JP5905006B2 - 体細胞の人工リプログラミング神経幹細胞(irNSC)への変換 - Google Patents
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Description
a)体細胞を提供する段階、
b)少なくとも2種の遺伝子を導入することにより、該体細胞を神経幹細胞へリプログラミングする段階、ならびに
c)増殖因子および低分子で、リプログラミングのために誘導する段階。
d)神経幹細胞の増殖に適する条件下で、段階b)およびc)の産物をインキュベーションする段階
をさらに含む。典型的に、段階b)およびc)の産物は、ニューロスフェアとして細胞培養において容易に同定することができる。好ましくは、神経幹細胞の増殖に適する該条件は、該ニューロスフェアの収集、および化学的に定義された培地におけるそれらの拡大を含む。好ましくは、該培地は拡大培地であり、かつ、ニューロスフェアを非接着性培養条件において培養する。拡大培地の非限定的な例を、下記にさらに記載する。
[本発明1001]
以下の段階を含む、神経幹細胞(NSC)を産生する方法:
a)体細胞を提供する段階、
b)Bmi1、Sox2、Mash 1、Sox11、Emx2、Foxg1、およびPax6の群より選択される少なくとも2種の遺伝子を導入することにより、該体細胞をNSCへリプログラミングする段階;ならびに
c)増殖因子および低分子を用いてリプログラミングのために誘導する段階。
[本発明1002]
d)NSCの増殖に適する条件下で、段階b)およびc)の産物をインキュベーションする段階
をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1003]
段階a)の体細胞が、ヒト細胞である、本発明1001または1002のいずれかの方法。
[本発明1004]
段階a)の体細胞が、繊維芽細胞、ケラチン生成細胞、および脂肪細胞の群より選択される、本発明1001〜1003のいずれかの方法。
[本発明1005]
段階c)の増殖因子および低分子が、化学的に定義された培地の補給物である、本発明1001〜1004のいずれかの方法。
[本発明1006]
化学的に定義された培地が、インスリン、トランスフェリン、およびプロゲステロンを補給した無血清培地である、本発明1005の方法。
[本発明1007]
段階b)の少なくとも2種の遺伝子が、Bmi1およびSox2を含む、本発明1001〜1006のいずれかの方法。
[本発明1008]
段階b)の少なくとも2種の遺伝子が、Mash1、Sox11、Emx2、Foxg1、およびPax6の群より選択される少なくとも1種の遺伝子をさらに含む、本発明1007の方法。
[本発明1009]
段階b)の少なくとも2種の遺伝子が、Bmi、Sox2、およびMash1を含む、本発明1007または1008の方法。
[本発明1010]
段階c)の増殖因子が、FGF2、EGF、およびBDNFの群より選択される、本発明1001〜1009のいずれかの方法。
[本発明1011]
段階c)の低分子が、ROCK阻害剤を含む、本発明1001〜1010のいずれかの方法。
[本発明1012]
ROCK阻害剤が、1-(5-イソキノリンスルホニル)ホモピペラジン、N-ベンジル-2-(ピリミジン-4-イルアミノ)チアゾール-4-カルボキサミド、(+)-(R)-トランス-4-(1-アミノエチル)-N-(4-ピリジル)シクロ-ヘキサンカルボキサミドジヒドロクロリド、およびN-{(3R,4R)-4-[4-(2-フルオロ-6-ヒドロキシ-3-メトキシ-ベンゾイル)-ベンゾイルアミノ]-アゼパン-3-イル}-4-ヒドロキシ-3,5-ジメチル-ベンズアミドの群より選択される、本発明1011の方法。
[本発明1013]
体細胞が、ヒストンデアセチラーゼ(HDAC)阻害剤で前処理される、本発明1001〜1012のいずれかの方法。
[本発明1014]
体細胞のリプログラミングが、レンチウイルスによる少なくとも2種の遺伝子の組み合わせの送達を通して達成される、本発明1001〜1013のいずれかの方法。
[本発明1015]
本発明1001〜1014のいずれかの方法により取得された、神経幹細胞。
[本発明1016]
CNS疾患用のインビトロのモデルとしての、本発明1015の神経幹細胞の使用。
[本発明1017]
本発明1015の神経幹細胞を含む、治療用組成物。
[本発明1018]
神経幹細胞が、ニューロンまたはグリア細胞に分化する、本発明1017の治療用組成物。
[本発明1019]
本発明1001〜1014のいずれかの方法により取得されたNSCの、バイオバンク。
[本発明1020]
本質的に本明細書において記載されるような、方法および使用。
細胞培養:
誘導培地:ヒトEGF(Peprotech)30 ng/ml、ヒトFGF2 30ng/ml(Peprotech)、ヒトBDNF(Roche)20 ng/ml、およびファスジル(Calbiochem)10μMまたはバラノール様324化合物(N-{(3R,4R)-4-[4-(2-フルオロ-6-ヒドロキシ-3-メトキシ-ベンゾイル)-ベンゾイルアミノ]-アゼパン-3-イル}-4-ヒドロキシ-3,5-ジメチル-ベンズアミド)2μMを補給したN2B27(N2B27は、N2およびB27(両方ともGibco由来)を補給したDMEM/F12(Gibco, Paisley, UK)の1:1混合物である)。
FGF、EGF、BDNF 20 ng/ml;ヘパリン2μg/ml;バラノール様324 2μM;アスコルビン酸0.2mM、SHH(組み換えヒトソニック・ヘッジホッグ、カタログ番号:1845SH)500ng/ml、FGF8(組み換えヒトFGF8aアイソフォーム、カタログ番号:4745F8)100ng/ml、DLL4(組み換えヒトDLL4、カタログ番号:1506D4)500ng/ml、Jagged1(組み換えヒトJagged 1 Fcキメラ、カタログ番号:1277JG)500ng/mlを含むNeuroCult(登録商標)NS-A Proliferation Kit(ヒト、StemCells Technologies)。
1.irNSCの生成:
・200.000個のIMR90ヒト繊維芽細胞に、ポリブレン(ヘキサジメトリンブロミド、Sigma)4μg/mlを含む300μl誘導培地を有するエッペンドルフにおいて、様々な遺伝子の組み合わせについてのレンチウイルス(各単一のレンチウイルスについて30の感染多重度(M.O.I)を使用する)およびレポーターネスチンGFPレンチウイルス(10のM.O.Iを使用する)を感染させる。
・室温で15分間インキュベーションする。
・組織用処理された6ウェルプレートのウェル中の1.7 ml誘導培地に、300μlをプレーティングする。
・1日目、2 mlの誘導培地/各ウェルを更新する。
・3日目、浮遊性スフェアと共に2 mlを注意深く回収し、ニューロスフェアを収集する。
・ニューロスフェアを拡大する。
・6ウェルプレートの3ウェルから15mlチューブに、浮遊性ニューロスフェアと共に培地を回収する。
・スフェアを10分間沈降させる。
・上清を非常に注意深く除去する(単一の細胞は沈降しないはずであり、上清と共に吸引する)。
・スフェアを4 ml最終容積の拡大培地に再懸濁する。
・超低接着性プレートのB6プレート(Corning)にプレーティングする。
・2〜3日インキュベーションする。
・irNSCの生成から14日目まで、2〜3日毎に拡大手順を反復する。
・irNSCの生成および拡大手順後の14日目に、明白な境界を有しかつirNSC GFP+に富む丸いニューロスフェアを、実体顕微鏡の下で選択する。
・ファスジル10μMまたはバラノール様324化合物2μMを添加した拡大培地を用いて、ポリオルニチン/ラミニンであらかじめコーティングした24ウェルプレートのウェルに40個のスフェアをプレーティングする。
・翌日、ファスジル/バラノール様324化合物2μMを含まない拡大培地に更新する。
・3日間インキュベーションする。
・拡大培地を除去し、分化培地を添加する。
・3〜4日後に分化培地を更新する。
・3〜4日間インキュベーションする。
・細胞をPFA 4%で固定し、免疫染色を行う。
15日目のニューロスフェアを、以下の抗体で特徴決定のために染色した:マウスネスチンおよびウサギSox2でO/N、ならびにその後、二次抗体である抗マウス488および抗ウサギ555で1時間。
一次抗体:
ネスチンマウス、モノクローナル、1/500希釈(MAB5326 Millipore)
Sox2ウサギ、ポリクローナル、1/500希釈(AB5603MI Millipore)
二次抗体:
Alexa fluor 488、IgG、1/1000希釈、ヤギ抗マウス(A11029 Invitrogen)
Alexa fluor 555、IgG、1/1000希釈、ヤギ抗ウサギ(A21429 Invitrogen)
Claims (15)
- 以下の段階を含む、神経幹細胞(NSC)を産生するインビトロの方法:
a) 繊維芽細胞、ケラチン生成細胞、および脂肪細胞の群より選択される哺乳動物体細胞を提供する段階、ならびに
b) Bmi1およびSox2の群より選択される少なくとも2種の遺伝子を該体細胞に導入し、FGF2、EGF、およびBDNFならびに低分子のROCK阻害剤を含む培地中で該体細胞を培養することにより、該体細胞をNSCへリプログラミングする段階。 - c) NSCの増殖に適する条件下で、段階b)の産物をインキュベーションする段階
をさらに含む、請求項1記載の方法。 - 段階a)の哺乳動物体細胞が、ヒト細胞である、請求項1または2のいずれか一項記載の方法。
- 段階b)の増殖因子および低分子が、化学的に定義された培地の補給物である、請求項1〜3のいずれか一項記載の方法。
- 化学的に定義された培地が、インスリン、トランスフェリン、およびプロゲステロンを補給した無血清培地である、請求項4記載の方法。
- 段階b)の少なくとも2種の遺伝子が、Mash1、Sox11、Emx2、Foxg1、およびPax6の群より選択される少なくとも1種の遺伝子をさらに含む、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
- 段階b)の少なくとも1種のさらなる遺伝子がMash1である、請求項6記載の方法。
- ROCK阻害剤が、1-(5-イソキノリンスルホニル)ホモピペラジン、N-ベンジル-2-(ピリミジン-4-イルアミノ)チアゾール-4-カルボキサミド、(+)-(R)-トランス-4-(1-アミノエチル)-N-(4-ピリジル)シクロ-ヘキサンカルボキサミドジヒドロクロリド、およびN-{(3R,4R)-4-[4-(2-フルオロ-6-ヒドロキシ-3-メトキシ-ベンゾイル)-ベンゾイルアミノ]-アゼパン-3-イル}-4-ヒドロキシ-3,5-ジメチル-ベンズアミドの群より選択される、請求項1〜7のいずれか一項記載の方法。
- 体細胞が、ヒストンデアセチラーゼ(HDAC)阻害剤で前処理される、請求項1〜8のいずれか一項記載の方法。
- Bmi1およびSox2を含む該少なくとも2種の遺伝子が、レンチウイルスによって該体細胞に送達される、請求項1〜9のいずれか一項記載の方法。
- 請求項1〜10のいずれか一項記載の方法により取得された、患者特異的な神経幹細胞。
- CNS疾患用のインビトロのモデルとしての、請求項11記載の神経幹細胞の使用。
- 請求項11記載の神経幹細胞を含む、治療用組成物。
- 神経幹細胞が、ニューロンまたはグリア細胞に分化する、請求項13記載の治療用組成物。
- 請求項1〜10のいずれか一項記載の方法により、患者またはいくつかのHLA型を有する健康な個体から取得された、患者特異的な神経幹細胞を含む、バイオバンク。
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KR20140121317A (ko) * | 2013-04-06 | 2014-10-15 | 서울대학교산학협력단 | 비신경 세포로부터 유도 신경 줄기 세포의 생산 방법 및 이에 의하여 생산되는 유도 신경 줄기 세포 |
WO2015011031A1 (en) * | 2013-07-23 | 2015-01-29 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Small molecule based conversion of somatic cells into neural crest cells |
CN104342401B (zh) * | 2013-07-25 | 2017-04-05 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | 利用确定的细胞因子组合促进成纤维细胞转分化为脂肪细胞 |
KR102113829B1 (ko) | 2013-10-25 | 2020-05-25 | 웨인 스테이트 유니버시티 | 단백질-유도 생체내 세포 재프로그래밍을 통한 세포 전환 방법, 시스템 및 조성물 |
JP6478116B2 (ja) | 2013-12-25 | 2019-03-06 | 東亞合成株式会社 | 多能性幹細胞から内胚葉系細胞への分化誘導方法 |
CN104894060B (zh) * | 2014-03-03 | 2018-11-06 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 诱导体细胞转分化为神经干细胞的方法及其应用 |
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US20180051249A1 (en) * | 2015-03-04 | 2018-02-22 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Methods for making neural stem cells and uses thereof |
US11027047B2 (en) | 2015-03-31 | 2021-06-08 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Delivery vehicles for stem cells and uses thereof |
JP6691756B2 (ja) | 2015-09-29 | 2020-05-13 | 東亞合成株式会社 | 合成ペプチドを用いた神経幹細胞の生産方法 |
RS61529B9 (sr) * | 2015-11-12 | 2024-04-30 | Hoffmann La Roche | Oligonukleotidi za indukovanje ekspresije paternalnog ube3a |
WO2017170180A1 (ja) * | 2016-03-31 | 2017-10-05 | 味の素株式会社 | 神経分化能を亢進させる神経幹細胞用培地 |
KR102311121B1 (ko) | 2016-04-20 | 2021-10-13 | 교토후고리츠다이가쿠호진 | 배양 상피 시트의 제조 방법 |
EP3807402A4 (en) * | 2018-06-14 | 2022-04-27 | Academia Sinica | METHOD FOR GENERATE INDUCED OLIGODENDROCYTE LINEAGE CELLS AND TREATMENT USING SUCH CELLS |
CN112567022A (zh) | 2018-08-21 | 2021-03-26 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于评定跨内皮屏障完整性的方法 |
AU2020453143A1 (en) * | 2020-06-09 | 2023-02-09 | Unist(Ulsan National Institute Of Science And Technology) | Composition for inducing direct cross differentiation of somatic cell into motor neuron, and method for using same |
WO2022072325A1 (en) * | 2020-09-29 | 2022-04-07 | NeuExcell Therapeutics Inc. | Neurod1 combination vector |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5968829A (en) * | 1997-09-05 | 1999-10-19 | Cytotherapeutics, Inc. | Human CNS neural stem cells |
WO2003039489A2 (en) * | 2001-11-09 | 2003-05-15 | Artecel Sciences, Inc. | Endocrine pancreas differentiation of adipose tissue-derived stromal cells and uses thereof |
EP1516926A4 (en) * | 2002-06-24 | 2006-10-11 | Tanabe Seiyaku Co | PROCESS FOR THE PRODUCTION OF NERVOUS CELLS |
US7682828B2 (en) | 2003-11-26 | 2010-03-23 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Methods for reprogramming somatic cells |
US9845344B2 (en) * | 2004-03-30 | 2017-12-19 | Hoba Therapeutics Aps | Therapeutic use of a growth factor, NsG33 |
GB0410011D0 (en) * | 2004-05-05 | 2004-06-09 | Novartis Forschungsstiftung | Neural cell differentiation method |
US8278104B2 (en) * | 2005-12-13 | 2012-10-02 | Kyoto University | Induced pluripotent stem cells produced with Oct3/4, Klf4 and Sox2 |
US20100021437A1 (en) * | 2008-04-07 | 2010-01-28 | The McLean Hospital Corporation Whitehead Institute for Biomedical Research | Neural stem cells derived from induced pluripotent stem cells |
JP2011521639A (ja) | 2008-08-12 | 2011-07-28 | インダストリー‐アカデミック・コオペレイション・ファウンデイション,ヨンセイ・ユニバーシティ | ヒト神経幹細胞及びこれを利用した中枢または末梢神経系疾患及び損傷治療用薬学的組成物 |
GB0902034D0 (en) * | 2009-02-06 | 2009-03-11 | Reneuron Ltd | Method |
WO2012022725A2 (en) | 2010-08-19 | 2012-02-23 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Conversion of somatic cells to induced reprogrammed neural stem cells (irnscs) |
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