JP5824527B2 - 供給物混合装置およびその使用 - Google Patents
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Description
哺乳動物細胞の培養において生産収量または培養時間を増大させるために、本質的な培地成分の濃度を限界値またはそれを上回る値に維持するよう培養培地に供給液が添加される。
− 本明細書において報告する装置を含む培養容器内で、ポリペプチドをコードする核酸を含む細胞を、流加培養または連続培養にて培養する工程であって、少なくとも1種類の酸性の供給物溶液および少なくとも1種類のアルカリ性の供給物溶液が培養中に添加される、工程、および
− 培養培地または細胞からポリペプチドを回収する工程であって、それによってポリペプチドが生産される工程。
− 当該ポリペプチドをコードする核酸を含む細胞を、本明細書において報告する装置を含む培養容器内での流加培養または連続培養にて培養する工程であって、少なくとも1種類の酸性供給物溶液および少なくとも1種類のアルカリ性供給物溶液が培養中に添加される、工程、および
− 当該培養培地または当該細胞から当該ポリペプチドを回収する工程であって、それによって、G(0)グリコフォームが減少し、かつ/またはG(1)グリコフォームが増加しているポリペプチドが得られる工程
を含み、混合された供給物溶液が、培養容器への添加の時点でpH 4.0〜pH 6.0のpH値を有する、方法である。
以下に、本発明の基本的な諸特徴および種々の態様を列挙する。
[1]
それぞれ非生理学的なpH値を有する少なくとも2種類の供給物溶液を細胞培養容器に添加するための装置であって、該供給物溶液のための別々の入り口、該供給物溶液を混合するためのチャンバー、および混合した供給物溶液を該細胞培養容器に添加するための単一の出口を含み、該培養容器中の培養培地の体積に対する、該供給物溶液を混合するための該チャンバーの容積の比率が、0.8 ml/l〜1.2 ml/lである、装置。
[2]
前記比率が約1 ml/lであることを特徴とする、[1]記載の装置。
[3]
前記培養容器から分離されており、かつ前記出口が該培養容器の内部への出口であることを特徴とする、前記[1]〜[2]のいずれか一項記載の装置。
[4]
前記供給物混合装置が前記培養容器の外部または該培養容器の内部にあることを特徴とする、前記[1]〜[3]のいずれか一項記載の装置。
[5]
前記供給物溶液を混合するための前記チャンバーが0.5 ml〜1,000 mlの容積を有することを特徴とする、前記[1]〜[4]のいずれか一項記載の装置。
[6]
滅菌可能な材料で作られていることを特徴とする、前記[1]〜[5]のいずれか一項記載の装置。
[7]
以下を含む細胞培養器具:
a)細胞培養容器、
b)ガス供給装置、
c)それぞれ非生理学的なpH値を有する供給物溶液のための少なくとも2つの液体貯蔵ユニット、
d)該細胞培養容器中のpH値を決定するための少なくとも1つのセンサー、および
e)[1]〜[6]のいずれか一項記載の装置。
[8]
細胞の流加培養または連続培養における、[1]〜[6]のいずれか一項記載の装置または[7]記載の器具の使用。
[9]
以下の工程を含む、ポリペプチドを生産するための方法:
− 該ポリペプチドをコードする核酸を含む細胞を、[1]〜[6]のいずれか一項記載の装置または[7]記載の器具を含む培養容器を用いた流加培養または連続培養にて培養する工程であって、それぞれ非生理学的なpH値を有する少なくとも2種類の供給物溶液が培養培地に添加される、工程、および
− 該培養培地または該細胞から該ポリペプチドを回収する工程。
[10]
以下を特徴とする、[9]記載の方法:
− 任意の酸性供給物溶液がpH 6.5またはそれよりも低いpH値を有し、かつ/または任意のアルカリ性供給物溶液がpH 8.0またはそれよりも高いpH値を有すること、ならびに
− 混合された供給物溶液がpH 7〜pH 7.5のpH値を有すること。
[11]
混合が培養容器への添加の直前になされることを特徴とする、[9]または[10]記載の方法。
[12]
任意の酸性供給物溶液がpH 4.5またはそれよりも低いpH値を有し、かつ/または任意のアルカリ性供給物溶液がpH 10.0またはそれよりも高いpH値を有することを特徴とする、[9]〜[11]のいずれか一項記載の方法。
[13]
2種類〜4種類の別々の供給物溶液が前記培養培地に添加され、そのうちの少なくとも1種類が酸性供給物溶液であり、かつ少なくとも1種類がアルカリ性供給物溶液であることを特徴とする、[9]〜[12]のいずれか一項記載の方法。
[14]
アルカリ性供給物溶液または酸性供給物溶液の各々が、アミノ酸、糖、ビタミン、微量元素、乳酸塩、および成長因子から選択される少なくとも1種類の化合物を含むことを特徴とする、[9]〜[13]のいずれか一項記載の方法。
[15]
G(0)グリコフォームが減少し、かつ/またはG(1)グリコフォームが増加したポリペプチドを得るための方法であって、
− 該ポリペプチドをコードする核酸を含む細胞を、[1]〜[6]のいずれか一項記載の装置を含む培養容器を用いて、または[7]記載の器具において流加培養または連続培養にて培養する工程であって、少なくとも1種類の酸性供給物溶液および少なくとも1種類のアルカリ性供給物溶液が培養培地に添加される、工程、ならびに
− 該培養培地または該細胞から該ポリペプチドを回収する工程
を含み、混合された供給物溶液が、該培養容器への添加の時点でpH 4.0からpH 6.0のpH値を有する、方法。
治療用のポリペプチドまたはバイオマスの生産のために広く用いられている様式は、流加発酵である。流加発酵では、哺乳動物細胞培養物の細胞密度が100×105細胞/mlを超えることが多く、その結果、特定の物質または物質クラスの低溶解性および/または安定性低下のために、十分な量の必要な培養基質を提供することが困難となる。
抗体
本明細書において報告する方法および実施例で用いられる例示的な抗体は、(参照により本明細書に組み入れられる)国際公開公報第2010/034443号に報告される抗IL17抗体である。
供給物1:この溶液は、約9.5のpH値ですべての供給物成分(アミノ酸およびピルビン酸塩)を含む。
供給物2:この溶液は、pH 約1.5の酸性pH値で可溶性の成分を2倍の濃度で含む。
供給物3:この溶液は、pH 約10の塩基性pH値において可溶性の成分を2倍の濃度で含む。
供給物溶液混合のためのチャンバーの容積:1.146 ml
2 l培養容器を用いた培養開始時の培養培地の体積:1.2 l
供給物混合装置を通過する供給物の流れ:36 g/日
4つの2 l培養容器(Sartorius Biostat B-DCU Quad, Sartorius, Goettingen, Germany)に、同一の振盪フラスコで前培養した播種液を同時に播種した。2つの培養容器は本明細書において報告する装置を含み、その他の2つの培養容器は、ルアーフィッティングは付いているが混合チャンバーは持たない2つの個別の従来型供給装置を含んだ。
この実施例では、塩基消費、乳酸塩形成、増殖キネティクスまたは産物形成などの培養の異なるパラメータに対する供給物溶液のpH値の影響についてのみ分析する。その他のすべてのパラメータは同等に維持した。
供給物溶液を使用することによって、培養培地のpH値は直接影響を受ける。pH制御メカニズムによって培養中に添加しなければならない酸および/または塩基の量も影響を受けるが間接的である。
混合供給物の挙動
目標pH値約pH 6.5を得るために、pH値11.3のアルカリ性供給物溶液およびpH値約1.0の酸性供給物溶液を組み合わせた。個々の溶液の混合は、室温および4℃において、それぞれの温度の各供給物溶液10 mlを組み合わせて実施した。
Claims (12)
- 以下の工程を含む、ポリペプチドを生産するための方法:
− 該ポリペプチドをコードする核酸を含む細胞を、装置を含む培養容器を用いて、または器具において、流加培養または連続培養にて培養する工程であって、
それぞれ互いに独立してpH6.5よりも低いまたはpH 7.5よりも高いpH値を有する少なくとも2種類の供給物溶液が培養培地に添加され;
前記装置が、それぞれ互いに独立してpH6.5よりも低いまたはpH 7.5よりも高いpH値を有する少なくとも2種類の供給物溶液を細胞培養容器に添加するための装置であって、該供給物溶液のための別々の入り口、該供給物溶液を混合するためのチャンバー、および混合した供給物溶液を該細胞培養容器に添加するための単一の出口を含み、該培養容器中の培養培地の体積に対する、該供給物溶液を混合するための該チャンバーの容積の比率が、0.8 ml/l〜1.2 ml/lである、装置であり;ならびに
前記器具が、以下のa)〜e):
a)細胞培養容器、
b)ガス供給装置、
c)それぞれ互いに独立してpH6.5よりも低いまたはpH 7.5よりも高いpH値を有する供給物溶液のための少なくとも2つの液体貯蔵ユニット、
d)該細胞培養容器中のpH値を決定するための少なくとも1つのセンサー、および
e)それぞれ互いに独立してpH6.5よりも低いまたはpH 7.5よりも高いpH値を有する少なくとも2種類の供給物溶液を細胞培養容器に添加するための装置であって、該供給物溶液のための別々の入り口、該供給物溶液を混合するためのチャンバー、および混合した供給物溶液を該細胞培養容器に添加するための単一の出口を含み、該培養容器中の培養培地の体積に対する、該供給物溶液を混合するための該チャンバーの容積の比率が、0.8 ml/l〜1.2 ml/lである、装置
を含む、器具
である、工程、および
− 該培養培地または該細胞から該ポリペプチドを回収する工程。 - 前記比率が1 ml/lであることを特徴とする、請求項1記載の方法。
- 前記装置が前記培養容器から分離されており、かつ前記出口が該培養容器の内部への出口であることを特徴とする、請求項1または2記載の方法。
- 前記供給物混合装置が前記培養容器の外部または該培養容器の内部にあることを特徴とする、請求項1〜3のいずれか一項記載の方法。
- 前記供給物溶液を混合するための前記チャンバーが0.5 ml〜1,000 mlの容積を有することを特徴とする、請求項1〜4のいずれか一項記載の方法。
- 前記装置が滅菌可能な材料で作られていることを特徴とする、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
- 以下を特徴とする、請求項1〜6のいずれか一項記載の方法:
− 任意の酸性供給物溶液がpH 6.5よりも低いpH値を有し、かつ/または任意のアルカリ性供給物溶液がpH 8.0またはそれよりも高いpH値を有すること、ならびに
− 混合された供給物溶液がpH 7〜pH 7.5のpH値を有すること。 - 混合が培養容器への添加の直前になされることを特徴とする、請求項1〜7のいずれか一項記載の方法。
- 任意の酸性供給物溶液がpH 4.5またはそれよりも低いpH値を有し、かつ/または任意のアルカリ性供給物溶液がpH 10.0またはそれよりも高いpH値を有することを特徴とする、請求項1〜8のいずれか一項記載の方法。
- 2種類〜4種類の別々の供給物溶液が前記培養培地に添加され、そのうちの少なくとも1種類が酸性供給物溶液であり、かつ少なくとも1種類がアルカリ性供給物溶液であることを特徴とする、請求項1〜9のいずれか一項記載の方法。
- アルカリ性供給物溶液または酸性供給物溶液の各々が、アミノ酸、糖、ビタミン、微量元素、乳酸塩、および成長因子から選択される少なくとも1種類の化合物を含むことを特徴とする、請求項10記載の方法。
- G(0)グリコフォームが減少し、かつ/またはG(1)グリコフォームが増加したポリペプチドを得るための方法であって、
− 該ポリペプチドをコードする核酸を含む細胞を、装置を含む培養容器を用いて、または器具において流加培養または連続培養にて培養する工程であって、
少なくとも1種類の酸性供給物溶液および少なくとも1種類のアルカリ性供給物溶液が培養培地に添加され;
前記装置が、それぞれ互いに独立してpH6.5よりも低いまたはpH 7.5よりも高いpH値を有する少なくとも2種類の供給物溶液を細胞培養容器に添加するための装置であって、該供給物溶液のための別々の入り口、該供給物溶液を混合するためのチャンバー、および混合した供給物溶液を該細胞培養容器に添加するための単一の出口を含み、該培養容器中の培養培地の体積に対する、該供給物溶液を混合するための該チャンバーの容積の比率が、0.8 ml/l〜1.2 ml/lである、装置であり;ならびに
前記器具が、以下のa)〜e):
a)細胞培養容器、
b)ガス供給装置、
c)それぞれ互いに独立してpH6.5よりも低いまたはpH 7.5よりも高いpH値を有する供給物溶液のための少なくとも2つの液体貯蔵ユニット、
d)該細胞培養容器中のpH値を決定するための少なくとも1つのセンサー、および
e)それぞれ互いに独立してpH6.5よりも低いまたはpH 7.5よりも高いpH値を有する少なくとも2種類の供給物溶液を細胞培養容器に添加するための装置であって、該供給物溶液のための別々の入り口、該供給物溶液を混合するためのチャンバー、および混合した供給物溶液を該細胞培養容器に添加するための単一の出口を含み、該培養容器中の培養培地の体積に対する、該供給物溶液を混合するための該チャンバーの容積の比率が、0.8 ml/l〜1.2 ml/lである、装置
を含む、器具
である、工程、ならびに
− 該培養培地または該細胞から該ポリペプチドを回収する工程
を含み、混合された供給物溶液が、該培養容器への添加の時点でpH 4.0からpH 6.0のpH値を有する、方法。
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