JP5762691B2 - 発酵によるアスタキサンチン製造方法 - Google Patents
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Description
(1)アスタキサンチン及びカンタキサンチンを同時に生産する細菌をビオチン含有培地で培養する工程を含み、ビオチン非含有培地における培養終了後の培養物と比較して、培養終了後の培養物におけるアスタキサンチンに対するカンタキサンチンの生産濃度の比率が低いことを特徴とする、アスタキサンチンを含むカロテノイドを製造する方法。
(2)ビオチンの培地当たりの濃度が0.001mg/L〜50mg/Lであることを特徴とする、(1)記載の方法。
(3)培養終了後の培養物におけるアスタキサンチンに対するカンタキサンチンの生産濃度の比率が25質量%以下であることを特徴とする、(1)記載の方法。
(4)培養終了後の培養物におけるグルコン酸の生成濃度が30g/L以下であることを特徴とする、(1)記載の方法。
(5)培養において、培養物中の溶存酸素濃度を1ppm以上に制御することを特徴とする、(1)記載の方法。
(7)培養において、培養物中の溶存酸素濃度を1ppm以上に制御し、培養終了後の培養物におけるアスタキサンチンに対するカンタキサンチンの生産濃度の比率が25質量%以下であることを特徴とする、(1)記載の方法。
(8)培養において、培養物中の溶存酸素濃度を2ppm以上に制御し、培養終了後の培養物におけるアスタキサンチンに対するカンタキサンチンの生産濃度の比率が8質量%以下であることを特徴とする、(1)記載の方法。
(9)培養において、培養物中の溶存酸素濃度を段階的又は連続的に高くなるように制御することを特徴とする、(1)記載の方法。
(10)培養中期の培養物中の初期溶存酸素濃度を1〜2.5ppmに制御し、且つ溶存酸素濃度を段階的又は連続的に高くし、培養終了後の培養物におけるアスタキサンチンに対するカンタキサンチンの生産濃度の比率が25質量%以下であることを特徴とする、(1)記載の方法。
(12)細菌がParacoccus属に属する細菌であることを特徴とする、(1)記載の方法。
(13)細菌がPHB生産能を低下させた変異株であることを特徴とする、(1)記載の方法。
(14)細菌がグルコン酸生産能を低下させた変異株であることを特徴とする、(1)記載の方法。
(15)細菌が、16SリボソームRNAに対応するDNAの塩基配列が配列番号1記載の塩基配列と実質的に相同である細菌であることを特徴とする、(1)記載の方法。
(17)(1)記載の方法により製造されたアスタキサンチンを含むカロテノイドを含有する飼料用カロテノイド組成物であって、製造されたカロテノイドにおけるアスタキサンチンに対するカンタキサンチンの比率が25質量%以下であることを特徴とする、前記組成物。
(18)製造されたアスタキサンチンを含むカロテノイドにおけるPHB含量が30質量%以下であることを特徴とする、(17)記載の飼料用カロテノイド組成物。
(19)(1)記載の方法により製造されたアスタキサンチンを含むカロテノイドを含有する食品用カロテノイド組成物であって、製造されたカロテノイドにおけるアスタキサンチンに対するカンタキサンチンの比率が8質量%以下であることを特徴とする、前記組成物。
(旧名称:通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所)
〒305-8566
茨城県つくば市東1丁目1番地1中央第6
識別のための表示:E-396
受託番号:FERM BP-4283
原寄託日:平成5年(1993年)4月27日
識別のための表示:A-581-1
受託番号:FERM BP-4671
原寄託日:平成6年(1994年)5月20日
以下の組成の培地(シュークロース30g/L、コーンスティープリカー30g/L、リン酸二水素カリウム1.5g/L、リン酸水素二ナトリウム12水和物3.8g/L、塩化カルシウム2水和物5.0g/L、硫酸マグネシウム7水和物0.7g/L、硫酸鉄7水和物0.3g/L、pH7.2)100mlを、500ml容量の綿栓付き三角フラスコに入れ、121℃で15分間オートクレーブ殺菌し、シード用フラスコ培地を7本調製した。
以下の組成の培地(シュークロース30g/L、コーンスティープリカー30g/L、リン酸二水素カリウム1.5g/L、リン酸水素二ナトリウム12水和物3.8g/L、塩化カルシウム2水和物5.0g/L、硫酸マグネシウム7水和物0.7g/L、硫酸鉄7水和物0.3g/L、pH7.2)100mlを、500ml容量の綿栓付き三角フラスコに入れ、121℃で20分間オートクレーブ殺菌し、シード用フラスコ培地を8本調製した。
Paracoccus carotinifaciens E-396株(FERM BP-4283)をN-メチル-N'-ニトロ-N-ニトロソグアニジンで変異処理し、赤色の色調が濃いコロニーを選択した。選択された株の培養液中のPHB濃度及びカロテノイド濃度を測定し、PHB生産能が低く、且つアスタキサンチン生産能が高い変異株LP-26株を選択した。
培養中期の初期溶存酸素濃度を2ppmに制御し、40時間2ppmを維持した後、溶存酸素濃度の制御を2.5ppmにシフトし、培養終了時まで2.5ppmを維持した。すなわち、溶存酸素濃度を、培養開始後0〜8時間では飽和濃度から成り行きで2ppmまで低下させ、8〜48時間では2ppmに制御し、48〜140時間では2.5ppmに制御した。
培養中期の初期溶存酸素濃度を1ppmに制御し、8時間1ppmを維持した後、1時間に0.1ppmずつ制御濃度を上げ、40時間かけて5ppmまで溶存酸素濃度を上昇させ、その後は培養終了まで5ppmを維持した。すなわち、溶存酸素濃度を、培養開始後0〜9時間では飽和濃度から成り行きで1ppmまで低下させ、9〜17時間では1ppmに制御し、17〜57時間では1ppmから1時間に0.1ppmずつ5ppmまで上昇させ、57〜140時間では5ppmに制御した。
培養中期の初期溶存酸素濃度を3ppmに制御し、50時間3ppmを維持した後、溶存酸素濃度の制御を3.5ppmにシフトし、培養終了時まで3.5ppmを維持した。すなわち、溶存酸素濃度を、培養開始後0〜7時間では飽和濃度から成り行きで3ppmまで低下させ、7〜57時間では3ppmに制御し、57〜140時間では3.5ppmに制御した。
培養中期の初期溶存酸素濃度を2ppmに制御し、4時間2ppmを維持した後、2時間に0.1ppmずつ制御濃度を上げ、100時間かけて7ppmまで溶存酸素濃度を上昇させ、その後は培養終了まで7ppmを維持した。すなわち、溶存酸素濃度を、培養開始後0〜8時間では飽和濃度から成り行きで2ppmまで低下させ、8〜12時間では2ppmに制御し、12〜112時間では2ppmから2時間に0.1ppmずつ7ppmまで上昇させ、112〜140時間では7ppmに制御した。
Paracoccus carotinifaciens E-396株(FERM BP-4283)をN-メチル-N'-ニトロ-N-ニトロソグアニジンで変異処理し、赤色の色調が濃いコロニーを選択した。選択した菌株を試験管で培養し、培養液のpH低下が少なく、培養液の赤色が濃い変異株を選抜した。選抜された変異株の試験管培養液中のグルコン酸濃度及びカロテノイド濃度を測定し、グルコン酸生産能が低く、且つアスタキサンチン生産能が高い変異株LG-7株を選択した。
培養中期の初期溶存酸素濃度を2.5ppmに制御し、35時間2.5ppmを維持した後、溶存酸素濃度の制御を3ppmにシフトし、培養終了時まで3ppmを維持した。すなわち、溶存酸素濃度を、培養開始後0〜8時間では飽和濃度から成り行きで2.5ppmまで低下させ、8〜43時間では2.5ppmに制御し、43〜120時間では3ppmに制御した。
培養中期の初期溶存酸素濃度を3.5ppmに制御し、4時間3.5ppmを維持した後、4時間に0.1ppmずつ制御濃度を上げ、60時間かけて5ppmまで溶存酸素濃度を上昇させ、その後は培養終了まで5ppmを維持した。すなわち、溶存酸素濃度を、培養開始後0〜7時間では飽和濃度から成り行きで3.5ppmまで低下させ、7〜11時間では3.5ppmに制御し、11〜71時間では3.5ppmから4時間に0.1ppmずつ5ppmまで上昇させ、71〜120時間では5ppmに制御した。
以下の組成の培地(シュークロース20g/L、コーンスティープリカー5g/L、リン酸二水素カリウム0.54g/L、リン酸水素二カリウム2.78g/L、塩化カルシウム2水和物5g/L、硫酸マグネシウム7水和物0.7g/L、硫酸鉄7水和物3g/L、pH7.2)100mlを、500ml容量の綿栓付き三角フラスコに入れ、121℃で20分間オートクレーブ殺菌し、シード用フラスコ培地を調製した。
Paracoccus属細菌A-581-1株(FERM BP-4671)を紫外線照射により変異処理し、赤色の色調が濃いコロニーを選択した。選択された株の培養液中のカロテノイドを分析し、アスタキサンチン生産性の向上した変異株K-185株を選択した。
Claims (8)
- アスタキサンチン及びカンタキサンチンを同時に生産する、遺伝子組換え体ではないパラコッカス(Paracoccus)属に属する細菌を、0.005〜50mg/Lの培地当たりの濃度のビオチンを含有するが、酵母エキスを含有しない培地で培養する工程を含み、培養において、培養物中の溶存酸素濃度を3ppm以上に制御するか、又は培養物中の初期溶存酸素濃度を2〜3ppmに制御した後、培養物中の溶存酸素濃度を3.5ppm以上まで段階的又は連続的に高くし、培養終了後の培養物におけるアスタキサンチンに対するカンタキサンチンの生産濃度の比率が8.0質量%以下であることを特徴とする、アスタキサンチンを含むカロテノイドを製造する方法。
- 培養終了後の培養物におけるグルコン酸の生成濃度が30g/L以下であることを特徴とする、請求項1記載の方法。
- 培養終了後の培養物における乾燥細胞当たりのポリ-β-ヒドロキシ酪酸(PHB)含量が30質量%以下であることを特徴とする、請求項1記載の方法。
- 培養において、培養物中の溶存酸素濃度を、培養中期に入ったときから2〜50時間のタイミングで段階的又は連続的に高くなるように制御することを特徴とする、請求項1記載の方法。
- 細菌がPHB生産能を低下させた変異株であることを特徴とする、請求項1記載の方法。
- 細菌がグルコン酸生産能を低下させた変異株であることを特徴とする、請求項1記載の方法。
- 細菌が、16SリボソームRNAに対応するDNAの塩基配列が配列番号1記載の塩基配列と実質的に相同である細菌であることを特徴とする、請求項1記載の方法。
- 細菌が、E-396株(FERM BP-4283)若しくはA-581-1株(FERM BP-4671)又はそれらの変異株であることを特徴とする、請求項1記載の方法。
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