JP6112514B2 - 多能性(pluripotency)を有する幹細胞の培養方法 - Google Patents
多能性(pluripotency)を有する幹細胞の培養方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6112514B2 JP6112514B2 JP2014554553A JP2014554553A JP6112514B2 JP 6112514 B2 JP6112514 B2 JP 6112514B2 JP 2014554553 A JP2014554553 A JP 2014554553A JP 2014554553 A JP2014554553 A JP 2014554553A JP 6112514 B2 JP6112514 B2 JP 6112514B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- cell
- undifferentiated
- culture
- substance capable
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0696—Artificially induced pluripotent stem cells, e.g. iPS
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
- C12N2501/58—Adhesion molecules, e.g. ICAM, VCAM, CD18 (ligand), CD11 (ligand), CD49 (ligand)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/70—Enzymes
- C12N2501/73—Hydrolases (EC 3.)
- C12N2501/734—Proteases (EC 3.4.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/998—Proteins not provided for elsewhere
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Biophysics (AREA)
Description
本開示において、多能性を有する幹細胞は、限定されない一又は複数の実施形態において、ヒト多能性(pluripotent)幹細胞である。本開示において、ヒト多能性幹細胞は、限定されない一又は複数の実施形態において、ヒトiPS細胞又はヒトES細胞である。
本開示において、未分化状態を脱した細胞とは、限定されない一又は複数の実施形態において、細胞の形態が未分化状態の細胞のそれとは異なり、判別可能である。本開示において「未分化状態を脱した細胞」は、「脱未分化細胞」又は「未分化逸脱細胞」とも言う場合がある。脱未分化細胞となったことは、限定されない一又は複数の実施形態において、未分化マーカーの消失で確認できる。前記未分化マーカーは、限定されない一又は複数の実施形態において、Oct3/4、Nanog、SSEA−4、TRA−1−60である。
本開示において、細胞間接着を阻害可能な物質は、限定されない一又は複数の実施形態において、E−カドヘリンの機能阻害活性を有する物質である。本開示において、細胞間接着を阻害可能な物質は、限定されない一又は複数の実施形態において、効率的に脱未分化細胞を除去する観点から、E−カドヘリンの機能阻害活性に加え、細胞表面への結合能を有することが好ましい。前記細胞表面への結合能は、限定されない一又は複数の実施形態において、多能性を有する幹細胞の細胞表面への結合能である。
本開示において、細胞間接着を阻害可能な物質は、限定されない一又は複数の実施形態において、ボツリヌス菌(Clostridium botulinum)の神経毒素複合体におけるヘマグルチニン(HA)である。本開示において、細胞間接着を阻害可能な物質は、限定されない一又は複数の実施形態において、効率的に脱未分化細胞を除去する観点から、ボツリヌス菌(Clostridium botulinum)の神経毒素複合体における3つのヘマグルチニンサブコンポーネントHA1(HA33)、HA2(HA17)、及び、HA3(HA70)からなる群から選択される2又は3成分で構成される複合体又はその複合体を含むものである。また、細胞間接着を阻害可能な物質は、限定されない一又は複数の実施形態において、効率的に脱未分化細胞を除去する観点から、HA2(HA17)及びHA3(HA70)で構成される複合体若しくは3成分で構成される複合体又はその複合体を含むものである。前記サブコンポーネントHA3(HA70)は、一又は複数の実施形態において、E−カドヘリンの機能阻害活性を発現する観点、及び、効率的に脱未分化細胞を除去する観点から、A型又はB型のボツリヌス菌のものであることが好ましい。また、サブコンポーネントHA1(HA33)及びHA2(HA17)は、限定されない一又は複数の実施形態において、A型、B型、及びC型のいずれのボツリヌス菌のものであってもよい。HAは、限定されない一又は複数の実施形態において、各サブコンポーネントは、それぞれ、リコンビナントであってもよく、天然型であってもよい。
本開示において、「細胞間接着を阻害可能な物質の存在下での細胞培養」は、従来用いられる及び/又は今後開発される、多能性を有する幹細胞の培養条件及び培養培地等を採用でき、該培養条件の培地に細胞間接着を阻害可能な物質を存在させることで行える。限定されない一又は複数の実施形態において、細胞間接着を阻害可能な物質を培養中の培養培地に添加してもよく、或いは、細胞間接着を阻害可能な物質を予め添加した培地を使用して培養してもよい。培養培地、培養プレート等は市販のものを使用してもよい。
〔2〕 多能性を有する幹細胞の培養中に発生した又は発生しうる未分化状態を脱した細胞を除去する方法であって、細胞間接着を阻害可能な物質の存在下で細胞培養することを含む、方法。
〔3〕 多能性を有する幹細胞の未分化状態を維持する方法であって、細胞間接着を阻害可能な物質の存在下で細胞培養することを含む、方法。
〔4〕 多能性を有する幹細胞が、ヒト多能性幹細胞である、〔1〕から〔3〕のいずれかに記載の方法。
〔5〕 ヒト多能性幹細胞が、ヒトiPS細胞又はヒトES細胞である、〔4〕記載の方法。
〔6〕 細胞間接着を阻害可能な物質が、E−カドヘリンの機能阻害活性を有する物質である、〔1〕から〔5〕のいずれかに記載の方法。
〔7〕 細胞間接着を阻害可能な物質が、さらに、細胞表面への結合能を有する物質である、〔6〕記載の方法。
〔8〕 細胞間接着を阻害可能な物質が、ボツリヌス菌(Clostridium botulinum)の神経毒素複合体におけるヘマグルチニン(HA)である、〔1〕から〔7〕のいずれかに記載の方法。
〔9〕 細胞間接着を阻害可能な物質が、ボツリヌス菌(Clostridium botulinum)の神経毒素複合体における3つのヘマグルチニンサブコンポーネントHA1、HA2、及び、HA3からなる群から選択される2又は3成分で構成される複合体である、〔1〕から〔8〕のいずれかに記載の方法。
〔10〕 前記複合体のHA3サブコンポーネントは、A型又はB型のボツリヌス菌のものである、〔9〕記載の方法。
〔11〕 培養が、継代培養である、〔1〕から〔10〕のいずれかに記載の方法。
〔12〕 細胞間接着を阻害可能な物質を含む、多能性を有する幹細胞の培養のための、組成物。
〔13〕 細胞間接着を阻害可能な物質を含む、多能性を有する幹細胞の培養中に発生した又は発生しうる未分化状態を脱した細胞を除去するための、組成物。
〔14〕 細胞間接着を阻害可能な物質を含む、多能性を有する幹細胞の未分化状態を維持するための、組成物。
〔15〕 多能性を有する幹細胞が、ヒト多能性幹細胞である、〔12〕から〔14〕のいずれかに記載の組成物。
〔16〕 ヒト多能性幹細胞が、ヒトiPS細胞又はヒトES細胞である、〔15〕記載の組成物。
〔17〕 細胞間接着を阻害可能な物質が、E−カドヘリンの機能阻害活性を有する物質である、〔12〕から〔16〕のいずれかに記載の組成物。
〔18〕 細胞間接着を阻害可能な物質が、さらに、細胞表面への結合能を有する物質である、〔17〕記載の組成物。
〔19〕 細胞間接着を阻害可能な物質が、ボツリヌス菌(Clostridium botulinum)の神経毒素複合体におけるヘマグルチニンである、〔12〕から〔18〕のいずれかに記載の組成物。
〔20〕 細胞間接着を阻害可能な物質が、ボツリヌス菌(Clostridium botulinum)の神経毒素複合体における3つのヘマグルチニンサブコンポーネントHA1、HA2、及び、HA3からなる群から選択される2又は3成分で構成される複合体である、〔12〕から〔19〕のいずれかに記載の組成物。
〔21〕 前記複合体のHA3サブコンポーネントは、A型又はB型のボツリヌス菌のものである、〔20〕記載の組成物。
〔22〕 培養が、継代培養である、〔12〕から〔21〕のいずれかに記載の組成物。
〔23〕 〔1〕から〔11〕のいずれかに記載の方法のための、〔12〕から〔22〕のいずれかに記載の組成物。
〔24〕 多能性を有する幹細胞用の培地成分と、細胞間接着を阻害可能な物質とを含む、キット。
〔25〕 多能性を有する幹細胞の培養中に発生する又は発生しうる未分化状態を脱した細胞を除去するための、〔24〕記載のキット。
〔26〕 多能性を有する幹細胞の培養のための、〔24〕記載のキット。
〔27〕 細胞間接着を阻害可能な物質を含む、多能性を有する幹細胞の培養中に発生した又は発生しうる未分化状態を脱した細胞を除去するための、〔24〕記載のキット。
〔28〕 多能性を有する幹細胞が、ヒト多能性幹細胞である、〔24〕から〔27〕のいずれかに記載のキット。
〔29〕 ヒト多能性幹細胞が、ヒトiPS細胞又はヒトES細胞である、〔28〕記載のキット。
〔30〕 細胞間接着を阻害可能な物質が、E−カドヘリンの機能阻害活性を有する物質である、〔24〕から〔29〕のいずれかに記載のキット。
〔31〕 細胞間接着を阻害可能な物質が、さらに、細胞表面への結合能を有する物質である、〔30〕記載のキット。
〔32〕 細胞間接着を阻害可能な物質が、ボツリヌス菌(Clostridium botulinum)の神経毒素複合体におけるヘマグルチニンである、〔24〕から〔31〕のいずれかに記載のキット。
〔33〕 細胞間接着を阻害可能な物質が、ボツリヌス菌(Clostridium botulinum)の神経毒素複合体における3つのヘマグルチニンサブコンポーネントHA1、HA2、及び、HA3からなる群から選択される2又は3成分で構成される複合体である、〔24〕から〔32〕のいずれかに記載のキット。
〔34〕 前記複合体のHA3サブコンポーネントは、A型又はB型のボツリヌス菌のものである、〔33〕記載のキット。
〔35〕 培養が、継代培養である、〔24〕から〔34〕のいずれかに記載のキット。
〔36〕 〔1〕から〔11〕のいずれかに記載の方法のための、〔24〕から〔35〕のいずれかに記載のキット。
〔37〕 〔1〕から〔11〕のいずれかに記載の方法における細胞間接着を阻害可能な物質の使用。
図5に示す実験スケジュールに従ってiPS細胞を培養した。まず、フィーダ細胞上にiPS細胞を播種し(day 0)、24時間ごとに維持培地で培地交換した。3日後(day 3)においてHAを添加し24時間インキュベートし、PBSで2度洗浄して維持培地で培地交換した(day 4)。その後、9日後(day 9)まで24時間ごとに維持培地で培地交換した。培養後、培養された細胞のOct3/4の発現を免疫細胞染色法で確認し、また、DAPI染色を行った。使用した細胞、培地、HA、及び培養条件は以下のとおりである。
iPS細胞:Tic(Np 39)
フィーダ細胞:SNL 76/7(Np 5)マイトマイシン−c処理済み
〔培地〕
iPS細胞:Repro Stem(商品名、ReproCELL社製)、5ng/mL FGF−2
フィーダ細胞:DMEM(7%FBS,1%Penicillin−streptomycin solution)
〔容器〕
24ウェルプレート(底面積:1.9cm2/ウェル、培地量:0.4mL/ウェル)
〔HA〕
HA複合体試料として、下記表1に記載のボツリヌス菌の神経毒素複合体試料であるヘマグルチニンHA−1〜HA−4を使用した。なお、HA−1及びHA−2は、ともに、HA1〜3のサブコンポーネントが全てB型の複合体であり、別個に調製されたHA複合体試料である。HA−3は、HA1がC型でHA2及び3がB型のHA複合体試料である。HA−4は、HA1及び2がB型でHA3がC型のHA複合体試料である。
HAの希釈:同じ希釈系列に含まれるPBS濃度を同じにするため、2段階希釈を行った。まず、PBSでHAを段階希釈し、さらに、培地(Repro Stem)を用いて希釈した。(終濃度:100,50,10,1nM)
さらにbFGF(終濃度5ng/ml)を加え、iPS細胞に添加した。
〔培養条件〕
37℃、5%CO2雰囲気下
iPS細胞の継代後、t=72h(day 3)の培地交換において、HA−1〜4を各濃度で添加し、24時間培養した。その後、t=96h(day 4)の培地交換において、HA無添加の培地に切り替え、培養を継続した。
〔観察〕
day3、day4、day5、及びday9において、IN Cell Analyzer 2000(商品名、GEヘルスケアバイオサイエンス社製)で培養細胞を観察し画像を取得した。HA−1を100nM、50nM、10nM、及び、1nMで添加した場合の顕微鏡観察写真をそれぞれ図6、7、8、及び9に示す。
フィーダ細胞上にiPS細胞を播種し、7日後まで24時間ごとに維持培地で培地交換した。培養後、培養された細胞のOct3/4の発現を免疫細胞染色法で確認し、また、DAPI染色を行った。使用した細胞、培地、及び培養条件は以下のとおりである。
iPS細胞:Tic(Np 39)
フィーダ細胞:MEF
〔培地〕
iPS細胞:Repro Stem(商品名、ReproCELL社製)、5ng/mL FGF−2
フィーダ細胞:DMEM(7%FBS,1%Penicillin−streptomycin solution)
〔容器〕
24ウェルプレート(底面積:1.9cm2/ウェル、培地量:0.4mL/ウェル)
〔培養条件〕
37℃、5%CO2雰囲気下
〔観察〕
day3、及びday7において、IN Cell Analyzer 2000(商品名、GEヘルスケアバイオサイエンス社製)で培養細胞を観察し画像を取得した。得られた顕微鏡観察写真を図17に示す。
〔Rac−1 inhibitor調製・添加方法〕
Rac−1 inhibitor希釈:培地(Repro Stem)を用いて希釈した(終濃度:50又は100μM)。
さらにbFGF(商品名、ReproCELL社製、終濃度5ng/ml)を加え、iPS細胞に添加した。
Rac−1 inhibitorによって誘導された未分化逸脱細胞に及ぼすHAの影響を確認した。まず、フィーダ細胞上にiPS細胞を播種し(day 0)、24時間ごとに維持培地で培地交換した。3日後(day 3)において100μM Rac−1 inhibitorを添加し24時間インキュベートし、PBSで2度洗浄して維持培地で培地交換した(day 4)。5日後(day 5)においてHA−1を添加し24時間インキュベートし、PBSで2度洗浄して維持培地で培地交換した(day 6)。その後、8日後(day 8)まで24時間ごとに維持培地で培地交換した。培養後、培養された細胞のOct3/4の発現を免疫細胞染色法で確認し、また、DAPI染色を行った。使用した細胞、培地、及び培養条件は以下のとおりである。Rac−1 inhibitor及びHAの調製及び添加方法は上述の通りとした。
iPS細胞:Tic(Np 39)
フィーダ細胞:MEF
〔培地〕
iPS細胞:Repro Stem(商品名、ReproCELL社製)、5ng/mL bFGF(商品名、ReproCELL社製)
フィーダ細胞:DMEM(10%FBS(GIBCO社製),1%HEPES(sigma社製)、1%Penicillin−streptomycin(NACALAI TESQUE社製))
〔容器〕
24ウェルプレート(底面積:1.9cm2/ウェル、培地量:0.4mL/ウェル)
〔観察〕
day3、day4、day5、day6、及びday8において、IN Cell Analyzer 2000(商品名、GEヘルスケアバイオサイエンス社製)で培養細胞を観察し画像を取得した。得られた顕微鏡観察写真を図18に示す。
培養面としてSynthemax Surface(商品名、Corning社製)を使用し、その上にiPS細胞を播種し、7日後まで24時間ごとに維持培地で培地交換した。培養後、培養された細胞のOct3/4の発現を免疫細胞染色法で確認し、また、DAPI染色を行った。使用した細胞、培地、及び培養条件は以下のとおりである。
iPS細胞:Tic(Np 39)
〔培地〕
mTeSR(R)1medium(商品名、STEMCELL Technologies社製)
〔容器〕
24ウェルプレート(底面積:1.9cm2/ウェル、培地量:0.4mL/ウェル)
〔培養条件〕
37℃、5%CO2雰囲気下
〔観察〕
day6において、IN Cell Analyzer 2000(商品名、GEヘルスケアバイオサイエンス社製)で培養細胞を観察し画像を取得した。
細胞として以下の細胞1又は2を使用し、HAとしてHA−1を使用し、HAの添加濃度を50nMとした以外は、ヘマグルチニン(HA)がiPS細胞に及ぼす影響(その1)と同じ条件で、培養及び観察を行った。得られた顕微鏡観察写真をそれぞれ図20に示す。
〔細胞〕
iPS細胞:201B7株
フィーダ細胞:SNL76/7細胞
〔培地〕
iPS細胞:Repro Stem(商品名、ReproCELL社製)
フィーダ細胞:DMEM(7%FBS,1%Penicillin−streptomycin solution)
〔細胞2〕
〔細胞〕
iPS細胞:454E−2株
フィーダ細胞:SNL76/7細胞
〔培地〕
iPS細胞:Repro Stem(商品名、ReproCELL社製)
フィーダ細胞:DMEM(7%FBS,1%Penicillin−streptomycin solution)
図21に示す実験スケジュールに従ってiPS細胞を継代培養した。まず、フィーダ細胞上にiPS細胞を播種し(day 0)、24時間ごとに維持培地で培地交換した。3日後(day 3)においてHAを50nM添加し24時間インキュベートし、PBSで2度洗浄して維持培地で培地交換した(day 4)。その後、10日後(day 10)まで24時間ごとに維持培地で培地交換した。培養後、通常の操作で継代を行い、継代から3日後(day 13)においてHAを50nM添加し24時間インキュベートし、PBSで2度洗浄して維持培地で培地交換した(day 14)。その後、10日間の培養、継代、HAの添加及び培養(10日間)を行った。培養された細胞のOct3/4の発現を免疫細胞染色法で確認し、また、DAPI染色を行った。使用した細胞、培地、及び培養条件は以下のとおりである。HAとしては、HA−1を使用した。
iPS細胞:Tic(Np 39)
フィーダ細胞:SNL 76/7(Np 5)マイトマイシン−c処理済み
〔培地〕
iPS細胞:Repro Stem(商品名、ReproCELL社製)、5ng/mL FGF−2
フィーダ細胞:DMEM(7%FBS,1%Penicillin−streptomycin solution)
〔容器〕
24ウェルプレート(底面積:1.9cm2/ウェル、培地量:0.4mL/ウェル)
〔HA調製・添加方法〕
HAの希釈:同じ希釈系列に含まれるPBS濃度を同じにするため、2段階希釈を行った。まず、PBSでHAを段階希釈し、さらに、培地(Repro Stem)を用いて希釈した。(終濃度:50nM)
さらにbFGF(終濃度5ng/ml)を加え、iPS細胞に添加した。
〔培養条件〕
37℃、5%CO2雰囲気下
iPS細胞の継代後、t=72h(day 3)の培地交換において、HAを各濃度で添加し、24時間培養した。その後、t=96h(day 4)の培地交換において、HA無添加の培地に切り替え、培養を継続した。
〔観察〕
day3、day4、day10、day13、day14、day20、day23、day24及びday30において、IN Cell Analyzer 2000(商品名、GEヘルスケアバイオサイエンス社製)で培養細胞を観察し画像を取得した。また、形成されたコロニー及び未分化コロニー(未分化細胞で形成され、未分化逸脱細胞を含まないコロニー)の数を計測し、未分化コロニーの割合を算出した。その結果を図22に示す。
Claims (11)
- 多能性(pluripotency)を有する幹細胞の培養方法であって、細胞間接着を阻害可能な物質の存在下で細胞培養することを含み、
前記細胞間接着を阻害可能な物質は、ボツリヌス菌(Clostridium botulinum)の神経毒素複合体におけるヘマグルチニン(HA)である、方法。 - 多能性(pluripotency)を有する幹細胞の培養中に発生した又は発生しうる未分化状態を脱した細胞を除去する方法であって、細胞間接着を阻害可能な物質の存在下で細胞培養することを含み、
前記細胞間接着を阻害可能な物質が、ボツリヌス菌(Clostridium botulinum)の神経毒素複合体におけるヘマグルチニン(HA)である、方法。 - 多能性(pluripotency)を有する幹細胞の未分化状態を維持する方法であって、細胞間接着を阻害可能な物質を含む培地中で細胞培養することを含み、
前記細胞間接着を阻害可能な物質が、ボツリヌス菌(Clostridium botulinum)の神経毒素複合体におけるヘマグルチニン(HA)である、方法。 - 多能性を有する幹細胞が、ヒト多能性(pluripotent)幹細胞である、請求項1から3のいずれかに記載の方法。
- ヒト多能性幹細胞が、ヒトiPS細胞又はヒトES細胞である、請求項4記載の方法。
- 細胞間接着を阻害可能な物質が、ボツリヌス菌の神経毒素複合体における3つのヘマグルチニンサブコンポーネントHA1、HA2、及び、HA3からなる群から選択される2又は3成分で構成される複合体である、請求項1から5のいずれかに記載の方法。
- 前記複合体のHA3サブコンポーネントは、A型又はB型のボツリヌス菌のものである、請求項6記載の方法。
- 培養が、継代培養である、請求項1から7のいずれかに記載の方法。
- 細胞間接着を阻害可能な物質を含む、請求項1から8のいずれかに記載の方法のための、組成物であって、
前記細胞間接着を阻害可能な物質が、ボツリヌス菌(Clostridium botulinum)の神経毒素複合体におけるヘマグルチニン(HA)である、組成物。 - 多能性を有する幹細胞用の培地成分と、細胞間接着を阻害可能な物質とを含み、
前記細胞間接着を阻害可能な物質が、ボツリヌス菌(Clostridium botulinum)の神経毒素複合体におけるヘマグルチニン(HA)である、キット。 - 請求項1から8のいずれかに記載の方法のための、請求項10記載のキット。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2012288783 | 2012-12-28 | ||
JP2012288783 | 2012-12-28 | ||
PCT/JP2013/084932 WO2014104207A1 (ja) | 2012-12-28 | 2013-12-26 | 多能性(pluripotency)を有する幹細胞の培養方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2014104207A1 JPWO2014104207A1 (ja) | 2017-01-19 |
JP6112514B2 true JP6112514B2 (ja) | 2017-04-12 |
Family
ID=51021281
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014554553A Active JP6112514B2 (ja) | 2012-12-28 | 2013-12-26 | 多能性(pluripotency)を有する幹細胞の培養方法 |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9822344B2 (ja) |
EP (1) | EP2940125B1 (ja) |
JP (1) | JP6112514B2 (ja) |
KR (1) | KR20150108365A (ja) |
CN (1) | CN105051185A (ja) |
AU (1) | AU2013367082A1 (ja) |
BR (1) | BR112015015466A2 (ja) |
CA (1) | CA2896689A1 (ja) |
SG (1) | SG11201505155WA (ja) |
WO (1) | WO2014104207A1 (ja) |
ZA (1) | ZA201504388B (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPWO2015199243A1 (ja) * | 2014-06-27 | 2017-04-27 | 国立大学法人大阪大学 | 変異型ヘマグルチニン複合体タンパク質、及びそれを用いた多能性を有する幹細胞の培養方法 |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP6541158B2 (ja) * | 2014-06-04 | 2019-07-10 | 国立大学法人大阪大学 | 粘膜ワクチン用アジュバント |
CA2974620C (en) * | 2015-01-29 | 2021-06-22 | The University Of Tokyo | Cell culture method, cell aggregates, cell aggregation control agent, and medium |
JP6949349B2 (ja) | 2016-12-20 | 2021-10-13 | 国立大学法人大阪大学 | 多能性幹細胞の増殖を促進するための組成物、及び多能性幹細胞の増殖促進方法 |
WO2019103111A1 (ja) | 2017-11-24 | 2019-05-31 | 国立大学法人金沢大学 | ヘマグルチニン複合体タンパク質及びその用途 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20090202431A1 (en) * | 2005-04-08 | 2009-08-13 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Stem-like cells in bone sarcomas |
US7695963B2 (en) * | 2007-09-24 | 2010-04-13 | Cythera, Inc. | Methods for increasing definitive endoderm production |
US9068182B2 (en) * | 2009-07-28 | 2015-06-30 | Corning Incorporated | Synthetic polysaccharide microcarriers for culturing cells |
JP2012143229A (ja) | 2010-12-24 | 2012-08-02 | Chiba Univ | 多能性幹細胞培養用組成物およびその用途 |
GB201220058D0 (en) * | 2012-11-07 | 2012-12-19 | Univ Manchester | Cell differentiation |
-
2013
- 2013-12-26 KR KR1020157019207A patent/KR20150108365A/ko not_active Application Discontinuation
- 2013-12-26 AU AU2013367082A patent/AU2013367082A1/en not_active Abandoned
- 2013-12-26 BR BR112015015466A patent/BR112015015466A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2013-12-26 US US14/655,804 patent/US9822344B2/en active Active
- 2013-12-26 CA CA2896689A patent/CA2896689A1/en not_active Abandoned
- 2013-12-26 CN CN201380068378.9A patent/CN105051185A/zh active Pending
- 2013-12-26 WO PCT/JP2013/084932 patent/WO2014104207A1/ja active Application Filing
- 2013-12-26 JP JP2014554553A patent/JP6112514B2/ja active Active
- 2013-12-26 EP EP13868965.8A patent/EP2940125B1/en active Active
- 2013-12-26 SG SG11201505155WA patent/SG11201505155WA/en unknown
-
2015
- 2015-06-17 ZA ZA2015/04388A patent/ZA201504388B/en unknown
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPWO2015199243A1 (ja) * | 2014-06-27 | 2017-04-27 | 国立大学法人大阪大学 | 変異型ヘマグルチニン複合体タンパク質、及びそれを用いた多能性を有する幹細胞の培養方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
BR112015015466A2 (pt) | 2017-07-11 |
CA2896689A1 (en) | 2014-07-03 |
JPWO2014104207A1 (ja) | 2017-01-19 |
WO2014104207A1 (ja) | 2014-07-03 |
CN105051185A (zh) | 2015-11-11 |
SG11201505155WA (en) | 2015-08-28 |
EP2940125A1 (en) | 2015-11-04 |
AU2013367082A1 (en) | 2015-08-06 |
US9822344B2 (en) | 2017-11-21 |
KR20150108365A (ko) | 2015-09-25 |
ZA201504388B (en) | 2016-04-28 |
EP2940125B1 (en) | 2019-05-01 |
US20150329831A1 (en) | 2015-11-19 |
EP2940125A4 (en) | 2016-05-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6112514B2 (ja) | 多能性(pluripotency)を有する幹細胞の培養方法 | |
JP6682474B2 (ja) | 単細胞選別のための細胞培養プラットホームおよびiPSCの再プログラミングの増強 | |
JP2014501108A5 (ja) | ||
JP2022097516A5 (ja) | ||
WO2017119512A1 (ja) | 低分子化合物による成熟肝細胞からの肝幹/前駆細胞の作製方法 | |
JP6355736B2 (ja) | 変異型ヘマグルチニン複合体タンパク質、及びそれを用いた多能性を有する幹細胞の培養方法 | |
JP2019528057A5 (ja) | ||
Simpson et al. | Engineering patient-specific valves using stem cells generated from skin biopsy specimens | |
Tsuno et al. | Application of human amniotic mesenchymal cells as an allogeneic transplantation cell source in bone regenerative therapy | |
Rao et al. | Illustrating the potency of current Good Manufacturing Practice–compliant induced pluripotent stem cell lines as a source of multiple cell lineages using standardized protocols | |
JP2008148643A (ja) | 無血清培地および幹細胞の培養方法 | |
US11795438B2 (en) | Composition for promoting proliferation of pluripotent stem cells, and method for promoting proliferation of pluripotent stem cells | |
WO2019177936A1 (en) | Method for generating multiple cellular products from single pluripotent cell source | |
AR091669A1 (es) | Linea celular de alto rendimiento en suspension, sistema y metodo para su preparacion | |
Islam et al. | In vitro osteogenic potential of green fluorescent protein labelled human embryonic stem cell‐Derived osteoprogenitors |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170207 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170307 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6112514 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |