JP5976740B2 - イン・ビトロおよびイン・ビボにおける成人歯髄幹細胞 - Google Patents
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Description
本発明は、ヒトにおける修復歯科学の分野に関する。詳細には、本発明は、象牙質/歯髄に分化し得る細胞の集団および象牙質/歯髄を再生する方法に関する。
歯の形成の間には、上皮と歯乳頭細胞との間の相互作用が、間葉細胞の特定の集団の後に原生象牙質を形成する象牙芽細胞への分化を刺激することによって歯の形態形成を促進する。形態学的に、象牙芽細胞は、象牙質の外側端部に整列した偏心的な核および長い細胞突起を有する円柱状の一方向に並んだ細胞である(1)。歯の萌出後に、一般的な機械的腐食または破壊に応答し、かつ細菌によって引起こされる歯の分解を介して、象牙芽細胞によって第二象牙質が形成される(2)。この象牙芽細胞は、歯髄組織の何処かに存在する前駆体集団の増殖および分化から発生すると考えられている(3)。歯の発生および種々の分化した歯に関連する細胞型の膨大な知見にもかかわらず、出生後の生物におけるそれらの各々前駆細胞集団の特徴および性質に関してはほとんど知られていない。
また、本発明は、a)単離した成人歯髄幹細胞の培養物からの細胞とヒドロキシアパタイト/リン酸三カルシウムとを接触させ、ついでb)工程a)からの細胞を哺乳動物に移植することを含むヒト象牙質/歯髄組織を再生する方法も提供する。
原文明細書中で用いる“a”、“an”または”the”は1以上のものを意味し得る。例えば、“a”cellは1以上の細胞を意味し得る。さらに、“the”cellも1以上の細胞を意味し得る。
NIH Office of Human Subjects Researchによって設定された認可ガイドラインで、Dental Clinic of the National Institute of Dental & Craniofacial Researchにおいて成人(19-29歳)から通常のヒトの埋伏した第三大臼歯を収集した。歯表面を清掃し、消毒した歯科用裂溝状バーを用いてセメント質−エナメル質接合部のまわりに切断して、髄室を暴露させた。歯冠および歯根から歯髄組織を静かに分離し、ついで、3mg/mlのI型コラゲナーゼ(Worthington Biochem, Freehold, NJ)および4mg/mlのディスパーゼ(Boehringer Mannheim, GMBH, Germany)の溶液中、37℃にて1時間消化した。70μm濾過器(strainer)(Falcon, BD Labware, Franklin Lakes, NJ)に細胞を通すことによって単一細胞懸濁液を得た。正常な成人ボランティア(20−35歳)の骨髄吸引物から処理した骨髄細胞は、Poietic Technologies, Gaithersburg, Marylandから購入し、ついで増殖培地で洗浄した。歯髄および骨髄の単一細胞懸濁液(0.01ないし1×105/ウェル)を、20%子ウシ胎児血清(Equitech-Bio Inc, Kerrville, TX)、100μMのL−アスコルビン酸 2−リン酸(WAKO, Tokyo, Japan)、2mMのL−グルタミン、100U/mlのペニシリンおよび100mg/mlのストレプトマイシン(Biofluids Inc, Rockville, MD)を補充したイーグル培地(GIBCO BRL, Grand Island, NY)の修飾物を含む6−ウェルプレート(Costar, Cambridge, MA)に播き、ついで、5%のCO2中、37℃にてインキュベートした。コロニー形成効率を評価するために、14日目に培養物を4%のホルマリンで固定し、ついで0.1%のトルイジンブルーで染色した。>50細胞の塊をコロニーとしてスコアした。イン・ビトロの石灰化骨マトリックス沈澱物を誘導する条件は以前に報告されている(6)。DPSCおよびBMSCの準融合培養物(第一継代)の増殖率は、Zymed Laboratories BrdU染色キット(Vector Laboratories, Burlingame, CA)を用いて、24時間のブロモデオキシウリジン(BrdU)の取込みによって評価した。
第一代DPSCおよびBMSCを8−チャンバースライド(2×104細胞/ウェル)(NUNC Inc, Naperville, IL)に継代培養した。その細胞を4%のホルマリン中で固定し、ついでZymed広域スペクトル・免疫ペルオキシダーゼキット(Vector Laboratories)を用いて、飽和レベルの一次抗体および対応する対照抗体と反応させた。
第二代DPSCおよびBMSC培養物をPBS中で洗浄し、ついで4%のホルマリンを用いて固定した。アルカリホスファターゼ活性をSigma in vitro アルカリホスファターゼ基質キット(85L-2)を用いて評価した。カルシウム沈澱は2%のアリザリンレッドS(pH4.2)で処理することによって検出した。
ほぼ5.0×106のDPSCおよびBMSC(第三継代)を40mgのヒドロキシアパタイト/リン酸三カルシウム(HA/TCP)セラミック粉末(Zimmer Inc, Warsaw, IN)と混合し、ついで以前に記載されているごとく(9)、10週齢の免疫無防備ベージュマウス(NIH-bg-nu-xid、Harlan Sprague Dawley, Indianapolis, IN)の背面に皮下移植した。これらの手法は、認可された小動物プロトコールの規定(NIDCR#97-024)に準じて行った。移植片を移植6週間後に回収し、4%のホルマリンで固定し、緩衝化した10%のEDTA(pH8.0)で脱灰させ、ついでパラフィンに包埋した。切片(5m)を脱パラフィンし、H&Eで染色した。
全RNAは、RNA STAT−60(TEL−TEST Inc. Friendswood, TX)を用いて、6週齢のDPSC移植片のコラゲナーゼ/ディスパーゼ消化細胞懸濁液から調製した。第一鎖cDNA合成は、オリゴ−dTプライマーを用いて第一鎖cDNA合成キット(GIBCO BRL, Life Technologies)を用いて行った。第一鎖cDNA(2μl)を1×PCR反応緩衝液:1.5mMのMgCl2、200mMの各dNTP、0.2単位のAmpliTaq DNAポリメラーゼ(Perkin−Elmer Inc, Norwalk, CT)ならびに10ピコモルの各ヒト特異的プライマーセット:BSP(センス(配列番号:1)
ヒト特異的alu反復配列に対するジゴキシゲニン−標識プローブを、以前に記載されているごとく(13)、aluに対するプライマーを用いるPCRによって調製した。同様にして、ヒトDSPPのmRNAに特異的なジゴキシゲニン−標識プローブも、前記したのと同一のPCR条件下でDSPPプライマーを用いて調製した。両プローブの特異性はDNA配列決定によって確認した。非染色切片を脱パラフィンし、mRNA locator-Hyb Kit(カタログ番号1800;Ambion, Inc., Austin, TX)を用いてジゴキシゲニン−標識aluプローブ(9)またはDSPPプローブのいずれかとハイブリダイズさせた。ハイブリダイゼーションの後に、組織切片中のaluおよびDSPPの両方のmRNAの存在を、抗−ジゴキシゲニン・アルカリホスファターゼコンジュゲート・Fabフラグメント(Boehringer Mannheim)との免疫反応性によって検出した。
骨前駆細胞(osteoprogenitor)は、プラスチック基層に接着するその能力および適当な刺激によって増殖を開始する能力によって、骨髄の吸引物から単離し得る(13−15)。各コロニーは単一の前駆細胞(コロニー形成単位−繊維芽細胞、CFU-F)から発生し、細胞形態および増殖能力において幅広い変化を示す(13−18)。本明細書において、歯髄組織におけるクロノジェニック細胞集団の存在(図1AおよびB)を最初に立証している。各コロニー内の細胞は、ヒト骨髄CFU−Fの子孫に類似する典型的な繊維芽細胞様の形態(19)によって特徴付けられた(図1C)。歯髄組織由来のコロニー形成細胞の頻度(平板した104細胞当り22ないし70コロニーの範囲)は、同様の平板密度(平板した0.1ないし2.5×104細胞)上での骨髄CFU−F(2.4ないし3.1コロニー/平板した104細胞)の発生率と比較して有意に高かった(図1D)。さらに、DPSC培養物中の増殖する細胞の数も、BrdU取込み方法を用いてBMSC培養物(46%BrdU陽性細胞±1.96 SEM、n=3)と比較した場合に有意に高かった(平均72%BrdU陽性細胞±3.48 SEM、n=3)(t−検定 p<0.05)(図1E)。
DPSCおよびBMSCクロノジェニック集団の子孫を特徴付けるために、異なる表現型と関連する公知の抗原に特異的な大きな一連の抗体を用いて免疫組織化学実験を行った。両方の細胞集団について典型的な免疫反応特性を表1に示す。DPSCおよびBMSCの第一代培養物は、造血系マーカーCD14(単球/マクロファージ)、CD45(一般的白血球抗原)、CD34(造血幹細胞/前駆細胞/内皮細胞)、ならびにMyoD(平滑筋)、ニューロフィラメント(神経)、II型コラーゲン(軟骨)およびPPARγ(脂肪)のごとき他のマーカーと反応しなかった。一般的に、DPSCおよびBMSCは、内皮細胞(VCAM−1およびMUC−18)、平滑筋(α−平滑筋アクチン)、骨(アルカリホスファターゼ、I型コラーゲン、オステオネクチン、オステオポンチン、オステオカルシン)および繊維芽細胞(III型コラーゲン、FGF−2)と関連する種々のマーカーについて同様の発現パターンを示す。骨マトリックスタンパク質である骨シアロタンパク質はDPSC培養物中に存在しないが、BMSC培養物中には低レベルで存在した。DPSCについての代表的な免疫反応性パターンを図2に示す。多くのマーカーは均一に発現されていないが、細胞のサブセット中に見出され、DSPC集団は、BMSC集団について示されたのと同様に異種であることを示している。
L−アスコルビン酸−2−リン酸、グルココルチコイド、デキサメタゾン、および無機リン酸塩の存在下で増殖させたDPSCの長期培養(5ないし6週間)により、高レベルのカルシウムを含むアリジリンレッド陽性の凝集した小節を形成する能力を実証した(図3A)。沈澱物は、単一石灰化ゾーンとして接着層全体にわたってばらばらに散乱していた。それに対して、BMSC培養物は、誘導の3ないし4週間後に接着層全体にわたって石灰化した沈澱物の広いシートを生成した(図3C)。デキサメタゾンを用いた刺激の6週間後に第一代DPSC培養物における脂肪生成の事実は存在せず(図3C)、一方、脂質を含有する脂肪細胞のクラスターがBMSCの第一代培養物においては2週間ほども早期に検出された(図3D)。
DPSCおよびBMSCの移植は前記と同様にして行った。移植片は移植8週間後に回収し、4%の新たに調製したパラホルムアルデヒドを用いて24時間固定化し、10%のEDTA(pH8.0)を用いて7日間脱灰した。ついで、その移植片を70%のエタノールに移し、パラフィンブロック中に包埋した。DSPP抗体はDr. Larry Fisher(NIDCR/NIH)から寄贈いただいた。脱パラフィンし、脱水し、内因性ペルオキシダーゼを除去した後に、切片をDSPP一次抗体と一緒に室温にて1時間インキュベートした。ついで、第二抗体および酵素コンジュゲートのインキュベーションに、指示書に従ってHistostain SPキットを用いた(Zymed Laboratories Inc. South San Francisco, CA, U.S.A.)。ヒトの歯髄および脱灰した象牙質組織を陽性対照として用いた。この手法により、DPSC移植片中の新たに形成した象牙質が象牙質特異的DSPP抗体に対して陽性であることが示された(図7)。このことは、イン・ビボにおいてヒトDPSCが象牙芽細胞に分化してヒト象牙質を再生することのさらなる証拠である。
DPSCおよびBMSCの移植は、前記と同様にして行った。8週齢のヒトDPSC移植片を4%の新たに調製したパラホルムアルデヒドで24時間固定し、70%のエタノールに移し、プラスチック包埋した。Trichrome染色(GOMORI)キット(Sigma, #HT10516)を製造業者のプロトコールに従って染色に用いた。通常の歯のプラスチック包埋切片を陽性対照として用いた。この染色により、DPSCが普通のヒト象牙質と同様の無機物化したコラーゲン構造を含む象牙質を再生することが示された(図8)。
1. Smith, A. J., Cassidy, N., Perry, H., Begue-Kirn, C., Ruch, J. V.およびLesot, H. (1995) Int J Dev Biol 39, 273-80.
2. Kitamura, C., Kimura, K., Nakayama, T.およびTerashita, M. (1999) J Dent Res 78, 673-80.
3. Ruch, J. V. (1998) Biochem Cell Biol 76, 923-38.
4. Couble, M. L., Farges, J. C., Bleicher, F., Perrat-Mabillon, B., Boudeulle, M.およびMagloire, H. (2000) Calcif Tissue Int 66, 129-38.
5. Cheng, S. L., Yang, J. W., Rifas, L., Zhang, S. F.およびAvioli, L. V. (1994) Endocrinology 134,277-86.
6. Gronthos, S., Graves, S. E., Ohta, S.およびSimmons, P. J. (1994) Blood 84, 416473.
7. Friedenstein, A. J., Ivanov-Smolenski, A. A., Chajlakjan, R. K., Gorskaya, U. F., Kuralesova, A. I., Latzinik, N. W.およびGerasimow, U. W. (1978) Exp Hemato 6, 4404.
8. Bennett, J. H., Joyner, C. J., Triffitt, J. T.およびOwen, M. E. (1991) J Cell Sci 99, 131-9.
9. Kuznetsov, S. A., Krebsbach, P. H., Satomura, K., Kerr, J., Riminucci, M., Benayahu, D.およびRobey, P. G. (1997) J Bone Miner Res 12, 1335-47.
10. Ferrai, G., Cusella-De Angelis, G., Coletta, M., Paolucci, E., Stornaiuolo, A., Cossu, G.およびMavilio, F. (1998) Science 279,1528-30.
11. Azizi, S. A.ら (1998) Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 3908-13.
12. Pittenger, M. F., Mackay, A. M., Beck, S. C., Jaiswal, R. K., Douglas, R., Mosca, J. D., Moorman, M. A., Simonetti, D. W., Craig, S.およびMarshak, D. R. (1999) Science 284,143-7.
13. Bianco, P.およびRobey, P. G. (2000) J. Clin. Invest. 105.
14. Robey, P. G. (2000) J Clin Invest 105, 1489-91.
15. Nakashima, M., Nagasawa, H., Yamada, Y.およびReddi, A. H. (1994) Dev Biol 162,18-28.
16. Shiba, H., Fujita, T., Doi, N., Nakamura, S., Nakanishi, K., Takemoto, T., Hino, T., Noshiro, M., Kawamoto, T., Kurihara, H.およびKato, Y. (1998) J Cell Physiol 174, 194-205.
17. Onishi, T., Kinoshita, S., Shintani, S., Sobue, S.およびOoshima, T. (1999) Arch Oral Biol 44, 361-71.
18. Kettunen, P., Karavanova, I.およびThesleff, I. (1998) Dev Genet 22,374-85.
19. Kuo, M. Y., Lan, W. H., Lin, S. K., Tsai, K. S.およびHahn, L. J. (1992) Arch Oral Biol 37,945-52.
20. Tsukamoto, Y., Fukutani, S., Shin-Ike, T., Kubota, T., Sato, S., Suzuki, Y.およびMori, M. (1992) Arch Oral Biol 37, 1045-55.
21. Buurma, B., Gu, K.およびRutherford, R. B. (1999) Eur J Oral Sci 107, 282-9.
22. Ritchie, H. H., Hou, H., Veis, A.およびButler, W. T. (1994) JBiol Chem 269, 3698-702.
23. Gorter de Vries, I., Quartier, E., Van Steirteghem, A., Boute, P., Coomans, D.およびWisse, E. (1986) Arch Oral Biol 31, 57-66.
24. MacDougall, M., Simmons, D., Luan, X., Nydegger, J., Feng, J.およびGu, T. T. (1997) J Biol Chem 272,835-42.
25. Feng, J. Q., Luan, X., Wallace, J., Jing, D., Ohshima, T., Kulkarni, A. B., D'Souza, R. N., Kozak, C. A.およびMacDougall, M. (1998) J Biol Chem 273, 9457-64.
26. Owen, M. E. (1998) (Combridge University Press, Cambridge), pp. 1-9.
27. Friedenstein, A. J. (1980) in Immunology of Bone Marrow Eransplantation (Springer-Verlag, Berlin), pp. 19-29.
28. Bianco, P.およびCossu, G. (1999) Exp Cell Res 251,257-63.
29. Bianco, P.およびRiminucci, M. (1998) in Marrow stronlal cell culture, eds. Owen, M. A.およびBeresford, J. N. (Cambridge University Press, Cambridge UK), pp. 10-25.
30. Doherty, M. J., Ashton, B. A., Walsh, S., Beresford, J. N., Grant, M. E.およびCanfield, A. E. (1998) JBone Miner Res 13, 828-38.
31. Shiba, H., Nakamura, S., Shirakawa, M., Nakanishi, K., Okamoto, H., Satakeda, H., Noshiro, M., Kamihagi, K., Katayama, M.およびKato, Y. (1995) Dev Biol 170, 457-66.
32. Majors, A. K., Boelun, C. A., Nitto, H., Midura, R. J.およびMuschler, G. F. (1997) J Orthop Res. 15, 546-57.
33. Ishizeki, K., Nawa, T.およびSugawara, M. (1990) Anat Rec 226,279-87.
34. Holtgrave, E. A.およびDonath, K. (1995) Biomaterials 16,155-9.
35. Lyaruu, D. M., van Croonenburg, E. J., van Duin, M. A., Bervoets, T. J.,
Woltgens, J. H.およびde Blieck-Hogervorst, J. M. (1999) J Oral Pathol Med 28, 293-6.
36. Prime, S. S., Sim, F. R.およびReade, P. C. (1982) Transplantation 33,561-2.
37. Schultz, E.およびMcCormick, K. M. (1994) Rev. Physio. Biochein. Pharmacol. 123,213-257.
38. Johansson, C. B., Svensson, M., Wallstedt, L., Janson, A. M.およびFrisen, J. (1999) Exp Cell Res 253, 733-6.
39. Doetsch, F., Caille, I., Lim, D. A., Garcia-Verdugo, J. M.およびAlvarez-Buylla, A. (1999) Cell 97,703-16.
Claims (7)
- 象牙質/歯髄組織の再生に使用するための組成物であって、
(a)単離したクロノジェニック成人歯髄幹細胞の培養物であって、ここに幹細胞は脂肪細胞分化性(adipogenic)でなく、象牙芽細胞に分化することができ;および
(b)担体
を含む組成物。 - 幹細胞が骨シアロタンパク質を産生しない請求項1記載の組成物。
- ヒト象牙質/歯髄を作り出すイン・ビトロ(in vitro)の方法であって、
単離したクロノジェニック成人歯髄幹細胞の培養物と鉱物供給源とをイン・ビトロ(in vitro)で接触させ、それによってヒト象牙質/歯髄組織を作り出すことを含み、ここに幹細胞は脂肪細胞分化性(adipogenic)でなく、象牙芽細胞に分化することができる、方法。 - 鉱物供給源がヒドロキシアパタイト/リン酸三カルシウムである請求項3記載のイン・ビトロ(in vitro)の方法。
- さらに鉱物供給源を含む、請求項1記載の組成物。
- 鉱物供給源がヒドロキシアパタイト/リン酸三カルシウムである、請求項5記載の組成物。
- 単離したクロノジェニック成人歯髄幹細胞の培養物が、
成人歯髄をI型コラゲナーゼおよびディスパーゼで消化して単一の細胞懸濁液を形成させ;
その単一の細胞懸濁液を、子ウシ胎児血清を補充したイーグル培地の修飾物中で培養してコロニーを形成させ;ついで
コロニーを単離し、それによって単離した成人歯髄幹細胞を作り出す工程によって作り出す、請求項1記載の組成物。
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AUPQ147799A0 (en) | 1999-07-07 | 1999-07-29 | Medvet Science Pty. Ltd. | Mesenchymal precursor cell |
US7670628B2 (en) | 1999-07-07 | 2010-03-02 | Angioblast Systems, Inc. | Mesenchymal precursor cell |
AU2003901668A0 (en) * | 2003-03-28 | 2003-05-01 | Medvet Science Pty. Ltd. | Non-haemopoietic precursor cells |
NZ534540A (en) | 2002-02-06 | 2005-07-29 | Stiftung Caesar | Described is the development of a stem cell bank for teeth or teeth derived tissues, as well as the development of membrane-like meso/endodermal matrices which can be used in regenerative medicine |
EP1622691B1 (en) | 2003-03-14 | 2011-05-25 | The Trustees of Columbia University in the City of New York | Systems and methods of blood-based therapies having a microfluidic membraneless exchange device |
US20060076295A1 (en) | 2004-03-15 | 2006-04-13 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Systems and methods of blood-based therapies having a microfluidic membraneless exchange device |
ATE511753T1 (de) | 2003-04-19 | 2011-06-15 | Us Gov Health & Human Serv | Postnatale stammzellen und deren verwendungen |
US7309232B2 (en) * | 2003-10-10 | 2007-12-18 | Dentigenix Inc. | Methods for treating dental conditions using tissue scaffolds |
BRPI0402659A (pt) * | 2004-06-23 | 2006-01-31 | Univ Fed Sao Paulo Unifesp | Uso de células tronco, método de engenharia tecidual, usos de tecidos dentais e substituto biológico do dente |
JP4831687B2 (ja) * | 2004-07-23 | 2011-12-07 | 株式会社カネカ | 間葉系幹細胞から象牙芽細胞への分化誘導方法 |
ITNA20040043A1 (it) * | 2004-07-28 | 2004-10-28 | Francesco Carinci | Tecnica di ingegneria tissutale ottenibile mediante isolamento di una nuova sottopopolazione di cellule staminali mbp-shed ed mbp-dpsc, isolate da polpa di denti decidui e permanenti in grado di produrre in vitro tessuto osseo umano. |
TW200609355A (en) * | 2004-09-01 | 2006-03-16 | Tzu Chi Buddhist General Hospital | Nurr1-positive neuron stem cells, pharmaceutical composition thereof and methods for their isolation, culture and preservation |
KR20130100225A (ko) | 2004-09-24 | 2013-09-09 | 안지오블라스트 시스템스 인코퍼레이티드 | 간엽 전구세포의 증식 및/또는 생존성 증강 방법 |
JP4884678B2 (ja) * | 2005-02-03 | 2012-02-29 | 国立大学法人名古屋大学 | ヒト歯髄細胞からの象牙質再生方法 |
US20070258957A1 (en) * | 2006-05-04 | 2007-11-08 | Russell Bowermaster | Method for obtaining and storing multipotent stem cells |
DE602005012081D1 (de) * | 2005-07-29 | 2009-02-12 | Univ Bonn | Verfahren zur Isolierung von Stammzellen aus ein kissenformiges Gewebe der Zähne |
JP4781037B2 (ja) * | 2005-08-01 | 2011-09-28 | 株式会社カネカ | ヒト歯髄細胞の判別及び選択方法 |
KR100759388B1 (ko) | 2005-08-02 | 2007-09-19 | 유형근 | 치조골 골수 유래 성체 줄기세포의 골아세포 분화 방법 |
ES2405333T3 (es) * | 2005-10-19 | 2013-05-30 | Osaka University | Agente terapéutico para la regeneración del complejo dentina-pulpa dental |
US7448871B2 (en) * | 2005-12-09 | 2008-11-11 | Krasner Paul R | Apparatus and method for storing and transporting teeth |
EP2019658B1 (en) | 2006-05-22 | 2012-01-25 | The Trustees of Columbia University in the City of New York | Method of microfluidic membraneless exchange in an h-filter and filtration of the extraction fluid outlet streams |
WO2008067488A2 (en) * | 2006-11-29 | 2008-06-05 | University Of Southern California | Mesenchymal stem cell-mediated functional tooth regeneration |
WO2008132722A1 (en) * | 2007-04-26 | 2008-11-06 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Pluripotent autologous stem cells from oral mucosa and methods of use |
EP2155860B1 (en) | 2007-05-03 | 2014-08-27 | The Brigham and Women's Hospital, Inc. | Multipotent stem cells and uses thereof |
US8574567B2 (en) * | 2007-05-03 | 2013-11-05 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Multipotent stem cells and uses thereof |
US20100098670A1 (en) * | 2007-11-21 | 2010-04-22 | Cerapedics Inc. | Autologous dental pulp stem cell-based bone graft substitute |
US20110002895A1 (en) * | 2007-12-05 | 2011-01-06 | Minoru Ueda | Composition for autotransplantation or allotransplantation using dental pulp stem cell, and use of the composition |
CA2709490A1 (en) | 2007-12-19 | 2009-07-09 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
MX2010008591A (es) | 2008-02-04 | 2010-08-30 | Univ Columbia | Dispositivos, sistemas y metodos de separacion de fluidos. |
WO2009124213A2 (en) * | 2008-04-02 | 2009-10-08 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Dental stem cell differentiation |
CA2745760A1 (en) | 2008-12-04 | 2010-06-10 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
EP2379732A2 (en) | 2008-12-19 | 2011-10-26 | Novozymes Inc. | Methods for increasing enzymatic hydrolysis of cellulosic material in the presence of a peroxidase |
EP2379712B1 (en) | 2008-12-19 | 2017-02-22 | Novozymes Inc. | Methods for increasing hydrolysis of cellulosic material in the presence of cellobiose dehydrogenase |
WO2010080527A1 (en) | 2008-12-19 | 2010-07-15 | Novozymes, Inc. | Methods for determining cellulolytic enhancing activity of a polypeptide |
US10328103B2 (en) | 2009-01-03 | 2019-06-25 | Ray C. Wasielewski | Medical treatment composition comprising mammalian dental pulp stem cells |
US8470308B2 (en) * | 2009-01-03 | 2013-06-25 | Ray C. Wasielewski | Enhanced medical implant comprising disrupted tooth pulp and tooth particles |
US8604277B2 (en) | 2009-01-28 | 2013-12-10 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding same |
US8278507B2 (en) | 2009-06-02 | 2012-10-02 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
CN102596270B (zh) * | 2009-09-11 | 2016-10-12 | 独立行政法人国立长寿医疗研究中心 | 非拔牙根管填充材料以及非拔牙的牙组织再生方法 |
DK2478096T3 (en) | 2009-09-17 | 2017-08-28 | Novozymes Inc | POLYPEPTIDES WITH CELLULOLYTIC IMPROVING ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES CODING THEM |
WO2011041405A1 (en) | 2009-09-29 | 2011-04-07 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
BR112012006982B1 (pt) | 2009-09-29 | 2021-12-21 | Novozymes, Inc. | Célula hospedeira microbiana transgênica, métodos para produzir um polipeptídeo, para produzir um mutante de uma célula precursora, para inibir a expressão de um polipeptídeo, para produzir uma proteína, para degradar ou converter um material celulósico, para produzir um produto de fermentação, para fermentar um material celulósico, construções de ácido nucleico, vetor de expressão, polipeptídeo isolado tendo atividade intensificadora celulolítica, polinucleotídeo isolado que codifica o mesmo, e, composição detergente |
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KR101194821B1 (ko) | 2009-10-08 | 2012-10-25 | 경북대학교 산학협력단 | 킬레이팅제 용해성 치아 단백질 및 이의 용도 |
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US9081008B2 (en) | 2009-12-04 | 2015-07-14 | James Sherley | Detecting and counting tissue—specific stem cells and uses thereof |
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BR112012020503A2 (pt) | 2010-03-31 | 2015-09-15 | Novozymes Inc | variante isolado de celobioidrolase precursor, polipeptídeo isolado, construção de ácido nucleico, vetor de expressão, célula hospedeira, método de produzir um variante de celobioidrolas precursor, métodos para obter o variante, para degradar variante de celobioidrolase precursor, métodos para obter o variante, para degradar ou converter um material celulósico, poara produzir um produto de fermentação e de fermentar um material celulósico, e, composição de enzima. |
US8883210B1 (en) | 2010-05-14 | 2014-11-11 | Musculoskeletal Transplant Foundation | Tissue-derived tissuegenic implants, and methods of fabricating and using same |
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CN103459605B (zh) | 2011-01-31 | 2016-08-24 | 诺维信北美公司 | 用于酶法精制经预处理的纤维素材料以供糖化的工艺 |
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RU2466680C1 (ru) * | 2011-10-03 | 2012-11-20 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Витацел" | Способ диагностики состояния кожи пациента (варианты) |
EP2633870B1 (en) * | 2012-02-29 | 2018-08-01 | Technische Universität Berlin | Method of preparing an artificial tooth primordium in vitro and artificial tooth primordium derived therefrom |
US10041039B2 (en) | 2012-03-29 | 2018-08-07 | Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. | Method for producing pluripotent stem cells derived from dental pulp |
US9790468B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-10-17 | Avita Iinternational Ltd. | Multifunctional immature dental pulp stem cells and therapeutic applications |
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TW202020144A (zh) | 2018-07-31 | 2020-06-01 | 日商Jcr製藥股份有限公司 | 源自齒髓的細胞之製造方法 |
WO2021021919A1 (en) * | 2019-07-29 | 2021-02-04 | Relevance Total Health | Compositions and methods of using multipotent stem cells to reduce disease and enhance wellness |
US20230086254A1 (en) | 2020-01-30 | 2023-03-23 | Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. | Medicinal composition comprising dental pulp-derived cells |
WO2023227972A1 (en) | 2022-05-24 | 2023-11-30 | Iceta - Instituto De Ciências, Tecnologias E Agroambiente Da Universidade Do Porto | Process for preparation and cryopreservation of dental pulp from definitive teeth and products thereof based on isolated mesenchymal stem cells |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1997045533A1 (en) * | 1996-05-28 | 1997-12-04 | The Regents Of The University Of Michigan | Engineering oral tissues |
US6328765B1 (en) * | 1998-12-03 | 2001-12-11 | Gore Enterprise Holdings, Inc. | Methods and articles for regenerating living tissue |
US7670628B2 (en) * | 1999-07-07 | 2010-03-02 | Angioblast Systems, Inc. | Mesenchymal precursor cell |
US6899915B2 (en) * | 2000-11-29 | 2005-05-31 | President And Fellows Of Harvard College | Methods and compositions for culturing a biological tooth |
US6767740B2 (en) * | 2001-10-09 | 2004-07-27 | Roger Anton Sramek | Stem cell and dental pulp harvesting method and apparatus |
FR2833610B1 (fr) * | 2001-12-14 | 2007-01-26 | Natural Implant | Construits cellulaires cultives in vitro, preparation et utilisations |
NZ534540A (en) * | 2002-02-06 | 2005-07-29 | Stiftung Caesar | Described is the development of a stem cell bank for teeth or teeth derived tissues, as well as the development of membrane-like meso/endodermal matrices which can be used in regenerative medicine |
US7309232B2 (en) * | 2003-10-10 | 2007-12-18 | Dentigenix Inc. | Methods for treating dental conditions using tissue scaffolds |
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