JP5816086B2 - 刺激細胞標準 - Google Patents
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Description
(i) こうして作製された参照細胞が+4℃で最適に安定であるにもかかわらず、細胞を劣化なしに大気温度で出荷することができる;
(ii) 細胞を蒸留水で容易に再構成する;
(iii) 細胞がフローサイトメトリーアッセイおよびELISPOTアッセイの両方で機能し、特に37℃前後の高温度で維持する場合、細胞がサイトカインを周囲環境に放出する。
本発明の一実施形態においては、「バフィーコート」を例えば瀉血されたドナーまたは全国血液採取エージェンシーから得る。血液のバフィーコート画分は、遠心後の白血球の大部分と、血小板とを含む血液の一部である。このようにして得たバフィーコートの全てを通常使用前に試験して、梅毒トレポネーマ・ヘム凝集検査(「TPHA」)、B型肝炎表面抗原(「HBsAg」)、抗ヒト免疫不全ウイルス1(「抗HIV 1」)、抗ヒト免疫不全ウイルス 2(「抗HIV 2」)および抗C型肝炎ウイルス(「抗HCV」)にネガティブであることを確認する。
一例として、ここに記載した方法を用いて、末梢血単核細胞(PBMC)の増殖アッセイ用の参照標準を作製することができる。本発明の一実施形態において、「バフィーコート」を、例えば瀉血されたドナーまたは全国血液採取エージェンシーから得た。該血液のバフィーコート画分は、遠心後の白血球の大部分と、血小板とを含む血液の一部分である。このようにして得たバフィーコート全てを通常使用前に試験して、これらが梅毒トレポネーマ・ヘム凝集検査(「TPHA」)、B型肝炎表面抗原(「HBsAg」)、抗ヒト免疫不全ウイルス1(「抗HIV1」)、抗ヒト免疫不全ウイルス2(「抗HIV2」)および抗C型肝炎ウイルス(「抗HCV」)にネガティブであることを確認する。
Claims (15)
- (a) 細胞試料はヒトまたは動物の体から予め単離して得たものであり、該細胞試料が末梢血単核細胞、細胞系統、血小板からなる群から選択した細胞を含むステップと、
(b) 分裂促進因子の添加によって前記細胞を刺激してサイトカイン分泌阻害剤の存在下でサイトカインを作製するステップと、
(c) 前記刺激細胞を固定剤の添加によって固定するステップと、
(d) 前記固定した刺激細胞を凍結乾燥によって保存するステップとを備え、
前記分裂促進因子がPMA(ホルボール-12-ミリステート-13-アセテート)を含む、
細胞参照材料を製造する方法。 - (i) 混合細胞集団はヒトまたは動物の体から予め単離して得たものであり、該混合細胞集団が末梢血単核細胞と血小板からなる群から選択した複数の細胞タイプを含むステップと、
(ii) 前記混合細胞集団を分画して、各画分内に細胞タイプの明確な集団を有する複数の画分を作製するステップと、
(iii) 前記一つ以上の画分内の細胞をサイトカイン分泌阻害剤の存在下で刺激してサイトカインを作製するステップと、
(iv) 前記各画分内の細胞を固定剤の添加によって固定するステップと、
(v) 前記複数の画分を再結合して特異的に刺激した細胞の混合物を作製するステップと、
(vi) 前記特異的に刺激した細胞の混合物を凍結乾燥または凍結貯蔵によって保存するステップとを備える細胞参照材料を製造する方法。 - 前記細胞試料または前記混合細胞集団は哺乳類の体から単離されたものである請求項1または2のいずれかに記載の方法。
- 前記細胞試料または前記混合細胞集団は人体から単離されたものである請求項3に記載の方法。
- 前記分裂促進因子がイオノマイシンを含む請求項1、請求項1に従属する請求項3、請求項1に従属する請求項4のいずれかに記載の方法。
- 前記分裂促進因子がPMA(ホルボール-12-ミリステート-13-アセテート)およびイオノマイシンの混合物を含む請求項1、請求項1に従属する請求項3〜5のいずれかに記載の方法。
- 前記サイトカイン分泌阻害剤がBrefeldin Aを含む前記請求項1〜6のいずれかに記載の方法。
- 前記固定剤がパラホルムアルデヒドを含む前記請求項1〜7のいずれかに記載の方法。
- 前記固定剤がパラホルムアルデヒドおよび塩化クロムの混合物を含む請求項8に記載の方法。
- 前記細胞の固定後で細胞の保存前に残留固定剤を除去するステップを更に備える前記請求項1〜9のいずれかに記載の方法。
- 前記細胞の保存前に前記固定後の細胞を高張性条件下に暴露するステップを更に備える前記請求項1〜10のいずれかに記載の方法。
- 前記細胞の保存前に凍結保護物質を前記固定後の細胞に添加するステップを更に備える前記請求項1〜11のいずれかに記載の方法。
- 複数の細胞試料を複数の個体から予め単離して得るステップと、
前記各細胞試料に対し請求項1に従属する前記請求項3〜12のいずれかの方法を行うステップとを備え、
前記細胞の保存前に前記複数の試料に由来した固定細胞同士を混合するステップを更に含む細胞参照材料を製造する方法。 - 複数の混合細胞集団を複数の個体から予め単離して得るステップと、
前記各混合細胞集団に対し請求項2に従属する前記請求項3〜12のいずれかの方法を行うステップとを備え、
前記細胞の保存前に前記複数の混合細胞集団に由来した固定細胞同士を混合するステップを更に含む細胞参照材料を製造する方法。 - 刺激ステップ(b)または(iii)を省略し、および、保存ステップ(d)または(vi)を省略した前記請求項1〜14のいずれかに記載の方法ステップにより未刺激の固定細胞を調製するステップと、
前記未刺激の固定細胞を、保存ステップ(d)または(vi)を省略した前記請求項のいずれかに記載の方法ステップに従って調製する刺激した固定細胞と混合するステップと、
前記未刺激の固定細胞と前記刺激した固定細胞とを混合した細胞を凍結乾燥または凍結貯蔵によって保存するステップとを備える細胞参照材料を製造する方法。
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