JP5918227B2

JP5918227B2 - 転移性腫瘍の生長抑制のための新規なスルホンアミド化合物

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Publication number: JP5918227B2
Application number: JP2013516924A
Authority: JP
Inventors: クラウディウ・スプラン; ショウカット・デダー; ポール・シー・マクドナルド; ファブリツィオ・カルタ
Original assignee: Welichem Biotech Inc
Current assignee: Welichem Biotech Inc
Priority date: 2010-07-09
Filing date: 2011-06-22
Publication date: 2016-05-18
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Description

本発明は、新規なスルホンアミド化合物の、特に、哺乳動物の低酸素性（ハイポキシック（ｈｙｐｏｘｉｃ））および転移性（メタスタティック（ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ））癌の治療および癌幹細胞の破壊において、炭酸脱水酵素ＩＸおよびＸＩＩのインヒビターとしての使用に関する分野である。

異なる１６個の（炭酸脱水酵素（ＣＡ）アイソフォームが哺乳動物に於いて分離されキャラクタライズされており、それらは重要な生理的役割を果たす。それらのうちのいくつかは細胞質ゾルであり（ＣＡＩ、ＣＡＩＩ、ＣＡＩＩＩ、ＣＡＶＩＩ、ＣＡＸＩＩＩ）、他のものは膜結合型であり（ＣＡＩＶ、ＣＡＩＸ、ＣＡＸＩＩ、ＣＡＸＩＶおよびＣＡＸＶ）、ＣＡＶＡおよびＣＡＶＢはミトコンドリアであり、そして、ＣＡＶＩは唾液及び乳中に分泌される。哺乳類のＣＡは分離され詳細に研究されたその様な酵素の最初であり（Ｓｕｐｕｒａｎ，ＣＴ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ．２００８，７，ｐ１６８，Ｓｕｐｕｒａｎ，Ｃ．Ｔ．；Ｓｃｏｚｚａｆａｖａ，Ａ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００７，１５，４３３６）、それらのうちの多数は確立している治療のターゲットである。古典的ＣＡインヒビターは、利尿薬および抗緑内障の医薬品として５０年間以上臨床で使用中であり、１級スルホンアミド（ＲＳＯ_２ＮＨ_２）である。実際、臨床に用いられているスルホンアミドまたはスルファミン酸塩のクラスに属するＣＡ抑制活性を示す約３０の医薬品（又は臨床開発中の薬剤）があり（Ｓｕｐｕｒａｎ，Ｃ．（２００８）Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．７：１６８−１８１）、その内の幾つかは、利尿薬および抗緑内障剤として確立されている。

ＣＡインヒビターに、とりわけ抗癌剤としてポテンシャルがあることが最近分かってきた。しかしながら、治療薬としてのＣＡインヒビターの設計に対する重大な障害は、現在利用可能なスルホンアミド／スルファミン酸塩クラスのインヒビターの、ヒト中に於ける多くのアイソフォームの存在（すなわち１６個のＣＡ、その内、１３個は触媒活性を有している）、多くの組織／器官中でのやや拡散した局在性、およびアイソザイム選択性の欠落、に関連する。実際、上記の誘導体の中で、治療的値でＣＡアイソフォームを選択的に阻害する化合物はない（すべてのヒト（ｈ）ＣＡアイソフォームに対する１−２５個のスルホンアミド化合物の抑制データが、Ｓｕｐｕｒａｎ，Ｃ．（２００８）Ｎａｔｕｒｅ，７：１６８−１８１中に提供されている。

アイソザイムＣＡＩＸおよびＣＡＸＩＩは、腫瘍細胞中に主に見いだされ、正常組織で制限された発現を示す。現在のＣＡＩの限界の参考になる概要は、Ｐｏｕｌｓｅｎ，ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ（２０１０）２０（６）：７９５−８０６中に提供される。癌及び転移に対してＣＡＩＸインヒビターの使用が、利用可能な化合物の限界により、有効に実証されていないことはこのレビューから明らかである。

あるスルホンアミドＣＡＩＸインヒビターが確かに抗腫瘍の効果を示し得るという証拠が、ごく最近公表された（Ａｈｌｓｋｏｇ，Ｊ．Ｋ．Ｊ．；Ｄｕｍｅｌｉｎ，Ｃ．Ｅ．；Ｔｒｕｓｓｅｌ，Ｓ．；Ｍａｒｌｉｎｄ，Ｊ．；Ｎｅｒｉ，Ｄ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００９，１９，４８５１．）。Ｍａｒｅｓｃａら（ＰＣＴＷＯ_２００９０８９３８３）中に、例えばある化合物が開示されている。しかしながら、ハウスキーピング炭酸脱水酵素の阻害が示されるていので、選択性が問題である。

式（Ｉ）Ｒ−Ｑ−Ａｒ−ＳＯ_２ＮＨ_２−の化合物を含んでなるウレイド−スルホンアミド組成物が提供される。ここで、Ｒは電荷を有し又は有しないアリール、ヘタリル、アルキル又はシクロアルキル基であり；
Ｑは−Ｌ（ＣＨ_２）_ｎ−基であり、ここで、ｎ＝０、１又は２であり、Ｌは−ＮＨＣＸＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｓ）ＳＮＨ、−ＮＨＣＯＮＨＣＳＮＨ、又は−ＳＯ_２ＮＨ基であり、ここで、ＸはＯまたはＳであり；
及び、Ａｒは、酸素、窒素又は硫黄の少なくとも１つのヘテロ原子を含んでいるＣ_６−Ｃ_１０芳香族又はヘテロ芳香族基であり、
低酸素性（ハイポキシック）および転移性癌の治療のための、癌幹細胞の欠陥又は破壊のための、又はＣＡＩＸまたはＣＡＸＩＩの増加した発現によって特徴付けられた任意の癌の治療に対して提供される。

Ｑは−ＮＨＣＯＮＨであってよく、Ａｒはフェニルであってよく、そして、ＲはＰｈＣＨ_２、Ｐｈ_２ＣＨ、４−ＦＣ_６Ｈ_４、４−ＣｌＣ_６Ｈ_５、４−ＢｒＣ_６Ｈ_４、Ｃ_６Ｆ_５、２−ＭｅＯＣ_６Ｈ_４、４−ＡｃＣ_６Ｈ_４、２−ｉ−ＰｒＣ_６Ｈ_４、４−ｉ−ＰｒＣ_６Ｈ_４、４−ｎ−ＢｕＣ_６Ｈ_４、ｎ−ＢｕＯＣ_６Ｈ_４、４−ｎ−オクチル−Ｃ_６Ｈ_４、４−ＮＣＣ_６Ｈ_４、２−ＮＣＣ_６Ｈ_４、４−ＰｈＯＣ_６Ｈ_４、２−ＰｈＣ_６Ｈ_４、３−Ｏ_２ＮＣ_６Ｈ_４、４−ＭｅＯ−２ＭｅＣ_６Ｈ_３、シクロペンチル、インダン−５−イル、３，５−Ｍｅ_２Ｃ_６Ｈ_３、４−ＣＦ_３Ｃ_６Ｈ_４、又は３，５−（ＣＦ_３）_２Ｃ_６Ｈ_３の１つである。

本発明組成物の活性成分は次のうちのいずれか１つ以上であってよい：
４−｛［（ベンジルアミノ）カルボニル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０２）；
４−｛［（ベンズヒドリルアミノ）カルボニル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０３）；
４−｛［（４’−フルオロフェニル）カルバモイル］アミノ）｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０４）；
４−｛［（４’−ブロモフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０５）；
４−｛［（ペンタフルオロフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０７）；
４−｛［（２’−メトキシフェニル）カルバモイル］アミノ）｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０８）；
４−｛［（４’−アセトフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０９）；
４−｛［（２’−イソ−プロピルフェニル）カルバモイル］アミノ）｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１０）；
４−｛［（４’−イソ−プロピルフェニル）カルバモイル］アミノ）｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１１）；
４−｛［（４’−ｎ−ブチルフェニル）カルバモイル］アミノ）｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１２）：
４−｛［（４’−ブトキシフェニル）カルバモイル］アミノ）｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１３）；
４−｛［（４’−ｎ−オクチルフェニル）カルバモイル］アミノ）｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１４）：
４−｛［（４’−シアノフェニル）カルバモイル］アミノ）｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１５）；
４−｛［（２’−シアノフェニル）カルバモイル］アミノ）｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１６）；
４−｛［（４’−フェノキシフェニル）カルバモイル］アミノ）｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１７）；
４−｛［（ビフェニル−２’−イル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１８）；
４−｛［（３’−ニトロフェニル）カルバモイル］アミノ）｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１９）；
４−｛［（４’−メトキシ−２’−メチルフェニル）カルバモイル］アミノ）｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２０）；
４−［（シクロペンチルカルバモイル）アミノ］ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２２）（；）
４−｛（［（３’，５’−ジメチルフェニル）アミノ］カルボニルアミノ）；｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２３）；
４−｛［（４’−クロロフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２４）；
４−｛［（２’，３’−ジヒドロー１Ｈ−インデン−５」−イルアミノ］カルボニルアミノ）｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２５）；
４−｛［（［４’，（トリフルオロメチル）フェニル］アミノカルボニル）アミノ）］｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２６）；
４−｛［（［３’，５’−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］アミノカルボニル）アミノ）］｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２７）；
３−（３−（４’−ヨードフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２８）；
３−（３−（４’−フルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２９）；
３−（３−（３’−ニトロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３０）；
３−（３−（４’−アセチルフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３１）；
３−（３−（２’−イソプロピルフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３２）；
３−（３−（パーフルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３３）；
４−（３−（４’−クロロ−２−フルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３４）；
４−（３−（４’−ブロモ−２’−フルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３５）；
４−（３−（２’−フルオロ−５’−ニトロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３６）；
４−（３−（２’，４’，５」−トリフルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３７）；
４−（３−（２’−フルオロ−５’−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３８）；
４−（３−（２’−フルオロ−３’−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３９）；
４−（３−（２’，３’，４’−トリフルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１４０）；
４−（３−（２’−フルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１４１）；
４−（３−（２’，４’−ジフルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１４２）；
４−（３−（３’−クロロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１４３）
４−（３−（２’，５’−ジクロロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１４４）；
４−（３−（２’−クロロ−５’−ニトロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１４５）；
４−（３−（２’−クロロ−４’−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１４６）；
４−（３−（２’，６’−ジフルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１４７）；又は
４−（３−（パークロロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１４８）。

本発明により、インビボで又はインビトロで、ＣＡＩ及びＣＡＩＩの活性を抑制するよりかなりの程度大きく腫瘍関連ＣＡＩＸの活性を抑制する組成物が提供される。

本発明による組成物で哺乳動物を治療することにより、前記哺乳動物中の腫瘍生長、侵入および（または）腫瘍転移を抑制する方法が提供される。

本発明による組成物で哺乳動物を治療することにより、前記哺乳動物中の乳癌細胞数又は質量を減じる方法が提供される。

本発明によって提供される組成物を使用して、哺乳類の癌幹細胞母集団中の癌幹細胞を激減させる方法が提供される。

本発明によって提供される組成物を使用して、低酸素性癌細胞の細胞死を誘発する方法が提供される。

哺乳動物が追加的な抗癌剤で治療される、請求項１０に記載の方法。

本発明に従って治療された哺乳動物は、追加的化学療法剤又は他の抗癌剤で治療されてもよい。ここに治療されたいかなる癌又は腫瘍又は細胞集団も、非癌性で同様に発生した組織に対する正常なレベル以上に又は越えてＣＡＩＸ又はＣＡＸＩＩを発現するかもしれない。

治療される腫瘍は、本発明の実施態様による胸、肺、膵臓、腎、前立腺、頚部、結腸直腸癌、又膠芽腫かもしれない。癌または腫瘍がある哺乳動物を治療する組成物の使用は、転移を減じてもよいし除去してもよい。

哺乳類はヒトであってもよい。

式（Ｉ）Ｒ−Ｑ−Ａｒ−ＳＯ_２ＮＨ_２−の化合物を含んでなる組成物が更に提供される。ここで、Ｒは電荷を有し又は有しないアリール、ヘタリル、アルキル又はシクロアルキル基であってよく；Ｑは−Ｌ（ＣＨ_２）_ｎ−基であってよく、ここで、ｎ＝０、１又は２であり、Ｌは−ＮＨＣＸＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｓ）ＳＮＨ、−ＮＨＣＯＮＨＣＳＮＨ、又は−ＳＯ_２ＮＨ基であってよく、ここで、ＸはＯまたはＳであり；及び、Ａｒは、酸素、窒素又は硫黄の少なくとも１つのヘテロ原子を含んでいるＣ_６−Ｃ_１０芳香族又はヘテロ芳香族基であってよく、又は、ここで、Ｑは−ＮＨＣＯＮＨであってよく、Ａｒはフェニルであり、そして、ＲはＰｈＣＨ_２、Ｐｈ_２ＣＨ、４−ＦＣ_６Ｈ_４、４−ＣｌＣ_６Ｈ_５、４−ＢｒＣ_６Ｈ_４、Ｃ_６Ｆ_５、２−ＭｅＯＣ_６Ｈ_４、４−ＡｃＣ_６Ｈ_４、２−ｉ−ＰｒＣ_６Ｈ_４、４−ｉ−ＰｒＣ_６Ｈ_４、４−ｎ−ＢｕＣ_６Ｈ_４、ｎ−ＢｕＯＣ_６Ｈ_４、４−ｎ−ＢｕＯＣ_６Ｈ_４、４−ｎ−オクチル−Ｃ_６Ｈ_４、４−ＮＣＣ_６Ｈ_４、２−ＮＣＣ_６Ｈ_４、４−ＰｈＯＣ_６Ｈ_４、２−ＰｈＣ_６Ｈ_４、３−Ｏ_２ＮＣ_６Ｈ_４、４−ＭｅＯ−２−ＭｅＣ_６Ｈ_３、シクロペンチル、インダン−５−イル、３，５−Ｍｅ_２Ｃ_６Ｈ_３、４−ＣＦ_３Ｃ_６Ｈ_４、又は３，５−（ＣＦ_３）_２Ｃ_６Ｈ_３であってよい。

本発明の好ましい化合物は、更なる明快さのための以下に説明される。

本発明による組成物は、インビトロで、ＣＡＩ及びＣＡＩＩの活性を抑制するよりかなりの程度大きく腫瘍関連ＣＡＩＸ及びＣＡＸＩＩの活性を抑制すると云う点で特徴付けされる。

低酸素にあるヒト乳癌細胞の浸潤を阻害し及び／または細胞死を誘発する組成物およびそれらの使用がさらに提供される。

ＣＡＩＸ活性の抑制を通して乳癌幹細胞のメンテナンスを損なう組成物およびそれらの使用がさらに提供される。

ＣＡＩＸ活性の阻害によりヒト乳癌中の癌幹細胞母集団を激減させる組成物およびそれらの使用がさらに提供される。

ＭＳＴ−０１７、ＭＳＴ−１１４、ＭＳＴ−１１９、ＭＳＴ−１０４又はＭＳＴ−１３０を持った転移性又は低酸素性の癌を治療する方法がさらに提供される。

式（Ｉ）の化合物からなる医薬組成物、特に医薬組成物、も提供される。

本発明の他の側面および特徴は、付随する図、表、式および実施例と相俟って本発明の具体的な実施態様の以下の説明をレビューすることで、当業者に明白になるであろう。

図１は、無再発性生存期間（Ａ）、遠隔無再発性生存期間（Ｂ）および乳癌特有の生存期間（Ｃ）に関連したＣＡＩＸ発現のＩｎＫａｐｌａ−Ｍｅｉｅｒ分析を示し、統計的有意性の非常な高水準を達成した（それぞれ、ｐ＜１０^−１７、ｐ＜１０^−１６、及びｐ＜１０^−１３）。１０年の遠隔無再発性生存期間および乳癌特有の生存期間の、ＣＡＩＸネガティブの群に対するＣＡＩＸポジティブの群おける具体的な割合が、それぞれ、７３％に対して５７％、および７８％に対して６２％であった。標準的予後変数および生物学的なサブタイプをすべて含む多変量解析中で、ＣＡＩＸ発現は、１．４の危険比率で強い独立した貧弱な予後因子のままであった。図２は、生体内の腫瘍細胞の生物発光のラベル化を実証するマウスモデルと一緒の３つの細胞株６７ＮＲ、６６ｃｌ４および４Ｔ１に対する細胞培養（Ａ）、および、３つの腫瘍タイプ（高発現、暗い；低発現、明るい）のための低酸素症（又は低酸素状態：ハイポキシア（ｈｙｐｏｘｉａ））で誘発された遺伝子発現表（Ｂ）を示す。図３は、原発腫瘍中にＣＡＩＸ過剰発現を示すウェスタンブロットを示す。ＮＭＧ＝正常な乳腺。ベータアクチンはローディング管理の役を務めた。図４は、溶解産物（ゲル）のｑＲＴ−ＰＣＲ（グラフ）およびウェスタンブロットによって測定されるように７２時間培養された転移（４Ｔ１、６６ｃｌ４）及び非転移（６７ＮＲ）である細胞のＣＡＩＸ発現に関連したデータのグラフ（Ａ）を示す。データは平均±ｓ．ｅ．ｍとして表わされる。ｎ＝３、＊＊Ｐ＜０．００５、＊＊＊Ｐ＜１０^−３。ベータアクチンはローディング管理として示された。７２時間培養され、ＣＡＩＸ（ｓｈＣＡＩＸ）をターゲットとする非サイレンシングｓｈＲＮＡ（ｓｈＮＳ）又はｓｈＲＮＡを発現する４Ｔ１細胞（Ｂ）。ｓｈＣＡＩＸを発現する独立した２つのクローン（Ｃ２、Ｃ５）が解析された。下段パネル、溶解産物はＣＡＩＸ発現用ウェスタンブロットによって評価された。ベータアクチンはローディング管理の役を務めた。図５は、ｓｈＣＡＩＸを発現し、低酸素で４８時間培養されたＴＯＰ４Ｔ１細胞（Ａ）のＴＵＮＥＬポジティブ細胞（矢印）の代表的な画像（イメージ）を含む。そして、細胞死の量はｓｈＮＳを発現する４Ｔ１細胞と比較された。上段パネルは、ＴＵＮＥＬポジティブ細胞（矢印）の代表的なイメージ。目盛り＝１００μｍ。（Ａ）下段パネル、２０倍率で５つのランダム視野／細胞株を数えることにより、ＴＵＮＥＬポジティブ細胞の定量化を示すグラフ。データはノルモキシア（酸素正常状態（ｎｏｒｍｏｘｉａ））で培養された細胞をコントロールするために比較され、ＴＵＮＥＬポジティブ細胞のひだ（ｆｏｌｄ）変化として発現される。ｎ＝５。（Ｂ）ｓｈＮＳまたはｓｈＣＡＩＸを発現している４Ｔ１細胞が、指示された状態で７２時間培養され、及び、ＡＴＰの細胞内レベルは全細胞溶解物上で決定された。＊Ｐ＜０．０１、酸素正常状態中のＡＴＰレベルと比較された。図６は、４Ｔ１腫瘍モデルを使用した自然発生転移の代表的な生物発光イメージ（Ａ）を示す。ヒートマップ（明、最も極度でない；より暗い、最も極度）は階調スケール身体イメージに被せて示される。（Ｂ）同じ視野であるが、ｓｈＮＳ又はｓｈＣＡＩＸを発現している４Ｔ１細胞での、１０匹のＢＡＬＢ／ｃマウスの乳腺へ接種した親の４Ｔ１細胞での視野である。＊は、対照群からの原発腫瘍切除の完了を示す。図７はＣＡＩＸ発現を失ったヒト乳癌細胞によって減じられた原発腫瘍生長を示す。ｓｈＮＳまたはｓｈＣＡＩＸを発現するＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞、および親のＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、ＮＯＤ．ＣＢ１７−ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／Ｊマウスの側腹部に皮下接種し、該動物の腫瘍成長をモニターした。各群に対してｎ＝７．挿入：ヒトＣＡＩＸ（ｓｈＣＡＩＸ）又は非サイレンシング対照シーケンス（ｓｈＮＳ）をターゲットとするｓｈＲＮＡｍｉｒを発現するＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞は、酸素正常状態または低酸素において７２時間培養されて、低酸素で誘発されたＣＡＩＸ発現解析され、ウェスタンブロットが示される。β−アクチンはローディング管理の役を務めた。図８は、ＣＡＩＸの消耗が、実験的な転移モデル中で肺転移の形成を阻害することを示す。パネル（Ａ）は、ＣＡＩＸを表現する４Ｔ１細胞によって実験的な転移の代表的な生物発光イメージを示す。パネル（Ｂ）は、４Ｔ１ｓｈＮＳ群からのマウス肺の肉眼的なイメージ中に転移の小結節の存在を示す。パネル（Ｃ）は、異なる腫瘍群中の可視小結節数の定量化を示す。パネル（Ｄ）は、４Ｔｌ細胞誘導の肺転移中のＣＡＩＸの免疫組織化学的な着色を示す。図９は、ＭＳＴ−０１７、又は以前に”ＣＡＩ−１７”と同定されたもの（Ｓｕｐｕｒａｎ，Ｃ．２００８，Ｎａｔｕｒｅ．Ｖｏｌ７：１６８−１８１）の化学構造（Ａ）を示し、細胞は１０μＭＭＳＴ−０１７の存在下で７２時間培養された（Ｂ）。示された状態にある細胞株に結合したＦＩＴＣタグ付きインヒビターの代表的なイメージを示し、（Ｃ）は、ＭＳＴ−０１７（４Ｔ１、６６ｃｌ４および６７ＮＲ細胞に対してそれぞれ４００、６００および４００ μＭ）の存在又は非存在下に、７２時間培養された細胞に対する細胞外ｐＨ変化のグラフ表示である。ｎ＝３。細胞外ｐＨ±ｓ．ｅ．ｍの平均的変化が示される。図１０は、４Ｔ１原発腫瘍の生長を減ずるＭＳＴ−０１７の生体内効能を示すデータを示す。（Ａ）ＣＡＩＸ発現の４Ｔ１細胞レベルが、ウェスタンブロットによって解析された。（Ｂ）左側のパネル、腫瘍成長がキャリパに基づいた測定によってモニターされた。処理開始および終了は矢印によって示される。ビヒクルで治療され又は治療されていない動物を、コントロールとして用いた。（Ｃ）治療された動物の体重を一般的なインヒビター毒性の基準としてモニターした。マウスは、ＣＡＩＸインヒビターの各服用の直前に検量した。図１１は、図示されたように治療された動物に対して、およびＣＡＩＸのウェスタンブロットによる、６７ＮＲ腫瘍成長の差を示す。（Ａ）については、６７ＮＲ細胞はノルモキシア（ｎｏｒｍｏｘｉａ：正常酸素状態）またはハイポキシア（低酸素状態または低酸素症）において培養された。そして、ＣＡＩＸ発現のレベルはウェスタンブロットによって解析された。（Ｂ）については、動物は６７ＮＲ細胞で接種され、図１０の様に治療された。フレーム（Ｃ）グラフは、様々な処理およびコントロールアーム（ｃｏｎｔｒｏｌａｒｍｓ）中の体重に有意差が注目されなかったことを示すデータを示す。図１２は、ＣＡＩＸインヒビターＭＳＴ−１１９の化学構造（Ａ）を示し、および４Ｔ１細胞の静脈内注射およびＭＳＴ−１１９での治療に引き続いて確立した転移の代表的な生物発光のイメージ（Ｂ）を示す。フレーム（Ｃ）は、腫瘍誘発生物発光の定量化結果を示す。図１３は、４Ｔ１細胞の静脈内注射およびＭＳＴ−１０４での治療に従って確立した転移の代表的な生物発光のイメージ（Ａ）を示す。フレーム（Ｂ）は、腫瘍誘発生物発光の定量化結果を示す。図１４は、乳腺に同所性的に移植され、ＣＡＩＸインヒビターＭＳＴ−１０４で治療されたヒト胸壁腫瘍生長の用量依存的抑制を示す。腫瘍成長は時間にわたってモニターされた。挿入パネルは、低酸素において成長するときこれらの細胞がＣＡＩＸの発現をアップレギュレートすることを示す。図１５は、低酸素中で３ＤＭａｔｒｉｇｅｌＴＭ培養液中で培養されたとき、親のＭＤＡ−ＭＢ−２３１ヒト乳癌細胞とは対照的に、高度に肺転移性のＭＤＡ−２３１ＬＭ２−４細胞が侵襲性であることを示す。図１６は、ＣＡＩＸのウレイドスルホンアミドインヒビター（ＭＳＴ−１０４、ＭＳＴ−１１９、ＭＳＴ−１０７、ＭＳＴ−１３０）が、低酸素中で３ＤＭａｔｒｉｇｅｌＴＭ培養中に、高度に転移性のヒト乳癌細胞の浸潤を阻害することを示す。図１７は、低酸素中の３ＤＭａｔｒｉｇｅｌＴＭ培養中に於ける細胞死に対するウレイドスルホンアミドの特異的効果を示す。（Ａ）ＴＵＮＥＬポジティブ細胞の数の代表的なイメージ。フレーム（Ｂ）は、ＴＵＮＥＬ−ポジティブ細胞の定量化結果を示す。図１８は、４Ｔ１乳癌細胞中のＣＡＩＸ発現の遺伝的枯渇が、（Ａ）低酸素中で癌球体（ｔｕｍｏｒｓｐｈｅｒｅ）の生長を起こすのに必要な細胞の数を増加し、（Ｂ）ＣＤ４４＋／ＣＤ２４−／ｌｏｗ癌幹細胞の低酸素に誘発された増加を減じることを示す。図１９は、ウレイドスルホンアミドＭＳＴ−１０４でのヒト乳癌・同所性腫瘍の治療が、腫瘍内の癌幹細胞集団を枯渇させることを示す。フレーム（Ａ）は、ＥＳＡ＋癌幹細胞を選別する代表的なＦＡＣＳプロットを示す。フレーム（Ｂ）は、ヒト乳癌幹細胞が腫瘍中に示すＥＳＡ＋の数の定量化結果を示す。

ここに記述されるように、転移癌の治療に適しているウレイドスルホンアミド組成物は合成され利用される。それらは式（Ｉ）を含んでなる：Ｒ−Ｑ−Ａｒ−ＳＯ_２ＮＨ_２
ここで、Ｒは電荷を持ち又は持たないアリール、ヘタリル、アルキル又はシクロアルキル基であってよく；
Ｑは−Ｌ（ＣＨ_２）_ｎ−であってよく；ここで、ｎ＝０、１又は２、ならびにＬは−ＮＨＣＸＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｓ）ＳＮＨ−、−ＮＨＣＯＮＨＣＳＮＨ−、又は−ＳＯ_２ＮＨ−基であり、ここで、ＸはＯまたはＳであってよく；及び、Ａｒは、酸素、窒素又は硫黄の少なくとも１つのヘテロ原子を含んでいるＣ_６−Ｃ_１０芳香族またはヘテロ芳香族基であってよい。

式（１）、ここで、Ｑは−ＮＨＣＯＮＨ−の基でよく、Ａｒはフェニルであってよく、Ｒは本発明の方法に有用なＰｈＣＨ_２、Ｐｈ_２ＣＨ、４−ＦＣ_６Ｈ_４、４−ＣｌＣ_６Ｈ_５、４−ＢｒＣ_６Ｈ_４、Ｃ_６Ｆ_５、２−ＭｅＯＣ_６Ｈ_４、４−ＡｃＣ_６Ｈ_４、２−ｉ−ＰｒＣ_６Ｈ_４、４−ｉ−ＰｒＣ_６Ｈ_４、４−ｎ−ＢｕＣ_６Ｈ_４、４−ｎ−ＢｕＯＣ_６Ｈ_４、４−ｎ−オクチル−Ｃ_６Ｈ_４、４−ＮＣＣ_６Ｈ_４、２−ＮＣＣ_６Ｈ_４、４−ＰｈＯＣ_６Ｈ_４、２−ＰｈＣ_６Ｈ_４、３−Ｏ_２ＮＣ_６Ｈ_４、４−ＭｅＯ−２−ＭｅＣ_６Ｈ_３、シクロペンチル、インダン−５−イル、３，５−Ｍｅ_２Ｃ_６Ｈ_３、４−ＣＦ_３Ｃ_６Ｈ_４、３，５−（ＣＦ_３）_２Ｃ_６Ｈ_３であってよい。

本発明の代表的な化合物は次のとおりである：
４−｛［（ベンジルアミノ）カルボニル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０２）；
４−｛［（ベンズヒドリドアミノ）カルボニル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０３）；
４−｛［（４’−フルオロロフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０４）；
４−｛［（４’−ブロモフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０５）；
４−｛［（ペンタフルオロフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０７）；
４−｛［（２’−メトキシフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０８）；
４−｛［（４’−アセチルフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０９）；
４−｛［（２’−イソプロピルフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１０）；
４−｛［（４’−イソプロピルフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１１）；
４−｛［（４’−ｎ−ブチルフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１２）；
４−｛［（４’−ブトキシフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１３）；
４−｛［（４’−ｎ−オクチルフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１４）；
４−｛［（４’−シアノフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１５）；
４−｛［（２’−シアノフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１６）；
４−｛［（４’−フェノキシフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１７）；
４−｛［（ビフェニル−２’−イル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１８）；
４−｛［（３’−ニトロフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１９）；
４−｛［（４’−メトキシの−２’−メチルフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２０））
４−［（シクロペンチルカルバモイル）アミノ］ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２２））、
４−｛（［（３’，５’−ジメチルフェニル）アミノ］カルボニルアミノ））｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２３）；
４−｛［（４’−クロロフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２４）；
４−｛［（２’，３’−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−５’−イルアミノ］カルボニルアミノ）｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２５）；
４−｛［（［４’−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノカルボニル）アミノ］｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２６）；
４−｛［（［３’，５’」−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］アミノカルボニル）アミノ］｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２７））；
３−（３−（４’−ヨードフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２８）；
３−（３−（４’−フルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２９）；
３−（３−（３’−ニトロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３０）；
３−（３−（４’−アセチルフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３１）；
３−（３−（２’−イソプロピルフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３２）；
３−（３−（パーフルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３３）；
４−（３−（４’−クロロ−２−フルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３４）；
４−（３−（４’−ブロモ−２’−フルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３５）；
４−（３−（２’−フルオロ−５’−ニトロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３６）；
４−（３−（２’，４’，５’−トリフルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３７）；
４−（３−（２’−フルオロ−５’−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３８）；
４−（３−（２’−フルオロ−３’−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３９）；
４−（３−（２’，４’，５’−トリフルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１４０）；
４−（３−（２’−フルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１４１）；
４−（３−（２’，４’−ジフルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１４２）；
４−（３−（３’−クロロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１４３）；
４−（３−（２’，５’−ジクロロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１４４）；
４−（３−（２’−クロロ−５’−ニトロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１４５）；
４−（３−（２’−クロロ−４’−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１４６）；
４−（３−（２’，６’−ジフルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１４７）；又は
４−（３−（パークロロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１４８）；

明瞭さのために、Ｃ_６−Ｃ_１０芳香族基は、フェニル又は１−，若しくは２−ナフチルを意味し、ヘテロ芳香族基は、酸素、窒素又は硫黄の少なくとも１つの異種原子を含んでいるＣ_２−Ｃ_１２のヘテロ環式芳香族化合物を意味する。更に、１，３，４−チアチアゾールは好ましい複素環である。

式（Ｉ）の化合物がさらに提供され、ここで、該化合物は、生体外で測定されて、ＣＡＩおよびＣＡＩＩの活性を阻害するより強く腫瘍関連のＣＡＩＸおよびＣＡＸＩＩの活性を阻害する。

本発明の第更なる目的は、式（Ｉ）の化合物の調製方法である。好ましい１つの反応は、式Ｒ−ＮＣＸの化合物（ここでＲ及びＸは上記と同義である）及び式ＮＨ_２−Ａｒ−ＳＯ_２ＮＨ_２又はＮＨ_２−ＣＳＮＨ−Ａｒ−ＳＯ_２ＮＨ_２の化合物の間で実施される（ここで、Ａｒは上記と同義である）。
別の好ましい反応は式ＮＨ_２−Ｙ−ＳＯ_２ＮＨ_２の化合物のナトリウム／カリウムＮ，Ｎ−ジメチル−／ジエチルジチオカルバメートとの酸化的チオカルバミレーションであり、ここで、Ｙは−（ＣＨ_２）ｎＡｒ−基であり、ｎ＝０、１、２であり、ＡｒはＣ_６−Ｃ_１０芳香族、又は酸素、窒素若しくは硫黄の少なくとも１つの異種原子を含有するヘテロ芳香族基である。

反応条件は当業者に知られたものである、例えば以下を参照せよ：Ａ．ＳｃｏｚｚａｆａｖａａｎｄＣ．Ｔ．ＳｕｐｕｒａｎＢｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２０００，１０，１１１７−１１２０；Ｃ．Ｔ．Ｓｕｐｕｒａｎ；Ｆ．Ｂｒｉｇａｎｔｉ；Ｓ．Ｔｉｌｌｉ；Ｗ．Ｒ．Ｃｈｅｇｗｉｄｄｅｎ；Ａ．ＳｃｏｚｚａｆａｖａＢｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００１，９，７０３−７１４；Ｃ．Ｔ．Ｓｕｐｕｒａｎ；Ａ．Ｓｃｏｚｚａｆａｖａ；Ｂ．Ｃ．Ｊｕｒｃａ；Ｍ．Ａ．ＩｌｉｅｓＥｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９８，３３，８３−９３。

次のスキームは、本発明による化合物を調製するために使用されてもよい方法の例を示す。

本発明による化合物は選択的なＣＡＩＸおよびＣＡＸＩＩインヒビターである。かくして、式（Ｉ）の化合物がさらに提供される、ここで、該化合物は、生体外で測定されて、ＣＡＩおよびＣＡＩＩの活性を阻害するよりかなりの程度に腫瘍関連のＣＡＩＸおよびＣＡＸＩＩの活性を阻害する。これらの化合物は、ヒト乳癌の生長を減じて、固形腫瘍において典型的な低酸素の条件の下の乳癌細胞による浸潤を阻害し、低酸素下でヒト乳癌細胞を殺し、癌幹細胞集団を枯渇させる方法に役立つ。

癌幹細胞（ＣＳＣ）は、自己更新可能性の特性、非ＣＳＣ子孫を生じさせる能力、および腫瘍内の他の癌細胞に関する非常に増強された腫瘍を引き起こす可能性がある癌細胞の部分母集団として定義される（ＣｈａｆｆｅｒａｎｄＷｅｉｎｂｅｒｇ，（２０１１）Ｓｃｉｅｎｃｅ３３１：１５５９−１５６４；Ｃｌｅｖｅｒｓ，（２０１１）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１７：３１３−３１９；ＨａｎａｈａｎａｎｄＷｅｉｎｂｅｒｇ，（２０１１）Ｃｅｌｌ．１４４：６４６−６７４）。ＣＳＣは、適切な動物宿主へ移植されたとき、新しい腫瘍の種付けする能力を有する細胞として実験的に定義される（ＣｈａｆｆｅｒａｎｄＷｅｉｎｂｅｒｇ，２０１１；ＨａｎａｈａｎａｎｄＷｅｉｎｂｅｒｇ，２０１１）。ＣＳＣは癌治療抵抗性成分であると考えられる。

表１：ｈＣＡＩ、ｈＣＡＩＩ（細胞質ゾルのアイソフォーム）およびｈＣＡＩＸの抑制およびウレイドスルホンアミドでｈＣＡＸＩＩ（膜貫通性の、腫瘍関連酵素）。ＭＳＴ−１０１〜ＭＳＴ−１２７。

本発明の化合物は、高度に過剰発現したＣＡＩＸ又はＣＡＸＩＩを有する低酸素性腫瘍の治療に対して、治療方法と同様に医薬の調製にも有用である。「過剰発現」は、通常その効果又は生成物を過度に生成することによる遺伝子の過度の発現を意味する。薬物は、ＣＡＩＸへの抑止的な作用をしており、低酸素の腫瘍およびその周辺環境の酸性化を逆転することに特に有効である。

さらに、本発明の化合物は癌幹細胞を減じ及び／または根絶することができ。癌幹細胞は、従来の治療薬又は技術（化学療法または放射線）に対する腫瘍による抵抗の根拠であると思われる。

ほとんどの癌治療中で、作用の相補的な物理療法を持った多数の剤は、化学療法「カクテル」の一部として典型的に使用される。治療されている癌の性質に依存する１つ以上の追加的な抗腫瘍薬を含んでいるかもしれないカクテルに本発明の組成物が使用されてもよいことが予想される。他の化学療法剤（代謝拮抗物質、すなわち、５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、チオグアニン、シタラビン、フルダラビン、６−メルカプトプリン、メトトレキセート、ゲムシタビン、カペシタビン、ペントスタチン、トリメトキサレート又はクラドリビン）；ＤＮＡ架橋およびアルキル化薬（すなわち、シスプラチン、カルボプラチン、ストレプタゾイン、メルファラン、クロラムブチル、カルマスティン、ｍｅｔｈｃｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅメトクロレタミン、ロムスチン、ビスルファン、チオテパ、イフォスファミド又はシクロホスファミド）；ホルモン剤（すなわちタモキシフェン、ラロキシフェン、トレミフェン、アナストロゾール又はレトロゾール）；抗生物質（すなわち、プリカマイシン、ブレオマイシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ダクチノマイシン、マイトマイシン、ドキソルビシン又はダウノルビシン）；免疫調節薬（すなわち、インターフェロン、ＩＬ−２又はＢＣＧ）；抗有糸分裂剤（すなわち、エストラムスチン、パクリタキセル、ドセタセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン又はビノレルビン）；トポイソメラーゼインヒビター（すなわち、トポテカン、イリノテカン、エトポシド又はテニポシド。）；及び、他の剤（すなわち、ヒドロキシ尿素、トラスツズマブ、アルトレタミン、リツキシマブ、Ｌ−アスパラギナーゼ又はジェムツツマブオゾガミシン）は、本発明の組成物と組合せて使用されてもよい。

注射、局所適用又は食物摂取に適している処方に到着するために、分子は、既知の薬学上の添加剤（塩類、水、脂質および（または）単糖）と調合されてもよい。

医薬製剤はヒト使用に対して安定で受容可能な化合物の製剤を開発することを含んでいる。化合物の処方は、薬物がいかなる可溶化剤、安定化剤、凍結乾燥化剤又は水和化剤とも両立することを保証するために試験されているであろう。

いかなる処方のデザインも、製剤中に他のどの成分を使用しなければならないか決めるために、薬物の物理的、化学的および機械的性質キャラクタリゼーションを含んでいる。

粒度、多形性、ｐＨおよび溶解度、これらがすべてバイオアベイラビリティ、そしてその結果薬物の活性に影響を及ぼす場合があるからである。薬物は、存在する薬物量が各用量ユニット（例えば各錠剤）に於いて一致していることを保証する方法によって不活性添加物と組み合わなければならない。

処方設計が、臨床試験が始まる時までに完成することはありそうもない。これは、単純な製剤がフェーズＩ治験で使用するために最初に開発されていることを意味する。これらの処方の長期安定性の保証は、そらが数日で使用される（テストされる）ので、必要ではない。

フェーズＩＩＩ治験に到達する迄には、薬物の処方が市場で究極的に使用される製剤に近づく様に開発されるべきであった。安定試験は温度、湿度、酸化又は光分解（紫外線光または可視光）が何らかの影響があるかどうかテストするために実施される。そして、製剤は何らかの分解産物が形成されたかどうかを確認するために分析される。

一つの実施態様において、本発明の化合物はエタノール及び食塩水と共にポリエチレングリコール中で処方される。１つの特別の実施態様において、処方は、３７．５％のＰＥＧ４００、１２．５％のエタノールおよび５０％の食塩水から成る。

この文書中に使用されるように、腫瘍は、いかなる原発性又は転移性の癌、低酸素の腫瘍組織又は悪性腫瘍をも意味するために用いられてよい。低酸素および（または）転移（特に胸、肺、腎臓癌）に弱いいかなる膵臓で、頚部の腫瘍、結腸直腸、膠芽腫、前立腺および卵巣癌は本発明の実施態様により治療され得る。本発明の組成物での治療にふさわしい追加的な癌タイプを決定する方法は利用可能である、すなわち、該方法は、低酸素組織の検知のために当業者に利用可能であり、知られている。例えば、低酸素症又は低酸素の組織を検知する方法を開示しているＵ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏｓ．５，４０１，４９０及び５，８４３，４０４を参照せよ。これらの技術または当業者に知られている他の技術のいずれも、低酸素組織を識別するために使用されてよい。

治療に敏感な腫瘍は、正常組織に関してＣＡＩＸまたはＣＡＸＩＩの高いレベルを有するであろう。アイソザイムＣＡＩＸおよびＣＡＸＩＩは、腫瘍細胞中に主に見いだされ、正常組織で制限された発現を示す。二酸化炭素を効率的に水和してプロトン及び重炭酸ソーダとすることによって、これらのＣＡが固形腫瘍の細胞外の酸性化に著しく寄与すること、一方、それらの抑制がある程度までこの現象を逆転することが、最近証明された。ＣＡＩＸ及びＣＡＸＩＩは低酸素誘導可能な因子（ＨＩＦ）経路に応じて多くのそのような腫瘍中に過剰発現される。

データで実証されるように、ＣＡＩＸ及びＣＡＸＩＩは低酸素及び転移に関係している。したがって、低酸素性および転移性腫瘍は、既にデータが推測をサポートしているが故に、本発明の化合物を使用して治療を指示する為にＣＡＩＸ及びＣＡＸＩＩの高いレベルを証明するためのテストは必要ないであろう。しかしながら、ＵＳＰａｔｅｎｔＮｏ．７３７８０９１ｂｙＧｕｄａｓｅｔａｌ．は検知及び診断に役立つＣＡＩＸ抗体を開示している。ＲＮＡプローブと同様にＣＡＸＩＩに対する抗体もバイオプシーを実施された腫瘍サンプル中のＣＡＸＩＩ過剰発現を評価するために使用することができる。

ＣＡＸＩＩもＢａｔｔｋｅｅｔａｌ．，（２０１１）ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．Ｍａｙ；６０（５）：６４９−５８中で評価されている。

腫瘍成長、存続および（または）展開は、本発明化合物の使用によって、又は、その様に苦しんでいる哺乳動物を治療する際の本発明化合物の使用によって、抑制されると言ってもよい。本願における「抑制」は、特に、これらの用語が哺乳動物（特にヒト）が罹患した腫瘍及び癌に関連した際には、退行の誘導、生長の抑制および展開の抑制を意味してもよい。

ドセタセル、ビンカアルカロイド、ミトキサントロン、シスプラチン、パクリタキセル、５−ＦＵ、ハーセプチン、アバスチン、グリーベクを含み、これらに限定されない典型的な化学療法剤は、本発明の化合物と組合わせて使用されてもよい。同様に、放射線治療は本発明の化合物を含む投与スケジュールと組み合わせてもよい。

外科的介入が行なわれるとき、本発明の化合物および組成物は手術前に、手術時に又は手術後に使用されてもよい。用量は、最初の投薬を決定するために患者の体表面積（それは血液量と関連する）を計算するために患者のサイズおよび体重を使用する投薬スキームによって典型的に決定される。スタートする用量は通常、治療化合物の臨床実験の間に案出される。

腫瘍治療に対する臨床的研究のためのバックグラウンドおよび現在のアプローチは、ＴａｋｉｍｏｔｏＣＨ，ＣａｌｖｏＥ． ”ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＯｎｃｏｌｏｇｉｃＰｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ” ｉｎＰａｚｄｕｒＲ，ＷａｇｍａｎＬＤ，ＣａｍｐｈａｕｓｅｎＫＡ，ＨｏｓｋｉｎｓＷＪ（Ｅｄｓ）ＣａｎｃｅｒＭａｎａｇｅｍｅｎｔ：ＡＭｕｌｔｉｄｉｓｃｉｐｌｉｎａｒｙＡｐｐｒｏａｃｈ．１１ｅｄ．２００８中に見いだされ得る。それはｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒｎｅｔｗｏｒｋ．ｃｏｍ／ｃａｎｃｅｒ−ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ−１１／ｃｈａｐｔｅｒ０３／ａｒｔｉｃｌｅ／１０１６５／１４０２６２８で自由に利用可能である。

次の実施例は本発明の態様を示すために使用される。しかし、実施態様は、これらの実例によって制限されることを意図しない。

実施例１
本発明の具体的な実施態様の製造（化合物ＭＳＴ−１０１からＭＳＴ−１２７を包括する）
［式（Ｉ）の化合物製造のための基本手順］
化学の方法：^１Ｈ、^１３Ｃおよび^１９ＦスペクトルはＢｒｕｋｅｒＡｄｖａｎｃｅＩＩＩ４００ＭＨｚ分光計を使用して記録した。ケミカルシフトはｐｐｍ（ｐｐｍ）で報告し、結合定数（Ｊ）はヘルツ（Ｈｚ）で表示する。赤外線スペクトルはＫＢｒプレート上の固体としてＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＳｐｅｃｔｒｕｍＲＸＩ分光計に記録した。融点（ｍ．ｐ．）は、他に述べない限り、ＢｕｃｈｉＭｅｌｔｉｎｇＰｏｉｎｔＢ−５４０融点測定装置を使用して、開いた毛管中で測定し未訂正のままである。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）はＭｅｒｃｋシリカゲル６０Ｆ２５４アルミニウム支持プレート上で実施した。プレートの溶出は溶出系として酢酸エチル−石油エーテルを使用して実施した。可視化は、ニンヒドリンＴＬＣ染色液へ浸漬しホットエアーガンで加熱することにより、２５４ｎｍのＵＶ光で達成した。フラッシュカラムクロマトグラフィーは、吸着剤としてシリカゲル（Ａｌｄｒｉｃｈケミカル社（Ｍｉｌａｎ、Ｉｔａｌｙ）から入手）を使用して実施した。粗生成物は同一の溶出溶剤系中の溶液としてカラムへ導入した。溶媒及び化学薬品は、ＡｌｄｒｉｃｈＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．，Ｍｉｌａｎ，Ｉｔａｌｙから供給されるままに使用した。
４−アミノベンゼン・スルホンアミド（２．９ｍｍｏｌｅ）は、アセトニトリル（２０−３０ｍＬ）中に溶解し、次に、イソシアニドの化学量論量で処理した。その混合物は完了までｒ．ｔ．で攪拌したか、又は５０℃で２時間加熱した（ＴＬＣモニタリング）。形成された重い沈殿は、ジエチルエーテルで洗浄し、ろ過分離し、真空下で乾燥した。

４−［（アニリノカルボニル）アミノ］ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０１）：
４−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）をイソシアン酸フェニル（０．２３ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で１日間攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、４３．７％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１０１を得た。
ｍ．ｐ．２３３−２３５ ℃ （Ｌｉｔ^１）；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．６３（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３４０（Ｎ−Ｈ尿素），１６５６（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９５（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．００（１Ｈ，ｔｔ，Ｊ７．４，０．８，４’−Ｈ），７．２０（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．２９（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ８．２，０．８，２ｘ３’−Ｈ），７．４７（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ８．２，１．２，２ｘ２’−Ｈ），７．６１（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．０，２ｘ３−Ｈ），７．７３（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．０，２ｘ２−Ｈ），８．８２（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．０９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５３．２（Ｃ＝Ｏ尿素），１４３．８，１４０．２，１３７．８，１２９．８，１２７．７，１２３．１，１１９．４，１１８．４。

４−｛［（ベンジルアミノ）カルボニル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０２）；
４−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）をベンジルイソシアナート（０．３９ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で４間攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、４２．３％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１０２を得た。ｍ．ｐ．１９４−１９６ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．５８（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３１３（Ｎ−Ｈ尿素），１６７４（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９１（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）４．３５（２Ｈ，ｄ，Ｊ６．０，１’−Ｈ_２），６．８１（１Ｈ，ｔ，Ｊ６．０，ＮＨ），７．１９（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．２８（１Ｈ，ｔｔ，Ｊ６．８２．０，５’−Ｈ），７．３５（４Ｈ，ｍ，２ｘ３’−Ｈ，２ｘ４’−Ｈ），７．５９（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．０，２ｘ３−Ｈ），７．７１（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．０，２ｘ２−Ｈ），９．０（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５５．８（Ｃ＝Ｏ尿素），１４４．５，１４１．０，１３７．１，１２９．３，１２８．１，１２７．８，１２７．７，１１７．８，４３．７（Ｃ−１’）。

４−｛［（ベンズヒドリドアミノ）カルボニル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０３）；
４−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）をベンズヒドリルイソシアナート（０．６１ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で２間攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、４２．４％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１０３を得た。ｍ．ｐ．２３５−２３６ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．７６（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３３８（Ｎ−Ｈ尿素），１６９６（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９２（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）６．０（１Ｈ，ｄ，Ｊ７．６，ＮＨ），７．１９（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．２９（２Ｈ，ｔｔ，Ｊ７．２１．６，２ｘ４’−Ｈ），７．３８（９Ｈ，ｍ，１’−Ｈ，４ｘ３’−Ｈ，４ｘ４’−Ｈ）７．５６（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ３−Ｈ），７．７０（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２−Ｈ），８．９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５４．９（Ｃ＝Ｏ尿素），１４４．２，１４３．８，１３７．２，１２９．５，１２７．９，１２７．８，１２７．７，１１７．７，５７．８（Ｃ−１’）。

４−｛［（４’−フルオロロフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０４）；
４−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を４−フルオロフェニルイソシアナート（０．４０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で２日間攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、５５．５％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１０４を得た。ｍ．ｐ．２４２−２４３ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．５３（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３３８（Ｎ−Ｈ尿素），１６９７（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９３（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．１７（２Ｈ，ｔ，Ｊ９．０，２ｘ２’−Ｈ），７．２４（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．５１（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ９．０４．８，２ｘ３’−Ｈ），７．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ３−Ｈ），７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２−Ｈ），８．８６（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．０９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５８．５（ｄ，Ｊ_Ｃ−Ｆ２３７，Ｃ−４’），１５３．３（Ｃ＝Ｏ尿素），１４３．７，１３７．８，１３６．６（ｄ， ^４Ｊ_Ｃ−Ｆ３，Ｃ−１’），１２７．７，１２１．２（ｄ， ^３Ｊ_Ｃ−Ｆ７，Ｃ−２’），１１８．４，１１６．３（ｄ， ^２Ｊ_Ｃ−Ｆ２２，Ｃ−３’）； δ_Ｆ（３７６．５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） −１２１．０（１Ｆ，ｓ）。

４−（｛［（４’−ブロモフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０５）；
４−アミノ−ベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を４−ブロモフェニルイソシアナート（０．５７ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で１日間攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、４３．１％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１０５を得た。ｍ．ｐ．２６９−２７１ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．３８（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３２８（Ｎ−Ｈ尿素），１６５２（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９０（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２４（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．４９（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．２，２ｘ２’−Ｈ），７．５１（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．２，２ｘ３’−Ｈ），７．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ３−Ｈ），７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２−Ｈ），８．９９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．１５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５２．６（Ｃ＝Ｏ尿素），１４３．１，１３９．３，１３７．５，１３２．０，１２７．３，１２０．９，１１８．１，１１４．１。

４−｛［（４’−ヨードフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０６）；
４−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を４−ヨードフェニルイソシアナート（０．７１ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で１晩攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、４６．５％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１０６を得た。ｍ．ｐ．２７５−２７７ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．５５（酢酸エチル／石油エーテル３３％） ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３２５（Ｎ−Ｈ尿素），１６５２（Ｃ＝Ｏ尿素），１５８６（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２４（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．３６（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２’−Ｈ），７．６３（２Ｈ，ｄ，Ｊ６．８，２ｘ３−Ｈ），７．６６（２Ｈ，ｄ，Ｊ６．８，２ｘ２−Ｈ），７．７７（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ３’−Ｈ），８．９７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．１５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６），１５３．２（Ｃ＝Ｏ尿素），１４３．７，１４０．３，１３８．５，１３８．１，１２７．９，１２１．７，１１８．６，８６．２（Ｃ−４’）。

４−｛［（ペンタフルオロフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０７）；４−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）をペンタフルオロフェニルイソシアナート（０．６０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で１日間攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、９７．７％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１０７を得た。ｍ．ｐ．２５１−２５３ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．４９（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３２９（Ｎ−Ｈ尿素），１６５６（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９７（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２３（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．６１（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ３−Ｈ），７．７４（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２−Ｈ），８．６５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．４８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５２．９（Ｃ＝Ｏ尿素），１４４．０（ｍ，Ｊ_Ｃ−Ｆ２３９，Ｃ−２’），１４３．３，１３９．６（ｍ，Ｊ_Ｃ−Ｆ２４８，Ｃ−４’），１３８．５，１３８．２（ｍ，Ｊ_Ｃ−Ｆ２４９，Ｃ−３’），１２７．８，１１８．８，１１４．７（ｄｄｄ， ^２Ｊ_Ｃ−Ｆ２３， ^３Ｊ_Ｃ−Ｆ１４， ^４Ｊ_Ｃ−Ｆ４，Ｃ−１’）； δ_Ｆ（３７６．５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） −１４６．２（２Ｆ，ｄｄ， ^３Ｊ２４， ^４Ｊ５．１，２ｘ２’−Ｆ）， −１５９．２（２Ｆ，ｔ， ^３Ｊ２３，２ｘ４’−Ｆ）， −１６４．０（１Ｆ，ｄｄ， ^３Ｊ２３．３， ^４Ｊ５．０，２ｘ３’−Ｆ）。

４−｛［（２’−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル）｝アミノベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０８）；
４−アミノ−ベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を２−メトキシフェニルイソシアナート（０．４３ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で１晩攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、４０．４％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１０８を得た。ｍ．ｐ．２３４−２３６ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．４７（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３６２（Ｎ−Ｈ尿素），２８３８（Ｃ−Ｈａｌｉｐｈａｔｉｃ），１６８４（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９２（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）３．９２（３Ｈ，ｓ，ＣＨ_３），６．９４（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ８．２７．４１．４，４’−Ｈ），７．０１（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ８．０７．４１．６，５’−Ｈ），７．０７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ８．２１．２，３’−Ｈ），７．２３（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２−Ｈ），７．７７（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ３−Ｈ），８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ８．０１．６，６’−Ｈ），８．３８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．７３（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５３．０（Ｃ＝Ｏ，尿素），１４８．７，１４３．８，１３７．７，１２９．２，１２７．８，１２３．２，１２１．５，１１９．４，１１８．１，１１１．７，５６．７（ＣＨ_３）。

４−｛（［（４’−アセチルフェニル）アミノ］カルボニル）アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１０９）：
４−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を４−アセチルフェニルイソシアナート（０．４６ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で１日間攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、４６．６％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１０９を得た。ｍ．ｐ．２５８−２６０ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．２７（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３００（Ｎ−Ｈ尿素），１６５９（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９０（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）２．５６（３Ｈ，ｓ，ＣＨ_３），７．２６（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２’−Ｈ），７．６７（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ３−Ｈ），７．７９（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２−Ｈ），７．９６（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ３’−Ｈ），９．２２（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．２５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１９７．３（Ｃ＝Ｏ），１５２．９（Ｃ＝Ｏ尿素），１４４．９，１４３．４，１３８．２，１３１．７，１３０．６，１２７．８，１１８．７，１１８．４，２７．３（ＣＨ_３）。

４−｛（［（２’−イソプロピルフェニル）アミノ］カルボニル）アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１０）：
４−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を２−イソプロピルフェニルイソシアナート（０．４７ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で６時間攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、４８．７％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１１０を得た。ｍ．ｐ．２２６−２２７ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．６５（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３６１（Ｎ−Ｈ尿素），２９６６（Ｃ^＿Ｈａｌｉｐｈａｔｉｃ），１６７６（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９２（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１．２４（６Ｈ，ｄ，Ｊ６．８，２ｘＣＨ_３），３．１９（１Ｈ，ｓｅｐｔ，Ｊ６．８，ＣＨ），７．１４（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ７．９７．６１．６，４’−Ｈ），７．１９（ｄｄｄ，Ｊ７．９６．８１．２，５’−Ｈ），７．２３（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．３４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ７．６１．６，３’−Ｈ），７．６５（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ３−Ｈ），７．６８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ６．８１．２，６’−Ｈ），７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２−Ｈ），８．１１（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．３７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５３．８（Ｃ＝Ｏ尿素），１４４．０，１４０．８，１３７．６，１３６．０，１２７．８，１２６．７，１２６．３，１２５．３，１２４．８，１１８．２，２７．８（ＣＨ），２４．１（２ｘＣＨ_３）。

４−｛（［（４’−イソプロピルフェニル）アミノ］カルボニル）アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１１）：
４−アミノ−ベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を４−イソプロピルフェニルフェニルイソシアナート（０．４７ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で１間攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、５８．５％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１１１を得た。ｍ．ｐ．２２６−２２７ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．５０（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３５１（Ｎ−Ｈ尿素），２９６４（Ｃ^＿Ｈａｌｉｐｈａｔｉｃ），１６４７（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９０（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１．２２（６Ｈ，ｄ，Ｊ６．８，２ｘＣＨ_３），２．８７（１Ｈ，ｓｅｐｔ，Ｊ６．８，ＣＨ），７．２０（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．４，２ｘ３’−Ｈ），７．２３（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．４０（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．４，２ｘ２’−Ｈ），７．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．０，２ｘ３−Ｈ），７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．０，２ｘ２−Ｈ），８．７２（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．０４（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５３．２（Ｃ＝Ｏ尿素），１４３．９，１４３．２，１３７．９，１３７．６，１２７．７，１２７．５，１１９．５，１１８．３，３３．７（ＣＨ），２４．９（ＣＨ_３）。

４−（｛［（４’−ブチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１２）；
４−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を４−ブチルフェニルイソシアナート（０．５１ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で３時間攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、４８．６％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１１２を得た。ｍ．ｐ．２４３−２４５ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．５４（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３３３（Ｎ−Ｈ尿素），２９２９（Ｃ^＿Ｈａｌｉｐｈａｔｉｃ），１６５３（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９２（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）０．９３（３Ｈ，ｔ，Ｊ７．２，ＣＨ_３），１．３３（２Ｈ，ｓｉｘ，Ｊ７．４，ＣＨ_２），１．５７（２Ｈ，ｓｅｐｔ，Ｊ７．４，ＣＨ_２），２．５６（２Ｈ，ｔ，Ｊ７．６，ＣＨ_２），７．１４（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．６，２ｘ３’−Ｈ），７．２３（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．３９（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．６，２ｘ２’−Ｈ），７．６３（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．０，２ｘ３−Ｈ），７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．０，２ｘ２−Ｈ），８．７１（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．０４（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５３．２（Ｃ＝Ｏ尿素），１４３．９，１３７．８，１３７．６，１３７．１，１２９．５，１２７．３，１１９．５，１１８．３，３５．１（ＣＨ_２），３４．２（ＣＨ_２），２２．６（ＣＨ_２），１４．７（ＣＨ_３）。

４−｛［（４’−ブトキシフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１３）；
４−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を４−ブトキシフェニルイソシアナート（０．５５ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で１日間攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、４６．０％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１１３を得た。ｍ．ｐ．２３６−２３９ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．６０（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３６１（Ｎ−Ｈ尿素），２９５７（Ｃ−Ｈａｌｉｐｈａｔｉｃ），１６４６（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９２（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚＤＭＳＯ−ｄ_６）０．９７（３Ｈ，ｔ，Ｊ７．６，ＣＨ_３），１．４８（２Ｈ，ｓｉｘ，Ｊ７．２，ＣＨ_２），１．７１（２Ｈ，ｓｉｘ，Ｊ６．８，ＣＨ_２），３．９６（２Ｈ，ｔ，Ｊ６．４，ＣＨ_２），６．９０（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．２，２ｘ３’−Ｈ），７．２２（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．３８（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．２，２ｘ２’−Ｈ），７．６３（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ３−Ｈ），７．７５（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２−Ｈ），８．６２（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．０２（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５５．１（Ｃ＝Ｏ尿素），１５３．３，１４４．０，１３７．５，１３３．１，１２７．７，１２１．２，１１８．２，１１５．５，６８．２（ＯＣＨ_２），３１．７（ＣＨ_２），１９．７（ＣＨ_２），１４．６（ＣＨ_３）。

４−｛（［（４−オクチルフェニル）アミノ］カルボニル）アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１４）：４−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を４−オクチルフェニルイソシアナート（０．６７ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で１日間攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、４１．４％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１１４を得た。ｍ．ｐ．２８２−２８３ ℃；シリカゲルＴＬＣＲｆ０．５９（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３３２（Ｎ−Ｈ尿素），２９２４（Ｃ^＿Ｈａｌｉｐｈａｔｉｃ），１６５３（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９２（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）０．８９（３Ｈ，ｔ，Ｊ６．８，ＣＨ_３），１．３０（１２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２），１．５７（２Ｈ，ｔ，Ｊ７．６，ＣＨ_２），７．１４（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．６，２ｘ３’−Ｈ），７．２３（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．３９（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．６，２ｘ２’−Ｈ），７．６３（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．０，２ｘ３−Ｈ），７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．０，２ｘ２−Ｈ），８．７２（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．０５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６），１５３．２（Ｃ＝Ｏ尿素），１４３．９，１３７．８，１３７．６，１３７．１，１２９．５，１２７．７，１１９．５，１１８．２，３５．４（ＣＨ_２），３２．２（ＣＨ_２），３２．０（ＣＨ_２），２９．７（ＣＨ_２），２９．６（ＣＨ_２），２９．５（ＣＨ_２），２３．０（ＣＨ_２），１４．９（ＣＨ_３）。

４−｛［（４’−シアノフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１５）；
４−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を４−シアノフェニルイソシアナート（０．４２ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で１日間攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、６０．６％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１１５を得た。ｍ．ｐ．２６５−２６７ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．３７（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３５５（Ｎ−Ｈ尿素），２２２１（Ｃ≡Ｎ），１６９５（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９４（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２６（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．６６（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８），７．６８（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．２），７．７８（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ），７．７９（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ），９．２８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．３５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５２．８（Ｃ＝Ｏ尿素），１４４．８，１４３．２，１３８．３，１３４．２，１２７．８，１２０．１，１１９．２，１１８．８，１０４．６（Ｃ≡Ｎ）。

４−｛（［（２’−シアノフェニル）アミノ］カルボニル）アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１６）：
２−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を４−シアノフェニルイソシアナート（０．４１ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、沈殿が生じるまで反応を室温で１日間攪拌した。得られた粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて酢酸エチル／石油エーテル１／１で溶出することにより精製して、白色固形物としてＭＳＴ−１１６を得た。ｍ．ｐ．２５６−２５８ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．７３（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３１０（Ｎ−Ｈ尿素），２２３１（Ｃ≡Ｎ），１６９６（Ｃ＝Ｏ尿素），１５８７（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２６（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ７．６７．２０．８，４’−Ｈ），７．２７（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．６７（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．０，２ｘ３−Ｈ），７．７０（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ８．４７．２１．６，５’−Ｈ），７．８０（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．０，２ｘ２−Ｈ），７．８２（１Ｈ，ｄｄ，７．６１．６，３’−Ｈ），８．１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ８．４０．４，６’−Ｈ），８．９０（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．７８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５２．８（Ｃ＝Ｏ尿素），１４３．２，１４２．４，１３８．４，１３５．０，１３４．１，１２７．８，１２４．５，１２２．６，１１８．７，１１７．８，１０３．６（Ｃ≡Ｎ）。

４−（｛［（４’−フェノキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１７）；
４−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を４−フェノキシフェニルイソシアナート（０．６１ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で５時間攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、４６．８％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１１７を得た。ｍ．ｐ．２３６−２３７ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．４１（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３２８（Ｎ−Ｈ尿素），１６５３（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９５（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．００（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ８．８１．２，３’−Ｈ），７．０３（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．０，６’−Ｈ），７．１３（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ７．５０．８，８’−Ｈ），７．２４（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．４０（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ９．０７．５，７’−Ｈ），７．５２（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２’−Ｈ），７．６５（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．２，３−Ｈ），７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．２，２−Ｈ），８．８４（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．０８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５８．５（Ｃ＝Ｏ尿素），１５３．３，１５１．９，１４３．８，１３７．７，１３６．２，１３０．９，１２７．７，１２３．８，１２１．２，１２０．７，１１８．７，１１８．４。

４−［（ビフェニル−２’−イルカルバモイルｌ）アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１８）；
４−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）をビフェニル−２−イルイソシアナート（０．５７ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で１日間攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、４０．０％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１１８を得た。ｍ．ｐ．２２９−２３１ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．７５（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３６５（Ｎ−Ｈ尿素），１６７５（Ｃ＝Ｏ尿素），１５８４（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ７．４），７．２２（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．２７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ７．４１．６），７．３９（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ８．４１．６，１０’−Ｈ），７．４６（２Ｈ，ｄｔ，Ｊ６．８１．６），７．５４（１Ｈ，ｄ，Ｊ７．６，６’−Ｈ），７．５８（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．２，２ｘ３−Ｈ），７．７４（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．２，２ｘ２−Ｈ），７．８３（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），７．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ８．０，３’−Ｈ），９．４１（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５３．６（Ｃ＝Ｏ尿素），１４４．０，１３９．５，１３７．８，１３６．４，１３４．２，１３１．５，１３０．２，１２９．９，１２８．９，１２８．６，１２７．９，１２４．８，１２４．０，１１８．３。

４−｛［（３’−ニトロフェニル）カルバモイル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１１９）；
３−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｍｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を４−ニトロフェニルイソシアナート（０．４７ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で１日間攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、４４．３％の収率で黄色固形物としてＭＳＴ−１１９を得た。ｍ．ｐ．２４６−２４８ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．３９（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３７０（Ｎ−Ｈ尿素），１７０９（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９２（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２３（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．５９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ８．４８．０，５’−Ｈ），７．６５（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．０，２ｘ３−Ｈ），７．７３（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ８．４２．０，０．８，６’−Ｈ），７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．０，２ｘ２−Ｈ），７．８６（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ８．０２．４０．８，４’−Ｈ），８．５８（１Ｈ，ａｐｐｔ，Ｊ２．２，２’−Ｈ），９．２５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．３５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５３．２（Ｃ＝Ｏ尿素），１４９．１，１４３．３，１４１．６，１３８．３，１３１．１，１２７．７，１２５．５，１１８．８，１１７．６，１１３．３。

４−｛［（４’−メトキシの−２’−メチルフェニル）アミノ］カルボニル）アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２０）；
４−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を４−メトキシ−２−メチルフェニルイソシアナート（０．４７ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で１晩攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、４０．１％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１２０を得た。ｍ．ｐ．２４０−２４１ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．３５（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３１３（Ｎ−Ｈ尿素），２８３５（Ｃ^＿Ｈａｌｉｐｈａｔｉｃ），１６４７（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９１（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）２．２５（３Ｈ，ｓ，ＣＨ_３），３．７６（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），６．７８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ８．８２．８，５’−Ｈ），６．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ２．８，３’−Ｈ），７．２２（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，６’−Ｈ），７．６３（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ３−Ｈ），７．７５（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２−Ｈ），７．９６（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．２６（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５６．６（Ｃ＝Ｏ尿素），１５３．７，１４４．２，１３７．４，１３２．３，１３０．７，１２７．８，１２５．３，１１８．１，１１６．４，１１２．２，５６．１（ＯＣＨ_３），１９．０（ＣＨ_３）。

４−｛［（９Ｈ−フルオレン−２−イルアミノ）カルボニル］アミノ｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２１）；４−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（２０ｍｌ）に、１０ｍｌのアセトニトリル中に溶解した９Ｈ−フルオレン−２−イルイソシアナート（０．５９ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を滴加した。反応を室温で１時間撹拌し、先に報告した基本手順に記載されているように処理して、６２．０％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１２１を得た。ｍ．ｐ．２８０−２８５ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．５２（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３２９（Ｎ−Ｈ尿素），１６４８（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９１（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）３．９４（２Ｈ，ｓ，ＣＨ_２），７．２４（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．２９（１Ｈ，ａｐｐｔ，Ｊ７．２，４’−Ｈ），７．３９（１Ｈ，ａｐｐｔ，Ｊ７．２，５’−Ｈ），７．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ７．２，３’−Ｈ），７．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ７．２，６’−Ｈ），７．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ８．４，２ｘ３−Ｈ），７．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ８．４，２ｘ２−Ｈ），７．８３（３Ｈ，ｍ，２’−Ｈ，７’−Ｈ，８’−Ｈ），８．９４（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．１４（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５３．２（Ｃ＝Ｏ尿素），１４４．９，１４３．８，１４３．５，１４２．０，１３９．３，１３７．７，１３６．４，１２７．８，１２７．６，１２６．８，１２５．９，１２１．２，１２０．２，１１８．４，１１８．２，１１６．２，３７．４（ＣＨ_２）。

４−［（シクロペンチルカルバモイル）アミノ］ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２２）：
４−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）をシクロペンチルイソシアナート（０．３２ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を５０℃で２時間攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、６８．８％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１２２を得た。ｍ．ｐ．２２４−２２６ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．５７（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３２８（Ｎ−Ｈ尿素），３０５５（Ｃ−Ｈａｌｉｐｈａｔｉｃ），１６８４（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９１（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１．４１（２Ｈ，ｍ，２ｘ３’−Ｈ_ａｘ），１．５８（２Ｈ，ｍ，２ｘ２’−Ｈ_ａｘ），１．６７（２Ｈ，ｍ，２ｘ２’−Ｈ_ｅｑ），１．８８（２Ｈ，ｍ，２ｘ３’−Ｈ_ｅｑ），３．９８（１Ｈ，ｓｉｘ，Ｊ６．８，１’−Ｈ），６．３５（１Ｈ，ｄ，Ｊ６．８，ＮＨ），７．１８（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．５５（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ３−Ｈ），７．７０（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２−Ｈ），８．６８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５５．３（Ｃ＝Ｏ尿素），１４４．６，１３６．８，１２７．７，１１７．６，５１．８（Ｃ−１’），３３．７（Ｃ−２’），２４．１（Ｃ−３’）。

４−｛（［（３，５−ジメチルフェニル）アミノ］カルボニルアミノ）｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２３）：
３−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を３，５−ジメチルフェニルイソシアナート（０．４３ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で１晩攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、６０．６％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１２３を得た。ｍ．ｐ２３５−２３６ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．５８（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３４３（Ｎ−Ｈ尿素），２８６０（Ｃ−Ｈａｌｉｐｈａｔｉｃ），１６８６（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９５（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）２．２７（６Ｈ，ｓ，２ｘＣＨ_３），６．６８（１Ｈ，ｓ，４’−Ｈ），７．１２（２Ｈ，ｓ，２’−Ｈ），７．２３（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ３−Ｈ），７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２−Ｈ），８．６７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．０６（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５３．１（Ｃ＝Ｏ，尿素），１４３．８，１４０．１，１３８．７，１３７．７，１２７．７，１２４．７，１１８．３，１１７．１，２２．０（２ｘＣＨ_３）。

４−｛（［（４’−クロロフェニル）アミノ］カルボニルアミノ）｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２４）：
４−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を４−クロロフェニルイソシアナート（０．４４ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で１晩攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、８９．４％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１２４を得た。ｍ．ｐ２３９−２４０℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．４４（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３２７（Ｎ−Ｈ尿素），１６５２（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９２（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２４（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．３８（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２’−Ｈ），７．５３（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ３’−Ｈ），７．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ３−Ｈ），７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２−Ｈ），８．９７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．１３（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５３．１（Ｃ＝Ｏ，尿素），１４３．６，１３９．２，１３７．９，１２９．６，１２７．７，１２６．６，１２０．９，１１８．５。

４−｛［（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−５−イルアミノ］カルボニルアミノ）｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２５）：
５−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を５−インダニルイソシアナート（０．４６ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で１晩攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、６０．６％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１２５を得た。ｍ．ｐ２３３−２３５ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．６１（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３３３（Ｎ−Ｈ尿素），２８４４（Ｃ−Ｈａｌｉｐｈａｔｉｃ），１６５３（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９２（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）２．０４（２Ｈ，ａｐｐｑｔ，Ｊ７．４，２’−Ｈ），２．８５（４Ｈ，ａｐｐｑｔ，Ｊ７．４，２ｘ１’−Ｈ，２ｘ３’−Ｈ），７．１６（１Ｈ，ａｐｐｄ，Ｊ８．２，６’−Ｈ），７．１９（１Ｈ，ａｐｐｄｄ，Ｊ８．２１．６，７’−Ｈ），７．２５（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．４２（１Ｈ，ｓ，４’−Ｈ），７．６３（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ３−Ｈ），７．７５（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２−Ｈ），８．７０（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．０６（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５３．２（Ｃ＝Ｏ，尿素），１４５．２，１４３．９，１３８．４，１３７．６，１２７．８，１２５．２，１１８．３，１１７．７，１１５．７，ｏｎｅｃａｒｂｏｎｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇｓｉｇｎａｌ，３３．４８，３２．６４，２６．１５（３ｘＣＨ_２）。

４−｛［（［４−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ｝カルボニル）アミノ］ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２６）；
４−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を４−トリフルオロメチル−フェニルイソシアナート（０．５４ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で１晩攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、９６．１％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１２６を得た。ｍ．ｐ２８１−２８３ ℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．４９（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３３４（Ｎ−Ｈ尿素），１６５７（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９２（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２７（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．６６（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ３−Ｈ），７．７２（４Ｈ，ｍ，２ｘ２’−Ｈ，２ｘ３’−Ｈ）７．７８（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２−Ｈ），９．２４（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．２６（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５３．０（Ｃ＝Ｏ，尿素），１４４．０（ｍ，Ｃ−１’），１４３．４（Ｃ−４），１３８．２（Ｃ−１），１２７．７（２ｘＣ−２），１２７．０（ｑ， ^３Ｊ_Ｃ−Ｆ３．８，Ｃ−３’），１２５．４（ｑ，Ｊ_Ｃ−Ｆ２６９，ＣＦ_３），１２３．０（ｑ， ^２Ｊ_Ｃ−Ｆ３２，Ｃ−４’），１１９．０（２ｘＣ−２’），１１８．７（２ｘＣ−３）； δ_Ｆ（３７６．５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） −６０．１（３Ｆ，ｓ）。

４−｛［（［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］アミノカルボニル）アミノ］｝ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２７）；
３−アミノベンゼンスルファニルアミド（０．５０ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）を３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニルイソシアナート（０．７４ｇ；２．９０ｍｍｏｌ）で処理し、反応を室温で１晩攪拌し、先に報告した基本手順に記載したように処理して、８１．４％の収率で白色固形物としてＭＳＴ−１２７を得た。ｍ．ｐ２２８−２２９℃；シリカゲルＴＬＣＲ_ｆ０．６２（酢酸エチル／石油エーテル３３％）； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３７４（Ｎ−Ｈ尿素），１６５３（Ｃ＝Ｏ尿素），１５９６（芳香族）； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）Ｈ），７．２７（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２），７．６９（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．０，３−Ｈ），７．７１（１Ｈ，ｓ，４’−Ｈ），７．７９（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．０，２−Ｈ），８．１６（２Ｈ，ｓ，２ｘ２’−Ｈ），９．４３（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），９．５４（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５３．２（Ｃ＝Ｏ，尿素），１４３．１，１４２．５，１３８．５，１３１．７（ｑ， ^２Ｊ_Ｃ−Ｆ３２，２ｘＣ−３’），１２７．７（２ｘＣ−２），１２４．２（ｑ，Ｊ_Ｃ−Ｆ２７２，２ｘＣＦ_３），１１９．２（ｍ，２ｘＣ−２’），１１９．１（２ｘＣ−３），１１５．７（ｍ，Ｃ−４’）； δ_Ｆ（３７６．５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） −６１．７（６Ｆ，ｓ）。

ウレイド置換された化合物（ＭＳＴ−１２８−１３３）
材料及び方法
無水溶媒およびすべての試薬はＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，ＡｌｆａＡｅｓａｒ及びＴＣＩから購入した。空気または湿気敏感な化合物を含む反応はすべて乾燥したガラス容器、および溶液を移送するためのシリンジ技術を使用して窒素雰囲気下で行なった。赤外線（ＩＲ）スペクトルはＫＢｒプレートで記録され、ｎｈｙｄ−１で表示した。核磁気共鳴（^１ＨＮＭＲ、^１３ＣＮＭＲ、ＤＥＰＴ、ＨＳＱＣ、ＨＭＢＣ）スペクトルは、ＭｅＯＨ−ｄ４又はＤＭＳＯ−ｄ６中でＢｒｕｋｅｒＡｄｖａｎｃｅＩＩＩ４００ＭＨｚ分光計を使用して記録した。ケミカルシフトはｐｐｍ（ｐｐｍ）で報告し、結合定数（Ｊ）はヘルツ（Ｈｚ）で表示する。スプリッティングパターンは以下のように示す：ｓ、シングレット；ｄ、ダブレット；ｓｅｐｔ、セプテット；ｔ、トリプレット；ｑ、カルテット；ｍ、マルチプレット；ｂｒｓ、（幅広シングレット）；ｄｄ、二重のダブレット；ａｐｐｔ、見掛け上のトリプレット；ａｐｐｑ、見掛け上のカルテット。交換可能なプロトン（ＯＨ及びＮＨ）の帰属はＤ_２Ｏの添加によって確認した。分析的な薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）はＭｅｒｃｋシリカゲルＦ−２５４プレート上で実施した。フラッシュクロマトグラフィー精製は、固定相としてＭｅｒｃｋシリカゲル６０（２３０−４００メッシュＡＳＴＭ）上で、及び酢酸エチル／ｎヘキサン、又は、ＭｅＯＨ／ＤＣＭを溶離液に用いて行った。融点（ｍ．ｐ．）は開放系のキャピラリー中で測定し、未訂正である。

３−（３−（４’−ヨードフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２８）
３−（３−（４’−ヨードフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（Ａ）：ｍ．ｐ．２５６−２５８ ℃； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３１６５，３２６５，１６４３，１５８９； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．３４−７．６６（９Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換），８．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ，２．１，２−Ｈ），８．７９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），９．０８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５３．１（Ｃ＝Ｏ），１４５．６，１４０．９，１４０．３，１３８．３，１３０．３，１２２．１，１２１．６，１１９．９，１１６．１，８５．９；Ｅｌｅｍ．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃ．［Ｃ，３７．４２；Ｈ，２．９０；Ｎ，１０．０７］；Ｆｏｕｎｄ［Ｃ，３７．０６；Ｈ，２．７９；Ｎ，９．８２］；ｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）４１８（Ｍ＋Ｎａ）^＋。

３−（３−（４’−フルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１２９）
３−（３−（４’−フルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（Ｂ）：ｍ．ｐ．２３３−２３５ ℃； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３７７，３３５２，１６８５，１５５７； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ８．８，Ａｒ−Ｈ），７．４５（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換），７．４７−７．６０（５Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ），８．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ，２．１，２−Ｈ），８．７８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），９．０４（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５８．４（ｄ，Ｊ_Ｃ−Ｆ２３７，Ｃ−４’），１５３．４（Ｃ＝Ｏ），１４５．６，１４１．１，１３６．６，１３０．３，１２２．０，１２１．２，１１９．８，１１６．３，１１６．１； δ_Ｆ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） −１２１．１４；Ｅｌｅｍ．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃ．［Ｃ，５０．４８；Ｈ，３．９１；Ｎ，１３．５８］；Ｆｏｕｎｄ［Ｃ，４９．９８；Ｈ，３．７９；Ｎ，１３．４９］；ｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）３１１（Ｍ＋Ｎａ）^＋。

３−（３−（３’−ニトロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３０）
３−（３−（３’−ニトロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（Ｃ）：ｍ．ｐ．２５２−２５５ ℃； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３８０，３３５０，１６８９，１５５０； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．４１（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換），７．４８−７．６４（４Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ），７．７７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ７．２，２．１，Ａｒ−Ｈ），７．８７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ７．２，２．１，Ａｒ−Ｈ），８．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ，２．１，２−Ｈ），８．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ，２．１，２’−Ｈ），９．２３（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），９．３１（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５３．３（Ｃ＝Ｏ），１４９．１，１４５．７，１４１．７，１４０．６，１３１．０，１３０．３，１２５．４，１２２．４，１２０．２，１１７．４，１１６．４，１１３．２；Ｅｌｅｍ．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃ．［Ｃ，４６．４３；Ｈ，３．６０；Ｎ，１６．６６］；Ｆｏｕｎｄ［Ｃ，４６．９１；Ｈ，３．５５；Ｎ，１６．９４］；ｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）３３７（Ｍ＋Ｎａ）^＋。

３−（３−（４’−アセチルフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３１）
３−（３−（４’−アセトフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（Ｄ）：ｍ．ｐ．２６７−２６９ ℃； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３４０２，３３５１，２０１４，１９３３，１９１２，１５９３； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）２．５６（３Ｈ，ｓ，ＣＨ_３），７．４１（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換），７．４８−７．５５（３Ｈ，ｍ，４−Ｈ，５−Ｈ，６−Ｈ），７．６０（２Ｈ，ｄ，Ｊ７．２，２ｘ２’−Ｈ），７．９７（２Ｈ，ｄ，Ｊ７．２，２ｘ３’−Ｈ），８．１３（１Ｈ，ｔ，Ｊ２．０，２−Ｈ），９．１８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），９．１９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１９７．２（ＣＨ_３Ｃ＝Ｏ），１５３．０（Ｃ＝Ｏ），１４５．７，１４５．０，１４０．７，１３１．６，１３０．５，１３０．４，１２２．２，１２０．２，１１８．２，１１６．２，２７．２；Ｅｌｅｍ．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃ．［Ｃ，５４．０４；Ｈ，４．５４；Ｎ，１２．６０］；Ｆｏｕｎｄ［Ｃ，５４．３１；Ｈ，４．４７；Ｎ，１２．９６］；ｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）３３４（Ｍ＋Ｎａ）^＋。

３−（３−（２’−イソプロピルフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３２）
３−（３−（２’−イソプロピルフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（Ｅ）：ｍ．ｐ．１７５−１７６ ℃； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３２８，３３００，１６９０，１５５６； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１．２３（６Ｈ，ｄ，Ｊ６．２，２ｘ８’−Ｈ_３），３．１９（１Ｈ，ｓｅｐｔ，Ｊ６．２，７’−Ｈ），７．１４（２Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ），７．３５（１Ｈ，ｄ，Ｊ７．２，Ａｒ−Ｈ），７．３７（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換），７．５９−７．７０（４Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ），８．００（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），８．１０（１Ｈ，ｔ，Ｊ２．０，２−Ｈ），９．３０（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５３．９（Ｃ＝Ｏ），１４５．６，１４１．３，１４０．７，１３６．１，１３０．３，１２６．７，１２６．２，１２５．２，１２４．７，１２１．７，１１９．５，１１５．８，２７．８，２４．０；Ｅｌｅｍ．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃ．［Ｃ，５７．６４；Ｈ，５．７４；Ｎ，１２．６０］；Ｆｏｕｎｄ［Ｃ，５８．１４；Ｈ，５．７３；Ｎ，１２．７０］；ｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）３３４（Ｍ＋Ｎａ）^＋。

３−（３−（パーフルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（ＭＳＴ−１３３）
３−（３−（パーフルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド（Ｆ）：ｍ．ｐ．２２４−２２７ ℃； ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３３９０，３２８７，１７８５，１５６０； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．３８（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換），７．５０（２Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ），７．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ７．２，Ａｒ−Ｈ），８．０９（１Ｈ，ｓ，２−Ｈ），８．６３（１Ｈ，ｓ，ＡｒＮＨＣＯＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），９．４７（（１Ｈ，ｓ，ＡｒＮＨＣＯＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５２．９（Ｃ＝Ｏ），１４５．６，１４４．１（ｄ，Ｊ^１ _Ｃ−Ｆ２４５），１４０．７，１３９．６（ｄ，Ｊ^１ _Ｃ−Ｆ２５３），１３８．２（ｄ，Ｊ^１ _Ｃ−Ｆ２４５），１３０．４，１２２．３，１２０．４，１１６．４，１１４．７（ｔ，Ｊ _Ｃ−Ｆ１２）； δ_Ｆ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） −１４６．３（２Ｆ，ｄｄ，Ｊ１９．２４．８，２ｘ２’−Ｆ）， −１５９．２（１Ｆ，ｔ，Ｊ２２．９，４’−Ｆ）， −１６４．０（２Ｆ，ｄｔ，Ｊ２２．６４．８，２ｘ３’−Ｆ）；Ｅｌｅｍ．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃ．［Ｃ，４０．９５；Ｈ，２．１１；Ｎ，１１．０２］；Ｆｏｕｎｄ［Ｃ，４０．６８；Ｈ，１．７４；Ｎ，１１．００］；ｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）３８２（Ｍ＋Ｎａ）^＋。

表２：メタ−ウレイド置換されたスルホンアミドＭＳＴ−１２８から１３３までのＣＡコントロールデータ。

ＭＳＴ−１３４−１４８に対応するウレイドスルホンアミドの合成
４−（３−（４’−クロロ−２−フルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミドＭＳＴ−１３４
４−（３−（４’−クロロ−２−フルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド： ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３１６６，３２７０，１６４０，１５９２； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２６−７．３０（３Ｈ，ｂｒｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換，５’／６’−Ｈ），７．５２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ，８．２，２．１，５’／６’−Ｈ），７．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．２，２ｘ２／３−Ｈ），７．７８（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．２，２ｘ２／３−Ｈ），８．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ９．０，８．２３’−Ｈ），８．７９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），９．４７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５２．８（ｄ，Ｊ^１ _Ｃ−Ｆ２４５，Ｃ−２’），１５２．７（Ｃ＝Ｏ），１４３．２，１３８．２，１２７．８，１２７．４，（ｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ１０），１２６．７（ｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ１０），１２５．６，１２２．５，１１８．４，１１６．６（ｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ２３）； δ_Ｆ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） −１２６．３８。

４−（３−（４’−ブロモ−２’−フルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミドＭＳＴ−１３５
４−（３−（４’−ブロモ−２’−フルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド： ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３１６６，３２７０，１６４０，１５９２； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２７（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換），７．４０（１Ｈ，ｄ，Ｊ，９．２５’／６’−Ｈ），７．６４（３Ｈ，ｍ，２ｘ２／３−Ｈ，５’／６’−Ｈ），７．７８（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．２，２ｘ２／３−Ｈ），８．１６（１Ｈ，ｔ，Ｊ８．８３’−Ｈ），８．７９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），９．４８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５２．８（ｄ，Ｊ^１ _Ｃ−Ｆ２４５，Ｃ−２’），１５２．７（Ｃ＝Ｏ），１４３．２，１３８．２，１２８．５，１２７．９，１２７．７（ｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ６），１２２．８，１１９．２（ｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ２２），１１８．４，１１４．０（ｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ９）； δ_Ｆ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） −１２６．３８。

４−（３−（２’−フルオロ−５’−ニトロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミドＭＳＴ−１３６
４−（３−（２’−フルオロ−５’−ニトロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド：ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３１６６，３２７０，１６４０，１５９２； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２８（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換），７．６０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ，９．２６．８，６’−Ｈ），７．７０（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．２，２ｘ２／３−Ｈ），７．８０（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．２，２ｘ２／３−Ｈ），７．９６（１Ｈ，ｍ，４’−Ｈ），９．１３（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），９．１８（１Ｈ，ｍ，６’−Ｈ），９．５７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５６．０（ｄ，Ｊ^１ _Ｃ−Ｆ２５１，Ｃ−２’），１５４．８（Ｃ＝Ｏ），１４４．９，１４２．９，１３８．６，１２９．３（ｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ１２），１２７．９，１１９．０（ｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ９），１１８．７，１１７．０（ｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ２２），１１５．７； δ_Ｆ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） −１１９．４３。

４−（３−（２’，４’，５’−トリフルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミドＭＳＴ−１３７
４−（３−（２’，４’，５’−トリフルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド：ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３１６６，３２７０，１６４０，１５９２； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２７（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換），７．６８（３Ｈ，ｍ，２ｘ２／３−Ｈ，３’−Ｈ），７．７８（２Ｈ，ｄ，Ｊ９．２，２ｘ２／３−Ｈ），８．２２（１Ｈ，ｍ，６’−Ｈ），８．５８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），９．４７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５２．７（Ｃ＝Ｏ），１４８．２（ｄｄ，Ｊ^１ _Ｃ−Ｆ２４０，１２．２），１４６．４（ｄ，Ｊ^１ _Ｃ−Ｆ２３７，１５．８），１４４．４（ｄｄ，Ｊ^１ _Ｃ−Ｆ２５０，１２．０），１４３．３，１３８．３，１２７．８，１２５．０（ｍ），１１８．５，１０９．５（ｄｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ２４．５，２．９），１０６．４（ｄｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ２５．６，２２．０）； δ_Ｆ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） −１３０．６４（ｄ，Ｊ _Ｆ−Ｆ１３．９）， −１４１．７５（ｍ）， −１４３．０６（ｄ，Ｊ _Ｆ−Ｆ２４．４）。

４−（３−（２’−フルオロ−５’−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミドＭＳＴ−１３８
４−（３−（２’−フルオロ−５’−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド： ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３１６６，３２７０，１６４０，１５９２； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２８（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換），７．４７（１Ｈ，ｍ，４’−Ｈ），７．５５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１０．８８．８，３’−Ｈ），７．６７（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ），７．７９（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ），８．６３（１Ｈ，ｍ，６’−Ｈ），９．０３（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），９．５６（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５４．０（ｄ，Ｊ^１ _Ｃ−Ｆ２４７，Ｃ−２’），１５２．８（Ｃ＝Ｏ），１４３．０，１３８．５，１２９．３０（ｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ１１．３），１２７．９，１２６．２（ｄｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ３１．８，３．３），１２３．５，１２０．７（ｍ），１１８．６，１１７．７，１１７．０（ｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ２０．５）； δ_Ｆ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） −６０．７（３Ｆ，Ｃ−Ｆ_３）， −１２３．８（１Ｆ，２’−Ｆ）。

４−（３−（２’−フルオロ−３’−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミドＭＳＴ−１３９
４−（３−（２’−フルオロ−３’−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド：ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３１６６，３２７０，１６４０，１５９２； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２７（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換），７．４３（２Ｈ，ｍ，５’−Ｈ，６’−Ｈ），７．６５（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ），７．７９（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ），８．４６（１Ｈ，ｍ，４’−Ｈ），８．９６（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），９．５３（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５２．７（Ｃ＝Ｏ），１５０．０（（ｄ，Ｊ^１ _Ｃ−Ｆ２５０，Ｃ−２’），１４３．１，１３８．３，１２９．４（（ｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ９），１２７．８，１２５．９（ｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ４３．９），１２４．９，１２２．２，１２０．４，１１８．７，１１７．５（ｄｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ３２．１，３．２）； δ_Ｆ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） −５９．８（３Ｆ，ｄ，Ｊ_Ｆ−Ｆ１３．２，Ｃ−Ｆ_３）， −１３２．２（１Ｆ，ｑ，Ｊ１３．２，２’−Ｆ）。

４−（３−（２’，３’，４’−トリフルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミドＭＳＴ−１４０
４−（３−（２’，３’，４’−トリフルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド： ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３１６６，３２７０，１６４０，１５９２； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２７（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換），７．３４（２Ｈ，ｍ，５’／６’−Ｈ），７．６５（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ），７．７７（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ），７．８８（１Ｈ，ｍ，５’／６’−Ｈ），８．８２（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），９．４５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５２．９（Ｃ＝Ｏ），１４６．６（ｄ，Ｊ^１ _Ｃ−Ｆ２３７），１４３．２，１４１．８（ｄ，Ｊ^１ _Ｃ−Ｆ２４０），１３９．６（ｄ，Ｊ^１ _Ｃ−Ｆ２４２），１３８．３，１２７．８，１２６．０（ｍ），１１８．５，１１６．７（ｍ），１１２．６（ｄｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ１８，４）； δ_Ｆ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） −１４３．１（１Ｆ，ｄ，Ｊ_Ｆ−Ｆ２１．７，２’／４’−Ｆ）， −１４８．４（１Ｆ，ｄ，Ｊ_Ｆ−Ｆ２１．７，２’／４’−Ｆ）， −１６１．１（１Ｆ，ｔ，Ｊ_Ｆ−Ｆ２１．７，３’−Ｆ）。

４−（３−（２’−フルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミドＭＳＴ−１４１
４−（３−（２’−フルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド： ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３１６６，３２７０，１６４０，１５９２； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．０７（１Ｈ，ｍ，３’−Ｈ），７．２０（１Ｈ，ｍ，４’−Ｈ），７．２６（３Ｈ，ｂｒｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換，５’−Ｈ），７．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ），７．８０（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ），８．２０（１Ｈ，ｍ，６’−Ｈ）８．７０（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），９．４６（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５３．１（ｄ，Ｊ^１ _Ｃ−Ｆ２４０），１５２．９（Ｃ＝Ｏ），１４３．４，１３８．１，１２８．１，１２７．８，１２５．４，１２３．８，１２１．７，１１８．３，１１６．６（ｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ１９）； δ_Ｆ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） −１２９．５９。

４−（３−（２’，４’−ジフルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミドＭＳＴ−１４２
４−（３−（２’，４’−ジフルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド：ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３１６６，３２７０，１６４０，１５９２； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．０８（１Ｈ，ｍ，３’／５’−Ｈ），７．２５（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換），７．３６（１Ｈ，ｍ，３’／５’−Ｈ），７．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ），７．７８（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ），８．１１（１Ｈ，ｍ，６’−Ｈ），８．６４（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），９．４１（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５８．１（ｄｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ２４３，１３），１５３．４（ｄｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ２４４，１２），１５３．０（Ｃ＝Ｏ），１４３．４，１３８．１，１２８．１，１２７．８，１２４．５（ｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ９），１２３．２（ｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ８），１１８．４，１１２．０（ｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ２１），１０４．８（ｔ，Ｊ _Ｃ−Ｆ２５）； δ_Ｆ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） −１１７．５２， −１２４．３。

４−（３−（３’−クロロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミドＭＳＴ−１４３
４−（３−（３’−クロロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド：ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３１６６，３２７０，１６４０，１５９２； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，４’−Ｈ），７．２５（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換），７．３３（２Ｈ，ｍ，５’−Ｈ，６’−Ｈ），７．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ），７．７７（３Ｈ，ｍ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ，２’−Ｈ），９．０４（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），９．１７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５３．１（Ｃ＝Ｏ），１４３．５，１４１．８，１３８．０，１３４．１，１３１．３，１２７．７，１２２．７，１１８．７，１１８．６，１１７．８。

４−（３−（２’，５’−ジクロロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミドＭＳＴ−１４４
４−（３−（２’，５’−ジクロロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド：ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３１６６，３２７０，１６４０，１５９２； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ８．８２．８，４’−Ｈ），７．２８（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換），７．５５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ８．８２．８，３’−Ｈ），７．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ），７．７９（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ），８．３５（１Ｈ，ｄ，Ｊ２．８，６’−Ｈ），８．６０（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），９．９０（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５２．７（Ｃ＝Ｏ），１４３．１，１３８．４，１３７．８，１３２．９，１３１．５，１２７．９，１２４．０，１２１．３，１２１．１，１１８．７。

４−（３−（２’−クロロ−５’−ニトロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミドＭＳＴ−１４５
４−（３−（２’−クロロ−５’−ニトロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド：ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３１６４，３２７１，１６４１，１５９２； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２９（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換），７．７０（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ），７．８２（３Ｈ，ｍ，２ｘ２／３−Ｈ，３’−Ｈ），７．９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ８．９２．２，４’−Ｈ），８．８４（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），９．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ２．２，６’−Ｈ），９．９９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５２．７（Ｃ＝Ｏ），１４７．５．１４２．９，１３８．６，１３７．７，１３１．３，１２８．９，１２７．９，１１８．８，１１８．５，１１５．６。

４−（３−（２’−クロロ−４’−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミドＭＳＴ−１４６
４−（３−（２’−クロロ−４’−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド：ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３１６９，，１６３９，１５６０； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２９（２Ｈ，ｓ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換），７．６９（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ），７．７４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ８．８４．０，５’−Ｈ），７．８０（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ），７．９２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ４．０，３’−Ｈ），８．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，６’−Ｈ），８．７６（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），１０．０（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５２．５，１４３．０，１４０．４，１３８．５，１２８．７，１２７．９，１２７．２（ｍ），１２５．８（ｍ），１２４．０（ｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ３３．０），１３．２，１２２．７，１２１．４； δ_Ｆ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） −６０．４２。

４−（３−（２’，６’−ジフルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミドＭＳＴ−１４７
４−（３−（２’，４’−ジフルオロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド：ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３１６４，３２７０，１６４１，１５９０； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．３３（４Ｈ，ｍ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換，２ｘ５’−Ｈ），７．３７（１Ｈ，ｍ，４’−Ｈ），７．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ），７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ），８．３０（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），９．３８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５８（ｄ，Ｊ^１ _Ｃ−Ｆ２４７，Ｃ−２’，Ｃ−６’），１５３．２７（Ｃ＝Ｏ），１４３．７，１３８．０，１２８．３（ｍ），１２７．７，１１８．５，１１５．９（ｔ，Ｊ _Ｃ−Ｆ１６，Ｃ−４’），１１２．６（ｄ，Ｊ _Ｃ−Ｆ２３，２ｘＣ−３’）； δ_Ｆ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） −１１８．７３。

４−（３−（パークロロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミドＭＳＴ−１４８
４−（３−（パークロロフェニル）ウレイド）ベンゼンスルホンアミド：ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１，３１６８，３２７５，１６４１，１５９０； δ_Ｈ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２４（２Ｈ，ｍ，ＳＯ_２ＮＨ_２，Ｄ_２Ｏと交換），７．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ），７．７５（２Ｈ，ｄ，Ｊ８．８，２ｘ２／３−Ｈ），８．２９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換），９．３８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ，Ｄ_２Ｏと交換）； δ_Ｃ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１５３．２（Ｃ＝Ｏ），１４２．０，１３９．２，１３０．１（ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇｓｉｇｎａｌｓ），１２７．４，１２５．５。

表３：ウレイド置換されたスルホンアミドＭＳＴ−１３４−１４８でのＣＡ抑制データ

残りの実施例については、以下の方法および追加情報は有用な参照になる。

細胞培養および低酸素暴露
マウス乳癌細胞株４Ｔ１、６６ｃｌ４および６７ＮＲ、並びにヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−２３１およびＭＤＡ−２３１ＬＭ２−４を発現させるルシフェラーゼの習得、生成および培養が以前に記述された（Ｌｏｕｅｔａｌ，（２００８）ＤｅｖＤｙｎ２３７：２７５５−２７６８；Ｌｏｕｅｔａｌ，（２０１１）ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，７１：３３６４−３３７６）。低酸素内培養については、細胞を、密封した嫌気性ワークステーション中の調湿されたインキュベータ中で、Ｎ_２でバランスされた１％Ｏ_２および５％ＣＯ_２の中で３７℃に維持した。

安定した細胞の発生
マウスＣＡＩＸおよび非サイレンシング配列（開放生物システム）をターゲットとするｓｈＲＮＡｍｉｒベクターを、メーカーの指示によるＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥＰＬＵＳＴＭ（ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、９０％コンフルエントな細胞へトランスフェクトした。プロマイシンの以前の利用により、トランスフェクトされた細胞を、ヒグロマイシンを使用して選抜した。安定したｓｈＣＡＩＸクローンを、限定的希釈クローニングによって誘導した。細胞の中への（再）ＣＡＩＸの導入については、ヒトＣＡＩＸ（Ｄｒ．ＪａｃｑｕｅｓＰｏｕｙｓｓｅｇｕｒ，ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＮｉｃｅからの贈り物）を、同一の手順に従って４Ｔ１細胞へトランスフェクトし、そして、Ｚｅｏｃｉｎを選抜に用いた。

細胞外ｐＨの測定
溶液ｐＨの変化は、以前に公表された（２９、４２、４３）手順を使用して評価した。簡単に言えば、細胞は、６０ｍｍの皿中で適切な密度（４Ｔ１細胞およびそのトランスフェクトされた誘導体については１ｘ１０４細胞／ｃｍ２、６６ｃｌ４細胞については２ｘ１０４細胞／ｃｍ２、６７ＮＲ細胞およびそのトランスフェクトされた誘導体については１ｘ１０４細胞／ｃｍ２）で平板培養し、一晩回復させた。次に、３ｍｌの新鮮な媒体／皿の基準容積を添加した。そして、細胞を、酸素正常状態（空気＋５％のＣＯ_２）又は低酸素（窒素でバランスされた１％のＯ_２および５％のＣＯ_２）中で７２時間培養した。酸素正常状態及び低酸素中で育てられた培養物が同様のコンフルエンスにあって媒体収集のときに同様の菌体数を含んでいることを確認する点に注意した。集めた使用済みの媒体は３７℃に維持し、ｐＨは直ちにディジタルｐＨ計を使用して測定した。与えられた細胞株用菌体数が両方の環境要因において比較可能であったことを保証するために細胞計数を行なった。ｑＲＴ−ＰＣＲおよびウエスタンプロット解析のために、細胞を氷の上で収穫した。

薬理学的インヒビター
スルホンアミド（ＭＳＴ−０１７）の化学的特性は、以前に、称呼ＣＡＩ１７の下で記述された（Ｓｕｐｕｒａｎ，Ｃ．２００８，Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ７：１６８−１８１）。ウレイドスルホンアミドは新しい。生体外の試験のために、化合物は、ＤＭＳＯ中に溶解し、−８０℃で保管し、適用直前に培地へ希釈した。サブコンフルエントな細胞は酸素正常状態または低酸素中で７２時間ＭＳＴ−０１７で培養し、ＰＢＳ中で３回洗浄し、ＺｅｉｓｓＡｘｉｏｐｌａｎＴＭ落射蛍光顕微鏡を使用して画像化した。生体内の試験のために、ＭＳＴ−０１７インヒビターを腹腔注射で（最初の２回分は静脈注射で）７５ｍｇ／ｋｇおよび１５０ｍｇ／ｋｇの用量を週３回、２週間に亙り投与した。他のインヒビターのための投与濃度および計画は、以下の適切な実施例において示される。化合物は注射に先立ってＰＥＧ４００／エタノール／食塩水中で可溶化した。インヒビター濃度が変えられるように、ビヒクル成分は一定に維持された。

ｍＲＮＡおよびタンパク質発現の分析
定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）は、ＲｏｃｈｅＵｎｉｖｅｒｓａｌＰｒｏｂｅＬｉｂｒａｒｙ（ＵＰＬ）を使用して、メーカーの指示に従って、ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ器機上の３８４穴ウエルプレート中で実施した。簡単に云えば、サブコンフルエントな細胞又は凍結した組織切片のいずれかからのＲＮＡ合計の１μｇを、ｃＤＮＡを作成するために使用した。１００ｎＭのＵＰＬプローブ、２００ｎＭの各プライマー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）およびＴａｑＭａｎＴＭＰＣＲマスターミックス（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を含んでいるｑＲＴ−ＰＣＲ混合物の１０μｌを、ＰＣＲ（４４）の４０サイクルに対する各ウエルにロードした。相対的な遺伝子発現定量化データは、ＡＢＩプリズム７９００ＨＴ配列検出体（ＳｅｑｕｅｎｃｅＤｅｔｅｃｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍ）およびハウスキーピング遺伝子としてのアクチン−βを使用する標準２−ΔΔｃｔ法を使用して、取得し分析した。免疫ブロット法のために、細胞又はフラッシュ凍結した腫瘍組織を、適切なインヒビターで補足した１％トリトンＸ−１００のバッファー（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、ｐＨ＝７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセリン、１ｍＭのＥＧＴＡおよび２ｍＭのＥＤＴＡ）中に溶解した。等しい量のタンパク質をＳＤＡ−ＰＡＧＥゲル剤にロードした。分解の前にＨＩＦ−１αの検出を強化するために、等密度における細胞を低酸素中で４ｘＳＤＳローディングバッファー中に直接溶解した。ウェスタンブロットは、マウスＣＡＩＸ（１：５００）、ＨＩＦ−１α（１：２５０）およびヒトＣＡＩＸ（１：１０００）（全て、Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓから入手）およびβ−アクチン抗体（１：１０，０００、Ｓｉｇｍａ）を使用して行なった。

マウス腫瘍モデル
動物試験および手順はすべて、ＢＣＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｒｅのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎＡｎｉｍａｌＣａｒｅＣｏｍｍｉｔｔｅｅおよびＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＢｒｉｔｉｓｈＣｏｌｕｍｂｉａ（Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ，Ｃａｎａｄａ）によって承認されたプロトコルに従って行った。

先天性の同所性の腫瘍および自然発生的転移
以前に記述されたように（Ｌｏｕｅｔａｌ，（２０１１）ＣａｎｃｅｒＲｅｓ７１：３３６４−３３７６；Ｌｏｕｅｔａｌ，（２００８）ＤｅｖＤｙｎ２３７：２７５５−２７６８）、４Ｔ１細胞（１ｘ１０^６）又は６７ＮＲ細胞（２ｘ１０^６）を、７−９週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスの第４乳房状脂肪パッドへ同所性的に移植した。この大きさの菌体数の注射はこれらの腫瘍の繁殖には標準で、よく腫瘍成長の他のモデル中に使用される数未満である（Ｅｒｌｅｒ，ＪＴ．Ｂｅｎｎｅｗｉｔｈ，ＫＬ，．Ｉｃｏｌａｕ，Ｍ．Ｎａｔｕｒｅ４４０：１２２２−１２２６）。原発腫瘍成長速度は修正楕円体の式（ＬｘＷ２）／２を使用して、キャリパ測定から計算した。腫瘍生成及び転移の進行は以前に記述されたような生物発光の画像化を使用して、モニターし定量した（Ｅｂｏｓｅｔａｌ．，（２００９）ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌ１５：２３２−２３９．；Ｌｏｕｅｔａｌ．，（２００８）ＤｅｖＤｙｎ２３７：２７５５−２７６８）。

実験的な転移アッセイ
ＣＡＩＸの遺伝的消耗を含む試験のために、４Ｔ１または６７ＮＲの細胞（５ｘ１０^５）を、７−９週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスの尾静脈に直接注入した。マウスは、転移の生長をフォローアップするために１週間に１回、画像処理した。マウスを注射後２０日に安楽死させ、肺は、詳しい分析のために切除した。肺中の全腫瘍組織量は肺表面上に見える小結節を手作業で数えることにより定量した。試験のために、４Ｔ１細胞（１−５ｘ１０^５）は、スルホンアミドインヒビターを使用して、上記の様に注入した（Ｐａｃｃｈｉａｎｏｅｔａｌ，（２０１１）ＪＭｅｄＣｈｅｍ５４：１８９６−１９０２）。

ヒト異種移植腫瘍
ＣＡＩＸ消耗を含む試験のために、５０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ／ＰＢＳ溶液中に懸濁した１ｘ１０７ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、６−８週齢雌のＮＯＤ．ＣＢ１７−ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／Ｊマウスに皮下移植した。原発性の胸壁腫瘍異種移植のために、２ｘ１０^６細胞は、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１のＬＭ２−４Ｌｕｃ＋変種（Ｅｂｏｓｅｔａｌ，（２００９）ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌ１５：２３２−２３９）を使用して、上述したようにマウスに同所性的に移植した。腫瘍が２００ｍｍの３に達したとき、療法を始めた。両方のモデルに対して、腫瘍成長はキャリパ測定によってモニターした。

３ＤＭａｔｒｉｇｅｌ浸潤アッセイ
以前に記述されたように（Ｌｅｅｅｔａｌ，（２００７）ＮａｔＭｅｔｈｏｄｓ４：３５９−３６５）、３Ｄ「オントップ」マトリゲル（ｍａｔｒｉｇｅｌ）培養物アッセイを行なった。簡単に云えば、ＭＤＡ−２３１ＬＭ２−４Ｌｕｃ＋細胞（１．５ｘ１０４細胞／ｃｍ２）を、２ｘインヒビターの終末濃度を含んでいる１００μｌ／ウエル増殖培地中に再懸濁し、そしてマトリゲルであらかじめコーティングされた８ウエルチェンバースライドの中へ平板培養した。ウエルの中心での細胞群生を防ぐために、細胞を１０−１５分ごとに横方向の攪拌に４５分間付した。１０％のマトリゲルを含んでいる追加的な１００のμｌ／ウエル媒体を細胞に添加して、培養物を４日間低酸素中で培養した。像を取得し、培養物は、Ｌｅｅｅｔａｌ，（２００７）ＮａｔＭｅｔｈｏｄｓ４：３５９−３６５中に概説された「全体の培養物固着」法を使用して、ＴＵＮＥＬ用に固定した。

腫瘍球体培養物
４Ｔ１細胞は、５％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（Ｓｉｇｍａ）を含むＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）中で、毎週２回のサブ培養で単層として育成した。続いて、ｓｈＮＳおよびｓｈＣＡＩＸ４Ｔ１は、メーカーの指示に従って、マモカルト（ｍａｍｍｏｃｕｌｔ）媒体（ＳｔｅｍＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｂ．Ｃ．，Ｃａｎａｄａ）中で腫瘍球体（ｔｕｍｏｒｓｐｈｅｒｅｓ）として培養した。（Ｔｕｍｏｒｓｐｈｅｒｅｓは、腫瘍細胞が特定の増殖条件（ＦｉｌｌｍｏｒｅａｎｄＫｕｐｅｒｗａｓｓｅｒ，（２００８）ＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＲｅｓ．１０：Ｒ２５）の下、生体外で培養されるときに、生ずる被着剤癌細胞からできている３−次元構造（多くの場合形において球状）である。腫瘍球体は、通常浮遊培養中で成長し、生体内の腫瘍に対する生体外の代理と考えられる。）

細胞数測定分析フロー
４Ｔ１腫瘍球体は、トリプシンで培養し、ＨＦバッファー（２％のウシ胎仔血清を含むＨＢＳＳ）中で一度洗浄し、次に１００ｕｌＨＦ中の１０^６個の細胞について抗体の抗−ＣＤ２４−ＡＰＣおよび抗−ＣＤ４４−ＰＥＣｙ７を使用する０．３μｌで染色し、氷の上で１０分間培養した。培養に続いて、細胞をＨＦバッファーで一度洗浄し、４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ；終濃度、１μｇ／ｍｌ）を含む３００ｕｌＨＦ緩衝剤中に再懸濁した。細胞は、アリアセルソータ（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＳａｎＪｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）上で分離した。実際の細胞は前方および側面散乱に基づきゲート制御し、単離細胞は前方散乱およびパルス幅に基づきゲート制御した。ゲートは、未染色の細胞、アイソタイプ特有のコントロール、及び単回染色、の分析によって決定した。ＣＤ４４＋ＣＤ２４−／ｌｏｗ又はＣＤ４４＋ＣＤ２４＋細胞は、得られた細胞数が少なかったため、純度評価はしなかった。フローサイトメーターの細胞カウンターを、菌体数決定のために使用した。細胞を、ＤＭＥＭ媒体又はＨＦバッファーに集めた。

免疫組織化学
腫瘍切除の２時間前に、マウスに、１５００ｍｇ／ｋｇのＢｒｄＵｒｄ（Ｓｉｇｍａ）および６０ｍｇ／ｋｇのピモニダゾール（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ）を含む食塩水を腹腔内注射し、及び、５分前にＤｉＯＣ７（３）（７０μｌ、０．６ｍｇ／ｍｌ；ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅｓ）を静脈注射した。連続する腫瘍低温切片（１０μｍ）は、ＣｒｙｏｓｔａｒＴＭＨＭ５６０（ＭｉｃｒｏｍＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）でカットし、２４時間空気乾燥し、血流を視覚化するためにＤｉＯＣ７（３）のための組織蛍光を画像化した。切片は、５０％（ｖ／ｖ）のアセトン／メタノール中で室温で１０分間固定した。染色は、脈管構造については抗ＰＥＣＡＭ／ＣＤ３１抗体（１：２０００クローン、２Ｈ８，ＢＤＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ）およびＡｌｅｘａ６４７抗ハムスター第二紀（１：２００，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、低酸素症については多クローンのラビット−抗−ピモニダゾール（１：２０００，ＨｙｄｒｏｘｙｐｒｏｂｅＩｎｃ．）およびＡｌｅｘａ４８８抗ラビット第二紀（１：２００，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅｓ）を使用して、アポプトーシスについてはＴＭＲレッドのタグ付けしたｄＵＴＰを持ったＴＵＮＥＬ（Ｒｏｃｈｅ診断法（ＲｏｃｈｅＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ））を使用して、それぞれ行った。螢光画像化スライドを蒸留水に１０分間転送した後、引き続き、２ＭのＨＣｌで１ｈの処理および０．１Ｍのホウ酸ナトリウムで５分の中和を行った。ＤＮＡを組み込まれたＢｒｄＵｒｄを、単クローンのラット抗ＢｒｄＵｒｄ（１：５００、クローンＢＵ１／７５、Ｓｉｇｍａ）および抗マウスペルオキシダーゼ接合体抗体（１：２００，Ｓｉｇｍａ）並びに金属で強められたＤＡＢ基質（１：１０，Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して、検出した。ヘマトキシリンで逆染色されたスライドは画像化の前に脱水し、Ｐｅｒｍｏｕｎｔ（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してマウントした。以前に記述されたように（Ｋｙｌｅ，ＡＨ．，Ｈｕｘｈａｍ，ＬＡ．，Ｙｅｏｍａｎ，ＤＭ．，ｅｔａｌ２００７．ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ１３：２８０４−２８１０）、画像習得および分析を行った。以前に記述された如く（Ｌｕｏｅｔａｌ．）、パラフィンに包埋された腫瘍切片を、ＣＡＩＸ用（原発腫瘍用に１：１００、肺転移用に１：５０、ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）に、およびＨＩＦ−１α用（１：１００、Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ）用に、染色した。リンパ脈管新生（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）試験のために、凍結組織切片を、２％のＰＦＡで２０分間固定し、及び、湿潤容器中において、１０％のウシ血清アルブミンおよび２％のヤギ血清を含むＰＢＳ中に溶解したラビット抗−ＬＹＶＥ−１（１：１００，Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ）およびラット抗ＣＤ３１（１：１００，ＢＤＰｈａｒｍｉｇｅｎ）により室温で１時間染色した。Ａｌｅｘａ４８８抗ラビットおよびＡｌｅｘａ５４６抗ラット抗体を、二次的な抗体として１時間使用し、マウンティング用のＤＡＰＩ核逆染色を含むＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ封入剤（ＶｅｃｔｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）をそれに続けた。

［細胞増殖アッセイ］
細胞増殖は、メーカーの指示によるＭＴＴ細胞増殖キット（ＲｏｃｈｅＡｐｐｌｉｅｄＳｃｉｅｎｃｅ）を使用して測定した。簡単に言えば、細胞を５ｘ１０３細胞／ｃｍ２の密度で９６穴プレート中で平板培養し、一晩回復させた。次に、パラレルサンプルは、アッセイを行なう前に４８〜７２ｈ間酸素正常状態及び低酸素中で培養した。

［アポプトーシスアッセイ］
ＴＵＮＥＬ標識化（ＲｏｃｈｅＡｐｐｌｉｅｄＳｃｉｅｎｃｅ）を、ほとんどメーカーの指示に従って、アポプトーシス分析（アッセイ）のために採用した。簡単に云えば、カバーガラス上で育てたサブコンフルエントな細胞を、１％の血清中で、酸素正常状態又は低酸素下で４８時間培養し、４％のパラホルムアルデヒド中で６０分間固定し、空気乾燥し、室温で、ＰＢＳおよび０．１％のトリトン−Ｘ−１００中で１０分間透過処理した。細胞層は、次に、ＴＵＮＥＬ試薬で３７℃で６０分間培養し、ＰＢＳ中で洗浄し、Ｈ_３３３４２の１：１０，０００稀釈液で逆染色して、２７であった。

［歴史上の臨床分析］
１９８６年から１９９２年までのＢｒｉｔｉｓｈＣｏｌｕｍｂｉａ州の侵襲性の乳癌の新しい診断を受けた４，４４４人の患者の組織マイクロアレイは、中央のエストロゲン受容体研究所に提出された腫瘍標本から生み出された。ＴＭＡを生み出すために使用された方法が記述されている（Ｃｈｅａｎｇ，ＭＤ．，Ｃｈｉａ，ＳＫ．，Ｖｏｄｕ，Ｄｅｔａｌ．２００９．ＪＮａｔｌＣａｎｃｅｒＩｎｓｔ１０１：７３６−７５０）。ＴＭＡコホート（ｃｏｈｏｒｔ）が発現しているのは、この間に分析されたすべての乳癌事例のおよそ７０％であって、全てがＢｒｉｔｉｓｈＣｏｌｕｍｂｉａＣａｎｃｅｒＡｇｅｎｃｙに関係していた。３，６３０のケースは、全てのバイオマーカーのアセスメントにとって、適切な腫瘍および染色結果を有していた。以前に記述されたように（ＣｈｅａｎｇＭＤら）、ＥＲ、ＰＲ、ＨＥＲ２、ＣＫ５／６、ＥＧＦＲおよびＫｉ６７に対する免疫組織化学が連続切片上で同時に実施され、スコア付けされた。ＣＡＩＸ発現は、ネズミ科の単クローン抗体（Ｍ７５；１：５０）を使用して評価された（Ｃｈｏｉ，ＳＷ．，Ｋｉｍ，ＪＹ．，Ｐａｒｋ，ＪＹ．２００８ＨｕｍＰａｔｈｏｌ３９：１３１７−１３２２）。ＣＡＩＸ発現のスコア付けは、０：染色なし又は１：染色ありのいずれかであり、２人の病理学者によって独立に、ブラインド的に実施された。試験の事前認可はＢｒｉｔｉｓｈＣｏｌｕｍｂｉａ大学の倫理委員会から得られた。

［統計分析］
結果は、Ｅｘｃｅｌソフトウェア中でデータ分析ＴｏｏｌＰａｃｋ（ＤａｔａＡｎａｌｙｓｉｓＴｏｏｌＰａｃｋ）ＴＭを使用して、統計分析にかけた。両側のｐ値は、学生のｔ検定を使用して計算した。データは、ｐ＜０．０５に対して重要な意義を持つと考えられた．臨床的転帰に対して、統計分析は、ＳＰＳＳ１３．０（Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ，Ｓ−Ｐｌｕｓ６．２（Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）およびＲ２．１．１（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒ−ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇを使用して行なった。単変量解析中で、ＢＣＳＳ（原発性又は根本的な原因としての乳癌での死亡日に対する原発性乳癌の診断の日付）およびＲＦＳ（局所的か、局地的か、遠方の再発日付に対する原発性乳癌の診断の日付）および遠方のＲＦＳ（遠方の再発日付に対する原発性乳癌の診断の日付）を、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒカーブによって推測した。Ｌｏｇ−ランク試験を、生存差を推測するために使用した。多変量解析のために、Ｃｏｘ比例ハザードモデルを、調整された危険比率および有意を推測するために使用した。比例ハザードモデルの妨害を評価するために、重みが加えられたＳｃｈｏｅｎｆｅｌｄ残余の平滑化されたプロットを使用した。

実施例２
ＣＡＩＸは、乳癌患者の大きな集団（ｃｏｈｏｒｔ）中の予後マーカーである。
乳癌を含むいくつかのタイプの癌中のＣＡＩＸ発現が、以前に記述されたような患者の予後不良と関連すると従来の試験は報告したが、標本数は比較的小さく、均一でない補助的な治療であった。標準化された治療に付した多くのサンプル集団中で重要な予後マーカーとしてＣＡＩＸを検証するために、我々は、１０．５年の中間フォローアップを持った３９９２の患者サンプルを含む原発性の胸壁腫瘍組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）中のＣＡＩＸ発現を解析した。

ＴＭＡを生み出すために使用された方法が記述されている（Ｃｈｅａｎｇ，ＭＤ．，Ｃｈｉａ，ＳＫ．，Ｖｏｄｕ，Ｄｅｔａｌ．２００９．ＪＮａｔｌＣａｎｃｅｒＩｎｓｔ１０１：７３６−７５０）。ＴＭＡコホート（ｃｏｈｏｒｔ）が発現しているのは、この間に分析されたすべての乳癌事例のおよそ７０％であって、全てがＢｒｉｔｉｓｈＣｏｌｕｍｂｉａＣａｎｃｅｒＡｇｅｎｃｙに関係していた。ＣＡＩＸ発現は、ネズミ科の単クローン抗体（Ｍ７５；１：５０）を使用して評価した（Ｃｈｏｉ，ＳＷ．，Ｋｉｍ，ＪＹ．，Ｐａｒｋ，ＪＹ．２００８ＨｕｍＰａｔｈｏｌ３９：１３１７−１３２２）。ＣＡＩＸ発現のスコア付けは、０：染色なし又は１：染色ありのいずれかであり、２人の病理学者によって独立に、ブラインド的に実施された。試験の事前認可はＢｒｉｔｉｓｈＣｏｌｕｍｂｉａ大学の倫理委員会から得られた。

［統計分析］
結果は、Ｅｘｃｅｌソフトウェア中でデータ分析ＴｏｏｌＰａｃｋ（ＤａｔａＡｎａｌｙｓｉｓＴｏｏｌＰａｃｋ）ＴＭを使用して、統計分析にかけた。両側のｐ値は、学生のｔ検定を使用して計算した。データは、ｐ＜０．０５に対して重要な意義を持つと考えられた．臨床的転帰に対して、統計分析は、ＳＰＳＳ１３．０（Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ，Ｓ−Ｐｌｕｓ６．２（Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）およびＲ２．１．１（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒ−ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ）を使用して行なった。単変量解析中で、ＢＣＳＳ（原発性又は根本的な原因としての乳癌での死亡日に対する原発性乳癌の診断の日付）およびＲＦＳ（局所的か、局地的か、遠方の再発日付に対する原発性乳癌の診断の日付）および遠方のＲＦＳ（遠方の再発日付に対する原発性乳癌の診断の日付）を、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒカーブによって推測した。Ｌｏｇ−ランク試験を、生存差を推測するために使用した。多変量解析のために、Ｃｏｘ比例ハザードモデルを、調整された危険比率および有意を推測するために使用した。比例ハザードモデルの妨害を評価するために、重みが加えられたＳｃｈｏｅｎｆｅｌｄ残余の平滑化されたプロットを使用した。

ＣＡＩＸ発現は評価可能な腫瘍の１５．６％で見られた。そして、ＣＡＩＸは、基礎の乳癌で最も高い相関（５１％）および管腔のＡサブタイプ中で低い割合（８％）となり、生物学的なサブタイプ中に差別的に発現した（下記の表５）。

Ｋａｐｌａ−Ｍｅｉｅｒ分析中で、ＣＡＩＸ発現は無再発性生存期間（図１Ａ）、遠隔無再発性生存期間（図１Ｂ）および乳房癌特有の生存期間（図１Ｃ）と深く関係し、統計的有意性の非常な高水準を達成した（それぞれ、（ｐ＜１０^−１７，ｐ＜１０^−１６，ａｎｄｐ＜１０^−１３，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ））。１０年の遠隔無再発性生存期間および乳癌特有の生存期間の、ＣＡＩＸネガティブの群に対するＣＡＩＸポジティブの群おける具体的な割合が、それぞれ、７３％に対して５７％、および７８％に対して６２％であった。標準的予後変数および生物学的なサブタイプをすべて含む多変量解析中で、ＣＡＩＸ発現は、１．４の危険比率で強い独立した貧弱な予後因子のままであった。これらのデータは、ＣＡＩＸが多くの乳癌患者中の予後のマーカーであることを示した従来の試験の結果を確認し拡張する。

この実施例は、本発明の化合物が、転移に敏感ないかなる癌に対しても、又はＣＡＩＸ（患者の減少した生存と関連する大きな患者データバンク中で示される標的）を過剰発現している癌に対してもに対しても、治療になるという証拠を提供する。

表４．生物学的なサブタイプによるＣＡＩＸ発現

上記で、ＬｕｍＡは管腔Ａである；ＬｕｍＢは管腔Ｂである；ＥＲはエストロゲン受容体である；ＰＲはプロゲステロン受容体である；ＥＧＦＲは上皮の成長因子レセプターである；及び、「＋ｖｅ」はポジティブである。

実施例３
転移性４Ｔ１腫瘍は低酸素症およびＣＡＩＸ発現によって特徴付けられる。
図２は細胞培養、生物発光の標識化を持ったマウスモデル及び３つの腫瘍細胞株についての低酸素誘発された遺伝子発現表を示す。簡単に云えば、安定してルシフェラーゼを発現する転移性（４Ｔ１、６６ｃｌ４）及び、非転移性（６７ＮＲ）マウス乳房腫瘍細胞株を、マウスの乳房状脂肪パッドに接種した。腫瘍生成および転移の進行を生物発光画像化によってモニターした。原発腫瘍細胞をレーザー顕微解剖によって分離した。そして、識別的遺伝子発現分析は、分離された腫瘍細胞について行なった。（Ｂ）各細胞モデルからの３匹のマウスからの腫瘍組織は、低酸素症に誘発された遺伝子発現（高発現、暗；低発現、明）を解析した。

非転移性の６７ＮＲ腫瘍は高い脈管密度を示し、低酸素症が大部分は欠けていて、アポトーシスの細胞の数は低かった。対照的に、転移細胞株から誘導された原発腫瘍（特に４Ｔ１細胞株）は貧弱に導管化され、アポトーシス細胞数を多く持った低酸素症および壊死の広い領域を有していた（図２）。これらの腫瘍中で確認された低酸素で誘導可能な遺伝子の中で、ＣＡＩＸの発現は特に、両方の転移性変種中で上昇した（図２および２）。我々は、転移性腫瘍中の原形質膜に頑丈なレベルのＣＡＩＸタンパク質が局在化されることを観察したが、一方、ＣＡＩＸ発現は非転移性６７ＮＲ腫瘍には不在であった。原発腫瘍中のＣＡＩＸ過剰発現を示すウェスタンブロットが、図３に再現されている。ＮＭＧ＝正常な乳腺。ベータアクチンはローディング管理の役を務めた。

これらのデータは、低酸素症に誘発されたＣＡＩＸ発現が原発性の胸壁腫瘍の転移の可能性の増加にとって重要であり得ることを示す。

実施例４
低酸素症中のＣＡＩＸ発現、ｐＨ調節および細胞生存に関しての４Ｔ１モデルの検証
これらの実験のために、４Ｔ１細胞を、酸素正常状態または低酸素の中に４８時間培養した。そして、ＣＡＩＸ発現のレベルは、ベータアクチンをコントロールとし、ｑＲＴ−ＰＣＲおよびウェスタンブロットを使用して解析した。データは平均±ｓ．ｅ．ｍとして表わされる。ｎ＝３、＊＊Ｐ＜０．００５、＊＊＊Ｐ＜１０−３。第二ステップとして、非サイレンシングｓｈＲＮＡ（ｓｈＮＳ）又はＣＡＩＸ（ｓｈＣＡＩＸ）をターゲットとするｓｈＲＮＡを発現する４Ｔ１細胞（Ｂ）を７２時間培養した。ｓｈＣＡＩＸを発現する独立した２つのクローン（Ｃ２、Ｃ５）を解析した。データは平均±ｓ．ｅ．ｍとして表わされる。ｎ＝３．＊＊＊Ｐ＜０．０００５、酸素正常状態中で培養された細胞と比べて。４Ｔ１細胞のＣＡＩＸ遺伝子発現はマウスＣＡＩＸをターゲットとする構成物を安定して発現することにより沈黙（ｓｉｌｅｎｃｅｄ）させられ、ＣＡＩＸの低酸素症に誘発されたＣＡＩＸ発現を阻害するｓｈＲＮＡの効能を決定するために低酸素中で細胞を培養した。

このように、転移性細胞株（特に４Ｔ１細胞株）が低酸素に応じてＣＡＩＸ発現を誘発した（図４Ａ）。対照的に、低酸素中の培養は、非転移の細胞株６７ＮＲ中のＣＡＩＸ発現を誘発しなかった。非サイレンシングコントロールｓｈＲＮＡ（ｓｈＮＳ）を発現する４Ｔ１細胞は、低酸素中のＣＡＩＸの発現を劇的にアップレギュレートした（図４Ｂ）。しかし、低酸素に誘発されたＣＡＩＸ発現は、ＣＡＩＸ（ｓｈＣＡＩＸ；図４Ｂ）をターゲットとするｓｈＲＮＡを発現する、２つの独立したクローン（Ｃ２、Ｃ５）中で著しく減じられた。

ＣＡＩＸは、細胞内および細胞外ｐＨの調節を通じて腫瘍ｐＨの制御に機能的に連結される。低酸素に誘発された細胞外のアシドーシスはＣＡＩＸの生物学的活性の指標である。低酸素中の細胞外の媒体の酸性化は、親及びｓｈＮＳ発現する４Ｔ１細胞に呼応して、ｓｈＣＡＩＸを発現する４Ｔ１クローン中で遮断される。このことは、ＣＡＩＸ遺伝子発現を沈黙させること（ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ）が転移性４Ｔ１細胞のｐＨ調節の機能的な抑制を誘発することを示唆している。

ＣＡＩＸを失った４Ｔ１細胞は低酸素で培養されたとき、非サイレンシングコントロール細胞と比較して、増加した細胞死を示した（図５）。これは、ＣＡＩＸが低酸素環境中の転移の乳癌細胞の生存にとって重要であることを示唆する。

実施例５
［生体内検証］
４Ｔ１マウス胸壁腫瘍モデル中のＣＡＩＸの安定した消耗は、図６中で示される様に、原発腫瘍生長及び転移を阻害する。具体的には、４Ｔ１腫瘍モデルを使用する自然発生的な転移の代表的な生物発光の画像が、この発見を実証するために使用される。疑似カラーヒートマップ（明、最も強くはない；暗、最も強い）を階調スケール身体イメージに被せて示す。これらの試験のために、ｓｈＮＳ又はｓｈＣＡＩＸを発現している４Ｔ１細胞及び親の４Ｔ１細胞を、ＢＡＬＢ／ｃマウスの乳腺へ接種した。動物を腫瘍成長のためにモニターした。各群に対してｎ＝１０．結果は平均±ｓ．ｅ．ｍとして表わされる。＊は、対照群からの原発腫瘍切除の完了を示す。＊＊＊ｓｈＮＳ基と比較した、両側スチューデントｔ検定を有するＰ＜１０^−１１。

結果は、ＣＡＩＸに消耗した細胞から確立された腫瘍が最初の腫瘍成長の後に著しく逆行した一方、４Ｔ１細胞が、３０日間しっかりと成長する腫瘍を容易に形成することを示す。（図６Ａ）。試験の終わりごろに、原発腫瘍再発を有する２匹のマウス現われるだけなので、腫瘍の退行は安定しているように見えた（図６Ｂ）。このように、ＣＡＩＸ発現の消滅はマウスの粗生存率の上に劇的効果を有している。ＣＡＩＸを発現する腫瘍を持つ動物は累進的な転移性の疾病のために死ななければならないが、ＣＡＩＸを枯渇させた４Ｔ１細胞を接種した動物の生存率は、１００％のままであった。

ＣＡＩＸ発現は、ＣＡＩＸを枯渇させた４Ｔ１細胞から誘導された腫瘍中でダウンレギュレートされる。このモデル中の腫瘍成長抑制がＣＡＸＩＩが存在する状態で生じており、ＣＡＩＸが低酸素症の胸壁腫瘍の生存および生長については重大な酵素であることを示唆しており、ｓｈＣＡＩＸ４Ｔ１腫瘍及びコントロール腫瘍の間のＣＡＸＩＩの発現レベルで差はない。

実施例６
胸壁腫瘍モデル
４Ｔ１マウス胸壁腫瘍モデル中のＣＡＩＸの安定した消耗は、原発腫瘍生長及び転移を阻害する。図６（Ａ）では、４Ｔ１腫瘍モデルを使用する自然発生的転移が、階調スケールの本体画像に被せた生物発光ヒートマップ（より明るい、最も極度でない；より暗い、最も極度）を使用して視覚化されている。（Ｂ）ｓｈＮＳ又はｓｈＣＡＩＸを発現している４Ｔ１細胞及び親の４Ｔ１細胞を、ＢＡＬＢ／ｃマウスの乳腺へ接種した。１０動物を腫瘍成長のためにモニターした。矢印は、動物数の変化を示す。そして、訂正された値が示されている。結果は平均±ｓ．ｅ．ｍとして表わされる。＊は、対照群からの原発腫瘍切除の完了を示す。＊＊＊ｓｈＮＳ基と比較された両側スチューデントｔ検定を有するＰ＜１０^−１１。

ＣＡＩＸｓｈＲＮＡを持ったヒト乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞株中のＣＡＩＸ消耗は、親及び非サイレンシングコントロール細胞に比べてこれらの細胞中で低酸素症に誘発されたＣＡＩＸ発現の著しい抑制を示す（図７）。さらに、ＣＡＩＸの消耗は、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１異種移植片の腫瘍成長を劇的に減ずる。

図７は、ヒト胸壁腫瘍モデル中のＣＡＩＸの安定した消耗が原発腫瘍生長を阻害するという証拠を示す。ｓｈＮＳまたはｓｈＣＡＩＸを発現するＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞、および親のＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、ＮＯＤ．ＣＢ１７−ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／Ｊマウスの側腹部に皮下接種し、該動物の腫瘍成長をモニターした（各群について、ｎ＝７）。＊＊＊ｓｈＮＳ対照腫瘍と比較された両側のスチューデントｔ検定を有するＰ＜０．０１。図７挿入図におて、ヒトＣＡＩＸ（ｓｈＣＡＩＸ）又は非サイレンシング対照シーケンス（ｓｈＮＳ）をターゲットとするｓｈＲＮＡｍｉｒを発現するＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞は、正常酸素状態（ｎｏｒｍｏｘｉａ：ノルモキシア）または低酸素（ｈｙｐｏｘｉａ：ハイポキシア）において７２時間培養されて、低酸素状態で誘発されたＣＡＩＸ発現が解析された。ウェスタンブロットが示される。β−アクチンはローディング管理の役を務めた。

実施例７
転移モデル
細胞株４Ｔ１は、転移の進行により注射後頑丈な肺転移および被検マウスの内に３週安楽死させなければならなかった型を静脈内で注入した。しかし、転移は、ＣＡＩＸ枯渇細胞で接種されたマウス中で観察されなかった（図８Ａ）。ＣＡＩＸを失った腫瘍細胞は、肺にほとんど目に見える転移を示さず、完全に健康なままである（図８Ｂ）。ネガティブの対照６７ＮＲ細胞（それらは自然な転移ではない）は、細胞が注射後２４時間で肺に濃縮した事実にもかかわらず、注射後３週間の後、転移の証拠をほとんど示さない。

ＣＡＩＸを発現する細胞を注射した動物からの肺の検査は多くの肺表面小結節を示した。一方、ＣＡＩＸを失った細胞を注射したマウスからの肺は本質的に正常であった（図８Ｃ）。ＣＡＩＸの安定した消耗は、４Ｔ１モデル中の肺転移の確立を阻害する。

細胞膜局所的なＣＡＩＸ発現は、ＣＡＩＸが枯渇した細胞を持つマウスではなく、対照動物からの肺の組織学の切片中で明らかであった（図８Ｄ）。

実施例８
ＭＳＴ−０１７（ＣＡＩ１７）の選択性
細胞は、１０μＭのＭＳＴ−０１７の存在下で７２時間培養した。表示された状態で細胞株に結合したＦＩＴＣタグ付きインヒビターの代表的な画像が図９中に示される。（Ｃ）細胞を、ＭＳＴ−０１７（４Ｔ１、６６ｃｌ４および６７ＮＲの細胞についてそれぞれ、４００、６００および４００μＭ）で、又はＭＳＴなしで７２時間培養した。ｎ＝３。細胞外ｐＨ±ｓ．ｅ．ｍの平均的変化が示される。各細胞株にとって、低酸素中の細胞外ｐＨの変化は、酸素正常状態中で育てられたパラレル培養中で測定されたベースライン細胞外ｐＨに関連があると評価された。＊インヒビターなしで培養された細胞と比較された両側のスチューデントｔ検定を有するＰ＜０．００１。

細胞外ｐＨは、ＣＡＩＸを発現する６６ｃｌ４および４Ｔ１転移細胞株中の低酸素において劇的に減少したが、ＣＡＩＸを発現しない６７ＮＲ培養においては変わらなかった。ＭＳＴ−０１７を持った細胞の処置は、６６ｃｌ４及び４Ｔ１細胞培養における低酸素下の細胞外媒体の酸性化を逆転した（図９Ｃ）。

実施例９
スルホンアミド化合物ＭＳＴ−０１７を使用する生体内腫瘍抑制
特有の小分子インヒビターを持った標的化ＣＡＩＸ活性は、４Ｔ１原発腫瘍の生長を減ずる（図１０）。図１０（Ａ）において、４Ｙ１細胞をノルモキシア（正常酸素）またはハイポキシア（低酸素）において培養した。ＣＡＩＸ発現のレベルはウェスタンブロットによって解析した。

動物を４Ｔ１細胞で同所的に接種した。腫瘍を１４日間確立させた。マウスに、２週間にわたり１週当たり３回、ＭＳＴ−０１７の表示された用量を注射した。左側のパネル、腫瘍成長をキャリパに基づいた測定によってモニターした。治療開始および終了を矢印によって示す（図１０Ｂ）。ビヒクルで治療され又は治療されていない動物を、コントロールとして用いた。＊Ｐ＜０．０２、＊＊Ｐ＜０．０１：２−側スチューデントｔ検定を使用し、ビヒクルコントロールと比較して。

治療された動物の体重を一般的なインヒビター毒性の基準としてモニターした。マウスは、ＣＡＩＸインヒビターの各服用の直前に検量した。様々な処置およびコントロールアーム中の体重における有意差は注目されなかった（図１０Ｃ）。

このように、確立した４Ｔ１腫瘍を抱えるマウスのＭＳＴ−０１７での治療は、ビヒクルコントロールと比較して、治療されたマウス中で腫瘍成長の著しい抑制を示した。治療されたマウス中で著しい体重減少が示されなかったので、インヒビター濃度および服薬スケジュールは忍容性が良好であった。

ＭＳＴ−０１７の同一濃度で治療された確立している６７ＮＲ誘導腫瘍を抱えるマウスは、ビヒクル剤コントロールに関するインヒビターの著しい効果を示さず（図１１）、著しい体重減少は観察されなかった。

実施例１０
新規なスルホンアミドＭＳＴ−１０４およびＭＳＴ−１１９での生体内転移抑制
新規なＣＡＩＸインヒビターＭＳＴ−１１９は、４Ｔ１乳房腫瘍細胞による転移形成を減じる。ＣＡＩＸインヒビターＭＳＴ−１１９の化学構造を図１２Ａで示す。４Ｔ１細胞の静脈内注射およびＭＳＴ−１１９での治療に引き続いて確立された転移の代表的な生物発光の画像は、１２Ｂ中に示される。動物は細胞の接種の２４時間後に治療された。３回分を６日間腹腔内注射によって投与した。そして、マウスは、インヒビターの第３の服用量の２４時間後に画像化した。ＭＳＴ−１１９を、３７．５％のＰＥＧ４００、１２．５％のエタノールおよび５０％の食塩水で構成されたビヒクル中で送達した。腫瘍誘導生物発光の定量化を１２Ｃに示す。関心領域を転移の焦点近くで配置した。そして、マウス表面での全フラックス（光子／秒）を計算した。データは平均±ｓ．ｅ．ｍとして報告する。１群当たり、Ｎ＝４。＊Ｐ＜０．０５。

新規なＣＡＩＸインヒビターＭＳＴ−１０４は、４Ｔ１乳房腫瘍細胞による転移形成を減じる（図１３）。４Ｔ１細胞を、ＢＡＬＢ／ｃマウスの尾静脈に直接注射した。５日間の、ビヒクル又はＭＳＴ−１０４での毎日の治療を、細胞の接種後２４時間で開始した。そして、マウスは、最終用量の２４時間後に画像化した。ビヒクル及びインヒビターは腹腔内注射によって投与した。腫瘍細胞誘導した生物発光の代表的な画像がコントロールおよびインヒビターで処置された動物で示される。（Ｂ）グラフは、腫瘍誘発生物発光の定量化を示す。１群当たり、Ｎ＝６。＊Ｐ＜０．０１。生物発光信号の定量化は、治療されたマウス中での転移形成の、統計的に著しい減少を明らかにした。これらのデータは、新規なスルホンアミドを使用して、ＣＡＩＸのターゲットとされた抑制に応じて乳癌細胞による肺転移形成の抑制の更なる実例を提供する。

実施例１１
新規なスルホンアミドによるヒト原発性胸壁腫瘍生長の抑制
新規なＣＡＩＸインヒビターＭＳＴ−１０４は、ヒト原発性乳癌異種移植片の生長を減じる。転移性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１ＬＭ２−４Ｌｕｃ＋細胞を、ＮＯＤ／スキッドマウスへ同所的に移植した。腫瘍が２００ｍｍ３の平均に達したとき、動物に腹腔内投与によってＭＳＴ−１０４の指示された用量を日々与え、そして、腫瘍成長はキャリパー測定を使って定量化した。インヒビター治療の開始および終了を指示する。各群当たり、Ｎ＝８。＊Ｐ＜０．０３、＊＊Ｐ＜０．００１。挿入図、ノルモキシア（酸素正常状態）（Ｎ）およびハイポキシア（低酸素状態）（Ｈ）中で培養されたＬＭ２−４Ｌｕｃ＋細胞によるＣＡＩＸ発現を示すウェスタンブロット。

ＣＡＩＸ活性の薬理学的抑制効果を生体内で評価するために、我々は、確立しているＭＤＡ−２３１ＬＭ２−４腫瘍（Ｅｂｏｓ、２００９年ら）を抱えるマウスをＭＳＴ−１０４で治療した。これらの細胞は、低酸素中のＣＡＩＸを強く誘発することが観察された（図１４、挿入図）。我々は、ビヒクルコントロールと比較して、インヒビターで治療されたマウス中の腫瘍成長の著しく用量依存的な抑制を観察した（図１４）。これらのデータは、スルホンアミドに基づいたＣＡＩＸインヒビターがＣＡＩＸを発現するヒト胸壁腫瘍を特異的にターゲットとする能力を示す。

実施例１２
新規なスルホンアミドによる、低酸素で誘発された浸潤の抑制、および３ＤＭａｔｒｉｇｅｌＴＭ培養中で育成されたヒト乳癌細胞の生存
３ＤＭａｔｒｉｇｅｌＴＭ培養中で育成されたＭＤＡ−ＭＢ−２３１ＬＭ２−４Ｌｕｃ＋細胞は、低酸素において侵襲性である（図１５）。細胞を、酸素正常状態及び低酸素の中で４日間、３Ｄ「オントップ」ＭａｔｒｉｇｅｌＴＭアッセイにおいて、該方法中で記載されているように培養した。３Ｄ培養の代表的な位相コントラスト画像を示す。低酸素は、親のＭＤＡ−２３１細胞ではなくＬＭ２−４変種による浸潤を誘発した。

ＣＡＩＸの新規なスルホンアミドインヒビターでの治療は、３ＤＭａｔｒｉｇｅｌＴＭ培養中で育成されたヒト乳癌細胞の低酸素誘発浸潤を減ずる（図１６）。細胞を、インヒビター存在下において低酸素で４日間、３Ｄ「オントップ」ＭａｔｒｉｇｅｌＴＭアッセイ中で培養した。ＤＭＳＯ処理された細胞培養は、コントロールとして寄与した。ＤＭＳＯのパーセンテージ濃度およびインヒビターのモル濃度を示す。代表的な位相コントラスト画像を示す。これらのデータは、スルホンアミドが低酸素中の転移性ヒト乳癌細胞の浸潤を阻害することを示す。

ＣＡＩＸのウレイドスルホンアミドインヒビターは、低酸素でヒト乳癌細胞の細胞死に特異的効果を示す（図１７）。細胞を、３Ｄ「オントップ」ＭａｔｒｉｇｅｌＴＭアッセイ中で培養した。細胞は低酸素で４日間、インヒビターが存在する状態での生長であった。ＤＭＳＯ処理された細胞培養は、コントロールとして寄与した。（Ａ）上段は、ＴＵＮＥＬポジティブ細胞（矢印）の代表的なイメージ（画像）。（Ｂ）１条件当たり５つのランダム視野を数えることによるＴＵＮＥＬ＋ｖｅ細胞の定量化を示すグラフ。データは、ＴＵＮＥＬポジティブ細胞／２０ｘ視野（ＦＯＶ）の平均数として表現される。これらのデータは、ＣＡＩＸのスルホンアミドインヒビターが、低酸素中でヒト乳癌細胞の死を誘発することができることを示す。

実施例１３
乳癌細胞のＣＡＩＸ発現の遺伝消耗は、低酸素中で癌幹細胞集団を減じる。
血清フリー条件下の懸濁液中での非接着性腫瘍球体としての生体外増殖は、乳癌幹細胞の特徴である。乳癌幹細胞集団は、ＣＤ４４^＋ＣＤ２４^{−／ｌｏｗ}用法指示の表示として以前に特徴付けられた（Ａｌ−Ｈａｊｊｅｔａｌ，（２００３）ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ１００：３９８３−３９８８；Ｐｏｎｔｉｅｔａｌ，（２００５）ＣａｎｃｅｒＲｅｓ６５：５５０６−５５１１）。図１８は、ＣＡＩＸ発現が「腫瘍球体」が惹起する集団生長及び低酸素中での腫瘍球体形成の効率に対して必要であることを示す。（Ａ）４Ｔ１ｓｈＮＳおよびｓｈＣＡＩＸ細胞を倍加希釈で接種し、酸素正常状態または低酸素中の腫瘍球体生成条件下で培養した。腫瘍球体生長を惹起するのに必要な細胞数を評価した。３つの独立した実験の平均±ＳＥＭを示す。＊Ｐ＜０．０３，＊＊Ｐ＜０．００６。（Ｂ）４Ｔ１ｓｈＮＳおよびｓｈＣＡＩＸ細胞を酸素正常状態または低酸素中の腫瘍球体として培養し、分解し、そして、ＣＤ４４＋ＣＤ２４−／ｌｏｗ集団をＦＡＣＳ分析によって評価した。示されたデータは、３つの独立した実験から、％ＣＤ４４＋ＣＤ２４−／ｌｏｗ細胞±ＳＥＭの平均の変化である。＊Ｐ＜０．００４，＊＊Ｐ＜０．０２５。

ＣＩＡＸが正常な酸素レベルでいずれかの細胞株中で誘発されないので、腫瘍球体を形成するのに必要な細胞数中の有意差は酸素正常状態中の４Ｔ１ｓｈＮＳ及びｓｈＣＡＩＸの間で観察されなかった（図１８Ａ）。腫瘍球体を形成するのに必要な４Ｔ１−ｓｈＮＳ細胞の数は、酸素正常状態コントロールと比較して、低酸素中で顕著に減少し、癌幹細胞（ＣＳＣ）の割合が低酸素中での培養において著しく高いことを示唆している（図１８Ａ）。重要なことは、ＣＩＡＸ発現のＲＮＡｉを媒介としたノックダウンは、低酸素中の腫瘍球体を形成するのに必要な種を生ずる細胞数を著しく増加させた。このことは、そのＣＡＩＸ発現が、ｓｈＮＳ−４Ｔ１コントロール細胞で低酸素中において観察されたＣＳＣ類似の展開に対して必要であることを示している。

図１８Ｂ中で、４Ｔ１ｓｈＮＳおよびｓｈＣＡＩＸ細胞は酸素正常状態または低酸素中において腫瘍球体生成条件下で培養されて、ＣＤ４４＋ＣＤ２４−／ｌｏｗとして分類された推定上のＣＳＣ類似の集団を定量化するためにＦＡＣＳによって解析した。ｓｈＮＳコントロール中で、ＣＤ４４＋ＣＤ２４−／ｌｏｗ集団は、酸素正常状態のコントロールと比較して、低酸素下の培養状態中で著しく増加する（図１８Ｂ）。しかしながら、ＣＡＩＸのＲＮＡｉを媒介としたノックダウンは、著しく低酸素中のこの集団を枯渇させる、このことは、低酸素中のＣＤ４４＋ＣＤ２４−／ｌｏｗのＣＳＣ類似の展開に対してＣＡＩＸが必要なことを示している（図１８Ｂ）。

実施例１４
ＭＳＴ−１０４は、同所性のヒト胸壁腫瘍中の癌幹細胞集団を生体内で枯渇させることができる。
図１９は、ＣＡＩＸインヒビターＭＳＴ−１０４によるヒト原発性乳癌異種移植片の治療が、癌幹細胞集団を生体内でターゲットとすることを示す。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１ＬＭ２−４Ｌｕｃ＋を、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスへ同所的に移植した。腫瘍が平均２００ｍｍ２に達したとき、動物に腹腔内注射によって、３８ｍｇ／ｋｇのＭＳＴ−１０４又はビヒクルを日々投入した。（Ａ）原発腫瘍を分離し、除去し、そして、ＥＳＡ＋細胞集団をＦＡＣＳ分析によって評価した。ＥＳＡ＋細胞の割合を実証する代表的なＦＡＣＳプロットを示す。（Ｂ）示されたデータは、３匹のマウスから、ＥＳＡ＋細胞±ＳＥＭの平均変化である。＊＊Ｐ＜０．０２２４。

ビヒクルに治療された腫瘍は平均１０％のＥＳＡ＋細胞集団を含有していた。それに比べて、スルホンアミドＣＡＩＸインヒビターＭＳＴ−１０４で治療された腫瘍は、ビヒクルに治療されたコントロール腫瘍と比較して著しく減少したＥＳＡ＋細胞集団を示した。これらのデータは、スルホンアミドがヒト乳癌幹細胞集団を生体内で枯渇させることができることを示す。

本発明特有の実施態様が記述され示された一方、そのような実施態様は、同伴する請求項に従って解釈されるような本発明の制限としてではなく、本発明の例証のみとなると考えられるべきである。

Claims

薬学的に受容可能なビヒクル、および4-{[(4'-フルオロフェニル)カルバモイル]アミノ}ベンゼンスルホンアミド(MST-104)または4-{[(3'-ニトロフェニル)カルバモイル]アミノ}ベンゼンスルホンアミド(MST-119)を含んでなる、腫瘍を治療するための医薬組成物。
哺乳動物中での腫瘍成長を抑制するための請求項1に記載の医薬組成物。
哺乳動物中での腫瘍転移を抑制するための請求項1に記載の医薬組成物。
哺乳動物中での乳癌細胞の数又は質量を減少させるための請求項1に記載の医薬組成物。
哺乳動物の哺乳類癌幹細胞集団中の癌幹細胞を激減させるための請求項1に記載の医薬組成物。
哺乳動物の低酸素症癌細胞の細胞死を誘発するための請求項1に記載の医薬組成物。
1つ以上の追加的な抗癌剤をさらに含む、請求項2に記載の医薬組成物。
1つ以上の追加的な抗癌剤をさらに含む、請求項3に記載の医薬組成物。
1つ以上の抗癌剤をさらに含む、請求項4に記載の医薬組成物。
1つ以上の抗癌剤をさらに含む、請求項5に記載の医薬組成物。
1つ以上の抗癌剤をさらに含む、請求項6に記載の医薬組成物。
腫瘍がCAIXを過剰に発現する、請求項2または3に記載の医薬組成物。
腫瘍がCAXIIを過剰に発現する、請求項2または3に記載の医薬組成物。
腫瘍が乳癌である、請求項2または3に記載の医薬組成物。
癌が哺乳動物の胸組織に起因する、請求項4-6のいずれか1つに記載の医薬組成物。
哺乳動物がヒトである、請求項2-15のいずれか1つに記載の医薬組成物。
腫瘍が、乳癌、肺癌、膵癌、腎癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頚部癌、膠芽腫および結腸直腸癌から選ばれる請求項1-3および7-13のいずれか1つに記載の医薬組成物。
哺乳動物中の腫瘍および転移の治療用医薬の製造のための、4-{[(4'-フルオロフェニル)カルバモイル]アミノ}ベンゼンスルホンアミド(MST-104)または4-{[(3'-ニトロフェニル)カルバモイル]アミノ}ベンゼンスルホンアミド(MST-119)の使用。
哺乳動物がヒトである、請求項18に記載の使用。
生体外で、CAI及びCAIIの活性を抑制するより大きい程度に腫瘍関連CAIXの活性を抑制するための医薬の製造における、4-{[(4'-フルオロフェニル)カルバモイル]アミノ}ベンゼンスルホンアミド(MST-104)または4-{[(3'-ニトロフェニル)カルバモイル]アミノ}ベンゼンスルホンアミド(MST-119)の使用。
生体外で、CAI及びCAIIの活性を抑制するより大きい程度に腫瘍関連CAXIIの活性を抑制するための医薬の製造における、4-{[(4'-フルオロフェニル)カルバモイル]アミノ}ベンゼンスルホンアミド(MST-104)または4-{[(3'-ニトロフェニル)カルバモイル]アミノ}ベンゼンスルホンアミド(MST-119)の使用。