JP5787406B2 - 物質変換方法、バイオリアクタの製造方法、バイオリアクタ - Google Patents
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本実施の形態の物質変換方法は、培養槽12に、親水性の基質を含む水溶液と、水溶液よりも比重の小さい第1の合成高分子微粒子と、第1の合成高分子微粒子とは疎水度およびゼータ電位の少なくとも一方が異なる第2の合成高分子微粒子と、糸状菌と、を添加し、水溶液から形成される水層20の液面に、糸状菌/第1の合成高分子微粒子/第2の合成高分子微粒子を含む複合層30を形成するステップと、複合層30中の糸状菌を生体触媒として、親水性の基質を反応させるステップと、を含む。
図1(B)は、第2の実施の形態に係る物質変換方法を模式的に示す図である。
図1(C)は、第3の実施の形態に係る物質変換方法を模式的に示す図である。
図1(D)は、第4の実施の形態に係る物質変換方法を模式的に示す図である。
上述した物質変換方法は、例えば、クエン酸やイタコン酸等の有機酸やg−デカラクトンや6−ペンチル−a−ピロン等の香料原料、あるいはメバスタチンやシクロスポリン等の医薬品原料の生産などに適用することが想定される。糸状菌を適宜選択することにより、これらの生産を容易に効率化することができる。
グルコース40g、ペプトン10g、硫酸鉄5mg、硫酸マンガン20mg、塩化カルシウム10mg、逆浸透水1Lよりなる液体培地(pH6.0)50ml、第1の合成高分子微粒子(MMF−DE−1、松本油脂製薬株式会社製、平均粒径30μm、真比重0.06)150mg、第2の合成高分子微粒子[三菱レーヨン社製ポリメチルメタクリレートHBS000の粉砕分級物(粒径100μm以下)、プライムポリマー社製低密度ポリエチレン45,200の粉砕分級物(粒径100μm以下)、ノバティックHD社製高密度ポリエチレンHJ560U66414の粉砕分級物(粒径100μm以下)、あるいは和光純薬工業社製ポリビニルクロライド223−00255の粉砕分級物(粒径100μm以下)]各700mgの混合物に、リゾープス・オリゼー(Rhizopus oryzae)NBRC4716の胞子懸濁液(1.2x106spores/ml)1mlを添加して、激しく混合後、直径68mm、高さ55mmの深型ガラスシャーレに全量投入した。25℃で3日間静置培養して当該糸状菌を発芽、成長させ、糸状菌/第1の合成高分子微粒子/第2の合成高分子微粒子の複合マットを形成させた。その後、当該複合マットの上部に疎水性の基質としてノルマルデカンを20ml重層し、25℃で1週間静置培養した。ここで、培養器間で糸状菌/第1の合成高分子微粒子/第2の合成高分子微粒子の複合マットの厚さを揃えるために、比重並びに粒径から換算して、各培養器中の第2の合成高分子微粒子の添加量は第1の合成高分子微粒子の5倍量とした。
実施例1の比較対照として、第2の高分子微粒子を添加していない培養器(第1の合成高分子微粒子200mg)と液体培養系(500mlの三角フラスコを用いて、培地、植菌量、ノルマルデカン量を揃えたもの)を設定した。実施例1と同じく、前培養3日後にノルマルデカンを20ml添加して、第1の合成高分子微粒子のみを配合したL−L IBRは1週間の静置培養、液体培養系は1週間の振盪培養(200rpm)を行った。培養後、実施例1と同じ条件でガスクロマトグラフィーを用いてノルマルデカンを含む有機層を直接分析することにより、物質変換により生成した化合物の量を測定した。
グルコース40g、トリプトン10g、硫酸鉄5mg、硫酸マンガン20mg、塩化カルシウム10mg、逆浸透水1Lよりなる液体培地(pH6.0)50ml、第1の合成高分子微粒子(MMF−DE−1、松本油脂製薬株式会社製、平均粒径30μm、真比重0.06)150mg、第2の合成高分子微粒子[三菱レーヨン社製ポリメチルメタクリレートHBS000の粉砕分級物(粒径50μm以下)、ノバルティックHD社製高密度ポリエチレンHJ560 U66414の粉砕分級物(粒径50μm以下)、あるいはアルドリッチ社製ポリスチレン441147−1KG微粒子(粒径50μm以下)]各700mgの混合物に、アスペルギルス・ソジャエ(Aspergillus sojae)NBRC32074の3日培養液1mlを添加して激しく混合後、直径68mm、高さ55mmの深型ガラスシャーレに全量投入した。25℃で3日間静置培養して糸状菌を発芽および成長させ、糸状菌/第1の合成高分子微粒子/第2の合成高分子微粒子の複合マットを形成させた。その後、当該複合マットの上部に疎水性の基質として2%ベンジルのジヘキシルエーテル溶液20mlを重層し、25℃で5日間静置培養した。実施例1と同様に、培養器間で糸状菌/第1の合成高分子微粒子/第2の合成高分子微粒子の複合マットの厚さを揃えるために、比重並びに粒径から換算して、各培養器中の第2の合成高分子微粒子の添加量は第1の合成高分子微粒子の5倍量とした。
第2の高分子微粒子を添加せずに第1の合成高分子微粒子を200mg用いた以外は実施例2と同様にして、5日間静置培養した。
グルコース40g、ペプトン10g、硫酸鉄5mg、硫酸マンガン20mg、塩化カルシウム10mg、逆浸透水1Lよりなる液体培地(pH6.0)50ml、第1の合成高分子微粒子(MMF−DE−1、松本油脂製薬株式会社製、平均粒径30μm、真比重0.06)150mg、第2の合成高分子微粒子(オルガノ社製陰イオン交換樹脂の粉砕分級物)[IRA910CT CL(粒径50μm以下)、IRA958CT CL(粒径50μm以下)]各500mgの混合物に、ボーベリア・バシアナ(Beauveria bassiana)ATCC7159の3日間培養ブロス1mlを添加して、激しく混合後、直径68mm、高さ55mmの深型ガラスシャーレに全量投入した。28℃で3日間静置培養して当該糸状菌を発芽、成長させて糸状菌/第1の合成高分子微粒子/第2の合成高分子微粒子の複合マットを形成させた。その後、当該複合マットの上部に疎水性の基質としてノルマルノナンを20ml重層し、28℃で1週間、静置培養した。この場合、実施例1と同様に、培養器間で糸状菌/第1の合成高分子微粒子/第2の合成高分子微粒子の複合マットの厚さを揃えるために、比重並びに粒径から換算して、各培養器中の第2の合成高分子微粒子の添加量は第1の合成高分子微粒子の5倍量とした。
第2の高分子微粒子を添加せずに第1の合成高分子微粒子を200mg用いた以外は実施例3と同様にして、5日間静置培養した。
糸状菌の栄養源であると同時に本実施例では基質でもあるグルコース100g、リン酸二水素カリウム10g、硝酸ナトリウム2g、塩化アンモニウム2g、硫酸マグネシウム250mg、硫酸鉄50ng、硫酸マンガン200ng、塩化カルシウム100ng、水1L(pH6.0)よりなる液体培地50mlに、第1の合成高分子微粒子(MFL−80GCA、松本油脂製薬株式会社製、炭酸カルシウムコート型、平均粒径20μm、真比重0.2)0.5g、充填合成高分子微粒子(オルガノ社製陰イオン交換樹脂粉砕の分級物)[IRA910CT CL(粒径50μm以下)、IRA958CT CL(粒径50μm以下)]各500mgの混合物に、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)NBRC 6341の胞子懸濁液(1.2x106spores/ml)1mlを添加して、激しく混合後、直径68mm、高さ55mmの深型ガラスシャーレに全量投入した。25℃で3日間静置培養して当該糸状菌を発芽、成長させて糸状菌/第1の合成高分子微粒子/第2の合成高分子微粒子の複合マットを形成させた。静置条件下、28℃で1週間培養した。
同様の組成の液体培地50mlを500mlの三角フラスコに分注し、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)NBRC6341の胞子懸濁液(1.2x106spores/ml)1mlを添加して、28℃、200rpmで1週間振盪培養した。その後、遠心分離によって菌体を除去し、得られた上清中のクエン酸をF−キット・クエン酸を用いて定量することにより、物質変換により生成した化合物の量を測定した。
Claims (13)
- 培養槽に、親水性の基質を含む水溶液と、前記水溶液よりも比重の小さい第1の合成高分子微粒子と、前記第1の合成高分子微粒子とは疎水度およびゼータ電位の少なくとも一方が異なる第2の合成高分子微粒子と、糸状菌と、を添加し、前記水溶液から形成される水層の液面に、糸状菌/第1の合成高分子微粒子/第2の合成高分子微粒子を含む複合層を形成するステップと、
前記複合層中の糸状菌を生体触媒として、前記親水性の基質を反応させるステップと、を含み、
前記第2の合成高分子微粒子は、ポリスチレン、ポリアクリレート、またはポリメチルメタクリレートを基体樹脂とし、三級アミノ基を陰イオン交換基として有するアニオン交換樹脂を含み、平均粒径が10μm〜500μm、水の接触角が75°以上、総イオン交換容量が1.0meq/g以上であることを特徴とする物質変換方法。 - 前記第1の合成高分子微粒子は、中空構造を有することを特徴とする請求項1に記載の物質変換方法。
- 疎水性の有機溶媒を含む有機層を、前記複合層の液面に重層するステップをさらに含むことを特徴とする請求項1または2に記載の物質変換方法。
- 前記疎水性の有機溶媒が、炭素数6以上18以下の直鎖状または分岐状パラフィン類、粘度2cP以下の疎水性シリコンオイル、炭素数10以上18以下の脂肪族エーテル類およびエステル類から選択されることを特徴とする請求項3に記載の物質変換方法。
- 前記親水性の基質が前記糸状菌により親水性の化合物に変換されて、当該化合物が前記水層に蓄積されることを特徴とする請求項1または2に記載の物質変換方法。
- 前記親水性の基質が前記糸状菌により疎水性の化合物に変換されて、当該化合物が前記有機層に蓄積されることを特徴とする請求項3または4に記載の物質変換方法。
- 培養槽に、水溶液と、前記水溶液よりも比重の小さい第1の合成高分子微粒子と、前記第1の合成高分子微粒子とは疎水度およびゼータ電位の少なくとも一方が異なる第2の合成高分子微粒子と、糸状菌と、を添加し、前記水溶液から形成される水層の液面に、糸状菌/第1の合成高分子微粒子/第2の合成高分子微粒子の複合層を形成するステップと、
疎水性の基質および疎水性の有機溶媒を含む有機層を、前記複合層の上面に重層するステップと、
前記複合層中の糸状菌を生体触媒として、前記疎水性の基質を反応させるステップと、を含み、
前記第2の合成高分子微粒子は、ポリスチレン、ポリアクリレート、またはポリメチルメタクリレートを基体樹脂とし、三級アミノ基を陰イオン交換基として有するアニオン交換樹脂を含み、平均粒径が10μm〜500μm、水の接触角が75°以上、総イオン交換容量が1.0meq/g以上であることを特徴とする物質変換方法。 - 前記疎水性の基質が前記糸状菌により親水性の化合物に変換されて、当該化合物が前記水層に蓄積されることを特徴とする請求項7に記載の物質変換方法。
- 前記疎水性の基質が前記糸状菌により疎水性の化合物に変換されて、当該化合物が前記有機層に蓄積されることを特徴とする請求項7に記載の物質変換方法。
- 培養槽に、親水性の基質を含む水溶液と、前記水溶液よりも比重の小さい合成高分子微粒子と、糸状菌と、を添加し、前記水溶液から形成される水層の液面に、糸状菌/合成高分子微粒子の複合層を形成するステップと、
前記複合層中の糸状菌を生体触媒として、前記親水性の基質を反応させるステップと、を含み、
前記合成高分子微粒子は、ポリスチレン、ポリアクリレート、またはポリメチルメタクリレートを基体樹脂とし、三級アミノ基を陰イオン交換基として有するアニオン交換樹脂を含み、平均粒径が10μm〜500μm、水の接触角が75°以上、総イオン交換容量が1.0meq/g以上であることを特徴とする物質変換方法。 - 培養槽に、水溶液と、前記水溶液よりも比重の小さい合成高分子微粒子と、糸状菌と、を添加し、前記水溶液から形成される水層の液面に、糸状菌/合成高分子微粒子の複合層を形成するステップと、
疎水性の基質および有機溶媒を含む有機層を、前記複合層の上面に重層するステップと、
前記複合層中の糸状菌を生体触媒として、前記疎水性の基質を反応させるステップと、を含み、
前記合成高分子微粒子は、ポリスチレン、ポリアクリレート、またはポリメチルメタクリレートを基体樹脂とし、三級アミノ基を陰イオン交換基として有するアニオン交換樹脂を含み、平均粒径が10μm〜500μm、水の接触角が75°以上、総イオン交換容量が1.0meq/g以上であることを特徴とする物質変換方法。 - 培養槽に、水溶液と、糸状菌と、前記水溶液よりも比重の小さい第1の合成高分子微粒子と、前記第1の合成高分子微粒子とは疎水度およびゼータ電位の少なくとも一方が異なる第2の合成高分子微粒子と、を添加し、前記水溶液の水面に糸状菌/第1の合成高分子微粒子/第2の合成高分子微粒子の複合マットを形成するステップを含み、
前記第2の合成高分子微粒子は、ポリスチレン、ポリアクリレート、またはポリメチルメタクリレートを基体樹脂とし、三級アミノ基を陰イオン交換基として有するアニオン交換樹脂を含み、平均粒径が10μm〜500μm、水の接触角が75°以上、総イオン交換容量が1.0meq/g以上であることを特徴とするバイオリアクタの製造方法。 - 培養槽と、
前記培養槽に収容された水溶液と、
前記水溶液の液面に形成された複合マットと、を備え、
前記複合マットは、
糸状菌と、
前記水溶液よりも比重が小さい第1の合成高分子微粒子と、
前記第1の合成高分子微粒子とは疎水度およびゼータ電位の少なくとも一方が異なる第2の合成高分子微粒子と、を含み、
前記複合マットは、前記第1の合成高分子微粒子と、前記糸状菌および前記第2の合成高分子微粒子とが複合体となることにより、前記水溶液の液面に形成され、
前記第2の合成高分子微粒子は、ポリスチレン、ポリアクリレート、またはポリメチルメタクリレートを基体樹脂とし、三級アミノ基を陰イオン交換基として有するアニオン交換樹脂を含み、平均粒径が10μm〜500μm、水の接触角が75°以上、総イオン交換容量が1.0meq/g以上であることを特徴とするバイオリアクタ。
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