JP5833711B2 - 肝カルボキシルエステラーゼ1を含有する肝癌診断用血漿バイオマーカー及び肝癌スクリニング方法 - Google Patents
肝カルボキシルエステラーゼ1を含有する肝癌診断用血漿バイオマーカー及び肝癌スクリニング方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5833711B2 JP5833711B2 JP2014137810A JP2014137810A JP5833711B2 JP 5833711 B2 JP5833711 B2 JP 5833711B2 JP 2014137810 A JP2014137810 A JP 2014137810A JP 2014137810 A JP2014137810 A JP 2014137810A JP 5833711 B2 JP5833711 B2 JP 5833711B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hce1
- liver cancer
- plasma
- protein
- liver
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/916—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. phosphatases (3.1.3), phospholipases C or phospholipases D (3.1.4)
- G01N2333/918—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oncology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
2)抗−ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1抗体400μgと電磁ビーズ10mgを結合させた後、それらのうち500μgを取って、健常者又は肝癌患者の血漿8mgと一緒に1mLチューブで2時間培養してヒト肝カルボキシルエステラーゼ1を免疫沈降させた後、これを残りの血漿タンパク質から分離する。
3)第2段階で分離した健常者と肝癌患者のそれぞれの試料液を、溶解緩衝溶液でタンパク質変形させた後、1次元ゲル電気泳動で分離する。
4)約62kDa位置のゲルバンドを切り取り、トリプシンを用いてタンパク質をペプチドに消化する。
5)高感度のナノ液体クロマトグラフィーを使用して消化されたペプチドを分析して、ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1タンパク質を確認する(図6及び図7参照)。
2)上記ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1の存在確認方法第1及び第2段階のように血漿サンプルを免疫沈降させて、ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1の溶液を得る。
3)抗−ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1抗体を利用する免疫ブロティングで、ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1のシグナルを確認する。
4)健常者の血漿より肝癌患者の血漿がヒト肝カルボキシルエステラーゼ1のシグナルが高いことを確認する(図8及び図9参照)。
病理学的に患者の個別情報が確保された肝癌組織と、同一患者から分取された正常肝組織は、延世医科大学病理学研究室から提供された。陰性コントロールとして用いるため健常者の血漿の適切性を評価するために以下の検査を用いた;肝癌指標標準検査要素である免疫欠乏ウイルス(HIV)来由のHIV−1及びHIV−2抗体;HIV−1抗原;B型肝炎表面抗原;B型肝炎核抗原;C型肝炎ウイルス;T細胞白血病ウイルス(HTLV−I/II)抗原;及び梅毒トレポネーマ。血漿を世界人間プロテオーム機構(HUPO)で公式的に標準化された試料分離方法で得た。
各組織100mgを、細胞溶解RIPA緩衝溶液[50mMトリス、150mM塩化ナトリウム(NaCl)、1%NonidetP−40、0.25%デオキシコレートナトリウム、pH7.4]中、4℃で均質化した。糖タンパク質は、5種のアガロース結合レクチン:コンカナバリンA、小麦胚芽レクチン、ジャカリン(Jacakin)、セイヨウニワトコ(Sambucus nigra)及びヒイロチャワンタケ(Aleuria aurantia):の混合物を使用するレクチン−親和性クロマトグラフィーで分離した。異なった糖成分を有する糖タンパク質に対して結合特異性を有する、これらのレクチン混合物を、PD−10カラム(Pierce)に最終2mLとなるように充填した。糖タンパク質を含有しているサンプルを、結合用緩衝溶液[20mMトリス、1mM塩化マンガン(MnCl2)、1mM塩化カルシウム(CaCl2)、0.15M塩化ナトリウム(NaCl)、pH7.4]中でこのカラムに付して、30分間カラムに結合させた。結合した糖タンパク質を、糖組成に基づいて糖たんぱく質を移動する分離用緩衝溶液[0.2Mメチル−D−マンノピロサイド、0.2Mメチル−D−グルコピロサイド、0.2M N−アセチルグルコサミン、0.2Mガラクトース、0.1Mラクトース、0.1Mフコース、20mMトリス、0.5M塩化ナトリウム、pH7.0]を使用して溶出した。溶出した糖タンパク質を5kDa膜濾過紙で濃縮し、50%卜リクロロ酢酸と100%アセトンで沈殿させた。沈殿物を、2−D溶解緩衝溶液[7Mウレア、2Mチオウレア、4%CHAPS、30mMトリス、pH8.5]に溶解した。得られたタンパク質溶液を、pH8.5に調整し、タンパク質濃度を、2D Quant kit(GE Healthcare)を使用して測定した。
5名の患者由来の10個の試料(5個の非腫瘍肝組織および5個の腫瘍肝組織)を、2−D DIGE用の分析サンプル(それぞれ50μg)を調整するために用いた。分析サンプル及び対応するプールされている標準サンプルを、蛍光染料であるCy3、Cy5、Cy2(400pmol:GE Healthcare)で暗条件で30分間それぞれ標識した。
1μLの10mMリシンで反応を停止させた。各標識された3個の試料を混合して、最終容量が450μLとなるように、試料緩衝溶液[6Mウレア、2Mチオウレア、4%CHAPS、60mMジチオトレイトール(dithiothreitol;DTT)、30mMトリス、pH8.5]を添加し、2%IPG3−10NL緩衝溶液とともに常温で16時間培養して再水和した。
等電点電気泳動法(isoelectric focusing;IEF)を、イモビリンドライストリップ(Immobiline Dry Strip)pH3−10NL(GE Healthcare)を使用してMultiPhorII電気泳動システム(GE Healthcare)で最適条件下(95,000V)で実施した。次いで、ドライストリップを培養して、トリブチルホスフィン(TBP)緩衝溶液[6Mウレア、2%ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)、30mMトリス、20%グリセロール、2.5%アクリルアミド溶液、5mMトリブチルホスフィン]中で25分間ワン−ステップ還元及びアルキル化した。
イメージを分析した後、有意に特異的に発現したタンパク質を、クマシブルー染料で染色されたゲルから切り取り、脱色してトリプシンで切断(digestion)した。切断したペプチドを、ポロス(Poros)R2及びオリゴR3レジン混合物を使用して脱塩した。タンパク質を、4800MALDI−TOF−MS(Applied Biosystem)で分析して、スペクトルを、MASCOTデータベースを利用して同定した。
患者10名の非腫瘍肝臓組織と腫瘍肝臓組織の間における肝癌バイオマーカータンパク質濃度の差異をウェスタンブロッティング分析で検証した。各サンプルから得た等量のタンパク質5μgを、10%ゲル上のSDS−PAGEで分離した。
タンパク質をニトロセルロース(nitrocellulose;NC)膜に転換した後、5%脱脂乳が含まれたTBS−T緩衝溶液[20mMトリス、137mM塩化ナトリウム、0.1%Tween−20、pH7.6]中で、1時間室温で培養して、ブロッキングした。膜を、抗−ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1抗体(CE1、Abcam;1:10000;5%脱脂乳が含まれたTBS−T緩衝溶液中)と室温で1時間培養した。陽性対照群として、マウスベータアクチン抗体(SantaCruz)を用いた。
5%脱脂乳が含まれたTBS−T緩衝溶液で洗浄した後、膜を2次抗ウサギIgG−HRP(SantaCruz;1:20000倍希釈)と室温で1時間培養した。免疫反応性タンパク質を、ECL Plusウェスタンブロット試薬(GE Healthcare)で検出して、Typhoon9400スキャナでスキャンして分析した。
HCCを有する47名の患者の非腫瘍性及び腫瘍性肝の切片から構築されたパラフィン−浸漬された組織アレイを免疫組織化学的染色法に使用した。キシレン及びアルコールでスライドを脱パラフィン化させ、脱水させた後、0.6%過酸化水素で処理した。抗−hCE1抗体(1:100)をスライドに塗布し、30分間インキュベートした。hCE1−結合抗体の色相をChemMate Envision Kit(DAKO)で発現させ、ヘマトシリン(対照染色薬として使用)で30分間可視化した。染色の強度は、染色されていない場合に対して“−”で,弱い染色に対して“+”で、そして強い染色に対して“++”で点数を付けた。
電磁ビーズである‘Dynabead MyOne(商標登録) Tosylactivated’(Invitrogen)を、製造会社のマニュアルによって抗−ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1抗体でコーティングした。10mgのビーズと400μgの抗−ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1抗体を混合して、結合緩衝溶液[0.1Mホウ酸ナトリウム、1M硫酸アンモニウム、pH9.5]中で37℃で16時間培養して、5%脱脂乳が含まれたTBS−T緩衝溶液で更に16時間追加にブロッキングした。抗−ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1抗体が結合されたビーズ500μgを、健常者と肝癌患者の血漿8mgと一緒に1mLチューブに移して2時間培養して、ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1を免疫沈降させた。
TBS−T緩衝溶液をpH2に調整して抗体に結合したタンパク質を溶出した。免疫ブロッティングを行い、健常者と肝癌患者の間の血漿内のヒト肝カルボキシルエステラーゼ1の変化を分析した。この時、使用した抗体は、実施例5で使用した抗−ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1の1次抗体(Abcam;1:1000)、及び2次抗ウサギIgG−HRP(SantaCruz;1:5000)である。
実施例7で実施した免疫ブロッティングで測定したヒト肝カルボキシルエステラーゼ1の該当ゲルバンドを切り取り、ジチオトリエトール(dithiothrietol;DTT)/ヨード酢酸(iodoacetic acid;IAA)処理を通じてタンパク質還元とアルキル化を行い、トリプシンで処理してペプチドに切断した後、ナノ液体クロマトグラフィー質量分析装置と線形トラップ四重極(LTQ)検出装置を利用してゲル内のヒト肝カルボキシルエステラーゼ1タンパク質を確認した。
本発明は、以下の(1)以下にもある。
(1)
ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1タンパク質を有効成分として含有する肝癌診断用血
漿バイオマーカー組成物。
(2)
当該ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1タンパク質が肝癌患者の血漿において健常者よ
り増加することを特徴とする、(1)に記載の組成物。
(3)
当該ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1タンパク質が肝癌患者の血漿において健常者よ
り平均2〜5倍増加することを特徴とする、(2)に記載の組成物。
(4)
ヒト血液試料からプロテオーム技術を用いて肝癌診断用血漿バイオマーカーとしてヒト
肝カルボキシルエステラーゼ1の存在を確認する第1段階と、免疫沈降法、免疫ブロッテ
ィング、ナノ液体クロマトグラフィー質量分析装置を用いてヒト肝カルボキシルエステラ
ーゼ1の存在及び相対的比較量から健常者と肝癌患者を識別する第2段階と、を含む肝癌
スクリーニング方法。
(5)
当該第1段階が、
1)血液サンプルを、エチレンジアミン四酢酸ジカリウムを含むチューブに採取し、3
0分間常温に放置した後、2,400xgで15分間遠心分離し、上澄み液血漿を得る段
階と、
2)抗−ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1抗体400μgと電磁ビーズ10mgを結
合させた後、それらのうち500μgを取って、健常者と肝癌患者の血漿8mgと一緒に
1mLチューブで2時間培養して、ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1タンパク質を免疫
沈降させる段階と、
3)当該2)段階の健常者と肝癌患者のサンプルを、溶解緩衝溶液でタンパク質変形さ
せた後、1次元ゲル電気泳動で分離する段階と、
4)ほぼ62kDa位置のゲルバンドを切り取り、トリプシン処理によってタンパク質
をペプチドに切断する段階と、
5)高感度のナノ液体クロマトグラフィーを使用してヒト肝カルボキシルエステラーゼ
1タンパク質を確認する段階と、を含むことを特徴とする(4)に記載の方法。
(6)
当該第2段階が、
1)2次蛍光ゲル電気泳動、免疫ブロッティング及び免疫組織化学的染色の結果から、
肝癌患者の肝癌組織におけるヒト肝カルボキシルエステラーゼ1の発現レベルが正常組織
より顕著に減少することを確認する段階と、
2)血漿サンプルを免疫沈降させて、ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1溶液を得る段
階と、
3)免疫ブロッティングで抗−ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1抗体を利用してヒト
肝カルボキシルエステラーゼ1のシグナルを確認する段階と、
4)正常血漿より肝癌血漿がヒト肝カルボキシルエステラーゼ1のシグナルが高いこと
を確認する段階と、を含むことを特徴とする(4)に記載の方法。
(7)
当該ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1タンパク質のレベルが肝癌患者の血漿において
健常者より高いことを特徴とする、(4)に記載の方法。
(8)
当該ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1タンパク質のレベルが肝癌患者の血漿において
健常者より平均2〜5倍増加することを特徴とする、(7)に記載の方法。
[1]
抗ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1抗体を含有する肝癌診断用組成物。
[2]
抗ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1抗体によって検出されるヒト肝カルボキシルエステラーゼ1タンパク質のレベルが肝癌患者の血漿において健常者より増加することを特徴とする、[1]に記載の組成物。
[3]
抗ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1抗体によって検出されるヒト肝カルボキシルエステラーゼ1タンパク質が肝癌患者の血漿において健常者より平均2〜5倍増加することを特徴とする、[2]に記載の組成物。
[4]
ヒト血液試料からプロテオーム技術を用いて肝癌診断用血漿バイオマーカーとしてヒト肝カルボキシルエステラーゼ1の存在を確認する第1段階と、免疫沈降法、免疫ブロッティング、ナノ液体クロマトグラフィー質量分析装置を用いてヒト肝カルボキシルエステラーゼ1の存在及び相対的比較量から健常者と肝癌患者を識別する第2段階と、を含む肝癌スクリーニング方法。
[5]
当該第1段階が、
1)血液サンプルを、エチレンジアミン四酢酸ジカリウムを含むチューブに採取し、30分間常温に放置した後、2,400xgで15分間遠心分離し、上澄み液血漿を得る段階と、
2)抗−ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1抗体400μgと電磁ビーズ10mgを結合させた後、それらのうち500μgを取って、健常者と肝癌患者の血漿8mgと一緒に1mLチューブで2時間培養して、ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1タンパク質を免疫沈降させる段階と、
3)当該2)段階の健常者と肝癌患者のサンプルを、溶解緩衝溶液でタンパク質変形させた後、1次元ゲル電気泳動で分離する段階と、
4)ほぼ62kDa位置のゲルバンドを切り取り、トリプシン処理によってタンパク質をペプチドに切断する段階と、
5)高感度のナノ液体クロマトグラフィーを使用してヒト肝カルボキシルエステラーゼ1タンパク質を確認する段階と、を含むことを特徴とする[4]に記載の方法。
[6]
当該第2段階が、
1)2次蛍光ゲル電気泳動、免疫ブロッティング及び免疫組織化学的染色の結果から、肝癌患者の肝癌組織におけるヒト肝カルボキシルエステラーゼ1の発現レベルが正常組織より顕著に減少することを確認する段階と、
2)血漿サンプルを免疫沈降させて、ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1溶液を得る段階と、
3)免疫ブロッティングで抗−ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1抗体を利用してヒト肝カルボキシルエステラーゼ1のシグナルを確認する段階と、
4)正常血漿より肝癌血漿がヒト肝カルボキシルエステラーゼ1のシグナルが高いことを確認する段階と、を含むことを特徴とする[4]に記載の方法。
[7]
当該ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1タンパク質のレベルが肝癌患者の血漿において健常者より高いことを特徴とする、[4]に記載の方法。
[8]
当該ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1タンパク質のレベルが肝癌患者の血漿において健常者より平均2〜5倍増加することを特徴とする、[7]に記載の方法。
(1)
対象において肝癌(HCC)を診断するための情報を取得する方法であって、該方法は以下を含む:
肝癌(HCC)診断のための血漿バイオマーカーとして、対象からの血液サンプル中のヒト肝カルボキシルエステラーゼ1(hCE1)タンパク質の存在を検出する工程、
ただし、hCE1タンパク質のレベルは、健常者の血漿中よりも、肝癌(HCC)の患者の血漿中において、増加している。
(2)
健常者の血漿と比較して、肝癌(HCC)の患者の血漿中において、平均して、2〜5倍で、hCE1タンパク質のレベルが増大している、(1)に記載の方法。
(3)
hCE1タンパク質の存在が、抗hCE1抗体によって検出される、(1)に記載の方法。
(4)
対象における肝癌(HCC)を診断するための情報を取得する方法であって、該方法は以下のステップを含む:
a) 対象からの血液サンプルの一部を、ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1(hCE1)に特異的結合親和性を有する抗体と、接触させて、これによって、該抗体とhCE1との複合体を形成させ、ただし、該抗体は検出可能な標識を有しており、
b) 上記接触させるステップa)において形成された複合体を、複合体を構成しない標識された抗体から、分離し、
c) 上記接触させるステップa)で形成された複合体を構成する抗体の検出可能な標識からのシグナルを定量し、該シグナルは血液サンプル中のhCE1の量に比例しており、それによってサンプル中のhCE1の量が算出され、
d) 上記定量するステップc)において算出されたhCE1の量を、hCE1リファレンス量と比較し、及び
e) 上記算出するステップc)において算出された上記サンプル中のhCE1の量がhCE1リファレンス量よりも大きい場合に、対象における肝癌(HCC)の診断を提供する。
(5)
hCE1リファレンス量が、肝癌(HCC)ではない患者の血液サンプルにおけるhCE1量である、(4)に記載の方法。
(6)
血液サンプルが血漿を含む、(4)に記載の方法。
(7)
血液サンプルが血清である、(4)に記載の方法。
(8)
ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1(hCE1)タンパク質を、血液サンプル中のその他の残余のタンパク質から、分離するステップを含み、ただし、上記hCE1タンパク質を分離するステップはステップa)とb)の間に設けられる、(4)に記載の方法。
(9)
hCE1タンパク質が、血液サンプル中のその他の残余のタンパク質から、免疫沈降によって分離される、(8)に記載の方法。
(10)
(8)に記載の方法であって、
血液サンプル中のその他の残余のタンパク質から、hCE1タンパク質を分離するステップが、以下のステップを含む方法:
i. 対象からのサンプルの一部を、hCE1に対して特異的な結合親和性を有する抗体と、接触させ、それによって抗体とhCE1の間に複合体を形成し、及び、
ii. 上記接触するステップ(i)において形成された複合体を沈殿させて、
iii. 沈殿した複合体を上記サンプルの上清から分離し、ただし、該上清はその他の残余のタンパク質と、複合体を構成しない抗体を含んでおり、
ただし、hCE1タンパク質は血液サンプル中のその他の残余のタンパク質から分離される。
(11)
抗体が、磁性体分子に結合されている、(10)に記載の方法。
Claims (11)
- 対象において肝癌(HCC)を診断するための情報を取得する方法であって、該方法は以下を含む:
肝癌(HCC)診断のための血漿バイオマーカーとして、対象からの血液サンプル中のヒト肝カルボキシルエステラーゼ1(hCE1)タンパク質の存在を検出する工程、
ただし、hCE1タンパク質のレベルは、健常者の血漿中よりも、肝癌(HCC)の患者の血漿中において、増加している。 - 健常者の血漿と比較して、肝癌(HCC)の患者の血漿中において、平均して、2〜5倍で、hCE1タンパク質のレベルが増大している、請求項1に記載の方法。
- hCE1タンパク質の存在が、抗hCE1抗体によって検出される、請求項1に記載の方法。
- 対象における肝癌(HCC)を診断するための情報を取得する方法であって、該方法は以下のステップを含む:
a) 対象からの血液サンプルの一部を、ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1(hCE1)に特異的結合親和性を有する抗体と、接触させて、これによって、該抗体とhCE1との複合体を形成させ、ただし、該抗体は検出可能な標識を有しており、
b) 上記接触させるステップa)において形成された複合体を、複合体を構成しない標識された抗体から、分離し、
c) 上記接触させるステップb)で形成された複合体を構成する抗体の検出可能な標識からのシグナルを定量し、該シグナルは血液サンプル中のhCE1の量に比例しており、それによってサンプル中のhCE1の量が算出され、
d) 上記定量するステップc)において算出されたhCE1の量を、hCE1リファレンス量と比較し、及び
e) 上記算出するステップc)において算出された上記サンプル中のhCE1の量がhCE1リファレンス量よりも大きい場合に、対象における肝癌(HCC)の陽性の判定を提供する。 - hCE1リファレンス量が、肝癌(HCC)ではない患者の血液サンプルにおけるhCE1量である、請求項4に記載の方法。
- 血液サンプルが血漿を含む、請求項4に記載の方法。
- 血液サンプルが血清である、請求項4に記載の方法。
- ヒト肝カルボキシルエステラーゼ1(hCE1)タンパク質を、血液サンプル中のその他の残余のタンパク質から、分離するステップを含み、ただし、上記hCE1タンパク質を分離するステップはステップa)とb)の間に設けられる、請求項4に記載の方法。
- hCE1タンパク質が、血液サンプル中のその他の残余のタンパク質から、免疫沈降によって分離される、請求項8に記載の方法。
- 請求項8に記載の方法であって、
血液サンプル中のその他の残余のタンパク質から、hCE1タンパク質を分離するステップが、以下のステップを含む方法:
i. 対象からのサンプルの一部を、hCE1に対して特異的な結合親和性を有する抗体と、接触させ、それによって抗体とhCE1の間に複合体を形成し、及び、
ii. 上記接触するステップ(i)において形成された複合体を沈殿させて、
iii. 沈殿した複合体を上記サンプルの上清から分離し、ただし、該上清はその他の残余のタンパク質と、複合体を構成しない抗体を含んでおり、
ただし、hCE1タンパク質は血液サンプル中のその他の残余のタンパク質から分離される。 - 抗体が、磁性体分子に結合されている、請求項10に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020080023707A KR100975852B1 (ko) | 2008-03-14 | 2008-03-14 | 간-카르복실에스터라제 1 단백질과 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 간암 진단 조성물 |
KR10-2008-0023707 | 2008-03-14 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010550580A Division JP5576302B2 (ja) | 2008-03-14 | 2008-10-01 | 肝カルボキシルエステラーゼ1を含有する肝癌診断用血漿バイオマーカー及び肝癌スクリニング方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014197021A JP2014197021A (ja) | 2014-10-16 |
JP5833711B2 true JP5833711B2 (ja) | 2015-12-16 |
Family
ID=41065396
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010550580A Expired - Fee Related JP5576302B2 (ja) | 2008-03-14 | 2008-10-01 | 肝カルボキシルエステラーゼ1を含有する肝癌診断用血漿バイオマーカー及び肝癌スクリニング方法 |
JP2014137810A Expired - Fee Related JP5833711B2 (ja) | 2008-03-14 | 2014-07-03 | 肝カルボキシルエステラーゼ1を含有する肝癌診断用血漿バイオマーカー及び肝癌スクリニング方法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010550580A Expired - Fee Related JP5576302B2 (ja) | 2008-03-14 | 2008-10-01 | 肝カルボキシルエステラーゼ1を含有する肝癌診断用血漿バイオマーカー及び肝癌スクリニング方法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US8198038B2 (ja) |
JP (2) | JP5576302B2 (ja) |
KR (1) | KR100975852B1 (ja) |
CN (2) | CN104749380B (ja) |
WO (1) | WO2009113758A1 (ja) |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100975852B1 (ko) * | 2008-03-14 | 2010-08-13 | 연세대학교 산학협력단 | 간-카르복실에스터라제 1 단백질과 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 간암 진단 조성물 |
CN102175843A (zh) * | 2011-01-20 | 2011-09-07 | 复旦大学附属中山医院 | 一组高分化早期肝癌的分子标志物及其应用 |
KR101338517B1 (ko) * | 2011-04-18 | 2013-12-10 | 연세대학교 산학협력단 | 인간 간-카르복실에스터라제 1을 특이적으로 인식하는 단일클론 항체, 상기 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 이의 용도 |
US10265421B2 (en) | 2013-01-31 | 2019-04-23 | Bracco Imaging S.P.A. | Hyperpolarized esters as metabolic markers in MR |
WO2015000838A1 (en) | 2013-07-01 | 2015-01-08 | Bracco Imaging Spa | Hyperpolarized 1-13c-1,1-bis(acetoxy(methyl))-2,2'-cyclopropane as metabolic marker for mr |
CN108277259A (zh) * | 2018-03-30 | 2018-07-13 | 沈阳北创医学检验所有限公司 | 一种测定复杂生物体系中ce2活性的检测试剂盒 |
CN111337674A (zh) * | 2018-12-18 | 2020-06-26 | 上海底物生化科技有限公司 | 一种用于预测心血管事件风险的试剂盒 |
CN112904023B (zh) * | 2021-01-20 | 2022-06-14 | 宁波海壹生物科技有限公司 | 一种降钙素原化学发光免疫检测试剂盒 |
CN113740544A (zh) * | 2021-07-29 | 2021-12-03 | 山东第一医科大学(山东省医学科学院) | 鉴定人垂体组织泌乳激素蛋白质存在形式生物标志物方法 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999042593A1 (en) | 1998-02-19 | 1999-08-26 | St. Jude Children's Research Hospital | Compositions and methods for sensitizing and inhibiting growth of human tumor cells |
JP2001188069A (ja) * | 1999-12-28 | 2001-07-10 | Japan Science & Technology Corp | 肝障害の診断方法 |
US20020076786A1 (en) * | 2000-06-29 | 2002-06-20 | Curtis Rory A.J. | 25869, a novel human carboxylesterase and uses thereof |
AU2001281969A1 (en) | 2000-07-17 | 2002-01-30 | Bayer Aktiengesellschaft | Regulation of human carboxylesterase-like enzyme |
CN1769455A (zh) * | 2005-09-14 | 2006-05-10 | 上海第二医科大学附属第九人民医院 | 口腔白斑癌变相关基因 |
CN100419075C (zh) * | 2006-04-17 | 2008-09-17 | 哈尔滨医科大学 | 分泌人羧酸酯酶2单克隆抗体的杂交瘤细胞株及人羧酸酯酶2的单克隆抗体 |
US7906637B2 (en) * | 2006-06-23 | 2011-03-15 | St. Jude Children's Research Hospital | Compositions and methods for inducing or inhibiting activities of selected human cells |
KR100975852B1 (ko) * | 2008-03-14 | 2010-08-13 | 연세대학교 산학협력단 | 간-카르복실에스터라제 1 단백질과 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 간암 진단 조성물 |
-
2008
- 2008-03-14 KR KR1020080023707A patent/KR100975852B1/ko active IP Right Grant
- 2008-10-01 CN CN201510136986.XA patent/CN104749380B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2008-10-01 US US12/994,406 patent/US8198038B2/en not_active Ceased
- 2008-10-01 CN CN200880129216.0A patent/CN102027127B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2008-10-01 WO PCT/KR2008/005762 patent/WO2009113758A1/en active Application Filing
- 2008-10-01 JP JP2010550580A patent/JP5576302B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2008-10-01 US US14/302,128 patent/USRE46572E1/en active Active
-
2014
- 2014-07-03 JP JP2014137810A patent/JP5833711B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20110097738A1 (en) | 2011-04-28 |
KR100975852B1 (ko) | 2010-08-13 |
CN102027127B (zh) | 2017-03-29 |
JP2014197021A (ja) | 2014-10-16 |
KR20090098366A (ko) | 2009-09-17 |
CN104749380A (zh) | 2015-07-01 |
CN104749380B (zh) | 2018-01-09 |
JP2011517399A (ja) | 2011-06-09 |
US8198038B2 (en) | 2012-06-12 |
WO2009113758A1 (en) | 2009-09-17 |
USRE46572E1 (en) | 2017-10-17 |
CN102027127A (zh) | 2011-04-20 |
JP5576302B2 (ja) | 2014-08-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5833711B2 (ja) | 肝カルボキシルエステラーゼ1を含有する肝癌診断用血漿バイオマーカー及び肝癌スクリニング方法 | |
JP6025607B2 (ja) | 前立腺癌の診断及び治療のためのバイオマーカー及びそれを用いて決定されるバイオマーカーアッセイ | |
KR101219519B1 (ko) | 렉틴을 이용한 암 진단 방법 | |
US20060068452A1 (en) | Differential protein expression patterns related to disease states | |
KR101559101B1 (ko) | 혈액유래 암 진단용 펩티드 마커 및 이를 이용한 암 진단방법 | |
JP2009500597A (ja) | 線維症のマーカー | |
Zhang et al. | Identification of abnormal fucosylated-glycans recognized by LTL in saliva of HBV-induced chronic hepatitis, cirrhosis, and hepatocellular carcinoma | |
CN110914687A (zh) | 血浆微量样品中肿瘤源性细胞外囊泡的纳米等离激元定量 | |
KR20150062915A (ko) | 혈액 당단백질을 이용하는 암 마커 및 이를 이용하는 암 진단방법 | |
EP3270163B1 (en) | Method of detecting proteins in human samples and uses of such methods | |
KR20110038778A (ko) | 다중렉틴을 이용한 체액 유래 단백질 동정 방법 및 이 방법에 의하여 탐지된 간암 바이오마커 | |
KR20150020392A (ko) | 당단백질의 탈당화 검출을 통한 암 마커 스크리닝 방법 및 간세포암 마커 | |
KR101219516B1 (ko) | 암 진단용 펩티드 마커 및 이를 이용한 암 진단방법 | |
JPWO2008096767A1 (ja) | 肝細胞がんタンパク質マーカーとそれを用いた肝細胞がん検出方法及び装置 | |
JP7432578B2 (ja) | がんマーカーおよびその用途 | |
EP3819639B1 (en) | Sugar chain specific to prostate cancer, and test method using same | |
KR101144325B1 (ko) | 다중병렬크로마토그래피를 이용하여 항체와 반응하는 항원을 정확하게 찾아내는 프로테오믹스 기반 방법 | |
JP2009210355A (ja) | 肺腺癌予後診断マーカー | |
WO2023209065A1 (en) | Glycan structures of haptoglobin as a biomarker of hepatocellular carcinoma | |
US8207301B2 (en) | Hepatocellular carcinoma protein marker | |
Hegmans et al. | Proteomics of Pleural Effusion | |
CN108226522A (zh) | 一种基于双分子荧光互补技术的Cys C检测试剂盒、制备及使用方法 | |
WO2016005916A1 (en) | A method and kit for the detection of a biomarker of thyroid cancer in biological samples | |
JPH07285884A (ja) | p53癌抑制遺伝子産物に対する抗体 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20140724 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20150310 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150407 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150707 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150929 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20151029 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5833711 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |