JP5703086B2 - 細胞外に金属化合物結合能を提示するレポーターベクター - Google Patents
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Description
1つの実施形態に従う、レポーターベクターは、レポーター遺伝子として細胞外に提示される金属化合物結合ペプチドをコードする塩基配列を含む。この構成により、レポーターベクターは、プロモーター活性に応じて、金属化合物結合ペプチドをレポーターとして細胞外に提示する。その結果、細胞外に提示された金属化合物結合ペプチドに、金属化合物が特異的に結合および/または集積することが可能となる。これにより、細胞が標識される。このように標識された細胞は、結合するべき金属化合物の種類に依存して、選択された検出方法により検出できる。即ち、金属化合物の種類により、例えば、磁気共鳴装置(MRI)や陽電子放射断層撮影装置(PET)や単一光子放射断層撮影装置(SPECT)コンピュータ断層撮影装置(CT)などの画像診断装置により検出が可能となる。
例えば、細胞外に提示可能な金属化合物結合ペプチドは、このペプチドがコードされる遺伝子から転写および翻訳されること、細胞膜に輸送されること、および細胞膜に固定されることを含む過程を介して細胞外に提示されてよい。また、当該ペプチドは、遺伝子からの転写翻訳に加えて、更に任意の修飾を受けてもよい。
金属化合物結合ペプチドは、特定の金属化合物に対して特異的に結合するペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチドおよび/またはタンパク質であればよい。便宜上、ペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質を総称して「ペプチド」と呼ぶ。金属化合物結合ペプチドと、これと特異的に結合する金属化合物は、結合対と解されてよい。
細胞において産生されたペプチド、即ち、遺伝子の転写翻訳および任意に修飾されたペプチドは、細胞膜に輸送される。細胞膜への輸送は、例えば、シグナル・ペプチドを利用すればよい。シグナル・ペプチドの例としては、イムノグロブリンκ鎖のリーダー・ペプチド、プレプロアルブミンのリーダー・ペプチド、プレIgG軽鎖のリーダー・ペプチド、アセチルコリン受容体γサブユニット前駆体のリーダー・ペプチド、ポリヒスチジンやポリバリンをコードする塩基配列などが挙げられる。しかしながらシグナル・ペプチドは、これらに限定されるものではない。
上述のように、細胞外への金属化合物結合ペプチドの提示は、例えば、細胞において金属化合物結合ペプチドをコードする塩基配列に基づいて産生されたペプチドが細胞膜に輸送されて細胞膜に固定されることにより達成される。
1つの実施形態に従う、レポーターベクターは、特定の条件に応じてプロモーター活性を示す塩基配列を含む。この塩基配列は、その下流に機能的に結合されたレポーター遺伝子を条件に応じて発現させるように構成された塩基配列であればよい。
1つの実施形態に従う、レポーターベクターは、その上流に機能的に結合されたレポーター遺伝子について、条件に応じて開始された転写を終結するように構成された塩基配列を含む。
1つの実施形態に従うレポーターベクターは、特定の条件に応じてプロモーターが活性化することにより、レポーターペプチドを産生し、細胞外に金属化合物結合性を提示する。
更なるもう1つの実施形態に従うレポーター遺伝子の塩基配列の例を、配列番号10に示す。当該レポーター遺伝子は、イムノグロブリンκ鎖のリーダー・ペプチドをコードする塩基配列と、抗Gd−DTPA一本鎖抗体ペプチドをコードする塩基配列と、PDGFRのアンカー・ペプチドをコードする塩基配列を、機能的に連結して作製したGd−DTPA結合一本鎖抗体ペプチドである。
1つの実施形態に従うレポーターベクターは、意図される細胞に送達され、検出しようとする条件においてレポーター遺伝子を発現することが可能であればよい。従って、そのような構成が可能である限り、レポーター遺伝子構築物と解されてもよい。即ち、当該レポーター遺伝子構築物は、細胞に導入され、導入された細胞の状態または環境に依存して活性化される塩基配列のプロモーター活性によって発現が調節されたレポーター遺伝子を含み、条件に応じてレポーター遺伝子を発現し、その結果産生されたれレポーターペプチドが標識として細胞外に提示され、金属化合物結合能を示すように構成されればよい。
使用例1 検出方法
実施形態に従うレポーターベクターは、特定の状況にある細胞をインビトロおよびインビポにおいて検出するために使用することが可能である。
(1)細胞を含む検出対象に対して、特定の条件に応じてプロモーター活性を示す塩基配列と、細胞外に提示される金属化合物結合ペプチドをコードする塩基配列と、転写終結シグナルをコードする塩基配列とを上流から下流に向けてこの順番で含む細胞外に金属化合物結合能を提示するレポーターベクターを取り込ませることと、
(2)前記細胞外に金属化合物結合ペプチドを提示させることと、
(3)前記金属化合物結合ペプチドに対して、前記金属化合物結合ペプチドと結合対を形成可能な金属を接触させることと、
(4)前記金属化合物結合ペプチドに結合した金属を検出することと、
を含む特定の条件を有する細胞を検出する方法である。
上述した何れのレポーターベクターも、上記のような検出において使用される検出剤または検出用組成物として提供されてよい。
実施形態に従うレポーターベクターは、特定の状況にある細胞をインビトロおよびインビポにおいて検出するために使用することが可能である。
(1)細胞を含む検査対象に、特定の条件に応じてプロモーター活性を示す塩基配列と、細胞外に提示される金属化合物結合ペプチドをコードする塩基配列と、転写終結シグナルをコードする塩基配列とを上流から下流に向けてこの順番で含む細胞外に金属化合物結合能を提示するレポーターベクターを取り込ませることと、
(2)前記細胞外に金属化合物結合ペプチドを提示させることと、
(3)前記細胞に対して、前記金属化合物結合ペプチドと結合対を形成可能な金属化合物を接触させることと、
(4)前記金属化合物結合ペプチドに結合した金属化合物を検出することと、
(5)前記(4)における金属化合物の検出結果に基づいて検査対象が特定の条件の細胞を有すると診断すること、
を含む。
更なる実施形態に従うと検査対象における疾患の診断方法が提供される。この使用例は特に個体について疾患を診断するために有用である。
(1)検査対象に含まれる細胞内に、特定の条件に応じてプロモーター活性を示す塩基配列と、細胞外に提示される金属化合物結合ペプチドをコードする塩基配列と、転写終結シグナルをコードする塩基配列とを上流から下流に向けてこの順番で含む細胞外に金属化合物結合能を提示するレポーターベクターを取り込ませることと、
(2)前記細胞外に金属化合物結合ペプチドを提示させることと、
(3)前記細胞に対して、前記金属化合物結合ペプチドと結合対を形成可能な金属化合物を接触させることと、
(4)前記金属化合物結合ペプチドに結合した金属化合物を検出することと、
(5)前記(4)における金属化合物の検出結果に基づいて検査対象における前記疾患について診断すること、
を含む。
上述した何れのレポーターベクターも、上記のような診断において使用される診断剤または診断用組成物として提供されてよい。
実施形態に従うレポーターベクターは、上述において診断方法1および診断方法2を例として記載するような診断方法において利用することに加えて、治療方法としても使用することが可能である。
(1)検査対象に含まれる細胞内に、特定の条件に応じてプロモーター活性を示す塩基配列と、細胞外に提示される金属化合物結合ペプチドをコードする塩基配列と、転写終結シグナルをコードする塩基配列とを上流から下流に向けてこの順番で含む細胞外に金属化合物結合能を提示するレポーターベクターを取り込ませることと、
(2)前記細胞外に金属化合物結合ペプチドを提示させることと、
(3)前記細胞に対して、前記金属化合物結合ペプチドと結合対を形成可能な金属化合物を接触させることと、
(4)前記金属化合物結合ペプチドに結合した金属化合物にエネルギーを与えて、レポーターペプチドを発現した細胞を特異的に死滅することと、
を含む。
上述した何れのレポーターベクターも、上記のような治療において使用される治療剤または治療用組成物として提供されてよい。
抗Gd−DTPAモノクローナル抗体(抗Gd-DTPA mAb)の軽鎖可変領域(VL)と重鎖可変領域(VH)をリンカー・ペプチドで連結して抗Gd−DTPA一本鎖抗体(GdscFv)のアミノ酸配列をデザインした(配列番号1)。このアミノ酸配列をもとに、塩基配列をヒトのコドン使用頻度に最適化し、Gd−scFv遺伝子を化学合成した(配列番号2)。
細胞外のGd−DTPAを捕捉するため、Gd−scFvを融合蛋白質として細胞表面に提示されるように設計したベクターを作製した。pDisplay(Life Technologies)は、蛋白質を細胞膜に輸送するシグナル・ペプチド、及び細胞膜に輸送された蛋白質を膜に固定するためのアンカー・ペプチドが組込まれたベクターで、両ペプチド間に目的遺伝子を組込むことで、融合蛋白質として遺伝子産物を細胞膜に固定化して細胞表面に提示することができる。pDisplayには、この他に融合蛋白質の検出を容易にするヘマグルチン(HA)タグ配列とc−mycタグ配列が組込まれている。このpDisplayを、GdscFv遺伝子組込みベクター(pDis-GdscFv)の作製に用いた。1)に記載の方法で合成したGdscFv遺伝子を制限酵素(Bgl IIとSal I)で消化した後、同じく制限酵素(Bgl IIとSal I)で消化したpDisplayベクターに組み込み、pDis−GdscFvを作製した(図3)。pDis−GdscFvのGdscFv融合遺伝子の塩基配列を配列番号10に、同遺伝子がコードする融合蛋白質のアミノ酸配列を配列番号9に示した。
50μLのOpti−MEM培地に1.0μLのlipofectamine 2000を加えて室温に5分間静置した後、0.6μgのベクター(pDis-GdscFv or pDisplay)を含むOpti−MEM培地50μLと混合して室温に20分間静置した後、この溶液を一晩培養しておいたHuh−7細胞(24 wellプレートに8.0 x 104細胞/wellで播種)の培養液に加えて培養を続けた。48時間後、培地を取り除き、細胞をPBSで2回洗浄した後、セルスクレーパーを用いてプレート底面から細胞を剥がしてPBSに縣濁した。14,000rpm、5分間の遠心で細胞を回収して細胞溶解液(1 x SDS-PAGE buffer)を加え、沸騰水中に5分間インキュベートした後、8%SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動をおこなった。泳動終了後、ゲル中の蛋白質を、サブマリン型電気泳動装置を用いて、PVDF膜(Pore size: 0.44 μm, Millipore)に転写(ブロッティング)した。ブロックエース(Dainippon Sumitomo Pharma)でPVDF膜のブロッキングをおこなった後、一次抗体溶液(500倍希釈した一次抗体と10% ヤギ正常血清を含むPBS)に膜を浸し、穏やかに振とうしながら1時間、室温で反応させた。一次抗体は、GdscFv融合蛋白質内部のヘマグルチニン・タグ配列を認識するマウス抗HA抗体(Millipore)を使用した。1時間後、一次抗体溶液を取り除き、トリス緩衝食塩水(TBS)で膜を3回洗浄した。以降は、ABC kit(Alkaline Phosphatase Universal, VECTASTAIN)を用いて、一次抗体が結合した蛋白質を検出した。操作はキットのマニュアルに従った。PVDF膜は、Alkaline phosphataseの基質であるBCIP/NBT(KPL)で発色させた。図4に示したように、pDis-GdscFvを導入した細胞で、Gd-scFv融合蛋白質に由来するシグナルが検出された(矢印のバンド、分子量が約35 kDa)。
50μLのOpti−MEM培地に1.0μLのlipofectamine 2000を加えて室温に5分間静置した後、0.6μgのベクター(pDis-GdscFv or pDisplay)を含むOpti−MEM培地50μLと混合して室温に20分間静置した後、この溶液を一晩培養しておいたHuh−7細胞(8 wellチャンバースライドに4.0 x 104細胞/チャンバーで播種)の培養液に加えて培養を続けた。48時間後、培養液を除いて細胞をPBSで2回洗浄してから、4%のパラホルムアルデヒドを300μL加えて室温で20分間反応させた。PBSで細胞を3回洗浄した後、ブロッキング液(5% ヤギ正常血清を含むPBS )を500μL加えて室温に静置した。1時間後、ブロッキング液を取り除き、一次抗体溶液(250倍希釈した一次抗体と5% ヤギ正常血清を含むPBS)を加えた。一次抗体は、GdscFv融合蛋白質内部のc−mycタグ配列を認識するマウス抗c−myc抗体(Sigma)を使用した。4℃に1晩静置した後、一次抗体溶液を取り除き、PBSで3回洗浄してから、二次抗体溶液(1000倍希釈した蛍光標識(Alexa 555標識)ヤギ抗マウス・モノクローナル抗体, Life Technologies)と室温で反応させた。1時間後、二次抗体溶液を取り除き、PBSで2回洗浄した後、DAPI溶液(1 μg/ml)で核染色をおこなった。PBSで2回洗浄後、チャンバーを取り外して、封入剤AntiFade(Life Technologies)を1滴垂らした。封入剤の上にカバーグラスを載せ、その4辺をマニキュアで固定してから、蛍光装置付き倒立顕微鏡による観察をおこなった。図5に示したように、pDis−GdscFvを導入した細胞において、Gd−scFv融合蛋白質に由来する蛍光が検出された(図5)。
上記3)に記載の方法でpDis−GdscFvを導入したHuh−7細胞(Gd-scFv細胞)と、ベクターを導入していないこと以外、前記細胞と同じ処理をおこなったHuh−7細胞(Mock細胞)を準備した。48時間後、培地を除いて細胞をPBSで洗浄してから、8% ヤギ正常血清を含むPBSを加え、室温で30分間ブロッキングした。30分後、溶液を取り除いて西洋ワサビ過酸化酵素(HRP)で標識したガドペンテト酸(Gd-DTPA, BioPAL)と蛍光色素(DyLight 488)で標識したウサギ抗HRP抗体(蛍光標識抗体)(SEIKAGAKU BIOBUSSINESS)の混合溶液、或いは蛍光標識抗体のみを細胞に加え、室温で1時間反応させた。HRP-Gd-DTPAとDyLight 488標識HRP抗体は、前もって、5% ヤギ正常血清を含むPBS中で室温に30分間インキュベートして複合体を形成させてから加えた。1時間後、細胞をPBSで2回洗浄し、上記4)の核染色後と同様の方法により、蛍光観察用のサンプルを作製して正立型落射蛍光顕微鏡による観察をおこなった。図6に示したように、pDis−GdscFvを導入した細胞において、Gd−DTPA/蛍光標識抗体に由来する蛍光が検出された(図6)。
上記3)に記載の方法でpDis−GdscFvを導入したHuh−7細胞(Gd-scFv細胞)を0.25% トリプシン処理により回収した。この際、ベクターを導入していないこと以外、前記細胞と同じ処理をおこなったHuh−7細胞(Mock細胞)を準備した。回収したGd−scFv細胞、及びMock細胞をそれぞれ2つに分割した後、一方に10μg/mLのGd−DTPAを含む培地を、もう一方にはGd−DTPAを含まない培地を500μL加えた合計4サンプルを調整し(Gd-scFv細胞/Gd+, Gd-scFv細胞/Gd-, Mock細胞/Gd+, Mock細胞/Gd-)、穏やかに振盪しながら37℃にインキュベートした。2時間後、1,000rpm、3分間の遠心で細胞を回収し、1mLのPBSで細胞を洗浄した。予め40℃に温めておいた350μLのPBSに細胞を縣濁し、同じく40℃に温めておいた350μLの2.0%アガロースに加えてすばやく混ぜ合わせた。この溶液を24wellプレートのwellに注いで固化させて、マイクロMRI撮像用サンプルを調整した。このサンプルのT1強調画像を、オックスフォード社製のマイクロMRI(4.7T)で撮像した。図7に、マイクロMRIで撮像した結果を示した。Gd−scFv細胞/Gd+では、Gd−DTPAの造影効果(水分子のT1緩和時間短縮)により、MR画像のコントラストが増強された。
以下に、実施形態の例を更に記載する。
[1] 特定の条件に応じてプロモーター活性を示す塩基配列と、細胞外に提示される金属化合物結合ペプチドをコードする塩基配列と、転写終結シグナルをコードする塩基配列とを上流から下流に向けてこの順番で含む細胞外に金属化合物結合能を提示するレポーターベクター。
[2] 前記細胞外に提示される金属化合物結合ペプチドをコードする塩基配列が、
(a)金属化合物結合ペプチドをコードする塩基配列と、
(b)前記金属化合物結合ペプチドを細胞膜に輸送するシグナル・ペプチドをコードする塩基配列と、
(c)前記シグナル・ペプチドによって前記細胞膜に輸送された前記金属化合物結合ペプチドを前記細胞膜に固定化するアンカー・ペプチドをコードする塩基配列と
を上流から下流に向けてこの順番で含む[1]に記載のレポーターベクター。
[3] 前記(a)における金属化合物結合ペプチドが、特定の金属化合物に対するモノクローナル抗体に由来する重鎖可変領域断片と、前記モノクローナル抗体に由来する軽鎖可変領域断片と、前記重鎖可変領域断片と前記軽鎖可変領域断片との間に存在するリンカー・ペプチドとを含み、且つ前記重鎖可変領域断片と前記軽鎖可変領域断片とにより免疫学的に前記特定の金属化合物と特異的に結合する一本鎖抗体ペプチドである[2]に記載のレポーターベクター。
[4] 前記(a)における金属化合物結合ペプチドが、常磁性金属含有物と特異的に結合するペプチドである[2]または[3]に記載のレポーターベクター。
[5] 前記(a)における金属化合物結合ペプチドが、常磁性金属、常磁性金属イオン、常磁性金属錯体または磁性金属錯体塩と特異的に結合するペプチドである[2]または[3]に記載のレポーターベクター。
[6] 前記(a)における金属化合物結合ペプチドが、ガドリニウム化合物、テルビウム化合物、鉄化合物、マンガン化合物、銅化合物またはクロム化合物と特異的に結合するペプチドである[2]または[3]に記載のレポーターベクター。
[7] 前記(a)における金属化合物結合ペプチドが、ガドリニウム、ガドリニウムイオン、ガドリニウム錯体、ガドリニウム錯体塩、テルビウム、テルビウムイオン、テルビウム錯体、テルビウム錯体塩、鉄、鉄錯体、鉄錯体塩、マンガン、マンガンイオン、マンガン錯体、マンガン錯体塩、銅、銅イオン、銅錯体、銅錯体塩、クロム、クロムイオン、クロム錯体、クロム錯体塩、それらの金属原子を含む酸化金属、酸化金属塩、水酸化金属および金属炭酸塩、並びにそれらの水和物からなる群より選択される金属化合物と特異的に結合するペプチドである[2]または[3]に記載のレポーターベクター。
[8] 前記(a)における金属化合物結合ペプチドが、ガドペンテト酸と特異的に結合するペプチドである[2]または[3]に記載のレポーター・ベクター。
[9] 更に、前記(a)における金属化合物結合ペプチドをコードする塩基配列が、ガドペンテト酸と特異的に結合する一本鎖抗体ペプチドをコードする塩基配列である[8]に記載のレポーターベクター。
[10] 前記一本鎖抗体ペプチドをコードする塩基配列が、配列番号1に記載のアミノ酸配列をコードする塩基配列である[9]に記載のレポーターベクター。
[11] 前記一本鎖抗体ペプチドをコードする塩基配列が、配列番号2に記載の塩基配列である[9]に記載のレポーターベクター。
[12] 更に、前記(b)におけるリーダー・ペプチドをコードする塩基配列が、イムノグロブリンκ鎖のリーダー・ペプチドをコードする塩基配列である[2]〜[11]の何れか1項に記載に記載のレポーターベクター。
[13] 更に、前記(c)におけるアンカー・ペプチドをコードする塩基配列が、血小板由来成長因子受容体を細胞膜に固定するアンカー・ペプチドをコードする塩基配列である[2]〜[12]の何れか1項に記載のレポーターベクター。
[14] インビトロにおいて、特定の条件を有する細胞を検出する方法であって、
(1)細胞を含む検出対象に対して、[1]〜[13]の何れか1項に記載のレポーターベクターを取り込ませることと、
(2)前記細胞外に金属化合物結合ペプチドを提示させることと、
(3)前記金属化合物結合ペプチドに対して、前記金属化合物結合ペプチドと結合対を形成可能な金属を接触させることと、
(4)前記金属化合物結合ペプチドに結合した金属を検出することと、
を含む方法。
[15] [1]〜[13]の何れか1項に記載のレポーターベクターを有効成分として含む特定の条件を有する細胞のための検出剤。
[16] [1]〜[13]の何れか1項に記載のレポーターベクターを有効成分として含む、前記特定の条件を指標とする疾患のための診断剤。
[17] [1]〜[13]の何れか1項に記載のレポーターベクターを有効成分として含む、前記特定の条件を指標とする疾患のための造影剤。
[18] [1]〜[13]の何れか1項に記載のレポーターベクターを有効成分として含む、前記特定の条件に関連する疾患を治療するための治療剤。
[19] 前記疾患が癌または骨代謝異常である[15]〜[18]の何れか1項に記載の薬剤。
12.細胞外に提示される金属化合物結合ペプチドをコードする塩基配列
13.特定の条件に応じてプロモーター活性を示す塩基配列13
14.転写終結シグナルをコードする塩基配列
21.細胞
22.細胞膜
23.金属化合物結合ペプチド
24.金属化合物
Claims (19)
- 特定の条件に応じてプロモーター活性を示す塩基配列と、細胞外に提示され、抗原性を有する金属化合物に特異的に結合する一本鎖抗体ペプチドをコードする塩基配列と、転写終結シグナルをコードする塩基配列とを上流から下流に向けてこの順番で含む細胞外に金属化合物結合能を提示するレポーターベクター。
- 前記細胞外に提示され、抗原性を有する金属化合物に特異的に結合する一本鎖抗体ペプチドをコードする塩基配列が、
(a)抗原性を有する金属化合物に特異的に結合する一本鎖抗体ペプチドをコードする塩基配列と、
(b)前記抗原性を有する金属化合物に特異的に結合する一本鎖抗体ペプチドを細胞膜に輸送するシグナル・ペプチドをコードする塩基配列と、
(c)前記シグナル・ペプチドによって前記細胞膜に輸送された前記抗原性を有する金属化合物に特異的に結合する一本鎖抗体ペプチドを前記細胞膜に固定化するアンカー・ペプチドをコードする塩基配列と
を上流から下流に向けてこの順番で含む請求項1に記載のレポーターベクター。 - 前記(a)における前記抗原性を有する金属化合物に特異的に結合する一本鎖抗体ペプチドが、抗原性を有する特定の金属化合物に対するモノクローナル抗体に由来する重鎖可変領域断片と、前記モノクローナル抗体に由来する軽鎖可変領域断片と、前記重鎖可変領域断片と前記軽鎖可変領域断片との間に存在するリンカー・ペプチドとを含み、且つ前記重鎖可変領域断片と前記軽鎖可変領域断片とにより免疫学的に前記抗原性を有する特定の金属化合物と特異的に結合する一本鎖抗体ペプチドである請求項2に記載のレポーターベクター。
- 前記細胞外に提示され、抗原性を有する金属化合物に特異的に結合する一本鎖抗体ペプチドが、抗原性を有する常磁性金属含有物と特異的に結合するペプチドである請求項1〜3の何れか1項に記載のレポーターベクター。
- 前記細胞外に提示され、抗原性を有する金属化合物に特異的に結合する一本鎖抗体ペプチドが、抗原性を有する常磁性金属、常磁性金属イオン、常磁性金属錯体または磁性金属錯体塩と特異的に結合するペプチドである請求項1〜3の何れか1項に記載のレポーターベクター。
- 前記細胞外に提示され、抗原性を有する金属化合物に特異的に結合する一本鎖抗体ペプチドが、抗原性を有するガドリニウム化合物、テルビウム化合物、鉄化合物、マンガン化合物、銅化合物またはクロム化合物と特異的に結合するペプチドである請求項1〜3の何れか1項に記載のレポーターベクター。
- 前記細胞外に提示され、抗原性を有する金属化合物に特異的に結合する一本鎖抗体ペプチドが、ガドリニウム、ガドリニウムイオン、ガドリニウム錯体、ガドリニウム錯体塩、テルビウム、テルビウムイオン、テルビウム錯体、テルビウム錯体塩、鉄、鉄錯体、鉄錯体塩、マンガン、マンガンイオン、マンガン錯体、マンガン錯体塩、銅、銅イオン、銅錯体、銅錯体塩、クロム、クロムイオン、クロム錯体、クロム錯体塩、それらの金属原子を含む酸化金属、酸化金属塩、水酸化金属および金属炭酸塩、並びにそれらの水和物からなる群より選択される抗原性を有する金属化合物と特異的に結合するペプチドである請求項1〜3の何れか1項に記載のレポーターベクター。
- 前記細胞外に提示され、抗原性を有する金属化合物結合ペプチドが、ガドペンテト酸と特異的に結合するペプチドである請求項1〜3の何れか1項に記載のレポーターベクター。
- 前記細胞外に提示され、抗原性を有する金属化合物に特異的に結合する一本鎖抗体ペプチドが、金属粒子、金属イオン、金属イオンの塩、金属錯体、金属錯体塩、酸化金属、酸化金属塩、水酸化金属、水酸化金属塩、金属炭酸塩およびこれらの水和物である金属原子を含有する物質からなる群より選択される抗原性を有する物質と特異的に結合するペプチドである請求項1〜3の何れか1項に記載のレポーターベクター。
- 前記一本鎖抗体ペプチドをコードする塩基配列が、配列番号1に記載のアミノ酸配列をコードする塩基配列である請求項8に記載のレポーターベクター。
- 前記一本鎖抗体ペプチドをコードする塩基配列が、配列番号2に記載の塩基配列である請求項8に記載のレポーターベクター。
- 更に、前記(b)におけるリーダー・ペプチドをコードする塩基配列が、イムノグロブリンκ鎖のリーダー・ペプチドをコードする塩基配列である請求項2〜11の何れか1項に記載に記載のレポーターベクター。
- 更に、前記(c)におけるアンカー・ペプチドをコードする塩基配列が、血小板由来成長因子受容体を細胞膜に固定するアンカー・ペプチドをコードする塩基配列である請求項2〜12の何れか1項に記載のレポーターベクター。
- インビトロにおいて、特定の条件を有する細胞を検出する方法であって、
(1)細胞を含む検出対象に対して、請求項1〜13の何れか1項に記載のレポーターベクターを取り込ませることと、
(2)前記細胞外に抗原性を有する金属化合物に特異的に結合する一本鎖抗体ペプチドを提示させることと、
(3)前記抗原性を有する金属化合物に特異的に結合する一本鎖抗体ペプチドに対して、前記抗原性を有する金属化合物に特異的に結合する一本鎖抗体ペプチドと結合対を形成可能な金属を接触させることと、
(4)前記抗原性を有する金属化合物に特異的に結合する一本鎖抗体ペプチドに結合した金属を検出することと、
を含む方法。 - 請求項1〜13の何れか1項に記載のレポーターベクターを有効成分として含む特定の条件を有する細胞のための検出剤。
- 請求項1〜13の何れか1項に記載のレポーターベクターを有効成分として含む、前記特定の条件を指標とする疾患のための診断剤。
- 請求項1〜13の何れか1項に記載のレポーターベクターを有効成分として含む、前記特定の条件を指標とする疾患のための造影剤。
- 請求項1〜13の何れか1項に記載のレポーターベクターを有効成分として含む、前記特定の条件に関連する疾患を治療するための治療剤。
- 前記疾患が癌または骨代謝異常である請求項16〜18の何れか1項に記載の薬剤。
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