JP5904940B2 - 核酸増幅反応中の反応溶液の蒸発を防止するための組成物 - Google Patents
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Description
さらにまた、本発明は、検体からの核酸抽出及び増幅、検出を連続的に行う装置を提供することも目的とする。
(2)核酸増幅反応中の核酸増幅反応溶液の蒸発を防止するための組成物であって、融点が0-15℃である前記組成物。
(3)核酸増幅反応中の核酸増幅反応溶液の蒸発を防止するための組成物であって、融点が5-10℃である前記組成物。
(4)(1)から(3)のいずれかに記載の組成物を、核酸増幅反応溶液の上層に積層させる工程を含む核酸増幅方法。
(5)核酸増幅反応終了後に、(1)から(3)のいずれかに記載の組成物を固化させる工程を含む核酸増幅方法。
(6)核酸増幅の方法であって、核酸増幅反応容器中における反応溶液の蒸発を防止するための組成物の空気との界面形状が、水平又は、上に凸となる反応容器と反応溶液の蒸発を防止するための組成物の組み合わせを用いる前記方法。
(7)核酸増幅の方法であって、反応容器内壁のぬれ張力が反応溶液の蒸発を防止するための組成物の表面張力より小さい反応容器と反応溶液の蒸発を防止するための組成物の組み合わせを用いる前記方法。
(8)核酸増幅の方法であって、反応容器内壁のぬれ張力が反応溶液の蒸発を防止するための組成物の表面張力の80%より小さい反応容器と反応溶液の蒸発を防止するための組成物の組み合わせを用いる前記方法。
(9)反応溶液の蒸発を防止するための組成物を収容する核酸増幅用のプレパック試薬であって、(1)から(3)のいずれかに記載の反応溶液の蒸発を防止するための組成物を含む前記試薬。
(10)反応溶液の蒸発を防止するための組成物と反応容器を収容する核酸増幅用のプレパック試薬であって、反応容器と反応溶液の蒸発を防止するための組成物の組み合わせが、(6)から(8)のいずれかに記載の組み合わせである前記試薬。
(11)検体からの核酸抽出及び増幅、検出を連続的に行う装置であって、増幅及び検出工程に於いて、核酸反応溶液が蒸発を防止するための組成物により密閉され、該組成物を介して光学的に核酸の増幅を検出することができる、前記装置。
(12)検体からの核酸抽出及び増幅、検出を連続的に行う装置であって、増幅及び検出工程に於いて、核酸反応溶液が蒸発を防止するための組成物により密閉され、反応終了後、該組成物を固化させ、反応溶液の漏洩・飛散等を防止することのできる、前記装置。
(13)検体からの核酸抽出及び増幅、検出を連続的に行う装置であって、(1)から(3)のいずれかに記載の反応溶液の蒸発を防止するための組成物により、反応溶液の蒸発を防止することができる、前記装置。
(14)検体からの核酸抽出及び増幅、検出を連続的に行う装置であって、反応容器と反応溶液の蒸発を防止するための組成物の組み合わせとして、請求項6から8のいずれかに記載の組み合わせで用いることができる、前記装置。
(15)検体からの核酸抽出及び増幅、検出を連続的に行う装置であって、(9)又は(10)記載のプレパック試薬を収容できる、前記装置。
本明細書は、本願の優先権の基礎である日本国特許出願、特願2010‐141510の明細書および/または図面に記載される内容を包含する。
本発明の組成物は、容器中の核酸増幅反応液が空気と接触する面を完全に覆うだけの量を添加すればよく、好ましくは、容器中の核酸増幅反応液が空気と接触する面を完全に覆うだけの最低量の1.1から3倍、より好ましくは、1.5から2倍の量、添加すると良い。
・反応容器内壁のぬれ張力が反応溶液の蒸発を防止するための組成物の表面張力より小さい反応容器と反応溶液の蒸発を防止するための組成物の組み合わせ。
・反応容器内壁のぬれ張力が反応溶液の蒸発を防止するための組成物の表面張力の80%より小さい反応容器と反応溶液の蒸発を防止するための組成物の組み合わせ。
核酸増幅反応容器中における反応溶液の蒸発を防止するための組成物の空気との界面形状が、水平又は上に凸となる反応容器と反応溶液の蒸発を防止するための組成物の組み合わせの例としては、株式会社フロロテクノロジー社製フッ素系コーティング剤FS−1010によって内壁を表面コーティングされた、ロッシュ社製PCRチューブ及び、アプライドバイオシステム社製ミネラルオイルなどを挙げることができる。
(2) 核酸増幅反応中の核酸増幅反応溶液の蒸発を防止するための組成物であって、融点が0-15℃である前記組成物。
(3) 核酸増幅反応中の核酸増幅反応溶液の蒸発を防止するための組成物であって、融点が5-10℃である前記組成物。
(1b) 反応容器内壁のぬれ張力が反応溶液の蒸発を防止するための組成物の表面張力より小さい反応容器と反応溶液の蒸発を防止するための組成物の組み合わせ。
(1c) 反応容器内壁のぬれ張力が反応溶液の蒸発を防止するための組成物の表面張力の80%より小さい反応容器と反応溶液の蒸発を防止するための組成物の組み合わせ。
ータ109は磁力手段79に相当する。
1.蒸発防止用オイル(低温凝固タイプ)の調製
60−80℃で加熱融解させた、所望量(0.5, 0.75, 1.00, 1.25又は1.50 g)の固体パラフィン(パラフィン和光特級、mp: 44-46℃)を液状パラフィン(流動パラフィン、シグマ特級)10.00 gと混合して、蒸発防止用オイルを調製した。以下の実験には、この蒸発防止用オイルをサンプルとして用いた。
・水に不溶である(完全分離)。
・液相比重が水より小さい。
・核酸増幅反応への阻害がない。
・液相(単体)の分光透過率(520nm、 25℃)が90 %以上である。
・蛍光(特に、検出光波長周辺)がない。
・特殊な廃棄の必要がない。
2−1.目視による透明化(白濁化)の確認及び、スパチュラ等の接触による凝固の確認
1で調整した、低温凝固タイプの蒸発防止用オイルの融点(凝固点)を以下の方法で定量した。
・上記試料容器を、その外形に適合するヒートブロックに装着し、アズワン社製恒温装置上で温度調節をした。
・60から5℃ずつ温度を低下させ、各温度域での試料の性状を目視及び、スパチュラ等の接触により評価した。
核酸増幅反応中に反応液の蒸発を防止するためのミネラルオイルの、反応容器内壁へのぬれ性が蛍光検出の及ぼす影響を検証するため、以下の実験を行った。
ロッシュ社製白色PCRチューブの内壁を、撥水撥油処理剤(株式会社フロロテクノロジー)でコーティングすることにより(膜厚1μm以下)、容器内壁のぬれ張力を低下させる処理をおこなった。未処理のものと併せ、容器内壁のぬれ張力の異なる2種類の核酸増幅反応容器を調整した。JISK6768に規定された方法に準じて、この2種の反応容器に対するミネラルオイル(アプライドバイオシステム社製)のぬれを評価したところ、未処理容器に大しては、ミネラルオイルがぬれ広がったのに対し、処理品の内壁は、ミネラルオイルをはじく事が確認できた。
1で調整した2種の反応容器中に、0.5uMの蛍光物質(FAM)を含む水溶液(蛍光水溶液)20uLを注入し、円形開口部内の蛍光強度分布を測定した。蛍光検出は、励起480nm、検出520 nmを同軸で行う光ファイバーで行い、この光ファイバーは反応容器の円形開口部の中心通り、開口部を横断するようなx軸に沿って走査した。ついで、この反応容器に、ミネラルオイル(アプライドバイオシステム社製)を20uL注入し、同様の蛍光測定を行った。結果を図16−1に示す。
1で調整した低ぬれ張力の容器について、2と同様の計測を行った結果を図16−2に示す。反応容器開口部面内の蛍光強度分布は、ミネラルオイル注入によっても大きな変化は無く、未処理品に見られた、有効領域の減少は認められなかった。
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
2:反応溶液
3:油性成分
4:コーティング
10、70、80、180、280
検体検査装置
14、84、184、284、384 検査カートリッジ容器
15、85、185、285 ノズルヘッド
17、77、177、277 光測定部
24、94、224 シール
25、125、225 分注チップ
26、226 担体封入チップ(固相内蔵チップ)
28、228 デジタル・カメラ
30、100、200、230 ノズル
92、192 蓋
Claims (11)
- 核酸増幅及び光学的検出の方法であって、核酸増幅反応容器中における反応溶液の蒸発を防止するための組成物と、前記組成物の空気との界面形状が水平となる反応容器との組み合わせを用いる前記方法。
- 核酸増幅及び光学的検出の方法であって、反応溶液の蒸発を防止するための組成物と、反応容器内壁のぬれ張力が前記組成物の表面張力より小さい反応容器との組み合わせを用いる前記方法。
- 核酸増幅及び光学的検出の方法であって、反応溶液の蒸発を防止するための組成物と、反応容器内壁のぬれ張力が前記組成物の表面張力の80%より小さい反応容器との組み合わせを用いる前記方法。
- 核酸増幅反応中の核酸増幅反応溶液の蒸発を防止するための組成物が、核酸増幅反応中は液体であり、反応終了後、温度変化により固体となる、融点が反応温度以下の組成物である請求項1〜3のいずれかに記載の方法。
- 核酸増幅反応中の核酸増幅反応溶液の蒸発を防止するための組成物の融点が0-15℃である請求項4記載の方法。
- 核酸増幅反応中の核酸増幅反応溶液の蒸発を防止するための組成物の融点が5-10℃である請求項5記載の方法。
- 反応溶液の蒸発を防止するための組成物と反応容器を収容する核酸増幅及び光学的検出用のプレパック試薬であって、反応容器と反応溶液の蒸発を防止するための組成物の組み合わせが、請求項1〜3のいずれかに記載の組み合わせである前記試薬。
- 検体からの核酸抽出及び増幅、光学的検出を連続的に行う装置であって、反応容器と反応溶液の蒸発を防止するための組成物の組み合わせとして、請求項1〜3のいずれかに記載の組み合わせで用いることができる、前記装置。
- 検体からの核酸抽出及び増幅、光学的検出を連続的に行う装置であって、請求項7記載のプレパック試薬を収容できる、前記装置。
- 増幅及び光学的検出工程に於いて、核酸反応溶液が蒸発を防止するための組成物により密閉され、該組成物を介して光学的に核酸の増幅を検出することができる、請求項8又は9記載の装置。
- 増幅及び光学的検出工程に於いて、核酸反応溶液が蒸発を防止するための組成物により密閉され、反応終了後、該組成物を固化させ、反応溶液の漏洩・飛散を防止することのできる、請求項8〜10のいずれかに記載の装置。
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