JP6089165B1 - ビフィズス菌増殖用組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
安息角=tan−1(b/a)×180÷π
(式中、a=シャーレ半径、b=堆積したサンプルの高さを表わす。)
ビフィズス菌用培地は、ビフィズス菌増殖用組成物を含有してなり、更に必要に応じてビフィズス菌の生育に好適な成分を含有してなる。ビフィズス菌の培養方法は、ビフィズス菌用培地を用いてビフィズス菌を培養する方法である。
原料として、出穂前に刈り取った大麦の茎葉を用いた。これを水洗いし、付着した泥などを除去し、5〜10cm程度の大きさに切断する前処理を行った。前処理した茎葉を、90〜100℃の熱湯で90秒間〜120秒間、1回のみブランチング処理し、その後、冷水で冷却した。続いて、得られた茎葉を、水分量が5質量%以下となるまで、乾燥機中で、20分間〜180分間、80℃〜130℃の温風にて乾燥させた。乾燥した茎葉を約1mmの大きさに粉砕処理した。得られた大麦の茎葉を、200メッシュ区分を90%以上が通過するように粉砕処理し、大麦茎葉の粉砕末試料を得た。
製造例1で得られた大麦の茎葉の粉砕末試料について、生体内でのビフィズス菌増殖効果のモデル試験として、以下の増殖試験を実施した。大麦の茎葉の粉砕末試料の増殖対象として、ビフィドバクテリウム・ロンガムを用いた。これに対し、製造例1で得られた粉砕末試料を、ビフィドバクテリウム・ブレーベ(Bifidobacterium breve)の増殖に用いた例を比較例とした。
(ビフィズス菌用の粉砕末試料入り培地の作製)
製造例1で得られた大麦の茎葉の乾燥粉砕末試料0.1gを試験管に量りとり、食品衛生検査指針に準じて作製したリン酸緩衝生理食塩水(PBS)10mLで懸濁させた。これをオートクレーブにて121℃、20分の条件で滅菌し、ビフィズス菌用培地を得た。
ビフィズス菌(白色微粉末)の乾燥菌体約10mgを試験管にとり、MRS Broth(MERCK社製)10mLで懸濁させ、37℃で約24時間嫌気培養した。
「ビフィズス菌の前培養」で得られた懸濁液を10000倍まで段階希釈した希釈液0.1mLを、「ビフィズス菌用の粉砕試料入り培地の作製」で得られたビフィズス菌用培地10mLに添加したものを2セット用意し、一方は希釈液添加時点のものを静置培養開始時点(0時間)の培養液とした。他方は37℃、24時間の条件で、嫌気条件下で静置培養を行い、静置培養終了時点(24時間)の培養液とした。
「ビフィズス菌の本培養」で得られた、静置培養0時間及び24時間の培養液それぞれから、ビフィズス菌のDNAを採取し、リアルタイムPCR法にて菌数測定を行った。上記各培養液から、ビフィズス菌のDNAを、DNA抽出キット(Takara製)で抽出し、得られたDNAを鋳型DNAとした。これにビフィズス菌特異的プライマーを用いてリアルタイムPCRにてビフィズス菌の検出を行った。PCRコンディションは95℃5秒、60℃30秒で40サイクルとした。PCR反応液は、2×PCR Buffer(Takara社製)を5μL 、各プライマー(濃度:10pmol/μL)を0.8μL、鋳型DNA0.8μL、滅菌水3μLとした。プライマーとしては、後述する配列のものを用いた。ビフィズス菌の菌数は既知の菌数の各ビフィズス菌をスタンダードとして定量した。具体的には、増殖対象のビフィズス菌を、菌濃度を1.4×109CFU/mLから1.0×105CFU/mLまでの4段階に希釈したものを上記と同様にDNA抽出してリアルタイムPCRにより増幅した増幅産物量を測定することにより検量線を作成した。結果を下記表1に示す。
Bifidobacterium属
Foward :TCGCGTCYGGTGTGAAAG(配列表に記載の配列1)
Reverse :CCACATCCAGCRTCCAC(配列表に記載の配列2)
製造例1で得られた大麦の茎葉の粉砕末試料について、大麦の茎葉の粉砕末試料の増殖対象として、ビフィドバクテリウム・アドレセンティスを、比較例としてビフィドバクテリウム・ブレーベを用い、ビフィズス菌の本培養における静置培養時間を72時間とした以外は実施例1と同様にして、生体内でのビフィズス菌増殖効果のモデル試験を実施した。結果を下記表2に示す。
Claims (1)
- 大麦の茎及び/又は葉の粉砕物及び/又はその乾燥粉末を含有することを特徴とする、ビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum)の増殖用組成物。
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