KR100294374B1 - Ｄｎａ 함유 잉크 및 그의 제조방법 - Google Patents
Ｄｎａ 함유 잉크 및 그의 제조방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR100294374B1 KR100294374B1 KR1019990003017A KR19990003017A KR100294374B1 KR 100294374 B1 KR100294374 B1 KR 100294374B1 KR 1019990003017 A KR1019990003017 A KR 1019990003017A KR 19990003017 A KR19990003017 A KR 19990003017A KR 100294374 B1 KR100294374 B1 KR 100294374B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- dna
- ink
- pcr
- containing ink
- oil
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 54
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims description 87
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 39
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 claims description 39
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 14
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 claims description 11
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 claims description 10
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 claims description 9
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 4
- BMVXCPBXGZKUPN-UHFFFAOYSA-N 1-hexanamine Chemical group CCCCCCN BMVXCPBXGZKUPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 claims description 2
- HZUUNVDJHMHKKQ-UHFFFAOYSA-N n-methoxy-n-tritylhexan-1-amine Chemical group C=1C=CC=CC=1C(C=1C=CC=CC=1)(N(OC)CCCCCC)C1=CC=CC=C1 HZUUNVDJHMHKKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 9
- 238000012795 verification Methods 0.000 abstract description 5
- 239000003973 paint Substances 0.000 abstract description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 235
- 239000000976 ink Substances 0.000 description 145
- 239000000047 product Substances 0.000 description 28
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 21
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 16
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 15
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 10
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 10
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 7
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 7
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 7
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 7
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000007857 nested PCR Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000007639 printing Methods 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- UPGVKDBZVYEJRL-UHFFFAOYSA-N (2-methoxyphenyl)-diphenylmethanamine Chemical compound COC1=CC=CC=C1C(N)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 UPGVKDBZVYEJRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229940053010 pen-aqueous Drugs 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09D—COATING COMPOSITIONS, e.g. PAINTS, VARNISHES OR LACQUERS; FILLING PASTES; CHEMICAL PAINT OR INK REMOVERS; INKS; CORRECTING FLUIDS; WOODSTAINS; PASTES OR SOLIDS FOR COLOURING OR PRINTING; USE OF MATERIALS THEREFOR
- C09D11/00—Inks
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
본 발명은 수성잉크 또는 유성잉크에 개체-특이적 DNA를 혼합하여 잉크(도료)로서 사용하고, 전기 DNA의 검증에 재사용할 수 있는 DNA 함유 잉크에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 전기 DNA 함유 잉크로 제조한 인쇄물로부터 DNA를 정제하고 이를 주형으로 PCR 방법에 의해 DNA를 증폭하여 DNA를 검증하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 DNA 함유 잉크를 이용하면, 이용 개체의 고유한 DNA 정보가 담긴 인쇄물 및 각종 DNA 함유 잉크 함유 제품을 제조할 수 있는 바, 전기 DNA 함유 잉크를 포함하는 제품은 비밀 유지, 신원 확인, 진품 선별 및 희귀품 제조 등의 목적에 유용하게 사용할 수 있다.
Description
본 발명은 DNA 함유 잉크(ink) 및 그의 제조방법에 관한 것이다. 좀 더 구체적으로, 본 발명은 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)에 의해 증폭된 DNA를 수성 또는 유성잉크에 첨가해줌으로써 이들 잉크로 인쇄된 인쇄물의 진품여부를 정확하고 손쉽게 확인할 수 있으며, 또한 특정 유명인의 특정 DNA를 포함하는 잉크로 인쇄된 상품 로고를 부착한 제품을 제작함으로써 제품 광고 등에 활용할 수 있는 DNA를 포함하는 특수 잉크(도료) 및 그의 제조방법에 관한 것이다.
PCR은 생물체의 DNA중 특정 부위를 시험관내에서 선택적으로 증폭시킬 수 있는 방법으로(참조: Saiki, R.K. et al., Science, 230:1350-1354, 1985), 각종 유전자의 탐색, 클로닝(cloning), 염기서열결정(sequencing) 등 생명공학 관련 전 분야에서 폭넓게 사용되는 기술로서, DNA의 특정부위의 양끝에 있는 서열을 서로 상보적인 가닥으로 합성해 만든 프라이머(primer)와 원래의 주형 DNA(template)를 넣고 적정 조건에서 DNA 중합효소(DNA polymerase)를 넣어 주고 합성한 다음, 온도를 올려 합성된 양가닥(double strand)을 단일 가닥(single strand)으로 풀고, 다시 프라이머와 DNA 중합효소를 첨가하는 반응을 되풀이 하면 매 순환(cycle)마다 목적으로 하는 DNA가 2배씩 증폭이 되는 반응이다.
현재 PCR 방법은 각종 유전자의 탐색이나 염기서열 결정 등 생명공학 관련 전 분야에서 폭넓게 사용되는 기술이 되었으며, 유전자를 클로닝하고 발현시키는실험 및 연구용 목적은 물론, 점차 일상생활의 영역으로 그 적용범위를 광범위하게 넓혀가고 있다.
한편, 미국특허 제 5,139,812호에는 비밀 유지와 신원 및 진품 확인 등의 목적을 위하여 분자생물학적 기법을 도입하여 DNA 하이브리다이제이션 (hybridization) 기법을 이용하는 방법이 개시되어 있다. 그러나, 전기 종래기술의 경우, 단일가닥의 핵산을 다량 함유하는 용액을 제조하여 인쇄물 등에 이용하고, 전기 단일가닥 핵산을 하이브리다이제이션에 의해 검출하는 단계를 포함하는데, 실용화 과정에서 다음과 같은 단점이 노출되었다: 첫째, 하이브리다이제이션을 위하여 다량의 핵산이 요구되고; 둘째, 하이브리다이제이션의 조건이 까다롭기 때문에 인쇄물 등의 재질에 많은 제약이 초래되며; 셋째, 비특이적 결합(nonspecific binding)에 의한 불분명한 결과를 초래한다.
또한, 미국특허 제 5,599,578호와 미국특허 제 3,886,083호에는, 신원 확인이나 진품 표시 등의 목적으로 사용할 수 있는 기술과 제품(잉크)을 개시하고 있는 바, 이들 모두 가시광선으로는 보이지 않고 UV(ultraviolet)나 IR(infrared) 하에서만 눈에 보이는 UV 염료와 IR 염료, 또는 형광 색소(fluorescent pigment)를 이용하는 것일 뿐, 특정 개체의 고유성을 대표할 수 있는 방법은 포함되지 않았다.
따라서, 적은 양의 핵산을 사용하며, 간단한 단계에 의해 전기 핵산을 특이적으로 확인할 수 있고, 제약없이 광범위한 용도로 이용될 수 있으며, 동시에 개체의 고유성을 정확히 검증할 수 있는 기술을 개발하여야 할 필요성이 끊임없이 대두되었다.
이에, 본 발명자들은 DNA를 가지고 개체의 고유성 및 특이성을 효과적으로 나타낼 수 있는 기술을 확립하고자 예의 노력한 결과, PCR에 의해 증폭된 DNA를 다양한 종류의 수성잉크 또는 유성잉크에 혼합한 DNA 함유 잉크로 인쇄물을 제조하고, 전기 인쇄물로부터 DNA를 정제하였을 때, PCR 방법에 의해 전기 DNA를 재검증할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
결국, 본 발명의 주된 목적은 수성잉크 또는 유성잉크에 개체-특이적 DNA를 혼합하여 잉크(도료)로서 사용하고, 전기 DNA의 검증에 재사용할 수 있는 DNA 함유 잉크를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 전기 DNA 함유 잉크로 제조한 인쇄물로부터 DNA를 정제하고 이를 주형으로 PCR 방법에 의해 DNA를 증폭하여 DNA를 검증하는 방법을 제공하는 것이다.
도 1은 일반 프라이머, 아민(amine) 프라이머, MMT(monomethoxytrityl)-아민 프라이머를 이용한 베타-엑틴(beta-actin) DNA의 PCR 방법에 의한 증폭효율을 나타내는 아가로오스 젤 사진이다.
도 2는 일반프라이머, 아민 프라이머, MMT-아민 프라이머를 이용하여 PCR 증폭 DNA의 재 PCR에 의한 검출 효율을 비교한 아가로오스 젤 사진이다.
도 3은 DNA를 포함하는 만년필용 수성잉크로부터 정제된 DNA를 PCR 방법으로 확인한 아가로오스 젤 사진이다.
도 4는 DNA를 포함하는 스템프(stamp)용 수성잉크로부터 정제된 DNA를 PCR 방법으로 확인한 아가로오스 젤 사진이다.
도 5는 복사용지에 점적한 수성 DNA 함유 잉크로부터 정제된 DNA를 PCR 방법으로 확인한 아가로오스 젤 사진이다.
도 6은 여러종의 DNA를 포함하는 수성 DNA 함유 잉크로부터 정제된 DNA를 PCR 방법으로 확인한 아가로오스 젤 사진이다.
도 7은 유성 DNA 함유 잉크로부터 정제된 DNA를 PCR 방법으로 확인한 아가로오스 젤 사진이다.
도 8은 올리브유를 이용하여 제조한 유성 DNA 함유 잉크의 균질성을 조사하기 위하여 PCR을 수행한 아가로오스 젤 사진이다.
도 9는 복사용지에 점적한 유성 DNA 함유 잉크로부터 정제된 DNA를 PCR 방법으로 확인한 아가로오스 젤 사진이다.
도 10은 복사용 OHP 필름에 점적한 유성 DNA 함유 잉크로부터 정제된 DNA를 PCR 방법으로 확인한 아가로오스 젤 사진이다.
이하, 본 발명의 DNA 함유 잉크를 보다 구체적으로 설명하고자 한다.
본 발명의 DNA 함유 잉크는 잉크 100㎕ 당 104내지 109복사체(copy)의 증폭된 DNA를 첨가하여, 최종농도 잉크 1㎕ 당 102내지 107복사체 DNA를 함유하도록 제조한다.
이때, 잉크는 상업적으로 입수가능한 수성잉크 또는 유성잉크라면 어느 것이든 사용이 가능하다. 또한, 전기 DNA 증폭에 사용하는 프라이머는 합성한 올리고뉴클레오타이드의 5'-말단에 아무런 잔기를 연결시키지 않은 프라이머(이하, '일반 프라이머'라 함) 외에, 본 발명의 DNA 함유 잉크 내의 DNA를 클로닝 벡터나 발현 벡터에 클로닝할 수 없도록 방지할 수 있어 증폭된 DNA의 정보유출을 방지하기 위한 5'-말단에 헥실아민 그룹(hexylamine group)을 갖는 프라이머(이하, '아민 프라이머'라 함) 및 유성잉크에 혼합시에는 5'-말단에 모노메톡시트리틸-헥실아민 그룹(MMT(monomethoxytrityl)-hexylamine group)을 갖고 있어 MMT-그룹이 갖는 소수성(hydrophobicity)을 최대한 활용할 수 있는 프라이머(이하, 'MMT-아민 프라이머'라 함)를 사용한다. 특히, 유성 잉크를 사용시에는, 유성잉크를 증폭된 DNA에 미네랄오일(mineral oil), 옥수수유(corn oil), 또는 올리브유(olive oil) 등의 유지(oil)를 첨가한 현탁액에 첨가해 줌으로써 유성잉크 내로 증폭된 DNA가 균질하게 혼합될 수 있도록 한다.
PCR 방법을 이용하면 증폭하고자 하는 목적 DNA의 특정부위를 최대 108배로 증폭시킬 수 있으므로(30 순환의 PCR을 수행할 경우: 1.8530), PCR 방법에 의해 미량의 DNA로부터 대량의 DNA 함유 잉크를 제조할 수 있으며, 또한 극미량의 DNA 함유 잉크로부터 정확하게 DNA를 검출할 수 있다. 실제로, 사람의 혈액으로부터 정제한 지노믹 DNA(genomic DNA) 100ng(대략 105복사체)을 사용하여 30 순환의 PCR을 수행할 경우 대략 1 내지 10ng/㎕의 증폭 DNA를 얻을 수 있었으며, 증폭 DNA의 크기를 100bp로 정할 경우 이는 1012내지 1013복사체에 해당되었다. 일반적으로, PCR 수행 후 가장 손쉬운 아가로오스 젤 전기영동에 의해 PCR 산물을 확인하기 위하여서는 최소 104내지 105복사체 정도의 목적 DNA를 시발체로 사용하며, 네스티드 PCR(nested PCR)을 적용할 경우는 1 내지 10 복사체 정도면 충분하다. 결과적으로, 사용된 DNA 함유 잉크의 1㎕ 분량을 취해 PCR로 확인할 경우, DNA 함유 잉크에 포함되어야 하는 DNA의 양은 104내지 105복사체/㎕ DNA 함유 잉크(네스티드 PCR로 확인할 경우는 1 내지 10 복사체/㎕ DNA 함유 잉크)이며, 이를 양으로 환산하면 PCR 반응액 1㎕로 DNA 함유 잉크 100 내지 1,000리터를 제조할 수 있는 양(네스티드 PCR로 확인할 경우는 1,000,000 내지 10,000,000리터)이다. 따라서, 본 발명에 의하면, 미량의 지노믹 DNA만으로도 대량의 DNA 함유 잉크를 제조할 수 있으며, 저렴한 제조 단가, 간단한 제조 공정, 대량생산을 위한 과다한 설비 확충의 불필요 등의 장점을 갖는 고부가가치 제품을 제조할 수 있다.
한편, DNA 함유 잉크를 진품여부를 확인하기 위한 수단으로 사용할 경우, 각각의 DNA 함유 잉크제작 의뢰인에게 서로 다른 DNA를 제작해 주어야 한다. 따라서, 사용자 수가 늘어날 경우, 수억 또는 수십억종의 DNA를 필요로 하게되며, 이때서로 다른 DNA를 사용하려면 PCR을 위한 수억 내지 수십억종의 PCR용 프라이머를 확보해야 하는 문제점이 있다. 본 발명에서는 대량 및 다량 생산을 위하여 적용 불가능한 전기 문제점을 4 내지 5가지의 서로 다른 DNA를 섞어주는 방법으로 극복하였다. 즉, 200여종의 프라이머쌍으로 200여종의 증폭 DNA를 확보한 다음, 이중 4 내지 5가지의 DNA를 섞어줄 경우,200C4(6.4×107) 또는200C5(2.5×109)종의 서로 다른 조합의 DNA 함유 잉크를 제조할 수 있으므로, 200여종의 프라이머쌍을 확보하면 거의 모든 수요가 충족된다. 따라서, 5종류의 DNA를 섞어 한 종류의 DNA 함유 잉크를 제조하여 네스티드 PCR로 확인하는 방법을 사용할 경우, 200여종의 프라이머쌍으로 500㎕씩의 PCR 반응액을 확보하면 최대 10억 종류의 서로 다른 DNA 함유 잉크를 각각 1 리터씩 제조할 수 있다.
결과적으로, 본 발명의 DNA 함유 잉크는 미량의 DNA로도 이용 개체의 고유성을 최대한 살릴 수 있도록 고안되어, 이용시 재질 등에 구애를 받지 않도록 안정성을 확보하였음은 물론, 이용 개체의 고유 DNA 정보의 유출을 차단하는 수단도 포함하여 무엇보다 비특이적 결합의 위험이 없는 PCR 방법을 도입하여 정확한 결과를 확보할 수 있도록 구성되었다.
결국, 본 발명의 DNA 함유 잉크는 다음과 같은 여러가지 형태로 응용될 수 있다:
1. 잉크에 DNA를 혼합하고 혼합된 DNA를 검증에 재사용하는 방법;
2. 잉크에 포함되는 DNA를 4 내지 5 가지로 하여 경제적으로 다양한 종류의 DNA 함유 잉크를 제조하는 방법;
3. 잉크에 포함되는 DNA를 4 내지 5 가지로 하여 정보 유출을 최대한 방지하는 방법;
4. 정보 유출 방지를 위하여 프라이머의 5'-말단을 보호하는 방법;
5. DNA를 유성잉크에 혼합하는 방법;
6. 수성잉크 또는 유성잉크로부터 DNA를 추출하는 방법; 및,
7. 기타, DNA 함유 잉크를 이용한 다양한 적용방법을 제공한다.
이하, 실시예에 의하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 자명할 것이다.
실시예 1: PCR 방법에 의한 베타-엑틴 DNA의 증폭
베타-엑틴(beta-actin)의 특정 부위를 주형으로 하는 PCR을 수행하여 DNA의 PCR 방법에 의한 증폭효율을 확인하였다: 인간 지노믹 DNA(human genomic DNA)를 전혈(whole blood)로부터 페놀/클로로포름 방법으로 정제하고, 베타-엑틴 특정 부위의 증폭을 위한 프라이머로서 S1: 5'-CATGTTTGAGACCTTCAACACCCC-3'(서열번호 1) 및 AS1: 5'-GGAGTCCATCACGATGCCAGTGG-3'(서열번호 2)(증폭산물: 100 bp)을 이용하여, 베타-엑틴의 특정 부위가 증폭되도록 PCR을 수행하였다. 이때, 전기 일반 프라이머 외에 5'-말단에 아민 그룹이 연결된 아민 프라이머와 5'-말단에 MMT-아민 그룹이 연결된 MMT-아민 프라이머도 사용하였다.
전기 PCR 반응은 1x PCR 완충용액, 250uM의 각 디옥시뉴클레오사이드 트리포스페이트(deoxynucleoside triphosphate), 1.0 단위의 Taq DNA 중합효소, 100ng의 지노믹 DNA 및 20pmole의 각 프라이머가 포함된 50㎕의 반응액으로 수행되었다. 반응액은 5분 동안 94℃로 열처리되었으며, 다음으로 94℃에서 45초, 60℃에서 45초, 72℃에서 45초인 순환을 30회 반복시켰고, 마지막으로 72℃에서 5분 동안 최종반응되었다. 결과적으로, 도 1에서 보듯이, 예상했던 100bp의 절편이 PCR 반응에 의해 증폭됨을 확인할 수 있었다(화살표는 증폭산물의 위치를 표시함). 또한, 일반 프라이머(레인 1 및 2), 아민 프라이머(레인 3 및 4) 및 MMT-아민 프라이머(레인 5 및 6)를 사용하여 PCR 반응을 수행하였을 때, 프라이머의 종류와는 관계없이 DNA가 일정하게 증폭되었다.
PCR 반응의 특이성 및 민감도를 조사하기 위하여 전기 PCR에 의해 증폭된 DNA를 109내지 104배까지 희석하여 동일한 조건으로 다시 PCR을 수행한 결과, 전술한 3종의 프라이머를 사용하였을 때, 프라이머의 종류와는 관계없이 모두 동일한 결과를 보여 검출 민감도에 문제가 없음이 확인되었다(참조: 도 2). 도 2에서, 레인 1, 2, 3 및 4는 일반프라이머; 레인 5, 6, 7 및 8은 아민 프라이머; 및, 레인 9, 10, 11 및 12는 MMT-아민 프라이머를 사용하여 PCR을 수행한 결과이다. 이때,레인 1, 5 및 9는 109복사체 DNA; 레인 2, 6 및 10은 106복사체 DNA; 레인 3, 7 및 11은 105복사체 DNA; 레인 4, 8 및 12는 104복사체 DNA를 각각 주형으로 사용하였고; 및, 레인 13 및 14는 음성 대조군(negative control)이다(화살표는 증폭산물의 위치를 표시함).
실시예 2: 수성 DNA 함유 잉크의 제조
상업적으로 입수가능한 만년필용 수성잉크 3종(검정색, 적색, 청색) 및 스템프용 수성잉크(적색, 청색) 100㎕에 0.1fg(108복사체)의 증폭 DNA를 첨가하여 최종농도 106복사체 DNA/㎕이 되도록 DNA 함유 잉크를 제조하였다. 이때, 전기 증폭 DNA는 실시예 1의 일반 프라이머는 물론, 아민 프라이머 및 MMT-아민 프라이머를 사용하였다.
실시예 3: 수성 DNA 함유 잉크로부터 정제한 DNA의 PCR 확인
실시예 2에서 제조한 수성 DNA 함유 잉크내에 포함되어 있는 DNA를 QIAquick PCR 정제 키트(QIAGEN GmbH, Germany)를 이용하여 정제하였다: 즉, DNA 함유 잉크 1㎕를 취해 100㎕의 증류수를 첨가해 혼합한 다음, 400㎕의 PB 완충용액을 첨가하고, QIAquick 스핀 컬럼(spin column)을 이용하여 최종 100㎕의 증류수로 용출하여 정제하였다. 이중 10㎕를 취해 실시예 1에서와 같은 조건으로 PCR을 수행한 다음, 2.5%(w/v) 아가로오스 젤 전기영동으로 DNA가 PCR 방법에 의해 재증폭되는지를 확인하였다(참조: 도 3 및 도 4).
도 3에서 보듯이, 일반 프라이머, 아민 프라이머, MMT-아민 프라이머 모두 청색 및 적색 잉크의 경우는 대조군과 동일한 PCR 증폭을 확인할 수 있었으나, 검정색 잉크의 경우는 DNA의 회수율이 10% 이하로 나타났다. 도 3의 레인 1은 대조군으로서 105복사체 DNA 원액을 직접 PCR에 사용한 결과이며; 레인 2, 3 및 4는 또 다른 대조군인 증류수; 레인 5, 6 및 7은 검정색; 레인 8, 9 및 10은 청색; 및, 레인 11, 12 및 13은 적색 잉크에 DNA(106복사체/㎕)를 첨가한 다음 1㎕로부터 상기 방법으로 DNA를 추출한 용액의 1/10 양(105복사체)을 사용한 PCR 결과이다. 이때, 레인 2, 5, 8 및 11은 일반 프라이머; 레인 3, 6, 9 및 12는 아민 프라이머; 및, 레인 4, 7, 10 및 13은 MMT-아민 프라이머로 PCR 증폭된 DNA를 사용한 결과이다. 결과적으로, MMT-아민 프라이머를 제외하고는 상기 DNA 정제 방법의 DNA 회수율은 95% 이상임을 알 수 있었으며, 검정색 잉크를 제외하고는 DNA 함유 잉크 원액내의 DNA 안정성이나 회수율에도 전혀 문제가 없었다(화살표는 증폭산물의 위치를 표시함).
또한, 도 4에서 보듯이, 스템프용 청색, 적색 잉크의 경우에도 전술한 방법과 동일하게 DNA 함유 잉크 내의 DNA를 정제하여 PCR 방법으로 증폭시켰을 때, 동일한 결과를 얻었다(참조: 도 4). 도 4의 레인 1은 105복사체 DNA 원액을 직접 PCR에 사용한 결과이며; 레인 2, 3 및 4는 증류수; 레인 5, 6 및 7은 스템프용 청색 잉크; 및, 레인 8, 9 및 10은 스템프용 적색 잉크에 106복사체/㎕ 농도의 DNA를 첨가한 다음 DNA를 추출한 용액의 1/10 양(105복사체)을 사용한 PCR 결과이다. 이때, 레인 2, 5, 및 8은 일반 프라이머; 레인 3, 6 및 9는 아민 프라이머; 및, 레인 4, 7 및 10은 MMT-아민 프라이머로 PCR 증폭된 DNA를 사용한 결과이다(화살표는 증폭산물의 위치를 표시함).
결과적으로, 수성잉크의 경우 MMT-프라이머를 사용할 필요가 없으며, 사용하는 잉크의 종류에 따라 다소 차이가 있지만, 각각의 잉크에 대한 예비실험을 통해 첨가하는 DNA의 양을 조절해 주면, 수성잉크를 이용한 DNA 함유 잉크의 제조 및 사용에는 문제가 없을 것으로 사료되었다.
실시예 4: 수성 DNA 함유 잉크로 인쇄한 인쇄물로부터 DNA 회수 및 PCR 확인
본 발명의 DNA 함유 잉크를 사용한 인쇄물로부터 DNA를 재검증할 수 있는지를 확인하기 위하여, 실시예 2에서 제조한 수성 DNA 함유 잉크를 사용하여 인쇄를 한 다음, 인쇄물로부터 DNA를 용출하여 PCR 방법에 의해 다시 증폭하였다: 즉, 106복사체 DNA/㎕의 PCR 증폭 DNA가 포함된 수성 DNA 함유 잉크 1㎕ 씩을 복사용지에점적하고 12시간이 경과한 다음, 전기 수성 DNA 함유 잉크가 점적된 부위를 오려내어 100㎕의 증류수에 20분간 방치하였고, 실시예 3과 동일한 방법으로 DNA를 추출하여, 추출된 DNA를 주형으로 하는 PCR을 수행한 결과, 일반 프라이머, 아민 프라이머 및 MMT-아민 프라이머 등 3종류의 프라이머를 사용한 모든 경우에서 증폭된 DNA를 확인할 수 있었다(참조: 도 5).
도 5의 레인 1은 105복사체의 DNA 원액을 직접 PCR에 사용한 결과이며; 레인 2, 3 및 4는 검정색 잉크; 레인 5, 6 및 7은 청색 잉크; 레인 8, 9 및 10은 적색 잉크; 레인 11, 12 및 13은 스템프용 청색 잉크; 및, 레인 14, 15 및 16은 스템프용 적색 잉크에 106복사체/㎕ 농도의 DNA를 첨가하여 DNA 포함 잉크를 제조한 다음, 이중 1㎕로부터 실시예 3과 동일한 방법으로 DNA를 추출한 용액의 1/10 양인 105복사체를 주형으로 사용한 PCR 결과이다. 이때, 레인 2, 5, 8, 11 및 14는 일반 프라이머; 레인 3, 6, 9, 12 및 15는 아민 프라이머; 및, 레인 4, 7, 10, 13 및 16은 MMT-아민 프라이머로 PCR 증폭된 DNA를 주형으로 사용한 PCR 결과이다(화살표는 증폭산물의 위치를 표시함). 도 5에서 보듯이, 실시예 3에서와 같이, PCR로 증폭된 DNA의 양은 일반 프라이머, 아민 프라이머, MMT-아민 프라이머순으로 감소하는 경향을 보였으며, 검정색 잉크를 제외한 4종의 잉크 모두 대조군과 비교하였을 때, 뚜렷한 차이를 보이지 않았다.
실시예 3 및 4의 결과로부터, 수성잉크의 경우, 아민 프라이머를 사용하여게놈정보의 유출 가능성을 차단한 PCR 증폭 DNA를 수성잉크에 첨가하여 DNA 함유 잉크를 제조하였을 때, 전기 수성 DNA 잉크로 인쇄한 인쇄물로부터 DNA가 용이하게 회수되었으며, PCR 방법에 의한 전기 증폭 DNA의 재검증 역시 효과적으로 수행할 수 있었다.
실시예 5: 여러종의 DNA를 혼합하여 사용할 경우의 DNA 검출 및 확인
베타-엑틴의 여러 부위에 해당하는 5종의 서로 다른 DNA를 포함하는 DNA 함유 잉크를 제조하고, 전기 DNA 함유 잉크로부터 DNA를 회수하여 PCR 방법으로 다시증폭시킴으로써, 개체-특이적 DNA를 표방하기 위하여 여러종의 DNA를 조합에 의해 DNA 함유 잉크에 포함시켰을 때 용이하게 각 DNA가 다시 검출될 수 있는지를 확인하였다. 이때, 프라이머로는 실시예 1에서 사용한 S1 및 AS1 프라이머 외에, 전면 프라이머(sense primer)는 S1 프라이머를 공통으로 사용하고, 이에 대한 후면 프라이머(antisense primer)로서 AS2:5'-CCGTCACCGGAGTCCATCACGATG-3'(서열번호 3)(증폭산물: 108bp), AS3: 5'-GGGTGACCCCGTCACCGGAGTC-3'(서열번호 4)(증폭산물: 116bp), AS4: 5'-GGCACAGTGTGGGTGACCCCGTC-3'(서열번호 5)(증폭산물: 126bp), AS5: 5'-AGGGCATACCCCTCGTAGATGGGCAC-3'(서열번호 6)(증폭산물: 147bp)인 일반 프라이머를 합성하였다. 이들 프라이머를 사용하여 베타-엑틴 DNA를 주형으로 한 PCR을 수행한 다음, 0.2㎕씩의 증폭 DNA(108복사체 DNA)를 100㎕의 청색 스템프용 잉크에혼합하여 DNA 함유 잉크를 제조하였다. 이중 1㎕를 취해 페놀/클로로포름 방법으로 DNA를 추출하고, 전기 5종의 프라이머쌍을 다시 사용하여 다시 PCR을 수행한 결과, 도 6에서와 같이 5종의 PCR 산물이 특이적으로 증폭됨을 확인하였다. 도 6의 레인 1, 2, 3, 4 및 5는 대조군으로서 106복사체 DNA 원액을 사용한 결과이며; 레인 6, 7, 8, 9 및 10은 청색 DNA 함유 잉크로부터 정제한 DNA를 이용하여 PCR을 수행한 결과이다. 이때, 레인 1 및 6은 S1/AS1; 레인 2 및 7은 S1/AS2; 레인 3 및 8은 S1/AS3; 레인 4 및 9는 S1/AS4; 레인 5 및 10은 S1/AS5 프라이머쌍을 사용하여 PCR을 수행한 결과이다.
결과적으로, 개체의 고유성을 대변할 수 있도록 개체-특이적 DNA를 여러종 DNA 함유 잉크에 혼합하여 사용하더라도, 전기 DNA 함유 잉크로부터의 개체-특이적 DNA 검출 및 확인을 용이하게 수행할 수 있음을 확인하였다.
실시예 6: 유성 DNA 함유 잉크의 제조
본 발명의 DNA 함유 잉크를 상업적으로 입수가능한 인쇄용 적색 유성잉크에 최종농도 106복사체 DNA/㎕가 되도록 제조하였다. 이때, 유성잉크에 DNA를 첨가하기 전, 실시예 1에서의 일반 프라이머, 아민 프라이머, MMT-아민 프라이머로 증폭한 DNA 1㎕(0.1fg)에 미네랄오일(mineral oil), 옥수수유(corn oil), 또는 올리브유(olive oil) 10㎕를 미리 첨가하고, 볼텍스 혼합기(vortex mixer)를 이용하여 현탁시켜 줌으로써, 유성잉크에 친수성의 PCR 반응액이 균질하게 혼합될 수 있는 현탁액을 준비하였다. 다음으로, 전기 현탁액에 100㎕의 적색 유성잉크를 첨가하고 잘 혼합하여 유성 DNA 함유 잉크를 제조하였다. 또한, DNA 원액 1㎕를 100㎕의 유성잉크에 직접 첨가한 유성 DNA 함유 잉크도 제조하여 PCR 반응을 통한 확인 등에 대조군으로서 사용하였다.
실시예 7: 유성 DNA 함유 잉크로부터 정제한 DNA의 PCR 확인
실시예 6에서 제조한 유성 DNA 함유 잉크로부터 DNA를 정제하고 이를 주형으로 사용한 PCR을 수행하였다: 즉, DNA를 현탁시킨 유성잉크 1㎕를 600㎕의 페놀/클로로포름(1:1, v/v) 용액에 첨가하여 용해시킨 다음, 100㎕의 증류수를 넣어 혼합하였다. 이어 13,000rpm의 속도로 10분간 원심분리하고, 상층액 100㎕를 취해 QIAquick PCR 정제 키트를 이용하여 정제하였다. 이중 105복사체에 해당하는 양을 취하여 실시예 1에서와 같은 조건으로 PCR을 수행한 다음, 2.5%(w/v) 아가로오스 젤 전기영동으로 DNA가 PCR 방법에 의해 재증폭되는지를 확인하였다(참조: 도 7). 도 7의 레인 1, 2 및 3은 105복사체 DNA 원액을 직접 PCR 반응에 사용한 결과이며; 레인 4, 5 및 6은 증류수; 레인 7, 8 및 9는 미네랄오일; 레인 10, 11 및 12는 옥수수유; 및, 레인 13, 14 및 15는 올리브유를 사용하여 적색 유성잉크에 DNA(106복사체/㎕)를 첨가한 다음 1㎕로부터 상기 방법으로 DNA를 추출한 용액의 1/10 양(105복사체)을 사용한 PCR 결과이다. 이때, 유성 DNA 함유 잉크 제조시 레인 1, 4, 7, 10 및 13은 일반 프라이머; 레인 2, 5, 8, 11 및 14는 아민 프라이머; 및, 레인 3, 6, 9, 12 및 15는 MMT-아민 프라이머로 PCR 증폭된 DNA를 사용한 결과이다(화살표는 증폭산물의 위치를 표시함).
결과적으로, DNA 원액을 직접 유성잉크에 혼합한 경우(레인 4, 5 및 6)는 아주 미량의 DNA만 PCR 방법에 의해 증폭되어, 유지(oil)를 이용한 유성 DNA 함유 잉크의 제조방법이 10배 이상의 효율을 보임을 확인하였다. 그러나, 유성 DNA 함유 잉크의 경우, 전체적으로 수성 DNA 함유 잉크에 비해 회수율이 20 내지 50% 정도로 낮았으며, 유성 DNA 함유 잉크 제조시 균질한 혼합을 위하여 도입한 MMT-아민 프라이머를 사용한 경우에도, 수성 DNA 함유 잉크의 경우와 동일하게 PCR 방법을 통한 증폭시 낮은 효율을 나타냈다.
유성 DNA 함유 잉크 내의 복사체 농도를 높여 PCR 증폭시 회수율을 높여보고자, 전술한 유성 DNA 함유 잉크 내의 DNA 농도보다 10배 높은 106복사체 DNA/㎕인 최종농도가 되도록 올리브유를 이용하여 유성 DNA 함유 잉크를 제조하고, 이로부터 DNA를 정제하여 PCR 방법을 이용한 증폭을 수행하였다. 도 8에서 보듯이, 전체적인 회수율이 낮은 동일한 결과를 얻을 수 있었다. 도 8의 레인 1, 2, 3 및 4는 일반 프라이머; 레인 5, 6, 7 및 8은 아민 프라이머; 및, 레인 9, 10, 11 및 12는 MMT-아민 프라이머를 사용한 PCR 증폭 결과이다. 이때, 레인 1, 5 및 9는 106복사체 DNA 원액을 PCR에 직접 사용한 대조군 실험 결과이다(화살표는 증폭산물의 위치를 표시함). MMT-아민 프라이머를 사용하여 PCR 반응으로 증폭하였을 때 DNA 증폭의 효율이 낮은 이유는, DNA의 회수 방법에 기인되는 것으로 사료되며, 이에 대한 확인은 다양한 정제 방법을 적용하여 검증해야 할 것이다.
결과적으로, 유성잉크의 경우, 미네랄오일 등을 이용하여 DNA 원액을 유성잉크에 균질하게 첨가할 수 있었으며, 수성잉크에 비해 회수율이 다소 떨어지는 점을 감안하여 10 내지 100 배 정도 많은 DNA를 사용할 경우, 효과적으로 유성 DNA 함유 잉크를 제조할 수 있음을 확인하였다.
실시예 8: 유성 DNA 함유 잉크로 인쇄한 인쇄물로부터 DNA 회수 및 PCR 확인
실시예 6에서 제조한 유성 DNA 함유 잉크 1㎕씩을 복사용지 및 아세테이트(acetate) 필름(복사용 OHP 필름)에 점적하여 건조시키고 12시간 방치한 다음, 유성 DNA 함유 잉크가 점적된 부위를 오려내어 600㎕의 페놀/클로로포름 용액에 20분간 방치하고, 실시예 7과 동일한 방법으로 DNA를 정제하였다. 정제된 DNA를 주형으로 사용하여 PCR을 수행한 결과, 복사용지에 점적한 경우, PCR 증폭에 의한 회수율은 10% 미만으로 나타났다(참조: 도 9). 도 9의 레인 1, 2 및 3 은 105복사체 DNA 원액을 직접 PCR에 사용한 대조군이며; 레인 4, 5 및 6은 미네랄오일; 레인 7, 8 및 9는 옥수수유; 및, 레인 10, 11 및 12는 올리브유로 제조한 유성 DNA함유 잉크를 사용하여 PCR 증폭한 결과이다. 이때, 유성 DNA 함유 잉크 제조시, 레인 1, 4, 7 및 10은 일반 프라이머; 레인 2, 5, 8 및 11은 아민 프라이머; 및, 레인 3, 6, 9 및 12는 MMT-아민 프라이머로 PCR 증폭된 DNA를 사용한 결과이다(화살표는 증폭산물의 위치를 표시함).
복사용 OHP 필름에 유성 DNA 함유 잉크를 점적하였을 때, 올리브유를 사용한 경우 회수율이 70 내지 50%였으며, 옥수수유를 사용한 경우 50 내지 20%의 회수율이 나타났고, 미네랄오일을 사용하였을 때, 아민 프라이머의 경우 50% 내외의 회수율을 보였으나, 일반 프라이머 및 MMT-아민 프라이머의 경우는 회수율이 10% 미만이었다(참조 도 10). 도 10의 레인 1, 2 및 3은 105복사체 DNA 원액을 직접 PCR에 사용한 대조군이며; 레인 4, 5 및 6은 미네랄오일; 레인 7, 8 및 9는 옥수수유; 및, 레인 10, 11 및 12는 올리브유를 사용하여 유성 DNA 함유 잉크를 제조하였을 때의 PCR 증폭 결과이다. 이때, 유성 DNA 함유 잉크 제조시, 레인 1, 4, 7 및 10은 일반 프라이머; 레인 2, 5, 8 및 11은 아민 프라이머; 및, 레인 3, 6, 9 및 12는 MMT-아민 프라이머를 사용하여 PCR 증폭된 DNA를 사용한 결과이다(화살표는 증폭산물의 위치를 표시함).
결과적으로, 유성 DNA 함유 잉크의 경우, 종이보다는 OHP 필름에 인쇄하였을 때에 DNA의 회수율이 상대적으로 높았으나, 유지의 종류에 따라서도 다소 차이가 있었기 때문에, 인쇄용지에 따른 DNA 회수율을 고려하여 사용하는 DNA의 양 및 적절한 유지를 선택한다면, 유성 DNA 함유 잉크의 사용도 용이하리라고 사료된다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의해 정의된다고 할 것이다.
이상에서 상세히 설명하고 입증하였듯이, 본 발명은 실험 및 연구용에 한정적으로 사용되고 있는 DNA 및 PCR을 일상생활용품인 인쇄물에 적용할 수 있는 DNA 함유 잉크 및 그를 이용한 DNA 검증방법을 제공한다. 본 발명의 DNA 함유 잉크를 이용하면, 이용 개체의 고유한 DNA 정보가 담긴 인쇄물 및 각종 DNA 함유 잉크 함유 제품을 제조할 수 있는 바, 전기 DNA 함유 잉크를 포함하는 제품은 비밀 유지, 신원 확인, 진품 선별 및 희귀품 제조 등의 목적에 유용하게 사용할 수 있다. 특히, 본 발명의 DNA 함유 잉크를 이용하였을 경우, 전기 DNA 함유 잉크로 인쇄된 인쇄물의 진품여부를 정확하고 손쉽게 확인 할 수 있으며, 특정 유명인의 특정 DNA를 포함하는 잉크(ink)로 인쇄된 상품 로고를 부착한 제품을 제작함으로써 제품 광고등에 활용할 수 있다. 또한, 본 발명의 DNA 함유 잉크를 제조하기 위해서는 미량의 지노믹 DNA만이 요구되므로, 저렴한 제조 단가, 간단한 제조 공정, 대량생산을 위한 과다한 설비 확충의 불필요등의 장점을 갖는 고부가가치 제품을 제조할 수 있는 방법으로 활용 가능하다.
Claims (7)
- 잉크 1㎕ 당 102내지 107복사체의 증폭된 DNA를 함유하는 DNA 함유 잉크.
- 제 1항에 있어서,전기 잉크는 수성 또는 유성인 것을 특징으로 하는DNA 함유 잉크.
- 제 1항에 있어서,전기 DNA는 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction) 방법에 의해 증폭된 것을 특징으로 하는DNA 함유 잉크.
- 제 3항에 있어서,전기 중합효소 연쇄반응에 사용하는 프라이머(primer)는 5'-말단에 헥실아민 그룹(hexylamine group) 또는 모노메톡시트리틸-헥실아민 그룹(monomethoxytrityl-hexylamine group)을 갖는 것을 특징으로 하는DNA 함유 잉크.
- 제 2항에 있어서,유성잉크를 사용시, 유성잉크를 증폭된 DNA에 유지(oil)를 첨가한 현탁액에 첨가한 것을 특징으로 하는DNA 함유 잉크.
- 제 5항에 있어서,전기 유지는 미네랄오일(mineral oil), 옥수수유(corn oil) 또는 올리브유(olive oil)인 것을 특징으로 하는DNA 함유 잉크.
- 제 1항의 DNA 함유 잉크로 인쇄물을 제조하고, 전기 인쇄물로부터 DNA를 정제하여, 이를 주형으로 중합효소 연쇄반응에 의해 DNA를 증폭하는 단계를 포함하는 DNA의 검증방법.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1019990003017A KR100294374B1 (ko) | 1999-01-30 | 1999-01-30 | Ｄｎａ 함유 잉크 및 그의 제조방법 |
| PCT/KR2000/000072 WO2000044891A1 (en) | 1999-01-30 | 2000-01-28 | Dna-containing ink |
| AU24633/00A AU2463300A (en) | 1999-01-30 | 2000-01-28 | Dna-containing ink |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1019990003017A KR100294374B1 (ko) | 1999-01-30 | 1999-01-30 | Ｄｎａ 함유 잉크 및 그의 제조방법 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20000052129A KR20000052129A (ko) | 2000-08-16 |
| KR100294374B1 true KR100294374B1 (ko) | 2001-07-03 |
Family
ID=19572792
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1019990003017A KR100294374B1 (ko) | 1999-01-30 | 1999-01-30 | Ｄｎａ 함유 잉크 및 그의 제조방법 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR100294374B1 (ko) |
| AU (1) | AU2463300A (ko) |
| WO (1) | WO2000044891A1 (ko) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20010018878A (ko) * | 1999-08-23 | 2001-03-15 | 김정호 | Ｄｎａ구조를 분석하여 그 분석한 ｄｎａ구조를 물품에 형상화하는 방법 및 그 물품 |
| EP1515268A3 (en) * | 2001-03-01 | 2007-12-12 | NTT Data Technology Corporation | Method and system for individual authentication and digital signature utilizing article having DNA based ID information mark |
| ATE352594T1 (de) * | 2001-11-02 | 2007-02-15 | November Ag Molekulare Medizin | Markierungslösung zur fälschungssicheren kennzeichnung eines wertgegenstands, aus der markierungslösung hergestellte markierung sowie verfahren zur markierung eines wertgegenstands |
| GB2390055B (en) | 2002-03-22 | 2005-09-07 | Cypher Science Internat Ltd | A marking apparatus |
| KR20050120549A (ko) * | 2004-07-05 | 2005-12-22 | 이학록 | 졸-겔법을 이용한 ｄｎａ 함유 제품의 제조방법 |
| ITRM20050235A1 (it) | 2005-05-13 | 2006-11-14 | Biolab S P A | Tracciante alimentare naturale. |
| US9062218B2 (en) * | 2008-09-11 | 2015-06-23 | Nagahama Bio-Laboratory Incorporated | DNA-containing ink composition |
| TR201006859A2 (tr) * | 2010-08-18 | 2011-06-21 | Dal Yilmaz | Otomatik karakteristik renk belirleyici ve karişim üretici bir cihaz |
| CN103328588B (zh) * | 2010-10-28 | 2015-08-19 | 深圳智慧天使投资有限公司 | 一种w/o乳液油墨组合物及其应用 |
| CZ2015140A3 (cs) | 2015-02-26 | 2016-09-07 | Univerzita PalackĂ©ho v Olomouci | Systém a způsob pro ověření pravosti výrobku |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4683202A (en) * | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
| FR2649518B1 (fr) * | 1989-07-07 | 1991-10-18 | Bioprobe Systems Sa | Procede et dispositif de marquage crypte de haute securite pour la protection d'objets de valeur |
-
1999
- 1999-01-30 KR KR1019990003017A patent/KR100294374B1/ko not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-01-28 AU AU24633/00A patent/AU2463300A/en not_active Abandoned
- 2000-01-28 WO PCT/KR2000/000072 patent/WO2000044891A1/en active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2000044891A1 (en) | 2000-08-03 |
| KR20000052129A (ko) | 2000-08-16 |
| AU2463300A (en) | 2000-08-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109715825B (zh) | 用于检测样品中目标核酸的方法 | |
| Moeseneder et al. | Optimization of terminal-restriction fragment length polymorphism analysis for complex marine bacterioplankton communities and comparison with denaturing gradient gel electrophoresis | |
| CA2395874C (en) | Dna-based steganography | |
| JP5951755B2 (ja) | 定量的ヌクレアーゼプロテクションアッセイ（ｑＮＰＡ）法および定量的ヌクレアーゼプロテクション配列決定（ｑＮＰＳ）法の改善 | |
| JP5385973B2 (ja) | 反応における複数の核酸配列の同時検出 | |
| US7501253B2 (en) | DNA fingerprinting using a branch migration assay | |
| US20060211000A1 (en) | Methods, compositions, and kits for detection of microRNA | |
| CN101142325A (zh) | 制备用于分析的多核苷酸的方法 | |
| KR100294374B1 (ko) | Ｄｎａ 함유 잉크 및 그의 제조방법 | |
| CN108184327A (zh) | 用于鉴定耐药性结核的组合物和方法 | |
| CA2318371A1 (en) | Method for the detection of nucleic acid sequences | |
| EP1386002A1 (en) | Methods and compositions for nucleotide analysis | |
| KR101823353B1 (ko) | 보툴리눔 독소 A, B, E 및 클로스트리디움 퍼프린젠스 alpha 독소 유전자의 신속한 검출방법 및 검출 키트 | |
| CA2490864A1 (en) | Methods of detecting sequence differences | |
| US20060084099A1 (en) | Product identification method | |
| EP1799860B1 (en) | Dna fingerprinting using a branch migration assay | |
| US6083701A (en) | Method for determining tandem repeat sequence length | |
| CN113924369A (zh) | 一种高通量测序方法和试剂盒 | |
| TW329476B (en) | Method for detecting contaminant DNA in a protein product and kits used for the same purpose | |
| US20090197251A1 (en) | Process for marking products with nucleic acids for proving the identity and origin of the products | |
| JP2004513625A5 (ko) | ||
| CN108588239A (zh) | 朱鹮微卫星多态位点、鉴定方法及特异引物序列 | |
| WO2019231287A1 (ko) | 회전환 증폭을 이용한 표적핵산 검출 방법 및 표적핵산 검출용 조성물 | |
| JP2001299398A (ja) | 遺伝子型による生物の同定方法 | |
| JP2006094814A (ja) | 情報化核酸及びこれを用いた情報化核酸組成物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20130325 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20140310 Year of fee payment: 14 |
|
| LAPS | Lapse due to unpaid annual fee |