JP6058726B2 - 血液凝固反応における血液凝固時間延長剤 - Google Patents
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Description
1)トロンビンを使用した血液凝固能検査
フィブリノゲン測定、ATIII測定、トロンビン時間測定
2)組織トロンボプラスチンを使用した血液凝固能検査
プロトロンビン時間測定、プロトロンビン時間を用いたII、V、VII、X因子の活性測定、複合因子測定(トロンボテスト・ヘパプラスチンテスト等)
3)リン脂質を使用した血液凝固能検査
部分トロンボプラスチン時間測定、活性化部分トロンボプラスチン時間測定、活性化部分トロンボプラスチン時間測定を用いたVIII、IX、XI、XII因子、プレカリクレイン、高分子キニノゲンの活性測定、蛇毒時間測定、蛇毒時間測定を用いたX因子の定量、希釈蛇毒時間測定を用いたループスアンチコアグラント(LA)測定、プロテインC活性測定、トロンボプラスチン生成試験
上記1)〜3)のいずれの検査においても、患者検体に血液凝固活性化剤等を含む試薬を混合することによる凝固の惹起から最終的にフィブリノゲンがフィブリンに転化し析出するまでの時間を測定する。
従って本発明の課題は、血液凝固反応における光学的変化量を減少させない血液凝固時間延長剤を含有する検体希釈液を提供することにある。このことによって、血液凝固能検査の正確性向上に寄与することができる。
プロトロンビン時間測定の場合、正常血漿(活性約100%)を測定したとき、9〜60秒、好ましくは9〜30秒、さらに好ましくは10〜16秒の凝固時間が得られるように反応液中に含有させることが好ましい。活性化部分トロンボプラスチン時間測定においては正常血漿を測定したとき、15〜80秒、好ましくは15〜60秒、さらに好ましくは20〜50秒の凝固時間が得られるように反応液中に含有させることが好ましい。その他の血液凝固能検査に関しても、測定方法に適した凝固時間が得られるように反応液中に含有させればよい。
合成高分子類の具体例としては、ポリビニルアルコール500、ポリビニルアルコール1500、ポリビニルアルコール2000等のポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール1500、ポリエチレングリコール2000、ポリエチレングリコール4000、ポリエチレングリコール6000、ポリエチレングリコール8000、ポリエチレングリコール20000等のポリエチレングリコール及びポリビニルピロリドン等を挙げることができる。これら合成高分子類は1種もしくは2種以上を組み合わせて用いることができる。これら合成高分子類の添加量は、特に限定されないが、検体希釈液中の濃度が0.001〜20W/V%であることが好適で、より好ましくは0.01〜10W/V%である。
また前記血液凝固能測定試薬には適当な防腐剤を添加してもよい。防腐剤としては、シプロフロキサシン、プロピオン酸、安息香酸ナトリウム、アジ化ナトリウム、プロクリン300等の中から1種もしくは2種以上を組み合わせて選択し用いることができる。また、必要に応じて塩化ナトリウム等の塩や、アミノ酸、糖等の一般的な安定化剤等を含ませてもよい。
上記に記載の濃度は、溶液品中の濃度を記載しているが、乾燥品等は使用時に水又は緩衝液等で溶解したときの濃度を記載している。
(凝固時間延長作用の確認)
トロンビン時間法で血漿検体中のフィブリノゲン濃度を測定する場合、一般的にトロンビンを血漿に添加して凝固時間を測定し、フィブリノゲン濃度既知の標準液による検量線から濃度を求める。手順としては、検体血漿10μLに対して90μLの検体希釈液を添加・混合した後、血液凝固活性化剤含有試薬として50μLのトロンビン含有試薬を添加し、凝固時間を測定する。
(血液凝固反応における光学的変化量の調整)
本発明の血液凝固時間延長剤であるベンザミジン塩酸塩と、従来の血液凝固時間延長剤である塩化ナトリウムの添加濃度を調節した検体希釈液(HEPES緩衝液pH7.5)を用いて、実施例1と同様に正常市販血漿を測定した。その結果、表2に示した如く、同程度の凝固時間が得られる散乱光の光学的変化量(散乱光強度変化量)の極大値(ΔH)を適宜所望の大きさに調整できることが判る。
Claims (9)
- ベンザミジン又はその誘導体を有効成分とする血液凝固反応における血液凝固時間延長剤を含有するとともに、トロンビンを含有しない、散乱光検出法による血液凝固能測定用検体希釈液。
- ベンザミジン又はその誘導体の濃度が5〜100mMである請求項1に記載の検体希釈液。
- 塩化ナトリウムをさらに含有する請求項1又は2に記載の検体希釈液。
- フィブリノゲン測定用検体希釈液である請求項1〜3いずれかに記載の血液凝固能測定用検体希釈液。
- ベンザミジン又はその誘導体を有効成分とする血液凝固反応における血液凝固時間延長剤を含有するとともに、トロンビンを含有しない吸光度変化量の減少抑制剤であって、散乱光測定に用いられることを特徴とする吸光度変化量の減少抑制剤。
- ベンザミジン又はその誘導体を有効成分とする血液凝固反応における血液凝固時間延長剤を含有するとともに、トロンビンを含有しない検体希釈液を、散乱光測定に用いることを特徴とする吸光度変化量減少の抑制方法。
- 血液凝固能の測定法であって、
(1)血漿検体を請求項1〜3に記載の希釈液で希釈する工程、
(2)前記、希釈された血漿検体に、血液凝固活性化剤試薬を添加する工程、
(3)前記、希釈された血漿検体と血液凝固活性化剤試薬の混合物の散乱光を測定し凝固時間を測定する工程
を含む、血液凝固能の測定法。 - 血液凝固能がフィブリノゲン測定、PTまたはAPTTのいずれかである、請求項7に記載の方法。
- 血液凝固活性化剤試薬がトロンビン含有試薬であり、血液凝固能がフィブリノゲン測定である、請求項7又は8に記載の方法。
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