JP6088063B2 - ブルトン型チロシンキナーゼの阻害剤 - Google Patents

Description

発明の分野
本発明は、Ｂｔｋを阻害し、異常なＢ細胞活性化により引き起こされる自己免疫疾患及び炎症性疾患の処置に有用である、新規化合物の使用に関する。

発明の背景
タンパク質キナーゼは、ヒト酵素の最大ファミリーの１つを構成し、リン酸塩基をタンパク質に加えることにより、多くの異なるシグナル伝達過程を制御する（T. Hunter, Cell 1987 50:823-829）。具体的には、チロシンキナーゼは、チロシン残基のフェノール類部分のタンパク質をリン酸化する。チロシンキナーゼファミリーは、細胞成長、遊走、及び分化を制御するメンバーを含む。異常なキナーゼ活性は、癌、自己免疫疾患、及び炎症性疾患を含む、様々なヒト疾患において結び付けられてきた。タンパク質キナーゼは、細胞のシグナル伝達の鍵となる制御因子であるので、細胞機能を、低分子キナーゼ阻害剤で調節するための標的を提供し、これにより、良好な薬物設計標的を作成する。キナーゼにより仲介される疾患過程の処置に加えて、キナーゼ活性の選択的阻害剤、及び有効な阻害剤はまた、細胞シグナル伝達過程の調査、及び治療対象の他の細胞標的の同定に有用である。

Ｂ細胞が、自己免疫疾患、及び／又は炎症性疾患の病態形成において鍵となる役割を果たすという、良好な証拠が存在する。Ｂ細胞を枯渇させる、タンパク質ベースの治療剤、例えば、リツキサンは、自己抗体によりもたらされる炎症性疾患、例えば、関節リウマチに対して有効である（Rastetter et al. Annu Rev Med 2004 55:477）。それ故、Ｂ細胞活性化において役割を果たすタンパク質キナーゼの阻害剤は、Ｂ細胞により仲介される疾患症状、例えば、自己抗体産生に有用な治療剤であろう。

Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）を介したシグナル伝達は、増殖、及び成熟抗体産生細胞への分化を含む、広範なＢ細胞応答を制御する。ＢＣＲは、Ｂ細胞活性の鍵となる制御ポイントであり、異常なシグナル伝達は、複数の自己免疫疾患、及び／又は炎症性疾患を導く、調節解除されたＢ細胞増殖、及び病原性自己抗体の形成を引き起こし得る。ブルトン型チロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）は、膜近位かつＢＣＲから直ぐ下流にある、ＢＣＲ非会合型キナーゼである。Ｂｔｋの欠如は、ＢＣＲシグナル伝達を阻害することを示し、それ故、Ｂｔｋの阻害は、Ｂ細胞により仲介される疾患過程を阻害するための有用な治療アプローチであり得る。

Ｂｔｋは、チロシンキナーゼのＴｅｃファミリーのメンバーであり、初期Ｂ細胞発生、並びに成熟Ｂ細胞活性化及び生存の重大な制御因子であることが示された（Khan et al. Immunity 1995 3:283；Ellmeier et al. J. Exp. Med. 2000 192:1611）。ヒトにおけるＢｔｋの変異は、状態、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症（ＸＬＡ）を導く（Rosen et al. New Eng. J. Med. 1995 333:431、及びLindvall et al. Immunol. Rev. 2005 203:200で概説される）。これらの患者は、易感染性であり、ＢＣＲ刺激後に、Ｂ細胞の障害された成熟、低減した免疫グロブリン、及び抹消Ｂ細胞レベル、減少したＴ細胞非依存性免疫応答、並びに弱められたカルシウム動員を示す。

自己免疫疾患、及び炎症性疾患におけるＢｔｋの役割の証拠はまた、Ｂｔｋ欠損マウスモデルにより提供された。全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の前臨床マウスモデルにおいて、Ｂｔｋ欠損マウスは、疾患の進行の顕著な改善を示す。加えて、Ｂｔｋ欠損マウスは、コラーゲンにより誘発される関節炎に抵抗性である（Jansson and Holmdahl Clin. Exp. Immunol. 1993 94:459）。選択的Ｂｔｋ阻害剤は、マウス関節炎モデルにおいて、用量に依存した有効性を示した（Z. Pan et al., Chem. Med Chem. 2007 2:58-61）。

Ｂｔｋはまた、疾患過程に関与し得る、Ｂ細胞以外の細胞により発現される。例えば、Ｂｔｋは、肥満細胞により発現され、Ｂｔｋ欠損骨髄由来の肥満細胞は、障害された抗原により誘導される脱顆粒を示す（Iwaki et al. J. Biol. Chem. 2005 280:40261）。これは、Ｂｔｋが、病理的肥満細胞応答、例えば、アレルギー、及び喘息を処置するのに有用であり得ることを示す。また、ＸＬＡ患者（ここで、Ｂｔｋ活性は存在しない）由来の単球は、刺激後に、低減したＴＮＦα産生を示す（Horwood et al. J Exp Med 197:1603, 2003）。それ故、ＴＮＦαにより仲介される炎症は、低分子Ｂｔｋ阻害剤により調節され得る。また、Ｂｔｋは、アポトーシスにおいて役割を果たすことが報告され（Islam and Smith Immunol. Rev. 2000 178:49）、したがって、Ｂｔｋ阻害剤は、特定のＢ細胞リンパ腫及び白血病の処置に有用である（Feldhahn et al. J. Exp. Med. 2005 201:1837）。

発明の概要
本出願は、本明細書において後述される、式ＩのＢｔｋ阻害剤化合物、その使用方法を提供する。

本出願は、式Ｉ

（式中：
Ａは、場合により１個以上のＡ’で置換されている、不飽和又は部分的に飽和の単環式又は二環式ヘテロアリール又はフェニルであり；
Ａ’は、ハロ、低級アルキル、又はオキソであり；
それぞれのＲ^１は、独立して、ハロ、ヒドロキシル低級アルキル、又は低級アルキルであり；
ｍは、０、１、又は２であり；
Ｒ^２は、メチルピラゾリルであり；
ｎは、０、又は１であり；
Ｘは、結合、ＣＨ_２、又はＮＨＣ（＝Ｏ）である）
の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。

本出願は、式Ｉ

（式中：
Ａは、場合により１個以上のＡ’で置換されている、不飽和又は部分的に飽和の単環式又は二環式ヘテロアリール又はフェニルであり；
Ａ’は、ハロ、低級アルキル、又はオキソであり；
それぞれのＲ^１は、独立して、ハロ、ヒドロキシル低級アルキル、又は低級アルキルであり；
ｍは、０、１、又は２であり；
Ｒ^２は、メチルピラゾリルであり；
ｎは、０、又は１であり；
Ｘは、ＣＨ_２、又はＮＨＣ（＝Ｏ）である）
の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。

本出願は、必要な患者に、治療上有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む、炎症状態、及び／又は自己免疫状態の処置方法を提供する。

本出願は、少なくとも１個の薬学的に許容し得る担体、賦形剤、又は希釈剤と混合された、式Ｉの化合物を含む医薬組成物を提供する。

発明の詳細な説明
定義
本明細書で用いられる語句「ａ」、又は「ａｎ」実体は、１個以上の該実体に言及する；例えば、１個の化合物は、１個以上の化合物、又は少なくとも１個の化合物に言及する。しかるが故に、用語「ａ」（又は「ａｎ」）、「１個以上」、及び「少なくとも１個」は、本明細書において互換的に用いることができる。

語句「本明細書において上で定義される通り」は、発明の概要において提供される、それぞれの群についての最も広い定義、又は最も広い請求に言及する。以下で提供される全ての他の実施態様において、それぞれの実施態様において存在することができ、かつ明確に定義されない置換基は、発明の概要において提供される最も広い定義を維持する。

本明細書で用いられる通り、請求項の移行句、又は本体中に関わらず、用語「含む」、及び「含んでいる」は、開放型の意味を有するものとして解釈されるべきである。すなわち、該用語は、語句「少なくとも有している」、又は「少なくとも含んでいる」と同義的に解釈されるべきである。方法の文脈で用いられるとき、用語「含んでいる」は、方法が、少なくとも列挙される工程を含むが、更なる工程を含んでもよいことを意味する。化合物又は組成物の文脈で用いられるとき、用語「含んでいる」は、化合物、又は組成物が、少なくとも列挙された特徴、又は成分を含むが、更なる特徴、又は成分も含み得ることを意味する。

本明細書で用いられる通り、特に具体的に示されない限り、単語「又は」は、「及び／又は」の包括的意味で用いられ、「いずれか／又は」の排他的意味で用いられない。

用語「独立して」は、同一の化合内の同一又は異なる定義を有する変数の存在又は不存と関連することなく、変数が、任意の一例において適用されることを示すために、本明細書で用いられる。故に、化合物（ここで、Ｒ''が２回出現し、「独立して、炭素、又は窒素」として定義される）において、両方のＲ''が炭素であり得るか、両方のＲ''が窒素であり得るか、又は一方のＲ''が炭素であり、他方が窒素であり得る。

任意の変数が、本発明で用いられるか、又は請求される化合物を表し、記載する任意の部分又は式において、１回より多く存在するとき、それぞれの存在でのその定義は、他の存在毎で、その定義から独立する。または、置換基、及び／又は変数の組み合わせは、かかる化合物が安定な化合物となる場合にのみ、許容可能である。

結合の端の記号「^＊」、又は結合により描かれる「⁻⁻⁻⁻⁻⁻」は、官能基、又は他の化学的部分の分子の残りの部分（分子の一部である）への結合点に言及する。故に、例えば、

である。

環系(別の頂点で結合することが反対される)に描かれる結合は、結合が、適当な環原子のいずれかに結合され得ることを示す。

本明細書に用いられる用語「場合の」、又は「場合により」は、続いて記載される現象、又は状況が、生じ得るが、生じる必要がないこと、及び記載が、現象又は状況が生じる場合、及びそれが生じない場合を含むことを意味する。例えば、「場合により置換されている」は、場合により置換されている部分が、水素原子、又は置換基を取り込み得ることを意味する。

語句「場合により、結合」は、結合が存在し得るか、又は存在し得ないこと、及び記載が、単結合、２重結合、又は３重結合を含むことを意味する。置換基が、「結合」又は「存在しない」と示されるなら、置換基に結合した原子は、直接結合される。

用語「約」は、およそ、範囲内、概略的、又は周辺を意味するために、本明細書で用いられる。用語「約」が、数字で表される範囲と一緒に用いられるとき、それは、境界を、記載される数字で表される値より上、及び下に拡大することにより、範囲を改変する。一般的に、用語「約」は、数字で表される値を、２０％の分散により、規定値より上、及び下に改変するために、本明細書で用いられる。

式Ｉの特定の化合物は、互変異性を示し得る。互変異性化合物は、２つ以上の相互変換可能な種として存在し得る。プロトン移転互変異性体は、２個の原子間で共有結合した水素原子の遊走を生じる。互変異性体は、一般的に、平衡して存在し、個々の互変異性体を単離する試みにより、通常、化学的特性及び物理的特性が、化合物の混合物と一致する、混合物が生成される。平衡の位置は、分子内の化学的特徴に依存する。例えば、多くの脂肪族アルデヒド、及びケトン、例えば、アセトアルデヒドにおいて、ケトが、優勢である一方、フェノールにおいて、エノールが優勢である。共通するプロトン移転互変異性体は、ケト／エノール（−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ−⇔−Ｃ（−ＯＨ）＝ＣＨ−）、アミド／イミド酸（−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−⇔−Ｃ（−ＯＨ）＝Ｎ−）、及びアミジン（−Ｃ（＝ＮＲ）−ＮＨ−⇔−Ｃ（−ＮＨＲ）＝Ｎ−）互変異性体を含む。後者の２つは、ヘテロアリール、及び複素環式環において特に共通し、本発明は、全ての互変異性型の化合物を包含する。

本明細書で用いられる技術用語、及び科学用語は、特に定義されない限り、本発明が属する当業者に共通して理解される意味を有する。本明細書において、当業者に公知の種々の方法論及び材料が参照される。薬理学の一般的原理を説明する標準的な仕事は、Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10^thEd., McGraw Hill Companies Inc., New York (2001)を含む。当業者に公知の任意の適当な材料、及び／又は方法は、本発明を実施する際に利用され得る。しかしながら、好ましい材料、及び方法が記載される。以下の記載及び実施例において参照される材料、試薬などは、特に示されない限り、市販の供給源から得ることができる。

本明細書に記載される定義は、化学的に関連する組合せ、例えば、「ヘテロアルキルアリール」、「ハロアルキルヘテロアリール」、「アリールアルキルヘテロシクリル」、「アルキルカルボニル」、「アルコキシアルキル」などを形成することが付け加えられ得る。用語「アルキル」が、例えば、「フェニルアルキル」、又は「ヒドロキシアルキル」において、別の用語の末尾として用いられるとき、これは、上で定義され、他の具体的に命名された基から選択される１〜２個の置換基で置換されている、アルキル基に言及することが意図される。したがって、例えば、「フェニルアルキル」は、１〜２個のフェニル置換基を有するアルキル基に言及し、これにより、ベンジル、フェニルエチル、及びビフェニルを含む。「アルキルアミノアルキル」は、１〜２個のアルキルアミノ置換基を有するアルキル基である。「ヒドロキシアルキル」は、２−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシプロピル、１−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピル、２−ヒドロキシブチル、２，３−ジヒドロキシブチル、２−（ヒドロキシメチル）、３−ヒドロキシプロピルなどを含む。したがって、本明細書で用いられる用語「ヒドロキシアルキル」は、以下で定義される、ヘテロアルキル基のサブセットを定義するために用いられる。用語−（アル）アルキルは、置換されていないアルキル、又はアルアルキル基のいずれかに言及する。用語（ヘテロ）アリール、又は（ヘタ）アリールは、アリール、又はヘテロアリール基のいずれかに言及する。

本明細書で用いられる用語「スピロシクロアルキル」は、スピロ環シクロアルキル基、例えば、スピロ［３．３］ヘプタンを意味する。本明細書で用いられる用語スピロヘテロシクロアルキルは、スピロ環ヘテロシクロアルキル、例えば、２，６−ジアザスピロ［３．３］ヘプタンを意味する。

本明細書で用いられる用語「アシル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、本明細書で定義される水素、又は低級アルキルである）の基を示す。本明細書で用いられる用語「アルキルカルボニル」は、式Ｃ（＝Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、本明細書で定義されるアルキルである）の基を示す。用語Ｃ_１−６アシルは、６個の炭素原子を含有する、基−Ｃ（＝Ｏ）Ｒに言及する。本明細書で用いられる用語「アリールカルボニル」は、式Ｃ（＝Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、アリール基である）を意味し、本明細書で用いられる用語「ベンゾイル」は、「アリールカルボニル」基（式中、Ｒはフェニルである）を意味する。

本明細書で用いられる用語「エステル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ（式中、Ｒは、本明細書で定義される低級アルキルである）の基を示す。

本明細書で用いられる用語「アルキル」は、１〜１０個の炭素原子を含有する、非分岐鎖、又は分岐鎖の飽和１価炭化水素残基を示す。用語「低級アルキル」は、１〜６個の炭素原子を含有する、直鎖又は分岐鎖の炭化水素残基を示す。．本明細書で用いられる「Ｃ_１−１０アルキル」は、１〜１０個の炭素を含む、アルキルに言及する。アルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、又はペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、及びオクチルを含む低級アルキル基を含むが、これらに限定されない。

用語「アルキル」が、別の用語の末尾で、例えば、「フェニルアルキル」、又は「ヒドロキシアルキル」において用いられるとき、これは、上で定義され、他の具体的に命名された基から選択される１〜２個の置換基で置換されている、アルキル基に言及することが意図される。したがって、例えば、「フェニルアルキル」は、基Ｒ’Ｒ''（式中、Ｒ’は、本明細書で定義される、フェニル基であり、Ｒ''は、本明細書で定義される、アルキレン基である）を示し、フェニルアルキル部分の結合点がアルキレン基上にあることを、理解する。アリールアルキル基の例は、ベンジル、フェニルエチル、３−フェニルプロピルを含むが、これらに限定されない。用語「アリールアルキル」、又は「アラルキル」は、Ｒ’が、アリール基であるこを除き、同様に解釈される。用語「（ヘタ）アリールアルキル」、又は「（ヘタ）アラルキル」は、Ｒ'が、場合により、アリール、又はヘテロアリール基であることを除き、同様に解釈される。

用語「ハロアルキル」、又は「ハロ−低級アルキル」、又は「低級ハロアルキル」は、１〜６個の炭素原子を含有する、直鎖又は分岐鎖炭化水素残基に言及し、ここで、１個以上の炭素原子が、１個以上のハロゲン原子で置換されている。

本明細書で用いられる用語「アルキレン」、又は「アルキルエニル」は、特に指定されない限り、１〜１０個の炭素原子の２価の飽和直鎖炭化水素基（例えば、（ＣＨ_２）_ｎ）、又は２〜１０個の炭素原子の分岐鎖の飽和２価炭化水素基（例えば、−ＣＨＭｅ−、又は−ＣＨ_２ＣＨ（ｉ−Ｐｒ）ＣＨ_２−）を示す。メチレンの場合を除き、アルキレン基の超原子価は、同一の原子に結合しない。アルキレン基の例は、メチレン、エチレン、プロピレン、２−メチル−プロピレン、１，１−ジメチル−エチレン、ブチレン、２−エチルブチレンを含むが、これらに限定されない。

本明細書で用いられる用語「アルコキシ」は、−Ｏ−アルキル基（式中、アルキルは、上で定義される通りである）、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、ｎ−ブチルオキシ、ｉ−ブチルオキシ、ｔ−ブチルオキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ（それらの異性体を含む）を意味する。本明細書で用いられる「低級アルコキシ」は、既に定義された「低級アルキル」基を有する、アルコキシ基を示す。本明細書で用いられる「Ｃ_１−１０アルコキシ」は、−Ｏ−アルキル（式中、アルキルは、Ｃ_１−１０である）に言及する。

用語「ＰＣｙ_３」は、３つの環状部分で３置換されている、ホスフィンに言及する。

用語「ハロアルコキシ」、又は「ハロ−低級アルコキシ」、又は「低級ハロアルコキシ」は、低級アルコキシ基（ここで、１個以上の炭素原子が、１個以上のハロゲン原子で置換されている）に言及する。

本明細書で用いられる用語「ヒドロキシアルキル」は、本明細書で定義される、アルキル基を示し、ここで、異なる炭素原子上の１〜３個の水素原子は、ヒドロキシル基により置換されている。

本明細書で用いられる用語「アルキルスルホニル」、及び「アリールスルホニル」は、式−Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ（式中、Ｒは、それぞれ、アルキル、又はアリールであり、アルキル、及びアリールは、本明細書で定義される通りである）の基に言及する。本明細書で用いられる用語「ヘテロアルキルスルホニル」は、本明細書において、式−Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ（式中、Ｒは、本明細書で定義される、「ヘテロアルキル」である）の基を示す。

本明細書で用いられる用語「アルキルスルホニルアミノ」、及び「アリールスルホニルアミノ」は、式−ＮＲ'Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ（式中、Ｒは、それぞれ、アルキル、又はアリールであり、Ｒ'は、水素、又はＣ_１−３アルキルであり、アルキル、及びアリールは、本明細書で定義される通りである）の基に言及する。

本明細書で用いられる用語「シクロアルキル」は、３〜８個の炭素原子を含有する、飽和炭素環、すなわち、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、又はシクロオクチルに言及する。本明細書で用いられる「Ｃ_３−７シクロアルキル」は、炭素環中に３〜７個の炭素を含む、シクロアルキルに言及する。

本明細書で用いられる用語「カルボキシ−アルキル」は、アルキル部分に言及し、ここで、１個の水素原子が、カルボキシルで置換されており、ヘテロアルキル基の結合点が、炭素原子を介することを理解する。用語「カルボキシ」、又は「カルボキシル」は、−ＣＯ_２Ｈ部分に言及する。

本明細書で用いられる用語「ヘテロアリール」、又は「ヘテロ芳香族」は、少なくとも１個の芳香族を有する５〜１２個の環原子の単環又は二環基、又は環自体が４〜８個の原子を含有し、１個以上のＮ、Ｏ、又はＳヘテロ原子を取り込み、残りの環原子が炭素である、部分的に不飽和の環を意味し、ヘテロアリール基の結合点は、芳香族上、又は部分的に不飽和の環上であることを理解する。当業者に周知なように、ヘテロアリール環は、その全ての炭素対応物より少ない芳香族特徴を有する。したがって、本発明の目的のため、ヘテロアリール基は、同定の芳香族特徴を有することのみが必要である。ヘテロアリール部分の例は、５〜６個の環原子、及び１〜３個のヘテロ原子を有する、単環式芳香族複素環を含み、これは、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、オキサジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、４，５−ジヒドロ−オキサゾリル、５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサゾリル、イソオキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、トリアゾリン、チアジアゾール、及びオキサジアキソリン（場合により、ヒドロキシ、シアノ、アルキル、アルコキシ、チオ、低級ハロアルコキシ、アルキルチオ、ハロ、低級ハロアルキル、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、ハロゲン、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、及びジアルキルアミノアルキル、ニトロ、アルコキシカルボニル、及びカルバモイル、アルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アルキルカルボニルアミノ、及びアリールカルボニルアミノから選択される、１つ以上、好ましくは、１又は２つの置換基で置換され得る）を含むが、これらに限定されない。二環式部分の例は、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾフリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾオキサゾール、ベンゾイソオキサゾール、ベンゾチアゾール、ナフチリジニル、５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，６］ナフチリジニル、及びベンゾイソチアゾールを含むが、これらに限定されない。二環式部分は、場合により、いずれかの環上で置換され得るが、結合点は、ヘテロ原子を含有する環上にある。

本明細書で用いられる用語「ヘテロシクリル」、「ヘテロシクロアルキル」、又は「ヘテロサイクル」は、特に指定されない限り、環毎に３〜８個の原子のスピロ環を含む、１個以上の環、好ましくは、１〜２個の環を含み、１個以上の環ヘテロ原子（Ｎ、Ｏ、又はＳ（Ｏ）_０−２から選択される）を取り込み、場合により、ヒドロキシ、オキソ、シアノ、低級アルキル、低級アルコキシ、低級ハロアルコキシ、アルキルチオ、ハロ、低級ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、ニトロ、アルコキシカルボニル、アミノ、アルキルアミノ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アルキルアミノスルホニル、アリールアミノスルホニル、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、及びそのイオン形から選択される、１個以上、好ましくは、１個又は２個の置換基で置換され得る、１価の飽和環基を示す。ヘテロ環基の例は、モルホリニル、ピペラジニル、ピペリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ヘキサヒドロアゼピニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、イソオキサゾリジニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、キヌクリジニル、及びイミダゾリニル、並びにそのイオン形を含むが、これらに限定されない。例はまた、二環式、例えば、３，８−ジアザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン、２，５−ジアザ−ビシクロ［２．２．２］オクタン、又はオクタヒドロ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジンであってもよい。

Ｂｔｋの阻害剤
本出願は、式Ｉ

（式中：
Ａは、場合により１個以上のＡ’で置換されている、不飽和又は部分的に飽和の単環式又は二環式ヘテロアリール又はフェニルであり；
Ａ’は、ハロ、低級アルキル、又はオキソであり；
それぞれのＲ^１は、独立して、ハロ、ヒドロキシル低級アルキル、又は低級アルキルであり；
ｍは、０、１、又は２であり；
Ｒ^２は、メチルピラゾリルであり；
ｎは、０、又は１であり；
Ｘは、結合、ＣＨ_２、又はＮＨＣ（＝Ｏ）である）
の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。

本出願は、式Ｉ

（式中：
Ａは、場合により１個以上のＡ’で置換されている、不飽和又は部分的に飽和の単環式又は二環式ヘテロアリール又はフェニルであり；
Ａ’は、ハロ、低級アルキル、又はオキソであり；
それぞれのＲ^１は、独立して、ハロ、ヒドロキシル低級アルキル、又は低級アルキルであり；
ｍは、０、１、又は２であり；
Ｒ^２は、メチルピラゾリルであり；
ｎは、０、又は１であり；
Ｘは、ＣＨ_２、又はＮＨＣ（＝Ｏ）である）
の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。

更に、本明細書で開示される具体的な残基Ｘ、Ａ、Ａ’、Ｒ^１、及びＲ^２に関する全実施態様が、本明細書で開示される別の残基Ｘ、Ａ、Ａ’、Ｒ^１、及びＲ^２に関する任意の他の実施態様と組み合わされ得ることは、理解されるべきである。

本出願は、式Ｉ（式中、ＸはＣＨ_２である）の化合物を提供する。

本出願は、式Ｉ（式中、ｎは１である）の化合物を提供する。

本出願は、式Ｉ（式中、ｎは０である）の化合物を提供する。

本出願は、式Ｉ（式中、ＸはＣＨ_２であり、ｎは１である）の化合物を提供する。

本出願は、式Ｉ（式中、ＸはＣＨ_２であり、ｎは０である）の化合物を提供する。

本出願は、式Ｉ（式中、ＸはＮＨＣ（＝Ｏ）であり、ｎは０である）の化合物を提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、ｍは１である）の化合物のいずれかを提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、Ｒ^１はＦである）の化合物のいずれかを提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、Ｒ^１はヒドロキシル低級アルキルである）の化合物のいずれかを提供する。

本出願は、式Ｉ（式中、ｍは２である）の化合物を提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、両方のＲ^１はＦであるか、一方のＲ^１はＦであり、他方はヒドロキシル低級アルキルである）の化合物を提供する。

本出願は、式Ｉ（式中、ｍは０である）の化合物を提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、Ａは、場合により１個以上のＡ’で置換されている、不飽和又は部分的に飽和の単環式ヘテロアリールである）の化合物のいずれかを提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、Ａは、場合により１個以上のＡ’で置換されている、不飽和又は部分的に飽和の二環式ヘテロアリールである）の化合物のいずれかを提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、Ａは、Ｆ、オキソ、及びtert−ブチルで置換されている）の化合物を提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、Ｘ＝ＣＨ_２、ｎは０である）の化合物のいずれかを提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、Ｘ＝ＣＨ_２、ｎは０であり、Ａは、場合により１個以上のＡ’で置換されている、不飽和又は部分的に飽和の二環式ヘテロアリールである）の化合物のいずれかを提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、Ｘ＝ＣＨ_２、ｎは０であり、Ａは、場合により１個以上のＡ’で置換されている、不飽和又は部分的に飽和の二環式ヘテロアリールであり、Ａ’は、低級アルキル、ハロ、又はオキソである）の化合物のいずれかを提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、Ｘ＝ＣＨ_２、ｎは０であり、Ａは、場合により１個以上のＡ’で置換されている、不飽和又は部分的に飽和の二環式ヘテロアリールであり、Ａ’は、tert−ブチル、Ｆ、又はオキソである）の化合物のいずれかを提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、Ｘ＝ＣＨ_２、ｎは０であり、Ａは、場合により１個以上のＡ’で置換されている、不飽和又は部分的に飽和の二環式ヘテロアリールであり、Ａ’は、tert−ブチル、Ｆ、又はオキソであり、Ｒ^１は、ハロ、又はヒドロキシル低級アルキルである）の化合物のいずれかを提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、Ｘ＝ＣＨ_２、ｎは０であり、Ａは、場合により１個以上のＡ’で置換されている、不飽和又は部分的に飽和の二環式ヘテロアリールであり、Ａ’は、tert−ブチル、Ｆ、又はオキソであり、Ｒ^１は、Ｆ、又はヒドロキシメチルである）の化合物のいずれかを提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、Ｘ＝ＣＨ_２、ｎは０であり、Ａは、場合により１個以上のＡ’で置換されている、不飽和又は部分的に飽和の二環式ヘテロアリールであり、Ａ’は、tert−ブチル、Ｆ、又はオキソであり、Ｒ^１は、Ｆ、又はヒドロキシメチルであり、ｍ＝１）の化合物のいずれかを提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、Ｘ＝ＣＨ_２、ｎは０であり、Ａは、場合により１個以上のＡ’で置換されている、不飽和又は部分的に飽和の二環式ヘテロアリールであり、Ａ’は、tert−ブチル、Ｆ、又はオキソであり、Ｒ^１は、Ｆ、又はヒドロキシメチルであり、ｍ＝０、又は２）の化合物のいずれかを提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、Ｘ＝ＣＨ_２、ｎは０であり、Ａは、場合により１個以上のＡ’で置換されている、フタラジンであり、Ａ’は、tert−ブチル、Ｆ、又はオキソであり、Ｒ^１は、Ｆ、又はヒドロキシメチルであり、ｍ＝１）の化合物のいずれかを提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、Ｘは、結合であり、ｎは０であり、Ａは、場合により１個以上のＡ’で置換されている、不飽和又は部分的に飽和の二環式ヘテロアリールであり、Ａ’は、低級アルキル、ハロ、又はオキソであり、Ｒ^１は、Ｆ、又はヒドロキシル低級アルキルであり、ｍ＝１）の化合物のいずれかを提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、Ｘは結合であり、ｎは０であり、Ａは、場合により１個以上のＡ’で置換されている、不飽和又は部分的に飽和の二環式ヘテロアリールであり、Ａ’は、tert−ブチル、Ｆ、又はオキソであり、Ｒ^１は、Ｆ、又はヒドロキシメチルであり、ｍ＝１）の化合物のいずれかを提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、Ｘは結合であり、ｎは０であり、Ａは、場合により１個以上のＡ’で置換されている、フタラジンであり、Ａ’は、tert−ブチル、Ｆ、又はオキソであり、Ｒ^１は、Ｆ、又はヒドロキシメチルであり、ｍ＝１）の化合物のいずれかを提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、Ｘ＝ＮＨＣ（＝Ｏ）、ｎは０であり、Ａは、場合により１個以上のＡ’で置換されている、フェニルであり、Ａ’は、低級アルキル、ハロ、又はオキソであり、Ｒ^１は、低級アルキルであり、ｍ＝１）の化合物のいずれかを提供する。

本出願は、上記、式Ｉ（式中、Ｘ＝ＮＨＣ（＝Ｏ）、ｎは０であり、Ａは、場合により１個以上のＡ’で置換されている、フェニルであり、Ａ’は、tert−ブチル、Ｆ、又はオキソであり、Ｒ^１はメチルであり、ｍ＝１）の化合物のいずれかを提供する。

本出願は、
６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン；
６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−フルオロ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン；
６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−フェニル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン；
６−tert−ブチル−２−［２，６−ジフルオロ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン；
６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−ヒドロキシメチル−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン；
６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛２−フルオロ−４−［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル］−ベンジル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オン；
４−tert−ブチル−Ｎ−［２−メチル−３−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−フェニル］−ベンズアミド；
６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［３−ヒドロキシメチル−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン；
６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−フルオロ−５−ヒドロキシメチル−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン；及び
２−tert−ブチル−５−｛２−フルオロ−４−［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル］−ベンジル｝−４，５−ジヒドロ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−６−オン
からなる群より選択される、式Ｉの化合物を提供する。

本出願は、必要な患者に、治療上有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む、炎症状態、及び／又は自己免疫状態の処置方法を提供する。

本出願は、必要な患者に、治療上有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む、関節リウマチの処置方法を提供する。

本出願は、必要な患者に、治療上有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む、喘息の処置方法を提供する。

本出願は、式Ｉの化合物を含む医薬組成物を提供する。

本出願は、少なくとも１個の薬学的に許容し得る担体、賦形剤、又は希釈剤と混合された、式Ｉの化合物を含む医薬組成物を提供する。

本出願は、炎症性疾患の処置用医薬の製造における、式Ｉの化合物の使用を提供する。

本出願は、自己免疫障害の処置用医薬の製造における、式Ｉの化合物の使用を提供する。

本出願は、関節リウマチの処置用医薬の製造における、式Ｉの化合物の使用を提供する。

本出願は、喘息の処置用医薬の製造における、式Ｉの化合物の使用を提供する。

本出願は、炎症状態、及び／又は自己免疫状態の処置のための、上述の化合物の使用を提供する。

本出願は、関節リウマチの処置のための、上述の化合物の使用を提供する。

本出願は、喘息の処置のための、上述の化合物の使用を提供する。

本出願は、本明細書に記載される化合物、方法、又は組成物を提供する。

化合物、及び調製
本発明により包含され、本発明の範囲内にある、代表的な化合物の例は、以下の表に提供される。以下のこれらの実施例及び調製は、当業者が、本発明をより明確に理解し、実施することを可能にするために提供される。これらは、本発明の範囲を制限すると見なされるべきではなく、単にその説明及び代表であると見なされるべきである。

一般的に、本出願に用いられる命名法は、ＩＵＰＡＣ系統的命名法を行うためのBeilstein InstituteコンピューターシステムであるＡＵＴＯＮＯＭＴＭ ｖ．４．０に基づく。表される構造と該構造に付与される名称との間に矛盾があれば、表される構造が、より重みを与えられるべきである。加えて、構造の立体化学、又は構造の一部が、例えば、太字、又は破線で示されないなら、構造、又は構造の一部は、その全ての立体異性体を包含するものとして解釈されるできである。

表Ｉは、一般式Ｉに記載の化合物の例を表す。

一般的合成スキーム
本発明の化合物は、任意の従来手段により調製され得る。これらの化合物の合成に適した方法は、実施例において提供される。一般的に、本発明の化合物は、以下のスキームに従い調製され得る。

式６（式中、Ｒ１は、式Ｉの類で上述された通りである）の化合物は、スキーム１に従い、調製され得る。式１（式中、Ｘは、脱離基、例えば、臭化物、又は塩化物である）の化合物、及び式２のフタラジノン誘導体（Berthel, S等、米国特許第２０１００２２２３２５号、段落１３９に記載される通り、調製され得る）で出発する、アルキル化反応は、式３のブロモベンゼン誘導体を与える。式４のボロン酸とのパラジウム触媒カップリングは、式５のビアリールを与える。次に、メトキシ基の切断は、式６の本発明の化合物を与える。

フタラジノン２のアルキル化は、フタラジノンを強塩基、例えば、水素化ナトリウムで処理し、次に、得られた陰イオンを式１のハロゲン化ベンジル誘導体で処理することにより、行われ得る。反応は、陰イオンの生成のため、不活性溶媒、例えば、ジメチルホルムアミド中、温度約７０℃で、及びアルキル化反応のため、およそ室温で便宜的に行われる。

ビアリール中間体５を与えるためのブロモベンゼン誘導体３と２−メトキシ−ピリジン−４−ボロン酸（４）との間のクロスカップリング反応は、パラジウム触媒供給源、例えば、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）、又はトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）、及びホスフィン配位子、例えば、トリシクロヘキシルホスフィンの存在下で行われ得る。あるいは、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）が、パラジウム触媒とホスフィン配位子の両方として用いられ得る。反応は、塩基、例えば、酢酸カリウム、若しくは炭酸ナトリウム、又は炭酸カリウムの存在下で行われる（Chemical Reviews 1995, 95, 2457-2483）。反応は、不活性溶媒、例えば、ＤＭＦ、若しくはジオキサン水溶液、又はジメトキシエタンとエタノールの混合物中で、温度 ９０℃〜１５０℃、反応時間 １〜数時間の従来の加熱、又はマイクロ波加熱のいずれかを用いて、行われ得る。

いくつかの異なる反応条件が、式５の化合物中のメトキシ基の切断のため用いられ得る。例えば、反応は、式５のメトキシピリジンを塩化トリメチルシリル、及びヨウ化ナトリウムと、溶媒、例えば、アセトニトリル中で数時間加熱することにより、便宜的にもたらされ得る。この反応のため用いられ得る具体的条件の例は、文献、例えば、Litchfield, J. et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2010, 20, 6262-6267；Ando, M. et al. Bioorg. Med. Chem. 2009, 17, 6106-6122；又はBigg, D等、米国特許第２００１００００５２１号において見出され得る。反応はまた、Van Eis, M.等、国際公開公報第２００８１２２６１４号、第３５頁；Leznoff, C. C. et. al. J. Heterocycl. Chem.1985, 22, 145-147;及びHadida Ruah, S.、国際公開公報第２００８１４１１１９号、第１４３頁に記載される通り、式５のメトキシピリジンを、ヨウ化トリメチルシリルと、クロロホルム、又はジクロロメタン、又はアセトニトリル中、温度 およそ室温〜約５０℃で処理することにより、もたらされ得る。反応はまた、Williams, T. M.等、米国特許第５，５２７，８１９号、実施例７６に記載される通り、式５の化合物を、三臭化ホウ素と、ジクロロメタン中、約０℃で処理することにより、行われ得る。反応はまた、Berdini, V.等、２０１００１２０７６１、第７５頁；及びMcElroy W. T. and DeShong, P. Tetrahedron 2006, 62, 6945-6954に記載される通り、式５の化合物を、三臭化リンと、１，２−ジクロロエタン中、還流温度で処理することにより、行われ得る。あるいは、反応は、Guzzo, P.等、米国特許第２００９００８２３５９号、第６１頁；及びCheng, D.等、国際公開公報第２０１２００３１８９号、第９８頁に記載される通り、式５の化合物を、３M ＨＣｌ、又は１０M ＨＣｌ中、高温、例えば、約１００℃〜１２０℃で処理することにより、行われ得る。更なる代替として、反応は、Andrews, M. J. I等、国際公開公報第２００７１３８０７２号、第１０８頁；又はWallberg, A.等、米国特許第２００７０２５９８６０号、実施例３６．１に記載される通り、式５の化合物を、ピリジン塩酸塩と、何も加えずに、又は溶媒、例えば、ＤＭＦ、又は水中、温度 約１００℃〜約１５０℃で処理することにより、行われ得る。

式１１の本発明の化合物は、スキーム２に示される通り、作成され得る。この過程により、式３のブロモベンゼン誘導体は、２，６−ジクロロ−ピリジン−４−ボロン酸（７）とパラジウム触媒カップリング反応して、式８のジクロロピリジン誘導体を与える。次に、化合物８は、１−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール（９）とパラジウム触媒カップリング反応して、式１０の化合物を与える。次に、メトキシ基の切断が、式１１の本発明の化合物を与える。

ビアリール中間体８を与えるためのブロモベンゼン誘導体３と２，６−ジクロロ−ピリジン−４−ボロン酸（７）との間のクロスカップリング反応は、パラジウム触媒供給源、例えば、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）、又はトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）、及びホスフィン配位子、例えば、トリシクロヘキシルホスフィンの存在下で行われ得る。あるいは、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）は、パラジウム触媒、及びホスフィン配位子の両方として用いられ得る。反応は、塩基、例えば、酢酸カリウム、又は炭酸ナトリウム、又は炭酸カリウムの存在下で行われる（Chemical Reviews 1995, 95, 2457-2483）。反応は、不活性溶媒、例えば、ＤＭＦ、若しくはジオキサン水溶液、又はジメトキシエタンとエタノールの混合物中で、温度 ９０℃〜１５０℃、反応時間 １〜数時間での従来の加熱、又はマイクロ波加熱のいずれかを用いて、生じ得る。

中間体１０を与えるためのジクロロピリジン誘導体８と１−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール（９）との間のクロスカップリング反応は、中間体８の調製について記載されるものと同様の条件を用いて、行われ得る。すなわち、式８の化合物は、１−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール（９）と、パラジウム触媒供給源、例えば、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）、又はトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）、及びホスフィン配位子、例えば、トリシクロヘキシルホスフィンの存在下で処理され得る。あるいは、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）は、パラジウム触媒、及びホスフィン配位子の両方として用いられ得る。反応は、塩基、例えば、酢酸カリウム、又は炭酸ナトリウム、又は炭酸カリウムの存在下で行われる（Chemical Reviews 1995, 95, 2457-2483）。反応は、不活性溶媒、例えば、ＤＭＦ、若しくはジオキサン水溶液、又はジメトキシエタンとエタノールの混合物中で、温度 ９０℃〜１５０℃、反応時間 １時間〜数時間の従来の加熱、又はマイクロ波加熱のいずれかを用いて、生じ得る。

式１０のメトキシピリジン誘導体中のメトキシ基の切断は、任意の従来方法、例えば、式５の化合物中のメトキシ基の切断について列挙されたものを用いて、行われ得る。例えば、反応は、式１０の化合物を、１０M ＨＣｌで、高温、例えば、約１００℃〜１２０℃で処理することにより、便宜的に行われ得る。

式１６の本発明の化合物は、スキーム３に示される通り、生成され得る。この方法により、式２の化合物は、２−ブロモ−６−フルオロベンズアルデヒド（１２）と求核置換反応して、式１３の中間体を与える。アルデヒドの還元は、アルコール１４を与える。これは、２−メトキシ−ピリジン−４−ボロン酸（４）とパラジウム触媒カップリングして、ビアリール中間体１５を与える。メトキシ基の切断は、式１６の本発明の化合物を与える。

式２のフタラジノンの式１２のベンズアルデヒド誘導体との反応は、フタラジノンを、フルオロベンズアルデヒドと、塩基、例えば、炭酸セシウムの存在下、更に、メトキシトリメチルシランの存在下、不活性溶媒、例えば、ＤＭＦ中、温度 約５０℃〜約８０℃で、数時間処理することにより、便宜的に行われ得る。

式１４のアルコールを与えるための式１３のアルデヒドの還元は、有機化学の分野で周知である反応、及び多くの可能性のある条件が存在するものである。この変換のために用いられ得る試薬の例は、Larock, R. C. Comprehensive Organic Transformations John Wiley & Sons Inc. NY 1999, pp. 1075以下において見出され得る。例えば、反応は、式１３の化合物を、水素化ホウ素ナトリウムと、不活性溶媒、例えば、アルコール（例えば、メタノール、又はエタノール、又はイソプロパノール）、又はかかるアルコールの補助溶媒との混合物、例えば、ジクロロメタン中、温度 約０℃〜およそ室温で処理することにより、便宜的にもたらされ得る。

ビアリール中間体１５を与えるための、ブロモベンゼン誘導体１４と２−メトキシ−ピリジン−４−ボロン酸（４）との間のクロスカップリング反応は、パラジウム触媒供給源、例えば、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）、又はトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）、及びホスフィン配位子、例えば、トリシクロヘキシルホスフィンの存在下で行われ得る。あるいは、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）は、パラジウム触媒とホスフィン配位子の両方として用いられ得る。反応は、塩基、例えば、酢酸カリウム、又は炭酸ナトリウム、又は炭酸カリウムの存在下で行われる（Chemical Reviews 1995, 95, 2457-2483）。反応は、不活性溶媒、例えば、ＤＭＦ、若しくはジオキサン水溶液、又はジメトキシエタンとエタノールの混合物中で、温度 ９０℃〜１５０℃、反応時間 １〜数時間の従来の加熱、又はマイクロ波加熱のいずれかを用いることにより、生じ得る。

いくつかの異なる反応条件が、式６の化合物の調製について上で概説された通り、式１５の化合物中のメトキシ基の切断のために用いられ得る。

式２２の化合物は、スキーム４に示される通り、調製され得る。この方法により、４−ブロモ−２−メトキシ−ピリジン（１７）は、２−メトキシ−ピリジン−４−ボロン酸（４）とのパラジウム触媒クロスカップリング反応し、式１８の得られた化合物中のニトロ基を還元して、アニリン１９を与える。式２０のカルボン酸とのアニリンのアシル化、続いて、メトキシ基の切断は、式２２の本発明の化合物を与える。

ビアリール中間体１８を与えるための、４−ブロモ−２−メトキシ−ピリジン（１７）と２−メトキシ−ピリジン−４−ボロン酸（４）との間のクロスカップリング反応は、パラジウム触媒供給源、例えば、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）、又はトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）、及びホスフィン配位子、例えば、トリシクロヘキシルホスフィンの存在下で行われ得る。あるいは、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）は、パラジウム触媒とホスフィン配位子の両方として用いられ得る。反応は、塩基、例えば、酢酸カリウム、又は炭酸ナトリウム、又は炭酸カリウムの存在下で行われる（Chemical Reviews 1995, 95, 2457-2483）。反応は、不活性溶媒、例えば、ＤＭＦ、若しくはジオキサン水溶液、又はジメトキシエタンとエタノールの混合物中で、温度 ９０℃〜１５０℃、反応時間１時間〜数時間の従来の加熱、又はマイクロ波加熱のいずれかを用いて、生じ得る。

式１８の化合物中のニトロ基の還元は、有機化学の分野の当業者に周知の様々な方法を用いて、もたらされ得る。これらの方法の多くが、Larock, R. C. Comprehensive Organic Transformations John Wiley & Sons Inc. NY 1999, pp. 823以下に概説される。１つの便宜的アプローチは、式１８の化合物を、水素ガスで、貴金属触媒、例えば、パラジウム炭素の存在下、溶媒、例えば、アルコール（例えば、メタノール、又はエタノール）中、圧力 水素約１〜３気圧で、およそ室温で処理することである。

４−tert−ブチル−安息香酸（２０）の式１９のアニリン誘導体とのカップリングは、有機化学の分野で周知の方法を用いて、達成され得る。かかる変換をもたらす方法は、Han, S.-Y. and Kim, Y.-A. Tetrahedron 2004, 60, 2447-2467、より最近では、El-Faham, A. and Albericio, F. Chem. Rev. 2011, 111, 6557-6602に概説される。例えば、反応は、式１９の化合物を、式２０の化合物と、多数のカップリング剤のうちの１つ、触媒、例えば、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、又は１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール、及び塩基、例えば、ピリジン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、又はトリエチルアミンの存在下、不活性溶媒、例えば、有機塩素化合物（例えば、ジクロロメタン）、又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、又はＮ−メチルピロリジノン中、温度 約０℃〜およそ室温、好ましくは、およそ室温で処理することにより、便宜的に行われ得る。用いられ得るカップリング剤の例は、ＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチル−アミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスファート）；ＢＯＰ−Ｃｌ（Ｎ，Ｎ'−ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）−ホスフィン酸クロリド）；ＤＣＣ（Ｎ，Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド）；ＤＩＣ（Ｎ，Ｎ'−ジイソプロピルカルボジイミド）；ＥＤＣ（１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミドハイドロクロライド）；ＦＤＰＰ（ペンタフルオロフェニルジフェニルホスフィナート）；ＨＡＴＵ（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート）；ＨＢＴＵ（Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート）；ＰｙＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリ（ピロリジノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスファート）；ＰｙＢｒｏＰ（ブロモトリ（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート）；及びＴＳＴＵ（２−スクシンイミド−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート）を含む。

いくつかの異なる反応条件は、式６の化合物の調製のため上で概説される通り、式２１の化合物中のメトキシ基の切断のため、用いられ得る。

式３４（式中、Ｒ１は、フッ素、又は水素のいずれかである）の対象の化合物は、スキーム５により調製され得る。カルバメート２３で出発する、ビス（ピナコラト）ジボロン２４とのパラジウム触媒ホウ素化反応は、ボロン酸エステル中間体２５を与える。２５と２，６−ジクロロ−４−ヨードピリジン７のクロスカップリング反応は、ビアリール中間体２６を与える。２６のナトリウムメトキシドでの処理は、メトキシ置換中間体２７を与える。２７と１−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール（９）のクロスカップリング反応は、２８のタイプの中間体を生成する。アミン２９を与えるための２８中のｂｏｃ保護基の除去、続く中間体３０とのカップリングは、エステル３１を与える。酸３２を与えるためのエステルの加水分解、続く環化は、最後の中間体、ラクタム３３を与える。次に、メチルエーテルの切断は、式３４の本発明の化合物を与える。

カルバメート２３のパラジウム触媒ホウ素化反応は、ビス（ピナコラト）ジボロン２４、適当なパラジウム触媒供給源、例えば、１，１'−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ＩＩ）ジクロライド、及び酢酸カリウムを用いて生じ得る（ジャーナル、Organic Chemistry 1995, 60, 7508-7510）。反応は、適当な溶媒、例えば、ジオキサン、ＤＭＦ、又はＮＭＰ中で、温度 ９０℃〜１５０℃、反応時間 １〜数時間の従来の加熱、又はマイクロ波加熱のいずれかを用いて、進められ得る。

ビアリール中間体２６を与えるための、ボロン酸エステル２５と２，６−ジクロロ−４−ヨードピリジン（７）との間のクロスカップリング反応は、パラジウム触媒供給源、例えば、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、及び塩基、例えば、酢酸カリウムの存在下で行われ得る（Chemical Reviews 1995, 95, 2457-2483）。反応は、不活性溶媒、例えば、ＤＭＦ中、温度 ９０℃〜１５０℃、反応時間 １〜数時間の従来の加熱、又はマイクロ波加熱のいずれかを用いて、生じ得る。

中間体２６のメチルエーテル２７への変換は、ナトリウムメトキシドの存在下、メタノール中で生じ得る。反応は、６５℃で、数時間進み得る。

中間体２８を与えるための、中間体２７と１−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール（９）との間のクロスカップリング反応は、パラジウム触媒供給源、例えば、テトラキス−（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、及び塩基、例えば、炭酸カリウムの存在下で行われ得る（Chemical Reviews 1995, 95, 2457-2483）。反応は、不活性溶媒、例えば、ＤＭＦ中で、温度 ９０℃〜１５０℃、反応時間 １〜数時間の従来の加熱、又はマイクロ波加熱のいずれかを用いて、生じ得る。

１級アミン２９を与えるための、２８中のｂｏｃ保護基の除去は、過剰の酸、例えば、トリフルオロ酢酸、及び適当な溶媒、例えば、ジクロロメタンを用いて、生じ得る。反応は、室温で、反応時間 数分〜数時間、進み得る。

アミン中間体２９とカルボン酸３０との間の縮合反応は、適当なアミドカップリング試薬、例えば、ＨＡＴＵの存在下、アミン塩基、例えば、トリエチルアミン、又はヒューニッヒ塩基を用いて、生じ得る（Chemical Reviews 2011, 111, 6557-6602）。反応は、不活性溶媒、例えば、ジクロロメタン、又はＤＭＦ中、室温で、反応時間 １〜数時間生じ得る。カルボン酸３０は、Wang, X等、国際公開公報第２０１２０３０９９０号、第５２〜５３頁に記載の方法に従い、作成され得ることに注意されたい。

式３１の化合物中のエステルの加水分解は、エステルを、アルカリ金属水酸化物、例えば、水酸化ナトリウム、又は水酸化リチウムで、不活性溶媒、例えば、ＴＨＦ水溶液、又はＴＨＦ、メタノールと水の混合物中、温度 約０℃〜約６０℃で処理することにより、便宜的に行われ得る。

式３３のラクタムを与えるための、式３２のアミノ酸の環化は、式３２のアミノ酸を、カップリング剤、例えば、ＰＹＢＯＰ、又はＨＢＴＵ、又はＥＤＣで、不活性溶媒、例えば、ＤＭＦ中、塩基、例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、又はピリジンの存在下、およそ室温で数時間処理することにより、便宜的にもたらされる。

いくつかの異なる反応条件が、式６の化合物の調製について上で概説された通り、式３３の化合物中のメトキシ基の切断のために用いられ得る。例えば、式３３の化合物は、塩化トリメチルシリル、及びヨウ化ナトリウムで、溶媒、例えば、アセトニトリル中、約８０℃で数時間処理されて、式３４の対象の化合物を提供する。

多くの臭化ベンジル、及び式１の塩化ベンジルは、市販されている。多くの他のものが公知であり、文献に開示されているか、又は以下の実施例において記載される手順を用いて、調製され得る。更に他のものが、この種の他の化合物の調製についての文献において開示される手順、例えば、スキーム６に表される手順を用いて、調製され得る。

例えば、式１（式中、Ｘは臭素を表す）の化合物は、式３５（式中、Ｙは水素を表す）の化合物を、Ｎ−ブロモスクシンイミド、又は３，３−ジメチル−Ｎ，Ｎ'−ジブロモヒダントインで、不活性溶媒、例えば、ハロゲン化アルカン（例えば、四塩化炭素）、又はアセトニトリル中、場合により、更に、触媒、例えば、アゾビス（イソブチロニトリル）、又は過酸化ベンゾイルの存在下、適温、便宜的には、溶媒の沸点、場合により、更に、光供給源の存在下で処理することにより；又は式３５（式中、Ｙは水素を表す）の化合物を、臭素で、不活性溶媒、例えば、水と芳香族炭化水素（例えば、ベンゼン）、又はハロゲン化アルカン（例えば、クロロホルム）の混合物中、白熱灯での照射下で処理することにより、調製され得る。式１（式中、Ｘは塩素を表す）の化合物は、式３５（式中、Ｙは水素を表す）の化合物を、Ｎ−クロロスクシンイミド、又は塩化スルフリルで、不活性溶媒、例えば、ハロゲン化アルカン（例えば、四塩化炭素）、又はアセトニトリル中、場合により、更に、触媒、例えば、アゾビス（イソブチロニトリル）、又は過酸化ベンゾイルの存在下、適当な温度、便宜的には、溶媒の沸点で、場合により、更に、光供給源の存在下で処理することにより；又は式３５（式中、Ｙは水素を表す）の化合物を、塩素と、不活性溶媒、例えば、水と芳香族炭化水素（例えば、ベンゼン）、又はハロゲン化アルカン（例えば、クロロホルム、又は四塩化炭素）の混合物中、白熱灯での照射下で処理することにより、調製され得る。

式１（式中、Ｘは臭素を表す）の化合物は、式３５（式中、ＹはＯＨを表す）の化合物を、三臭化リン、又はＮ−ブロモスクシンイミドとトリフェニルホスフィンの混合物で、不活性溶媒、例えば、ハロゲン化アルカン（例えば、塩化メチレン、又は四塩化炭素）中、温度 約０℃〜溶媒の沸点、便宜的には、約０℃で処理することにより、調製され得る。式１（式中、Ｘは塩素を表す）の化合物は、式３５（式中、ＹはＯＨを表す）の化合物を、塩化チオニル、又はＮ−クロロスクシンイミドとトリフェニルホスフィンの混合物で、不活性溶媒、例えば、ハロゲン化アルカン（例えば、塩化メチレン、又は四塩化炭素）中、温度 約０℃〜溶媒の沸点、便宜的には、約０℃で処理することにより、調製され得る。

式１（式中、Ｒ１は、ヒドロキシメチル基を表す）の化合物（例えば、式３８の化合物）はまた、対応するカルボン酸、又はカルボン酸エステルから便宜的に調製され得、いくつかの場合で、アルコールより容易に市販で入手できる。スキーム６は、式３８の中間体を、式３６（式中、Ｒ２は水素を表す）のカルボン酸、又は式３６（式中、Ｒ２は、低級アルキル、例えば、メチルを表す）のカルボン酸エステルから調製するために用いられ得る方法を示す。スキーム６に概説される方法により、式３６の出発材料が、臭素化されて、式３７の中間体を与え、次に、後者が還元されて、式３８の中間体を与える。

式３６の化合物は、式３７のブロモメチル誘導体に、式３５の化合物の式１（式中、Ｘは臭化物を表す）の化合物への変換について上で概説された条件の１つを用いて、便宜的に変換される。例えば、式３６の化合物は、Ｎ−ブロモスクシンイミドで、アゾビス（イソブチロ）ニトリル、又は過酸化ベンゾイルの存在下、溶媒、例えば、アセトニトリル、又は四塩化炭素中、溶媒の還流温度で、数時間処理され得る。

式３７（式中、Ｒ２は水素を表す）の中間体は、これを、還元剤、例えば、ボラン−メチルスルフィド複合体で、テトラヒドロフラン中、約０℃で数時間処理することにより、式３８のヒドロキシメチル誘導体に、変換され得る。式３７（式中、Ｒ２は、低級アルキル、例えば、メチルを表す）の中間体は、これを、還元剤、例えば、水素化ジイソブチルアルミニウムで、溶媒、例えば、トルエン中、約０℃で数時間処理することにより、式３８のヒドロキシメチル誘導体に変換され得る。

医薬組成物及び投与
本発明の化合物は、多種多様な経口投与投薬形態、及び担体に製剤化され得る。経口投与は、錠剤、被覆錠剤、ドラジェ、硬ゼラチンカプセル剤及び軟ゼラチンカプセル剤、液剤、乳剤、シロップ剤、又は懸濁剤の形態であり得る。本発明の化合物は、他の投与経路のうち、継続（静脈内点滴）局所非経口、筋肉内、静脈内、皮下、経皮（透過増強剤を含み得る）、口腔、経鼻、吸入、及び坐剤投与を含む、他の投与経路により投与されるとき、有効である。好ましい投与方法は、一般的に、苦痛の程度、及び有効成分に対する患者の応答により調節され得る、便宜的な１日投薬処方計画を用いた経口である。

本発明の１つの化合物又は複数の化合物、並びにその薬学的に使用し得る塩は、１個以上の従来の賦形剤、担体、又は希釈剤と一緒に、医薬組成物、及び単位投薬形態に入れられてもよい。医薬組成物、及び単位投薬形態は、従来の成分を、従来の割合で、更なる活性化合物、又は有効成分と共に、又はこれなしで含み得るか、又は単位投薬形態は、用いられるべき、意図された１日投薬量範囲に見合った、任意の適当な有効量の有効成分を含有してもよい。医薬組成物は、固形剤、例えば、錠剤、又は充填カプセル剤、半固形剤、粉剤、持続放出製剤、又は液体剤、例えば、液剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤、経口使用用の充填カプセル剤として；又は直腸投与、又は膣内投与用の坐剤の形態で；又は非経口使用用の無菌の注射可能な液剤の形態で用いられ得る。典型的な製剤は、約５〜約９５%(w/w) １つの活性化合物、又は複数の活性化合物を含有するだろう。用語「製剤」、又は「投薬形態」は、活性化合物の固形製剤と液体製剤の両方を含むことが意図され、当業者は、有効成分が、標的器官又は標的組織、並びに所望の用量及び薬物動態パラメーターに依存して、異なる製剤中に存在し得ることを、理解するだろう。

本明細書で用いられる用語「賦形剤」は、医薬組成物を調製する際に有用で、一般的に安全で、非毒性で、かつ生物学的に不所望でも、別段不所望でない化合物に言及し、獣医学での使用、並びにヒト医薬での使用に許容可能である賦形剤を含む。本発明の化合物は、単独で投与され得るが、一般的に、意図される投与経路、及び標準的な医薬での実施に関して選択される１個以上の適当な医薬賦形剤、希釈剤、又は担体との混合剤で投与されるだろう。

「薬学的に許容し得る」は、一般的に安全で、非毒性で、かつ生物学的に不所望でも、別段不所望でない医薬組成物の調製の際に有用であること、及び獣医並びにヒト医薬での使用に許容可能であることを意味する。

有効成分の「薬学的に許容し得る塩」形態はまた、当初、所望の薬物動態特性を、非塩形態で存在しない有効成分に付与し得、身体中でのその治療活性に関して有効成分の薬理学になお明確に影響し得る。化合物の語句「薬学的に許容し得る塩」は、薬学的に許容し、親化合物の所望の薬理活性を有する塩を意味する。かかる塩は、（１）無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸など；又は有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、４−メチルビシクロ［２．２．２］−オクト−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、３級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸などと形成される、酸付加塩；又は（２）酸性プロトンが、金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、又はアルミニウムイオンにより置換されているか；又は有酸塩基、例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミンなどと同等である、親化合物中に存在するとき、形成される塩を含む。

固形形態の製剤は、粉剤、錠剤、ピル、カプセル剤、カシェ剤、坐剤、及び分散可能な粒剤を含む。固形担体は、希釈剤、着香剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁化剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤、又は被覆材料としても作用し得る、１個以上の物質であり得る。粉剤において、担体は、一般的に、精密に分割された活性成分との混合物である、精密に分割された固体である。錠剤において、活性成分は、一般的に、必須の結合能を有する担体と、適当な割合で混合され、所望の形及びサイズに圧縮される。適当な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、でんぷん、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、低融点ワックス、ココアバターなどを含むが、これらに限定されない。固形形態の製剤は、活性成分に加えて、着色剤、着香剤、安定剤、バッファー、人工及び天然甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含有してもよい。

液体製剤はまた、経口投与に適し、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、水液剤、水性懸濁剤を含む、液体製剤を含む。これらは、使用の直ぐ前に、液体形態製剤に変換されることを意図されている、固形形態製剤を含む。乳剤は、溶液、例えば、プロピレングリコール水溶液中に調製され得るか、又は乳化剤、例えば、レシチン、ソルビタンモノオレエート、又はアカシアを含有し得る。水溶液は、活性成分を水中に溶解すること、及び適当な着色剤、着香剤、安定剤、及び増粘剤を加えることにより、調製され得る。水性懸濁剤は、精密に分割された活性成分を、水中に、粘性材料、例えば、天然又は合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、及び他の周知の懸濁化剤と分散させることにより、調製され得る。

本発明の化合物は、非経口投与（例えば、注射、例えば、ボーラス注射、又は持続点滴による）用に製剤化され得、アンプル剤、予め充填されたシリンジ、小量点滴中の単位用量形態、又は添加保存剤と共に多用量容器中に提示され得る。組成物は、懸濁剤、液剤、又は油又は水性ビークル中の乳剤、例えば、水性ポリエチレングリコール中の液剤などの形態を取り得る。油性又は非水性担体、希釈剤、溶媒、又はビークルの例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油（例えば、オリーブ油）、及び注射可能な有機エステル（例えば、オレイン酸エチル）を含み、調合剤、例えば、保存剤、湿潤剤、乳化剤又は懸濁剤、安定化剤、及び／又は分散剤を含有し得る。あるいは、有効成分は、無菌固体の無菌的単離、又は適当なビークル、例えば、無菌のパイロジェンフリー水で使用前に構築するための、溶液からの凍結乾燥により得られる、粉末形態であってもよい。

本発明の化合物は、軟膏、クリーム剤若しくはローション剤、又は経皮パッチとして表皮への局所投与用に製剤化されてもよい。軟膏、又はクリーム剤は、例えば、適当な増粘剤、及び／又はゲル化剤を添加することで、水性又は油性基剤と製剤化されてもよい。ローション剤は、水性又は油性基剤と製剤化され得、一般的に、１個以上の乳化剤、安定化剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤、又は着色剤を含有する。口内での局所投与に適した製剤は、有効な剤を、風味付けされた基剤、通常、スクロース、及びアカシア、又はトラガカント中に含む、口内錠；有効成分を、不活性な基剤、例えば、ゼラチン、及びグリセリン、又はスクロース、及びアカシア中に含む、トローチ；及び有効成分を、適当な液体担体中に含む、口内洗浄液を含む。

本発明の化合物は、坐剤としての投与用に製剤化されてもよい。低融点ワックス、例えば、脂肪酸グリセリドの混合物、又はココアバターが、まず融解され、活性成分が、例えば、撹拌により、均一に分散される。次に、融解された均一の混合物が、従来サイズの鋳型に注がれ、そのまま凝固するまで冷却される。

本発明の化合物は、膣内投与用に製剤化されてもよい。有効成分に加えて、担体を含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォーム剤、又はスプレー剤が、妥当であると、当技術分野で知られている。

本発明の化合物は、鼻腔内投与用に製剤化されてもよい。液剤、又は懸濁剤は、通常の手段、例えば、ドロッパー、ピペット、又はスプレーを用いて、鼻腔に直接適用される。製剤は、単一又は多用量形態で提供され得る。ドロッパー又はピペットの後者の場合、これは、適当な、予め決められた容量の液剤又は懸濁剤を患者が投与することにより、達成され得る。スプレーの場合、これは、例えば、調量噴霧スプレーポンプにより、達成され得る。

本発明の化合物は、鼻腔内投与を含む、特に、気道へのエアロゾル投与用に製剤化されてもよい。化合物は、一般的に、小さな粒子サイズ、例えば、５ミクロン未満のオーダーを有する。かかる粒子サイズは、当技術分野において公知の手段、例えば、微粒子化により、得られ得る。有効成分は、適当な噴霧剤、例えば、クロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、又はジクロロテトラフルオロエタン、又は二酸化炭素、又は他の適当なガスとの圧縮パック中で提供される。エアロゾルは、便宜的に、界面活性剤、例えば、レシチンを含有してもよい。薬物の容量は、調量バルブにより制御されてもよい。あるいは、有効成分は、乾燥粉末、例えば、適当な粉末基材、例えば、ラクトース、でんぷん、でんぷん誘導体、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、及びポリビニルピロリジン（ＰＶＰ）中の化合物の粉末混合物の形態で提供されてもよい。粉剤担体は、鼻腔内でゲルを形成する。粉末組成物は、例えば、ゼラチンのカプセル剤、又はカートリッジ、又は粉末が、吸入器により投与され得る、ブリスター包装中の単位用量で提示されてもよい。

所望なら、製剤は、有効成分の徐放又は制御放出投与に適合した腸溶コーティングで調製され得る。例えば、本発明の化合物は、経皮又は皮下薬物デリバリー装置中に製剤化され得る。これらのデリバリーシステムは、化合物の徐放が必要であるとき、及び処置処方計画との患者コンプライアンスが重要であるとき、有利である。経皮デリバリーシステムにおける化合物は、しばしば、皮膚接着固体支持体に結合される。対象の化合物はまた、透過エンハンサー、例えば、アゾン（１−ドデシルアザ−シクロヘプタン−２−オン）と組み合わされ得る。徐放デリバリーシステムは、皮下層に、外科手術、又は注射により皮下挿入される。皮下インプラントは、化合物を、脂質溶解メンブレン、例えば、シリコンゴム、又は生分解性ポリマー、例えば、ポリ乳酸中にカプセル化する。

医薬担体、希釈剤、及び賦形剤との適当な製剤は、Remington: The Science and Practice of Pharmacy 1995, edited by E. W. Martin, Mack Publishing Company, 19th edition, Easton, Pennsylvaniaに記載される。当業者は、本発明の組成物を不安定にすることなく、又はその治療活性を損なうことなく、特定の投与経路用の多数の製剤を提供するために、本明細書の教示内で製剤を改変し得る。

水、又は他のビークル中でより溶解可能なものにするための、本化合物の改変は、例えば、当業者の範囲内に十分にある、小さな改変（塩製剤、エステル化など）により容易に成され得る。患者における最大の有益な効果のため、本化合物の薬物動態を維持するために、特定の化合物の投与経路、及び投薬処方計画を改変することも、当業者の範囲内に十分にある。

本明細書で用いられる用語「治療上有効量」は、個体における疾患の症状を低減するために必要な量を意味する。用量は、それぞれ特定の場合において個々の要求に調整されるだろう。該投薬量は、多数の因子、例えば、処置されるべき疾患の重症度、患者の年齢及び一般的な健康状態、患者を処置する他の医薬、投与経路及び形態、及び関与する医師の選択及び経験に依存して、広範な制限内で変動し得る。経口投与のため、１日当たり約０．０１〜約１０００mg/体重kgの１日投薬量が、単独療法、及び／又は併用療法で適当である。好ましい１日用量は、１日当たり、約０．１〜約５００mg/体重kg、より好ましくは、０．１〜約１００mg/体重kg、最も好ましくは、１．０〜約１０mg/体重kgである。したがって、７０kgの個人に投与するため、投薬量範囲は、１日当たり約７mg〜０．７ｇである。１日投薬量は、単一投薬量として、又は分割投薬量、典型的には、１日当たり１〜５投薬量で投与され得る。一般的に、処置は、化合物の最適な用量より少ない投薬量で開始される。その後、投薬量は、個々の患者にとって最適な効果が達成されるまで、少しずつ増やされる。本明細書に記載される疾患の処置における当業者は、過度の実験なしで、個人の知識、経験、及び本出願の開示に依って、所定の疾患及び患者について、本発明の化合物の治療上有効量を確かめることが可能であろう。

医薬製剤は、単位投薬形態のものが好ましい。かかる形態において、製剤は、適量の活性成分を含有する単位用量に分割される。単位投薬形態は、包装された製剤、個々の量の製剤を含有するパッケージ、例えば、包装された錠剤、カプセル剤、及びバイアル又はアンプル剤中の粉剤であり得る。または、単位投薬形態は、カプセル剤、錠剤、カシェ剤、又は口内錠自体であり得るか、又はこれは、パッケージ形態の適当数のこれらのいずれかであり得る。

処置の適応症及び方法
一般式Ｉの化合物は、ブルトン型チロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）を阻害する。上流キナーゼによるＢｔｋの活性化は、順に、前炎症性メディエーターの放出を刺激する、ホスホリパーゼ−Ｃγの活性化を生じる。式Ｉの化合物は、関節炎、並びに他の抗炎症性疾患、及び自己免疫疾患の処置において有用である。したがって、式Ｉ記載の化合物は、関節炎の処置に有用である。式Ｉの化合物は、細胞においてＢｔｋを阻害するのに有用であり、Ｂ細胞発生を調節するのに有用である。本発明は、更に、薬学的に許容し得る担体、賦形剤、又は希釈剤と混合された、式Ｉの化合物を含有する医薬組成物を含む。

本明細書に記載される化合物は、キナーゼ阻害剤、特に、Ｂｔｋ阻害剤である。これらの阻害剤は、哺乳類における、Ｂｔｋ阻害に敏感な疾患、及び／又はＢ細胞増殖の阻害に敏感な疾患を含む、キナーゼ阻害に敏感な１個以上の疾患であり得る。任意の特定の理論と結び付けられることを望むことなく、本発明の化合物のＢｔｋとの相互作用は、Ｂｔｋ活性の阻害を生じ、それ故、これらの化合物の医薬的有用性を生じると考えられている。したがって、本発明は、かかる疾患を有する哺乳類に、有効量の、本明細書で提供される少なくとも１個の化学実体を投与することを含む、Ｂｔｋ活性の阻害に敏感な疾患、及び／又はＢ細胞増殖の阻害に敏感な疾患を有する、哺乳類、例えば、ヒトの処置方法を含む。有効濃度は、例えば、化合物の血液濃度をアッセイすることにより、又は理論上、バイオアベイラビリティを計算することにより、実験的に確認され得る。Ｂｔｋに加えて、影響され得る他のキナーゼは、他のチロシンキナーゼ、及びセリン／スレオニンキナーゼを含むが、これらに限定されない。

キナーゼは、基礎的な細胞過程、例えば、増殖、分化、及び死（アポトーシス）を制御するシグナル伝達経路において、顕著な役割を果たす。異常なキナーゼ活性は、多発癌、自己免疫疾患、及び／又は炎症性疾患、及び急性炎症反応を含む、広範な疾患において、関与している。鍵となる細胞シグナル伝達経路におけるキナーゼの多面的役割は、キナーゼ、及びシグナル伝達経路を標的にする新規薬物を同定するための有意な機会を提供する。

実施態様は、自己免疫疾患、及び／又は炎症性疾患、又はＢｔｋ活性、及び／又はＢ細胞増殖の阻害に敏感な急性炎症反応を有する患者の処置方法を含む。

本発明による化合物、及び組成物を用いて影響され得る、自己免疫疾患、及び／又は炎症性疾患は、乾癬、アレルギー、クローン病、過敏性腸症候群、シェーグレン疾患、組織移植片拒絶、及び移植された器官の超急性拒絶反応、喘息、全身性エリテマトーデス（及び関連する糸球体腎炎）、皮膚筋炎、多発性硬化症、強皮症、脈管炎（ＡＮＣＡ関連血管炎、及び他の血管炎）、自己免疫性溶血性貧血及び血小板減少状態、グッドパスチャー症候群（及び関連する糸球体腎炎、及び肺出血）、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、慢性特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、アジソン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、糖尿病、敗血性ショック、及び重症筋無力症を含むが、これらに限定されない。

本明細書で提供される少なくとも１個の化学実体が、抗炎症剤と併用して投与される処置方法が、本明細書に含まれる。抗炎症剤は、ＮＳＡＩＤ、非特異的及びＣＯＸ−２特異的シクロオキシゲナーゼ阻害剤、金化合物、コルチコステロイド、メトトレキサート、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体アンタゴニスト、免疫抑制剤、及びメトトレキサートを含むが、これらに限定されない。

ＮＳＡＩＤの例は、イブプロフェン、フルルビプロフェン、ナプロキセン及びナプロキセンナトリウム、ジクロフェナク、ジクロフェナクナトリウムとミソプロストールの組合せ、スリンダク、オキサプロジン、ジフルニサル、ピロキシカム、インドメタシン、エトドラク、フェノプロフェンカルシウム、ケトプロフェン、ナトリウムナブメトン、スルファサラジン、トルメチンナトリウム、並びにヒドロキシクロロキンを含むが、これらに限定されない。ＮＳＡＩＤの例はまた、ＣＯＸ−２特異的阻害剤、例えば、セレコキシブ、バルデコキシブ、ルミラコキシブ、及び／又はエトリコキシブを含む。

ある実施態様において、抗炎症剤は、サリチル酸塩である。サリチル酸塩は、アセチルサリチル酸又はアスピリン、サリチル酸ナトリウム、並びにサリチル酸コリン及びサリチル酸マグネシウムを含むが、これらに限定されない。

抗炎症剤はまた、コルチコステロイドであってもよい。例えば、コルチコステロイドは、コルチゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾロンリン酸エステル、又はプレドニゾンであり得る。

更なる実施態様において、抗炎症剤は、金化合物、例えば、金チオリンゴ酸ナトリウム、又はオーラノフィンである。

本発明はまた、抗炎症剤が、代謝阻害剤、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤、例えば、メトトレキサート、又はジヒドロオロト酸脱水素酵素阻害剤、例えば、レフルノミドである、実施態様を含む。

本発明の他の実施態様は、少なくとも１個の抗炎症性化合物が、抗Ｃ５モノクローナル抗体（例えば、エクリズマブ、又はパキセリズマブ）、ＴＮＦアンタゴニスト、例えば、エタネルセプト、又は抗ＴＮＦαモノクローナル抗体であるインフリキシマブである、組合せに関する

本発明のなお他の実施態様は、少なくとも１個の活性剤が、免疫抑制剤化合物、例えば、メトトレキサート、レフルノミド、サイクロスポリン、タクロリムス、アザチオプリン、及びミコフェノール酸モフェチルから選択される、免疫抑制剤化合物である、組合せに関する。

ＢＴＫを発現するＢ細胞及びＢ細胞前駆体は、Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫（ホジキンリンパ腫、及び非ホジキンリンパ腫を含む）、ヘアリー細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、慢性及び急性骨髄性白血病、及び慢性及び急性リンパ性白血病を含むが、これらに限定されない、Ｂ細胞悪性腫瘍の病理において関連する。

ＢＴＫは、Ｂリンパ球系細胞におけるＦａｓ／ＡＰＯ−１（ＣＤ−９５）死誘発シグナル複合体（ＤＩＳＣ）の阻害剤であることが示された。白血病細胞／リンパ腫細胞の運命は、ＤＩＳＣにより活性化されるカスパーゼの対立するアポトーシス促進作用と、ＢＴＫ及び／又はその基質を含む上流抗アポトーシス制御機序との間のバランスに帰する（Vassilev et al., J. Biol. Chem. 1998, 274, 1646-1656）。

ＢＴＫ阻害剤が、化学療法増感剤として有用であり、故に、他の化学療法薬物、特に、アポトーシスを誘発する薬物との併用において有用であることも見出された。化学療法増感ＢＴＫ阻害剤との併用で用いられ得る他の化学療法薬物の例は、トポイソメラーゼＩ阻害剤（カンプトテシン、又はトポテカン）、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤（例えば、ダウノマイシン、及びエトポシド）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、メルファラン、及びＢＣＮＵ）、チューブリン指向剤（例えば、タキソール、及びビンブラスチン）、及び生物学的剤（例えば、抗体、例えば、抗ＣＤ２０抗体、ＩＤＥＣ８、免疫毒素、及びサイトカイン）を含む。

Ｂｔｋ活性はまた、染色体９の一部と染色体２２の一部との転座から生じるｂｃｒ−ａｂｌ融合遺伝子を発現する、いくつかの白血病と関連する。この異常は、通常、慢性骨髄性白血病において観察される。Ｂｔｋは、ｂｃｒ−ａｂｌ細胞においてアポトーシスを回避させる下流の生存シグナルを開始するｂｃｒ−ａｂｌキナーゼにより恒常的にリン酸化される（N. Feldhahn et al. J. Exp. Med. 2005 201(11):1837-1852）。

処置方法
本出願は、必要な患者に、治療上有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む、炎症状態、及び／又は自己免疫状態の処置方法を提供する。

本出願は、必要な患者に、治療上有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む、炎症状態の処置方法を提供する。

本出願は、必要な患者に、治療上有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む、関節リウマチの処置方法を提供する。

本出願は、必要な患者に、治療上有効量の式Ｉを投与することを含む、喘息の処置方法を提供する。

本出願は、必要な患者に、治療上有効量の式ＩのＢｔｋ阻害剤化合物を投与することを含む、炎症状態、及び／又は自己免疫状態の処置方法を提供する。

本出願は、必要な患者に、治療上有効量の式ＩのＢｔｋ阻害剤化合物を投与することを含む、関節炎の処置方法を提供する。

本出願は、必要な患者に、治療上有効量の式ＩのＢｔｋ阻害剤化合物を投与することを含む、喘息の処置方法を提供する。

本出願は、必要な患者に、治療上有効量の式ＩのＢｔｋ阻害剤化合物を投与することを含む、Ｂ細胞増殖の阻害方法を提供する。

本出願は、式Ｉのいずれか１つのＢｔｋ阻害剤化合物を投与することを含む、Ｂｔｋ活性の阻害方法であって、Ｂｔｋ阻害剤化合物が、Ｂｔｋ活性のインビトロ生化学的アッセイにおいて、ＩＣ_５０５０μM未満を示す、方法を提供する。

上記方法の１つのバリエーションにおいて、Ｂｔｋ阻害剤化合物は、Ｂｔｋ活性のインビトロ生化学アッセイにおいて、ＩＣ_５０１００nM未満を示す。

上記方法の別のバリエーションにおいて、化合物は、Ｂｔｋ活性のインビトロ生化学的アッセイにおいて、ＩＣ_５０ １０nM未満を示す。

本出願は、必要な患者に、治療上有効量の抗炎症性化合物を、式ＩのＢｔｋ阻害剤化合物と併用して同時投与することを含む、炎症状態の処置方法を提供する。

本出願は、必要な患者に、治療上有効量の抗炎症性化合物を、式ＩのＢｔｋ阻害剤化合物と併用して同時投与することを含む、関節炎の処置方法を提供する。

本出願は、必要な患者に、治療上有効量の式ＩのＢｔｋ阻害剤化合物を投与することによる、リンパ腫、又はＢＣＲ−ＡＢＬ１^＋白血病細胞の処置方法を提供する。

本出願は、治療活性物質として使用するための、上述の化合物の使用を提供する。

本出願は、炎症状態、及び／又は自己免疫状態の処置用医薬の製造のための、上述の化合物の使用を提供する。

本出願は、炎症状態、及び／又は自己免疫状態の処置のための、上述の化合物の使用を提供する。

本出願は、炎症状態、及び／又は自己免疫状態の処置において使用するための、上述の化合物を提供する。

本出願は、本明細書において上述される発明を提供する。

実施例
一般的略語
一般的に用いられる略語は、アセチル（Ａｃ）、ａｚｏ−ビス−イソブチリルニトリル（ＡＩＢＮ）、雰囲気（Ａｔｍ）、９−ボラビシクロ［３．３．１］ノナン（９−ＢＢＮ、又はＢＢＮ）、２，２'−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１'−ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）、tert−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ジ−tert−ブチルピロカルボナート、又はｂｏｃ無水物（ＢＯＣ_２Ｏ）、ベンジル（Ｂｎ）、ブチル（Ｂｕ）、Chemical Abstracts Registration Number（ＣＡＳＲＮ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ、又はＺ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、ジエチルアミノ硫黄トリフルオリド（ＤＡＳＴ）、ジベンジリデンアセトン（ｄｂａ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノン−５−エン（ＤＢＮ）、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン（ＤＢＵ）、Ｎ，Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１，２−ジクロロエタン（ＤＣＥ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）、アゾジカルボン酸ジエチル（ＤＥＡＤ）、ジ−イソ−プロピルアゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ）、ジ−イソ−ブチルアルミニウムヒドリド（ＤＩＢＡＬ、又はＤＩＢＡＬ−Ｈ）、ジ−イソ−プロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、１，１'−ビス−（ジフェニルホスフィノ）エタン（ｄｐｐｅ）、１，１'−ビス−（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（ｄｐｐｆ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロライド（ＥＤＣＩ）、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）、エチル（Ｅｔ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、エタノール（ＥｔＯＨ）、２−エトキシ−２Ｈ−キノリン−１−カルボン酸エチルエステル（ＥＥＤＱ）、ジエチルエーテル（Ｅｔ_２Ｏ）、エチルイソプロピルエーテル（ＥｔＯｉＰｒ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート酢酸（ＨＡＴＵ）、酢酸（ＨＯＡｃ）、１−Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、イソ−プロパノール（ＩＰＡ）、イソプロピルマグネシウムクロライド（ｉＰｒｍｇＣｌ）、ヘキサメチルジシラザン（ＨＭＤＳ）、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣＭＳ）、リチウムヘキサメチルジシラザン（ＬｉＨＭＤＳ）、メタ−クロロペルオキシ安息香酸（ｍ−ＣＰＢＡ）、メタノール（ＭｅＯＨ）、融点（ｍｐ）、ＭｅＳＯ_２−（メシル、又はＭｓ）、メチル（Ｍｅ）、アセトニトリル（ＭｅＣＮ）、ｍ−クロロ過安息香酸（ＭＣＰＢＡ）、質量スペクトル（ｍｓ）、メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、メチルテトラヒドロフラン（ＭｅＴＨＦ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）、ｎ−ブチルリチウム（ｎＢｕＬｉ）、Ｎ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）、Ｎ−クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ピリジニウムクロロクロマート（ＰＣＣ）、ジクロロ−（（ビス−ジフェニルホスフィノ）フェロセニル）パラジウム（ＩＩ）（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２）、パラジウム（ＩＩ）アセタート（Ｐｄ（ＯＡｃ）_２）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３）、ピリジニウムジクロマート（ＰＤＣ）、フェニル（Ｐｈ）、プロピル（Ｐｒ）、イソ−プロピル（ｉ−Ｐｒ）、重量ポンド毎平方インチ（ｐｓｉ）、ピリジン（ｐｙｒ）、１，２，３，４，５−ペンタフェニル−１'−（ジ−tert−ブチルホスフィノ）フェロセン（Ｑ−Ｐｈｏｓ）、室温（周囲温度、ｒｔ、又はＲＴ）、ｓｅｃ−ブチルリチウム（ｓＢｕＬｉ）、tert−ブチルジメチルシリル、又はｔ−ＢｕＭｅ_２Ｓｉ（ＴＢＤＭＳ）、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオライド（ＴＢＡＦ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ、又はＥｔ_３Ｎ）、２，２，６，６−テトラメチルピペリジネル−オキシル（ＴＥＭＰＯ）、トリメチルシリルエトキシメチル（ＳＥＭ）、トリフレート、又はＣＦ_３ＳＯ_２−（Ｔｆ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、１，１'−ビス−２，２，６，６−テトラメチルヘプタン−２，６−ジオン（ＴＭＨＤ）、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、トリメチルシリル、又はＭｅ_３Ｓｉ（ＴＭＳ）、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（ＴｓＯＨ、又はｐＴｓＯＨ）、４−Ｍｅ−Ｃ_６Ｈ_４ＳＯ_２−、又はトシル（Ｔｓ）、及びＮ−ウレタン−Ｎ−カルボキシ無水物（ＵＮＣＡ）を含む。接頭辞、標準（ｎ）、イソ（ｉ−）、２級（sec−）、３級（tert−）、及びneoを含む通常の命名法は、アルキル部分と一緒に用いられるとき、その慣習的意味を有する（J. Rigaudy and D. P. Klesney, Nomenclature in Organic Chemistry, IUPAC 1979 Pergamon Press, Oxford.）。

一般的条件
本発明の化合物は、市販の出発材料で出発して、当業者に既知の一般的な合成技術及び合成方法を用いることにより、調製され得る。以下の概略は、かかる化合物の調製に適した反応スキームである。更なる例証を、具体的な実施例において見ることができる。

調製用実施例
具体的な略語
ＡＩＢＮ アゾビスイソブチロニトリル
ＡｌＣｌ_３ 三塩化アルミニウム
ＢＢｒ_３ 三臭化ホウ素
ＢＨ_３−ＤＭＳ ボラン−ジメチルスルフィド複合体
ＣＣｌ_４ 四塩化炭素
ＣＨ_２Ｃｌ_２ ジクロロメタン
ＣＨ_３ＣＮ アセトニトリル
Ｃｓ_２ＣＯ_３ 炭酸セシウム
ＤＩＰＥＡ ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＥ ジメトキシエタン
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＥｔＯＨ エタノール
ＨＡＴＵ Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート
Ｋ_２ＣＯ_３ 炭酸カリウム
ＫＨ_２ＰＯ_４ カリウムジホスファート
ＫＯＡｃ 酢酸カリウム
ＭｅＯＨ メタノール
Ｎａ_２ＣＯ_３ 炭酸ナトリウム
Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３ チオ硫酸ナトリウム
Ｎａ_２ＳＯ_４ 硫酸ナトリウム
ＮａＢＨ_４ 水素化ホウ素ナトリウム
ＮａＨ 水素化ナトリウム
ＮａＨＣＯ_３ 炭酸水素ナトリウム
ＮａＩ ヨウ化ナトリウム
ＮａＯＭｅ ナトリウムメトキシド
ＮＨ_４ＯＡｃ 酢酸アンモニウム
ＰＢｒ_３ 三臭化リン
Ｐｄ（ｄｂａ）_２ ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）
Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３ トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）
Ｐｄ（ＯＡｃ）_２ 酢酸パラジウム（ＩＩ）
Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４ テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）
ｉＰｒＯＨ イソプロパノール
ＰＹＢＯＰ （ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート）
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
Ｘ−Ｐｈｏｓ ２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル

一般的な実験の詳細
試薬を、Aldrich、Oakwood、Matrix、又は他の供給源から購入し、更に精製することなく用いた。加熱のためのマイクロ波照射を用いた反応は、Personal Chemistry Emrys Optimizer System、又はCEM Discovery Systemのいずれかを用いて、行った。数mg〜数ｇのスケールの精製を、当業者に公知の方法、例えば、シリカゲルフラッシュカラムの溶出により、行った；いくつかの場合で、CombiFlashシステムで溶出する、使い捨ての予め包装された数ｇのシリカゲルカラム（RediSep）の使用により、分取フラッシュカラム精製も行った。Biotage（商標）、及びISCO（商標）もまた、中間体の精製のため、本発明で用い得るフラッシュカラム器具である。

化合物同一性、及び純度を判断する目的のため、ＬＣ／ＭＳ（液体クロマトグラフィー／質量分析）スペクトルを、次のシステムを用いて記録した。質量スペクトルの測定のため、システムは、Micromass Platform II分光計：ポジティブモードのＥＳイオン化（質量範囲：１５０〜１２００）からなっている。同時クロマトグラフィー分離は、以下のＨＰＬＣシステムで達成した：ES Industries Chromegabond WR C-18 3u 120A（３．２×３０mm）カラムカートリッジ；移動層Ａ：水（０．０２％ ＴＦＡ）、及び層Ｂ：アセトニトリル（０．０２％ ＴＦＡ）；勾配３分で１０％ Ｂ〜９０％ Ｂ；平衡化時間 １分；流速 ２mL/分。

式１の多数の化合物をまた、当業者に周知の方法を用いて、逆層ＨＰＬＣにより精製した。いくつかの場合で、分取ＨＰＬＣ精製は、Shimadzu分取ＨＰＬＣシステム、及びLeap autoinjectorに繋げたPE Sciex 150 EX Mass Spec controlling a Gilson 215 collectorを用いて、行った。化合物は、陽イオン検出においてＬＣ／ＭＳ検出を用いて、溶出流から集めた：Ｃ−１８カラムからの化合物の溶出（２０mL/分での２．０×１０cm溶出）は、１０分かけた適当な直線勾配モード、溶媒（Ａ）０．０５％ ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ、及び溶媒（Ｂ）０．０３５％ ＴＦＡ／アセトニトリルを用いて、行った。ＨＰＬＣシステムへの注入のため、粗試料を、メタノール、アセトニトリルとＤＭＳＯの混合物に溶解した。

^１Ｈ−ＮＭＲ特徴決定を、Bruker、又はVarian 300、又は400MHz NMR分光計を用いて行った。

本発明の化合物を、公知の技術により合成し得る。以下の実施例、及び参考文献は、本発明を理解する目的のために提供する。しかしながら、実施例は、本発明、添付の請求の範囲に説明する発明の範囲を制限することを意図しない。実施例における最終生成物の名称を、Isis AutoNom 2000を用いて作成した。

中間体の調製
２−フルオロ−４−［２−メトキシ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリジン−４−イル］−ベンジルアミン

工程１：［２−フルオロ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ベンジル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル

圧力管中で、４−ブロモ−２−フルオロベンジルカルバミン酸tert−ブチル（５ｇ、１６．４mmol）、ビス（ピナコラト）ジボロン（６．２６ｇ、２４．７mmol）及び酢酸カリウム（４．８４ｇ、４９．３mmol）をＮＭＰ（７５．０mL）と合わせて明黄色の溶液を与えた。反応混合物を窒素下に１０分間脱気した。［１，１′−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロ−パラジウム（II）（７２２mg、０．９８６mmol）を加えた。反応混合物を１００℃で２０時間加熱した。反応混合物を、水を用いてクエンチし、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３×１００mL）で抽出した。合わせた有機層を、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１２０ｇ、ヘキサン中の０％〜３０％の酢酸エチル）によって精製した。［２−フルオロ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ベンジル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル（５．８ｇ、１００％）を黄色の油状物として得た。

工程２：［４−（２，６−ジクロロ−ピリジン−４−イル）−２−フルオロ−ベンジル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル

マイクロ波管中で、２，６−ジクロロ−４−ヨードピリジン（４．４９ｇ、１６．４mmol）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（９４８mg、８２０μmmol）をＤＭＦ（６０mL）と合わせて黄色の溶液を与えた。炭酸カリウム（６．８ｇ、４９．２mmol）及び［２−フルオロ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ベンジル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル（５．７６ｇ、１６．４mmol）を加えた。反応物をマイクロ波反応器中で１５０℃にて９０分間加熱した。反応混合物を水でクエンチし、次にＣＨ_２Ｃｌ_２（３×）で抽出した。合わせたＣＨ_２Ｃｌ_２層を、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４０ｇ、ヘキサン中の０〜２５％の酢酸エチル）によって精製した。生成物［４−（２，６−ジクロロ−ピリジン−４−イル）−２−フルオロ−ベンジル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル（４．０ｇ、５９％）を黄色の固体として得た。

工程３：［４−（２−クロロ−６−メトキシ−ピリジン−４−イル）−２−フルオロ−ベンジル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル

圧力管中で、［４−（２，６−ジクロロ−ピリジン−４−イル）−２−フルオロ−ベンジル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル（３．９９ｇ、１０．７mmol）をＭｅＯＨ（４６mL）と合わせて無色の溶液を与えた。ナトリウムメトキシド（メタノール溶液中２５重量％ＮａＯＭｅ）（６．９７ｇ、７．３７mL、３２．２mmol）を加えた。反応混合物を還流温度で一晩加熱した。反応混合物を濃縮し、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン中の０％〜２５％の酢酸エチル）によって精製した。［４−（２−クロロ−６−メトキシ−ピリジン−４−イル）−２−フルオロ−ベンジル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル（２．７２ｇ、６９％）をオフホワイトの固体として得た。

工程４：｛２−フルオロ−４−［２−メトキシ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリジン−４−イル］−ベンジル｝−カルバミン酸tert−ブチルエステル

圧力管中で、［４−（２−クロロ−６−メトキシ−ピリジン−４−イル）−２−フルオロ−ベンジル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル（１２０mg、０．３３０mmol）、及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３８mg、０．０３３mmol）をＤＭＦ（４mL）と合わせて明黄色の溶液を与えた。炭酸カリウム及び１−メチル−４−（４，４，５，５，−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール（６８mg、０．３３０mmol）を加えた。反応混合物を撹拌し、１００℃で一晩加熱した。翌朝、更なるテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３８mg、０．０３３mmol）及び１−メチル−４−（４，４，５，５，−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール（６８mg、０．３３０mmol）を加えた。反応混合物を、マイクロ波照射を２時間使用して１５０℃で加熱した。反応混合物を室温に冷やし、次に水で希釈した。混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（３×２０mL）で抽出した。合わせた有機層を水、続いてブラインで洗浄した。次に有機抽出物をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗物質を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル１２ｇ、ヘキサン中の０〜２０％のＥｔＯＡｃ）を使用して精製して、｛２−フルオロ−４−［２−メトキシ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリジン−４−イル］−ベンジル｝−カルバミン酸tert−ブチルエステル（８５mg、５２％）を白色の固体として生成した。

工程５：２−フルオロ−４−［２−メトキシ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリジン−４−イル］−ベンジルアミン

１０mLの丸底フラスコ中で、｛２−フルオロ−４−［２−メトキシ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリジン−４−イル］−ベンジル｝−カルバミン酸tert−ブチルエステル（４５mg、１０９μmol）をＣＨ_２Ｃｌ_２（５６０μL）及びＴＦＡと合わせて明黄色の溶液を与えた。混合物を室温で２時間撹拌した。この後、反応混合物を濃縮し、生成物を高真空で２時間更に乾燥させた。得られた生成物２−フルオロ−４−［２−メトキシ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリジン−４−イル］−ベンジルアミン（３２mg、７３％）を、更に精製することなくその後の反応に使用した。

調製例
実施例Ｉ−１
６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン

工程１：２−（４−ブロモ−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン

実施例Ｉ−２工程１に記載したものと類似の条件を使用して、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（これは、Berthel, S. et al. US 20100222325 Column 139に記載されているように調製してもよい；５０mg、０．２３mmol）と１−ブロモ−４−クロロメチル−ベンゼン（Aldrichから入手可能；５１．４mg、０．２５mmol）とを反応させて、２−（４−ブロモ−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（８０mg、９０％）を黄色の油状物として与えた。

工程２：６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン

ＤＭＥ中の２−（４−ブロモ−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（８０mg、０．２１mmol）とＰｄ（ＰＰｈ_３）_４（１ｍｏｌ％）との混合物をアルゴンで１０分間でパージした。Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液（２M；２当量）を加え、管をアルゴンでもう一度パージした。溶液を室温で５分間撹拌し、ＥｔＯＨ中の２−メトキシ−ピリジン−４−ボロン酸（Oakwood Products, Inc., 1741 Old Dunbar Road, West Columbia, SC 29172, USAから入手可能；３９．３mg、０．２６mmol）の溶液を加えた。混合物をアルゴンでパージし、蓋をし、９０℃で１時間加熱した。混合物をセライトwを通して濾過し、セライトをＣＨ_２Ｃｌ_２で洗浄した。濾液を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル）によって精製して６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（５０mg、５８％）をガム状物として与えた。ＭＳ：Ｃ_２５Ｈ_２５ＦＮ_３Ｏ_２［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４１８、実測値４１８。

工程３：６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン

６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（１００．０mg、０．２４mmol）をＰＢｒ_３と、実施例Ｉ−７工程４に記載した条件を使用して反応させて、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（５０mg、５２％）を白色の固体として与えた。ＭＳ：Ｃ_２４Ｈ_２３ＦＮ_３Ｏ［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４０４、実測値４０４。¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 11.59(br. s. , 1 H), 8.45(d, J=2.4 Hz, 1 H), 7.80(d, J=1.5 Hz, 1 H), 7.72(dd, J=13.2, 1.5 Hz, 1 H), 7.65(d, J=8.3 Hz, 2 H), 7.34 - 7.46(m, 3 H), 6.55(d, J=1.5 Hz, 1 H), 6.46(dd, J=6.8, 2.0 Hz, 1 H), 5.32(s, 2 H), 1.35(s, 9 H)

実施例Ｉ−２
６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−フルオロ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン

工程１：２−（４−ブロモ−２−フルオロ−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン

ＤＭＦ（５mL）中のＮａＨ（６０％、５５mg、１．３６mmol）の撹拌した懸濁液に、ＤＭＦ（１０mL）中の６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（これは、Berthel, S. et al. US 20100222325 Column 139に記載されているように調製してもよい；１５０．０mg、０．６８mmol）の溶液を０℃で滴下した。混合物を７０℃に加熱し、３０分間撹拌した。混合物を室温に冷やし、ＤＭＦ（５mL）中の４−ブロモ−１−クロロメチル−２−フルオロ−ベンゼン（Aldrichから入手可能；１６７．３mg、０．７５mmol）の溶液を加え、混合物を室温で４時間撹拌した。ＮＨ_４Ｃｌ水溶液を加えた。混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、ＥｔＯＡｃ抽出物を乾燥させ、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、２−（４−ブロモ−２−フルオロ−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（１６０mg、５８％）を白色の固体として与えた。ＭＳ：Ｃ_１９Ｈ_１８ＢｒＦ_２Ｎ_２Ｏ［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４０８、実測値４０８。

工程２：６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−フルオロ−４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン

２−（４−ブロモ−２−フルオロ−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（１６０mg、０．３９mmol）を２−メトキシ−ピリジン−４−ボロン酸（Oakwood Products, Inc., 1741 Old Dunbar Road, West Columbia, SC 29172, USAから入手可能；６０．４mg、０．４９mmol）と、実施例Ｉ−１工程２に記載されているものと類似した条件を使用して反応させて６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−フルオロ−４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（８０mg、４７％）を白色の固体として与えた。

工程３：６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−フルオロ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン

６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（１００．０mg、０．２４mmol）をＰＢｒ_３と、実施例Ｉ−７工程４に記載した条件を使用して反応させて、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（５０mg、５２％）を白色の固体として与えた。ＭＳ：Ｃ_２４Ｈ_２２Ｆ_２Ｎ_３Ｏ_２［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４２２、実測値４２２。¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 11.64(br. s. , 1 H), 8.45(d, J=2.4 Hz, 1 H), 7.80(d, J=1.5 Hz, 1 H), 7.73(dd, J=13.2, 1.5 Hz, 1 H), 7.59(d, J=11.2 Hz, 1 H), 7.42 - 7.50(m, 2 H), 7.32(t, J=8.1 Hz, 1 H), 6.62(d, J=1.5 Hz, 1 H), 6.50(dd, J=6.8, 1.5 Hz, 1 H), 5.36(s, 2 H), 1.35(s, 9 H)

実施例Ｉ−３
６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−フェニル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン

工程１：２−ブロモ−６−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−ベンズアルデヒド

ＤＭＦ（５mL）中の６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（これは、Berthel, S. et al. US 20100222325 Column 139に記載されているように調製してもよい；１００mg、０．４５mmol）の撹拌した溶液に、２−ブロモ−６−フルオロ−ベンズアルデヒド（Aldrichから入手可能；１０１．５mg、０．５mmol）、炭酸セシウム（３２５mg、０．２７mmol）及びメトキシトリメチルシラン（０．１mL、０．９１mmol）を加えた。混合物を６０℃で４時間加熱し、次に室温に冷やし、水（２５mL）で希釈した。得られた混合物を酢酸エチルで抽出し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、１０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、２−ブロモ−６−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−ベンズアルデヒド（１０５mg、５７％）を黄色のガム状物として与えた。ＭＳ：Ｃ_１９Ｈ_１７ＢｒＦＮ_２Ｏ_２［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４０４、実測値４０４。

工程２：２−（３−ブロモ−２−ヒドロキシメチル−フェニル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン

ＣＨ_２Ｃｌ_２とｉＰｒＯＨ（２：１；７．５mL）との混合物中の撹拌しかつ冷却した（約０℃）２−ブロモ−６−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−ベンズアルデヒド（１００mg、０．２５mmol）の溶液に、ＮａＢＨ_４（４．５mg、０．１２mmol）を加えた。混合物を約０℃で３０分間撹拌し、次に水を加え、混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出物を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、２０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、２−（３−ブロモ−２−ヒドロキシメチル−フェニル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（９０mg、８４％）を白色の固体として与えた。ＭＳ：Ｃ_１９Ｈ_１９ＢｒＦＮ_２Ｏ_２［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４０６、実測値４０６。

工程３：６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−フェニル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン

２０％の水性ジオキサン（２０mL）中の２−（３−ブロモ−２−ヒドロキシメチル−フェニル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（９０mg、０．２２mmol）の撹拌した溶液に、２−メトキシ−ピリジン−４−ボロン酸（Oakwood Products, Inc., 1741 Old Dunbar Road, West Columbia, SC 29172, USAから入手可能；４０．８mg、０．２７mmol）、Ｋ_２ＣＯ_３（６１．３mg、０．４４mmol）、及びトリシクロヘキシルホスフィン（３．７mg、０．０１mmol）を加えた。フラスコを排気し、窒素で３回充填戻した。Ｐｄ（ｄｂａ）_２（６．１mg、０．０１mmol）を加え、混合物を９６℃で５時間加熱した。混合物を室温に冷やし、溶媒を蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、２０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−フェニル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（６０mg、６２％）を白色の固体として与えた。ＭＳ：Ｃ_２５Ｈ_２５ＦＮ_３Ｏ_３［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４３４、実測値４３４。

工程４：６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−フェニル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン

ＣＨ_３ＣＮ中の６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−フェニル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（５０mg、０．１２mmol）、トリメチルシリルクロリド（２当量）及びＮａＩ（１当量）の混合物を還流温度で２時間加熱し、次に室温に冷やした。１０％Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液を加え、混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液の添加によって塩基性にした。混合物を１０％のＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出し、有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）によって精製して、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−フェニル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（２３mg、４８％）を白色の固体として与えた。ＭＳ：Ｃ_２４Ｈ_２３ＦＮ_３Ｏ_３［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４２０、実測値４２０．４。¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 11.66(br. s. , 1 H), 8.51(s, 1 H), 7.87(s, 1 H), 7.74(d, J=13.7 Hz, 1 H), 7.50 - 7.56(m, 1 H), 7.36 - 7.48(m, 3 H), 6.38(s, 1 H), 6.30(d, J=6.8 Hz, 1 H), 4.71(t, J=5.1 Hz, 1 H), 4.29(br. s., 2 H), 1.38(s, 9 H).

実施例Ｉ−４
６−tert−ブチル−２−［２，６−ジフルオロ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン

工程１：５−ブロモ−２−ブロモメチル−１，３−ジフルオロ−ベンゼン

ＣＣｌ_４（１５mL）中の５−ブロモ−１，３−ジフルオロ−２−メチルベンゼン（Oakwood Products, Inc., 1741 Old Dunbar Road, West Columbia, SC 29172, USA米国から入手可能；１．０ｇ、４．８３mmol）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（０．８６ｇ、４．８３mmol）及びＡＩＢＮ（４０mg、０．２４mmol）の混合物を還流温度で一晩加熱した。混合物をセライトを通して濾過し、溶媒を蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、２％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、５−ブロモ−２−ブロモメチル−１，３−ジフルオロ−ベンゼン（１．１ｇ、７９％）を無色の液体として与えた。

工程２：２−（４−ブロモ−２，６−ジフルオロ−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン

ＤＭＦ（１mL）中のＮａＨ（６０％、１８２mg、４．５４mmol）の撹拌した懸濁液に、ＤＭＦ（１．５mL）中の６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（これは、Berthel, S. et al. US 20100222325 Column 139に記載されているように調製してもよい；５００mg、２．２７mmol）の溶液を０℃で滴下した。混合物を７０℃に加熱し、３０分間撹拌した。混合物を室温に冷やし、ＤＭＦ（１．５mL）中の５−ブロモ−２−ブロモメチル−１，３−ジフルオロ−ベンゼン（７１５mg、２．５mmol）の溶液を加え、混合物を室温で４時間撹拌した。混合物を冷やし、冷水（５mL）を加えた。混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、有機抽出物を乾燥させ、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、５〜１０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、２−（４−ブロモ−２，６−ジフルオロ−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（５５５mg、５７％）を黄色の固体として与えた。ＭＳ：Ｃ_１９Ｈ_１７ＢｒＦ_３Ｎ_２Ｏ［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４２５、実測値４２５。

工程３：６−tert−ブチル−２−［２，６−ジフルオロ−４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン

ＤＭＥ（１．６mL）中の２−（４−ブロモ−２，６−ジフルオロ−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（５５０mg、１．２９mmol）の溶液を、アルゴンで１０分間パージした。Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（１４mg、０．０１mmol）を加え、混合物をアルゴンで１０分間パージした。Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液（２M；１．３mL、２．６mmol）を加え、管をアルゴンで５分間パージした。溶液を室温で５分間撹拌し、ＥｔＯＨ（１．６mL）中の２−メトキシ−ピリジン−４−ボロン酸（Oakwood Products, Inc., 1741 Old Dunbar Road, West Columbia, SC 29172, USAから入手可能；２４５mg、１．６１mmol）の溶液を加えた。混合物をアルゴンで１０分間パージし、蓋をし、９０℃で１時間加熱した。混合物をセライトを通して濾過し、セライトをＣＨ_２Ｃｌ_２で洗浄した。濾液を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、１５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、６−tert−ブチル−２−［２，６−ジフルオロ−４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（４２０mg、７１％）を黄色の固体として与えた。ＭＳ：Ｃ_２５Ｈ_２３Ｆ_３Ｎ_３Ｏ_２［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４５４、実測値４５４。

工程４：６−tert−ブチル−２−［２，６−ジフルオロ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン

ＣＨ_２Ｃｌ_２（１５mL）中の６−tert−ブチル−２−［２，６−ジフルオロ−４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（２００mg、０．４４mmol）の溶液を０℃に冷却した。ＢＢｒ_３（ＣＨ_２Ｃｌ_２中１M；４．４mL、４．４mmol）を加え、混合物を室温で４時間撹拌した。混合物をもう一度０℃に冷却し、ＢＢｒ_３の更なる部分（ＣＨ_２Ｃｌ_２中１M；４．４mL、４．４mmol）を加えた。混合物を室温で４８時間撹拌し、ＣＨ_２Ｃｌ_２（２５mL）を加えた。混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄し、有機層を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、２〜５％のＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）によって精製して、６−tert−ブチル−２−［２，６−ジフルオロ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（６２mg、３２％）をオフホワイトの固体として与えた。ＭＳ：Ｃ_２４Ｈ_２１Ｆ_３Ｎ_３Ｏ_２［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４４０、実測値４４０。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 11.67(br. s., 1 H), 8.05(d, J=2.4 Hz, 1 H), 7.37 - 7.42(m, 3 H), 7.11(d, J=7.8 Hz, 2 H), 6.71(s, 1 H), 6.37 - 6.47(m, 1 H), 5.49(s, 2 H), 1.56(s, 18 H), 1.36(s, 9 H).

実施例Ｉ−５
６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−ヒドロキシメチル−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン

工程１：５−ブロモ−２−メチル−安息香酸メチルエステル

塩化チオニル（１０mL）を５−ブロモ−２−メチル−安息香酸（２．０ｇ、９．３mmol）に０℃で加え、次にＤＭＦ（１滴）を加えた。混合物を窒素下に還流温度で３時間加熱した。反応混合物を蒸発させ、乾燥ＭｅＯＨ（５mL）を残留物に加えた。混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃを加えた。混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液及びブラインで洗浄した。有機相を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させて、５−ブロモ−２−メチル−安息香酸メチルエステル（２．１ｇ、９８％）をオフホワイトの固体として与えた。

工程２：５−ブロモ−２−ブロモメチル−安息香酸メチルエステル

ＣＣｌ_４（１０mL）中の５−ブロモ−２−メチル−安息香酸メチルエステル（５００mg、２．１９mmol）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（３８９mg、２．１８mmol）及びＡＩＢＮ（１８mg、０．１１mmol）の混合物を還流温度で一晩加熱した。反応混合物を冷やし、５％Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液（５mL）を加え、混合物を濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（３０mL）で希釈し、得られた混合物を水（５mL）及びブライン（５mL）で洗浄した。有機相を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜１％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、５−ブロモ−２−ブロモメチル−安息香酸メチルエステル（６００mg、８９％）を与えた。

工程３：（５−ブロモ−２−ブロモメチル−フェニル）−メタノール

トルエン（１．４mmol）中の５−ブロモ−２−ブロモメチル−安息香酸メチルエステル（２００mg、０．６５mmol）の溶液を、トルエン（１．４mL）中のＤＩＢＡＬ−Ｈ（トルエン中２５％w/w；０．８７mL、１．３mmol）の溶液に窒素下、０℃で滴下した。反応混合物を０℃で２時間撹拌し、次に１M ＨＣｌの添加によってｐＨ１に酸性化した。混合物をＥｔＯＡｃ（３×２５mL）で抽出し、合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させて、（５−ブロモ−２−ブロモメチル−フェニル）−メタノール（１４３mg、７８％）をオフホワイトの固体として与えた。

工程４：２−（４−ブロモ−２−ヒドロキシメチル−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン

ＮａＨ（６０％、８０mg、２mmol）を、ＤＭＦ（２mL）中の６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（これは、Berthel, S. et al. US 20100222325 Column 139に記載されているように調製してもよい；２２０mg、１mmol）の溶液に０℃で加えた。混合物を０℃で５分間撹拌し、次に７０℃で３０分間加熱した。混合物を室温に冷やし、（５−ブロモ−２−ブロモメチル−フェニル）−メタノール（１４０mg、０．５mmol）の溶液を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。氷水（２mL）を加えた。混合物をＥｔＯＡｃ（３×２５mL）で抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出物を水（３×５mL）及びブライン（５mL）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製して、２−（４−ブロモ−２−ヒドロキシメチル−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（６２mg、１５％）を黄色のガム状物として与えた。ＭＳ：Ｃ_２０Ｈ_２１ＢｒＦＮ_２Ｏ_２［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４１９、実測値４１８．８。

工程５：６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−ヒドロキシメチル−４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン

２０％水性ジオキサン（１１mL）中の２−（４−ブロモ−２−ヒドロキシメチル−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（６０mg、０．１４３mmol）の撹拌した溶液に、２−メトキシ−ピリジン−４−ボロン酸（Oakwood Products, Inc., 1741 Old Dunbar Road, West Columbia, SC 29172, USAから入手可能；２６mg、０．１７mmol）、Ｋ_２ＣＯ_３（３９mg、０．２９mmol）、及びトリシクロヘキシルホスフィン（２mg、０．００６mmol）を加えた。混合物をアルゴンで２０分間パージし、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３（５mg、０．００６mmol）を加えた。混合物を１００℃で４時間加熱した。混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（３０mL）を加えた。得られた混合物を水（３×５mL）及びブライン（５mL）で洗浄した。有機層を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、１０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−ヒドロキシメチル−４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（５４mg、８４％）を黄色のガム状物として与えた。ＭＳ：Ｃ_２６Ｈ_２６ＦＮ_３Ｏ_３［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４４８、実測値４４７．８。

工程６：６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−ヒドロキシメチル−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン

ＣＨ_３ＣＮ（１５mL）中の６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−ヒドロキシメチル−４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（２６０mg、０．５８mmol）、トリメチルシリルクロリド（０．１２ｇ、１．１mmol）及びＮａＩ（１２２mg、０．８１mmol）の混合物を窒素下に還流温度で３時間加熱し、次に室温に冷やした。５％Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液（５mL）を加え、混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（５mL）の添加によって塩基性にした。混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（５０mL）を加えた。得られた混合物を水（５mL）及びブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、２〜５％のＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）によって精製して、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−ヒドロキシメチル−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（６０mg、２４％）をオフホワイトの固体として与えた。ＭＳ：Ｃ_２４Ｈ_２３ＦＮ_３Ｏ_３［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４３４、実測値４３４．４。¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 11.59(br. s. , 1 H), 8.46(d, J=2.4 Hz, 1 H), 7.81(d, J=1.5 Hz, 1 H), 7.69 - 7.76(m, 2 H), 7.50(dd, J=8.3, 2.0 Hz, 1 H), 7.44(d, J=6.8 Hz, 1 H), 7.10(d, J=7.8 Hz, 1 H), 6.53(s, 1 H), 6.46(d, J=7.3 Hz, 1 H), 5.36(s, 2 H), 5.29(t, J=5.4 Hz, 1 H), 4.72(d, J=5.4 Hz, 2 H), 1.36(s, 9 H).

実施例Ｉ−６
６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛２−フルオロ−４−［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル］−ベンジル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オン

工程１：４−ブロモ−１−ブロモメチル−２−フルオロ−ベンゼン

ＣＣｌ_４（３０mL）中の４−ブロモ−２−フルオロ−１−メチルベンゼン（Aldrichから入手可能；２．０ｇ、１０．５８mmol）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１．８８ｇ、１０．５８mmol）及びＡＩＢＮ（８７mg、０．５３mmol）の混合物を窒素下に還流温度で４時間加熱した。反応混合物を室温に冷やし、５％Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液を加え、混合物を濃縮した。水（１０mL）を加え、混合物をＥｔＯＡｃ（３×５０mL）で抽出した。合わせた有機相を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン）によって精製して、４−ブロモ−１−ブロモメチル−２−フルオロ−ベンゼン（１．５ｇ、５３％）を無色の液体として与えた。

工程２：２−（４−ブロモ−２−フルオロ−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン

ＤＭＦ（５mL）中のＮａＨ（６０％、４７３mg、１１．８mmol）の懸濁液に、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（これは、Berthel, S. et al. US 20100222325 Column 139に記載されているように調製してもよい；１．３ｇ、５．９１mmol）の溶液を０℃で加えた。混合物を０℃で５分間撹拌し、窒素下、７０℃で３０分間加熱した。混合物を室温に冷やし、ＤＭＦ（３mL）中の４−ブロモ−１−ブロモメチル−２−フルオロ−ベンゼン（１．７４ｇ、６．５mmol）の溶液を加え、混合物を室温で１．５時間撹拌した。冷水（５mL）を加えた。混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、２０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、２−（４−ブロモ−２−フルオロ−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（１．０ｇ、４１％）を黄色の固体として与えた。ＭＳ：Ｃ_１９Ｈ_１８ＢｒＦ_２Ｎ_２Ｏ［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４０７、実測値４０７．２。

工程３：６−tert−ブチル−２−［４−（２，６−ジクロロ−ピリジン−４−イル）−２−フルオロ−ベンジル］−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン

ジオキサン（１６mL）中の２−（４−ブロモ−２−フルオロ−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（５００mg、１．２２mmol）、４，４，５，５，４’，４’，５’，５’−オクタメチル−［２，２’］ビ［［１，３，２］ジオキサボロラニル］（Aldrichから入手可能；４０５mg、１．５８mmol）、及び乾燥ＫＯＡｃ（３６１mg、３．６７mmol）の溶液をアルゴン下に脱気した。Ｘ−Ｐｈｏｓ（Aldrichから入手可能；８７mg、０．１８mmol）及びＰｄ（ＯＡｃ）_２（１３mg、０．０６１mmol）を加え、混合物を９５℃で４０分間加熱し、浴温度を８０℃に下げ、反応フラスコを、撹拌を維持しながら加熱浴から引き上げた。２，６−ジクロロ−４−ヨード−ピリジン（Aldrichから入手可能；３００mg、１．０９mmol）及びＫ_２ＣＯ_３（５０７mg、３．６７mmol）を加えた。アルゴンで脱気しておいた水（３．４mL）を加えた。反応混合物をアルゴンで脱気した。トリシクロヘキシルホスフィン（５１mg、０．１８mmol）及びＰｄ_２（ｄｂａ）_３（５６mg、０．０６１mmol）を加え、混合物を８０℃で１４時間撹拌した。混合物をセライトを通して濾過し、セライトをＥｔＯＡｃ（３×２５mL）で洗浄した。濾液を蒸発させＣＨ_２Ｃｌ_２（５０mL）を加えた。得られた混合物を水及びブラインで洗浄した。有機層を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、３０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、６−tert−ブチル−２−［４−（２，６−ジクロロ−ピリジン−４−イル）−２−フルオロ−ベンジル］−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（２６０mg、４４％）を黄色の固体として与えた。ＭＳ：Ｃ_２４Ｈ_２０Ｃｌ_２Ｆ_２Ｎ_３Ｏ［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４７４、実測値４７４。

工程４：６−tert−ブチル−２−｛４−［２−クロロ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリジン−４−イル］−２−フルオロ−ベンジル｝−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン

密閉可能な管中の、６−tert−ブチル−２−［４−（２，６−ジクロロ−ピリジン−４−イル）−２−フルオロ−ベンジル］−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（１６０mg、０．３４mmol）、１−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール（Aldrichから入手可能；５６mg、０．２７mmol）、Ｋ_２ＣＯ_３（１４０mg、１．０１mmol）及びＤＭＦ（３mL）の混合物をアルゴンで３０分間パージした。Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（３９mg、０．０３mmol）を加え、混合物を１０分間パージした。管を密閉し、１００℃で１６時間加熱した。反応混合物を冷やし、水（５mL）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×２０mL）で抽出した。有機層を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、２０〜５０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、６−tert−ブチル−２−｛４−［２−クロロ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリジン−４−イル］−２−フルオロ−ベンジル｝−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（６５mg、３７％）を黄色のガム状物として与えた。ＭＳ：Ｃ_２８Ｈ_２５ＣｌＦ_２Ｎ_５Ｏ［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値５２０、実測値５２０。

工程５：６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛２−フルオロ−４−［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル］−ベンジル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オン

６−tert−ブチル−２−｛４−［２−クロロ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリジン−４−イル］−２−フルオロ−ベンジル｝−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（６５mg、０．１２５mmol）と１０M ＨＣｌ（７mL）との混合物を１３０℃で９６時間加熱した。反応混合物を濃縮し、氷水（５mL）を残留物に加えた。得られた混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液の添加によって中和した。混合物をＥｔＯＡｃ（３×２５mL）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物を、分取ＨＰＬＣ（カラム＝XTerra C18（250x19mm）１０μ、流速＝１４．０mL／分、水、ＣＨ_３ＣＮ中の５mM ＮＨ_４ＯＡｃ）によって精製して、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛２−フルオロ−４−［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル］−ベンジル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オン（１７mg、２７％）をオフホワイトの固体として与えた。ＭＳ：Ｃ_２８Ｈ_２６Ｆ_２Ｎ_５Ｏ_２［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値５０２、実測値５０２．４。¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 11.72(s, 1 H), 8.45(d, J=2.4 Hz, 1 H), 8.41(s, 1 H), 8.15(s, 1 H), 7.80(s, 1 H), 7.63 - 7.76(m, 2 H), 7.55(d, J=8.3 Hz, 1 H), 7.35(t, J=8.1 Hz, 1 H), 6.86(br. s., 1 H), 6.46(s, 1 H), 5.38(s, 2 H), 3.87(s, 3 H), 1.36(s, 9 H).

実施例Ｉ−７
４−tert−ブチル−Ｎ−［２−メチル−３−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−フェニル］−ベンズアミド

工程１：２−メトキシ−４−（２−メチル−３−ニトロ−フェニル）−ピリジン

実施例Ｉ−１工程２に記載したものと類似の条件を使用して、４−ブロモ−２−メトキシ−ピリジン（Oakwood Products, Inc., 1741 Old Dunbar Road, West Columbia, SC 29172, USAから入手可能；５００mg、２．２６mmol）を２−メチル−３−ニトロフェニルボロン酸（Combi-Blocks Inc., 7949 Silverton Avenue, Suite 915, San Diego, CA 92126, USAから入手可能；６０．４mg、０．４９mmol）と反応させて、２−メトキシ−４−（２−メチル−３−ニトロ−フェニル）−ピリジン（４２０mg、６５％）を白色の固体として与えた。

工程２：３−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−２−メチル−フェニルアミン

ＭｅＯＨ（１０mL）中の２−メトキシ−４−（２−メチル−３−ニトロ−フェニル）−ピリジン（１００mg、０．４１mmol）と１０％パラジウム−炭素（１０mg）との混合物を、水素風船を室温で２時間使用して水素化した。混合物をセライトを通して濾過し、セライトをＭｅＯＨで洗浄した。合わせた濾液を蒸発させて、３−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−２−メチル−フェニルアミン（８０mg、９１％）を白色の固体として与えた。ＭＳ：Ｃ_１３Ｈ_１５Ｎ_２Ｏ［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値２１５、実測値２１５。

工程３：４−tert−ブチル−Ｎ−［３−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−２−メチル−フェニル］−ベンズアミド

ＣＨ_２Ｃｌ_２（１５mL）中の４−tert−ブチル−安息香酸（Aldrichから入手可能；１９７mg、１．１２mmol）の溶液、トリエチルアミン（０．１４mL、２．８mmol）及びＨＡＴＵ（Aldrichから入手可能；５３２mg、１．４mmol）を室温で３０分間撹拌した。３−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−２−メチル−フェニルアミン（２００mg、０．９３mmol）を加え、混合物を室温で１８時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液を加えた。有機相を分離し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、１０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、４−tert−ブチル−Ｎ−［３−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−２−メチル−フェニル］−ベンズアミド（１１０mg、３１％）を黄色のガム状物として与えた。ＭＳ：Ｃ_２４Ｈ_２７Ｎ_２Ｏ_２［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値３７５、実測値３７５。

工程４：４−tert−ブチル−Ｎ−［２−メチル−３−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−フェニル］−ベンズアミド

０℃の１，２−ジクロロエタン（１５mL）中の４−tert−ブチル−Ｎ−［３−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−２−メチル−フェニル］−ベンズアミド（１１５mg、０．３mmol）の撹拌した溶液に、ＰＢｒ_３（９７．７mg、０．８９mmol）をゆっくりと加えた。混合物を還流温度で４時間加熱した。氷水を、続いて１０％ＮａＨＣＯ_３水溶液（５mL）を加えた。混合物を５％ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出し、有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、５％のＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）によって精製して、４−tert−ブチル−Ｎ−［２−メチル−３−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−フェニル］−ベンズアミド（１５mg、１４％）を白色の固体として与えた。ＭＳ：Ｃ_２３Ｈ_２５Ｎ_２Ｏ_２［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値３６１、実測値３６１。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 11.81(br. s. , 1 H), 7.96(d, J=7.8 Hz, 1 H), 7.84(d, J=8.3 Hz, 2 H), 7.71(s, 1 H), 7.53(d, J=8.8 Hz, 2 H), 7.30 - 7.39(m, 2 H), 7.08(d, J=7.3 Hz, 1 H), 6.52(s, 1 H), 6.26(dd, J=6.6, 1.7 Hz, 1 H), 2.25(s, 3 H), 1.36(s, 9 H).

実施例Ｉ−８
６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［３−ヒドロキシメチル−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン

工程１：２−ブロモ−５−ブロモメチル−安息香酸

ＣＨ_３ＣＮ（３０mL）中の２−ブロモ−５−メチル−安息香酸（Aldrichから入手可能；１．０ｇ、４．６５mmol）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１．２４ｇ、６．９８mmol）及び過酸化ベンゾイル（２３mg、０．０９mmol）の混合物を還流温度で一晩加熱した。反応混合物を濃縮し、残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、１０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、２−ブロモ−５−ブロモメチル−安息香酸（１．２ｇ、８７％）を明黄色の固体として与えた。ＭＳ：Ｃ_８Ｈ_７Ｂｒ_２Ｏ_２［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値２９３、実測値２９３。ＮＭＲはわずかな不純物の存在を示しているが、この物質を次の工程で直接使用した。

工程２：（２−ブロモ−５−ブロモメチル−フェニル）−メタノール

ＢＨ_３−ＤＭＳ（ＴＨＦ中２M溶液、６．１mL、１２．２mmol）を、窒素下、ＴＨＦ（１５mL）中の２−ブロモ−５−ブロモメチル−安息香酸（１．２ｇ、４．０８mmol）の０℃の溶液に加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。ＭｅＯＨ及び氷水を加え、混合物を濃縮した。ＥｔＯＡｃ（１００mL）を加え、混合物を水（１０mL）及びブライン（１０mL）で洗浄した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させて、粗の（２−ブロモ−５−ブロモメチル−フェニル）−メタノール（１．２ｇ）を白色の固体として与え、これを精製することなく次の工程で直接使用した。

工程３：１−ブロモ−４−ブロモメチル−２−メトキシメトキシメチル−ベンゼン

ＣＨ_２Ｃｌ_２（３０mL）中の粗の（２−ブロモ−５−ブロモメチル−フェニル）−メタノール（工程２から；０．９５ｇ、〜３．４mmol）の冷却した（０℃）溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．６６ｇ、５．１mmol）及びメチルクロロメチルエーテル（０．３４ｇ、４．２４mmol）を窒素下で加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。ＣＨ_２Ｃｌ_２（５０mL）を加え、混合物をＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、２〜５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、１−ブロモ−４−ブロモメチル−２−メトキシメトキシメチル−ベンゼン（２７５mg、２５％）を無色の液体として与えた。

工程４：２−（４−ブロモ−３−メトキシメトキシメチル−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン

ＤＭＦ（３mL）中のＮａＨ（６０％、１４５mg、３．６３mmol）の懸濁液に、ＤＭＦ（２mL）中の６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（これは、Berthel, S. et al. US 20100222325 Column 139に記載されているように調製してもよい；４００．０mg、１．８２mmol）の溶液を０℃で滴下した。混合物を室温で５分間撹拌し、次に７０℃で３０分間加熱した。混合物を室温に冷やし、ＤＭＦ（２mL）中の１−ブロモ−４−ブロモメチル−２−メトキシメトキシメチル−ベンゼン（６８４mg、２mmol）の溶液を加え、混合物を室温で４時間撹拌した。水（５mL）を加え、混合物をＥｔＯＡｃ（３×２０mL）で抽出した。合わせた有機層を水（３×５mL）及びブライン（５mL）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、１２％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、２−（４−ブロモ−３−メトキシメトキシメチル−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（２３０mg、２７％）を黄色のガム状物として与えた。ＭＳ：Ｃ_２２Ｈ_２５ＢｒＦＮ_２Ｏ_３［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４６３、実測値４６２．８。

工程５：６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［３−メトキシメトキシメチル−４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン

密閉可能な管中のＤＭＥ（１．５mL）中の２−（４−ブロモ−３−メトキシメトキシメチル−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（１８５mg、０．４mmol）の溶液をアルゴンで１０分間パージした。Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（５mg、０．００４mmol）を加え、混合物をアルゴンで１０分間パージした。Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液（０．４mL、０．８mmol）を加え、管をアルゴンで５分間パージした。溶液を室温で５分間撹拌し、ＥｔＯＨ（１．５mL）中の２−メトキシ−ピリジン−４−ボロン酸（Oakwood Products, Inc., 1741 Old Dunbar Road, West Columbia, SC 29172, USAから入手可能；７５mg、０．４９mmol）の溶液を加えた。混合物をアルゴンで５分間パージし、蓋をし、９０℃で１時間加熱した。混合物をセライトを通して濾過し、セライトをＣＨ_２Ｃｌ_２で洗浄した。濾液を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、１５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［３−メトキシメトキシメチル−４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（６５mg、３３％）を黄色のガム状物として与えた。ＭＳ：Ｃ_２８Ｈ_３１ＦＮ_３Ｏ_４［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４９２、実測値４９２．２。

工程６：６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［３−ヒドロキシメチル−４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン

ジオキサン（１０mL）中の６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［３−メトキシメトキシメチル−４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（６８mg、０．１３８mmol）の溶液を０℃に冷却し、ジオキサン中の４M ＨＣｌの溶液（０．７mL、２．８mmol）を滴下した。混合物を室温で４時間撹拌し、次に溶媒を蒸発させた。飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液を加えてｐＨを８にし、混合物をＥｔＯＡｃ（３×１５mL）で抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ抽出物を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させて、粗の６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［３−ヒドロキシメチル−４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（３７mg）をガム状物として与え、これを更に精製することなく次の工程で直接使用した。ＭＳ：Ｃ_２６Ｈ_２７ＦＮ_３Ｏ_３［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４４８、実測値４４８．０。

工程７：６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［３−ヒドロキシメチル−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン

ＣＨ_３ＣＮ（５mL）中の粗の６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［３−ヒドロキシメチル−４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（工程６から；３７mg、０．０８mmol）、トリメチルシリルクロリド（０．０１７ｇ、０．１５７mmol）及びＮａＩ（１７．４mg、０．１２mmol）の混合物を還流温度で３時間加熱し、次に濃縮した。Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液（１mL）を、続いて飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（２mL）を加えた。混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（３×１５mL）で抽出し、合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、１〜２％のＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）によって精製して、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［３−ヒドロキシメチル−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（１５mg、２５％）をオフホワイトの固体として与えた。ＭＳ：Ｃ_２５Ｈ_２５ＦＮ_３Ｏ_３［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４３４、実測値４３４．０。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 10.78(s, 1 H), 8.11(d, J=2.4 Hz, 1 H), 7.64(s, 1 H), 7.39 - 7.49(m, 3 H), 6.53(s, 1 H), 6.30(d, J=5.9 Hz, 1 H), 5.39(s, 2 H), 4.61(s, 2 H), 1.37(s, 9 H).

実施例Ｉ−９
６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−フルオロ−５−ヒドロキシメチル−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン

工程１：２−ブロモ−４−フルオロ−５−メチル−安息香酸

５０％水性ジオキサン（９６mL）中の２−ブロモ−４−フルオロ−５−メチル−ベンズアルデヒド（3B Scientific Corporation, 1840 Industrial Drive, Suite 160, Libertyville, IL 60048, USAから入手可能；１．０ｇ、４．６１mmol）、スルファミン酸（２．６８ｇ、２７．６５mmol）、亜塩素酸ナトリウム（５３９mg、６mmol）及びＫＨ_２ＰＯ_４（７．５２ｇ、５５．３mmol）の混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を濃縮し、水（２０mL）を加えた。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（３×２５０mL）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させて２−ブロモ−４−フルオロ−５−メチル−安息香酸（１．０ｇ、９３％）をオフホワイトの固体として与えた。ＭＳ：Ｃ_８Ｈ_７ＢｒＦＯ_２［（Ｍ−Ｈ）⁻］の理論値２３１、実測値２３１．０。

工程２：２−ブロモ−５−ブロモメチル−４−フルオロ−安息香酸

ＣＨ_３ＣＮ（１０mL）中の２−ブロモ−４−フルオロ−５−メチル−安息香酸（０．５ｇ、２．１４mmol）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（３８１mg、２．１５mmol）及び過酸化ベンゾイル（１０mg、０．０４mmol）の混合物を還流温度で４時間加熱した。反応混合物を０℃に冷却し、５％の水性Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３を加えた。ＣＨ_３ＣＮを蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃ（３×１００mL）で抽出した。合わせた有機相を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、２〜２０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、２−ブロモ−５−ブロモメチル−４−フルオロ−安息香酸（５００mg、７４％）を与えた。ＭＳ：Ｃ_８Ｈ_６Ｂｒ_２ＦＯ_２［（Ｍ−Ｈ）⁻］の理論値３０９、実測値３０８．６。

工程３：（２−ブロモ−５−ブロモメチル−４−フルオロ−フェニル）−メタノール

ＢＨ_３−ＤＭＳ（ＴＨＦ中２M溶液、１．９mL、３．８mmol）を、ＴＨＦ（５mL）中の２−ブロモ−５−ブロモメチル−４−フルオロ−安息香酸（４００mg、１．２８mmol）の０℃の溶液に窒素下で加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。ＭｅＯＨ及び氷水を加え、混合物を濃縮した。ＥｔＯＡｃ（５０mL）を加え、混合物を水（５mL）及びブライン（５mL）で洗浄した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させて（２−ブロモ−５−ブロモメチル−４−フルオロ−フェニル）−メタノール（３２０mg、８４％）を白色の固体として与え、これを精製することなく次の工程で直接使用した。

工程４：２−（４−ブロモ−２−フルオロ−５−ヒドロキシメチル−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン

ＮａＨ（６０％、１０８mg、２．７２mmol）を、ＤＭＦ（３mL）中の６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（これは、Berthel, S. et al. US 20100222325 Column 139に記載されているように調製してもよい；３００．０mg、１．３６mmol）の溶液に０℃で少しずつ加えた。混合物を７０℃で３０分間加熱した。混合物を室温に冷却し、ＤＭＦ（２mL）中の（２−ブロモ−５−ブロモメチル−４−フルオロ−フェニル）−メタノール（２０３mg、０．６８mmol）の溶液を加え、混合物を室温で２．５時間撹拌した。水（５mL）を加え、混合物をＥｔＯＡｃ（３×１５mL）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製して、２−（４−ブロモ−２−フルオロ−５−ヒドロキシメチル−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（５９mg、１０％）を与えた。ＭＳ：Ｃ_２０Ｈ_２０ＢｒＦ_２Ｎ_２Ｏ_２［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４３７、実測値４３６．８。

工程５：６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−フルオロ−５−ヒドロキシメチル−４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン

２０％水性ジオキサン（１１mL）中の２−（４−ブロモ−２−フルオロ−５−ヒドロキシメチル−ベンジル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（５５mg、０．１３mmol）の撹拌した溶液に、２−メトキシ−ピリジン−４−ボロン酸（Oakwood Products, Inc., 1741 Old Dunbar Road, West Columbia, SC 29172, USA米国から入手可能；２３mg、０．１５３mmol）、Ｋ_２ＣＯ_３（３５mg、０．２５mmol）、及びトリシクロヘキシルホスフィン（１mg、０．００５mmol）を加えた。混合物をアルゴンで２０分間パージし、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３（５mg、０．００５mmol）を加えた。混合物を１００℃で４時間加熱した。混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（３０mL）を加えた。得られた混合物を水（３×５mL）及びブライン（５mL）で洗浄した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、１０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−フルオロ−５−ヒドロキシメチル−４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（５６mg、９５％）を黄色のガム状物として与えた。ＭＳ：Ｃ_２６Ｈ_２６Ｆ_２Ｎ_３Ｏ_３［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４６６、実測値４６６．０。

工程６：６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−フルオロ−５−ヒドロキシメチル−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン

ＣＨ_３ＣＮ（５mL）中の６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−フルオロ−５−ヒドロキシメチル−４−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（５５mg、０．１２mmol）、トリメチルシリルクロリド（２４mg、０．２２mmol）及びＮａＩ（２５mg、０．１７mmol）の混合物を還流温度で３時間加熱し、次に蒸発させた。５％Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液（１mL）、続いて飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（２mL）を加えた。混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（３×１５mL）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、１〜５％のＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）によって精製して、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−フルオロ−５−ヒドロキシメチル−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（３３mg、６２％）をオフホワイトの固体として与えた。ＭＳ：Ｃ_２５Ｈ_２４Ｆ_２Ｎ_３Ｏ_３［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４５２、実測値４５２．０。¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 11.67(br. s. , 1 H), 8.46(d, J=2.4 Hz, 1 H), 7.81(s, 1 H), 7.74(d, J=13.2 Hz, 1 H), 7.37 - 7.44(m, 2 H), 7.12(d, J=10.3 Hz, 1 H), 6.28(s, 1 H), 6.19(d, J=6.4 Hz, 1 H), 5.36(s, 2 H), 5.20(t, J=5.4 Hz, 1 H), 4.32(d, J=5.4 Hz, 2 H), 1.36(s, 9 H).

実施例Ｉ−１０
２−tert−ブチル−５−｛２−フルオロ−４−［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル］−ベンジル｝−４，５−ジヒドロ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−６−オン

工程１：３−メチル−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル

ＭｅＯＨ（２１１mL）中の３−メチルチオフェン−２−カルボン酸（Aldrichから入手可能；１５ｇ、１０６mmol）の懸濁液を０℃に冷却した。濃硫酸（６mL、１１３mmol）を滴下し、混合物を室温で３日間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃと飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液とに分配した。有機相を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させて褐色の油状物を得たが、これは、ＮＭＲによると、所望のメチルエステル（８４％）及び出発物質（１６％）の混合物を含んでいた。粗生成物をＥｔＯＡｃに溶解し、溶液を１M 水性ＮａＯＨで洗浄した。有機相を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させて、３−メチル−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（１３．６ｇ、８２％）を明褐色の油状物として与えた。¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ ppm 7.39(d, J=5.09 Hz, 1 H), 6.92(d, J=5.20 Hz, 1 H), 3.87(s, 3 H), 2.57(s, 3 H).

工程２：５−tert−ブチル−３−メチル−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル

アルゴン下のＡｌＣｌ_３（１７．３ｇ、１３０mmol）とＣＨ_２Ｃｌ_２（２０mL）との混合物を−７８℃に冷却した。ＣＨ_２Ｃｌ_２（１０mL）中の３−メチルチオフェン−２−カルボン酸メチル（１３．５ｇ、８６．４mmol）の溶液を５分間かけて滴下した。反応混合物を−７８℃で５分間撹拌した。ＣＨ_２Ｃｌ_２（１０mL）中の２−クロロ−２−メチルプロパン（Aldrichから入手可能；９．９mL、９０．７mmol）の溶液を３０分間かけて冷反応混合物に滴下した。反応混合物を室温温まるにまかせ、週末にかけて撹拌した。次に反応混合物を氷水に注いだ。有機相を分離し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、濃縮した。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、５−tert−ブチル−３−メチル−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（７．０５ｇ、３８％）を黄色の油状物として与えた。¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ ppm 6.68(s, 1 H), 3.84(s, 3 H), 2.50(s, 3 H), 1.38(s, 9 H).

工程３：３−ブロモメチル−５−tert−ブチル−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル

３−メチル−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（６．０６ｇ、２８．５mmol）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（６．１ｇ、３４．３mmol）、ＡＩＢＮ（２３４mg、１．４３mmol）及びＣＣｌ_４（８０mL）の混合物を９０℃で一晩加熱した。反応混合物を冷やし、濾過した。濾液を濃縮し、残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して３−ブロモメチル−５−tert−ブチル−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（２．６５ｇ、３２％）を黄色の油状物として与えた。第１カラムからの混合画分を濃縮し、クロマトグラフィー（シリカゲル、５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、３−ブロモメチル−５−tert−ブチル−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（２．５４ｇ、３０％）を与えた。¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ ppm 6.93(s, 1 H), 4.87(s, 2 H), 3.88(s, 3 H), 1.39(s, 8 H).

工程４：５−tert−ブチル−３−（｛２−フルオロ−４−［２−メトキシ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリジン−４−イル］−ベンジルアミノ｝−メチル）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル

３−ブロモメチル−５−tert−ブチル−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（１３０mg、４４６μmol）、２−フルオロ−４−［２−メトキシ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリジン−４−イル］−ベンジルアミン（これは、上記中間体の部の合成に記載したように調製してもよい；０．３７５ｇ、１．２mmol）、Ｃｓ_２ＣＯ_３（３９０mg、１．２mmol）、及びアセトニトリル（７mL）の混合物を室温で週末にかけて撹拌した。反応混合物を濾過し、混合物をシリカゲルで濃縮した。残留物を８０ｇのシリカゲルカラムに装填し、カラムを５０〜１００％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離して、５−tert−ブチル−３−（｛２−フルオロ−４−［２−メトキシ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリジン−４−イル］−ベンジルアミノ｝−メチル）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（６０mg、２６％）を無色の油状物として与えた。ＭＳ：Ｃ_２８Ｈ_３２ＦＮ_４Ｏ_３Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値５２３、実測値５２３．３。

工程５：５−tert−ブチル−３−（｛２−フルオロ−４−［２−メトキシ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリジン−４−イル］−ベンジルアミノ｝−メチル）−チオフェン−２−カルボン酸

５−tert−ブチル−３−（｛２−フルオロ−４−［２−メトキシ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリジン−４−イル］−ベンジルアミノ｝−メチル）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（６０mg、１１５μmol）、水酸化リチウム一水和物（２５．３mg、５７４μmol）、ＴＨＦ（１mL）及び水（１mL）の混合物を６０℃で１８時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、ＴＨＦを蒸発させた。水（１０mL）を加えた。水性１M ＨＣｌを、白色の懸濁液が形成されるまで加えた。混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させて、５−tert−ブチル−３−（｛２−フルオロ−４−［２−メトキシ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリジン−４−イル］−ベンジルアミノ｝−メチル）−チオフェン−２−カルボン酸（４５mg、７７％）を白色の固体として与えた。ＭＳ：Ｃ_２７Ｈ_３０ＦＮ_４Ｏ_３Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値５０９、実測値５０９．３。粗生成物を、更に精製することなく次の工程に用いた。

工程６：２−tert−ブチル−５−｛２−フルオロ−４−［２−メトキシ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリジン−４−イル］−ベンジル｝−４，５−ジヒドロ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−６−オン

５−tert−ブチル−３−（｛２−フルオロ−４−［２−メトキシ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリジン−４−イル］−ベンジルアミノ｝−メチル）−チオフェン−２−カルボン酸（４５mg、８８．５μmol）、ＰＹＢＯＰ（６０mg、１１５μmol）、ＤＩＰＥＡ（５０μL、２８６μmol）、及びＤＭＦ（２．０mL）の混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を窒素流下で蒸発させた。ＥｔＯＡｃ（１０mL）を加え、溶液を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄した。有機相を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させて２−tert−ブチル−５−｛２−フルオロ−４−［２−メトキシ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリジン−４−イル］−ベンジル｝−４，５−ジヒドロ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−６−オン（７７mg、１７７％）を与えた。ＭＳ：Ｃ_２７Ｈ_２８ＦＮ_４Ｏ_２Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）^＋］の理論値４９１、実測値４９１．３。粗生成物を更に精製することなく次の工程で使用した。

工程７：２−tert−ブチル−５−｛２−フルオロ−４−［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル］−ベンジル｝−４，５−ジヒドロ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−６−オン

ＣＨ_３ＣＮ（２mL）中の粗の２−tert−ブチル−５−｛２−フルオロ−４−［２−メトキシ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリジン−４−イル］−ベンジル｝−４，５−ジヒドロ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−６−オン（粗、工程６から；７７mg、およそ８８．５μmol）、トリメチルシリルクロリド（４０μL、０．３２mmol）及びＮａＩ（４７mg、０．３１mmol）の混合物を８０℃で２時間加熱し、次に室温に冷やした。ＥｔＯＡｃ（１０mL）を加え、続いて１M Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液（５mL）を、続いて飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（２mL）を加えた。有機相を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、１％ＮＨ_４ＯＡｃを含む０〜５％のＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）によって精製して、２−tert−ブチル−５−｛２−フルオロ−４−［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル］−ベンジル｝−４，５−ジヒドロ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−６−オン（３５mg、４７％）を明黄色の粉末として与えた。ＭＳ：Ｃ_２６Ｈ_２６ＦＮ_４Ｏ_２Ｓ［（Ｍ＋１）^＋］の理論値４７７、実測値４７７．２。¹H NMR(300 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 11.75(s, 2 H), 8.42(s, 1 H), 8.16(s, 1 H), 7.57 - 7.73(m, 3 H), 7.37(t, J=8.1 Hz, 1 H), 7.03(s, 1 H), 6.47(br. s., 1 H), 5.76(s, 1 H), 4.75(s, 2 H), 4.33(s, 2 H), 3.88(s, 3 H), 2.96 - 3.06(m, 3 H), 1.73(t, J=6.5 Hz, 3 H), 1.37(s, 9 H).

生物学的実施例
ブルトン型チロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）阻害アッセイ
アッセイは、濾過による、放射活性^３３Ｐリン酸化製品の捕獲である。Ｂｔｋ、ビオチン化ＳＨ_２ペプチド基質（Ｓｒｃ相同性）、とＡＴＰとの相互作用は、ペプチド基質のリン酸化を導く。ビオチン化製品は、ストレプトアビジンセファロースビーズに結合する。全ての結合した放射標識製品を、シンチレーションカウンターにより検出する。

アッセイしたプレートは、９６ウェルのポリプロピレン（Greiner）、及び９６ウェルの１．２μm 親水性ＰＶＤＦフィルタープレート（Millipore）である。ここで報告した濃度は、最終アッセイ濃度：ＤＭＳＯ中の１０〜１００μM 化合物（Burdick and Jackson）、５〜１０nM Ｂｔｋ酵素（Ｈｉｓタグ標識、全量）、３０μM ペプチド基質（ビオチン−Ａｃａ−ＡＡＡＥＥＩＹＧＥＩ−ＮＨ_２）、１００μM ＡＴＰ（Sigma）、８mM イミダゾール（Sigma、pH７．２）、８mM グリセロール−２−ホスファート（Sigma）、２００μM ＥＧＴＡ（Roche Diagnostics）、１mM ＭｎＣｌ_２（Sigma）、２０mM ＭｇＣｌ_２（Sigma）、０．１mg/ml ＢＳＡ（Sigma）、２mM ＤＴＴ（Sigma）、１μCi ^３３Ｐ ＡＴＰ（Amersham）、２０％ ストレプトアビジンセファロースビーズ（Amersham）、５０mM ＥＤＴＡ（Gibco）、２M ＮａＣｌ（Gibco）、２M ＮａＣｌ ｗ／１％ リン酸（Gibco）、microscint-20（Perkin Elmer）である。

ＩＣ_５０決定値を、標準的な９６ウェルプレートアッセイテンプレートから生じたデータを用いて、化合物毎に１０カ所のデータポイントから計算する。１つの対照化合物、及び７つの未知の阻害剤を、それぞれのプレートにおいて試験し、それぞれのプレートを２回実施した。典型的には、化合物を、half-logで希釈し、これは、１００μMから出発し、３nMで終わるものであった。対照化合物は、スタウロスポリンであった。バックグラウンドを、ペプチド基質の不存下でカウントした。トータルの活性を、ペプチド基質の存在下で測定した。以下のプロトコールを用いて、Ｂｔｋ阻害を決定した。
１）試料調製：試験化合物を、アッセイバッファー（イミダゾール、グリセロール−２−ホスファート、ＥＧＴＡ、ＭｎＣｌ_２、ＭｇＣｌ_２、ＢＳＡ）中でhalf-log増加で希釈した。
２）ビーズ調製
ａ．）５００ｇで遠心分離することにより、ビーズを洗浄する。
ｂ．）ビーズを、ＰＢＳ、及びＥＤＴＡと再構成して、２０％ ビーズスラリーを生成する。
３）基質を含まない反応混合物（アッセイバッファー、ＤＴＴ、ＡＴＰ、^３３Ｐ ＡＴＰ）、及び基質を含む混合物（アッセイバッファー、ＤＴＴ、ＡＴＰ、^３３Ｐ ＡＴＰ、ペプチド基質）を、３０℃で１５分間予めインキュベートする。
４）酵素バッファー（イミダゾール、グリセロール−２−ホスファート、ＢＳＡ）中のＢｔｋ １０μL、及び試験化合物 １０μLを、室温で１０分間予めインキュベートして、アッセイを開始させる。
５）反応混合物 ３０μLを、基質と共に、又はなしで、Ｂｔｋ、及び化合物に加える。
６）トータルアッセイ混合物 ５０μLを、３０℃で３０分間インキュベートする。
７）アッセイ ４０μLを、フィルタープレート中のビーズスラリー １５０μLに移して、反応を止める。
８）３０分後、フィルタープレートを、以下の工程で洗浄する。
ａ．ＮａＣｌ ３×２５０μL
ｂ．１％ リン酸を含有するＮａＣｌ ３×２５０μL
ｃ．Ｈ_２Ｏ １×２５０μL
９）プレートを、６５℃で１時間、又は室温で一晩、乾燥させる。
１０）マイクロシンチ−２０ ５０μLを加え、^３３Ｐ（cpm）をシンチレーションカウンターにてカウントする。
生データ（cpm）からパーセント活性を計算する。
パーセント活性＝（試料−ｂｋｇ）／（トータル活性−ｂｋｇ）×１００
１部位用量応答Ｓ字状モデルを用いて、パーセント活性からＩＣ_５０を計算する。
ｙ＝Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（ｘ／Ｃ）Ｄ））））
ｘ＝化合物濃度、ｙ＝％活性、Ａ＝分、Ｂ＝最大、Ｃ＝ＩＣ_５０、Ｄ＝１（ヒル傾斜）。

ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害ＴＲ−ＦＲＥＴ（時間分解ＦＲＥＴ）アッセイ
このＢＴＫ競合アッセイは、ＦＲＥＴ（Forster／Fluorescence Resonance Energy Transfer）技術を用いて、ブルトン型チロシンキナーゼの不活性化状態について、化合物の能力（ＩＣ５０）を測定する。ＢＴＫ−Ｅｕ複合体を、氷上で１時間インキュベートし、その後、開始濃度５０nM BTK-Bioease（商標）：１０nM Ｅｕ−ストレプトアビジン（Perkin- Elmer、カタログ番号ＡＤ００６２）で用いた。アッセイバッファーは、２０mM ＨＥＰＥＳ（pH７．１５）、０．１mM ＤＴＴ、１０mM ＭｇＣｌ_２、３％ キナーゼ安定剤を含む、０．５mg/ml ＢＳＡ（Fremont Biosolutions、カタログ番号ＳＴＢ−Ｋ０２）からなっていた。１時間後、上記由来の反応混合物を、アッセイバッファー中１０倍希釈して、５nM ＢＴＫ：１nM Ｅｕ−ストレプトアビジン複合体（ドナーフルオロフォア）を作成した。次に、陰性対照でないＢＴＫ−Ｅｕのみを含む、０．１１nM ＢＴＫ−Ｅｕと０．１１nM Kinase Tracer 178（Invitrogen、カタログ番号ＰＶ５５９３）の混合物１８μlを、３８４ウェルの平底プレート（Greiner、７８４０７６）に文注した。アッセイで試験すべき化合物を、１０×濃度として調製し、half-log増加の連続希釈をＤＭＳＯ中にて行い、１０カ所曲線を作成した。ＦＲＥＴ反応を開始するために、ＤＭＳＯ中の１０×ストックとして調製した化合物をプレートに加え、プレートを、１４℃で１８〜２４時間インキュベートした。

インキュベート後、プレートを、BMG Pherastar Fluorescent plate reader（又は均等物）にて読み取り、これを用いて、ユーロピウムドナーフルオロフォア（放出６２０nm）、及びＦＲＥＴ（放出６６５nm）からの放出エネルギーを測定した。陰性対照ウェルの値を平均化して、平均最小値を得た。陽性「阻害剤を含まない」対照ウェルを平均化して、平均最大値を得た。最大ＦＲＥＴの割合を、以下の方程式：
％最大ＦＲＥＴ＝１００×［（ＦＳＲ_化合物−ＦＳＲ_{平均最小値}）／（ＦＳＲ_{平均最大値}−ＦＳＲ_{平均最小値}）］
（式中、ＦＳＲ＝ＦＲＥＴシグナル比）。％最大ＦＲＥＴ曲線を、活性ベースでプロットし（Excel）、ＩＣ５０（％）、ヒル傾斜、ｚ’、及び％ＣＶを決定した。平均ＩＣ５０、及び標準偏差を、デュプリケート曲線（２つの独立した希釈由来の一重項阻害曲線）から、Microsoft Excelを用いて、もたらす。

このアッセイの代表的な化合物データを、以下の表ＩＩに挙げる。

ＣＤ６９発現により測定する全血中のＢ細胞活性化の阻害
ヒト血液中のＢ細胞のＢ細胞受容体により仲介される活性化を抑制する、Ｂｔｋ阻害剤の能力を試験する方法は、以下の通りである。
以下の制限：２４時間薬物なし、非喫煙者の、健常ボランティアから、ヒト全血（ＨＷＢ）を得る。静脈穿刺により、ヘパリンナトリウムで抗凝固剤処理したVacutainer管に血液を集める。試験化合物を１０倍希釈し、ＰＢＳ中の所望の出発薬物濃度（２０×）、続いて連続３倍ＰＢＳ中の１０％ ＤＭＳＯを希釈して、９カ所の用量応答曲線を作成する。各化合物希釈液 ５．５μlを、デュプリケートで、２mlの９６ウェルＶ底プレート（Analytical Sales and Services、番号５９６２３−２３）に加え；ＰＢＳ中の１０％ ＤＭＳＯ ５．５μlを、対照ウェル、及び非刺激ウェルに加える。ＨＷＢ（１００μl）をそれぞれのウェルに加え、混合後、プレートを、３７℃、５％ ＣＯ_２、湿度 １００％で、３０分間、インキュベートする。ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＭ（Southern Biotech、番号２０２２−１４）（５００μg/ml 溶液 １０μl、終濃度５０μg/ml）を、混合しながら、それぞれのウェル（非刺激ウェル以外）に加え、プレートを更に２０時間インキュベートする。

２０時間のインキュベートの終わりに、試料を、蛍光プローブ標識抗体（ＰＥマウス抗ヒトＣＤ２０ １５μl、BD Pharmingen、番号５５５６２３、及び／又はＡＰＣマウス抗ヒトＣＤ６９ ２０μl、BD Pharmingen、番号５５５５３３）と、３７℃、５％ ＣＯ_２、湿度 １００％で、３０分間インキュベートする。調節補償、及び最初の電圧設定のため、誘導対照、未染色、及び単一染色を含む。次に、試料を、１×Pharmingen Lyse Buffer（BD Pharmingen、番号５５５８９９） １mlで溶解し、プレートを、１８００rpmで５分間遠心分離する。吸引により上清を取り除き、残るペレットを、更に１×Pharmingen Lyse Buffer １mlで再度溶解し、プレートを前述の通りスピンダウンする。上清をアスピレーションし、残るペレットを、ＦＡＣｓバッファー（ＰＢＳ＋１％ ＦＢＳ）にて洗浄する。最終スピン後、上清を取り除き、ペレットを、ＦＡＣｓバッファー １８０μlに再懸濁する。BD LSR IIフローサイトメーター上でのＨＴＳ９６ウェルシステムでの実行に適した９６ウェルプレートに、試料を移す。

用いるフルオロフォアに適した励起波長及び放出波長を用いて、データを取得し、Cell Quest Softwareを用いて、陽性細胞値の割合を得る。まず、FACS analysis software(Flow Jo)により、結果を分析する。試験化合物のＩＣ５０を、抗ＩｇＭの刺激後にＣＤ２０陽性でもある、ＣＤ６９陽性細胞の割合が５０％低減する濃度として定義する（８つの対照ウェルの平均、刺激なしのバックグラウンドについて８ウェルの平均を引いた後）。XLfit software version 3、equation 201を用いて、ＩＣ５０値を計算する。

Ｂ細胞活性化の阻害−Ramos細胞におけるＢ細胞ＦＬＩＰＲアッセイ
本発明の化合物によるＢ細胞の活性化の阻害を、抗ＩｇＭにより刺激されるＢ細胞応答に対する試験化合物の作用を決定することにより、示す。

Ｂ細胞ＦＬＩＰＲアッセイは、抗ＩｇＭ抗体による刺激由来の細胞内カルシウム増加の可能性のある阻害剤の作用を決定する、細胞ベースの機能的方法である。Ramos細胞（ヒトバーキットリンパ腫細胞株、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５９６）を、成長培地（後述）にて培養した。アッセイの１日前に、Ramos細胞を、新しい成長培地（上と同じ）に再懸濁し、組織培養フラスコ中、密度 ０．５×１０^６/mLにした。アッセイの日、細胞をカウントし、組織培養フラスコ中、１μM ＦＬＵＯ−３ＡＭ（TefLabs、カタログ番号０１１６、無水ＤＭＳＯ、及び１０％ プルロン酸中に調製）を添加した成長培地中の密度 １×１０^６/mLにし、３７℃（４％ ＣＯ_２）にて１時間インキュベートした。細胞外の染料を取り除くために、遠心分離（５分、１０００rpm）により細胞を集め、ＦＬＩＰＲバッファー（後述）に、１×１０^６細胞/mLで再懸濁し、次に、９６ウェルのポリ−Ｄ−リジンコート黒色／透明プレート（ＢＤ、カタログ番号３５６６９２）に、１ウェル当たり１×１０^５細胞で文注した。試験化合物を、１００μM〜０．０３μMの範囲の種々の濃度（７種の濃度、詳細は以下）で加え、そのまま、細胞と室温で３０分間インキュベートした。Ramos細胞Ｃａ^２＋シグナル伝達を、１０μg/mL 抗ＩｇＭ（Southern Biotech、カタログ番号２０２０−０１）の添加により刺激し、ＦＬＩＰＲにて測定した（Molecular Devices、励起４８０nMのアルゴンレーザーを備えたＣＣＤカメラを用いて、９６ウェルプレートの像をとらえる）。

培地／バッファー：
成長培地：Ｌ−グルタミン（Invitrogen、カタログ番号６１８７０−０１０）、１０％ ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Summit Biotechnology、カタログ番号ＦＰ−１００−０５）；１mM ピルビン酸ナトリウム（Invitrogen、カタログ番号１１３６０−０７０）を含むＲＰＭＩ１６４０培地。

ＦＬＩＰＲバッファー：ＨＢＳＳ（Invitrogen、カタログ番号１４１１７５−０７９）、２mM ＣａＣｌ_２（Sigma、カタログ番号Ｃ−４９０１）、ＨＥＰＥＳ（Invitrogen、カタログ番号１５６３０−０８０）、２．５mM Probenecid（Sigma、カタログ番号Ｐ−８７６１）、０．１％ ＢＳＡ（Sigma、カタログ番号Ａ−７９０６）、１１mM グルコース（Sigma、カタログ番号Ｇ−７５２８）。

化合物希釈の詳細：
最高の最終アッセイ濃度 １００μMを達成するために、１０mM 化合物ストック溶液（ＤＭＳＯ中に作成） ２４μLを、ＦＬＩＰＲバッファー５７６μLに直接加える。試験化合物を、ＦＬＩＰＲバッファー（Biomek 2000 robotic pipettorを用いる）中に希釈し、以下の希釈スキーム：ビークル、１．００×１０^−４、１．００×１０^−５、３．１６×１０^−６、１．００×１０^−６、３．１６×１０^−７、１．００×１０^−７、３．１６×１０^−８Ｍで得る。

アッセイ及び分析：
カルシウムの細胞内増加を、最大−最小統計（Molecular Devices FLIPR対照を用いて、刺激抗体の添加により引き起こされるピークから、休止ベースラインを引くこと）、及び統計的エクスポートソフトウェアを用いて報告する。non-linear curve fit（GraphPad Prism software）を用いて、ＩＣ５０を決定した。

マウスコラーゲンにより誘発される関節炎（ｍＣＩＡ）
０日目に、マウスの尾部、又は背中に、フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）中のＩＩ型コラーゲン（ｉ．ｄ．）の乳剤を注射する。コラーゲン免疫後、動物は、およそ２１〜３５日目に、関節炎を発症する。２１日目に、フロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ；ｉ．ｄ．）中のコラーゲンの全身投与により、関節炎の発症はを同期した（ブーストした）。ブーストに対するシグナルである、中程度の関節炎（スコア１又は２；以下のスコア記載を参照）の任意の発症について、２０日後、動物を毎日調べた。ブースト後、マウスをスコア化し、候補治療剤で予め規定した時間（典型的には、２〜３週間）投与し、投与頻度は、毎日（ＱＤ）、又は１日２回（ＢＩＤ）である。

ラットコラーゲンにより誘発される関節炎（ｒＣＩＡ）
０日目に、フロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）中のウシＩＩ型コラーゲンの乳剤を、背中のいくつかの位置に、皮内注射（ｉ．ｄ．）した。およそ７日目に、尾部又は背中の別の部位に、コラーゲン乳剤のブースター注射を行った。一般的に、最初のコラーゲン注射の１２〜１４日後に、関節炎を観察する。後述（関節炎の評価）の通り、１４日以降、関節炎の発症について、動物を評価する。２回目の投与時に開始する予防的方法で、及び予め規定した時間（典型的には、２〜３週）、毎日（ＱＤ）、又は１日２回（ＢＩＤ）の投与頻度で、動物に、候補治療剤を投与する。

関節炎の評価：
両方のモデルにおいて、足及び下肢関節の炎症を、後述の基準に従い、４本の足の評価を含む、スコア決定システムを用いて、定量する。
スコア決定： １＝足又は１つの指の腫れ、及び／又は赤み
２＝２つより多い関節での腫れ
３＝２つより多い病変関節を伴った、足のひどい腫れ
４＝足及び指全体の重篤な関節炎。
ベースラインの測定のため、評価を０日目に行い、評価を、最初の兆候又は腫れの時点で再開し、実験の終わりまで、１週間当たり最大３回行う。それぞれのマウスの関節炎指標を、個々の足の４つのスコアを加えること（１匹の動物あたり最大１６となる）により、得る。

ラットインビボ喘息モデル
オスBrown-Norwaymラットを、ミョウバン０．２ml中のＯＡ（オブアルブミン）１００μgで、１週間に１回、３週間（０、７、及び１４日）腹腔内感作する。２１日目（最終感作の１週間後）に、ラットに、ビークル、又は化合物製剤のいずれかを１日４回皮下投与し、０．５時間後、ＯＡエアロゾル投与（１％ＯＡ、４５分間）し、投与の４又は２４時間後に終えた。屠殺時に、血清、及び血漿を、それぞれ、血清学、及びＰＫのため、全ての動物から採取した。気管カニューレを挿入し、肺を、３×ＰＢＳで洗浄する。ＢＡＬ体液を、トータルの白血球数、及び特異な白血球カウントについて分析する。細胞アリコート（２０〜１００μｌ）中のトータルの白血球数を、Coulter Counterにより決定する。特異な白血球カウントのため、試料 ５０〜２００μlを、Cytospinにて遠心分離し、Diff-Quikでスライド染色する。単球、好酸球、好中球、及びリンパ球の割合を、標準的形態学的基準を用いて、光学顕微鏡検査下でカウントし、パーセントとして表す。Ｂｔｋの代表的阻害剤は、対照レベルと比較して、ＯＡ感作及び投与ラットのＢＡＬ中のトータル白血球カウントの低減を示す。

前述の発明を、説明及び例示により、明確化かつ理解の目的のため、詳細に記載した。変更及び改変が、添付の請求の範囲内で行われ得ることは、当業者に明らかである。したがって、上述の記載は、説明であることが意図され、制限するものではないことは、理解されるべきである。それ故、本発明の範囲は、上記の記載を参照せずに決定され、代わりに、請求項が記載される均等発明の全範囲と共に、以下の添付の請求項を参照して、決定されるべきである。

本出願において引用される全ての特許、特許出願、及び刊行物は、個々の特許、特許出願、又は刊行物が、個別に示されているなら、本明細書において、引用により全体として、全ての目的のため、同程度に、取り込まれる。

Claims (9)

1. 式Ｉ
   

   

   
   （式中：
   Ａは、６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−２Ｈ−フタラジン−２-イルであり；
   それぞれのＲ^１は、独立して、Ｆ、又はヒドロキシメチルであり；
   ｍは、１であり；
   Ｒ^２は、メチルピラゾリルであり；
   ｎは、０であり；
   Ｘは、ＣＨ_２である）
   の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
2. ６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン；
   ６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−フルオロ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン；
   ６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−フェニル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン；
   ６−tert−ブチル−２−［２，６−ジフルオロ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン；
   ６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−ヒドロキシメチル−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン；
   ６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛２−フルオロ−４−［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル］−ベンジル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オン；
   ６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［３−ヒドロキシメチル−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン；及び
   ６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−フルオロ−５−ヒドロキシメチル−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−４−イル）−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン
   からなる群より選択される化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
3. 少なくとも１個の薬学的に許容し得る担体、賦形剤、又は希釈剤と混合された、請求項１又は２記載の化合物を含む、医薬組成物。
4. 炎症状態、及び／又は自己免疫状態を処置するための請求項３記載の医薬組成物。
5. 炎症状態を処置するための請求項３記載の医薬組成物。
6. 関節リウマチを処置するための請求項３記載の医薬組成物。
7. 喘息を処置するための請求項３記載の医薬組成物。
8. 炎症状態、及び／又は自己免疫状態の処置用医薬の製造のための、請求項１又は２記載の化合物の使用。
9. 炎症状態、及び／又は自己免疫状態の処置において使用するための、請求項１又は２記載の化合物。