JP6122776B2 - 腫瘍細胞由来微小胞 - Google Patents
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Description
本出願は、出願第12/673528号(2007年8月16日に出願された米国仮出願第60/935505号に対する優先権を主張する2008年8月8日に出願されたPCT出願番号PCT/CA2008/001441の国内段階)の一部継続出願である。これらの出願の内容全体は参照として本明細書に援用される。
〔技術分野〕
細胞培養および微小胞(MV)の単離
微小胞を枯渇されたウシ胎仔血清FBSを含有する培地中で、以前に記載されたように(Viloria−Petit et al Am.J.Pathology,1997,6:1523−1530;Yu et al.,2005,Blood,105:1734−1741)、U373(ヒト星状細胞腫)細胞、Tet−off調節されるEGFRvIIIまたは緑色蛍光タンパク質(pEGFPN1)カセットにC末端で融合したEGFRvIII(U373vIII−GFP))を発現する安定したバリアントU373vIIIおよびA431が維持される。HUVEC細胞はEGM−2(Cambrex Bioscience、Walkesville、MD、USA)中で維持される。以前に記載されたように(Yu & Rak,J.Thromb.Haemost,2004,2:2065−67;Al−Nedawi et al.,2005,Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.,25:1744−1749)、微小胞を馴化培地またはマウス血漿から採取する。簡潔には、培地に300gおよび12000gで2つの連続した遠心分離を行ない、細胞および残屑を除去する。微小胞を100000gで2時間の超遠心によってペレットにし、タンパク質含有量を定量し、EGFRまたはEGFRvIIIについて含有物を分析した。走査電子顕微鏡法(SEM)のために、細胞をカバースリップ上で増殖させ、2.5%グルタルアルデヒドで固定し、1%OsO4で染色し、金で覆い、JEOL 840A装置の使用して可視化する。インビボの分析のために、免疫不全(SCID)マウス(Charles River、カナダ)への1〜10×106のU373vIII細胞またはU373細胞の注入によって、腫瘍を生じさせる。いくつかの事例において示されるようにpan−ErbB阻害剤CI−1033により毎日マウスを処理する。血液を、癌を有するマウスまたは対照マウスから心臓穿刺によって採取し、ヘパリン処理注射器の中へ入れる。血小板不含有の血漿を使用して微小胞を調製する。
微小胞移行アッセイ
U373(アクセプター)細胞を24時間微小胞により処理し、単一細胞懸濁液をEGFRvIIIまたはGFPの発現についてフローサイトメトリーまたは蛍光顕微鏡によって分析する。シグナル伝達事象を検出するために、微小胞の添加前にU373を0.5%FBS(DMEM)中で飢餓状態にし、そのまま、または示された濃度のアネキシン−VもしくはCI−1033によりプレインキュベーションする。微小胞関連分子(EGFRvIII、TF)の発現、ならびに全体のおよび活性化されたMAPKおよびAktの発現に加えて、他の変化は、免疫ブロット(BclxL、p27/Kip1)、ELISA(VEGF、R&D Systems)またはプロモーター活性アッセイ(VEGF)によって、別記されるように(Lopez−Ocejo et al.2000,Oncogene,40:4611−4620)、アッセイされる。軟寒天コロニー形成アッセイのために、微小胞または対照培地により前処理した等しい数の細胞からの単一細胞懸濁液を0.3%アガロース中で調製する。培養を0.5%アガロースによりプレコートしたプレート中で樹立し、4を超える細胞を含有するコロニーをすべてカウントする。
多形膠芽腫に罹患した患者における循環EGFRvIIIの検出
癌を有するマウスの血漿について以前に記載されたものと類似の様式(Al−Nedawi et al.,2008,Nature Cell Biology,10:619−624)で、微小胞をヒト血漿から採取する。簡潔には、保管された血液サンプルに300gで5分間および次いで12000gで20分間の連続した2つの遠心分離を行って、細胞および残屑を除去する。最終的に、100000gで2時間の遠心分離後に微小胞を得て、大量のリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で2回洗浄する。タンパク質溶解物は、10mMTris(pH6.8)、5mM EDTA、50mM NaF、30mMピロリン酸ナトリウム、2%(重量/体積)SDS、1mMフッ化フェニルメチルスルホニル(PMSF)および1mM Na3VO4を含有する溶解緩衝液中で、氷上で10分間調製する。特別の指示の無い限り、溶解物をSDS−PAGEによって分離し、例えばマウスもしくはヒツジの抗ヒトEGFRポリクローナル抗体または適切なマウス単クローン抗体による免疫ブロットに行う。適切なHRPコンジュゲート二次抗体および化学発光プラスキット(ECLキット;Amersham Pharmacia、Buckinghamshire、英国)を使用して免疫検出を遂行し、その後ブロットをスキャンし、例えばStorm 860スキャナ(GE healthcare)を使用してタンパク質バンドを定量する。野生型EGFRおよびEGFRvIIIバンドの両方はこの様式で予想されるサイズで検出され、標準的なSDS−PAGE手順を使用して分離される。
MVにおける複数の癌に関する分子標的の検出
ヒト腫瘍細胞株によって培養培地の中へ放出された微小胞を単離し、ウエスタン分析を使用して微小胞の積載物における悪性腫瘍に関する複数のタンパク質(癌遺伝子、腫瘍抑制因子および細胞シグナル伝達のメディエーター等)を検出した。神経膠腫細胞株(U373、U373vIII、U87およびU87vIII)、肺癌細胞(A549)、乳癌細胞(MDA−MB−231)、前立腺癌細胞(PC−3)および結腸直腸癌細胞(DLD−1、HCT116およびCaCo2)を使用した。推定上の癌タンパク質K−ras、c−Met、β−カテニンおよびPDGFRならびに腫瘍抑制遺伝子産物PTEN、TP53およびE−カドヘリンを、微小胞において試験した。結果は図10A中に示され、(+)は着実な反応性を示し、(+/−)は弱い反応性を示し、(−)検出可能な反応性がないことを示す。ウエスタンブロット分析の例は図10B中に示される。
MVに関連する癌に関するタンパク質の持続的機能的状態(リン酸化/活性化)の実証
42のRTKについてのプローブを含有するリン酸化タンパク質の抗体アレイ(R&D Systems)を使用して、複数のタイプのヒト腫瘍細胞株によって培養培地の中へ放出された微小胞における複数のリン酸化RTKをインビトロで検出した(図11)。図11Aは、リン酸化RTKの抗体アレイを使用して、相対的リン酸化が単一のサンプルにおいて同時に検出できるRTKの例をリストする。アレイは119のスポットを有し、42の異なるリン酸化されたRTKを検出できる。図11Bは、示された細胞株からのMVにおいて検出された主要なリン酸化RTKを示す。アッセイのアウトプットの例は図11C中に与えられる。この結果は多数のMV関連リン酸化タンパク質を検出できることも示す。主要なMV関連リン酸化タンパク質は、例えば、EGFR、FGFR3、EphB2、ROR1、EphA2およびEphA4を含む。
ヒト腫瘍異種移植を有するマウスにおける循環MVのリンタンパク質プロファイルの決定
次いで、ヒト腫瘍異種移植を保持するマウスの血液中の循環MVのヒトリンタンパク質プロファイルをインビボで解析した(表4;図12)。示されたヒト癌細胞株の異種移植を、細胞の皮下接種によってSCIDマウスにおいて行った。腫瘍を形成させた。腫瘍が直径17mmのエンドポイントに到達した時にマウスを屠殺し、腫瘍を有するマウス4〜5匹をプールした血漿からMVを単離した。タンパク質溶解物を生成し、R&D Systemsからの抗ヒトRTKリンタンパク質抗体アレイをプロービングするために使用した。
MV関連RTKのリン酸化状態が標的化療法に応答性であるという実証
バイオマーカーとしてMVを使用して癌遺伝子指向性治療剤への応答をインビボでモニタリングきるかどうかを決定するために、EGFR駆動性の皮下腫瘍を有するマウスをEGFR阻害因子CI−1033により処理した(図13)。20mg/kgのCI−1033の腹腔内投与による7日間の処理後に、マウスの腫瘍サイズを測定し(図13A)、抗リン酸化EGFR抗体を使用するウエスタンブロット分析を使用して、マウスの循環MVにおけるEGFRのリン酸化状態を決定した(図13B、A431の皮下腫瘍を有するマウスからのMVを上部に示し、U373vIII腫瘍を有するマウスからのMVを下部に示す)。A431腫瘍およびU373vIII腫瘍の両方はCI−1033の毎日の用量への曝露に対して応答性であった。さらに、ウエスタン分析によって見られるように、EGFR駆動性の皮下腫瘍を有しEGFR阻害因子CI−1033により処理されたマウスの血液中の循環MVにおけるリン酸化ヒトEGFRの存在は減少した。野生型EGFR(A431細胞)に比較して、変異受容体EGFRvIII(U373vIII)の事例におけるEGFR阻害の程度はより低く、これは差異的な抗腫瘍効果に反映されている。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔1〕被験体における発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質の存在を検出する方法であって、
被験体からサンプルを採取する工程と;
サンプルから微小胞を単離する工程と;
微小胞における発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質の存在を検出する工程
とを含む方法。
〔2〕被験体における癌の予後を診断または決定する方法であって、
前記〔1〕の方法に従って微小胞における発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質の存在を検出する工程を含み、
サンプル中の発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質の存在が被験体が癌を有し得ることを示す方法。
〔3〕被験体における癌の進行または抗癌治療の治療有効性をモニターする方法であって、
a)癌を有する被験体から第1のサンプルを第1のタイムポイントで採取する工程と、第1のサンプルから微小胞を単離する工程と、第1のサンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質を測定する工程と;
b)癌を有する被験体から第2のサンプルを第2のタイムポイントで採取する工程であって、第2のタイムポイントが第1のタイムポイント後に起こる工程と、第2のサンプルから微小胞を単離する工程と、第2のサンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質を測定する工程
とを含み;
被験体が抗癌治療を受ける前に第1のタイムポイントが起こり、被験体が抗癌治療を受けた後に第2のタイムポイントが起こる場合、第1のサンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質もしくは腫瘍に関するタンパク質の量に比較して、第2のサンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質もしくは腫瘍に関するタンパク質の量における変化が癌の進行を示すか、または第1のサンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質もしくは腫瘍に関するタンパク質の量に比較して、第2のサンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質もしくは腫瘍に関するタンパク質の量の減少または無変化が抗癌治療の治療有効性を示し;
該サンプルが、血液、リンパ液、尿、脳脊髄液、腹水、唾液、洗浄物、精液、腺分泌物、滲出液、嚢胞の内容物および糞便からなる群から選択される体液である方法。
〔4〕前記発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が、EGFRvIII、EGFR、HER−2、HER−3、HER−4、MET、cKit、PDGFR、Wnt、β−カテニン、K−ras、H−ras、N−ras、Raf、N−myc、c−myc、IGFR、PI3K、Akt、BRCA1、BRCA2、PTEN、FGFR3、EphB2、ROR1、EphA2、EphA4、ならびにVEGFR−2、VEGFR−1、Tie−2、TEM−1およびCD276からなる群から選択された癌関連細胞の受容体、ならびに表1〜4中でリストされたタンパク質からなる群から選択される、前記〔1〕〜〔3〕のいずれか一項に記載の方法
〔5〕前記発癌タンパク質のリン酸化状態を測定する工程をさらに含む、前記〔1〕に記載の方法。
〔6〕前記第1のサンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質の量に比較して、前記第2のサンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質の量の増加が、癌の進行または継続的増殖を示し;
前記第1のサンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質もしくは腫瘍に関するタンパク質の量または微小胞の組成物に比較して、前記第2のサンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質もしくは腫瘍に関するタンパク質の量の減少または第2のサンプルから得られた微小胞の組成物における変化が、癌の退縮を示し;
前記第1のサンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質の量に比較して、前記第2のサンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質の量の無変化が、癌が進行していないことを示す、
前記〔3〕に記載の方法。
〔7〕少なくとも2つの前記発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が微小胞中で検出される、前記〔1〕に記載の方法。
〔8〕前記微小胞が、超遠心、免疫沈殿、親和性精製または精密濾過によって単離される、前記〔1〕に記載の方法。
〔9〕前記微小胞における発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質の存在が、免疫ブロット、免疫沈殿、ELISA、RIA、フローサイトメトリー、電子顕微鏡または質量分析によって検出または測定される、前記〔1〕に記載の方法。
〔10〕前記微小胞における発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が、アネキシンVでコートしたウェルを用いるELISAによって検出または測定される、前記〔1〕に記載の方法。
〔11〕前記抗癌治療が、外科手術、放射線医学、化学療法、標的化癌治療またはその組み合わせである、前記〔3〕に記載の方法。
〔12〕前記癌が、乳癌、神経膠腫、脳腫瘍、肺癌、膵臓癌、皮膚癌、前立腺癌および結腸直腸癌からなる群から選択される、前記〔2〕、〔3〕または〔11〕のいずれか一項に記載の方法。
〔13〕被験体からサンプル中の癌を検出するためのキットであって、
発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質に対する少なくとも1つの抗体、および該少なくとも1つの抗体を使用してサンプル中の微小胞における発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質を検出するための説明書
を含むキット。
〔14〕前記癌が、乳癌、神経膠腫、脳腫瘍、肺癌、膵臓癌、皮膚癌、前立腺癌および結腸直腸癌からなる群から選択される、前記〔13〕に記載のキット。
〔15〕前記発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が、EGFRvIII、EGFR、HER−2、HER−3、HER−4、MET、cKit、PDGFR、Wnt、β−カテニン、K−ras、H−ras、N−ras、Raf、N−myc、c−myc、IGFR、PI3K、Akt、BRCA1、BRCA2、PTEN、FGFR3、EphB2、ROR1、EphA2、EphA4、ならびにVEGFR−2、VEGFR−1、Tie−2、TEM−1およびCD276からなる群から選択される癌関連細胞の受容体からなる群から選択される、前記〔13〕に記載のキット。
〔16〕前記サンプルが、血液、リンパ液、尿、脳脊髄液、腹水、唾液、洗浄物、精液、腺分泌物、滲出液および糞便からなる群から選択される体液である、前記〔13〕のキット。
〔17〕リン酸化部位特異的抗体をさらに含む前記〔13〕に記載のキット。
〔18〕1つより多い発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が前記微小胞において検出され、該微小胞において検出された該発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質の組み合わせが癌型の診断に役立つ、前記〔2〕に記載の方法。
〔19〕前記発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質のリン酸化状態が決定される、前記〔18〕に記載の方法。
〔20〕被験体において癌の進行または抗癌治療の治療有効性をモニタリングする方法であって、
a)癌を有する被験体から第1の血液サンプルを第1のタイムポイントで採取する工程と、微小胞を第1の血液サンプルから単離する工程と、第1の血液サンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質のリン酸化状態を測定する工程と;
b)癌を有する被験体から第2の血液サンプルを第2のタイムポイントで採取する工程であって、第2のタイムポイントが第1のタイムポイント後に起こる工程と、微小胞を第2の血液サンプルから単離する工程と、第2の血液サンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質のリン酸化状態を測定する工程
とを含み;
被験体が抗癌治療を受ける前に第1のタイムポイントが起こり、被験体が抗癌治療を受けた後に第2のタイムポイントが起こる場合、第1の血液サンプルから得られた微小胞に比較して、第2の血液サンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質もしくは腫瘍に関するタンパク質のリン酸化状態における変化、またはリン酸化もしくは非リン酸化の発癌タンパク質もしくは腫瘍に関するタンパク質の量における変化が、癌の進行もしくは退縮を示すかまたは抗癌治療の治療有効性もしくは非有効性を示し、;
MVにおいて検出されるリン酸化状態またはリン酸化されたタンパク質の量によって決定されるように、癌の退縮または抗癌治療の治療有効性が発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質の非活性形態の増加によって示され、癌の進行または抗癌治療の非有効性が発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質の活性化形態の増加によって示される方法。
〔21〕前記発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が受容体チロシンキナーゼである、前記〔20〕に記載の方法。
〔22〕腫瘍における発癌受容体チロシンキナーゼの活性化をモニタリングする方法であって、
腫瘍を有する被験体から血液サンプルを採取する工程と、血液サンプルから微小胞を単離する工程と、微小胞における発癌受容体チロシンキナーゼのリン酸化状態を測定する工程とを含み、
発癌受容体チロシンキナーゼのリン酸化状態が受容体チロシンキナーゼの活性化または非活性化を示す方法。
〔23〕発癌タンパク質、腫瘍に関するタンパク質および/またはMV関連タンパク質を含む、単離された微小胞。
〔24〕被験体における腫瘍において発現される発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質を決定する方法であって、
被験体から体液のサンプルを採取する工程と;サンプルから微小胞を単離する工程と;微小胞において存在する発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質を決定する工程とを含み、
微小胞において存在する発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が腫瘍において発現されることを示す方法。
〔25〕被験体における癌を検出する方法であって、
被験体から体液のサンプルを採取する工程と;サンプルから微小胞を単離する工程と;微小胞をアッセイして微小胞における発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質の存在を決定する工程とを含み、
微小胞における発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質の存在が被験体が癌を有することを示す方法。
〔26〕前記発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が、前記被験体から得られた生検標本において検出されない、前記〔25〕に記載の方法。
〔27〕前記体液が血液である、前記〔24〕〜〔26〕のいずれか一項に記載の方法。
Claims (16)
- 被験体における癌の進行または抗癌治療の治療有効性をモニターする方法であって、
a)癌を有する被験体から第1のサンプルを第1のタイムポイントで採取する工程と、第1のサンプルから微小胞を単離する工程と、第1のサンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質のリン酸化部位の状態を検出する工程と;
b)該癌を有する被験体から第2のサンプルを第2のタイムポイントで採取する工程であって、第2のタイムポイントが第1のタイムポイント後に起こる工程と、第2のサンプルから微小胞を単離する工程と、第2のサンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質のリン酸化部位の状態を検出する工程
とを含み;
該被験体が抗癌治療を受ける前に第1のタイムポイントが起こり、該被験体が抗癌治療を受けた後に第2のタイムポイントが起こる場合、
第1のサンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質もしくは腫瘍に関するタンパク質のリン酸化部位におけるリン酸化の存在又は非存在に比較して、第2のサンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質もしくは腫瘍に関するタンパク質のリン酸化部位におけるリン酸化の存在又は不存在が癌の進行または抗癌治療の非有効性を示し;
該サンプルが、血液であり、
該癌が、EGFRvIII駆動性膠芽腫であり、
該発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が、BAD、BLNK (lin)、BRCA1、カベオリン 2、CHK2、CREB1、CDK1/2、DTK、EGFR、eIF4E、EphA1、EphA6、EphA7、EphB1、EphB2、EphB4、ERK1、FAK、FGFR1、FGFR2a、FGFR3、FGFR4、GSK3a、HER-2/ErbB2、HER-3/ErbB3、HER-4/ErbB4、ヒストン H1、ヒストン H2A.X、HSP27、インテグリン a4、インスリンR/IR/INSR、IGF1R、IRS1、JUN、KIT、LCK、MARCK、MEK1/MAP2K1、MER、MET/c-MET、MKK1、MLK3、MSPR、mTOR/FRAP、NFκB p65、p27 KIP1、p38a MAPK、p53、PDGFRa、PDGFRb、PKBa/AKT1、PKCa、PKCd、PKCg、PLCg2、プロゲステロン受容体、PTEN、RAC1、RAF1、Rb、RET/c-RET、ROR1、ROR2、RSK 1/3、SHC1、SMC1、SOX9、SRC、STAT1、TAU、TIE1、TIE2、TRKA、TRKB、TRKC、VEGFR1、VEGFR3、VEGFR2/KDR及びZAP70/SYKからなる群より選ばれる
方法。 - 前記第1のサンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質のリン酸化形態の量に比較して、前記第2のサンプルから得られた微小胞における発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質のリン酸化形態の量の増加が、癌の進行または継続的増殖を示す、
請求項1に記載の方法。 - 前記抗癌治療が、外科手術、放射線医学、化学療法、標的化癌治療またはその組み合わせである、請求項1に記載の方法。
- 前記発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が、BAD、BRCA1、カベオリン 2、CHK2、CREB1、CDK1/2、DTK、EGFR、eIF4E、EphA1、EphB2、ERK1、FAK、FGFR1、FGFR3、GSK3a、HER-2/ErbB2、HER-4/ErbB4、ヒストン H1、ヒストン H2A.X、HSP27、インテグリン a4、インスリンR/IR/INSR、IGF1R、IRS1、JUN、KIT、LCK、MARCK、MEK1/MAP2K1、MER、MET/c-MET、MLK3、MSPR、mTOR/FRAP、NFκB p65、p27 KIP1、p38a MAPK、p53、PDGFRa、PDGFRb、PKBa/Akt1、PKCa、PKCd、PKCg、PLCg2、プロゲステロン受容体、PTEN、RAC1、RAF1、Rb、RET/c-RET、ROR1、ROR2、RSK 1/3、SHC1、SMC1、SOX9、SRC、STAT1、TAU、TIE1、TIE2、TRKA、VEGFR3及びVEGFR2/KDRからなる群より選ばれる、請求項1に記載の方法。
- 前記発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が、BAD、BLNK (lin)、CHK2 EGFR、ERK1、FAK、HER-2/ErbB2、IRS1、JUN、MARCK、MEK1/MAP2K1、MKK1、PKCd、PKCg、RET/c-RET、TAU、VEGFR2及びZAP70/SYKからなる群より選ばれる、請求項1に記載の方法。
- 前記発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が、BAD、CHK2、EGFR、ERK1、FAK、HER-2/ErbB2、IRS1、JUN、MARCK、MEK1/MAP2K1、PKCd、RET/c-RET及びTAUからなる群より選ばれる、請求項1、4及び5のいずれか1項に記載の方法。
- 前記発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が、BAD、BRCA1、カベオリン 2、CHK2、CREB1、CDK1/2、EGFR、eIF4E、ERK1、FAK、GSK3a、HER-2/ErbB2、ヒストン H1、ヒストン H2A.X、HSP27、IGF1R、インスリンR/IR/INSR、インテグリン a4、IRS1、JUN、KIT、LCK、MEK1/MAP2K1、MET/c-MET、MLK3、mTOR/FRAP、NFκB p65、p27 KIP1、p38a MAPK、p53、PDGFRa、PDGFRb、PKBa/AKT1、PKCa、PKCd、PKCg、PLCg2、プロゲステロン受容体、PTEN、RAC1、RAF1、Rb、RET/c-RET、RSK 1/3、SHC1、SMC1、SOX9、SRC、STAT1及びVEGFR2/KDRからなる群より選ばれる、請求項1及び4のいずれか1項に記載の方法。
- 前記発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が、DTK、EGFR、EphA1、EphA6、EphA7、EphB1、EphB2、EphB4、FGFR1、FGFR2a、FGFR3、FGFR4、HER-2/ErbB2、HER-3/ErbB3、HER-4/ErbB4、IGF1R、インスリンR/IR/INSR、MER、MSPR、RET/c-RET、ROR1、ROR2、TIE1、TIE2、TRKA、TRKB、TRKC、VEGFR1及びVEGFR3からなる群より選ばれる、請求項1に記載の方法。
- 前記発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が、EGFR、EphB2及びROR1からなる群より選ばれる、請求項1、4及び8のいずれか1項に記載の方法。
- 前記発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が、EGFR、EphB2、FGFR3及びROR1からなる群より選ばれる、請求項1、4及び8のいずれか1項に記載の方法。
- 前記発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が、EGFR、EphA1、FGFR1、IGF1R、インスリンR/IR/INSR、MER、MSPR、RET/c-RET、ROR2、TIE1、TIE2及びVEGFR3からなる群より選ばれる、請求項1、4及び8のいずれか1項に記載の方法。
- 前記発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が、DTK、EGFR、FGFR1、HER-2/ErbB2、HER-4/ErbB4、MER、MSPR、ROR2、TIE1、TIE2、TRKA及びVEGFR1からなる群より選ばれる、請求項1、4及び8のいずれか1項に記載の方法。
- 前記発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が、SRC、p38a MAPK、PKCa、PKCd、PKCg及びFAKからなる群より選ばれる、請求項1に記載の方法。
- 前記発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質が、CREB1、NFκB p65及びSOX9からなる群より選ばれる、請求項1に記載の方法。
- 前記発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質がmTOR/FRAPである、請求項1に記載の方法。
- 前記発癌タンパク質または腫瘍に関するタンパク質がヒストン H1である、請求項1に記載の方法。
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