸（１．０当量）を丸底フラスコに充填した。次いでＥＤＣＩ（１．０当量）を一気に加え、均質になるまで懸濁液を撹拌し（通常＜５分間）、その後、ＨＯＢｔ（１．２当量）を加えた。さらに１５分間撹拌した後、ＤＭＦ（約３ｍｌ／ミリモル）中の遊離のアミン（１．０当量）を一滴ずつ加え、反応物を室温に温め、ＴＬＣによってモニターした。１２時間後、１ＮのＨＣｌで反応を止め、ｐＨ約４に酸性化し、ＣＨ2Ｃｌ2（３×）で抽出した。合わせた有機抽出物を１ＮのＨＣｌ（２×）及びブライン（１×）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させ、真空で濃縮し、カラムクロマトグラフィによって精製して所望のペプチド模倣体の足場を得た。
ペプチド模倣体−エポキシドエステルの鹸化
ペプチド模倣体エポキシドエステル（１当量）をＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（３：１：１）に溶解し、０℃に冷却し、ＬｉＯＨ（１当量）を加え、反応物を室温に温めた。必要に応じて、出発物質がＴＬＣ上に残らなくなるまで追加のＬｉＯＨ（０．２当量）を０℃にて３０時間ごとに加えた。得られた溶液を冷たい１ＮのＨＣｌで酸性化し、ＣＨ2Ｃｌ2に注いだ。場合によっては酸が析出し、焼結漏斗を介してそれを濾別し、ＣＨ2Ｃｌ2及びＨ2Ｏで連続して洗浄し、単離した。化合物が溶液にとどまった場合、水性相をＣＨ2Ｃｌ2（３×５０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機抽出物をＮａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濃縮して所望の生成物を得た。通常、所望の生成物の純度はエステル出発物質の純度を反映する。十分に純粋なエステル出発物質を有することが加水分解の際、純粋な酸を得るのに必須であることが見いだされた。
表１．エポキシドエステル１７〜２１及び３７の構造指示
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−４−メチル−１−オキソ−１−（フェニルアミノ）ペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（１７ａ）
Ｂｏｃ−保護したペプチド模倣体（５７０ｍｇ，１．１ミリモル）；ＣＨ2Ｃｌ2（１０ｍｌ）／ＤＭＦ（２ｍｌ）中の（２Ｓ，３Ｓ）−エポキシコハク酸モノエステル（１２６ｍｇ，０．９３ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（０．１６ｍＬ，０．９３ミリモル）及びＨＯＢＴ（１２６ｍｇ，０．９３ミリモル）；ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＥＤＣＩ（２２０ｍｇ，１．１ミリモル）を用いた一般的な手順によって白色固形物として表題の化合物を得た（１００ｍｇ、３０．６％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ７．５７−７．５５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６７Ｈｚ）；７．３４−７．３０（ｔ，２Ｈ）；７．１３−７．１０（ｔ，１Ｈ）；４．６３−４．６１（ｍ，１Ｈ）；４．３０−４．２４（ｍ，２Ｈ）；３．７２９−３．７２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６７Ｈｚ）；３．６２−３．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７２Ｈｚ）；１．７６−１．６３（ｍ，３Ｈ）；１．３３−１．２９（ｔ，３Ｈ）；１．０２−１．００（ｔ，６Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：１７１．２２，１６９．０７，１６７．１５，１３７．９８，１２８．４１，１２４．１２，１２０．１４，５２．９０，５２．５８，５２．５０，５１．７０，４０．７０，２９．５０，２４．６５，２２．０４，２０．６０。
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−（２，６−ジフルオロフェニルアミノ）−４−メチル−１−オキソペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（１７ｂ）．
Ｂｏｃ−保護したペプチド模倣体（６００ｍｇ，１．７ミリモル）；ＣＨ2Ｃｌ2（１０ｍｌ）／ＤＭＦ（５ｍｌ）中の（２Ｓ，３Ｓ）−エポキシコハク酸モノエステル（２８０ｍｇ，１．７ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（０．４５ｍＬ，２．６ミリモル）；ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＥＤＣＩ（２８０ｍｇ，１．７ミリモル）を用いた一般的な手順によって白色固形物として表題の化合物を得た（２１０ｍｇ、３１．６％）。1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ８．２０（ｓ，１Ｈ）；７．１８−７．１６（ｔ，１Ｈ）；６．９４−６．９０（ｔ，２Ｈ）；６．７２−６．７０（ｄ，１Ｈ）；４．８６−４．８５（ｑ，１Ｈ）；４．２９−４．２３（ｍ，２Ｈ）；３．８３−３．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６Ｈｚ）；３．７２−３．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６９Ｈｚ）；１．８４−１．７０（ｍ，３Ｈ）；１．３０−１．２６（ｔ，３Ｈ）；１．０１−０．９９（ｄ，６Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７０．１０，１６６．５，１６６．３９，１５８．９２，１５６．４６，１２７．７３，１１１．８８，１１１．５４，１６４．９，６２．２７，５３．９，５２．９，５１．０１，４１．２，２４．７４，２２．５，１４．０
（２Ｒ，３Ｒ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−（２，６−ジフルオロフェニルアミノ）−４−メチル−１−オキソペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（１７ｃ）．
Ｂｏｃ−保護したペプチド模倣体（５５０ｍｇ，１．６ミリモル）；ＣＨ2Ｃｌ2（１５ｍｌ）／ＤＭＦ（５ｍｌ）中の（２Ｓ，３Ｓ）−エポキシコハク酸モノエステル（２５０ｍｇ，１．６ミリモル），ＤＩＰＥＡ（０．６５ｍＬ，３．８ミリモル）及びＨＯＢＴ（２５０ｍｇ，１．９ミリモル）；ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＥＤＣＩ（３００ｍｇ，２．０ミリモル）を用いた一般的な手順によって白色固形物として表題の化合物を得た（２５ｍｇ、４１．６％）。1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ８．２０（ｓ，１Ｈ）；７．１９−７．１７（ｔ，１Ｈ）；６．９４−６．９０（ｔ，２Ｈ）；６．７２−６．７０（ｄ，１Ｈ）；４．８６−４．８５（ｑ，１Ｈ）；４．３１−４．２５（ｍ，２Ｈ）；３．８４−３．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６９Ｈｚ）；３．７３−３．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６９Ｈｚ）；１．８４−１．６９（ｍ，３Ｈ）；１．３２−１．２８（ｔ，３Ｈ）；１．０２−１．００（ｄ，６Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：１７０．１０，１６６．６７，１６６．３９，１５８．９２，１５６．４６，１２７．７３，１１１．７８，１１１．５４，６２．２８，５３．６７，５２．６９，５１．２１，４０．８１，２４．７４，２２．７４，２２．１１，１３．９７。
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−４−メチル−１−オキソペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（１７ｄ）．
Ｂｏｃ−保護したペプチド模倣体（４１０ｍｇ，１．０ミリモル）；ＣＨ2Ｃｌ2（１０ｍｌ）中の（２Ｓ，３Ｓ）−エポキシコハク酸モノエステル（１６０ｍｇ、１．０ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（０．１８ｍＬ，１．０ミリモル）及びＨＯＢＴ（１６３ｍｇ，１．２ミリモル）；ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のＥＤＣＩ（２１１ｍｇ，１．１ミリモル）を用いた一般的な手順によって白色固形物として表題の化合物を得た（２０３ｍｇ、４０．１％）。1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ９．９６（ｓ，１Ｈ）；７．７９−７．７６（ｑ，２Ｈ）；７．１１−７．０７（ｍ，３Ｈ）；６．５７−６．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）；４．８０−４．７８（１，１Ｈ）；４．２９−４．２３（ｍ，２Ｈ）；３．８６８−３．８６４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６０Ｈｚ）；３．５２２−３．５８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６０Ｈｚ）；１．８６−１．８１（ｍ，１Ｈ）；１．６６−１．６１（ｍ，２Ｈ）；１．２８−１．２４（ｍ，４Ｈ）；０．９８−０．９４（ｔ，６Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７０．２８，１６７．４８，１６５．７８，１６３．４３，１６１．００，１５８．２３，１４８．３４，１３５．３６，１３１．３２，１２８．１７，１１６．１３，１０８．５２，６２．０１，５３．７１，５３．３６，５１．８２，１４．３３．ＥＳＩ−ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］+＝４５０。
（２Ｒ，３Ｒ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−４−メチル−１−オキソペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（１７ｅ）．
Ｂｏｃ−保護したペプチド模倣体（２９０ｍｇ，０．７１ミリモル）；ＤＭＦ（３ｍｌ）中の（２Ｓ，３Ｓ）−エポキシコハク酸モノエステル（１１３ｍｇ，０．７１ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（０．１３ｍＬ，０．７１ミリモル）及びＨＯＢＴ（１１５ｍｇ，０．８５ミリモル）；ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のＥＤＣＩ（１５０ｍｇ，０．７８ミリモル）を用いた一般的な手順によって白色固形物として表題の化合物を得た（１００ｍｇ、３１．５％）。1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ９．９６（ｓ，１Ｈ）；７．７９−７．７６（ｑ，２Ｈ）；７．１１−７．０６（ｍ，３Ｈ）；６．４８−６．４６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）；４．７１−４．６９（１，１Ｈ）；４．２５−４．２２（ｍ，２Ｈ）；３．７８−３．７７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２０Ｈｚ）；３．６０−３．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２０Ｈｚ）；１．８６−１．８１（ｍ，１Ｈ）；１．７１−１．６０（ｍ，２Ｈ）；１．３０−１．２５（ｍ，４Ｈ）；０．９８−０．９６（ｔ，６Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７０．２４，１６７．４６，１６５．５８，１６３．４３，１６１．００，１５８．２０，１４８．３４，１３５．３６，１３１．２９，１２８．０９，１１５．９２，１０８．５２，６２．０１，５３．５２，５３．４１，５１．８５，１４．３３．ＥＳＩ−ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］+＝４５０。
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニルスルホンアミド）ブチルアミノ）−４−メチル−１−オキソペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（１７ｆ）．
Ｂｏｃ−保護したペプチド模倣体（４４２ｍｇ，１．０ミリモル）；ＤＭＦ（５ｍｌ）中の（２Ｓ，３Ｓ）−エポキシコハク酸モノエステル（１５４．１ｍｇ，０．９６ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（０．１７ｍＬ，０．９６ミリモル）及びＨＯＢＴ（１５７ｍｇ，１．１５ミリモル）；ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のＥＤＣＩ（２０３ｍｇ，１．０５ミリモル）を用いた一般的な手順によって白色固形物として表題の化合物を得た（３２１ｍｇ、６０．５％）。1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ７．８９−７．８６（ｍ，２Ｈ）；７．２１−７．１９（ｔ，２Ｈ）；６．８７−６．８５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４０Ｈｚ）；６．３２（ｂｓ，１Ｈ）；５．２５（ｔ，１Ｈ）；４．２７−４．２５（ｑ，１Ｈ）；４．２２−４．１９（ｍ，２Ｈ）；３．７１−３．７０（ｄ，１Ｈ．Ｊ＝１．６０Ｈｚ）；３．４８−３．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６０Ｈｚ）；３．２８−３．１２（ｍ，２Ｈ）；２．９５−２．９３（ｄ，２Ｈ）；１．６２−１．４５（ｍ，９Ｈ）；１．３３−１．３０（ｔ，３Ｈ）；０．９４−０．９０（ｔ，６Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：１７１．５２，１６６．６７，１６６．６３，１６６．５１，１６３．９８，１３０．０１，１２９．９２，１１６．６６，１１６．４４，６２．６５，５３．９９，５３．２３，５１．７５，４２．９８，４１．２０，３９．１５，２６．８０，２６．６３，２５．０６，２３．０６，２２．１９，１４．２５．ＥＳＩ−ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］+＝５０２。
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（２Ｓ）−１−（（５−（１，２−ジチオラン−３−イル）ペンタンアミド）メチルアミノ）−４−メチル−１−オキソペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（１７ｇ）．
Ｂｏｃ−保護したペプチド模倣体（１７０ｍｇ，０．３５ミリモル）；ＤＭＦ（２ｍｌ）中の（２Ｓ，３Ｓ）−エポキシコハク酸モノエステル（５６ｍｇ，０．３５ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（０．０６ｍＬ，０．３５ミリモル）及びＨＯＢＴ（５６ｍｇ，０．４２ミリモル）；ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のＥＤＣＩ（７３ｍｇ，１．２ミリモル）を用いた一般的な手順によって白色固形物として表題の化合物を得た（５３ｍｇ、２８％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ７．２３−７．２１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）；７．１８−７．１５（ｔ，１Ｈ）；６．３３（ｔ，１Ｈ）；４．５１−４．４９（ｑ，１Ｈ）；４．２８−４．２４（ｍ，２Ｈ）；３．７１７−３．７１３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６０Ｈｚ）；３．６０−３．５７（ｍ，１Ｈ）；３．５２４−３．５２０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６０Ｈｚ）；３．１８−３．１１（ｍ，７Ｈ）；２．４７−２．４５（ｍ，１Ｈ）；２．２２−２．１８（ｔ，Ｈ）；１．９３−１．９０（ｍ，１Ｈ）；１．６７−１．５２（ｍ，１５Ｈ）；１．３３−１．３０（ｄｄ，４Ｈ）；０．９４−０．９０（ｔ，６Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：１７３．６６，１７１．９４，１６７．１３，１６６．５２，６２．８５，５６．９５，５６．９２，５４．２８，５３．２８，５２．０１，４１．８９，４０．７３，４０．１０，３９．７２，３９．４０，３９．２３，３８．９４，３６．８７，３５．０７，２９．３８，２９．３６，２７．６５，２７．５０，２６．８９，２６．２７，２５．９０，２５．３２，２３．４１，２２．４８，１４．５２．ＥＳＩ−ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］+＝５３２。
（２Ｓ，３Ｒ）−エチル−３−（（Ｓ）−４−メチル−１−オキソ−１−（４−（５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド）ブチルアミノ）ペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（１７ｈ）．
Ｂｏｃ−保護したペプチド模倣体（５７０ｍｇ，１．１ミリモル）；ＤＭＦ（５ｍｌ）中の（２Ｓ，３Ｓ）−エポキシコハク酸モノエステル（１７６ｍｇ，１．１ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（０．２ｍＬ，１．１ミリモル）及びＨＯＢＴ（１７８ｍｇ，１．３ミリモル）；ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＥＤＣＩ（２３２ｍｇ，１．２ミリモル）を用いた一般的な手順によって白色固形物として表題の化合物を得た（６２４ｍｇ、８５％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ８．６２（ｄ，１Ｈ）；８．０８（ｔ，１Ｈ）；７．７４（ｔ，１Ｈ）；６．４２（ｓ，１Ｈ）；６．３６（ｓ，１Ｈ）；４．３１（ｍ，２Ｈ）；４．１８（ｍ，３Ｈ）；３．７１（ｄ，１Ｈ）；３．５９（ｄ，１Ｈ）；３．１２（ｍ，１Ｈ）；３．０１（ｍ，４Ｈ）；２．９２（ｄｄ，１Ｈ）；２．５８（ｄ，１Ｈ）；２．０４（ｔ，２Ｈ）；１．４９（ｍ，７Ｈ）；１．３５（ｍ，６Ｈ）；１．２３（ｔ，３Ｈ）；０．８９（ｄ，３Ｈ）；０．８３（ｄ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ ＭＨｚ）：１７１．７；１７０．９；１６７．１；１６４．４；１６２．６；６１．４；６０．９；５９．１；５５．３；５２．８；５１．１；４１．０；３８．２；３７．９；３５．１；２８．１；２７．９；２６．５；２６．４；２５．２；２４．１；２２．８；２１．５；１３．８．ＥＳＩ−ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］+＝５７０。
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）−１−オキソ−１−（フェニルアミノ）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（１８ａ）．
Ｂｏｃ−保護したペプチド模倣体（４６３ｍｇ，１．４ミリモル）；ＤＭＦ（５ｍｌ）中の（２Ｓ，３Ｓ）−エポキシコハク酸モノエステル（２２０ｍｇ，１．４ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（０．２４ｍＬ，１．４ミリモル）及びＨＯＢＴ（２３０ｍｇ，１．７ミリモル）；ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のＥＤＣＩ（３００ｍｇ，１．５ミリモル）を用いた一般的な手順によって白色固形物として表題の化合物を得た（１８０ｍｇ、３４．５％）。1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ−ｄ4）：δ７．６３（ｓ，１Ｈ）；７．５２−７．５０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．７２Ｈｚ）；７．３３−７．３１（ｔ，２Ｈ）；７．１３−７．１１（ｔ，１Ｈ）；６．９０（ｓ，１Ｈ）；４．７６−４．７５（ｔ，１Ｈ）；４．２９−４．２４（ｑ，２Ｈ）；３．６９−３．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．５６Ｈｚ）；３．６４−３．６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．５６Ｈｚ）；３．１７−３．０５（ｑｄ，２Ｈ）；１．３３−１．２９（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ4,１００ＭＨｚ）：１６９．７５，１６７．２５，１６６．９０，１３７．８５，１３４．９８，１２７．３６，１２４．１９，１１９．８８，６１．７３，５４．１５，５２．９０，５１．６０，１２．８８
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）−１−（メシチルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（１８ｂ）．
Ｂｏｃ−保護したペプチド模倣体（１８０ｍｇ，０．４７ミリモル）；ＤＭＦ（５ｍｌ）中の（２Ｓ，３Ｓ）−エポキシコハク酸モノエステル（７５ｍｇ，０．４７ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（０．１２ｍＬ，０．７ミリモル）及びＨＯＢＴ（７６ｍｇ，０．５６ミリモル）；ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のＥＤＣＩ（９９ｍｇ，０．５２ミリモル）を用いた一般的な手順によって白色固形物として表題の化合物を得た（５５ｍｇ、２８．３％）。1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ−ｄ4）：δ７．６６（ｓ，１Ｈ）；６．９６（ｓ，１Ｈ）；６．８８（ｓ，１Ｈ）；４．２７−４．２５（ｑ，２Ｈ）；３．６８（ｓ，１Ｈ）；３．３２（ｓ，１Ｈ）；３．２１−３．０７（ｍ，２Ｈ）；２．２５（ｓ，３Ｈ）；２．０６（ｓ，６Ｈ）；１．３２−１．２９（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：13Ｃ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ4,１００ＭＨｚ）：１６７．２２，１３６．７４，１３５．１４，１２８．２５，６１．７４，５２．９８，５１．８０，１９．５３，１６．７７，１２．８８．ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４１５．２（Ｍ＋Ｈ）+
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（１８ｃ）．
ラセミ体のＢｏｃ−保護したペプチド模倣体（４００ｍｇ，１．２ミリモル）；ＤＭＦ（５ｍｌ）中の（２Ｓ，３Ｓ）−エポキシコハク酸モノエステル（１６０ｍｇ，１．０ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（０．４３ｍＬ，２．５ミリモル）及びＨＯＢＴ（７６ｍｇ，０．５６ミリモル）；ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のＥＤＣＩ（２１０ｍｇ，１．１ミリモル）を用いた一般的な手順によって白色固形物の形態でラセミ混合物として表題の化合物を得た（２１７ｍｇ、４５．８％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ１２．５０（ｂｓ，１Ｈ）；１１．９０（ｂｓ，１Ｈ）；８．８５−８．７６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．１４Ｈｚ）；７．９５−７．９１（ｑ，２Ｈ）；７．６４−７．５８（ｍ，２Ｈ）；７．２８−７．２４（ｔ，２Ｈ）；６．８４（ｂｓ，１Ｈ）；４．７９−４．７５（ｑ，１Ｈ）；４．２２−４．１８（ｑ，２Ｈ）；３．７４−３．７３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８０Ｈｚ）；３．６３−３．６２（ｄｄ，１Ｈ；Ｊ＝１．８０Ｈｚ）；３．１７−３．０８（ｍ，２Ｈ）；１．２５−１．２１（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１６９．５３，１６８．８７，１６８．８１，１６５．９８，１６５．８３，１６２．８９，１６０．４７，１５７．６５，１４７．８２，１３４．５８，１３２．１０，１２７．６４，１２７．５６，１１６．４０，１１５．６０，１１５．４０，１０８．０４，５２．９８，５２．７５，５１．９０，２８．５５，２８．４２
（２Ｒ，３Ｒ）−エチル−３−（１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（１８ｄ）．
ラセミ体のＢｏｃ−保護したペプチド模倣体（４００ｍｇ，１．０ミリモル）；ＤＭＦ（５ｍｌ）中の（２Ｓ，３Ｓ）−エポキシコハク酸モノエステル（１４９ｍｇ，０．９３ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（０．１６ｍＬ，０．９３ミリモル）及びＨＯＢＴ（１５１ｍｇ，１．１ミリモル）；ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のＥＤＣＩ（１９６ｍｇ，１．０ミリモル）を用いた一般的な手順によって白色固形物の形態でラセミ混合物として表題の化合物を得た（２４０ｍｇ、５０．８％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ１２．５２（ｂｓ，１Ｈ）；１１．８６（ｂｓ，１Ｈ）；８．８５−８．７７（ｄｄ，Ｊ＝７．２１Ｈｚ；Ｊ＝７．４８Ｈｚ）；７．９５−７．９１（ｑ，２Ｈ）；７．６２（ｓ，１Ｈ）；７．５７（ｓ，１Ｈ）；７．２８−７．２４（ｔ，２Ｈ）；６．８４（ｓ，１Ｈ）；４．８１−４．７６（ｍ，１Ｈ）；４．２３−４．１５（ｍ，１Ｈ）；３．７６−３．７４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８Ｈｚ；Ｊ＝１．８Ｈｚ）；３．６４−３．６１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８Ｈｚ；Ｊ＝１．８Ｈｚ）；３．０８−２．９９（ｍ，２Ｈ）；１．２５−１．１７（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７０．２８＆１７０．２４，１６７．４８＆１６７．４６，１６５．７８＆１６５．５８，１６３．４３，１６１．０１，１５８．５３＆１５８．２０，１３５．３７，１３１．３２＆１３１．２９，１２８．１７＆１２８．０９，１１６．１３＆１１５．９２，１０８．５２，６２．０１，５３．７２＆５３．５２，５３．４１＆５３．３６，５１．８５＆５１．８２，１４．３３．
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（１−（６−フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルアミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（１８ｅ）．
ラセミ体のＢｏｃ−保護したペプチド模倣体（４０２ｍｇ，０．９９ミリモル）；ＤＭＦ（５ｍｌ）中の（２Ｓ，３Ｓ）−エポキシコハク酸モノエステル（１５９ｍｇ，０．９９ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（０．１８ｍＬ，０．９９ミリモル）及びＨＯＢＴ（１６１ｍｇ，１．１８ミリモル）；ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のＥＤＣＩ（２０９ｍｇ，１．０９ミリモル）を用いた一般的な手順によって白色固形物の形態でラセミ混合物として表題の化合物を得た（２２９ｍｇ、５１．５％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,４００ＭＨｚ）：δ７．９６（ｂｓ，１Ｈ）；７．７６−７．７３（ｍ，２Ｈ）；７．５２−７．５０（ｄ，１Ｈ）；７．１８−７．１４（ｍ，１Ｈ）；６．９４（ｓ，１Ｈ）；４．９３（ｂｓ，１Ｈ）；４．３２−４．２７（ｍ，２Ｈ）；３．７８（ｓ，１Ｈ）：３．６３（ｓ，１Ｈ）；３．２６−３．２２（ｄｄ，１Ｈ）；３．１０−３．０６（ｄｄ，１Ｈ）；１．３６−１．３２（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：１７２．１５，１６８．５２＆１６８．５０，１６６．８８＆１６６．７０，１６１．３１，１５９．１９＆１５８．９１，１４６．５３，１３６．２５，１３４．０４＆１３３．９３，１２２．９４＆１２２．８４，１１５．５５＆１１５．３０，１０９．４１＆１０９．１４，６２．４０，５５．６７，５４．２０＆５３．９８，５３．７２＆５３．６６，５２．１７＆５２．１２，１４．４２．
（２Ｒ，３Ｒ）−エチル−３−（１−（６−フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルアミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（１８ｆ）．
Ｂｏｃ−保護したペプチド模倣体（４２０ｍｇ，１．０ミリモル）；ＤＭＦ（５ｍｌ）中の（２Ｓ，３Ｓ）−エポキシコハク酸モノエステル（１６２ｍｇ，１．０１ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（０．１８ｍＬ，１．０１ミリモル）及びＨＯＢＴ（１６４ｍｇ，１．２１ミリモル）；ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のＥＤＣＩ（２１３ｍｇ，１．１１ミリモル）を用いた一般的な手順によって白色固形物の形態でラセミ混合物として表題の化合物を得た（２２６ｍｇ、５０．５％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ１１．８５（ｂｓ，１Ｈ）；８．８９−８．８１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．２１Ｈｚ；Ｊ＝７．４２Ｈｚ）；７．９１−７．８８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ；Ｊ＝２．５Ｈｚ）；７．７７−７．７４（ｑ，１Ｈ）；７．５７（ｓ，１Ｈ）；７．３２−７．２７（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ；Ｊ＝２．５Ｈｚ；Ｊ＝２．５Ｈｚ）；６．８５（ｓ，１Ｈ）；４．８２−４．７６（ｍ，１Ｈ）；４．２３−４．１６（ｍ，２Ｈ）；３．７６−３．７４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８Ｈｚ；Ｊ＝１．８Ｈｚ）；３．６５−３．６１（，１Ｈ，Ｊ＝１．８Ｈｚ；Ｊ＝１．８Ｈｚ）；３．１７−２．９８（ｍ，２Ｈ）；１．２５−１．１７（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７１．１３＆１７１．０９，１６７．４７＆１６７．４５，１６５．８３＆１６５．６５，１６０．３２，１５８．２１＆１５７．９３，１４５．６４，１３５．４０，１３３．２３＆１３３．１２，１２２．１７＆１２２．０８，１１４．８３＆１１４．５９，１０８．７４＆１０８．４７，６２．０１，５３．８６＆５３．６５，５３．４０＆５３．３３，５１．８６＆５１．８１，１４．３４
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−オキソ−１−（フェニルアミノ）−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（１９ａ）．
Ｂｏｃ−保護したペプチド模倣体（２３０ｍｇ，０．６６ミリモル）；ＣＨ2Ｃｌ2（５ｍｌ）中の（２Ｓ，３Ｓ）−エポキシコハク酸モノエステル（１０６ｍｇ，０．６６ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（０．１２ｍＬ，０．６６ミリモル）及びＨＯＢＴ（１１０ｍｇ，０．７９ミリモル）；ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のＥＤＣＩ（１３０ｍｇ，０．６６ミリモル）を用いた一般的な手順によって白色固形物として表題の化合物を得た（８４ｍｇ、３２．５％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ4，４００ＭＨｚ）：δ８．９４（ｓ，１Ｈ）；７．５２−７．５０（ｄ，２Ｈ）；７．３３（ｓ，１Ｈ）；７．３０−７．２６（ｔ，３Ｈ）；７．１１−７．０７（ｔ，１Ｈ）；４．９８−４．９５（ｔ，１Ｈ）；４．２４−４．２０（ｑ，２Ｈ）；３．６９（ｓ，１Ｈ）；３．５４（ｓ，１Ｈ）；３．４３−３．２８（ｍ，２Ｈ）；１．２８−１．２４（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ4，１００ＭＨｚ）：１６９．４３，１６７．２１，１６６．８４，１５３．８９，１５２．２４，１３７．８２，１２８．４５，１２４．２３，１２０．２４，１１６．１０，６１．８２，５３．６０，５３．１１，５１．９２，３２．９４，１２．９９。
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（１９ｂ）
ＤＭＦ（５ｍｌ）中の（２Ｓ，３Ｓ）−エポキシコハク酸モノエステル（６２２ｍｇ，３．８８ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（０．７５ｍＬ，４．２ミリモル）；ＥＤＣＩ（８９０ｍｇ，４．７ミリモル）；ＨＯＢｔ（７３０ｍｇ，５．４ミリモル）；ＤＭＦ（５ｍｌ）中の脱保護した遊離のアミン（１．３５ｇ，３．９ミリモル）を用いた最適化したカップリング手順に従って合成し；カラムクロマトグラフィの後、白色固形物として表題の化合物（単離収率＝１．３８ｇ、７２．４％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ−ｄ4）：δ８．９８−８．９８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７５Ｈｚ）；７．９２−７．９０（ｑ，２Ｈ）；７．３７（ｓ，１Ｈ）；７．３６（ｓ，１Ｈ）；７．１５−７．１０（ｔ，２Ｈ）；５．０６−５．０２（ｑ，１Ｈ）；４．２７−４．２４（ｑ，２Ｈ）；３．６９−３．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６６Ｈｚ）；３．５５−３．５４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６６Ｈｚ）；３．５６−３．２９（ｍ，２Ｈ）；１．３３−１．２９．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１６９．１７，１６７．１７，１５７．６９，１５４．００，１５１．９０，１４８．９０，１３０．９５，１２７．５５，１１６．１５，１１４．９９，１１４．７７，１０７．２０，６１．７６，５２．９７，５２．９１，５１．８２，３２．３５，１２．８９．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ−Ｈ］+Ｃ21Ｈ19ＦＮ4Ｏ5Ｓ2についての計算値：４８９．０７８１，観察値：４８９．０７３１。
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル３−（（Ｓ）−１−（４−（４−エチニルフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（１９ｃ）．
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）δ＝１２．５６（ｓ，１Ｈ）；９．０４−９．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８Ｈｚ）；８．８４−８．８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．７Ｈｚ）；７．９３−７．９１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ）；７．７６（ｓ，１Ｈ）；７．５５−７．５３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ）；７．４５−７．４４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６Ｈｚ）；４．９９−４．９３（ｑ，１Ｈ）；４．２６（ｓ，１Ｈ）；４．２２−４．１６（ｍ，２Ｈ）；３．７２−３．７１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ）；３．５６−３．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ）；３．６７−３．２２（ｍ，２Ｈ）；１．２５−１．１９（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７０．０４，１６７．４７，１６５．６２，１５８．２４，１５４．２５，１５２．６２，１４８．４７，１３４．９５，１３２．６１，１２６．２６，１２１．３３，１１６．６７，１１０．２１，８３．８７，８１．９９，６２．０２，５３．３６，５３．１１，５１．８１，３３．１１，１４．３３．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］+Ｃ23Ｈ20Ｎ4Ｏ5Ｓ2についての計算値：４９７．０９４８；観察値：４９７．０９４９；ＨＰＬＣ法２：純度＝９６．７％，Ｒt＝１４．５分（イオン−トラップＨＰＬＣ）。
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−３−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（２０）
Ｂｏｃ−保護したペプチド模倣体（２００ｍｇ，０．４５ミリモル）；ＤＭＦ（４ｍｌ）中の（２Ｓ，３Ｓ）−エポキシコハク酸モノエステル（７２ｍｇ，０．４４ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（０．０７８ｍＬ，０．４４ミリモル）及びＨＯＢＴ（７３ｍｇ，０．５３ミリモル）；ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のＥＤＣＩ（９５ｍｇ，０．４９ミリモル）を用いた一般的な手順によって白色固形物として表題の化合物を得た（１５２ｍｇ、６９．３％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ１２．５９（ｂｓ，１Ｈ）；８．９７−８．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８２Ｈｚ）；７．９５−７．９２（ｑ，２Ｈ）；７．６４（ｓ，１Ｈ）；７．５０（ｓ，１Ｈ）；７．２８−７．２４（ｔ，２Ｈ）；６．６７（ｓ，１Ｈ）；４．８７−４．８１（ｑ，１Ｈ）；４．２１−４．１５（ｍ，２Ｈ）；３．７４−３．７３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７９Ｈｚ）；３．５９（ｓ，３Ｈ），３．５５−３．５４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７９Ｈｚ）；３．１６−２．９７（ｍ，２Ｈ）；１．２４−１．１７（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１６９．９５，１６７．４８，１６５．５６，１６３．４５，１６１．０２，１４８．４１，１３８．５６，１３１．２７，１２８．１８，１２８．０９，１２７．８２，１２７．００，１１６．１６，１１５．９５，１０８．７０，６２．０１，５３．２４，５２．３６，５１．７０，３１．３０，２６．４０，１４．３３．ＥＳＩ−ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］+Ｃ22Ｈ22ＦＮ5Ｏ5Ｓについての計算値：４８７．５，観察値：４８８．０。
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−３−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（２１）．
Ｂｏｃ−保護したペプチド模倣体（１８５．５ｍｇ，０．４１ミリモル）；ＤＭＦ（３ｍｌ）中の（２Ｓ，３Ｓ）−エポキシコハク酸モノエステル（６７ｍｇ，０．４１ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（０．０７ｍＬ，０．４１ミリモル）及びＨＯＢＴ（６８ｍｇ，０．４９ミリモル）；ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のＥＤＣＩ（８８ｍｇ，０．４５ミリモル）を用いた一般的な手順によって白色固形物として表題の化合物を得た（１０４ｍｇ、５０．２％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ１２．４９（ｂｓ，１Ｈ）；８．７４−８．７２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ）；７．９５−７．９２（ｑ，２Ｈ）；７．６２（ｓ，１Ｈ）；７．４９（ｓ，１Ｈ）；７．２７−７．２４（ｔ，２Ｈ）；６．８９（ｓ，１Ｈ）；４．７７−４．７４（ｑ，１Ｈ）；４．２２−４．１７（ｍ，２Ｈ）；３．７５−３．７４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８Ｈｚ）；３．６２−３．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８Ｈｚ）；３．５８（ｓ，３Ｈ）；３．０２−２．９１（ｍ，２Ｈ）；１．２６−１．２２（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７０．３１，１６７．４８，１６５．５６，１６３．４３，１６１．００，１４８．３２，１３７．８９，１３６．９８，１３１．３１，１２８．１１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）；１１８．４５，１１６．１４，１１５．９２，１０８．４９，６２．０１，５３．５４，５３．４０，５１．８７，３３．２４，３０．５５，１４．３４．ＥＳＩ−ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］+Ｃ22Ｈ22ＦＮ5Ｏ5Ｓについての計算値：４８７．５，観察値：４８８．０。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−４−メチル−１−オキソ−１−（フェニルアミノ）ペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（２２）．
相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル１７ａ（７０ｍｇ，０．２ミリモル）；ＬｉＯＨ（４．８ｍｇ，０．２ミリモル）を用いた一般的な手順に従って；抽出した後、白色固形物として所望の生成物を得た（５４ｍｇ、８３．９％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ4，４００ＭＨｚ）：δ７．５７−７．５５（ｄ，２Ｈ）；７．３３−７．２９（ｔ，２Ｈ）；７．１３−７．０９（ｔ，１Ｈ）；４．６４−４．６１（ｍ，１Ｈ）；３．７１（ｓ，１Ｈ）；３．５７（ｓ，１Ｈ）；１．７６−１．６５（ｍ，３Ｈ）；１．０２−０．９８（ｔ，６Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ4，１００ＭＨｚ）：１７１．２２，１６９．０７，１６７．１４，１３７．９８，１２８．４１，１２４．１２，１２０．１４，５２．９０，５２．５８，５１．６９，４０．７０，２９．４９，２４．６４，２２．０４，２０．５９．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ−Ｈ］+Ｃ16Ｈ20Ｎ2Ｏ5についての計算値：３１９．３４０４，観察値：３１９．１３３２．ＨＰＬＣ法１：Ｒt＝２１．０分，純度＝９６．１％
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（２，６−ジフルオロフェニルアミノ）−４−メチル−１−オキソペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（２３ａ）.
相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル１７ｂ（２８ｍｇ，０．７２ミリモル）；ＬｉＯＨ（１．７ｍｇ，０．０７２ミリモル）を用いた一般的な手順に従って；抽出した後、白色固形物として所望の生成物を得た（２０ｍｇ、７７．０％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ4，４００ＭＨｚ，）：δ７．９１（ｓ，１Ｈ）；７．３６−７．３１（ｍ，１Ｈ）；７．０７−７．０２（ｔ，２Ｈ）；４．７２（ｍ，１Ｈ）；３．６５（ｓ，１Ｈ）；３．５２（ｓ，１Ｈ）；１．７４−１．６８（ｍ，３Ｈ）；１．０１−０．９９（ｄ，６Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７１．２６，１６９．２０，１６５．８１，１５９．４９（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），１５７．００（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），１２８．９８（ｔ，Ｊ＝１９．７Ｈｚ）；１１５．３４（ｔ，Ｊ＝３４．０Ｈｚ）；１１３．１０（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），１０７．４３，１０６．２２，５２．９６，５１．５１，５１．３２，４１．３０，２４．７１，２３．８１．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ−Ｈ］+Ｃ16Ｈ20Ｎ2Ｏ5についての計算値：３５５．３２１６，観察値：３５５．３１０１．ＨＰＬＣ法１：Ｒt＝１９．７分，純度＝９５．０％。
（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（２，６−ジフルオロフェニルアミノ）−４−メチル−１−オキソペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（２３ｂ）．
相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル１７ｃ（８５ｍｇ，０．２２ミリモル）；ＬｉＯＨ（５．２ｍｇ，０．２２ミリモル）を用いた一般的な手順に従って；抽出した後、白色固形物として所望の生成物を得た（５９ｍｇ、７４．８％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ，）：δ９．８８（ｓ，１Ｈ）；８．８１−８．７９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２１Ｈｚ）；７．３８−７．３３（ｍ，１Ｈ）；７．１７−７．１３（ｔ，２Ｈ）；４．６１−４．５６（ｑ，１Ｈ）；３．７０−３．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７９Ｈｚ）；３．５２−３．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７９Ｈｚ）；１．６６−１．５８（ｍ，３Ｈ）；０．９３−０．８８（ｄｄ，６Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７１．３５，１６９．２０，１６５．７９，１５９．４８（ｄ，Ｊ＝５．１６Ｈｚ）；１５７．０１（ｄ，Ｊ＝５．２１Ｈｚ）；１２８．５８（ｔ，１９．７Ｈｚ）；１１４．６３（ｔ，Ｊ＝３４．０Ｈｚ）；１１２．３９（ｄ，Ｊ＝２２．６Ｈｚ）；５３．０５，５１．７１，５１．６２，４１．３２，２４．７１，２１．９６．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ−Ｈ］+Ｃ16Ｈ20Ｎ2Ｏ5についての計算値：３５５．３２１６，観察値：３５５．３２０１．ＨＰＬＣ法１：Ｒt＝１８．９分，純度＝９６．５％。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−４−メチル−１−オキソペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（２４ａ）．
相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル１７ｄ（２０３ｍｇ，０．４５ミリモル）；ＬｉＯＨ（１０．８ｍｇ，０．４５ミリモル）を用いた一般的な手順に従って；抽出した後、白色固形物として所望の生成物を得た（１５０ｍｇ、７８．８％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ１２．５１（ｂｓ，１Ｈ）；８．６４−８．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ）；７．９５−７．９２（ｔ，２Ｈ）；７．６２（ｓ，１Ｈ）；７．２８−７．２４（ｔ，２Ｈ）；４．６３−４．５８（ｍ，１Ｈ）；３．５１−３．５０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６０Ｈｚ）；３．３４−３．３３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６０Ｈｚ）；１６５−１．５４（ｍ，３Ｈ）；０．９１−０．８８（ｔ，６Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ4，１００ＭＨｚ）：１７２．４４，１６５．３２，１６２．８７，１５９．３７，１５０．４５，１３２．６０，１３２．５７，１２９．１４，１２９．０６，１１６．５６，１１６．３４，１０８．６９，５４．４１，５３．５５，５３．１９，４１．７９，２６．２１，２３．５４，２２．０２．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ19Ｈ20ＦＮ3Ｏ5Ｓについての計算値：４２２．１１８０，観察値：４２２．１１８８．ＨＰＬＣ法１：Ｒt＝２４．６分，純度＝９５．７％。
（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−４−メチル−１−オキソペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（２４ｂ）．
相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル１７ｅ（７６．４ｍｇ，０．１６ミリモル）；ＬｉＯＨ（８ｍｇ，０．３４ミリモル）を用いた一般的な手順に従って；抽出した後、白色固形物として所望の生成物を得た（５１ｍｇ、７１．５％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ１２．５２（ｓ，１Ｈ）；８．７８−８．７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）；７．９４−７．９２（ｔ，２Ｈ）；７．６３（ｓ，１Ｈ）；７．２９−７．２４（ｔ，２Ｈ）；４．５８−４．５７（ｍ，１Ｈ）；３．６２−３．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８０Ｈｚ）；３．４１−３．４０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８０Ｈｚ）；１．６４−１．５１（ｍ，３Ｈ）；０．９１−０．８８（ｄｄ，６Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７１．０２，１６６．２６，１６２．８８，１６０．４６，１５７．７２，１４７．８１，１３０．８０，１３０．７７，１２７．６２，１２７．５４，１１５．５９（ｄ，Ｊ＝２１．６Ｈｚ）；１０７．９７，５２．３６，５２．０８，５１．３７，２８．８９，２４．２５，２２．８２，２１．１９．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ19Ｈ20ＦＮ3Ｏ5Ｓについての計算値：４２２．１１８０，観察値：４２２．１１８６．ＨＰＬＣ法１：Ｒt＝２３．８分，純度＝９５．１％
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニルスルホンアミド）ブチルアミノ）−４−メチル−１−オキソペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（２５）．
相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル１７ｆ（２１３ｍｇ，０．４２ミリモル）；ＬｉＯＨ（２１ｍｇ，０．８５ミリモル）を用いた一般的な手順に従って；抽出した後、白色固形物として所望の生成物を得た（１１０ｍｇ、５４．７％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ８．１５（ｓ，１Ｈ）；７．８９−７．８５（ｍ，２Ｈ）；７．３（ｓ，１Ｈ）；７．２１−７．１７（ｔ，２Ｈ）；６．１（ｓ，１Ｈ）；３．６８−３．６０（ｄ，２Ｈ）；３．３８−３．３７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６０Ｈｚ）；３．１０−３．０９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６０Ｈｚ）；２．９７（ｓ，１Ｈ）；２．８５（ｓ，１Ｈ）；１．６５−１．５６（ｍ，７Ｈ）；０．９１−０．８８（ｍ，６Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７３．４１，１７０．４７，１６６．９０，１６６．５２，１６３．９９，１３５．７５，１３５．７２，１３０．０３，１２９．９３，１１６．７１，１１６．４８，５３．８３，５２．３２，４３．０８，４１．３４，３９．６５，２６．７６，２６．２２，２４．９５，２２．９４，２２．０６．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ20Ｈ28ＦＮ3Ｏ7Ｓについての計算値：４７４．１７０５，観察値：４７４．１７０７．ＨＰＬＣ法１：Ｒt＝２０．９分，純度＝９９．０％。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（２Ｓ）−１−（４−（５−（１，２−ジチオラン−３−イル）ペンタンアミド）ブチルアミノ）−４−メチル−１−オキソペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（２６）．
１７ｇ（５３ｍｇ，０．１ミリモル）をＴＨＦ、メタノール及び水の３：１：1混合物２ｍｌに溶解し、０℃に冷却し、ＬｉＯＨ（５ｍｇ，０．２ミリモル）を加えた。同じ温度で１５分間撹拌した後、得られた溶液を１ＮのＨＣｌで酸性化し、ＣＨ2Ｃｌ2で抽出した。有機層を水、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させ、真空で濃縮した。粗精製の混合物のカラム精製（ＳｉＯ2，１５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ3）によって白色固形物として表題の化合物を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ８．０１−７．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ）；７．２６（ｓ，１Ｈ）；６．２５（ｂｓ，１Ｈ）；４．５７−４．５３（ｑ，１Ｈ）；３．６９（ｓ，１Ｈ）；３．５９（ｓ，１Ｈ）；３．２１−３．３１（ｍ，５Ｈ）；２．４５−２．４２（ｍ，１Ｈ）；２．２４−２．２０（ｔ，２Ｈ）；１．９４−１．９２（ｍ，１Ｈ）；１．６６−１．５１（ｍ，１２Ｈ）；１．２５−１．２１（ｍ，２Ｈ）；０．９４−０．９１（ｍ，６Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：１７４．１２，１７２．１３，１６８．９２，１６６．６４，５６．５２，５３．５７，５２．５７，５１．６２，４１．１９，４０．３１，３９．０９，３８．９３，３８．５０，３６．２４，３４．６３，２８．９３，２６．５６，２６．４２，２５．５５，２４．８５，２２．８０，２１．８７．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ22Ｈ37Ｎ3Ｏ6Ｓ2についての計算値：５０４．２１９７，観察値：５０４．２１９２．ＨＰＬＣ法１：Ｒt＝２１．７分，純度＝９５．４％。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−４−メチル−１−オキソ−１−（４−（５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド）ブチルアミノ）ペンタン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（２７）．
以下の量：相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル１７ｈ（１５５ｍｇ，０．３ミリモル）；ＬｉＯＨ（１４ｍｇ，０．５８ミリモル）；ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（１．５ｍＬ：０．５ｍＬ：０．５ｍＬ）を用いた一般的な鹸化手順に従って合成して白色固形物として２７を得た（４０ｍｇ、２７．１％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：８．５６（ｄ，１Ｈ）；８．０６（ｔ，１Ｈ）；７．７６（ｔ，１Ｈ）；６．４１（ｓ，１Ｈ），６．３５（ｓ，１Ｈ）；４．５７（ｍ，２Ｈ）；４．３１（ｍ，１Ｈ）；３．６６（ｄ，１Ｈ）；３．３１（ｄ，１Ｈ）；３．０８（ｍ，１Ｈ）；３．０１（ｍ，３Ｈ）；２．８０（ｄｄ，１Ｈ）；２．５６（ｄ，１Ｈ）；２．０４（ｔ，２Ｈ）；１．５３（ｍ，６Ｈ）；１．４３（ｍ，３Ｈ）；１．３６（ｍ，２Ｈ）；０．８９（ｄ，３Ｈ）；０．８４（ｄ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７１．８０，１７１．０６，１６８．７８，１６４．８５，１６２．６８，６１．００，５９．１６，５５．３６，５２．６５，５１．１９，４１．１４，３５．１７，２８．１７，２７．９８，２６．５９，２６．４５，２５．２８，２４．２４，２２．８７，２１．６１．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：イオン化なし，質量は調べず。ＨＰＬＣ法１：Ｒt＝１４．８分，純度＝９５．６％。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソ−１−（フェニルアミノ）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（２８）．
以下の量：相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル１８ａ（１５５ｍｇ，０．３ミリモル）；ＬｉＯＨ（１４ｍｇ，０．５８ミリモル）；ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（１．５ｍＬ：０．５ｍＬ：０．５ｍＬ）を用いた一般的な鹸化手順に従って合成して白色固形物として２８を得た（４０ｍｇ、２７．１％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ4，４００ＭＨｚ）：δ８．６６（ｓ，１Ｈ）；７．５７−７．５５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．８６Ｈｚ）；７．２９−７．２７（ｔ，３Ｈ）；７．１０−７．０７（ｔ，１Ｈ）；４．９７−４．９４（ｑ，１Ｈ）；３．６４−３．６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６６Ｈｚ）；３．５２９−３．５２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６６Ｈｚ）；３．３６−３．１５（ｍ，２Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ4，１００ＭＨｚ）：１６９．７９，１６７．２６，１６６．９５，１３７．９０，１３４．９９，１２８．３７，１２４．１０，１２０．１１，５４．１３，５２．９４，５１．６７．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ16Ｈ16Ｎ4Ｏ5についての計算値：３４５．１１９４，観察値：３４５．１１８５．ＨＰＬＣ法１：Ｒt＝１８．２分，純度＝９５．２％。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）−１−（メシチルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（２９）．
以下の量：相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル１８ｂ（５１．６ｍｇ，０．１ミリモル）；ＬｉＯＨ（５ｍｇ，０．２ミリモル）；ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（１．５ｍＬ：０．５ｍＬ：０．５ｍＬ）を用いた一般的な鹸化手順に従って合成して白色固形物として２９を得た（２６．２ｍｇ、５４．２％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ4，４００ＭＨｚ）：δ７．６２（ｓ．１Ｈ）；６．９３（ｓ，１Ｈ）；６．８７（ｓ，２Ｈ）；４．８４−４．８２（ｍ，１Ｈ）；３．５３−３．４９（ｄ，１Ｈ）；３．３８−３．３５（ｄ，１Ｈ）；３．２５−３．２２（ｍ，２Ｈ）；２．２５（ｓ，３Ｈ）；２．０７（ｓ，６Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ4，１００ＭＨｚ）：１７４．４０，１７２．６２，１７０．８０，１６８．８９，１３６．５４，１３５．７４，１３５．１１，１３３．４３，１３１．２５，１２８．１８，１１７．２６，５４．２０，５３．８２，５３．６９，５２．８０，２９．３４，１９．５５，１６．８６．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ−Ｈ+］Ｃ19Ｈ22Ｎ4Ｏ5についての計算値：３８５．１５１７，観察値：３８５．１５１６．ＨＰＬＣ法２：Ｒt＝１６．４分，純度＝９５．４％。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（３０ａ）．
以下の量：相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル１８ｃ（１８４ｍｇ，０．３９ミリモル）；ＬｉＯＨ（１４ｍｇ，０．５８ミリモル）；ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（１．５ｍＬ：０．５ｍＬ：０．５ｍＬ）を用いた一般的な鹸化手順に従って合成して白色固形物として３０ａを得た（４０ｍｇ、２７．１％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ１２．５０（ｂｓ，１Ｈ）；８．８４−８．７３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，７．３Ｈｚ）；７．９５−７．９１（ｑ，２Ｈ）；７．７３（ｓ，１Ｈ）；７．６３（ｓ，１Ｈ）；７．２９−７．２４（ｔ，２Ｈ）；６．９０（ｓ，１Ｈ）；４．８１−４．７４（ｍ，１Ｈ）；３．６５−３．６４（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１．６８Ｈｚ，１．６８Ｈｚ）；３．４６−３．４２（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１．６５Ｈｚ，１．６５Ｈｚ）；３．０９−３．０１（ｍ，２Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１６９．８１，１６５．８９，１６３．９５，１５７．９２，１４７．９６，１３４．９９，１３２．９３，１３２．９１，１２７．８９，１２７．７２，１１５．７７，１１５．５６，１０８．１７，９９．５９，５２．６９，５１．８５，５１．７７．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ19Ｈ16ＦＮ5Ｏ5Ｓについての計算値：４４６．０９２９，観察値：４４６．０９２２．ＨＰＬＣ法２：Ｒt＝１６．２分（Ｓ−異性体）＆１２．８分（Ｒ−異性体），純度＝９８．２％。異性体の同一性は最初のペプチドカップリングにてＨＯＢＴを用いた再合成によって判定した。これは、Ｒｔ＝１６．２分で溶出し、エナンチオマー混合物におけるＳ−異性体に相当するエナンチオマーとしては純粋なＳ−異性体の単離を導いた。
（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（３０ｂ）．
以下の量：相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル１８ｄ（２００ｍｇ，０．４２ミリモル）；ＬｉＯＨ（１２ｍｇ，０．５０ミリモル）；ＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（２．５ｍＬ：１．５ｍＬ：１．５ｍＬ）を用いた一般的な鹸化手順に従って合成して白色固形物として３０ｂを得た（８５ｍｇ、４５．２％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ，）：δ１２．５２（ｂｓ，１Ｈ）；８．８５−８．７５（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ；Ｊ＝４３．１Ｈｚ）；７．９４−７．９１（ｔ，２Ｈ）；７．８０（ｓ，１Ｈ）；７．６２（ｓ，１Ｈ）；７．２８−７．２４（ｔ，２Ｈ）；６．９３（ｓ，１Ｈ）；４．８０−４．７６（ｑ，１Ｈ）；３．６５−３．６４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４０Ｈｚ）；３．４６−３．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ）；３．０９−２．９６（ｍ，２Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１６９．５，１６８．８，１６５．９，１６２．９，１６０．５，１５７．６，１４７．８，１３４．６，１３２．１，１３０．７，１２７．６，１１６．４，１１５．５（ｄ，Ｊ＝２１．４Ｈｚ），１０８．０，５２．９，５２．７，５２．６，５１．９，２８．６．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ19Ｈ16ＦＮ5Ｏ5Ｓについての計算値：４４６．０９２８，観察値：４４６．０９３９；ＨＰＬＣ法２：Ｒt＝１５．８分，純度＝９７．２％。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（６−フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルアミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（３１ａ）．
以下の量：相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル１８ｅ（１５３ｍｇ，０．３２ミリモル）；ＬｉＯＨ（７．７ｍｇ，０．３２ミリモル）；ＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（３．５ｍＬ：１．５ｍＬ：１．５ ｍＬ）を用いた一般的な鹸化手順に従って合成して白色固形物として３１ａを得た（１０３ｍｇ、７１．５％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ１４．５５（ｂｓ，１Ｈ）；１４．３６（ｂｓ，１Ｈ）；９．１８−９．０２（ｍ，２Ｈ）；７．９３−７．９１（ｍ，１Ｈ）；７．７９−７．７５（ｍ，１Ｈ）；７．４４（ｓ，１Ｈ）；７．３１−７．２９（ｔ，１Ｈ）；４．９６−４．９１（ｑ，１Ｈ）；３．７２−３．７１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６２Ｈｚ）；３．５１−３．５０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６２Ｈｚ）；３．２９−３．１６（ｍ，２Ｈ）．％）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１６９．５０，１６８．５１，１６５．８４，１６５．８４，１５９．８２，１５７．５３，１５７．４４，１４５．０２，１３３．６７，１３２．６８，１３２．５７，１２８．５６，１２１．６３，１１７．０１，１１４．４０，１１４．１６，１０８．２７，１０８．００，５２．６７，５２．１９，５１．３４，２６．２０．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ17Ｈ14ＦＮ5Ｏ5Ｓについての計算値：４２０．０７７３，観察値： ４２０．０７７７。
（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（６−フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルアミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（３１ｂ）．
以下の量：相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル１８ｆ（１２５ｍｇ，０．２６ミリモル）；ＬｉＯＨ（６．２ｍｇ，０．２６ミリモル）；ＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（１．５ｍＬ：１．０ｍＬ：０．５ｍＬ）を用いた一般的な鹸化手順に従って合成して白色固形物として３１ｂを得た（４６ｍｇ、３９．１％）。1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ−ｄ4）：δ１１．８８（ｂｓ，１Ｈ），８．８９−８．８３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，Ｊ＝７．４Ｈｚ）；７．９１−７．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ）；７．７８−７．７２（ｑ， １Ｈ）；７．５６（ｓ，１Ｈ）；７．３０（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ）；６．８５（ｓ，１Ｈ）；４．８１−４．７６（ｍ，１Ｈ）；３．７６−３．７４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６８Ｈｚ）；３．４５−３．４３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６５Ｈｚ）；３．１１−３．００（ｍ，２Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ，）：１７１．１３，１６７．４８，１６５．８３，１６０．３２，１５８．２１，１４５．６４，１３５．４０，１３３．２３，１２２．１７，１１４．８３，１０８．７４，５３．８６，５３．４０，５１．８６．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ17Ｈ14ＦＮ5Ｏ5Ｓについての計算値：４２０．０７７３，観察値：４２０．０７６９。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−オキソ−１−（フェニルアミノ）−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（３２）．
以下の量：相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル１９ａ（１１２ｍｇ，０．２８ミリモル）；ＬｉＯＨ（６．９ｍｇ，０．２９ミリモル）；ＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（２．５ｍＬ：１．０ｍＬ：１．０ｍＬ）を用いた一般的な鹸化手順に従って合成して白色固形物として３２を得た（４５ｍｇ、４３．３％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ4，４００ＭＨｚ，）：δ８．９７（ｓ，１Ｈ）；７．５２−７．５０（ｄ，２Ｈ）；７．３２（ｓ，１Ｈ）；７．３０−７．２６（ｔ，３Ｈ）；４．９４−４．９２（ｔ，１Ｈ）；３．６２（ｓ，１Ｈ）；３．５２−３．４５（ｑ，２Ｈ）；３．４３（ｓ，１Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７２．４８，１６９．６５，１６８．８７，１５３．８３，１５２．４１，１３８．１６，１２８．３３，１２４．０４，１２０．７３，１１５．８９，５４．４９，５３．６０，５２．８９３２．８７．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ16Ｈ15Ｎ3Ｏ5Ｓについての計算値：３６０．０６６０，観察値：３６０．０６７３；ＨＰＬＣ法２：Ｒt＝１６．４分；純度：９５．２％。
（２Ｓ，３Ｓ）− ３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（３３）．
以下の量：相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル１９ｂ（９７４ｍｇ，２．０ミリモル）；ＬｉＯＨ（４７．５ｍｇ，２．０ミリモル）；ＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（２５ｍＬ：５ｍＬ：２ｍＬ）を用いた一般的な鹸化手順に従って合成して白色固形物として３３を得た（６８５ｍｇ、７４．６％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ4，４００ＭＨｚ，）：δ８．９９−８．９８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６７Ｈｚ）；７．９４−７．９１（ｑ，２Ｈ）；７．３７（ｓ，１Ｈ）；７．３６（ｓ，１Ｈ）；７．１５−７．１０（ｔ，２Ｈ）；５．０６−５．０２（ｑ，１Ｈ）；３．６４−３．６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．５７Ｈｚ）；３．４９−３．４５（ｍ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ4，１００ＭＨｚ）：１７０．０５，１６９．０１，１６６．１９，１６３．４３，１５８．１９，１５４．２５，１５２．６６，１４８．３６，１３１．３０，１２８．１８，１１６．６３，１１６．１５，１１５．９３，１０８．６２，５３．１２，５３．０５，５２．２１，３３．０９．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ19Ｈ15ＦＮ4Ｏ5Ｓ2についての計算値：４６３．０５４１，観察値：４６３．０５４５；ＨＰＬＣ法２：Ｒt＝２３．３分；純度＝９６．３％。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−エチニルフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（３４）．
以下の量の１９ｃ（１１５ｍｇ，０．２３ミリモル）；ＬｉＯＨ（６．７ｍｇ，０．２８ミリモル）；ＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（４．５ｍｌ：１．５ｍｌ：１．５ｍｌ）を用いた一般的な鹸化手順に従って合成して白色固形物として３４を得た（４８ｍｇ、４４．２％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ１２．５７（ｓ，１Ｈ）；９．０６−９．０５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９２Ｈｚ）；８．８１−８．７９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ）；７．９３−７．９１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）；７．７６（ｓ，１Ｈ）；７．５５−７．５３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）；７．４５−７．４４（ｄ，１Ｈ，１．８Ｈｚ）；４．９８−４．９３（ｑ，１Ｈ）；４．２５（ｓ，１Ｈ）；３．６６−３．６５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８Ｈｚ）；３．４２−３．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８Ｈｚ）；３．３５−３．２２（ｍ，２Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７０．０８，１６９．０３，１６５．９８，１５８．２５，１５４．３３，１５２．５４，１４８．４７，１３４．９５，１３２．６１，１２６．２６，１２１．３２，１１６．７５，１１０．２０，８３．８７，８１．９９，５３．１５，５３．０８，５１．８８，３３．０５．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ21Ｈ16Ｎ4Ｏ5Ｓ2についての計算値：４６９．０６３５；観察値：４６９．０６２７；ＨＰＬＣ法１：Ｒt＝１２．５分，純度＝９５．７％。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−３−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（３５）．
以下の量：相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル２０（１２９ｍｇ，０．２６ミリモル）；ＬｉＯＨ（６．３ｍｇ，０．２６ミリモル）；ＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（２．５ｍＬ：１．５ｍＬ：１．５ｍＬ）を用いた一般的な鹸化手順に従って合成して白色固形物として３５を得た（５６ｍｇ、４４６．１％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：８．９２−８．９０（ｄ，１Ｈ）；７．９６−７．９１（ｍ，２Ｈ）；７．６８（ｓ，１Ｈ）；７．３５−７．２４（ｍ，３Ｈ）；４．９４−４．８７（ｍ，１Ｈ）；４．６４−４．５６（ｍ，２Ｈ）；３．８２−３．５０（ｍ，５Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７１．５２，１６７．５０，１６５．５７，１６２．４５，１６１．０２，１４８．４２，１３８．６２，１３１．２７，１２８．１８，１２８．０１，１２７．８３，１２７．０５，１１６．１７，１１５．９９，１０６．７０，５３．２４，５２．５８，５１．９０，３１．２９，２９．５２．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ20Ｈ18ＦＮ5Ｏ5Ｓについての計算値：４６０．１０８５；観察値：４６０．１０９２；Ｒt＝１７．８分，純度＝９３．６％。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−３−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（３６）．
以下の量：相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル２１（９３ｍｇ，０．１９ミリモル）；ＬｉＯＨ（４．５ｍｇ，０．１９ミリモル）；ＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（１．５ｍＬ：０．５ｍＬ：０．５ｍＬ）を用いた一般的な鹸化手順に従って合成して白色固形物として３６を得た（２９ｍｇ、３３．１％）。1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）：１２．５０（ｂｓ，１Ｈ），８．８２−８．８０（ｄ，１Ｈ）；７．９３−７．９１（ｍ，２Ｈ）；７．７６（ｓ，１Ｈ）；７．６３（ｓ，１Ｈ）；７．４６−７．２４（ｔ，２Ｈ）；６．９９（ｓ，１Ｈ）；４．７９−４．７４（ｍ，１Ｈ）；３．６７−３．６６（ｄ，１Ｈ）；３．６２（ｓ，３Ｈ）；３．４９−３．４８（ｄ，１Ｈ）；３．１２−２．９０（ｍ，２Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）：１６９．７２，１６８．６０，１６５．５６，１６２．９７，１６０．５４，１５７．７８，１４７．８８，１３７．１７，１３０．８４，１２７．７１，１２７．６３，１１８．３５，１１５．６８，１１５．４７，１０８．０８，５３．０７，５２．９８，５１．５６，３３．１１，２９．６０．ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ20Ｈ18ＦＮＯ5Ｓについての計算値：４６０．１０８５，観察値：４６０．１０９０．Ｒt＝１８．１分，純度＝９５．３％。
クリック誘導体化のためのアルキニルエポキシド−エステル３７の調製
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−オキソ−１−（プロップ−２−インイルアミノ）−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（３７）
Ｂｏｃ−保護したペプチド模倣体（７４０ｍｇ，３．５ミリモル）；（２Ｓ，３Ｓ）−エポキシコハク酸モノエステル（５６４ｍｇ，３．５２ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（１．５３ｍＬ，８．８ミリモル）；ＥＤＣＩ（７４０ｍｇ，３．９ミリモル）；ＤＭＦ（１０ｍｌ）中のＨＯＢＴ（５２０ｍｇ，３．９ミリモル）を用いたペプチドカップリング手順を用いて３７を生成し、白色固形物として表題の化合物（９６０ｍｇ、７７．６％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ８．７８（ｓ，１Ｈ）；７．６５−７．６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．００Ｈｚ）；７．１４（ｓ，１Ｈ）；７．０４（ｂｓ，１Ｈ）；４．８０−４．７５（ｑ，１Ｈ）；４．２９−４．２４（ｍ，２Ｈ）；３．９９−３．９７（ｑ，２Ｈ）；３．７２−３．７１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６Ｈｚ）；３．５３−３．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６Ｈｚ）；３．３４−３．１５（ｍ，２Ｈ）；２．１９（ｂｓ，１Ｈ）；１．３３−１．３０（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：１６９．５９，１６６．４９，１６６．４５，１５３．２２，１５２．４２，１１６．２０，７８．９８，７１．５９，６２．３１，５３．７７，５２．８１，５２．４４，３２．６５，２９．２０，１４．０２．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３５２．０９７５（Ｍ＋Ｈ）+；ｍ／ｚ３５０．０８３６（Ｍ−Ｈ）+。
中間体エステル（３８〜４７）を得るためのヒュスゲン環化付加の一般的な手順
銅が触媒するヒュスゲン環状付加、ａ．ｋ．ａ．「クリックケミストリー」は、他の官能基との交差反応性の低さゆえに過去１０年大きく注目され、エポキシドを組み入れる阻害剤のライブラリの生成のために理想的なツールとなっている。新規のクリックケミストリー経路と共にコンピュータによる助言を採用して、以下参照、トリアゾールを組み入れるカルパイン阻害剤のライブラリを生成した（スキーム６）。ＴＢＴＡの助けを借りてＣｕ［ＩＩ］が触媒するヒュスゲン環化付加を用いてアリール／アジドによって、カギとなるアルキニル中間体３７を官能化し、相当するトリアゾール／アリールを組み入れるエポキシエステルペプチド模倣体を得た（３８〜４７）。エステルの鹸化によって２工程にわたって良好な収率（８５〜１００％）で所望のエポキシ酸（４９〜５８）が得られた。
スキーム６．トリアゾールを組み入れるカルパイン阻害剤までのクリックケミストリー経路

試薬：ｉ）Ｒ3−Ｎ3，ＣｕＳＯ4，ＮａＡｓｃ，ＴＢＴＡ，Ｈ2Ｏ／ｔ−ＢｕＯＨ／ＥｔＯＨ（２：１：１），ｒ．ｔ．，１２ｈ，９０−１００％．ｉｉ）ＬｉＯＨ，ＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ，０℃，８５−１００％
適当なアリール−アジド（１．２当量）及び３７（１．０当量）をｔ−ＢｕＯＨ／ＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏ（１：１：０．５）に溶解した。ＣｕＳＯ4（０．２当量）、アスコルビン酸ナトリウム（０．４当量）及び触媒量のＴＢＴＡ（０．０１当量）を順次加え、反応物を１２時間撹拌した。得られた沈殿物を濾別し、ＣＨ2Ｃｌ2に溶解し、セライトを介して濾過し、真空で濃縮して以下のような収率及び量で所望の生成物を得た。
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−オキソ−１−（１−フェニル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（３８）．
以下の量：３７（２５．０ｍｇ，０．０８ミリモル）；フェニルアジド（９．５ｍｇ，０．０７ミリモル）；ＣｕＳＯ4（２．０ｍｇ，０．０１ミリモル）；ＮａＡｓｃ（６．０ｍｇ，０．０３ミリモル）；ｔ−ＢｕＯＨ／ＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏ（２：１：０．５）中のＴＢＴＡ（５．０ｍｇ，０．０１ミリモル）を置き換えて一般的なクリック手順を用いて白色固形物として３８（３２ｍｇ、９２．６％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ８．７４−７．７３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９０Ｈｚ），７．９３（ｓ，１Ｈ）；７．７３−７．７１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝８．６８Ｈｚ）；７．５５−７．５２（ｔ，２Ｈ）；７．４７−７．３９（ｍ，２Ｈ）；７．０７−７．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７１Ｈｚ）；４．８４−４．７９（ｑ，１Ｈ）；４．５６−４．５４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．８７Ｈｚ）；４．３２−４．２１（ｍ，２Ｈ）；３．７１−３．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７８Ｈｚ）；３．５７−３．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７８Ｈｚ）；３．３９−３．１８（ｍ，２Ｈ）；１．３３−１．３１（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：１７０．０６，１６６．５２，１６６．３９，１５３．２５，１５２．３６，１４５．１１，１３６．９１，１２９．７５，１２８．８１，１２０．５７，１２０．４６，１１５．９７，６２．２７，５３．８０，５２．７９，５２．５８，３４．９８，３２．７６，１４．０１。
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−（（１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（３９）．
以下の量：３７（２７．３ｍｇ，０．０８ミリモル）；１−アジド−４−フルオロベンゼン（１０．４ｍｇ，０．０８ミリモル）；ＣｕＳＯ4（２．０ｍｇ，０．０１ミリモル）；ＮａＡｓｃ（６．０ｍｇ， ０．０３ミリモル）；ｔ−ＢｕＯＨ／ＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏ（２：１：０．５）中のＴＢＴＡ（５．０ｍｇ，０．０１ミリモル）を置き換えて一般的なクリック手順を用いて白色固形物として３９（３５ｍｇ、９２．２％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ８．７３−８．７２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９１Ｈｚ）；７．９０（ｓ，１Ｈ）；７．７４−７．６７（ｍ，３Ｈ）；７．５８−７．５５（ｔ，１Ｈ）；７．２４−７．１８（ｔ，２Ｈ）；７．０７−７．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７１Ｈｚ）；４．８４−４．７９（ｑ，１Ｈ）；４．５４−４．５０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．９０Ｈｚ）；４．２９−４．２１（ｍ，２Ｈ）；３．６８−３．６７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７８Ｈｚ）；３．５３−３．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７８Ｈｚ）；３．３７−３．１８（ｍ，２Ｈ）；１．３０−１．２６（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：１６９．８２，１６６．１７，１６６．０３，１６３．２８，１６０．８１，１５２．８６，１５２．００，１４４．９４，１３２．７８，１２２．１０，１２２．０１，１２０．４８，１１６．４５，１１６．２２，１１５．５９，６１．９１，５３．４３，５２．４０，５２．２４，３４．５５，３２．４２，１３．６３。
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−オキソ−１−（（１−（４−（ピペリジン−１−イルスルホニル）フェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（４０）．
以下の量：３７（２８．１ｍｇ，０．０８ミリモル）；４−ピペリジノフェニルアジド（１０．７ｍｇ，０．０８ミリモル）；ＣｕＳＯ4（３．０ｍｇ，０．０２ミリモル）；ＮａＡｓｃ（６．０ｍｇ，０．０３ミリモル）；ｔ−ＢｕＯＨ／ＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏ（２：１：０．５）中のＴＢＴＡ（５．０ｍｇ，０．０１ミリモル）；用いて置き換えて一般的なクリック手順を用いて白色固形物として４０（３１ｍｇ、７９．８％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ８．７６−８．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８４Ｈｚ）；８．０５（ｓ，１Ｈ）；７．９３（ｓ，４Ｈ）；７．７６−７．７４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０４Ｈｚ）；７．３８−７．３６（ｔ，１Ｈ）；７．１０−７．０９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７０Ｈｚ）；４．７９−４．７６（ｑ，１Ｈ）；４．５８−４．５５（ｑ，２Ｈ）；４．３０−４．２５（ｍ，２Ｈ）；３．７２−３．７１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７８Ｈｚ）；３．５５−３．５４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７８Ｈｚ）；３．３８−３．１７（ａｂｑ，２Ｈ）；３．０７−３０４（ｔ，３Ｈ）；１．７５−１．６０（ｍ，１Ｈ）；１．３１−１．２６（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：１７０．３１，１６９．６５，１６６．５２，１６６．４４，１５３．３０，１５２．４０，１５２．３４，１４５．９３，１３９．６４，１３６．６８，１２９．４０，１２０．６１，１２０．４１，１１６．２０，１１６．０２，７９．０１，７１．５７，６２．３１，５３．７７，５２．８０，５２．４５，４６．９４，３２．７０，２９．１９，２５．１１，２３．４２，１４．０２。
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−（１−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（４１）．
３７（２５．０ｍｇ，０．０７ミリモル）；５−アジドベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール（９．５ｍｇ，０．０７ミリモル）；ＣｕＳＯ4（２．０ｍｇ，０．０１ミリモル）；ＮａＡｓｃ（６．０ｍｇ，０．０３ミリモル）；ｔ−ＢｕＯＨ／ＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏ（２：１：０．５）中のＴＢＴＡ（５．０ｍｇ，０．０１ミリモル）を用いて以上の量を置き換えて一般的なクリック手順を用いて白色固形物として４１（３１ｍｇ、８９．７％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ８．７６−８．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８６Ｈｚ）；７．７９（ｓ，１Ｈ）；７．７３−７．７１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．１６Ｈｚ）；７．２４−７．２１（ｄｄ，２Ｈ）；７．１４−７．１１（ｄｄ，１Ｈ）；７．０８−７．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６３Ｈｚ）；６．９３−６．９１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３２Ｈｚ）；６．０９（ｓ，２Ｈ）；４．７９−４．７６（ｑ，１Ｈ）；４．５４−４．５３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．９０Ｈｚ）；４．３１−４．２５（ｍ，２Ｈ）；３．７２−３．７１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７６Ｈｚ）；３．５５−３．５４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７６Ｈｚ）；３．３８−３．１５（ａｂ，２Ｈ，Ｊ＝９２．８Ｈｚ，５７．５７Ｈｚ）；１．３５−１．３０（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：１６９．４９，１６９．０５，１６４．２２，１５５．０１，１５３．３０，１４８．８４，１４７．９２，１４８．２７，１３０．９８，１２１．７２，１１６．２６，１１４．１７，１０９．１２，１０２．６０，１０２．３３，６２．１４，５２．９５，５２．５４，５１．９０，３４．７８，３３．４９，１４．２３。
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−オキソ−１−（（１−（４−スルファモイルフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（４２）：
ｔ−ＢｕＯＨ／ＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏ（４：４：２）中の３７（１０９．０ｍｇ，０．３１ミリモル）；４−アジドベンゼンスルホンアミド（６１．５ｍｇ，０．３１ミリモル）；ＣｕＳＯ4（１０．０ｍｇ，０．０６ミリモル）；ＮａＡｓｃ（２０．０ｍｇ，０．０３ミリモル）；ＴＢＴＡ（１０．０ｍｇ，０．０２ミリモル）を用いて以上の量を置き換えて一般的なクリック手順を用いて白色固形物として４２（１１９ｍｇ、６９．８％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ８．９３（ｓ，１Ｈ）；８．４５（ｓ，１Ｈ）；８．１９−８．０５（ｑ，４Ｈ）；７．３３（ｓ，１Ｈ）；４．８１−４．７７（ｔ，１Ｈ）；４．５７−４．４８（ｑ，２Ｈ）；４．２８−４．２３（ｑ，２Ｈ）；３．６４（ｓ，１Ｈ）；３．５０（ｓ，１Ｈ）；３．４０−３．２１（ｍ，２Ｈ）；１．２８−１．２３（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ4，１００ＭＨｚ）：１７０．９４，１６６．８０，１６６．７２，１５３．４５，１５１．９２，１４５．７０，１４３．４９，１３８．８５，１２７．３１，１２０．７４，１１９．７６，１１５．５６，６１．４２，５２．７２，５２．６７，５１．４７，３３．９３，３１．９１，１２．５２。
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−（（１−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（４３）．
追加の３滴のＤＭＦを伴ったｔ−ＢｕＯＨ／ＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏ（４：４：２）中の３７（９３．７ｍｇ，０．２７ミリモル）；１−アジド−３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンゼン（８２．５ｍｇ，０．３２ミリモル）；ＣｕＳＯ4（０．６ｍｇ，０．０１ミリモル）；ＮａＡｓｃ（３．５ｍｇ，０．０２ミリモル）；ＴＢＴＡ（１５．０ｍｇ，０．０３ミリモル）を用いて以上の量を置き換えて一般的なクリック手順を用いて白色固形物として４３（１４２ｍｇ、８７．８％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ８．７７（ｓ，１Ｈ）；８．２５（ｓ，２Ｈ）；８．０９（ｓ，１Ｈ）；７．９６（ｓ，１Ｈ）；７．７７−７．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０９Ｈｚ）；７．３４−７．３２（ｔ，１Ｈ）；７．１１（ｓ，１Ｈ）；４．８１−４．７６（ｑ，１Ｈ）；４．５９−４．５７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．９０Ｈｚ）；４．３１−４．２５（ｍ，２Ｈ）；３．７２−３．７１１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６４Ｈｚ）；３．５５−３．５４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６４Ｈｚ）；３．４１−３．１７（ｍ，２Ｈ）；１．０１−０．９９（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７０．６２，１６７．４９，１６５．３７，１５４．０６，１５３．２４，１４６．９２，１３８．３１，１２４．５７，１２２．３７，１２１．８５，１２１．０９，１１６．２１，６１．９７，５３．４４，５２．９７，５１．７４，３４．６４，３３．４９，１４．２９。
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−（（１−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（４４）．
ｔ−ＢｕＯＨ／ＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏ（２：２：１）中の３７（６０ｍｇ，０．１７ミリモル）；１−アジド−４−ブロモベンゼン（５１ｍｇ，０．２６ミリモル）；ＣｕＳＯ4（４．４ｍｇ，０．０３ミリモル）；ＮａＡｓｃ（２２ｍｇ，０．１１ミリモル）；ＴＢＴＡ（２０．０ｍｇ，０．０４ミリモル）を用いて以上の量を置き換えて一般的なクリック手順を用いて白色固形物として４４（４０ｍｇ、４２．６％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ９．００−８．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６６Ｈｚ）；８．７４−８．７１（ｔ，１Ｈ）；８．６３−８．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２２Ｈｚ）；８．５４（ｓ，１Ｈ）；７．６０−７．５６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１４．８５Ｈｚ）；７．３４５−７．３４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６３Ｈｚ）；７．１１−７．０７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１４．８５Ｈｚ）；４．６９−４．６６（ｑ，１Ｈ）；４．４０−４．３８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．５９Ｈｚ）；４．２０−４．１３（ｍ，２Ｈ）；３．６６−３．６６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７３Ｈｚ）；３．５２−３．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７３Ｈｚ）；３．３３−３．１２（ｍ，２Ｈ）；１．２３−１．２０（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）：１７０．５７，１６７．５１，１６５．３６，１５４．０７，１５３．２７，１４６．５６，１３９．３９，１３６．２５，１２２．３０，１２１．５４，１１７．５１，１１６．２３，１．９７，５３．４６，５２．９９，５１．７６，３４．７５，３３．５０，１４．３２。
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−（（１−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（４５）．
ｔ−ＢｕＯＨ／ＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏ（２：２：１）中の３７（６０ｍｇ，０．１７ミリモル）；１−アジド−４−ニトロベンゼン（４２ｍｇ，０．２６ミリモル）；ＣｕＳＯ4（４．４ｍｇ，０．０３ミリモル）；ＮａＡｓｃ（２２ｍｇ，０．１１ミリモル）；ＴＢＴＡ（２０．０ｍｇ，０．０４ミリモル）を用いて以上の量を置き換えて一般的なクリック手順を用いて橙色固形物として４５（４０ｍｇ、４５．６％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ９．００−８．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８Ｈｚ）；８．７７−８．７４（ｔ，１Ｈ）；８．７３（ｓ，１Ｈ）；８．６３−８．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１７Ｈｚ）；８．４７−８．４４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．１３Ｈｚ）；８．２１−８．１９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．１３Ｈｚ）；７．３６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７８Ｈｚ）；４．７１−４．６５（ｑ，１Ｈ）；４．４２−４．４０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．５０Ｈｚ）；４．２０−４．０９（ｍ，２Ｈ）；３．６６−３．６５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７５Ｈｚ）；３．５２−３．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７５Ｈｚ）；３．２８−３．０６（ｍ，２Ｈ）；１．２２−１．１７（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：１７０．２５，１６７．１４，１６５．００，１５３．７０，１５２．８７，１４６．７７，１４６．６８，１４０．８９，１２５．７０，１２１．５９，１２０．４２，１１５．８６，６１．６０，５３．０９，５２．６１，５１．４０，３４．３２，３３．１２，１３．９４。
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−（（１−（２，６−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（４６）．
ｔ−ＢｕＯＨ／ＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏ（１：１：０．５）中の３７（４８ｍｇ，０．１４ミリモル）；２−アジド−１，３−ジフルオロベンゼン（２４ｍｇ，０．１５ミリモル）；ＣｕＳＯ4（３．５ｍｇ，０．０２ミリモル）；ＮａＡｓｃ（１８ｍｇ，０．０９ミリモル）；ＴＢＴＡ（１２ｍｇ，０．０１ミリモル）を用いて以上の量を置き換えて一般的なクリック手順を用いて白色固形物として４６（２０ｍｇ、３１．６％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ８．７４−８．７３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７９Ｈｚ）；７．７４−７．７２（ｍ，２Ｈ）；７．５５−７．４５（ｍ，１Ｈ）；７．３４−７．３２（ｍ，１Ｈ）；７．１７−７．１３（ｔ，２Ｈ）；７．０４−７．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７２Ｈｚ）；４．８２−４．８０（ｑ，１Ｈ）；４．５７−４．５６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．９７Ｈｚ）；４．２９−４．２４（ｍ，２Ｈ）；３．７１−３．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７８Ｈｚ）；３．５５−３．５４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７８Ｈｚ）；３．３５−３．１８（ｍ，２Ｈ）；１．３３−１．３０（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：１７０．１６，１６６．６５，１６６．３０，１５８．０１，１５５．４６，１５３．２９，１５２．２４，１４４．３６，１３１．４８，１２９．１４，１２５．１０，１１６．０１，１１２．６４，６２．２４，５３．８１，５２．７４，５２．６２，３４．７４，３２．９１，１３．９９。
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−（（１−メシチル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−（チアゾールｌ−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（４７）．
ｔ−ＢｕＯＨ／ＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏ（１：１：０．５）中の３７（４８ｍｇ，０．１４ミリモル）；２−アジド−１，３−ジフルオロベンゼン（２４ｍｇ，０．１５ミリモル）；ＣｕＳＯ4（３．５ｍｇ，０．０２ミリモル）；ＮａＡｓｃ（１８ｍｇ，０．０９ミリモル）；ＴＢＴＡ（１２ｍｇ，０．０１ミリモル）を用いて以上の量を置き換えて一般的なクリック手順を用いて白色固形物として４７（３０ｍｇ、４２．８％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ８．７９−８．７４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７９Ｈｚ）；７．６８−７．６４（ｍ，２Ｈ）；７．５０（ｓ，１Ｈ）；７．３６−７．３４（ｄ，２Ｈ）；７．２８−７．２６（ｄ，２Ｈ），７．１５−７．１０（ｍ，２Ｈ），６．９８（ｓ，１Ｈ）；５．５０（ｓ，１Ｈ）；４．８３−４．７８（ｍ，１Ｈ）；４．５９−４．５８（ｄ，１Ｈ）；４．２９−４．２５（ｍ，２Ｈ）；３．９９−３．９７（ｑ，１Ｈ）；３．８１（ｓ，３Ｈ）；３．６９−３．６８（ｍ，３Ｈ）；３．５５−３．５４（ｄ，１Ｈ）；３．３７−３．１９（ａｂｑ，２Ｈ）；２．３５（ｓ，３Ｈ）；１．９３（ｓ，３Ｈ）１．３３−１．２９（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１６９．２５，１６５．６２，１５３．６５，１５２．９８，１４４．９３，１４０．１１，１３４．５１，１３４．５０，１２８．１２，１２４．６９，１１５．８８，６３．５１，５２．６９，５２．７８，５１．９８，４８．６６，３４．５４，３３．１０，２０．６９，１６．８９，１３．５２。
（２Ｓ，３Ｓ）−エチル−３−（（Ｓ）−１−（（１−（４−アミノフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボキシレート（４８）．
ｔ−ＢｕＯＨ／ＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏ（２：１：０．５）中の３７（２９．５ｍｇ，０．０８４ミリモル）；４−アジドアニリン（１１．３ｍｇ，０．０８４ミリモル）；ＣｕＳＯ4（３．０ｍｇ，０．０２ミリモル）；ＮａＡｓｃ（７．０ｍｇ，０．０３ミリモル）；ＴＢＴＡ（５．０ｍｇ，０．００９ミリモル）を用いて以上の量を置き換えて一般的なクリック手順を用いて白色固形物として４８（３５ｍｇ、８５．９％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：ｄ＝８．７３（ｓ，１Ｈ）；８．１８（ｂｓ，１Ｈ）；７．８６（ｓ，１Ｈ）；７．８５−７．８３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１７Ｈｚ）；７．４６−７．３５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５８Ｈｚ）；７．０６（ｓ，１Ｈ）；６．８０−６．７８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６２Ｈｚ），４．７８−４．７７（ｑ，１Ｈ）；４．４８−４．４７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．６０Ｈｚ）；４．２９−４．２３（ｍ，２Ｈ）；３．６５−３．６４（ｄ，ｌＨ，Ｊ＝１．５９Ｈｚ）；３．５１−３．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．５９Ｈｚ）；３．４１−３．２４（ｍ，２Ｈ）：１．３３−１．３０（ｔ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：１６９．１２，１６６．７４，１６６．１４，１５３．０９，１５１．８，１４７．３２，１４４．４４，１２７．９０，１２１．８６，１２０．７３，１１５．７７，１１５．０，６２．０７，５３．３９，５２．２３，３４．５１，３４．３９，３２．７０，１３．６。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−オキソ−１−（（１−フェニル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（４９）．
相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル３８（２３ｍｇ，０．４７ミリモル）；ＬｉＯＨ（１．２ｍｇ，０．０５ミリモル）を用いて一般的な手順に従って、抽出の後、白色固形物（１８ｍｇ、８４．９％）として所望の生成物を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ９．００−８．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７６Ｈｚ）；８．７３−８．７０（ｔ，１Ｈ）；８．５８−８．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２４Ｈｚ）；８．５０（ｓ，１Ｈ）；７．８７−７．８５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．７６Ｈｚ）；７．６１−７．４９（ｍ，３Ｈ）；７．３４４−７．３４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２１Ｈｚ）；４．６９−４．６６（ｑ，１Ｈ）；４．４１−４．３９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．４９Ｈｚ）；３．５９−３．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．５８Ｈｚ）；３．３５−３．１０（ｍ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７０．６２，１６９．０６，１６５．７５，１５４．０５，１５３．３１，１４６．３６，１３７．０７，１３０．３８，１２９．０６，１３１．４８，１２０．４１，１１６．１９，５３．２５，５２．９６，５１．９０，３４．８０，２９．４２．ＨＲＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ18Ｈ16Ｎ6Ｏ5Ｓについての計算値：４４３．１１３７，観察値：ｍ／ｚ４４３．１１３５（Ｍ＋Ｈ+）；．ＨＰＬＣ法２：Ｒt＝１６．７分；純度＝９７．９％。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（（１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（５０）．
相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル３９（２５ｍｇ，０．５１ミリモル）；ＬｉＯＨ（１．３ｍｇ，０．０６ミリモル）を用いて一般的な手順に従って、抽出の後、白色固形物（１８ｍｇ、７６．２％）として所望の生成物を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ８．９８（ｓ，１Ｈ）；８．７２−８．７０（ｔ，１Ｈ）；８．５７−８．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０６）；８．４８（ｓ，１Ｈ）；７．９３−７．９０（ｑ，２Ｈ）；７．４８−７．４４（ｔ，２Ｈ）；７．３４（ｓ，１Ｈ）；４．７０−４．６５（ｑ，１Ｈ）；４．４０−４．３８（ｄ，２Ｈ；Ｊ＝５．５２）；３．６６（ｓ，１Ｈ）；３．５４−３．０６（ｍ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７０．６２，１６５．７５，１６３．２４，１６０．８０，１５４．０６，１５３．３２，１４６．４０，１３３．６２，１２２．８１，１２２．７２，１２１．７６，１１７．３３，１１７．１０，５３．２４，５３．０１，５２．９４，３４．７７，３３．５０．ＨＲＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ19Ｈ17ＦＮ6Ｏ5Ｓについての計算値：４６１．１０４３，観察値：ｍ／ｚ４６１．１０４９（Ｍ＋Ｈ+）；ＨＰＬＣ法２：Ｒt＝１７．９分；純度＝９７．２％。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−オキソ−１−（（１−（４−（ピペリジン−１−イルスルホニル）フェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（５１）．
相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル４０（２６ｍｇ，０．４２ミリモル）；ＬｉＯＨ（１．０ｍｇ，０．０４ミリモル）を用いて一般的な手順に従って、抽出の後、白色固形物（１２ｍｇ、４８．３％）として所望の生成物を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（アセトン−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ８．９８（ｂｓ，１Ｈ）；８．４８（ｓ，１Ｈ）；８．１６−８．１２（ｄ，２Ｈ，８．４８）；８．０２−８．００（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４８Ｈｚ）；７．３７（ｂｓ，１Ｈ）；４．８１（ｂｓ，１Ｈ）；４．５２（ｓ，２Ｈ）；３．８５−３．７９（ｍ，４Ｈ）；３．６１（ｓ，１Ｈ）；３．５５（ｓ，１Ｈ）；１．８２−１．６０（ｍ，６Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（アセトン−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７０．０７，１６９．０１，１６５．１２，１５３．５２，１３９．３６，１３６．１９，１２９．４７，１２０．８４，１２０．２１，１０７．３９，１０７．２５，６６．６２，５３．４４，５２．８０，５２．７７，４６．８３，３２．５２，３０．０７，２５．０２，２３．１３．ＨＲＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ24Ｈ27Ｎ7Ｏ7Ｓ2についての計算値：５９０．６４４０，観察値：ｍ／ｚ５９０．１０５０（Ｍ＋Ｈ+）；ＨＰＬＣ法２：Ｒt＝２１．７分；純度＝９６．３％。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（（１−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（５２）．
相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル４１（１０ｍｇ，０．１６ミリモル）；ＬｉＯＨ（０．３５ｍｇ，０．０２ミリモル）を用いて一般的な手順に従って、抽出の後、白色固形物（７ｍｇ、７３．１％）として所望の生成物を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ９．００−８．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８８Ｈｚ）；８．７１−８．６８（ｔ，１Ｈ）；８．５７−８．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２８Ｈｚ）；８．３８（ｓ，１Ｈ）；７．４６−７．４５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．１５Ｈｚ）；７．３３−７．３１（ｍ，２Ｈ）；７．１１（ｓ，１Ｈ）；７．０９（ｓ，１Ｈ）；６．１５（ｓ，２Ｈ）；４．６７−４．６５（ｍ，１Ｈ）；４．３８−４．３６（ｄ，２Ｈ）；３．６０−３．５８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７２Ｈｚ）；３．５０−３．１７（ｍ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７０．５９，１６９．０６，１６５．７５，１５４．０５，１５３．３１，１４８．６５，１４７．８１，１４６．０７，１３１．５３，１２１．６９，１１６．１９，１１４．１５，１０９．１１，１０２．５８，１０２．３３，５３．２４，５２．９４，５１．９０，３４．７８，３３．４９．ＨＲＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ20Ｈ18Ｎ6Ｏ7Ｓについての計算値：４８７．４６４３，観察値：ｍ／ｚ４８７．１０５０（Ｍ＋Ｈ+）；ＨＰＬＣ法２：Ｒt＝１８．１分；純度＝９７．７％。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−オキソ−１−（（１−（４−スルファモイルフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（５３）．
相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル４２（３０ｍｇ，０．５５ミリモル）；ＬｉＯＨ（１．３ｍｇ，０．０５５ミリモル）を用いて一般的な手順に従って；生成物は後処理の間に水性層に入る。水性層をＣＨ2Ｃｌ2で洗浄し、凍結乾燥して白色固形物（８ｍｇ、４５．１％）として所望の生成物を得る。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ９．００−８．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９２Ｈｚ）；８．７９−８．７６（ｔ，１Ｈ）；８．７０−８．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）；８．６６（ｓ，１Ｈ）；８．１２−８．０１（ｍ，４Ｈ）；７．５５（ｓ，２Ｈ）；７．３６（ｓ，１Ｈ）；４．７０−４．６５（ｍ，１Ｈ）；４．４１−４．４０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．２０Ｈｚ）；３．６１（ｓ，１Ｈ）；３．４４−３．１０（ｍ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７２．２５，１７０．６６，１６９．０６，１６５．７４，１５４．１０，１５２．５２，１３８．２９，１４６．８０，１４４．１９，１２８．０１，１２１．７５，１２０．５９，１１６．２９，５３．２５，５２．９８，５１．８４，４９．０１，３３．４３．ＨＲＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ19Ｈ19Ｎ7Ｏ7Ｓ2についての計算値：５２２．０８６５，観察値：ｍ／ｚ５２２．０８５８（Ｍ＋Ｈ+）；ＨＰＬＣ法２：Ｒt＝１４．８分；純度＝９５．１％。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（（１−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（５４）．
相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル４３（９４ｍｇ，０．１５ミリモル）；ＬｉＯＨ（３．７ｍｇ，０．１５ミリモル）を用いて一般的な手順に従って、抽出の後、白色固形物（７２ｍｇ、８０．３％）として所望の生成物を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ８．９９−８．９８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９２Ｈｚ）；８．９２（ｓ，１Ｈ）；８．７９−８．７７（ｔ，１Ｈ）；８．６３（ｓ，２Ｈ）；８．５７−８．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２７Ｈｚ）；８．２７（ｓ，１Ｈ）；７．３４−７．３３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８５Ｈｚ）；４．７１−４．６６（ｍ，１Ｈ）；４．４３−４．４２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．６７Ｈｚ）；３．５８−３．５７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７３Ｈｚ）；３．３６−３．３５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７０Ｈｚ）；３．２８−３．１０（ｍ，２Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７０．６７，１６９．０７，１６５．８０，１５４．０６，１５３．２９，１４６．９３，１３８．３２，１３２．４８，１３２．１４，１２２．３８，１２１．１１，１１６．１８，５３．２２，５２．９０，５１．９６，３４．６４，３３．５１．ＨＲＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ21Ｈ16Ｆ6Ｎ6Ｏ5Ｓについての計算値：５７９．４４４３，観察値：ｍ／ｚ５７９．０８９０（Ｍ＋Ｈ+）；ｍ／ｚ５７７．０７７５（Ｍ−Ｈ+）．ＨＰＬＣ法２：Ｒt＝２４．５分；純度＝９５．３％
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（（１−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（５５）．
相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル４４（２５ｍｇ，０．０４ミリモル）；ＬｉＯＨ（１．１ｍｇ，０．０４ミリモル）を用いて一般的な手順に従って、抽出の後、白色固形物（１８ｍｇ、７５．９％）として所望の生成物を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ８．９９−８．９８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８７Ｈｚ）；８．７４−８．７１（ｔ，１Ｈ）；８．５８−８．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２７Ｈｚ）；８．５４（ｓ，１Ｈ）；７．８６−７．７９（ｑ，４Ｈ）；７．３４−７．３３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７５Ｈｚ）；４．７０−４．６５（ｑ，１Ｈ）；４．４０−４．３８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．５９Ｈｚ）；３．６０−３．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７７Ｈｚ）；３．３８−３．３７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７７Ｈｚ）；３．２８−３．１０（ｍ，２Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７０．６２，１６９．０８，１６５．７４，１５４．０６，１５３．２９，１４６．５７，１３６．２５，１３３．２７，１２２．３１，１２１．６７，１２１．５４，１１６．２０，５３．２５，５２．９４，５１．８９，３４．７６，３３．４９．ＨＲＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ19Ｈ17ＢｒＮ6Ｏ5Ｓについての計算値：５２１．３４，観察値：ｍ／ｚ５２３．０２２９（Ｍ＋Ｈ+）；ｍ／ｚ５１９．０１２３（Ｍ−Ｈ+）；ＨＰＬＣ法２：Ｒt＝２１．８分；９７．２％。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（（１−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（５６）．
相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル４５（２７ｍｇ，０．０５ミリモル）；ＬｉＯＨ（１．２ｍｇ，０．０５ミリモル）を用いて一般的な手順に従って、抽出の後、白色固形物（２０ｍｇ、７８．３％）として所望の生成物を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ９．００−８．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７９Ｈｚ）；８．７４−８．７１（ｔ，１Ｈ）；８．５９（ｓ，１Ｈ）；８．４８−８．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４２Ｈｚ）；８．４７−８．４５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．１５Ｈｚ）；８．２１−８．１９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．１５Ｈｚ）；７．３４−７．３３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７８Ｈｚ）；４．６９−４．６６（ｑ，１Ｈ）；４．４２−４．４１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．６０Ｈｚ）；３．６０−３．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７９Ｈｚ）；３．５０−３．１０（ｍ，３Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７０．６８，１６９．０７，１６５．７５，１５４．１０，１５３．２５，１４７．１１，１４７．０５，１４１．２６，１２６．０８，１２１．９５，１２０．９４，１１６．２３，５３．２４，５２．９５，５１．８５，３４．６９，３３．４４．ＨＲＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ19Ｈ17Ｎ7Ｏ7Ｓについての計算値：４８８．４５４３，観察値：ｍ／ｚ４８８．０９８６（Ｍ＋Ｈ+）；ｍ／ｚ４８６．０８６４（Ｍ−Ｈ+）．ＨＰＬＣ法２：Ｒt＝２０．４分；９３．４％。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（（１−（２，６−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（５７）．
相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル４６（２４ｍｇ，０．０５ミリモル）；ＬｉＯＨ（１．１ｍｇ，０．０５ミリモル）を用いて一般的な手順に従って、抽出の後、白色固形物（１３ｍｇ、５７．３％）として所望の生成物を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ９．００−８．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９０Ｈｚ）；８．７８−８．７６（ｔ，１Ｈ）；８．６０−８．５８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２９Ｈｚ）；８．２７（ｓ，１Ｈ）；７．７７−７．６９（ｍ，１Ｈ）；７．４９−７．４５（ｔ，２Ｈ）；７．３６−７．２７（ｍ，２Ｈ）；４．７１−４．６５（ｍ，１Ｈ）；４．４４−４．４２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．６３Ｈｚ）；３．５９８−３．５９３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７８）；３．３６０−３．３５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７８）；３．２７−３．２２（ｍ，２Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７０．６９，１６９．０７，１６５．６９，１５８．０７，１５８．０４，１５５．５６，１５５．５３，１５４．０５，１５３．３１，１４５．６７，１３６．６２，１２９．１７，１２８．４８，１２６．１７，１１６．１７，５３．２３，５２．９３，５１．８３，３４．６７，３３．５１．ＨＲＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ19Ｈ16Ｆ2Ｎ6Ｏ5Ｓについての計算値：４７９．４３４３，観察値：ｍ／ｚ４７９．０９６０（Ｍ＋Ｈ+）：ＨＰＬＣ法２：Ｒt＝１７．３２分；９５．９％。
（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（（１−メシチル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸（５８）．
相当するペプチド模倣体エポキシドのエチルエステル４７（２４ｍｇ，０．０５ミリモル）；ＬｉＯＨ（１．１ｍｇ，０．０５ミリモル）を用いて一般的な手順に従って、抽出の後、白色固形物（１５ｍｇ、６６．１％）として所望の生成物を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ８．９８−８．９７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８７Ｈｚ）；８．７２−８．７０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ）；８．５５−８．５３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２３Ｈｚ）；７．９３（ｓ，１Ｈ）；７．３４（ｓ，１Ｈ）；７．０８（ｓ，１Ｈ）；４．６８−４．６３（ｍ，１Ｈ）；４．４２−４．４０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．５０Ｈｚ）；３．６１−３．５０（ｍ，４Ｈ）；２．３２（ｓ，３Ｈ）；１．８６（ｓ，６Ｈ）．13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ）：１７０．２９，１６５．６０，１５３．６５，１５２．９８，１４４．９３，１３９．４６，１３４．５１，１３３．５０，１２８．９０，１２４．６９，１１５．７８，５２．７９，５２．５８，４８．６６，３４．５４，３３．１０，２０．６９，１６．８９．ＨＲＭＳ−ＥＳＩ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ+］Ｃ22Ｈ24Ｎ6Ｏ5Ｓについての計算値：４８５．５３４３，観察値：ｍ／ｚ４８５．１６２２（Ｍ＋Ｈ+）：ｍ／ｚ４８３．１６００（Ｍ−Ｈ+）；ＨＰＬＣ法２：Ｒt＝２３．６分；９７．４％。
実施例３：第１世代の阻害剤：Ｐ３／Ｐ４キャップ基の選択によるカルパインの阻害
カルパインの活性は、ＦＲＥＴ基質の存在下で完全長のヒトＣａｌ１を用いて測定した。ＩＣ50値は、ＦＲＥＴ基質（ＤＡＢＣＹＬ）ＴＰＬＫ−ＳＰＰＳＰＲ−（ＥＤＡＮＳ）（配列番号５）及び活性化緩衝液の存在下で様々な濃度の適当な阻害剤（１０、１００、５００、１０００ｎＭ）の同時インキュベートによって概算した。２０分間のインキュベート後、蛍光を測定し、阻害剤を含有しない対照実験に対して標準化することによって％阻害を算出した。ペプチド阻害剤、Ｚ−ＬＬＹ−ＦＭＫ（配列番号６）を陽性対照として用いた。強力な阻害剤の場合、１、１０、５０、１００、２５０及び５００ｎＭを含めるように濃度／反応を広げた。
表２ エポキシスクシネートの構造及び阻害データ





表３ 完全長Ｃａｌ１についてのエポキシスクシネートの構造及び阻害データ

ａ）阻害はＦＲＥＴの存在下で種々の濃度の阻害剤と共に２０分間インキュベートした後、４８０ｎｍの蛍光放射をモニターすることによって測定した：阻害剤の非存在下での対照インキュベートに対して標準化した％阻害。データは３つ組実験の平均値±ＳＤで表す。ｂ）１μＭでは阻害は定量できない。
Ｐ２位でＬ−ロイシン残基を組み入れる第１世代の阻害剤である２２〜２７（表３）は、Ｐ２位でＥ−６４を模倣するように設計したが、Ｅ−６４のグアニジノ基に比べて効能及び生体利用効率を高めるようにＰ３キャップ基を変化させた。第１世代の阻害剤の大半はＥ−６４とほぼ同等の効力を有することが見いだされ、約１００ｎＭ（±２０〜５０）のＩＣ50値を持ったが、阻害剤の１つ２４ａは５０ｎＭ（±２５）のＩＣ50値を持ち、改善された効能を示した。これらの結果は、Ｐ２位における疎水性のアミノ酸残基はＣａｌ１への高い親和性を送達するという理解に一致する。２つの例、２３及び２４では、Ｓ，Ｓエポキシドの立体化学の重要性が実証された。Ｃａｌ１阻害はＲ，Ｒ誘導体２３ｂについては認められなかったが、Ｓ，Ｓ異性体は強力な阻害剤だった。Ｓ，Ｓエポキシドの立体化学は分子リモデリングに基づいて最適であることが提唱されているが、それはＳ，Ｓエポキシドによる保存された相互作用のネットワークの形成が活性部位システインとエポキシド環の求電子性Ｃ２との間での密接な接触を可能にすることを示唆している（それぞれその全体が参照によって本明細書に組み入れられるMladenovic, M. et al., The Journal of Physical Chemistry B 2008, 112, 11798-11808; Otto, H. H. et al., Chem Rev 1997, 97, 133-172）。
実施例４：新規のカルパイン阻害剤による活性部位の修飾
組換えＣａｌ１触媒ドメイン（Ｃａｌ1cat）は完全長の酵素のタンパク質分解ドメインから構成され、カルパイン活性を検討するのに代理として使用されている（それぞれその全体が参照によって本明細書に組み入れられるMoldoveanu, T. et al., Cell 2002, 108, 649-660; Moldoveanu, T. et al., Journal of Molecular Biology 2004, 343, 1313-1326; Cuerrier, D. et al., Biochemistry 2006, 45, 7446-52; Cuerrier, D. et al., Journal of Biological Chemistry 2005, 280, 40632-40641）。Ｃａｌ1catは、Ｃａ2+誘導性の活性化の際、完全長のＣａｌ１が活性及び阻害の解析を複雑にする自己触媒、自己タンパク質分解に関わるので、利点を提供する。Ｃａｌ1catは、完全長のＣａｌ１で見られる自己触媒活性を欠く。阻害の態様をさらに詳細に調べるために組換えのラットＣａｌ1catを大腸菌で発現させ、それから精製した。
阻害動態及びＸ線結晶学は、活性部位Ｃｙｓの共有結合修飾から生じる、Ｅ−６４によるカルパイン阻害のメカニズムを支持する（その全体が参照によって本明細書に組み入れられるSuzuki, K. et al., FEBS Letters 1983, 152, 67-70）。２４ａについての類似のメカニズムを支持するためにＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いた。実験の方法論を図３Ａに概説する。Ｃａｌ1cat（５μＭ）を適当な阻害剤（１０μＭ）とともに３０分間インキュベートした。ＥＤＴＡ（１０μＭ）によって混合物の反応を止め、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で流した。バンドの切り出し、ヨードアセトアミド（ＩＡＡ、１０μＭ）による遊離システインのゲル内キャッピング、トリプシン消化及びその後のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ解析によって図３Ｂに示すクロマトグラムを得た。活性部位システインを含有するペプチド断片（ＴＤＩＣＱＧＡＬＧＤＣ＊ＷＬＬＡＡＩＡＳＬＴＮＥＴＩＬＨＲ）（配列番号７）は、トリプシン消化のマッピング及び（阻害剤の非存在下での）ＩＡＡ修飾についてのｍ／ｚ値の一致、及び２４ａ又はＥ−６４による共有結合修飾によって同定した。ＩＡＡ標識した非活性部位のシステインを含有するペプチド断片を、観察される活性部位の修飾の程度の半定量的なＥＩＣ解析の内部標準として使用した（図３Ｂ）。これらの試験にはＣａｌ1catを採用したが、完全長のＣａｌ１の解析が同一の活性部位ペプチド断片をもたらしたことは注目に値する（Ｃａｌ1catと完全長Ｃａｌ１に由来する対照消化物のＴＩＣを実施例１０にて比較する）。
Ｅ−６４又は２４ａのいずれかとのＣａｌ1cat（１μＭ）の類似のインキュベートは活性部位システインの濃度依存性の修飾を示した（図３Ｃ）。Ｅ−６４及び２４ａ（双方とも１μＭ）とのＣａｌ1catの同時インキュベートは、観察されたＥＩＣピークの面積に基づいて２４ａによるさらに大きな修飾を示した（図３Ｄ）。この結果は、２４ａによる阻害の能力と合わせて、その後のリガンドの開発のための４−Ｆ−フェニルチアゾールＰ３／Ｐ４キャップ基の保持を支持した。
実施例５：第２世代のカルパイン阻害剤の開発
ＣＡ族のシステインプロテアーゼは、Ｓ２結合部位にて疎水性残基に共通の優先性を持つ類似の「活性化されていない」基質結合ポケットを有する（たとえば、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ）（それぞれその全体が参照によって本明細書に組み入れられるGreenbaum, D. et al., Chem Biol 2000, 7, 569-81; Greenbaum, D. C. et al., Chemistry & Biology 2002, 9, 1085-1094; Otto, H. H. et al., Chem Rev 1997, 97, 133-172）。エポキシスクシネートエステルの弾頭部を伴ったペプチドに関する以前の研究は、Ｐ２のヒスチジンがＣａｌ１の選択性を付与し得ることを示した。Ｇｌｕ３４９とＴｈｒ２１０によってキレートされた高度に保存された水分子を伴ったＳ２ポケットの中で生じる安定化している水素結合の存在であることがもたらされる理論的根拠（その全体が参照によって本明細書に組み入れられるCuerrier, D. et al., J Biol Chem 2007, 282, 9600-11）。Ｌ−ヒスチジンを組み入れる類似体の着目されたシリーズを合成し、評価した（２８〜３１）。加えて、２つのＮ−メチルＬ-ヒスチジン誘導体３５及び３６を創ってＳ２ポケットを探索した。
ヒスチジンの容易なプロトン化は合成で問題を起こし、ドラッガビリティを妨害し得るので、チアゾール誘導体も開発した（３２〜３４）。Ｐ２類似体３０ａ及び３３はＥ−６４とほぼ同等の効力を有した（ＩＣ50約１００ｎＭ）が、第２世代の化合物のスクリーニングはＬ−ロイシンの置換における活性の一般的な喪失を明らかにした（表３）。Ｐ２にてＬ−ロイシンの選択性及び活性部位の相互作用を理論的に説明するために使用した結晶構造は、エチルエポキシスクシネートエステルを含有したが、第１及び第２世代のエポキシスクシネートの単純なエチルエステルはＣａｌ１の測定可能な阻害をもたらさなかった。
Ｐ２のヒスチジン置換及びチアゾリル類似体の選択性を付与する能力を調べるために、Ｅ−６４、２４ａ、３０ａ及び３３を比較して単純な競合実験を実施した。ビオチン化したロイシンに基づくエポキシスクシネート２７は、Ｃａｌ１阻害剤であることが示され、１ＤのＳＤＳ−ＰＡＧＥ後の反応混合物の抗ビオチン免疫ブロットを用いて、Ｃａｌ１及びＣａｔｈＢの双方を個々に及び組み合わせにて、共有結合で修飾することも示された（図４）。ＣａｔｈＢは、Ｃａｌ１と類似の活性化されていない亜部位結合の優先性を示す関連するＣＡ族のシステインプロテアーゼである。Ｃａｌ1catを完全長酵素の代わりに使用して自己触媒を回避した。Ｃａｌ1catは、完全長酵素に比べて低下した活性を持つが、類似の基質特異性を保持することが報告されている（それぞれその全体が参照によって本明細書に組み入れられるMoldoveanu, T. et al., Cell 2002, 108, 649-660; Moldoveanu, T. et al., Journal of Molecular Biology 2004, 343, 1313-1326; Cuerrier, D. et al., Biochemistry 2006, 45, 7446-52; Cuerrier, D. et al., Journal of Biological Chemistry 2005, 280, 40632-40641）。
図４で説明するように、Ｃａｌ1cat及びＣａｔｈＢを阻害剤で１０分間予備処理し、その後、ビオチン化したエポキシド２７と共に２０分間インキュベートした。Ｅ−６４がシグナルの実質的な喪失（レーン２）を引き起こしたということは、２７による修飾から双方の酵素の活性部位の有効な遮断を示している。強力な第１世代のＣａｌ１阻害剤２４ａもまた双方の酵素からのシグナルを実質的に低下させたが（レーン４）、ウエスタンブロットの単純な視覚的な検査は、ＣａｔｈＢシグナルにおいて３０ａ（レーン３）及び３３（レーン５）がほとんど変化を惹起しないことを示した。定量的には、Ｐ２位におけるイミダゾリル及びチアゾリルの置換の所望の選択性が示された。選択性のさらに定量的な推定はバンドの強度の比較によって達成した。プローブ２７による修飾からのＣａｔｈＢに対するＣａｌ1catのバンド強度の比を１．０に設定すると、Ｅ−６４はＣａｌ1catについて選択性（１．５）を有すると評価されるが、２４ａは非選択性であることが認められた（図４）。第２世代の阻害剤は双方ともＣａｌ1catについて選択性であることが認められた。
２４ａ、３０ａ及び３３についてのドッキング結果の構造的な重なり合いは、溶媒にさらされたＳ４−Ｓ３領域に伸びたＰ３キャプ基及びＳ２ポケットの中に位置するＰ２ペプチド模倣体部分という、共通する結合モチーフを予測する（図５）。ドッキング孔は、Ｓ２部位にて保存されたＨ2Ｏ分子と相互作用する３０ａ及び３３の潜在力に適合する。イミダゾリル基又はチアゾリル基の取り込みはロイシンに基づいた阻害剤に比べてＣａｌ１結合部位に対する親和性を高めることはなかったが、この修飾は選択性を提供したことが留意されるべきである。
実施例６：Ｐ３／Ｐ４の改良に向けたコンピュータによる助言
エポキシド阻害剤によって修飾されたシステインプロテアーゼの結晶構造に基づいたコンピュータが誘導する薬剤設計は問題があると認識されている。活性部位のＣｙｓによる求核的攻撃は、開環と、Ｃ（ＯＨ）−Ｃ（Ｓ−Ｃｙｓ）単結合についての遊離の回転による緩みをもたらす（図６）。そのような結晶構造は、環状遷移状態の安定化のための十分な立体電子要件を反映するとは期待されない。従って、代わりのアプローチとして、２つのパラメータ：（ｄ１）Ｈｉｓ一般塩基とエポキシドのＯとの間の距離及び（ｄ２）求核性のＳとエポキシドのＣ２との間の距離を強調することによって阻害剤のドッキングをスコア化した（ＮＳｉｇ）。このアプローチを試し、Ｐ３／Ｐ４の修飾をさらに調べるために、分岐合成法を用いて化合物３３の類似体のライブラリを生成するためにクリックケミストリー法を用いた。化合物３３の合成可能な３２の類似体をコンピュータでスクリーニングし、合成及びアッセイのための１０を選択した。不十分な阻害剤であると予想された分化合物（５３、５４、５７及び５８）は相対的に高いＩＣ50値を得る一方で、有効な阻害剤であると予想された分子はカルパインに対して強力な活性を示し（５０、５２、５５及び５６）、５４は、強力であると予想されたにもかかわらず弱い活性を示すことによって顕著な外れ者を表した。ドッキングスコア（Ｎｓｉｎｇ）のＩＣ50との相関は、４９〜５２、５５〜５６について良好な相関をもたらした（Ｒ2＝０．９６８）。
実施例７：Ｃａｌ１について選択性の酵素動態試験
パパインは、ヒトのカテプシン（Ｂ、Ｃ、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｌ１−２、Ｏ、Ｓ、Ｗ、Ｚ）を含む通常リソソームの又は分泌性のシステインプロテアーゼのファミリーの代表的なものである。Ｐ１ペプチド残基はカチオン性であり、Ｐ２は疎水性でＬｅｕを含むので、パパインはＣａｌ１について有用なカウンタースクリーニングを表す。Ｃａｌ１を含むシステインプロテアーゼの不可逆的な阻害の詳細な動態解析について幾つかの方法が文献で報告されている。Ｓ／Ｎは当初のスクリーニングで採用されるＦＲＥＴ法を用いた動態解析には不十分すぎるので、アミノメチルクマリン基質ＳＬＬＶＹＡＭＣ（配列番号８）の使用について条件を最適化した。この基質を用いて、Ｄａｖｉｅｓと共同研究者の方法を用い、動態パラメータを導き出し、それによって時間の関数として生成物形成を測定する「プログレス曲線」を最初に得て、Ｐ∞＊（１−ｅ(-k*x)）に適合させた（図７）（その全体が参照によって本明細書に組み入れられるCuerrier, D. et al., J Biol Chem 2007, 282, 9600-11）。１／［Ｉ］に対するＰ∞のプロットは、アプローチの妥当性を支持する優れた線形の相関を与えた。動態パラメータ（ｋi、ＫI、ｋi／ＫI）を二重相互プロットから得た（図７）。パパインを超えるＣａｌ１の阻害についての相対的な選択性を評価する阻害有効性の測定値としてｋi／ＫIを用いて、表４に提示するデータは、２４ａは主要化合物であるＥ−６４よりも選択性は低いが、３３、３４、５０はすべてＣａｌ１選択性を示すことを示す。表４及び図７への参照は、この選択性の原因がＣａｌ１の差別化された阻害ではなく、Ｐ２チアゾールが原因で生じたパパインの不十分な阻害であることを示す。５０のＰ３キャップ基もＣａｌ１ではなくパパインへの結合親和性を低下させることによってこの誘導体のさらに高い選択性に寄与する。
表４．Ｃａｌ１及びパパインについてのエポキシスクシネートの阻害効率及び相対的な選択性
ａ）完全長Ｃａｌ１とパパインに対する算出された阻害率及び見かけの平衡定数。ｂ）Ｅ−６４に対して算出されたＫｉ／Ｋｉ。ｃ）１．０に設定されたＥ−６４に対してＫｉ／Ｋｉを用いて算出した選択性。阻害定数は、酵素及び阻害剤双方の濃度を変えて本文中に記載したように算出した。データは３つ組実験の平均値±Ｓ．Ｄ．を表す。
実施例８：カルパイン阻害ＦＲＥＴアッセイ
ヒト赤血球カルパイン１の活性に対する阻害効果の阻害剤を測定するのにＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ ＩｎｎｏＺｙｍｅ活性キットを用いた。カルパインＦＲＥＴ基質（ＤＡＢＣＹＬ）−ＴＰＬＫＳＰＰＰＳＰＲ−（ＥＤＡＮＳ）（配列番号９）を用いてＣａｌ１の活性を検出した。反応混合物を含有するアッセイ緩衝液（トリス［１０ｍＭ］、ＮａＣｌ［１００ｍＭ］、ｐＨ７．４）に２０μＭのＦＲＥＴ基質、１０ｎＭのネイティブＣａｌ１及び２０μＭのＴＣＥＰ（還元剤）を加えた。１０μＭのカルシウムの添加によってＣａｌ１を活性化した。切ることができる結合、アミド結合Ｋ−Ｓの切断は内部消光分子（ＤＡＢＣＹＬ）から蛍光色素分子（ＥＤＡＮＳ）を放出し、３２０ｎｍの励起及び４８０ｎｍの放射の波長で３０分間測定した蛍光の上昇を生じる。各阻害剤を様々な濃度で（１０ｎＭ、１００ｎＭ、１μＭ及び１０μＭ）反応混合物に加え、Ｃａｌ１の阻害を検出し、９６穴プレートリーダーによって蛍光の減少を測定した。Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウエアの範囲内での線形回帰を用いて各化合物のおよそのＩＣ50値を生成した。
実施例９：Ｃａｌ1catの発現及び精製
発現：その創製が参照によって全体として本明細書に組み入れられるＤａｖｉｅｓ，Ｐ．Ｌ．，ら、Ｃｅｌｌ，２００２．１０８（５）：６４９−６６０にて記載されているμ−カルパインの活性ドメインＩ−ＩＩを含有するｐＥＴ２４ｄ系のプラスミド構築物で大腸菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）を形質転換した。２２５ｒｐｍで振盪しながら３７℃にて３０μｇ／ｍｌのカナマイシンを含有するＬＢ培地にて１リットルの培養物をインキュベートし、０．６のＯＤ６００に達した後、０．５ｍＭのＩＰＴＧによって誘導した。さらに３時間のインキュベートに続いて０．５Ｌのアリコートの遠心（４℃、１３，０００ｒｐｍ、３０分間）によって細胞ペレットを生成し、使用に先立って−８０℃で保存した。
Ｃａｌ1catの発現のための増殖条件：その創製が参照によって全体として本明細書に組み入れられるＤａｖｉｅｓ，Ｐ．Ｌ．，ら、Ｃｅｌｌ，２００２．１０８（５）：６４９−６６０にて記載されているμ−カルパインの活性ドメインＩ−ＩＩを含有するｐＥＴ２４ｄ系のプラスミド構築物で大腸菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）を形質転換した。２２５ｒｐｍで振盪しながら３７℃にて３０μｇ／ｍｌのカナマイシンを含有するＬＢ培地にて１リットルの培養物をインキュベートし、０．６のＯＤ６００に達した後、０．５ｍＭのＩＰＴＧによって誘導した。さらに３時間のインキュベートに続いて０．５Ｌのアリコートの遠心（４℃、１３，０００ｒｐｍ、３０分間）によって細胞ペレットを生成し、使用に先立って−８０℃で保存した。
Ｃａｌ1catの精製：凍結した細胞ペレットを２５ｍｌの溶解緩衝液（５００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．６、２０ｍＭのイミダゾール、１ｍＭのＰＭＳＦ、１００μｇ／ｍＬのリゾチーム）に再浮遊し、氷上で３０分間インキュベートした。細胞を超音波処理によって溶解し、遠心（４℃、１３，０００ｒｐｍ、２０分間）によって澄ませた。精製のために溶解物をＮｉ2+−アフィニティカラム（ＨｉｓＴｒａｐＦＦ粗精製，５ｍＬ，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に適用した。１００：０のＡ：Ｂから０：１００のＡ：Ｂ（緩衝液Ａ＝５００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．６、２０ｍＭのイミダゾール。緩衝液Ｂ＝５００ｍＭのＮａＣｌ、２５０ｍＭのイミダゾール、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．６．）の線形勾配によって５ｍｌ／分でタンパク質を溶出し、２００μｌの受容緩衝液（最終濃度５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．６、４ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＴＣＥＰ）を含有する５ｍｌの分画に回収した。溶出したタンパク質を１０Ｋ分子量フィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって濃縮し、ゲル濾過（ＨｉＴｒａｐ脱塩、５ｍＬ，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を介して保存緩衝液（１５０ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．６、５％のグリセロール（ｖ／ｖ）、１ｍＭのＴＣＥＰ、１００μＭのＥＤＴＡ）に交換した。濃縮した酵素を２０μｌのアリコートにて−８０℃で保存した。製造元のプロトコールに従って保存緩衝液で希釈したＢＳＡ標準に対して、ビシンコニン酸アッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって最終的な精製した酵素タンパク質の濃度を測定した。７μｌのマーカー（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｐｌｕｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｓｔａｎｄａｒｄ，ＢｉｏＲａｄ社）を負荷した４〜１２％のポリアクリルアミドゲル（ＮｕＰＡＧＥ）によってタンパク質を解析した。Ｂｉｏ ＳａｆｅＣｏｏｍａｓｓｉｅ（ＢｉｏＲａｄ社）によってゲルを染色した。
μＩ−ＩＩ配列（配列番号１０）：ＭＧＲＨＥＮＡＩＫＹＬＧＱＤＹＥＮＬＲＡＲＣＬＱＮＧＶＬＦＱＤＤＡＦＰＰＶＳＨＳＬＧＦＫＥＬＧＰＮＳＳＫＴＹＧＩＫＷＫＲＰＴＥＬＬＳＮＰＱＦＩＶＤＧＡＴＲＴＤＩＣＱＧＡＬＧＤＣＷＬＬＡＡＩＡＳＬＴＬＮＥＴＩＬＨＲＶＶＰＹＧＱＳＦＱＥＧＹＡＧＩＦＨＦＱＬＷＱＦＧＥＷＶＤＶＶＶＤＤＬＬＰＴＫＤＧＫＬＶＦＶＨＳＡＱＧＮＥＦＷＳＡＬＬＥＫＡＹＡＫＶＮＧＳＹＥＡＬＳＧＧＣＴＳＥＡＦＥＤＦＴＧＧＶＴＥＷＹＤＬＱＫＡＰＳＤＬＹＱＩＩＬＫＡＬＥＲＧＳＬＬＧＣＳＩＮＩＳＤＩＲＤＬＥＡＩＴＦＫＮＬＶＲＧＨＡＹＳＶＴＤＡＫＱＶＴＹＱＧＱＲＶＮＬＩＲＭＲＮＰＷＧＥＶＥＷＫＧＰＷＳＤＮＳＹＥＷＮＫＶＤＰＹＥＲＥＱＬＲＶＫＭＥＤＧＥＦＷＭＳＦＲＤＦＩＲＥＦＴＫＬＥＩＣＮＬＴＰＤＬＥＨＨＨＨＨＨ
Ｃａｌ1catの配列の配列比較を図8に示す。活性部位のシステインは「ミニカルパイン配列アラインメント」では１１５であり、「すべてを含んだカルパイン配列アラインメント」では１３２である。配列アラインメントは、Ｐｕｂｍｅｄからダウンロードした配列を用いてＣＬＣ配列ビューアー（フリーバージョン）によって実施した。
実施例１０：阻害剤が修飾したＣａｌ1catの活性部位のＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる調査
ＣａＣｌ2（１０ｍＭ）の添加を介して組換えＣａｌ1cat（５μＭ）を活性化し、Ｅ−６４又は２２ａ（５μＭ）と共に２０分間インキュベートした。ＥＤＴＡ（１０μＭ）で反応を止め、反応混合物をＳＤＳ ＰＡＧＥゲル上で流した。Ｃａｌ1catを含有するバンドをゲルから切り出し、ＩＡＡ（１００ｍＭ）による６０分間のゲル内アルキル化に供し、その後、トリプシン消化に供した。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳは、Ａｇｉｌｅｎｔ６３００イオントラップＬＣ／ＭＳにて行った。ＨＰＬＣ分離は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｊｕｐｉｔｅｒ逆相ＨＰＬＣカラム（５ミクロン、１５０ｍｍ、２．００ｍｍ）；移動相ＡＣＮ［０．１％ギ酸］）／水（［０．１％ギ酸］）を採用した。予想されるｍ／ｚの修飾されたペプチド断片について得られたＴＩＣ及びＥＩＣを解析した。
活性部位ペプチド：ＴＤＩＣＱＧＡＬＧＤＣＷＬＬＡＡＩＡＳＬＴＬＮＥＴＩＬＨＲ（配列番号１１）について算出されたｍ／ｚ：理論的なｍ／ｚ＝３１１３．６（＋３）ＭＷ：１０３８．８，（＋４）Ｗ７７９．２。
ＩＡＡで修飾した活性部位ペプチドの配列：ＴＤＩＣ（カルバミドメチル）ＱＧＡＬＧＤＣ（カルバミドメチル）ＷＬＬＡＡＩＡＳＬＴＬＮＥＴＩＬＨＲ（配列番号１２）について算出されたｍ／ｚ：理論的なｍ／ｚ＝３２２７．８（＋３）；１０７６．８，（＋４）；ＭＷ８０７．６．観察されたｍ／ｚ＝（＋３）１０７６．５；（＋４）８０７．７。
Ｅ−６４及びＩＡＡで修飾した活性部位ペプチドの配列：配列−ＴＤＩＣ（Ｃａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ）ＱＧＡＬＧＤＣ（Ｅ６４）ＷＬＬＡＡＩＡＳＬＴＬＮＥＴＩＬＨＲ（配列番号１３）について算出されたｍ／ｚ：理論的なｍ／ｚ＝３５２８．１（＋３）；１１７６．１、（＋４）；ＭＷ８８２．１。
観察されたｍ／ｚ＝（＋３）；１１７６．４，（＋４）ＭＷ８８２．８
実施例１１：ビオチン化エポキシドプローブを用いたＣａｌ１対ＣａｔｈＢについての競合アッセイ
Ｃａｌ１cat（２μＭ）、ＣａｔｈＢ（２μＭ）、ＴＣＥＰ（１ｍＭ）及びＣａ2+（３０μＭ）を含有する混合物にて適当な阻害剤（５μＭ）を３７℃で１０分間予備インキュベートした。次いで２３（５μＭ）を加え、混合物をさらに２０分間インキュベートした。ＥＤＴＡ（１０μＭ）で反応を止め、４〜１６％のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを用いて試料を流し、その後、ＰＶＤＦ膜に移し、ＰｉｅｒｃｅＥＣＬ（増強化学発光）ウエスタンブロット基質によって視覚化した。各ブロットの強度は濃度測定ソフトウエアを用いて算出した。各酵素の相対的阻害は阻害剤の非存在下における酵素活性に関して算出した。ＣａｔｈＢに関するＣａｌ1catへの阻害剤の優先性は相対的なＣａｌ1catの阻害をその特定の阻害剤の相対的なＣａｔｈＢの阻害で割ることによって算出した。
実施例１２：カルパイン及びパパインの阻害の動態試験
１００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．６、１ｍＭのＴＣＥＰ、３０μＭのＳｕｃ−ＬＬＶＹ−ＡＭＣ基質、及び阻害剤（０．５〜５０μＭ）の溶液にブタの完全長カルパイン（１５６ｎＭ）又はパパイン（２３６ｐＭ）を加えた。カルパインの反応はＣａＣｌ2も含有した（ブタ及びラットについてそれぞれ１ｍＭ及び１００ｍＭ）。Ｅ−６４を水に溶解したことを除いて基質及び阻害剤は双方ともアセトニトリル／ＤＭＳＯ（１：１）に溶解した。有機溶媒はすべての反応で＜２％残ったが、＜１％が最も多かった。反応は、９６穴マイクロタイタープレートにてウェル当たり１５０μｌで３０℃にて実施し、生成物形成は蛍光（Ｅｘ／Ｅｍ＝３４６／４４４ｎｍ、４２０ｎｍのカットオフフィルター）によって経時的にモニターした。Ｋobsの動態値は単相会合解析を用いた非線形回帰を介して決定し、１／Ｋobs対1／［Ｉ］の線形プロットは動態定数ｋiおよびＫIを提供した。
実施例１３：シナプス機能不全の試験
シナプス機能不全に対する我々の最適化した化合物のスクリーニングに関して、我々は、ＬＴＰレスキュー試験を用いた。Ｅ−６４についてのＥＤ50（基準として）に相当する６５０ｎＭに等しいアミロイドβの値にて化合物６７、２２ａ、３０ａ、３６、６６、３３、５０及び５５を評価した。化合物６７、２２ａ、６６、３３、及び５０はＬＴＰ解放についての能力にてＥ−６４に勝った（図９）。それに対して３６及び５５はそれに勝らなかった。
実施例１４：選択した化合物の予備的な毒性特性
急性及び慢性の毒性の評価について、我々は３０ａ、３３及び５０についてマウスにて最大耐用量（ＭＴＤ）を測定した。ＭＴＤは、不快感又は死という点で毒性効果を生じない最大投与量として計算される。ＭＴＤは３０ａについては１００ｍｇ／ｋｇの用量、３３については１５０ｍｇ／ｋｇの用量、及び５０については２００ｍｇ／ｋｇの用量で設定した。これらの用量はすべて有効性試験で使用された用量の＞１０倍だった。急性毒性の評価は３つの化合物について毒性の臨床兆候はないことを明らかにした。慢性毒性の評価に関しては、組織病理学的な証拠が、３つの化合物についてＭＴＤでの慢性治療によって誘導される一般化された毒性を告発することはなかった。しかしながら、おそらく浸透圧調整に関連する同じ寸法の空胞変性によって証拠づけられるように３０ａ処理群では神経毒性が注目された。
実施例１５：選択された化合物の予備的な薬物動態特性
ＩＣＲマウスへのｉ．ｐ．投与後ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって３０ａ、３３及び５０の血漿濃度を測定した。各試料採取時間での血漿濃度を図１０に示す。動態の解析は、３つの候補化合物はすべてｉ．ｐ．注射の際、迅速に吸収されることを示している。実際、３０ａ（７．５７ｍｇ／ｋｇ）、３３（７．８６ｍｇ／ｋｇ）及び５０（７．８３ｍｇ／ｋｇ）のｉ．ｐ．投与に続いて、ピークの血漿濃度は投与後それぞれ０．２５、０．５及び０．１２５時間で生じた。ｉ．ｐ．投与後の３０ａ、３３及び５０の絶対的な生体利用効率はそれぞれ８０．４％、８７．３％及び４１．３％だった。各半減期は、約０．６時間、約１．１時間及び約０．６時間だった。
実施例１６：選択された化合物の脳薬剤活性の評価
成熟動物の海馬におけるスペクトリンのタンパク質分解の分解生成物のレベルを下げる能力を測定するために試験を行った。ＰＫ評価に使用した同じ濃度での３０ａ、３３及び５０による１２日間のｉ．ｐ．処理に続いて、ウエスタンブロット解析を用いて、カルパインが生成するスペクトリンの断片の防止をチェックした。ビヒクル、３０ａ、３３及び５０で処理した動物から得た海馬ホモジネートに由来するウエスタンブロットを図１１に示す。ビヒクル試料の列は、５、１０、１５及び２０μｇの総タンパク質／レーンによる負荷試料によって得られた。化合物で処理した動物に由来する試料は１５μｇ／レーンで負荷した。化合物３０ａはカルパインによるスペクトリン切断を防止することにてあまり効率的ではなかったが、残りの２つの化合物３３及び５０は断片の量を劇的に減らした。さらに、３３及び５０は脳に効果的に浸透することが可能だった。
実施例１７：行動レスキューアッセイ
３ヵ月齢のＡＰＰ／ＰＳ１動物における連想記憶及び参照記憶の損傷を救済する化合物の能力を評価した。文脈的恐怖記憶における損傷を改善する能力をｉ．ｐ．投与を介して調べた（図１２）。２日間のＲＡＷＭ試験にて２ヵ月齢からの６７、３０ａ、３３及び５０の毎日の注射が文脈的恐怖記憶及び参照記憶の喪失に対して有益だった。
さらに重度のプラーク負荷を伴った月齢の進んだＡＰＰ／ＰＳ１マウス（７ヵ月齢）における記憶喪失に対する慢性処理の効果も検討した。化合物６７、３３及び５０は慢性投与に続いて記憶損傷に対して有益だった（図１３）。
実施例１８：クリックコンジュゲートを用いた脳における薬剤作用の確認
ＩＣＲマウスにおけるＰＫの解析は脳における非常に低い生体利用効率を明らかにした。これは、薬剤の生体内での認知機能促進活性及びカルパインが介在する海馬のスペクトリン切断の低下によってもたらされる難問を提示した。脳及び血漿の生体利用効率はＣ５７ＢＬ６マウスにてＵＩＣでＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって確認した。この難題に対する考えられる説明は、（１）化合物のタンパク質との共有結合；（２）タンパク質との丈夫だが、可逆性の結合；（３）生体内での過剰な代謝である。これらの可能性を区別するために、さらなる評価は、化合物がアルブミンと結合し、ＢＢＢを通る輸送を順次覆い隠すことを示唆した。化合物のＰＫを改善する努力では、プロドラッグの合成も着手されている。カルパイン１の活性部位の共有結合修飾は薬剤ＭＯＡの一部である。この課題に対処するために、２Ｎ３にタグを付けた誘導体を調製した（図１４）。アルケニルエポキシド化合物３４又は８８をマウスに投与し、１０分及び３０分後に屠殺し、その後潅流して脳を切り出す。アルケニルエポキシドによって修飾したものを含むタンパク質を脳組織から単離し、アビジンカラムを通した後、アジ化ビオチニルにクリックする。ストレプトアビジン／ＨＲＰによるウエスタンブロットは薬剤が修飾したタンパク質を視覚化する。ゲル内消化及びＬＣ−ＭＳ／ＭＳプロテオーム解析は修飾されたタンパク質標的を同定する。陽性のウエスタンブロットは薬剤がＢＢＢに浸透することを裏付ける。プロテオーム解析は絶対に必要とされるわけではないが、ＭＯＡを支持する将来価値を加えた実験と見なされ得る。
実施例１９：プロドラッグについての行動レスキューアッセイ
３ヵ月齢のＡＰＰ／ＰＳ１動物における連想記憶及び参照記憶の欠陥を救済するプロドラッグの能力を評価した。エステル化した化合物は、酸同族体に対して増加したＢＢＢ浸透を示した。しかしながら、エステル化した化合物はまた、（ａ）反応性の２つの環の迅速な開環を生成するＧＳＨに向かう高い反応性；（ｂ）他のＳＨ反応性の標的、たぶん、任意のタンパク質標的に向かう反応性システインとの一般化された反応性；（ｃ）阻害剤の活性の低下を導く乏しいプロドラッグ挙動；（ｄ）乏しいＰＫ／ＰＤの存在下でさえ生体内の効果が作用の複数のメカニズムを示唆すること；（ｅ）低い阻害活性にもかかわらず、カルパイン１についてのおそらく高い選択性も示した。従って、エステル化はＰＫを改善すると思われるが、ＰＤのパラメータを損なう。化合物８９は、３ヵ月齢のＡＰＰ／ＰＳ１マウスにてＬＴＰ及び記憶の双方を改善する（図１５）。２ヵ月齢から３ヵ月齢までの８９による毎日の処理は、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにてＬＴＰ（Ａ）、文脈的恐怖記憶（Ｂ）及び参照記憶（Ｃ）における欠陥を改善した。全群についてｎ＝１０。その各媒体処理の遺伝子導入動物に比べて化合物で処理した遺伝子導入動物ではｐ＜０．０５。
実施例２０：ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおけるＡβレベルに対する効果
Ａβの脳及び血漿におけるレベルの上昇並びにアミロイドプラークの出現はＡＤの重要な特徴である。従って、Ｅ−６４及びＢＤＡ−４１０はＡβレベル及びプラーク負荷に効果を有さないけれども、３３及び８９で処理した動物から採取した脳組織及び血液試料におけるＡβ４０及び４２を測定することによって新規のカルパイン阻害剤の効果を調べた。Ｅ−６４及びＢＤＡ−４１０にて認められたように、化合物処理した遺伝子導入動物と媒体処理した遺伝子導入動物の海馬の間で差異は検出されなかった（図１６）。類似の結果が皮質で得られた。
前述の説明に役立つ実施形態にて本発明を記載し、説明してきたが、本開示は例としてのみ為されているのであって、以下に続くクレームによってのみ限定される本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、本発明の実施の詳細にて多数の変更がなされ得ることが理解される。開示された実施形態の特徴は本発明の範囲及び精神の範囲内で様々な方法にて組み合わせ及び／又は再構成して本発明の範囲の中にあるさらなる実施形態を生じることができる。当業者は、単に日常の実験を用いて、本開示で具体的に記載された特定の実施形態との多数の同等物を認識するであろうし、又は解明することができるであろう。そのような同等物は以下のクレームの範囲内に包含されるように意図される。

Claims (15)

  1. 式（Ｉ−ａ）の化合物
    （Ｉ−ａ）
    （式中、
    Ｒ1は、−ＣＯ2Ｈ、又は−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ4）−アルキルであり；
    Ｒ2は、水素又は−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキルであり；
    Ｒ4は、−（ＣＨ2）−チアゾリルであり；
    Ｒ5は、−（Ｃ 1 -Ｃ6）−アルキル−Ｒ6、−（Ｃ 2 -Ｃ5）−アルケニル、−（Ｃ 2 -Ｃ5）−アルキニル、−（ＣＨ2）n−アリール、又は−（ＣＨ2）n−ヘテロアリールであり、前記アリール又はヘテロアリールは１以上のＲ7基によって置換され；
    Ｒ6は、−Ｎ（Ｒ10）Ｃ（Ｏ）Ｒ8、又は−Ｎ（Ｒ10）Ｓ（Ｏ）2Ｒ8、であり；
    Ｒ7は独立して、ハロゲン、−（Ｃ 1 -Ｃ3）−アルキル、アリール、メチレンジオキシフェニル、又は−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2であり、前記アリールは任意で、１以上のＲ9基によって置換され；
    Ｒ8は、−（Ｃ 1 -Ｃ6）−アルキル−Ｒ11又はアリールであり、前記アリールは任意で、１以上のＲ9基によって置換され；
    Ｒ9は独立して、水素、ハロゲン、−（Ｃ 1 -Ｃ4）−アルキル、−（Ｃ 1 -Ｃ4）−ハロアルキル、−（Ｃ2-Ｃ4）−アルキニル、ＣＮ、ＮＯ2、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は
    であり；
    Ｒ10は独立して、水素又は−（Ｃ 1 -Ｃ4）−アルキルであり；
    Ｒ11は水素又は
    であり；
    ｎは０〜４の整数であり、
    ｐは０〜３の整数である）。
  2. Ｒ1が、−ＣＯ2Ｈ、又は−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ4）−アルキルであり；
    Ｒ2が、水素又は−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキルであり；
    Ｒ4が、
    であり；
    Ｒ5が、−（Ｃ 1 -Ｃ4）−アルキル−Ｒ6、−（ＣＨ2）n−アリール、又は−（ＣＨ2）n−ヘテロアリールであり、前記アリール又はヘテロアリールは１以上のＲ7基によって置換され；
    Ｒ6が、−Ｎ（Ｒ10）Ｃ（Ｏ）Ｒ8、又は−Ｎ（Ｒ10）Ｓ（Ｏ）2Ｒ8、であり；
    Ｒ7が独立して、ハロゲン、−（Ｃ 1 -Ｃ3）−アルキル、アリール、メチレンジオキシフェニル、又は−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2であり、前記アリールは任意で、１以上のＲ9基によって置換され；
    Ｒ8が、−（Ｃ 1 -Ｃ6）−アルキル−Ｒ11又はアリールであり、前記アリールは任意で、１以上のＲ9基によって置換され；
    Ｒ9が独立して、水素、ハロゲン、−（Ｃ 1 -Ｃ2）−アルキル、−（Ｃ 1 -Ｃ2）−ハロアルキル、−（Ｃ2-Ｃ4）−アルキニル、ＣＮ、ＮＯ2、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は
    であり；
    Ｒ10が独立して、水素又は−（Ｃ 1 -Ｃ4）−アルキルであり；
    Ｒ11が水素又は
    であり；
    ｎが０〜２の整数であり、
    ｐが０〜１の整数である、請求項１に記載の化合物。
  3. Ｒ1が、−ＣＯ2Ｈ、又は−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ4）−アルキルであり；
    Ｒ2が、水素又は−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキルであり；
    Ｒ5が、−（ＣＨ2）n−アリール、又は−（ＣＨ2）n−ヘテロアリールであり、前記アリール又はヘテロアリールは１以上のＲ7基によって置換され；
    Ｒ7が独立して、ハロゲン、−（Ｃ 1 -Ｃ3）−アルキル、アリール、メチレンジオキシフェニル、又は−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2であり、前記アリールは任意で、１以上のＲ9基によって置換され；
    Ｒ9が独立して、水素、ハロゲン、−（Ｃ 1 -Ｃ2）−アルキル、−（Ｃ 1 -Ｃ2）−ハロアルキル、−（Ｃ2-Ｃ4）−アルキニル、ＣＮ、ＮＯ2、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は
    であり；
    Ｒ10が独立して、水素又は−（Ｃ 1 -Ｃ4）−アルキルであり；
    ｎが０〜２の整数であり、
    ｐが０〜１の整数である、請求項１又は２に記載の化合物。
  4. Ｒ1が、−ＣＯ2Ｈ、又は−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ2）−アルキルであり；
    Ｒ2が、水素又は−（Ｃ1−Ｃ2）−アルキルであり；
    Ｒ5が、−（ＣＨ2）n−フェニル、又は−（ＣＨ2）n−ヘテロアリールであり、前記フェニル又はヘテロアリールは１以上のＲ7基によって置換され；
    Ｒ7が独立して、ハロゲン、−（Ｃ 1 -Ｃ3）−アルキル、フェニル、メチレンジオキシフェニル、又は−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2であり、前記フェニルは任意で、１以上のＲ9基によって置換され；
    Ｒ9が独立して、水素、ハロゲン、−（Ｃ 1 -Ｃ2）−アルキル、−（Ｃ 1 -Ｃ2）−ハロアルキル、−（Ｃ2-Ｃ4）−アルキニル、ＣＮ、ＮＯ2、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は
    であり；
    Ｒ10が独立して、水素又は−（Ｃ 1 -Ｃ2）−アルキルであり；
    ｎが０〜２の整数であり、
    ｐが０〜１の整数である、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物。
  5. Ｒ1が、−ＣＯ2Ｈ、又は−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ2）−アルキルであり；
    Ｒ2が、水素又は−（Ｃ1−Ｃ2）−アルキルであり；
    Ｒ5が、チアゾリル、又は−（ＣＨ2）−トリアゾリルであり、前記チアゾリル又はトリアゾリルはＲ7基によって置換され；
    Ｒ7が、１以上のＲ9基によって任意で置換されるフェニルであり；
    Ｒ9が独立して、ハロゲン、−（Ｃ 1 -Ｃ2）−アルキル、−（Ｃ 1 -Ｃ2）−ハロアルキル、−（Ｃ2-Ｃ4）−アルキニル、ＣＮ、ＮＯ2、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は
    であり；
    Ｒ10が独立して、水素又は−（Ｃ 1 -Ｃ2）−アルキルであり；
    ｐが０〜１の整数である、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
  6. Ｒ1が、−ＣＯ2Ｈ、又は−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ2）−アルキルであり；
    Ｒ2が、水素又は−（Ｃ1−Ｃ2）−アルキルであり；
    Ｒ5が、チアゾリル、又は−（ＣＨ2）−トリアゾリルであり、前記チアゾリル又はトリアゾリルはＲ7基によって置換され；
    Ｒ7が、１以上のＲ9基によって任意で置換されるフェニルであり；
    Ｒ9が独立して、ハロゲン、−（Ｃ 1 -Ｃ2）−アルキル、−（Ｃ 1 -Ｃ2）−ハロアルキル、−（Ｃ2-Ｃ4）−アルキニル、ＣＮ、ＮＯ2、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ10）2、又は
    であり；
    Ｒ10が独立して、水素又はメチルであり；
    ｐが０〜１の整数である、請求項１〜５のいずれかに記載の化合物。
  7. Ｒ1が、−ＣＯ2Ｈ、又は−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ2）−アルキルであり；
    Ｒ2が、水素であり；
    Ｒ5が、
    であり；
    Ｒ7が、１以上のＲ9基によって任意で置換されるフェニルであり；
    Ｒ9が独立して、ハロゲン、−（Ｃ 1 -Ｃ2）−アルキル、−（Ｃ 1 -Ｃ2）−ハロアルキル、−（Ｃ2-Ｃ3）−アルキニル、ＮＯ2、−Ｓ（Ｏ）2ＮＨ2、又は
    であり；
    ｐが０〜１の整数である、請求項１〜６のいずれかに記載の化合物。
  8. （２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；
    （２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−エチニルフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；
    （２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（（１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；及び
    （２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（（１−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸、
    から選択される、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物。
  9. （２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（４−（４−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；
    （２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（（１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸；及び
    （２Ｓ，３Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−（（１−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルアミノ）−１−オキソ−３−（チアゾール−４−イル）プロパン−２−イルカルバモイル）オキシラン−２−カルボン酸、
    から選択される、請求項１〜８のいずれかに記載の化合物。
  10. 請求項１〜９のいずれかに記載の化合物を含む医薬組成物。
  11. 請求項１〜９のいずれかに記載の化合物を含む神経変性疾患を治療するための医薬組成物。
  12. 疾患がアルツハイマー病である請求項１１に記載の医薬組成物。
  13. 請求項１〜９のいずれかに記載の化合物を含む、記憶を改善するための医薬組成物。
  14. 神経変性疾患を有する対象に投与するための、請求項１３に記載の医薬組成物。
  15. 神経変性疾患がアルツハイマー病である、請求項１４に記載の医薬組成物。
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