JP5763223B2 - 生薬抽出物を含有する退行性神経疾患の治療又は予防のための組成物 - Google Patents

Description

本発明は、生薬抽出物を含有する退行性神経疾患の予防又は治療用組成物であって、３.５：１の重量比（ｗ／ｗ）で混合された山薬(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ Ｒｈｉｚｏｍａ)及びウチワドコロ(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｎｉｐｐｏｎｉｃａ)を含有する組成物に関する。

［確認事項］
本研究は、大韓民国知識経済省戦略的Ｒ＆Ｄ企画局（ＯＳＰ）のＧｌｏｂａｌ Ｌｅａｄｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｐｒｏｇｒａｍに支援された（Ｎｏ．１００３９３０３）。

退行性神経疾患は、神経細胞(ニューロン)の漸進的な構造的、機能的な損失を意味する。退行性神経疾患は、通常神経系の特定部位に影響を及ぼして認知症、錐体外路疾患、小脳疾患、感覚障害、運動障害などの症状を伴う。また、同時に種々の部位が影響を受けると、複合的な症状が現われることもあり、患者が示す臨床症状によって診断をする。しかし、この場合、症状が多様であり、且つ互いに異なる疾患が共通的な臨床症状を示す場合が多く、診断が難しい(Ｓｏｃ. Ｓｃｉ. Ｍｅｄ. Ｖｏｌ. ４０. Ｎｏ.６， ｐｐ. ８４７-８５８, １９９５)。

退行性神経疾患発症の兆候は徐々に現われ、ほとんど加齢とともに発症する。一度発症すれば、退行性神経疾患は、死亡まで数年あるいは数十年にわたって持続的に進行する。家族歴による遺伝的影響が無視できないことが知られている。退行性神経疾患は、その臨床症状により、麻痺性認知症(アルツハイマー病など)、神経学的異常(ピック病など)、姿勢及び運動の異常(パーキンソン病など)、進行性運動失調症、筋萎縮及び筋肉衰弱、感覚及び運動障害に分類される(Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ, Ｖｏｌ.２, Ｎｏ.４, Ａｕｇｕｓｔ ２０１０ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ Ｂａｓｅｄ ｏｎ Ｍａｊｏｒ Ｒｉｓｋ Ｆａｃｔｏｒｓ Ｅｍｐｌｏｙｉｎｇ Ｍａｃｈｉｎｅ Ｌｅａｒｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ)。

１９８０年代に、神経栄養因子(Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ)が退行性神経疾患の治療可能性を有することが、アルツハイマー病の実験により提起された(Ｎａｔｕｒｅ. １９８７ Ｓｅｐ ３−９;３２９(６１３４):６５−８. Ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ ｎｅｕｒｏｎ ａｔｒｏｐｈｙ ａｎｄ ｓｐａｔｉａｌ ｍｅｍｏｒｙ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ ｉｎ ａｇｅｄ ｒａｔｓ ｂｙ ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ。)。アルツハイマー病として知られる基底前脳のニューロンの老化による欠損が、神経成長因子(ＮＧＦ)の側脳室投与により回復される。実験動物の記憶力向上が報告され、神経栄養因子(Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ)を使用して退行性神経疾患を治療しようとする研究が実施された。後続研究として、顔面神経と座骨神経を切開して運動ニューロンの機能を損傷させた後、神経栄養因子ファミリー(Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ ｆａｍｉｌｙ)の脳由来神経栄養因子(ＢＤＮＦ：Ｂｒａｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ)、ＮＴ−３(Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ−３)、ＮＴ−４(Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ−４)及び毛様体神経栄養因子(ＣＮＴＦ：Ｃｉｌｉａｒｙ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ)により損傷された運動ニューロンの機能が回復するという良好な結果を得た(Ｎａｔｕｒｅ. １９９２ Ｄｅｃ ２４−３１;３６０(６４０６):７５７−９. Ｂｒａｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｔｈｅ ｄｅａｔｈ ｏｆ ｍｏｔｏｒ ｎｅｕｒｏｎｓ ｉｎ ｎｅｗｂｏｒｎ ｒａｔｓ ａｆｔｅｒ ｎｅｒｖｅ ｓｅｃｔｉｏｎ。)。また、徐々に運動ニューロンの数と機能が失われる疾病を患う遺伝子組み換えマウス(ｗｏｂｂｌｅｒ)を用いた実験では、ＢＤＮＦとＣＮＴＦの投与により運動ニューロンの数を増加させて、その機能を向上させた(Ｓｃｉｅｎｃｅ. １９９４ Ａｕｇ １９;２６５(５１７５):１１０７−１０. Ａｒｒｅｓｔ ｏｆ ｍｏｔｏｒ ｎｅｕｒｏｎ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｗｏｂｂｌｅｒ ｍｉｃｅ ｃｏｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＣＮＴＦ ａｎｄ ＢＤＮＦ)。上記した実験の他に、運動ニューロン及び種々の感覚の病態モデルにおいて、神経栄養因子がニューロン及びそれらの機能を増加させ、実験動物の記憶、認知及び行動に関する障害の改善を示した。

このような前臨床実験結果に基いて、１９９０年代には、神経栄養因子をルーゲーリック病の治療に適用しようとする試みがあった。ルーゲーリック病は、運動ニューロンのみが選択的に死滅し、全身の麻痺とともに呼吸器の機能障害により死に至らしめる退行性神経疾患である。ＢＤＮＦが皮下投与又は蜘蛛膜下投与されたが、注射部位の痛みと消化器の副作用を示した。従って、前臨床実験に比べてより用量を減らして投与する必要があった。その結果、運動ニューロンの再生と機能向上効果は最小限で現われた(Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ. １９９３ Ｎｏｖ;１２４(１):６４−７２. Ｒｅｖｉｅｗ. Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｒａｔｉｏｎａｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｕｓｅ ｏｆ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎｓ ｉｎ ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ)。同様に、ルーゲーリック病患者にＣＮＴＦを注射した場合、発熱、注射部位の痛み、食欲不振など、ＢＤＮＦ投与時より重篤な副作用が見られ、それゆえ、ＣＴＮＦは制限された量で投与された。その結果、運動神経再生及び機能向上は有意なものでなかった。(Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ Ａｇｉｎｇ. １９９４ Ｍａｒ−Ａｐｒ;１５(２):２４９−５１. Ｒｅｖｉｅｗ Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ: ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｔｈｅ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎｓ ａｎｄ ｃｉｌｉａｒｙ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ)。ＢＤＮＦ、ＣＮＴＦなど神経栄養因子(Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ)を組み換えタンパク質の形態で生体内に注入し、中枢及び末梢神経系に到逹させる方法は、注入するタンパク質量に限界があった。ＮＧＦを使用してアルツハイマー病患者の治療を試みた臨床実験の場合、副作用、注入量の制限、薬物伝達、不明な薬物力学の問題があって、有意性ある結果を示すことができなかった。

失望的な臨床実験結果にもかかわらず、神経栄養因子(Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ)を利用した退行性神経疾患の治療が可能であるという実験的証拠が多数出されている。代表的には、ハンチントンタンパク質におけるｐｏｌｙＱの増加により、異常運動、人格変化、認知能力減少、早期死亡の症状が現われるハンチントン病の場合、多くの研究は、異常なハンチントンタンパク質の主な標的として、ＢＤＮＦに注目した。この理論は、病態実験動物及びハンチントン病患者の線条体におけるＢＤＮＦ量の減少により支持された(Ｓｃｉｅｎｃｅ. ２００１ Ｊｕｌ ２０;２９３(５５２９):４９３−８. Ｅｐｕｂ ２００１ Ｊｕｎ １４ Ｌｏｓｓ ｏｆ Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ＢＤＮＦ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｉｎ Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ'ｓ ｄｉｓｅａｓｅ)。

ところで、退行性神経疾患の治療のため、既存の方法と同様に、神経栄養因子(Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ)を組み換えタンパク質の形態で皮下または蜘蛛膜下に投与する方法を選択する場合、副作用により、投与量の減少と効果の減少が繰り返された。従って、２０００年代には、生体内で自ら生合成される神経栄養因子(Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ)の量を増加させる間接的な方法の神経栄養因子エンハンサー(Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ ｅｎｈａｎｃｅｒ)に対する研究が行われている(Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ. １９９９ Ｄｅｃ １０;１０(１８):２９８７−９７. Ｂｒａｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｒｉａｔａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ ｉｎ ａｎ ｅｘｃｉｔｏｔｏｘｉｃ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ'ｓ ｄｉｓｅａｓｅ，ａｓ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｂｙ ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ)。

山薬(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ Ｒｈｉｚｏｍａ)は、ヤマノイモ科(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａｃｅａｅ)に属する植物のナガイモ(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｂａｔａｔａｓ Ｄｅｃａｉｓｎｅ)またはヤマノイモ(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｔｈｕｎｂｅｒｇ)の周皮を除いた根茎(担根体)として、そのまま使用するかまたは蒸して乾かして使用する。韓国、中国及び日本に広く分布し、薬剤として使われた。滋養強壮、消化器障害、糖尿病、咳、肺疾患、腎臓機能強化などの薬効を有し、毒性及び副作用は発表された事がない。また、ウチワドコロ(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｎｉｐｐｏｎｉｃａ)は、ヤマノイモ科のつる性多年草であるブチェマ(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｎｉｐｐｏｎｉｃａ Ｍａｋｉｎｏ)の根茎である。韓国、中国及び日本に広く分布し、薬剤として使われた。血液循環をよくし、筋肉を緩くし、消化不良を解消し、尿がよく出るようにし、痰を除去し、マラリア発作の予防において効能を有し、毒性及び副作用は発表された事がない。

大韓民国登録特許第８５４６２１号公報は、ウチワドコロ、カエデドコロ、ナガイモ、ヤマノイモ及びオニドコロからなる群より選択される植物の抽出物を含有する末梢神経障害の予防及び治療用組成物を提供し、前記組成物が神経突起の成長を誘導すると共に内因性神経成長因子の分泌量を増加させることで、末梢神経障害の予防又は治療に効果的であることを開示している。

本発明者らは、前記大韓民国登録特許第８５４６２１号公報に記載されたウチワドコロ、カエデドコロ、ナガイモ、ヤマノイモ及びオニドコロから選択された植物の抽出物が、有意性ある神経突起の成長を誘導すると共に、内因性神経成長因子の分泌を増加させる効果があることを確認した。本発明者らは、これに基いて、実験動物の神経成長因子量をｉｎ ｖｉｖｏで増加させることにより、神経細胞増殖、神経突起形成促進及び認知能力を向上させる効果を有する生薬抽出物を研究した結果、前記生薬の各々または混合生薬の抽出物は、驚くべきことに、ほとんど同等な神経突起の成長を誘導すると共に内因性神経成長因子の分泌を増加させるが、山薬及びウチワドコロが選択的な特定比において非常に顕著な相乗作用を示すことを確認して、本発明を完成した。

従って、本発明は上述したような従来技術の問題点を解決するためになされたもので、その目的は、大韓民国登録特許第８５４６２１号公報に記載された生薬の中で、ニューロンの死滅防止及び再生を促進させる神経成長因子の生成と分泌を促進させて、神経細胞の増殖及び神経突起の形成を促進させることにより、認知能力の相乗的な向上効果を示す選択的生薬組成物を提供することにある。
本発明の他の目的は、前記生薬組成物を有効成分とする退行性神経疾患の予防または治療用医薬組成物及び健康機能食品を提供することにある。

前記目的を達成するため、本発明は、山薬(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ Ｒｈｉｚｏｍａ)とウチワドコロ(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｎｉｐｐｏｎｉｃａ)の３.５：１の重量比（ｗ／ｗ）で混合された抽出物を含有する退行性神経疾患の予防及び治療用組成物及び健康機能食品を提供する。

以下、本発明をより具体的に説明する。
本発明は、山薬(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ Ｒｈｉｚｏｍａ)とウチワドコロ(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｎｉｐｐｏｎｉｃａ)の３.５：１の重量比（ｗ／ｗ）で混合された抽出物を含有する退行性神経疾患の予防または治療用薬剤に関する。

山薬(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ Ｒｈｉｚｏｍａ)とウチワドコロ(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｎｉｐｐｏｎｉｃａ)の総重量に対して３.５：１の重量比(ｗ/ｗ)で混合された抽出物は、粗抽出物であり、好ましくは、５０％エタノールで抽出された抽出物である。

本発明の山薬とウチワドコロの生薬抽出物は、下記のように得ることができる。まず、山薬及びウチワドコロを各々洗浄及び乾燥した後、乾燥生薬を切断して切断生薬を調製した。その後、前記切断生薬の総重量の５倍量以上の５０％エタノールで、室温にて４８時間１回冷浸抽出した後減圧濃縮して、山薬とウチワドコロの３.５：１の重量比（ｗ／ｗ）で混合された生薬抽出物を得ることができる。

本発明は、退行性神経疾患の予防又は治療用医薬組成物の製造のための山薬とウチワドコロの３.５：１の重量比（ｗ／ｗ）で混合された生薬抽出物の使用を提供する。

本発明による退行性神経疾患は、アルツハイマー病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ハンチントン病、多発性硬化症、ギラン・バレー症候群、パーキンソン病、ルーゲーリック病、神経細胞の漸次的な死滅による麻痺性認知症及び進行性失調症により惹起された疾患を含む。

本発明において、退行性神経疾患の予防または治療用医薬製剤は、山薬とウチワドコロの３.５：１の重量比（ｗ／ｗ）で混合された生薬抽出物に、薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を添加して製剤化することができる。

本発明の医薬製剤を製剤化するために必要な生薬抽出物は、総重量に対して前記抽出物を０.０１〜８０％、好ましくは、１〜５０重量％で含む。

本発明の組成物に含有され得る担体、希釈剤又は賦形剤は、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルギン酸、ゼラチン、カルシウムリン酸塩、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、マイクロクリスタリンセルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウム又は鉱物油であり得る。

また、本発明の組成物は、各々通常の方法に従い、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップなどの経口剤、エアロゾール、外用剤、座剤または滅菌注射溶液の形態で剤形化して使用することができる。

特に医薬製剤は、一般的に使用される充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤などの希釈剤または希釈製剤を使用して調製することができる。経口投与のための固形医薬製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれる。固形医薬製剤は、前記生薬複合物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、澱粉、炭酸カルシウム、スクロース、ラクトース、またはゼラチンを添加して調剤することができる。また、前記賦形剤以外に、ステアリン酸マグネシウム、タルクのような潤滑剤を使用してもよい。液状医薬製剤は、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤を含む。一般的に用いられる単純希釈剤である水、リキッドパラフィン以外に、多様な希釈剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、清浄剤、保存剤などを含み得る。非経口投与のための医薬製剤には、滅菌溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤又は坐剤が含まれる。非水性溶剤及び懸濁剤には、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、オレイン酸エチルのような注射可能なエステルなどを使用することができる。坐剤には、ウィテップゾール(ｗｉｔｅｐｓｏｌ)、ポリエチレングリコール、ツイン(ｔｗｅｅｎ)６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどを使用することができる。

また、本発明は、山薬とウチワドコロの３.５：１の重量比で混合された生薬抽出物を有効成分として含有する医薬組成物を、薬学的に有効な量でヒトを含む哺乳動物に投与する、退行性神経疾患の治療方法を提供する。

山薬とウチワドコロの３.５：１の重量比で混合された生薬抽出物を含有する医薬組成物の投与量は、患者の年齢、性別、体重によるが、０.０１〜１０ｇ/ｋｇの量、好ましくは１〜５ｇ/ｋｇの量を、一日１回〜数回に分けて投与することができる。また、その投与量は、投与経路、疾病の程度、性別、体重、年齢、健康状態、食餌、注射時間、注射方法、排泄率などによって増減され得る。従って、前記投与量は、いかなる面でも本発明の範囲を限定するものではない。

本発明の山薬とウチワドコロの３.５：１の重量比（ｗ／ｗ）で混合された生薬抽出物を含有する医薬組成物は、ラット、マウス、畜牛、人間などの哺乳動物に様々な経路で投与され得る。投与の全経路は予想されることができ、例えば、経口、直腸または静脈、筋肉内、皮下、子宮内膜または脳室内注射により投与され得る。

本発明の山薬とウチワドコロの３.５：１の重量比で混合された生薬抽出物は、ほとんど毒性及び副作用を示したことがなく、安全で、予防目的で長期間服用することができる。

本発明者らは、山薬とウチワドコロの３.５：１の重量比で混合された生薬抽出物を用いて、実験動物の神経成長因子含量の増加による神経細胞増殖、神経突起形成促進及び認知能力向上における効果を検討した。そして、実験動物モデル又は細胞での実験により、山薬またはウチワドコロの単独抽出物、山薬とウチワドコロの他の混合比に比べて、顕著な相乗作用を見出した。

また、本発明は、退行性神経疾患の予防または改善のための健康機能食品を提供する。

ここで用いる「健康機能食品」なる語は、食品医薬品安全庁告示２００４−１２号に従い、人体に対する機能性及び安全性が認められた健康機能食品原料または成分に関する規定目録集に収載された健康食品のように、大韓民国の「２００２年健康機能食品に関する法律」に定義される食品を含む。

さらに詳しくは、本発明は、山薬とウチワドコロの３.５：１の重量比で混合された生薬抽出物と、食品学的に許容可能な食品添加剤を含む退行性神経疾患の予防または改善のための健康機能食品を提供する。

山薬とウチワドコロの３.５：１の重量比で混合された生薬抽出物を含む組成物は、退行性神経疾患の症状緩和のための薬物、食品及び飲料に利用され得る。たとえば、本発明の生薬抽出物を添加することができる食品は、飲料、ガム、茶、ビタミン複合剤及び補助食品を含む。薬物における使用には、生薬抽出物は、丸剤、散剤、顆粒、錠剤、カプセルまたは液剤の形態であり得る。

固形食品に適用される時、本発明の生薬抽出物は、食品の全重量の０.１〜１５重量％、好ましくは０.２〜１０重量％の量で用いられ得る。液状形態の場合、本発明の生薬抽出物は、液体１００ｍＬにつき０.１〜３０ｇ、好ましくは０.２〜５ｇの量で添加することができる。

液状の健康組成物には、必須成分である生薬成分を特定比で含むこと以外に、特に制限はない。典型的な飲料と同様に、液状の健康組成物は、さまざまな香味剤、天然炭水化物または他の添加剤をさらに含むことができる。

天然炭水化物の好ましい例は、ブドウ糖、果糖などの単糖類、マルトース、スクロースなどの二糖類、デキストリン、シクロデキストリンなどの多糖類、及びキシリトール、ソルビトール、エリトリトールなどの糖アルコールを含む。本発明において、有用な香味剤は、天然香味剤(タウマチン、ステビア抽出物(例えば、レバウディオサイドＡ、グリシルリジンなど))及び合成香味剤(サッカリン、アスパルテームなど)である。天然炭水化物は、液状の健康組成物１００ｍＬ当たり約１〜２０ｇ、好ましくは約５〜１２ｇの量で使用することができる。

さらに本発明の組成物は、様々な栄養剤、ビタミン、鉱物(電解質)、合成及び／または天然香味剤、着色剤及び充填剤(チーズ、チョコレートなど)、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使われる炭酸化剤などを含むことができる。天然果物ジュース及び果物ジュース飲料又は野菜飲料における使用のため、本発明の組成物は、果肉をさらに含むことができる。このような成分は、独立的にまたは組み合わせて使用することができる。前記添加剤の一般的な量は、あまり重要ではないが、本発明の組成物１００重量部当たり０〜約２０重量部である。

山薬とウチワドコロの３.５：１の重量比で混合された生薬抽出物は、生体内の神経成長因子(ＮＧＦ：Ｎｅｒｖｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ)量増加、神経細胞増殖の増加、神経突起形成促進及び認知能力向上において相乗効果を示す。従って、本発明の生薬抽出物は、退行性神経疾患の治療または予防のための医薬組成物及び健康食品に使用され得る。

図１は、実施例１の神経成長因子の分泌効果をＮＧＦ免疫組職化学染色法を用いて評価した結果を示す脳組職の海馬部位の写真である。

以下、実施例及び実験例により本発明を詳細に説明するが、下記実施例は本発明をより具体的に示すことを意図するものであり、添付のクレームに記載の本発明の範囲が下記実施例及び実験例に限定されるものではない。

＜実施例 1＞
本発明による山薬とウチワドコロの混合生薬抽出物の製造
韓国京東市場の漢方薬材商で乾燥された山薬(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ Ｒｈｉｚｏｍａ)とウチワドコロ(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｎｉｐｐｏｎｉｃａ)を購入した。不純物を除去し、カッターで粉砕して、山薬：ウチワドコロが３.５：１の重量比で混合した。生薬混合物２ｋｇに１０Ｌの５０％エタノール水溶液を添加して室温で４８時間撹拌しながらインキュベートした。生薬混合物を濾過により除去し、濾液を真空下濃縮して凍結乾燥し、混合生薬抽出物(粗抽出物)を得た(表１参照)。

＜比較例１及び比較例２＞ 生薬粗抽出物の製造
１．山薬粗抽出物の製造
実施例１で使われた山薬(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ Ｒｈｉｚｏｍａ)と同一の山薬を使用し、実施例１と同一の山薬２ｋｇを撹拌し、５０％エタノール水溶液１０Ｌを添加して室温で４８時間撹拌した。抽出、濾過、減圧濃縮した後、凍結乾燥により、最終的に山薬粗抽出物を得た(表２参照)。

２．ウチワドコロ粗抽出物の製造
実施例１で使われたウチワドコロ(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｎｉｐｐｏｎｉｃａ)と同一のウチワドコロ２ｋｇに、１０Ｌの５０％エタノール水溶液を添加して室温で４８時間撹拌した。抽出、濾過、減圧濃縮した後、凍結乾燥により、最終的にウチワドコロ粗抽出物を得た(表３参照)。

＜比較例３〜比較例１０＞
山薬及びウチワドコロの混合生薬粗抽出物の製造
前記実施例１で使われた山薬及びウチワドコロと同一の生薬を使用した。山薬とウチワドコロをカッターで粉砕して表４に記載した重量比で混合した。各混合物２ｋｇに１０Ｌの５０％エタノール水溶液を添加して、室温で４８時間撹拌しながらインキュベートした。生薬混合物は濾過により除去し、濾液を減圧濃縮した後、凍結乾燥して混合生薬抽出物(粗抽出物)を得た(表４参照)。

＜実験例１＞
生薬粗抽出物の神経成長因子の分泌増加効果
神経成長因子(ＮＧＦ)を生産するラット神経膠腫細胞株であるＣ６グリオーマ(Ｃ６ ｇｌｉｏｍａ)を使用して、実施例１による神経成長因子分泌の増加及び促進効能を確認した。この実験の対照群では、比較例１〜比較例１０を使用した。

Ｃ６細胞をＤＭＥＭ培地(５％ＦＢＳ、２ｍＭ Ｌ−ｇｌｕｔａｍｉｎｅ、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１ｍＭ ｓｏｄｉｕｍ ｐｙｒｉｕｖａｔｅ、５０μｇ ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ、１００Ｕ/ｍＬ ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ添加)を入れた２４−ウェル細胞培養プレートで、３７℃、５％ＣＯ_２下に培養した。培養された細胞を２×１０^５ｃｅｌｌｓ/ウェルの濃度に調整した後、本発明による実施例１、比較例１〜比較例１０を、１００、２５０、および５００μｇ／ｍＬで処理した。細胞を２日間培養した後、培地中のＮＧＦの濃度をＥＬＩＳＡを用いて測定した(表５参照)。

表５に示されるように、山薬及びウチワドコロの濃度依存的に、神経成長因子の濃度が増加した。また、山薬(比較例１)における神経成長因子濃度は、ウチワドコロ(比較例２)より増加し、前者はより優れた効果を示した。

実施例１(山薬：ウチワドコロ＝１５５：４５)では、比較例１(山薬２００)より２５％少ない濃度の山薬が注入されたが、各々同一濃度で神経成長因子含量は８.９〜１５.５％増加した。

また、実施例１における神経増殖因子の濃度は、山薬が７.７％多く注入された比較例５(山薬：ウチワドコロ＝１６７：３３、５：１)より約４.２〜１６.４％、山薬が１７.４％多く注入された比較例６(山薬：ウチワドコロ＝１８２：１８、１０：１)より８.９％〜１６.４％増加した。実施例１における神経増殖因子量は、山薬が１４.２％少なく注入された比較例４(山薬：ウチワドコロ＝１３３：６７、２：１)より４.４〜１２.９％増加した。実施例１は、他の比較例より神経成長因子含量の相乗的な増加を示した。

従って、山薬とウチワドコロの３.５：１の重量比で混合された抽出物を含有する医薬組成物は、他の混合比に比べて神経成長因子濃度を効果的に増加させることができることが示された。それゆえ、退行性神経疾患の治療又は予防に利用され得る。

以下、山薬とウチワドコロの生薬抽出物における神経成長因子の含量による神経細胞増殖、神経突起形成促進及び認知能力の向上効果を比較実験し、退行性神経疾患の治療又は予防における有用性を論ずる。

＜実験例２＞
生薬抽出物の認知能力向上効果
ＩＣＲ雄マウス(６週齢、２５−２８ｇ)を(株)大韓バイオリンク(Ｃｈｕｎｇｂｕｋ、Ｋｏｒｅａ)から供給を受けて慶煕大学校薬学大学のクリーンケージ(ｃｌｅａｎ ｃａｇｅ)で７日間飼育して順応させて使用した。水と飼料((株)大韓バイオリンク、Ｃｈｕｎｇｂｕｋ、Ｋｏｒｅａ)は自由に摂取させた。温度(２２±２℃)、湿度(５３±３％)及び明暗周期(１２時間)は自動的に調節されるようにした。

各群当たりマウスを１０匹ずつ割り当てた。対照群では、生理食塩水をマウス体重ｋｇ当たり５ｍＬを経口投与した。処理群では、生理食塩水に溶かした実施例１、比較例１〜比較例１０を、各々１０、１００ｍｇ/ｋｇ経口投与した。経口投与は１日１回行い、最後の経口投与の１時間後、受動回避試験(ｐａｓｓｉｖｅ ａｖｏｉｄａｎｃｅ ｔｅｓｔ)を次のように実施した。

受動回避試験は、二つのつながった(７×７ｃｍのスライディングドアを隔壁に設置)同一サイズの区画とステンレススチールバー(ｂａｒ)の底がある変形されたシャトル(ｓｈｕｔｔｌｅ)を使用して実施された。右側区画(ショック区画)は黒く塗って暗室を作った。左側区画は、天井にプレキシガラス(Ｐｌｅｘｉｇｌａｓ)カバー上に設置された電球(２３Ｖ; ５Ｗ)で照明した。第一日は、明るい部屋は電球をつけて、暗い部屋は電球を消しておく。本発明者らは、マウスを明るい区画に１０秒間留まらせた後、ギロチンドア(ｇｕｉｌｌｏｔｉｎｅ ｄｏｏｒ)を開いて、マウスが暗い部屋に入って行くまでの時間を測定した。マウスが暗い部屋に移動すれば、ギロチンドアが閉じて、足裏に０.３ｍＡの電気刺激が３秒間与えられた。２４時間後、同様な方法で受動回避試験を行い、明るい部屋に留まる時間(Ｌａｔｅｎｃｙ ｔｉｍｅ)を測定した。その結果は、表６に示した。

表６に示されるように、山薬(比較例１)投与群では、ウチワドコロ(比較例２)投与群より記憶保持時間が増加したが、実施例１(山薬：ウチワドコロ＝１５５：４５で)は、比較例１(山薬２００)より山薬含量を２５％少なく投与したにもかかわらず、記憶保持時間が８.９〜２２.２％増加した。

また、実施例１は、山薬を７.７％多く投与した比較例５(山薬：ウチワドコロ＝１６７：３３、５：１)より４.２〜１９％、山薬を１７.４％多く投与した比較例６(山薬：ウチワドコロ＝１８２：１５、１０：１)より７.３％〜２５.６％記憶保持時間が増加した。実施例１による記憶保持時間は、山薬を１４.２％少なく投与した比較例４(山薬：ウチワドコロ＝１３３：６７、２：１)より８.９〜１９％増加した。他の比較例より記憶保持時間が有意に増加することが示された。

従って、山薬とウチワドコロの３.５：１の重量比で混合された抽出物を含有する医薬組成物は、他の混合比に比べて認知能力改善効果を有することが示された。

＜実験例３＞
本発明による生薬抽出物のニューロン生成促進効果
実験例２の試験終了後、各群のマウスから海馬(ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ)を分離した。分離された海馬を過酸化水素で脱水した後、１次抗体として５−ｂｒｏｍｏ−２−ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ(ＢｒｄＵ、ｓａｎｔａ ｃｒｕｚ、ｒａｔ ｏｒｉｇｉｎ １：５００)を一晩反応させた。その後、２次抗体としてｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ ａｎｔｉ−ｒａｔ(ｖｅｃｔｏｒ、ｇｏａｔ ｏｒｉｇｉｎ)を使用し、ＡＢＣ反応(ＡＢＣ ｋｉｔ、ｖｅｃｔｏｒ)後、ジアミノベンジジン(Ｄｉａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅ)を使用することにより発色させた。ニューロン細胞生成促進効果は、海馬の歯状回(ｄｅｎｔａｔｅ ｇｙｒｕｓ)領域のＢｒｄＵ陽性細胞数を数えることにより確認した。その結果は表７に示す。

表７に示されるように、海馬の歯状回領域におけるＢｒｄＵ陽性細胞数を測定した時、山薬(実施例１)では、ウチワドコロ(比較例２)よりＢｒｄＵ陽性細胞数が増加することが示された。実施例１(山薬：ウチワドコロ＝１５５：４５)は、比較例１(山薬２００)より山薬含量を２５％少なく投与したにもかかわらず、ＢｒｄＵ陽性細胞数が約２５％以上増加した。

また、実施例１では、山薬を７.７％多く投与した比較例５、山薬を１７.４％多く投与した比較例６より、ＢｒｄＵ陽性細胞数が約２５％以上増加した。実施例１では、山薬を１４.２％少なく投与した比較例４より、ＢｒｄＵ陽性細胞数が約２０％以上増加した。他の比較例よりＢｒｄＵ陽性細胞数の有意な増加が示された。

従って、山薬とウチワドコロの３.５：１の重量比で混合された抽出物を含有する医薬組成物は、他の混合比に比べて歯状回(ｄｅｎｔａｔｅ ｇｙｒｕｓ)領域における神経細胞生成促進効果を有することが示された。

＜実験例４＞
生薬抽出物の神経細胞分化及び神経突起成長促進効果
実験例２の試験終了後、各群のマウスから海馬(ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ)を分離した。分離された海馬を過酸化水素で脱水した後、１次抗体としてｄｏｕｂｌｅｃｏｒｔｉｎ(ＤＣＸ、ｓａｎｔａ ｃｒｕｚ、ｇｏａｔ ｏｒｉｇｉｎ １：５００)を一晩反応させた。その後、２次抗体としてｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ ａｎｔｉ−ｇｏａｔ(ｖｅｃｔｏｒ、ｈｏｒｓｅ ｏｒｉｇｉｎ)を使用し、ＡＢＣ反応(ＡＢＣ ｋｉｔ、ｖｅｃｔｏｒ)後、ジアミノベンジジン(Ｄｉａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅ)を使用することにより発色させた。細胞分化及び神経突起成長促進効果は、海馬の歯状回(ｄｅｎｔａｔｅ ｇｙｒｕｓ)領域におけるＤＣＸ陽性細胞数を数えることにより確認した。その結果は、表８に示した。

表８に示されるように、海馬の歯状回領域において、山薬(実施例１)では、ウチワドコロ(比較例２)よりＤＣＸ陽性細胞数及びＤＣＸ陽性神経突起の長さが増加した。実施例１(山薬：ウチワドコロ＝１５５：４５)では、比較例１(山薬２００)より山薬含量を２５％少なく投与したにもかかわらず、ＤＣＸ陽性細胞数が約２５〜４０％増加し、ＤＣＸ陽性神経突起の長さが１.６〜１７.３％増加した。

また、実施例１では、比較例５(実施例１より山薬を７.７％多く投与)よりＤＣＸ陽性細胞数が約１８〜２７％増加し、ＤＣＸ陽性神経突起の長さが３.３〜９.２％増加した。実施例１では、比較例６(実施例１より山薬を１７.４％多く投与)よりＤＣＸ陽性細胞数が約２２.８〜３２.６％増加し、ＤＣＸ陽性神経突起の長さが３.３〜１０％増加した。実施例１では、比較例４(実施例１より山薬を１４.２％少なく投与)よりＤＣＸ陽性細胞数が約２０〜３０％増加し、ＤＣＸ陽性神経突起の長さが１１〜１８％増加した。他の比較例よりＤＣＸ陽性細胞数及びＤＣＸ陽性神経突起の長さが有意に増加することが示された。

従って、山薬とウチワドコロの３.５：１の重量比で混合された抽出物を含有する医薬組成物は、他の混合比に比べて歯状回(ｄｅｎｔａｔｅ ｇｙｒｕｓ)領域における神経細胞分化及び神経突起の成長促進効果を有することが示された。

＜実験例５＞
生薬抽出物の生体内神経成長因子の分泌促進効果
実験例２の試験終了後、対照群及び混合抽出物(山薬：ウチワドコロ＝３.５：１の抽出物)を投与した処理群のマウスから、海馬(ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ)を分離した。１次抗体として抗神経成長因子(ＮＧＦ、ａｂｃａｍ、ｒａｂｂｉｔ ｏｒｉｇｉｎ １：５００)を一晩反応させた後、２次抗体としてｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ ａｎｔｉ−ｒａｔ(ｖｅｃｔｏｒ、ｇｏａｔ ｏｒｉｇｉｎ)を使用した。ＡＢＣ反応(ＡＢＣ ｋｉｔ、ｖｅｃｔｏｒ)後、ストレプトアビジン(ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ)を使用することにより蛍光発色させた。神経成長因子の分泌促進効果は、海馬の門(ｈｉｌｕｓ)領域のＮＧＦ陽性細胞の測定により確認した。その結果は、図１に示す。

図１に示されるように、実施例１の生薬抽出物は、海馬において、有意な神経成長因子分泌促進効果を有する。

従って、山薬とウチワドコロの３.５：１の重量比で混合された生薬組成物を含有する本発明の医薬組成物は、他の混合比に比べて相乗効果を有する。それゆえ、本発明の医薬組成物は、アルツハイマー病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ハンチントン病、多発性硬化症、ギラン・バレー症候群、パーキンソン病、ルーゲーリック病、神経細胞の漸次的な死滅による麻痺性認知症、進行性失調症から惹起された疾患、姿勢及び運動の異常、進行性運動失調症、筋萎縮及び筋肉衰弱、感覚及び運動障害などを含む退行性神経疾患の予防または治療に利用される得る。

ここで、実施例１に開示された生薬抽出物を含有する組成物を、処方例によりさらに詳細に述べる。クレームを限定する意図ではなく、具体的に説明するものである。

処方例１．注射製剤の製造
実施例１の抽出物.............................. ..１００ｍｇ
メタ重亜硫酸ナトリウム.......................... .３.０ｍｇ
メチルパラベン............................... ....０.８ｍｇ
プロピルパラベン............................... ..０.１ｍｇ
注射用滅菌蒸溜水................................. 適量
前記成分を混合し、滅菌水を加えて全容量を２ｍＬとした後、２ｍＬ容量のアンプルに充填して滅菌し、注射剤とする。

処方例２．錠剤の製造
実施例１の抽出物.................................２００ｍｇ
乳糖.............................................１００ｍｇ
澱粉.............................................１００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム..........................適量
前記成分を混合し、錠剤化方法により圧縮して錠剤とする。

処方例３．カプセル剤の製造
実施例１の抽出物.............................. ..１００ｍｇ
乳糖.............................................５０ｍｇ
澱粉.............................................５０ｍｇ
タルク......................................... ...２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム..........................適量
前記成分を混合し、通常の方法によりゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を得る。

処方例４．液剤の製造
実施例１のエタノール抽出物.......................１０００ｍｇ
砂糖.............................................２０ｇ
異性化糖... ....................................２０ｇ
レモン香料.......................................適量
精製水を加えて全容量.............................１００ｍＬ
前記成分を混合して１００ｍＬの茶色ボトルに充填し、滅菌して液剤を得る。

Claims (5)

1. 有効成分として、山薬(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ Ｒｈｉｚｏｍａ)とウチワドコロ(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｎｉｐｐｏｎｉｃａ)の３.５:１の重量比（ｗ／ｗ）で混合された生薬抽出物と、薬学的に許容可能な担体を含むことを特徴とする、退行性神経疾患の予防または治療用医薬組成物。
2. 前記退行性神経疾患は、アルツハイマー病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ハンチントン病、多発性硬化症、ギラン・バレー症候群、パーキンソン病、ルーゲーリック病、神経細胞の漸次的な死滅による麻痺性認知症及び進行性失調症により惹起された疾患からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１に記載の退行性神経疾患の予防または治療用医薬組成物。
3. 山薬(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ Ｒｈｉｚｏｍａ)とウチワドコロ(Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｎｉｐｐｏｎｉｃａ)の３.５:１の重量比（ｗ／ｗ）で混合された生薬抽出物を含有することを特徴とする、退行性神経疾患の予防または改善用健康機能食品組成物。
4. 前記生薬抽出物は、５０％エタノールを用いて抽出した粗抽出物であることを特徴とする、請求項３に記載の健康機能食品組成物。
5. 前記生薬抽出物は、散剤、顆粒、錠剤、カプセル、シロップ剤及び飲料からなる群より選択される剤形に製造されることを特徴とする、請求項３に記載の健康機能食品組成物。