JP6099109B2 - 新規肺癌マーカー(liph) - Google Patents
新規肺癌マーカー(liph) Download PDFInfo
- Publication number
- JP6099109B2 JP6099109B2 JP2015523892A JP2015523892A JP6099109B2 JP 6099109 B2 JP6099109 B2 JP 6099109B2 JP 2015523892 A JP2015523892 A JP 2015523892A JP 2015523892 A JP2015523892 A JP 2015523892A JP 6099109 B2 JP6099109 B2 JP 6099109B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- lung cancer
- cancer
- liph
- lung
- sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 title claims description 66
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 title claims description 64
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 title claims description 64
- 102100030658 Lipase member H Human genes 0.000 title claims description 30
- 101710102454 Lipase member H Proteins 0.000 title claims description 25
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 title description 37
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 41
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 41
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 41
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 23
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 22
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 22
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 16
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 11
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 10
- 101150048797 LIPH gene Proteins 0.000 claims description 7
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 3
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 claims 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 49
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 30
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 24
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 23
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 10
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 9
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 9
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 9
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 8
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- 101001064316 Homo sapiens Lipase member H Proteins 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 6
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 6
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 208000003170 Bronchiolo-Alveolar Adenocarcinoma Diseases 0.000 description 4
- 206010058354 Bronchioloalveolar carcinoma Diseases 0.000 description 4
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 4
- 108010036226 antigen CYFRA21.1 Proteins 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 208000016992 lung adenocarcinoma in situ Diseases 0.000 description 4
- 208000024191 minimally invasive lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 4
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- 238000007397 LAMP assay Methods 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 3
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 3
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 3
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 208000003849 large cell carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 201000005243 lung squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 description 2
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- OCLXJTCGWSSVOE-UHFFFAOYSA-N ethanol etoh Chemical compound CCO.CCO OCLXJTCGWSSVOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 108010061031 pro-gastrin-releasing peptide (31-98) Proteins 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 2
- CZWUESRDTYLNDE-UHFFFAOYSA-N (2z)-2-[(2e,4e,6e)-7-[1-(5-carboxypentyl)-3,3-dimethyl-5-sulfoindol-1-ium-2-yl]hepta-2,4,6-trienylidene]-1-ethyl-3,3-dimethylindole-5-sulfonate Chemical compound CC1(C)C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)\C1=C/C=C/C=C/C=C/C1=[N+](CCCCCC(O)=O)C2=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C2C1(C)C CZWUESRDTYLNDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LIZDKDDCWIEQIN-UHFFFAOYSA-N 6-[2-[5-(3-ethyl-1,1-dimethyl-6,8-disulfobenzo[e]indol-2-ylidene)penta-1,3-dienyl]-1,1-dimethyl-6,8-disulfobenzo[e]indol-3-ium-3-yl]hexanoate Chemical compound C1=CC2=C(S(O)(=O)=O)C=C(S(O)(=O)=O)C=C2C(C2(C)C)=C1N(CC)\C2=C\C=C\C=C\C1=[N+](CCCCCC([O-])=O)C2=CC=C(C(=CC(=C3)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)C3=C2C1(C)C LIZDKDDCWIEQIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010068873 Adenosquamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 102000002464 Galactosidases Human genes 0.000 description 1
- 108010093031 Galactosidases Proteins 0.000 description 1
- 101000603202 Homo sapiens Nicotinamide N-methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101000625256 Homo sapiens Protein Mis18-beta Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 102000013460 Malate Dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010026217 Malate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102100038951 Nicotinamide N-methyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 102100025034 Protein Mis18-beta Human genes 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 201000008395 adenosquamous carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 210000001552 airway epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002821 alveolar epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 208000028299 esophageal disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- ZFKJVJIDPQDDFY-UHFFFAOYSA-N fluorescamine Chemical compound C12=CC=CC=C2C(=O)OC1(C1=O)OC=C1C1=CC=CC=C1 ZFKJVJIDPQDDFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 230000003029 glycosylic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 102000058146 human LIPH Human genes 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 230000036046 immunoreaction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- NJHLGKJQFKUSEA-UHFFFAOYSA-N n-[2-(4-hydroxyphenyl)ethyl]-n-methylnitrous amide Chemical compound O=NN(C)CCC1=CC=C(O)C=C1 NJHLGKJQFKUSEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 208000000649 small cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57488—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds identifable in body fluids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/916—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. phosphatases (3.1.3), phospholipases C or phospholipases D (3.1.4)
- G01N2333/918—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
すでに、種々の癌マーカーが開発されているが、肺癌及び食道癌では、更なる癌マーカーの開発が望まれている。
肺癌は早期発見が困難でその5年生存率は20%に満たない予後不良な疾患の一つである。しかし、Stage IA、IBの早期肺癌に限ればその5年生存率は70%程度と大幅に上昇する。肺癌の種類(組織型)は病理学的にはその形態から小細胞性肺癌及び非小細胞性肺癌に分類され、後者はさらに扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌に分類されている。肺癌マーカーとして現在良く使用されているものには、CYFRA21−1、CEA、SLX、SCC、ProGRP、NSEなどがある。CEAはもっとも一般的な腫瘍マーカーであり、SLXは腺癌に特異性が高い。CYFRA21−1やSCCは扁平上皮癌に特異性が高いとされ、ProGRPやNSEは小細胞癌に特異性が高いといわれている。
また、例えば、特許文献1には、従来からのCYFRA 21−1、CEA、NSE、SCC等のマーカーと組み合わせてNNMTを用いると感度が向上することを報告している。非特許文献1には、糖鎖を利用した肺癌マーカーが報告されている。
また、食道癌は、消化器での一番の致死性の悪性腫瘍の一つであり、検査で食道癌が発見されたときには、すでに病状が相当に進行していることが多い。ステージ1で根治的治療をしても5年後生存率は、依然、40−60%と低いのが現状である。しかしながら、食道癌マーカーについては、診断、治療効果判定、予後評価のいずれかにでも有用であるものは残念ながら少ない現状である。扁平上皮癌では、SCCとCEAが、腺癌ではCEAが使われ、他に食道癌マーカーとしてはp53抗体、及びCYFRA21−1がある。
なお、肺癌、食道癌のバイオマーカーとして、Opa interacting protein 5が報告されている(非特許文献2)。
更に、本願発明は、新規な食道癌マーカーを提供することを第7の課題とする。また、本願発明は、検出効率が高い食道癌マーカーを提供することを第8の課題とする。その上、他の食道癌マーカーと組み合わせることにより、検出効率及び/又は検出特異性を向上させることができる食道癌マーカーを提供することを第9の課題とする。
本願発明者らは、LIPH(lipase,member H)は複数の肺腺癌由来細胞株で正常肺由来上皮細胞と比較して発現が亢進し、肺癌及び食道癌において高発現している可能性が高いことを見出し、本願発明を完成させた。
さらに本願発明者らは、肺癌組織マイクロアレイを用いた免疫組織染色の結果、LIPHは肺腫瘍組織で染色が見られたが間質組織では染色が見られず、臨床サンプルのタンパク質レベルにおいても肺腫瘍組織での発現が亢進することを明らかにした。LIPHタンパク質の発現を肺癌の組織型別に見てみると、肺腺癌で70%、細気管支肺胞上皮癌で70%と高い陽性率を示した一方で、肺扁平上皮癌で30%、大細胞癌で20%とやや低く、小細胞癌では10検体中1検体のみでその発現が確認され、LIPHタンパク質が肺腺癌に特異的に発現するタンパク質であることを見出した。これらの知見に基づき、本願発明者らは、肺癌の組織型を特定するマーカーを提供する。
本願発明は、新規な、高い信頼性の肺癌マーカーを提供するという優れたものである。特にLIPHは、肺腺癌を特異的に検出できる点で優れたマーカーである。
また本願発明者らは、食道癌の組織マイクロアレイを用いた免疫組織染色の結果、LIPHは食道癌組織で染色が見られたが間質組織では染色が見られなかった。
本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願2013−136820号の明細書および/または図面に記載される内容を包含する。
図2は、肺癌マーカーLIPHの肺癌組織における発現を示す。
図3は、LIPHの発現を肺癌組織型別に観察した結果を示す。
図4は、健常人とがん患者におけるLIPHの血清中の検出量を示す。
図5は、CEAとの相関プロットを示す。
図6は、LIPHの発現を食道癌組織型別に観察した結果を示す。
本願発明者らは、癌マーカーを開発するために、肺癌で発現が有意に高いと予想される候補遺伝子をまず選抜した。その候補遺伝子の中から、複数の肺癌由来細胞株で正常肺由来上皮細胞と比較して発現量が高いものを更に選抜し、癌マーカーを完成させた。
2.癌マーカー遺伝子、肺癌マーカー遺伝子、食道癌マーカー遺伝子
本願発明者らは、癌マーカーとして、LIPH(lipase,member H)遺伝子を同定した。
さらに、本願発明者らは、LIPH(lipase,member H)遺伝子を肺癌マーカー及び食道癌マーカーとして同定した。
以下の実施例に示されるとおり、上記遺伝子は、複数の種類の肺癌由来細胞株で、正常肺由来細胞と比較して発現が亢進していたことが確認されている。さらに、免疫染色により、肺癌組織及び食道癌組織から上記遺伝子産物であるLIPHが検出されている。また、本マーカーは、肺癌及び食道癌への特異性に加え、肺癌切除後の予後との相関性が高く、肺癌の予後予測に使える可能性が非常に高いマーカーである。
3.癌マーカー遺伝子、肺癌マーカー遺伝子,及び/又は食道癌マーカー遺伝子の発現の確認
遺伝子発現の確認には、当該遺伝子のmRNA又は当該遺伝子がコードする蛋白質を検出する周知の方法を用いることができる。mRNAの存在を確認する方法としては、例えば、LAMP法、PCR法、マイクロアレイ法などを用いることができる。蛋白質の確認方法としては、免疫染色法、ELISA法などの抗体を用いる方法などを用いることができる。
4.癌マーカーを用いた、癌細胞の存在を確認する方法及び癌診断を補助する方法、肺癌マーカーを用いた、肺癌細胞の存在を確認する方法及び肺癌診断を補助する方法、食道癌マーカーを用いた、食道癌細胞の存在を確認する方法及び食道癌診断を補助する方法
4−1.サンプル
癌細胞、肺癌細胞又は食道癌細胞の存在を確認する方法に使用するためのサンプル(試料)としては、任意の試料を用いることができるが、好適には被験者からの採取物、具体的には、任意の採取された体液、生検された試料を挙げることができる。特に好適には、被験者の肺疾患部又は食道疾患部の生検試料または喀痰試料を挙げることができる。
4−2.サンプル中のmRNAの検出法並びにそのための試薬及びキット
例えば、生検試料は、細胞を、例えば、界面活性剤、ホモジナイザー、又はフリーズソーイングなどの定法により、破砕し、全RNAを抽出することができる。目的のmRNAの定量には、LAMP法、ディファレンシャルディスプレイ法やDNAアレイ(DNAチップ)を用いる方法、定量PCR法、リアルタイムPCR法、コンペティティブPCR法を利用することができる。
例えば、リアルタイムPCR法では、マーカー遺伝子の増幅産物の生成をリアルタイムでモニタリングし、解析する方法があげられる。前記リアルタイムモニタリング試薬としては、例えば、SYBRGreen I、TaqManプローブ等が挙げられる。
また、コンペティティブPCR法としては、例えば、細胞内の全RNAやmRNAから逆転写酵素を用いてcDNAを調製し、当該cDNA及びDNAコンペティターを同一チューブ内で反応させる方法や、さらに前記逆転写反応時にmRNAとともにRNAコンペティターを加えて反応させる方法等があげられる。またコンペティターのプライマー配列以外の内部配列としては、例えば、増幅目的mRNAの配列と相同配列でもよく、非相同な配列でもよい。
また、リアルタイムPCR法を利用する場合について、より具体的に例示すると、全抽出RNAからOligo dTプライマーを用いて逆転写反応で、cDNAを調製し、これをリアルタイムPCRで計測することができる。RNA抽出には、例えば、ISOGEN法(ニッポンジーン)を用いることができる。また、逆転写法には、例えば、PrimeScript(R) II 1st strand cDNA Synthesis Kitを用いることができる。リアルタイムPCRには、例えば、THUNDERBIRD(商標) SYBR Mix(TOYOBO社)やTaqManプローブなどを用いて増幅産物を測定することができる。
また、LIPH遺伝子の配列又は同配列に1から数個の塩基が欠失、置換、及び/又は付加された配列に相補的な配列の標識したプローブによるハイブリダイゼーション方法も含まれる。
なお、プライマーとしては、癌マーカー遺伝子、肺癌マーカー遺伝子及び/又は食道癌マーカー遺伝子であるLIPH遺伝子をPCR法などの遺伝子増幅方法で増幅できるプライマーであれば、いずれのプライマーでもよい。LIPH遺伝子、例えば、配列番号1で示される配列又は同配列に1から数個の塩基が欠失、置換、及び/又は付加された配列について、その配列の任意の連続する15塩基長以上の塩基、好ましくは16−30塩基長、より好ましくは、18〜28塩基長からなるプライマーを使用することができる。具体的には、以下の表1に記載のものを用いることができる。
更にハイブリダイゼーション法には、配列番号1で示される配列又は同配列に1から数個の塩基が欠失、置換、及び/又は付加された配列に相補的な配列の標識したプローブを用いることができる。
プローブの標識としては、例えば、放射性同位元素、蛍光物質、発光物質、酵素などを挙げることができる。放射性同位元素としては、例えば、〔32P〕、〔33P〕、〔125I〕、〔131I〕などを用いることができる。蛍光物質としては、例えば、Cy2、Cy3、Cy5、Cy5.5、Cy7、フルオレセインイソチオシアネート、フルオレスカミン、ローダミンなどを用いることができる。酵素としては、例えば、標識として常用される、アルカリフォスファターゼ、パーオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素などが挙げられる。
4−2−1.
上記mRNA検出方法を実施するためのキットとしては、例えば、(1)LIPH(lipase,member H)肺癌又は食道癌マーカー遺伝子をLAMP法などの遺伝子増幅方法で増幅できるプライマー又は1組のプライマー(プライマーセット)を含むキット、(2)一例を挙げれば、表1に掲げた1組のプライマー(プライマーセット)を含むキットが挙げられる。
4−3.サンプル中のタンパク質の検出方法
本願発明では、マーカー蛋白質の検出法として、例えば、抗体を用いて検出する方法や質量分析法などマーカー蛋白質を特異的に検出できる方法であればいかなる方法を用いても良い。抗体を用いる方法では、上記LIPH遺伝子によりコードされるタンパク質に対する抗体は、既に市販されているものを利用しても良いが、定法により調製してもよい。抗体を用いるマーカー蛋白質の検出法としては、免疫染色法、免疫蛍光法、各種のエンザイムイムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ(RIA)・酵素結合免疫測定法(ELISA)、二重モノクローナル抗体サンドイッチイムノアッセイ法、モノクローナルポリクローナル抗体サンドイッチアッセイ法、ウェスタンブロッティング法、ビオチン−アビジン法、免疫沈降法などを挙げることができる。
4−3−1.
例えば、上記4.3のタンパク質検出方法を実施するためのキットとしては次のようなものが挙げられる。
(1)(i)酵素標識化モノクローナル抗体及び(ii)基質溶液
サンドイッチELISA法を実施するためのキットとしては下記の試薬を含むものがある。
(2)(i)モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体、(ii)酵素標識化モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体、及び(iii)基質溶液
ビオチン−アビジン法を実施するためのキットは下記の試薬を含むものである。
(3)(i)ビオチン化モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体、(ii)酵素標識化アビジン又はストレプトアビジン、及び(iii)基質溶液
サンドイッチELISA法及びビオチン−アビジン法を実施するためのキットは下記の試薬を含むものである。
(4)(i)モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体、(ii)ビオチン化モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体、(iii)酵素標識化アビジン又はストレプトアビジン及び(iv)基質溶液
なお上記の基質溶液とは、抗体に標識した酵素の基質であって、酵素反応により検出可能な変化を生じる基質を含有する溶液のことである。例えば、基質溶液としては、アルカリフォスファターゼ(AP)で標識した場合はp−ニトロフェニルリン酸含有緩衝液が、ホースラディシュパーオキシダーゼ(HRPO)で標識した場合はo−フェニレンジアミン含有緩衝液が、β−ガラクトシダーゼで標識した場合は、4−メチルウンベリルフェリル−β−ガラクトシドを含有する緩衝液を用いることができる。
ビオチン化抗体を用いる方法としては公知の方法を用いることができるが、好ましくはストレプトアビジンとパーオキシダーゼとのコンジュゲートをビオチンに結合させる方法を用いる。このようなパーオキシダーゼとしては、ホースラディッシュパーオキシダーゼが挙げられる。さらに、パーオキシダーゼの検出には、そのパーオキシダーゼの作用によって発色する物質を用いることが好ましい。
以下に本願発明を、実施例を用いてより具体的に説明する。但し、本願は以下の実施例により限定されるものではない。
LIPH(lipase,member H)についての結果を図1に示す。正常肺由来上皮細胞(SAEC :小気道上皮細胞、NHBE:肺胞上皮細胞)と比較し、複数の肺腺癌細胞株で2倍以上の発現が確認された。また、肺扁平上皮癌細胞株で発現が上昇していた。図中グラフの縦軸は遺伝子の発現量を内部標準遺伝子GAPDHの発現量で除した値を、PC−3細胞の発現量との相対値で示している。
まず、キシレン処理を10分間、2回、100%EtOH(エタノール)で10分間処理を2回、した後、90%EtOHで10分間処理し、最後に、70%EtOHエタノールで10分間処理して、脱パラフィンし、親水化した。
次に、10mMクエン酸緩衝液中で110℃10分間オートクレーブを行うことで抗原の賦活化を行った。0.3%H2O2/MeOHで30分処理して、内在性ペルオキシダーゼを失活させた。その後、Vectastain ABCキット(Vector社)を用いて免疫染色を行い、DAB Peroxidase Substrate Kit(Vector社)を用いて発色を行った。また、免疫染色後にヘマトキシリン(Sigma社)で対比染色を行った。
顕微鏡(BX50(OLYMPUS社)、EOS kiss X6iで観察し、撮影した結果を図2に示す。肺腺癌組織において、腫瘍細胞の細胞質で強く発現していることが明らかとなった。
まず、キシレン処理を10分間、2回、100%EtOH(エタノール)で10分間処理を2回、した後、90%EtOHで10分間処理し、最後に、70%EtOHエタノールで10分間処理して、脱パラフィンし、親水化した。
抗原の賦活化は10mMクエン酸緩衝液(pH6.0)中で100℃、20分間加熱処理することで行い、内在性ペルオキシダーゼを失活させるため、0.3%過酸化水素/メタノールで30分間スライドを処理した。染色にはタイラマイドを利用したビオチンフリー免疫染色増感システムCASII(Dako社)を使用し、製造者のプロトコールに従って行った。DAB Peroxidase Substrate Kit(Vector社)を用いて発色を行った後、ヘマトキシリン(Sigma社)で対比染色を行った。観察はIX59顕微鏡(オリンパス)を用い、EOS Kiss X6i(Canon)を用いて画像を取得した。
結果を図6に示す。図6より、LIPHは、食道癌のマーカーとしても用いることができることが明らかとなった。
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
[配列表]
Claims (9)
- LIPH遺伝子によりコードされるポリペプチドである肺癌又は食道癌のマーカー。
- LIPHをコードするmRNAである請求項1記載の肺癌又は食道癌のマーカー。
- 配列番号1で示される配列又は同配列に1から数個の塩基が欠失、置換、及び/又は付加された配列に相補的な配列の標識した肺癌又は食道癌検出用プローブ。
- LIPH遺伝子を検出するためのLIPH遺伝子配列中の連続する15塩基以上の塩基を含む肺癌又は食道癌検出用プライマー。
- 配列番号1で示される配列又は同配列に1から数個の塩基が欠失、置換、及び/又は付加された配列について、その配列の任意の連続する15塩基長以上の塩基を含む肺癌又は食道癌検出用プライマー。
- LIPHに対する抗体を含む肺癌又は食道癌検出剤。
- 抗体がモノクローナル抗体である請求項6記載の肺癌又は食道癌検出剤。
- 請求項4又は5記載の肺癌又は食道癌検出用プライマーを含む肺癌又は食道癌検出キット。
- 請求項6又は7記載の肺癌又は食道癌検出剤を含む肺癌又は食道癌検出キット。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2013136820 | 2013-06-28 | ||
JP2013136820 | 2013-06-28 | ||
PCT/JP2014/058147 WO2014208156A1 (ja) | 2013-06-28 | 2014-03-18 | 新規肺癌マーカー(liph) |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2014208156A1 JPWO2014208156A1 (ja) | 2017-02-23 |
JP6099109B2 true JP6099109B2 (ja) | 2017-03-22 |
Family
ID=52141511
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015523892A Expired - Fee Related JP6099109B2 (ja) | 2013-06-28 | 2014-03-18 | 新規肺癌マーカー(liph) |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20160369349A1 (ja) |
JP (1) | JP6099109B2 (ja) |
WO (1) | WO2014208156A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110208537A (zh) * | 2019-07-18 | 2019-09-06 | 天津市肿瘤医院 | 肺癌尿液分子标志物mdh2在用于肺癌辅助诊断方面的应用 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2295602B1 (en) * | 2005-07-27 | 2012-07-11 | Oncotherapy Science, Inc. | Method of prognosing cancers |
WO2008014951A1 (en) * | 2006-08-01 | 2008-02-07 | Roche Diagnostics Gmbh | Use of nnmt as a marker for lung cancer |
EP2684568B1 (en) * | 2009-01-08 | 2017-11-15 | International Institute of Cancer Immunology, Inc. | EEF2-derived peptides for the treatment or prevention of cancer |
-
2014
- 2014-03-18 WO PCT/JP2014/058147 patent/WO2014208156A1/ja active Application Filing
- 2014-03-18 JP JP2015523892A patent/JP6099109B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2014-03-18 US US14/901,578 patent/US20160369349A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20160369349A1 (en) | 2016-12-22 |
WO2014208156A1 (ja) | 2014-12-31 |
JPWO2014208156A1 (ja) | 2017-02-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Chakraborty et al. | Current status of molecular markers for early detection of sporadic pancreatic cancer | |
EP2619321B1 (en) | Biomarkers for differentiating melanoma from benign nevus in the skin | |
JP6138154B2 (ja) | 乳癌の予測および診断のためのバイオマーカー | |
JP2018183162A (ja) | 膀胱癌を検出するための尿マーカー | |
JP6192123B2 (ja) | 乳癌の予測および診断のためのバイオマーカー | |
CN106701964B (zh) | 血清外泌体miRNA生物标志物及用于胃癌早期诊断的试剂盒 | |
US20230204583A1 (en) | Keratins as biomarkers for cervical cancer and survival | |
JP3538381B2 (ja) | 結腸癌を診断し、モニターし、そして病期決定する新規方法 | |
KR101416475B1 (ko) | 암진단용 마커 단백질, 그리고 이를 이용한 암진단방법 및암 진단키트 | |
CN110187111B (zh) | 一种用于早期贲门癌筛查elisa试剂盒 | |
JP6192122B2 (ja) | 結腸直腸癌診断および予測のためのバイオマーカー | |
KR101995189B1 (ko) | 비침습적 체외진단을 위한 간암 진단용 바이오마커 조성물 및 이를 포함하는 키트 | |
JP6099109B2 (ja) | 新規肺癌マーカー(liph) | |
EP2581745B1 (en) | Composition for diagnosis of lung cancer and diagnosis kit of lung cancer | |
CN104531878B (zh) | 一种联合lncRNA和AR3检测试剂盒及应用 | |
CN111763736B (zh) | 用于诊断甲状腺乳头状癌淋巴结转移的液体活检试剂盒 | |
KR102000387B1 (ko) | 췌관내유두상점액종양의 악성도를 감별할 수 있는 단백질 바이오마커 및 그 용도 | |
JP2020072705A (ja) | 膀胱癌を検出するための尿マーカー | |
WO2014208157A1 (ja) | 新規肺癌マーカー(prdx4) | |
US7358060B2 (en) | Method for monitoring and prognosis of disease course of gastrointestinal tumors | |
KR102350228B1 (ko) | 신장이식 후 t세포 매개성 거부반응의 진단 또는 예측을 위한 소변 엑소좀 바이오마커 | |
WO2009103779A1 (en) | BRCA1 mRNA EXPRESSION PREDICTS SURVIVAL IN PATIENTS WITH BLADDER CANCER TREATED WITH NEOADJUVANT CISPLATIN-BASED CHEMOTHERAPY | |
EP3329283B1 (en) | Method for the normalization of immunological tests | |
CN116539881A (zh) | 一种血清肿瘤标志物及其在制备癌症诊断试剂中的应用 | |
WO2007032373A1 (ja) | 腫瘍発生リスクの解析方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20161011 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20161212 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20161212 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170131 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170215 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6099109 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |