JP6041454B2 - Dna含有インク組成物 - Google Patents
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Description
耐水性インク組成物の調製
耐水性インク(透明:大阪シーリング印刷株式会社より入手)とDNA溶液(10μg/μl、1μg /μl、100 ng /μl、10 ng /μl) のDNA濃度でTE(10 mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH 8.8)を1:1の割合で混合し、最終的なDNAの濃度が5μg/μl、500 ng/μl、50 ng/μl、5 ng/μlとなる耐水性インク組成物をそれぞれ得た。
耐水性インク組成物の調製
耐水性インク(透明:大阪シーリング印刷株式会社より入手)とDNA溶液(10μg/μl、1μg /μl)のDNA濃度でTE(10 mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH 8.8))を99:1の割合で混合し、最終的なDNAの濃度が100 ng/μl、10 ng/μlとなる耐水性インク組成物をそれぞれ得た。
耐水性インクとして黒(DELETER製のコミック用黒インク耐水性BLACK4を用い、実施例1と同様にして耐水性インク組成物を得た。
(実施例4)
耐水性インクとして黒(DELETER製のコミック用黒インク耐水性BLACK4を用い、実施例2と同様にして耐水性インク組成物を得た。
油性インクおよびDNAを含むインク組成物の調製
油性透明インク(坂田インク 油性透明インクブラウン 油性透明インクホワイト)3gにDNA溶液((10μgDNA/μl TE(10 mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH 8.8))10μlを混合し、最終的なDNAの濃度が33 μg/g となる油性インク組成物を得た。
油性インクおよびDNAを含むインク組成物の調製
比較例1の油性インク組成物10mgにトルエンを200μl加え、混ぜ合わせ最終的なDNAの濃度が1.15 ng/μlとなる油性DNAインク組成物を得た。
(比較例3)
油性透明インク(坂田インク 油性透明インクブラウン 油性透明インクホワイト)10 mgにトルエン200 μlを加え、良く混ぜ、そこへDNA溶液((1μgDNA/μl TE(10 mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH 8.8))を0.33μlを混合し、最終的なDNAの濃度が1.15 ng
/μl となる油性インク組成物を得た。
水性インクおよびDNAを含むインク組成物の調製
原液の水性黒色インク(DELETER製のコミック用黒インク水性BLACK)にDNA溶液(10μg/μl、1μg /μl、100 ng /μl、10 ng /μl のDNA濃度でTE(10 mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH 8.8))を1:1の割合で混合し、最終的なDNAの濃度が5μg/μl、500 ng/μl、50 ng/μl、5 ng/μl となる水性インク組成物を得た。
(比較例5)
水性インクとして黒(DELETER製のコミック用黒インク水性BLACK)を用い、DNA溶液(10μg/μl、TE(10 mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH 8.8))と99:1で混ぜ合わせ、最終的なDNA濃度が100 ng/μlの水性インク組成物を得た。
まず、それぞれのインク組成物に刷毛を使用して紙(コピー用紙 ジャスト)に塗布し、 室温暗所にて一晩よく乾燥させた。しかし、比較例1の油性インク組成物の場合は、インクの粘性が非常に高いため塗布してもうまく紙になじまず、操作を施すこと自体が難しかった。
次に水による回収について、抽出時間を変化させ調べた。実施例1のインク組成物について、抽出時間を2分、5分、10分、20分、30分とした場合を(30分については4回、他は2回)調べ、平均値を算出した。その結果を表2に示す。
実施例2、4の最終DNA濃度100 ng/μlの調製物0.2 μlを4mm2にスポットし、150℃10分で乾燥させ、一度1μlの水でスポットよりDNAを回収し、もう一度スポットを150℃10分で乾燥させ、別の1μlの水でDNAを回収、この操作を5回繰り返し、何回までPCRにより回収液中のDNAの増幅が可能であるのか調べた。この結果、実施例2の耐水性透明インクでは5回目の回収液からも1回目と同様の増幅量が観察された。これに対し、実施例4での耐水性黒色インクの場合では4回目の抽出物を使用したPCRから増幅量が極端に落ち、5回目の抽出物からはバンドが確認されない場合が生じた。耐水性透明インクでは6回目の抽出物からも増幅は観察されるが、耐水性黒色インクでは6回目でも観察される場合は多いものの、観察されない場合、観察されても量が少ない場合に分かれることが判明した。この結果、耐水性透明インクは何回も同一印刷面より解析することが可能であり、耐水性黒色インクについても3、4回の解析は可能であると思われる。また、特に耐水性透明インクにおいては、少量の水により処理した場合には少量のDNAが漏れ出てしまいはするが、解析に不可能となるほどに流出していくわけではないと考えられる。特に、耐水性透明インクの場合では(実施例2)耐水性検証により、スポットを48時間流水(水道水)により処理し、ポリエチレンの布で擦った後、もう一度乾燥させ、20μlの水によりスポットからDNAを回収しPCRにより確認すると、3回の検証のうち、3回全てにおいて、観察された。
次に、実施例1と4までの組成物をそれぞれ、2μlずつ1 cm2にできるだけ均一になるようにピペットマンを使用しながら塗り、一晩室温、暗所で乾燥させた後、剃刀を利用して、4mm2ずつ切り出し、この紙片を用いてPCRを行った。各々のPCRチューブには実施例1、3では0.4 ng、4ng、40 ng、400 ngのDNAが、実施例2、4では0.8ng、8 ng鋳型として加わったと想定される。PCR産物をアガロース電気泳動により調べると、実施例1,2,3では全ての場合において、増幅が確認されたが、実施例4では全ての場合において増幅は観察されなかった。この結果、耐水性透明DNAインクを塗布された4mm2の紙片自体を鋳型にPCRによるDNAの増幅が可能であることが判明し、耐水性黒色DNAインクでは、DNAの濃度が極端に低いと、不可能であることが判明した。また、比較例4でも同様にPCRチューブに0.4 ng、4ng、40 ng、400 ngのDNAが鋳型として加わったと想定される条件で、全ての場合において増幅は観察されなかった。
さらに、実際にインクの含量を上げたことで耐環境性の向上が期待できるのかどうかを調べるため、最もDNAに影響を及ぼすであろうと考えられる紫外線に対する耐性を調べた。実施例1〜3のインク組成物を、もしくは60度で16時間乾燥させた後、紫外線照射を開始し、数時間おきに4mm2ずつ使い捨ての剃刀で切り出し、この紙片をPCRチューブに加えた。実施例4では、紙片を加えたPCRが不可能であるので、0.2 μlを4mm2にスポットし、紫外線照射を開始し、数時間おきにスポットに対し水1μl10秒のせ、その4mm2上で軽くピペッティングを行なった後、液を回収しPCRチューブに加え、PCRにより目的のDNAの増幅が可能であるかどうかを判断の基準とした。その結果、実施例1および3では24時間で増幅されない場合が生じるのに対し、耐水性透明インクの場合では、4mm2当たりに8 ngさらにその1/10量の0.8 ngの場合(実施例2)であっても、24時間紫外線照射ではPCRによる増幅は確実に確認され、72時間照射後にはバンドが確認されなくなるものの、48時間後でも確認される場合も生じた。さらに黒色耐水性DNAインクでは、4mm2当たり20 ng、2 ngの場合を調べたところ(実施例4)、紫外線照射48時間後でも確実にPCRによる増幅が確認でき、さらに72時間後でも増幅が確実に確認できた。
Claims (9)
- DNAを含む耐水性インク組成物であって、
該耐水性インク組成物は、25℃において水をインク組成物に対して5重量%以上含み、25℃の水中に該耐水性インク組成物で作成した印刷物を48時間浸漬後取り出し、ポリエステル100%の布でこすり、インクの剥落を調べた場合に、ポリエステルの布にインクが浸透せず、印刷物の滲みが観察されない、耐水性インク組成物。 - 前記耐水性インク組成物が、耐水性インクとDNAとの混合物である請求項1記載の耐水性インク組成物。
- 水、着色料、樹脂、およびDNAを含む、請求項1または2記載の耐水性インク組成物。
- 前記樹脂が、ウレタン系樹脂、アクリル系樹脂、およびエポキシ系樹脂からなる群より選択される少なくとも1種である、請求項3記載の耐水性インク組成物。
- DNAの含有量が、インク組成物1μl当たり1ng以上20μg以下である、請求項1から4までのいずれかに記載のインク組成物。
- 媒体上の印字からDNAを抽出する方法であって、
a)請求項1から5までのいずれかに記載の耐水性インク組成物を用いて作成された印字に直接水または水溶液を接触させる工程;
b)1秒以上48時間以下放置する工程;および
c)該印字と水または水溶液との接触によって得られるDNA含有水溶液を回収する工程;
を含む方法。 - 前記媒体が、紙、プラスチック樹脂、または布地である、請求項6記載の方法。
- 媒体上の印字の真贋を鑑定する方法であって、
a)請求項1から5までのいずれかに記載の耐水性インク組成物を用いて作成された印字に直接水または水溶液とを接触させる工程;
b)1秒以上48時間以下放置する工程;
c)該印字と水または水溶液との接触によって得られるDNA含有水溶液を回収する工程;
および
d)回収したDNA含有水溶液中のDNAを分析する工程、
を含む、方法。 - 前記媒体が紙、プラスチック樹脂、または布地である、請求項8記載の方法。
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