JP6022940B2 - 線維症予防又は治療剤 - Google Patents
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Description
1)配列番号1の塩基番号1285〜1318番の塩基、1398〜1418番の塩基、1434〜1463番の塩基、1548〜1579番の塩基、1608〜1628番の塩基、1700〜1726番の塩基、1778〜1798番の塩基、1806〜1826番の塩基及び1887〜1907番の塩基よりなる群から選ばれる連続する17〜23塩基を標的配列とし、全長が30ヌクレオチド以下であるsiRNA。
2)siRNAが、以下の(a)〜(s)から選ばれる上記1)のsiRNA。
(a)配列番号2に示されるセンス配列と配列番号3に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(b)配列番号4に示されるセンス配列と配列番号5に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(c)配列番号6に示されるセンス配列と配列番号7に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(d)配列番号8に示されるセンス配列と配列番号9に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(e)配列番号10に示されるセンス配列と配列番号11に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(f)配列番号12に示されるセンス配列と配列番号13に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(g)配列番号14に示されるセンス配列と配列番号15に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(h)配列番号16に示されるセンス配列と配列番号17に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(i)配列番号18に示されるセンス配列と配列番号19に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(j)配列番号20に示されるセンス配列と配列番号21に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(k)配列番号22に示されるセンス配列と配列番号23に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(l)配列番号24に示されるセンス配列と配列番号25に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(m)配列番号26に示されるセンス配列と配列番号27に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(n)配列番号28に示されるセンス配列と配列番号29に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(o)配列番号30に示されるセンス配列と配列番号31に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(p)配列番号32に示されるセンス配列と配列番号33に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(q)配列番号34に示されるセンス配列と配列番号35に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(r)配列番号36に示されるセンス配列と配列番号37に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(s)配列番号54に示されるセンス配列と配列番号55に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
3)前記siRNAのセンス鎖の3’末端の末端側からオーバーハングヌクレオチドを除いた連続する1〜10ヌクレオチドがDNAに変換された上記1)又は2)のsiRNA。
4)前記siRNAのアンチセンス鎖の5’末端の末端側から連続する1〜10ヌクレオチドがDNAに変換された上記1)−3)のsiRNA。
5)前記siRNAのセンス鎖の3’末端の末端側からオーバーハングヌクレオチドを除いた連続する1〜10ヌクレオチドがDNAに変換され、且つアンチセンス鎖の5’末端の末端側から連続する1〜10ヌクレオチドがDNAに変換された上記1)−4)のsiRNA。
6)アンチセンス鎖の5’末端がモノリン酸化又はモノチオリン酸化された上記1)〜5)のsiRNA。
7)上記1)〜6)のいずれかのsiRNAを含有する医薬組成物。
8)上記1)〜6)のいずれかのsiRNAを有効成分として含有するTGF−β1遺伝子発現抑制剤。
9)上記1)〜6)のいずれかのsiRNAを有効成分として含有する線維症予防又は治療剤。
10)上記1)〜6)のいずれかのsiRNAを有効成分として含有する肺線維症若しくは肺がんの予防又は治療剤。
11)TGF−β1遺伝子発現抑制剤の製造のための、上記1)〜6)のsiRNAの使用。
12)線維症予防又は治療剤の製造のための、上記1)〜6)のsiRNAの使用。
13)肺線維症若しくは肺がんの予防又は治療剤の製造のための、上記1)〜6)のsiRNAの使用。
14)TGF−β1遺伝子発現抑制のための、上記1)〜6)のsiRNA。
15)線維症予防又は治療のための、上記1)〜6)のsiRNA。
16)肺線維症若しくは肺がんの予防又は治療のための、上記1)〜6)のsiRNA。
17)上記1)〜6)のsiRNAをヒト又は動物に投与することを特徴とする、TGF−β1遺伝子発現抑制方法。
18)上記1)〜6)のsiRNAをヒト又は動物に投与することを特徴とする、線維症予防又は治療方法。
19)上記1)〜6)のsiRNAをヒト又は動物に投与することを特徴とする、肺線維症若しくは肺がんの予防又は治療方法。
配列番号1で示される塩基配列は、TGF−β1のmRNAの塩基配列であり、当該配列情報はGenBankに、GenBank Accession No. NM_000660.3として登録されている。
また、センス鎖及びアンチセンス鎖の両端は、平滑末端でもよいし、それぞれの鎖の3’側がオーバーハング(突出末端)であっても良い。ここで、「平滑末端」とは、2本鎖RNAの末端部分において、センス鎖の末端領域とそれに対合するアンチセンス鎖の末端領域が、1本鎖部分を形成することなく対合している構造を意味する。また、「オーバーハング」は、ダングリングエンドとも称され、2本鎖RNAの末端部分のセンス鎖の末端領域又はそれに対合するアンチセンス鎖の末端領域において、対合する塩基が存在しないために2本鎖を形成できず、1本鎖部分(突出末端)が存在している構造を意味する。
突出末端部分の塩基数は1〜10ヌクレオチドであり、好ましくは1〜4ヌクレオチドであり、さらに好ましくは1〜2ヌクレオチドである。尚、突出末端の長さは二つの鎖の間で無関係であり、互いに異なる長さであっても良い。突出末端部分のヌクレオチドはRNAでも、DNAでもよく、標的であるTGF−β1のmRNAに相補的な塩基が好ましいが、上記RNA干渉能を保持する限り相補的でない塩基であってもよい。
尚、この場合のハイブリダイズ条件は、本発明のsiRNAを生体内に投与して医薬として用いる場合は、生体内の条件であり、本発明のsiRNAを試薬としてin vitroで用いる場合は、中度のストリンジェントな条件又は高度なストリンジェントな条件であり、このような条件として、例えば、400mM NaCl、40mM PIPES pH6.4、1mM EDTA、50℃〜70℃で12〜160時間でのハイブリゼーション条件が挙げられる。これらの条件については、当業者に周知であり、Sambrook et al.(Molecular Cloning: A Laboratory Manual second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, USA, 1989)に記載されている。
また、配列同一性は、リップマン−パーソン法(Lipman-Pearson法;Science, 227, 1435, (1985))等によって計算すればよく、例えば、遺伝情報処理ソフトウェアGenetyx-Win(Ver.5.1.1;ソフトウェア開発)のホモロジー解析(Search homology)プログラムを用いて、Unit size to compare(ktup)を2として解析を行なうことにより算出される。
ここで、RNAヌクレオチドのDNAへの変換とは、AMPをdAMPへ、GMPをdGMPへ、CMPをdCMPへ、UMPをdTMPへ変換することを意味する。
ハイブリッド型としては、センス鎖のヌクレオチドをDNAに変換したものが好ましい。キメラ型としては、下流側(センス鎖の3’末端側、アンチセンス鎖の5’末端側)の一部のヌクレオチドをDNAに変換したものが挙げられる。具体的には、センス鎖の3’末端側及びアンチセンス鎖の5’末端側のヌクレオチドを共にDNAに変換したもの、センス鎖の3’末端側又はアンチセンス鎖の5’末端側の何れかのヌクレオチドをDNAに変換したものが挙げられる。また、変換するヌクレオチド長は、RNA分子の1/2に相当するヌクレオチドまでの任意長とするのが好ましく、例えば末端から1〜13ヌクレオチド、好ましくは1〜10ヌクレオチドが挙げられる。RNA干渉効果、RNA分子の安定性、安全性等の点から、好適なキメラ型siRNAとしては、例えばヌクレオチド長がそれぞれ19〜23であり、センス鎖の3’末端側からオーバーハングヌクレオチドを除いた1〜10、好ましくは1〜8、より好ましくは1〜6のヌクレオチド及びアンチセンス鎖の5’末端側から1〜10、好ましくは1〜8、より好ましくは1〜6のヌクレオチドを任意数、連続してDNAに変換したものが挙げられる(後記〔表2〕参照)。また、この場合、センス鎖(オーバーハングヌクレオチドを除く)とアンチセンス鎖のDNA変換数は同一であるのがより好ましい。
また、糖が修飾されたヌクレオチド類似体としては、例えば、リボヌクレオチドの2’−OHが、H、OR、R、ハロゲン原子、SH、SR、NH2、NHR、NR2、もしくはCN(ここで、Rは炭素数1−6のアルキル基、アルケニル基又はアルキニル基を示す)等によって置換された2’位糖置換体、5’末端の−OHがモノリン酸化又はモノチオリン酸化された5’末端リン酸化体、5’末端モノチオリン酸化体が挙げられる。
リン酸塩が修飾されたヌクレオチド類似体としては、隣接するリボヌクレオチドを結合するホスホエステル基を、ホスホチオエート基で置換したものが挙げられる。
ここで、置換基としては、一例として、アミノ基;メルカプト基;ニトロ基;炭素数1〜40(好ましくは2〜20、更に好ましくは4〜12)のアルキル基;炭素数1〜40(好ましくは2〜20、更に好ましくは4〜12)のアミノアルキル基;炭素数1〜40(好ましくは2〜20、更に好ましくは4〜12)のチオアルキル基;炭素数1〜40(好ましくは2〜20、更に好ましくは4〜12)のアルコキシル基;炭素数1〜40(好ましくは2〜20、更に好ましくは4〜12)のアミノアルコキシル基;炭素数1〜40(好ましくは2〜20、更に好ましくは4〜12)のチオアルコキシル基;炭素数1〜40(好ましくは2〜20、更に好ましくは4〜12)のモノ若しくはジアルキルアミノ基;炭素数1〜40(好ましくは2〜20、更に好ましくは4〜12)のアルキルチオ基;炭素数2〜40(好ましくは2〜20、更に好ましくは4〜12)のポリエチレンオキサイド基;炭素数3〜39(好ましくは3〜21、更に好ましくは3〜12)のポリプロピレンオキサイド基等を挙げることができる。これらの置換基を結合させることによって、RNA干渉効果を顕著に増強させることが可能になる。
上記センス鎖RNAにおける、置換基若しくは機能性分子又はこれらを連結するリンカーの結合部位については、特に限定されるものではないが、これらがセンス鎖RNAの所定のヌクレオチドのリン酸部分の水酸基を構成する水素原子と置換されて結合していることが好ましい。
化学的合成は、siRNA構成要素である核酸分子を含むアミダイド樹脂を原料として、核酸合成装置により合成することが可能である。
転写系による合成は、ヘアピン型RNAをトリミングする試験管内転写法により2本鎖RNAを合成することが可能である。
従って、本発明のsiRNA及び当該siRNAを投与対象内で発現可能な発現ベクターは、ヒト又は動物に投与するための医薬(医薬組成物)として有用である。具体的には、TGF−β1遺伝子発現抑制のための医薬、TGF−β1の過剰発現に起因する疾患、例えば線維症の予防・治療のための医薬、すなわち線維症の予防又は治療剤として有用である。
ここで、肺の線維化を来たす疾患としては、間質性肺炎、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患(COPD: Chronic obstructive pulmonary disease)、急性呼吸促迫症候群 (ARDS: Acute respiratory distress syndrome)、炎症性肺疾患、肺感染症、放射性肺臓炎、薬剤性間質性肺炎、膠原病に伴う間質性肺炎など多岐にわたるが、原因が特定できない間質性肺炎である特発性間質性肺炎(IIPs)のうち特発性肺線維症(IPF)が特に好ましい。特発性間質性肺炎(IIPs)には臨床病理学的疾患として、特発性肺線維症(IPF)、非特異的間質性肺炎(NSIP)、特発性器質化肺炎(COP/BOOP)、急性間質性肺炎(AIP)、剥離性間質性肺炎(DIP)、呼吸細気管支炎に伴う間質性肺疾患(RB-ILD)、リンパ球性間質性肺炎(LIP)等が包含される。
また、TGF-β1は、がん、特に肺腺がんの浸潤や転移を促進すること(Mol Cell Biochem (2011) 355:309.314、Cancer Genomics Proteomics 2010, 7, 217)、TGF-β1が、がん治療後の正常組織の損傷部位で過剰発現し、TGF-β1経路を標的とすることで当該正常組織の損傷を抑制できること(The Oncologist 2010;15:350.359)等が報告されていることから、本発明のsiRNA及び当該siRNAを投与対象内で発現可能な発現ベクターは、がん、特に肺がんの予防又は治療剤としても有用である。
シクロアミロースは、グルコースがα−1,4結合により結合した環状α−1,4−グルカンであり、へリックス構造の内側に立体的で奥行きのある空洞部分を有している。本発明に使用されるシクロアミロースにおけるグルコースの重合度としては、特に制限されるものではないが、例えば10〜500、好ましくは10〜100、更に好ましくは22〜50が例示される。シクロアミロースは、アミロマルターゼ等の酵素を利用して、グルコースから調製することができる。また、シクロアミロースは市販されており、本発明では市販品を使用することもできる(国際公開第2009/61003号パンフレット参照)。
この場合の発現ベクターは、例えば、本発明のsiRNAをコードすることができるDNAを、適当な遺伝子治療用ベクター、例えば、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクター、又はレンチウイルスベクター等に挿入することにより構築することができる。
実施例1 siRNAの作製
下記表3に示されるTGF−β1遺伝子を標的とするsiRNA分子を設計し、各siRNAオリゴヌクレオチドを化学合成法によって合成し、HPLC精製法にて精製して使用した。
(1)細胞
ヒト肺胞上皮由来のA549細胞(DSファーマバイオメディカル株式会社)を用いた。
1×105個の細胞を10%牛胎児血清含有のD−MEM培地(Dulbecco's modified Eagle's Medium, 100unit/mLペニシリン, 100μg/mLストレプトマイシン含有,12ウェルプレート)に播種する。37℃、5%CO2条件下で一晩培養後、40%コンフルエントとなったA549細胞の培地を無血清培地に交換した。
siRNAとして、上記表3に示すオリゴヌクレオチドを用い、細胞が40%コンフルエントとなった時点で、Lipofectamine2000 (インビトロジェン社)を用いて上記細胞への導入を行った。
具体的には、各ウェルあたり2.0μL Lipofectamine2000を98μL OPTI−MEM(インビトロジェン)に添加し、5分間室温でインキュベーションした(A溶液)。
0.2μM siRNA溶液0.625μLを99.375μL OPTI−MEMに添加した(B溶液)。A及びB溶液を混和し、室温で20分間インキュベーションした。インキュベーション後、12−ウェルプレート各ウェルにAB混液を添加した。siRNA最終濃度が、0.1nMとなるように添加した。
(i)サイトカイン処理
siRNA及びLipofectamine混液を添加6時間後、培地を0.1%BSA(牛血清アルブミン)及びサイトカイン(1ng/mL IL−1β及び1ng/mL TNF−α)含有D−MEM培地に交換し、12時間培養した。培養後上清をサンプリングした。
細胞中全RNA抽出には、自動核酸抽出装置QuickGene−810(富士フイルム株式会社)とQuickGene−810の専用キットであるQuickGene RNA cultured cell kitS(富士フイルム株式会社)を用いた。細胞を1.0mL PBSで洗浄し、細胞溶解液0.5mLを添加し、細胞中に含まれる全RNAの抽出を行った。0.5mL溶解液(LRC、メルカプトエタノール添加済み)を添加した12ウェルプレートをシーソー型振盪機で5分間撹拌した。ピペッティングにより液を5−6往復させてよく混ぜ、液をエッペンドルフチューブへ移した。エタノールを420μL添加し、ボルテックスミキサーで15秒間撹拌後、QuickGene−810で処理を行なった。QuickGene−810での処理中、DNase(RQ1 RNase−free DNase,Promega)を添加した。抽出した全RNAサンプルは、次処理を行うまで−80℃冷蔵庫にて保管した。
培養細胞から抽出された全RNAサンプル中のRNA濃度(μg/mL)を、260nmにおける吸光度の測定値から計算した(対照:TEバッファー)。この値をもとに、各サンプルにおいてRNA量が0.1μgに相当する溶液量を96ウェルプレートに入れた。これに蒸留水を加えて全量12μLとし、さらにQuantiTect Reverse Transcription Kit(QIAGEN)に含まれるgDNA Wipeout Buffer 2μLを加え、ボルテックス混和後、42℃で2分間インキュベートし、その後4℃に冷却した。これにQuantiTect Reverse Transcription Kit(QIAGEN)に含まれるQuantiscript Reverse Transcriptase 1μL、Quantiscript RT Buffer 4μL、及びRT Primer Mix 1μLを加え、混和し、42℃で15分間インキュベートした。続いてQuantiscript Reverse Transcriptaseを失活させるため95℃で3分間加熱した後、4℃に冷却した。
この調製液(cDNA調製原液)をTEバッファーで5倍希釈し、標的遺伝子(TGF−β1)をターゲットとしたPCR用cDNA溶液とした。
また、cDNA調製原液をTEバッファーで50倍希釈し、内部標準遺伝子としてGAPDHを選定しPCR用cDNA溶液とした。なお、コントロールサンプル(siRNA非投与)のcDNA調製原液をTEバッファーで1、10、100、及び1000倍希釈し、TGF−β1をターゲットとしたPCR検量線用サンプルとした。同様にコントロールサンプルcDNA調製原液をTEバッファーで10、100、1000、及び10000倍希釈し、GAPDHをターゲットとしたPCR検量線用サンプルとした。
TGF−β1に由来するcDNA産物2.5μLを鋳型として、12.5μL QuantiFast SYBR Green PCR Master Mix (QIAGEN)と、ヒト由来TGF−β1遺伝子又はヒト由来GAPDH遺伝子の2.5μL QuantiTect Primer Assay (QIAGEN)を用いて、滅菌蒸留水にて最終容量25μLとしたPCR反応溶液を調製した。調製した溶液は、Applied Biosystems 7500 (Life Technologies Japan)にて、95℃で5分間加熱した後、1)95℃,10秒、2)60℃,35秒のサイクルを40回繰り返した後に、95℃から60℃に徐冷し、熱解離測定を行った。PCR増幅過程に由来するCt(Threshold Cycle)値を基に、GAPDH遺伝子のCt値による各標的遺伝子の増幅割合を補正し、標的遺伝子のmRNA抑制効果を評価した。結果を図1及び表4に示す。
siRNA番号(l)を基に、下記表5に示したTGF−β1遺伝子を標的とするキメラ型siRNA分子を設計し、各キメラ型siRNAオリゴヌクレオチドを化学合成法によって合成し、HPLC精製法にて精製して使用した。
表5に示すオリゴヌクレオチド(濃度:10nM又は0.1nM)を用いて実施例2と同様の方法で、TGF−β1の発現抑制効果を評価した。結果を図2及び表6に示す。
siRNA番号(l)を基に、下記表7に示したTGF−β1遺伝子を標的とするリン酸又はチオリン酸結合キメラ型siRNA分子を設計し、各キメラ型siRNAオリゴヌクレオチドを化学合成法によって合成し、HPLC精製法にて精製して使用した。
表7に示すオリゴヌクレオチドを用いて実施例2と同様の方法でTGF−β1の発現抑制効果を評価した。結果を図3及び表8に示す。
siRNA番号(l)を基に、下記表9に示したTGF−β1遺伝子を標的とするオーバーハング部分にDNAを有するsiRNA分子を設計し、siRNAオリゴヌクレオチドを化学合成法によって合成し、HPLC精製法にて精製して使用した。
表9に示すオリゴヌクレオチドを用いて実施例2と同様の方法でTGF−β1の発現抑制効果を評価した。結果を表10に示す。
マウスとヒトの共通配列であるsiRNA番号(q)(配列番号34及び35)を基に、キメラ型siRNA(q-C8:センス鎖(5'→3'):CCAAGGGCUACCAtgccaact(配列番号52)、アンチセンス鎖(5'→3'):ttggcaUGGUAGCCCUUGGGC(配列番号53)を設計し、実施例3と同様にしてキメラ型siRNAオリゴヌクレオチドを合成し、HPLC精製法にて精製した。これを被験物質として用いて、ブレオマイシン肺線維症モデルマウスにて効力の評価を行った。
マウス(C57BL/6NCrSlc(SLC)、メス、13週齢)にペントバルビタール(大日本住友製薬株式会社製)をマウス腹腔内に投与後、麻酔下のマウス背部皮下にALZETTM osmotic pump(model 2001, DURECT Corporation)を埋め込み作成した。なお、ALZETTM osmotic pumpには約10mg/mLのブレオマイシン生理食塩水溶液200μLをあらかじめ注入しており、ブレオマイシンは日本化薬株式会社製を使用した。
被験物質は、ALZETTM osmotic pump埋め込み後、3、7、14日目に蒸留水(大塚製薬株式会社)で溶解し、毎回100μg/bodyをMicroSprayerTM(model IA-1C、PENN CENTURY, Inc.)を用いて気管内投与した。投与容量は、ブレオマイシン投与開始後3、7日目は75μL/body、14日目は50μL/bodyで行った。
なお、比較対照として、ALZETTM osmotic pumpに生理食塩水のみ200μLを注入して、被験物質として蒸留水を投与した群、およびALZETTM osmotic pumpに約10mg/mLのブレオマイシン生理食塩水溶液200μLを注入して、被験物質として蒸留水を投与した群を設定した。
採取したBALFは、遠心分離(2000rpm、4℃、10分間)し、上清のTGF-β1蛋白量をELISA法にて測定した。結果を図4に示す。図中、SALは、生理食塩水(saline)、DWは、蒸留水(distilled water)、BLMは、ブレオマイシン(bleomycin)を示す。
10%中性緩衝ホルマリン固定液で固定した肺組織は、パラフィン包埋、組織切片作製後、H.E.(Hematoxilin-Eosin)染色およびマッソントリクローム染色を行った。組織図を図5に示す。
Claims (17)
- 以下の(a)、(e)、(h)、(i)、(k)、(l)、(o)及び(s)から選ばれるsiRNA。
(a)配列番号2に示されるセンス配列と配列番号3に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(e)配列番号10に示されるセンス配列と配列番号11に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(h)配列番号16に示されるセンス配列と配列番号17に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(i)配列番号18に示されるセンス配列と配列番号19に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(k)配列番号22に示されるセンス配列と配列番号23に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(l)配列番号24に示されるセンス配列と配列番号25に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(o)配列番号30に示されるセンス配列と配列番号31に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA
(s)配列番号54に示されるセンス配列と配列番号55に示されるアンチセンス配列とから形成されるsiRNA - 前記siRNAのセンス鎖の3’末端の末端側からオーバーハングヌクレオチドを除いた連続する1〜10ヌクレオチドがDNAに変換された請求項1に記載のsiRNA。
- 前記siRNAのアンチセンス鎖の5’末端の末端側から連続する1〜10ヌクレオチドがDNAに変換された請求項1又は2に記載のsiRNA。
- 前記siRNAのセンス鎖の3’末端の末端側からオーバーハングヌクレオチドを除いた連続する1〜10ヌクレオチドがDNAに変換され、且つアンチセンス鎖の5’末端の末端側から連続する1〜10ヌクレオチドがDNAに変換された請求項1〜3の何れか1項に記載のsiRNA。
- 前記siRNAのセンス鎖の3’末端のオーバーハングヌクレオチドに塩基数1〜7のDNAヌクレオチドが付加された請求項1に記載のsiRNA。
- ヌクレオチドとして、糖、塩基及び/又はリン酸塩が化学修飾されたヌクレオチド類似体を含む請求項1〜5のいずれか1項に記載のsiRNA。
- アンチセンス鎖の5’末端がモノリン酸化又はモノチオリン酸化された請求項1〜6の何れか1項に記載のsiRNA。
- 請求項1〜7のいずれか1項に記載のsiRNAを含有する医薬組成物。
- 請求項1〜7のいずれか1項に記載のsiRNAを有効成分として含有するTGF−β1遺伝子発現抑制剤。
- 請求項1〜7のいずれか1項に記載のsiRNAを有効成分として含有する線維症予防又は治療剤。
- 請求項1〜7のいずれか1項に記載のsiRNAを有効成分として含有する肺線維症若しくは肺がんの予防又は治療剤。
- TGF−β1遺伝子発現抑制剤の製造のための、請求項1〜7のいずれか1項に記載のsiRNAの使用。
- 線維症予防又は治療剤の製造のための、請求項1〜7のいずれか1項に記載のsiRNAの使用。
- 肺線維症若しくは肺がんの予防又は治療剤の製造のための、請求項1〜7のいずれか1項に記載のsiRNAの使用。
- TGF−β1遺伝子発現抑制のための、請求項1〜7のいずれか1項に記載のsiRNA。
- 線維症予防又は治療のための、請求項1〜7のいずれか1項に記載のsiRNA。
- 肺線維症若しくは肺がんの予防又は治療のための、請求項1〜7のいずれか1項に記載のsiRNA。
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