JP5689764B2 - 選択性標的化方法 - Google Patents
選択性標的化方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5689764B2 JP5689764B2 JP2011164796A JP2011164796A JP5689764B2 JP 5689764 B2 JP5689764 B2 JP 5689764B2 JP 2011164796 A JP2011164796 A JP 2011164796A JP 2011164796 A JP2011164796 A JP 2011164796A JP 5689764 B2 JP5689764 B2 JP 5689764B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- target
- ligand
- peptide
- library
- binding
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
- C12N15/1037—Screening libraries presented on the surface of microorganisms, e.g. phage display, E. coli display
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
- C12N15/1072—Differential gene expression library synthesis, e.g. subtracted libraries, differential screening
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
- C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
- C40B40/00—Libraries per se, e.g. arrays, mixtures
- C40B40/02—Libraries contained in or displayed by microorganisms, e.g. bacteria or animal cells; Libraries contained in or displayed by vectors, e.g. plasmids; Libraries containing only microorganisms or vectors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6845—Methods of identifying protein-protein interactions in protein mixtures
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
- G01N2500/02—Screening involving studying the effect of compounds C on the interaction between interacting molecules A and B (e.g. A = enzyme and B = substrate for A, or A = receptor and B = ligand for the receptor)
Description
発明の別の態様は、洗浄組成物において有用なペプチドを同定する方法に関し、ペプチドライブラリーを抗−標的に接触させることにより上記ペプチドが抗−標的に結合することを可能にさせるが、但し、抗−標的は、織物、セラミックス、ガラス、ステンレス鋼、及びプラスチックからなる群から選択され;未結合の抗−標的ペプチドを分離し、未結合の抗−標的ペプチドを標的に接触させるが、但し標的は汚れ、そして特に織物上の汚れであり、但し当該汚れはポルフィリン由来の汚れ、タンニン由来の汚れ、カルテノイド色素由来の汚れ、アントシアニン色素由来の汚れ、しみに基づく汚れ、及びヒトの身体のしみ汚れからなる群から選択され、未結合のペプチドを汚れと結合させることにより、汚れ−結合ペプチド複合体を形成させ;そして汚れ−結合ペプチド複合体上で汚れ−結合ペプチドを同定することを含む。少なくとも一つの態様において、上記ペプチドは約10−7Mから10−10Mの範囲のKDにて汚れに結合する。
ペプチド又はポリペプチドは融合ペプチド又は蛋白質として提供してよい。ペプチドは、アミノ酸配列が公知の合成ペプチド類似体を含む。用語ペプチドは、ペプチドに構造上関連する分子、例えばその構造が標準の配列決定方法論では決定できないがより複雑な方法論、例えば質量分光分析法を用いて決定されるに違いないペプチド誘導体又はペプチド模倣物を含まない。ペプチド模倣物(peptidomimetics)(ペプチド模倣物(peptidemimetics)としても知られる)は、ペプチド類似体であるが、非ペプチド化合物である。通常、一つ又は複数のペプチド結合が任意に置換されている。(Evanset al.,(1987)J.Med.Chem.30:1229)。用語「蛋白質」はよく知られており、大きなポリペプチドを意味する。
B.一般的方法
本明細書に記載されるのは、選択された標的に関して結合親和性及び選択性を有するリガンドのライブラリーをスクリーニングする選択性標的化方法である。そのもっとも基本的な形態において、上記選択性標的化方法は以下のとおりに定義してよい:リガンド、好ましくは異なる配列の複数のペプチドのライブラリー、そしてより好ましくはランダムなペプチドライブラリーを作成するか又は得る。上記ライブラリーのリガンドと抗−標的の間の結合に関して好ましい条件下でリガンドライブラリーを抗−標的と接触させることにより抗−標的と結合するリガンドを選択から除外する(deselecting);抗−標的がリガンドと結合することを可能にする;そして抗−標的リガンド結合した分子又はあらゆる遊離のリガンドから抗−標的非バインダー(未結合リガンド)を分離する。当該抗−標的非バインダーを選択された標的に適切な条件下で接触させ、そしてそれらを結合させることを許容する。標的に親和性を有するリガンドは結合して標的結合リガンド複合体を形成することになる。抗−標的に結合したリガンドの除去及び弱く標的結合したリガンドの除去は、一般にライブラリー枯渇(depletion)と呼ぶ。標的結合リガンド複合体を次に未結合のリガンドを含む残りの混合物から分離する。標的結合リガンド複合体又は標的結合リガンドは、次に、任意に増幅、配列決定又はさらなるラウンドの選択に供してよい(図1)。発明は、さらに、発明の選択性標的化方法により同定されたリガンドを含む。
別の側面において、標的が損傷した細胞、組織又は器官の場合、抗−標的は健常な(非損傷)細胞、組織、器官又はその組み合わせである。特定の非限定抗−標的例は、健常な全血、皮膚、毛髪、歯、そして爪を含む。
ある好ましい態様において、抗−標的又は標的は物質又は表面、例えば織物、セラミック又はマイクロ流体チップであってよい。この例において、標的又は抗−標的の面積は重要になる。如何なる様式にも発明を限定する意図はないが、通常、抗−標的又は標的物質のサイズは約1.0mmから1.5cm;より好ましくは約25.0mmから0.5cmである;しかしながら、直径又は面積はこの値より低いか又は高くてよい。
未結合の抗−標的リガンドは、当業界公知の方法により抗−標的結合リガンドから分離してよい。これらの方法のいくつかは、移し替え、洗浄、遠心分離、濾過、クロマトグラフィー、マイクロ−解剖及び蛍光活性化細胞分類(FACS)を含む。
標的−結合複合体上の標的−結合リガンドは様々な技術により同定してよく、ポリメラーゼ鎖反応(PCR)、質量分光光度分析(MS)、表面プラズモン共鳴、免疫沈殿及び核磁気共鳴(NMR)分光分析を含む(米国特許第4,683,202号;Szaboet al.,(1995)Curr.Opin.Struct.Bio.5:699:Harlowet al.,(1999)UsingAntibodies,A LaboratoryManual,Cold SpringHarbor Press;及びHajduket al.,(1999)J.MedChem.,42:2315)。非対称PCRも標的−結合リガンドの同定に用いてよく、その際、異なる濃度の単一プライマー種又は複数プライマーを用いてよい。当業者にはよく知られているとおり、ライブラリーのメンバーを遺伝学上ペプチド又は蛋白質に連結する場合、DNA又はmRNAをPCRにより増幅することができ、そして対応する配列を配列決定及び同定用のベクターにサブクローン化することができる。
実施例1
腫瘍ネクローシス因子α(TNF−α)に結合するファージ−ペプチドの高親和性ファージ−ペプチドクローン同定用PCRを用いた選択:
薄壁PCR管を標的ヒト(h)TNF−α(バイオソースインターナショナル;カマリロ、CA)でコートしたが、PBS中の0.5mg/ml精製TNF−α 100μlを4℃においてPCR管の中でインキュベートすることによりコートした。過剰の未結合のTNF−αを除去し、そして管を一晩4℃において、Tris緩衝塩溶液(TBS)中の100μlのスーパーブロック(商標名)ブロッキングバッファー(ピアス:ロックフォード、IL)中でコートした。抗−標的(スーパーブロック(商標名)ブロッキングバッファー)は、100μlのスーパーブロック(商標名)で一晩4℃においてコートされた別のPCR管の中で調製した。ファージディスプレイされた7マーのランダムペプチドライブラリー(10μlの2x1013プラーク形成ユニット(pfu)/ml)を50μlのPBS中で希釈して、抗−標的PBS管の中で30分間振盪しながら4℃においてインキュベートした。上清を別の抗−標的PCR管に移して、この手続を3回繰返すことにより、抗−標的に結合するファージ−ディスプレイされたペプチドの数を大きく減少させた。
10mM dNTPs2.5μl
50μM CMM13−01プライマー10μl
50μM CMM13−02プライマー10μl
10 X PCRバッファー 7.5μl
Taqポリメラーゼ(5U/ml) 1μl
を次に加えた。
CMM13−01 5’CCTCGAAAGCAAGCTGATAAC 3’(配列番号:1)
CMM13−02 5’CATTCCACAGACAACCCTCATAG 3’(配列番号:2)
であった。
TNF−αに結合するファージ−ペプチドの結合親和性及び選択性の特性決定:
ファージクローンA1、アミノ酸配列:RYWQDIP;表1、TNF−αに対する(配列番号:3)の結合及び解離を、IAsysAutoPlus Biosensorを用いて、次にLabsystemsAffinity Sensors IAsys Protocol 2.4「蛋白質層への固定化:アビジンにカップリングしたチオール」(ThermoBioAnalysis Corp.フランクリン、MA)を用いて監視した。2つのキュベットを最初にアビジンでコートして、一方(対照)を次にビオチンでブロックした。これを次にリジン基で活性化した。15μlのアリコートの1mg/ml(h)TNF−α溶液を各キュベットに加えた。表面への蛋白質の結合は対照キュベットにおいて観察されなかったが、(h)TNF−αは明らかに未ブロックアビジンコートキュベットに固定化された(示さず)。この複合体は安定であり、そして10分にわたって解離しなかった。ブロッキング及び洗浄の後に、ファージクローA1,RYWQDIP(配列番号:3)を加えて、最終力価を5x1011pfu/mlとした。図4に示すとおり、サンプルキュベットにおいてはファージのTNF−αへの有意な結合があるが、対照キュベットへ結合したファージは極めてわずかであった。
実施例3:
IL−6及びIL−8に結合するファージ−ペプチドの選択:
実施例1に記載されたのと同じ方法を用いて、ヒトIL−6とIL−8標的として用い、そしてスーパーブロック(商標名)ブロッキングバッファーを抗−標的として用いた。PCR管を組換えヒトIL−6(0.1mg/ml)及びIL−8(0.25mg/ml)(バイオソースインターナショナル)でコートした。選択は、標的からのファージの酸溶出においてさえ、予測されたサイズ(267bp)のPCRバンドを生じた(図2B)。
実施例4
VEGFに結合するファージ−ペプチドの選択:
滅菌マイクロタイタープレート(5ウエル/サンプル)を200μlの1%PBS/BSA(PBS +1%ウシ血清アルブミン)でコートし、次に、200μlの0.25% PBSTで洗浄した。ウエルを満たしたままにした。100μlの新鮮な全血を10μlのファージライブラリーと混合して、最初にコートされた細胞を添加し、そして30分間室温において(RT)インキュベートすることにより、ファージペプチドのライブラリーを、抗−標的としてのヒト全血に対して排除した(deselected)。30分後、上記溶液を吸引し、次にコートされたウエルに送達した(delivered)。この手法を4回繰返すことにより、抗−標的非結合ファージのライブラリーを生じさせた。標的に関しては、5mgの200μmポリスチレンビーズをヒトVEGFでコートしたが、100μlの100μg/ml組換えヒトVEGF(バイオソースインターナショナル;カマリロ、CA)と共に一晩4℃においてゆるやかに振盪しながらインキュベートすることによった。PBST(1 xPBS中の0.25%ツイーン−20)により3回洗浄することにより、過剰の未結合のVEGFを除去した。次に、ビーズを2%ツイーン−20a x PBSTと共に2時間室温(RT)においてブロックした。ファージ−ディスプレイされた環状の7マーのランダムペプチドライブラリーを使用した。選択手法は本質的に実施例1に記載されたのと同じであった。最初のラウンドの選択の後に、標的−結合リジンからのPCR断片を精製し、EagI及びAcc651により消化し、そして上記制限酵素を加熱変性した。断片を直接M13KE切断ベクターへTakaraライゲーションキット(プロメガコープ)を用いてライゲーションした。ライゲーションミックスで形質転換し、そして標準手法(Sambrooket al.(1989)前記)に従い増幅した。第2ラウンドの選択を実施することにより、VEGFに結合するファージ−ペプチドをさらに富裕化した。対応するペプチド配列を以下の表に示す:
襟のしみに結合するファージ−ペプチドの選択:
コットン又は標的(襟のしみ)を含む65%ポリエステル:35%コットン及び抗―標的EMPA213ポリエステルコットン織物(試験織物、フリーホールド、NJ)上のしみ化シャツの襟を、ダイスを用いて直径7/32”に切り、NAEFパンチプレスに適合させる排除を伴った(MSインスツルメントカンパニー、ストニークリーク、NY)。96ウエルの平底マイクロタイタープレート(コスター、カタログ番号3598)をスーパーブロック(商標名)ブロッキングバッファーで一晩コートして、次に200−250μlのTBST(0.1%ツイーン−20)でEL403オートプレート洗浄機(バイオテックインスツルメンツ、ウイノスキー、VT)を用いて洗浄した。織物片をウエルの中にいれ、M13繊維状ファージ上にディスプレイされたファージ−ペプチド12マーライブラリーの10μlストック溶液を、100μlの界面活性剤(3.4g/Lヨーロピアン界面活性剤)に、抗−標的としてポリエステル−コットンを含むウエル中で加えた。20分間のインキュベーション後に、未結合ファージ(抗−標的非バインダー)を含む上清を、ポリエステル−コットン織物を含む第2のウエルに移した。これをもう一度繰返した。上清を次に、しみ化シャツの襟の織物を含むウエルに移し、そして汚れと10−60分間インキュベーションすることにより、残りのファージペプチド集団を「汚れバインダー」に関して選択した。0.1−2%のツイーン−20又は3.4g/Lの界面活性剤の何れかによる一連の洗浄工程に汚れを供した。洗浄工程は所望のストリンジェンシーに対して操作することができる。汚れを含む最初のウエルの中での初期の洗浄後に、あらゆる残りの結合ファージを含む汚された織物片を、第2洗浄工程のために次のウエルに移した。
織物上の標的の襟のしみへの放射線標識ペプチドの選択性結合:
標的(襟のしみ)及び抗―標的EMPA213ポリエステルコットン織物(試験織物、フリーホールド、NJ)を含むしみ化シャツの襟(コットン又は65%ポリエステル:35%コットン)を、直径1/2”に切り、コスター24ウエルプレートに入れた。本発明により同定されたしみ標的化ペプチドSISSTPRSYHWT(配列番号:20)を14CグリシンでN末端標識した。10μlの[1−14C−G]SISSTPRSYHWT(シンペップ、ダブリン、CA)(配列番号:114)400μM溶液を4mlの0.002%ツイーン−20含有50mMCAPSバッファー、pH10.4に加えた。放射性標識ペプチドの950μLアリコートを各ウエルに加え、そしてサンプル回転振盪機上で30℃において30分間振盪した。サンプルを取り出し、そして4mLのバッファーで洗浄して、次に、4mLのミリQ水で20分間洗浄した。サンプルをワットマンフィルターペーパー上で空気乾燥、そしてヒューレットパッカードスキャナー(パロアルト、CA)上でデジタルスキャンした。放射性標識したスワッチを次にリン蛍光体スクリーン(モリキュラーダイナミックス;サニーベール、CA)に30時間−70℃において暴露した。結果のリンイメージをモリキュラーダイナミックスストーム(登録商標)を用いてスキャンした。図5は、汚された織物及び対照の織物の対応するリンイメージと共に、標的(汚れ)及び抗−標的の可視イメージを示す。リンイメージの相対強度をイメージクアント(ImageQuant)(登録商標)イメージ分析ソフトウエア(モリキュラーダイナミックス;サニーベール、CA)を用いて定量し、そして織物の結合に対する汚れの結合の比は>15:1であることを示す。
実施例7:
汚れ標的化ペプチドの放出に関する遅いk off 速度定数の証明:
標的(襟のしみ)及び抗―標的を対照抗−標的(同じシャツからの汚されていないポリエステル:コットン)と共に含むしみ化シャツの襟(65%ポリエステル:35%コットン)を、直径7/32”に切り、96ウエルマイクロタイタープレート(ミリポアコーポ、0.22μMデュラポア膜;カタログ番号MAGV N2250)に入れた。14Cグリシンで末端標識された、しみ標的化ペプチドSISSTPRSYHWT(配列番号:20)及びペプチド対照NFFPTWILPEHT(配列番号:78)の400μMストック溶液の連続希釈を、1g/Lのタイド界面活性剤溶液(プロクターアンドギャンブル、シンシナチ、OH)に加え、そして60μLのアリコートをマイクロタイタープレートのウエルに入れた。プレートを振盪しながら30分間32℃においてインキュベートし、次に過剰の未結合の放射線標識ペプチド(バキュームマイフォールド;ミリポアコープ、カタログ番号MAVM096 OR)の吸引濾過を行った。サンプルは3回200μLの蒸留水で洗浄し、洗浄と洗浄の間は振盪し、約40分かけた。サンプルに結合した残りの放射活性を液体シンチレーションカウンティングによりウオーラックマイクロベータカウンター内で定量した。図6Aは、全放射線標識の50%より多くが、40分間の洗浄後でさえ、汚れ標的化ペプチドに関して汚された織物に結合したままである。これは、しみ標的化ペプチドの放出に関する速度定数koff≦2 x 10−4秒−1に相当する。対照的に、対照ペプチドは同じアッセイにおいて親和性又は選択性を何も示さない、図6B。
実施例8:
発明の選択性標的化方法に比較した酸溶出に関するペプチドの選択性と親和性:
コットン上の襟のしみに結合するファージペプチド配列HTFQHQWTHQTR(配列番号:27)は、Scottand Smith(1990)Science249:386に記載された方法を用いて各ラウンドの後にファージペプチドを酸溶出した以外は、実施例5に記載されたとおりに、バイオパンニング5ラウンド後に同定した。選択性(汚れ対コットン結合)及び親和性(koff)は、以下のとおりに襟のしみに結合する対応のペプチドに関して測定した:NiキレートしたGGHTFQHQWTHQTR(配列番号:28)の1mM溶液をコットン上の襟のしみ又はコットンのみと90分間室温において撹拌しながらマイクロタイタープレート中でインキュベートした。対照ペプチドキレートNiGGHも同じ条件下で試験した。ウエルからインキュベーション溶液をピペットオフした後に、織物の布きれを200μLの水で撹拌しながら3分間撹拌した。200μLのo−フェニレンジアミン(OPD)及び50μLの100mM H2O2を加え、そして420nmにおいて酸化されたOPDの吸収を測定することにより、残りの結合ペプチドをアッセイした。表5及び図7において要約されるとおり、織物に対する汚れの結合の比は、≦3:1より低いか又は同等であり、そして親和性はkoff=1 x 10−3秒−1と測定された。これらのデータは、特異的且つ選択的に強固に結合するペプチドは、本発明による選択性標的化方法を用いて同定されるのが好ましいことを証明する。
界面活性剤マトリックス内のファージディスプレイされたライブラリーの安定性:
ファージペプチドライブラリーの安定性に対する家庭内の洗濯場の界面活性剤の作用を試験するため、1013pfu/mLを含むM13繊維状ファージ(ニューイングランドバイオラブズ、ビバリーMA,アメリカ合衆国)上にディスプレイされたペプチド12マーのライブラリーのストック溶液を、a)100mMTris HCl,pH7.5,0.1%ツイーン−20(TBST対照)、b)ガロンあたり3グラム(gpg)の硬化剤を含む0.7g/LのArielFutur(プロクターアンドギャンブル。シンシナチ、OH)、及びc)15gpgの硬化剤を含む3.4g/LのArielFuturの中で、1012pfu/mLに希釈した。TBS中のスーパーブロッキングバッファー(ピアス、カタログ番号37535)でブロックされた96ウエル平底マイクロタイタープレート(コスター、カタログ番号3598)のウエルに、アリコート(100μL)を加えた。サンプルを25℃においてゆるやかに振盪しながら90分間インキュベートした。10μLのアリコートを取り出して、標準手法(Kay et al.,(1996)前記)に従ってファージ力価測定するためにルリアブロスに連続希釈した。TBST中の対照ファージライブラリーに比して、界面活性剤溶液においてはファージ力価の損失は観察されなかった。
実施例10:
ポリウレタンに結合してコットン、ポリエステル、又はポリエステル−コットン織物には結合しないファージ−ペプチドの選択:
1.5mLのマイクロ遠心分離管を一晩ブロッキングバッファー−PBSによりブロックし、1mLの3.4g/L界面活性剤により洗浄し、そして水分を切った。500μLの3.4g/L界面活性剤を4つの管に加え、一片のコットン、ポリコットン、及びポリエステル織物をそれぞれ共にした。ファージペプチドライブラリーは以下の通りであった:
管1 10μLのPh.D.−C7Cライブラリー
管2 10μLのPh.D.−12ライブラリー
管3 10μLの野生型ファージ対照
管4 ファージ対照なし。
50μL HotStarTaq(登録商標)マスターミックス(キアゲン)
25μL 溶解バッファー
5μL BSA(10μg/μL)
1.25μpL CMM13−01プライマー(50μM)
1.25μL CMM13−02プライマー(50μM)
17.5μL H2O
PCR増幅は、95℃において15秒間の変性、58℃において30秒間のアニーリング、そして72℃において30秒間の伸長合成を30サイクル、そして次に72℃において5分間を1サイクル使用することにより、実施した。PCR産物は、製造者の指示に従い、ゼロブラントクローニングにより、TOPO(登録商標)−10ベクター(インビトロジェン、サンディエゴ、CA)へクローン化した。クローンは標準配列決定法を用いて配列決定し、表6に要約した。
実施例11
ステンレス鋼又はガラス上にて標的のベークドオンされた卵のしみに対して選択されたペプチドの選択性結合:
卵のしみは、新鮮な卵からの黄身を使用して調製した。黄身を冷たい水で洗って、次にストレーナーを通してビーカーに押し出した。ビーカーを140°F水浴に入れて、卵の黄身を30分間一定の撹拌を伴って調理した。30分後に、ビーカーを氷の浴槽に入れて、一定撹拌を伴って黄身を室温まで冷やした。#316ステンレス鋼フォイルディスクを、ダイスを用いて7/32”の直径に切って、NAEFパンチプレスに適合させる排除を伴った(MSインスツルメントカンパニー、ストニークリーク、NY)。これらは、標的、ベークドオンされた卵のしみ、及び抗−標的、未だしみ化していないディスクの両方の基質として使用した。使用の前に、当該ディスクをマイルドな界面活性剤の中で洗浄し、そして脱イオン水中で徹底的に洗い流した。
実施例12
セラミック上の標的の茶の汚れに対する選択されたペプチドの特異的且つ選択的結合:
実施例1に記載された方法を用いて、オートマチック皿洗い用界面活性剤の存在下でセラミック上のお茶に結合するペプチドを2ラウンドの選択性標的化の後に同定した。標的結合ペプチド配列を表8に要約する。
ヒトの皮膚を標的化するが毛髪を標的化しないように選択されたペプチドのスクリーニング:
濃い(dark)ヒトの毛髪3インチ片2つ(インターナショナルヘアインポーターアンドプロダクツ、ホワイトプレインズ、NY)を、DI水中の2%ニュートロジーナ(登録商標)ボディーウオッシュ(ニュートロジーナコーポ)溶液10mlを含む、BSAブロックされた50mlのコニカル管に入れた。10μLの環状7マー又は直鎖12マーペプチドライブラリー(1010pfu/ml)、又は野生型ファージ(109pfu/ml)を加え、そしてサンプルを15分間室温において回転撹拌しながら(30rpm)混合した。未結合の上清を、さらに2つの濃い毛髪の3インチ片を含む新たな管に移し、そして室温において15分間回転撹拌しながらインキュベートした。この第2の毛髪のインキュベーションの後に、500μlの上記溶液を、0.9mL組織培養培地(MatTekCorp)を含む6ウエルの培養プレート中のヒト皮膚組織(EpiDerm(登録商標),MatTekCorp.アシュランド、MA)の表面上に30分間室温においてゆるやかに撹拌しながら移した。皮膚組織を取り出して、ブロックされたコニカル管の中で、50mlsの2%ボディーウオッシュ中で2回各5分間洗浄し、そして50mlsのPBSで3回各5分間洗浄した。最後のPBS洗浄後に、皮膚組織を−20℃に凍結して、次に標的結合リガンドファージのPCRを行った。
実施例14
ヒトの毛髪を標的化するが皮膚を標的化しないように選択されたペプチドのスクリーニング:
予め平衡化した皮膚組織を新しい0.9mLの組織培養培地を含む6ウエルの培養プレートに入れ、そして10μLの環状7マー又は直鎖12マーペプチドライブラリー(1010pfu/ml)、又は野生型ファージ(109pfu/ml)を含む、300μlの2%ニュートロジーナ(登録商標)ボディーウオッシュ溶液を皮膚表面に加えた。サンプルを15分間室温において回転撹拌しながら混合した。未結合の上清を、さらに皮膚組織を含む新たなウエルに移し、そして上記手法を繰返した。インキュベーション溶液を、2%ボディーウオッシュ10mlを含む50ml管内の、9つの3インチの濃い毛髪(インターナショナルヘアインポーターアンドプロダクツ、ホワイトプレインズ、NY)片に、30分間ゆるやかに撹拌しながら(30rpm)室温において移した。毛髪サンプルを次に1X 50mls,2 X 50mls,又は4 X50mlsの2%ボディーウオッシュで洗浄した;PBSの洗浄サイクルを続けた(1 X 25mls5分間、1 X 25mls2分間、2 X 50mls各5分間、全部で150mls)。最後のPBS洗浄後に、結合したファージペプチドを含む毛髪サンプルを−20℃に保存した。
実施例15
ヒトの毛髪を標的化するが皮膚を標的化しないペプチド又はヒトの皮膚を標的化するが毛髪を標的化しないペプチドの選択性結合に関するELISAアッセイ:
実施例13及び14において同定されたペプチド配列並びにランダムな対照ペプチドは、配列GGGK(ビオチン)でC末端標識した。配列LESTPKMK(配列番号:115)はコンセンサス配列LESTを含み、そして毛髪上で単離された。FTQSLPR(配列番号:116)はコンセンサス配列TQSLを含み、そして皮膚上で単離された。YGGFMTSE(配列番号:117)は対照ペプチドである。
Claims (4)
- 工程:
(a)リガンドライブラリーを抗−標的に接触させることによりリガンドが抗−標的に結合することを可能にし;
(b)未結合のリガンドを分離し;
(c)未結合のリガンドを選択された標的に接触させることにより未結合のリガンドが標的に結合することを可能にして標的とリガンドが結合した複合体を形成させ;
(d)標的とリガンドが結合した複合体を、標的に結合しないリガンドから分離し;そして
(e)標的とリガンドが結合した複合体上の標的に結合したリガンドを同定すること
を含む、リガンドライブラリーをスクリーニングする方法、又は、工程:
(a)リガンドライブラリーを選択された標的及び抗−標的に接触させることによりリガンドが選択された標的に結合することを可能にして、標的とリガンドが結合した複合体を形成し;
(b)標的とリガンドが結合した複合体を、抗−標的、抗−標的結合リガンド及び遊離リガンドから分離し;そして
(c)標的とリガンドが結合した複合体上の標的に結合したリガンドを同定すること
を含む、リガンドライブラリーをスクリーニングする方法
により同定されたリガンドであって、前記リガンドはTNF−αに結合し、かつ、配列番号:3−17のいずれか一つのアミノ酸配列を有するペプチドからなる群から選択されるペプチドである、リガンド。 - リガンドが洗浄応用において有用な、請求項1記載のリガンド。
- リガンドが治療上の応用において有用な、請求項1記載のリガンド。
- リガンドが個人的ケアの応用において有用な、請求項1記載のリガンド。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US19725900P | 2000-04-14 | 2000-04-14 | |
US60/197,259 | 2000-04-14 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2001577462A Division JP4966470B2 (ja) | 2000-04-14 | 2001-04-11 | 選択性標的化方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2012002818A JP2012002818A (ja) | 2012-01-05 |
JP5689764B2 true JP5689764B2 (ja) | 2015-03-25 |
Family
ID=22728668
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2001577462A Expired - Fee Related JP4966470B2 (ja) | 2000-04-14 | 2001-04-11 | 選択性標的化方法 |
JP2011164796A Expired - Fee Related JP5689764B2 (ja) | 2000-04-14 | 2011-07-27 | 選択性標的化方法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2001577462A Expired - Fee Related JP4966470B2 (ja) | 2000-04-14 | 2001-04-11 | 選択性標的化方法 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US20020098524A1 (ja) |
EP (1) | EP1360500B1 (ja) |
JP (2) | JP4966470B2 (ja) |
AT (1) | ATE455304T1 (ja) |
AU (1) | AU2001257012A1 (ja) |
CA (1) | CA2405715C (ja) |
CY (1) | CY1109876T1 (ja) |
DE (1) | DE60141088D1 (ja) |
DK (1) | DK1360500T3 (ja) |
ES (1) | ES2338097T3 (ja) |
PT (1) | PT1360500E (ja) |
WO (1) | WO2001079479A2 (ja) |
Families Citing this family (60)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20020098524A1 (en) | 2000-04-14 | 2002-07-25 | Murray Christopher J. | Methods for selective targeting |
US7129326B2 (en) * | 2000-04-14 | 2006-10-31 | Genencor International, Inc. | Methods for selective targeting |
AU2002230890A1 (en) * | 2000-12-14 | 2002-06-24 | Genencor International, Inc. | Targeted enzyme prodrug therapy |
US8623822B2 (en) | 2002-03-01 | 2014-01-07 | Bracco Suisse Sa | KDR and VEGF/KDR binding peptides and their use in diagnosis and therapy |
US7261876B2 (en) | 2002-03-01 | 2007-08-28 | Bracco International Bv | Multivalent constructs for therapeutic and diagnostic applications |
CA2513044A1 (en) | 2002-03-01 | 2004-08-05 | Dyax Corp. | Kdr and vegf/kdr binding peptides and their use in diagnosis and therapy |
US7794693B2 (en) | 2002-03-01 | 2010-09-14 | Bracco International B.V. | Targeting vector-phospholipid conjugates |
CA2502304C (en) * | 2002-10-08 | 2013-10-01 | Genencor International, Inc. | Phenolic binding peptides |
CN1774232B (zh) * | 2002-11-25 | 2012-05-09 | 金克克国际有限公司 | 皮肤或毛发结合肽 |
US7585495B2 (en) | 2003-09-08 | 2009-09-08 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method for identifying shampoo-resistant hair-binding peptides and hair benefit agents therefrom |
US20050226839A1 (en) * | 2003-09-08 | 2005-10-13 | Xueying Huang | Pepetide-based body surface reagents for personal care |
US7285264B2 (en) | 2003-09-08 | 2007-10-23 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Peptide-based body surface coloring reagents |
US20100311641A1 (en) * | 2003-09-08 | 2010-12-09 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Peptide-based body surface coloring reagents |
US20050054752A1 (en) * | 2003-09-08 | 2005-03-10 | O'brien John P. | Peptide-based diblock and triblock dispersants and diblock polymers |
US7807141B2 (en) * | 2003-09-08 | 2010-10-05 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Peptide-based oral care surface reagents for personal care |
US7220405B2 (en) * | 2003-09-08 | 2007-05-22 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Peptide-based conditioners and colorants for hair, skin, and nails |
EP1663118A4 (en) | 2003-09-08 | 2008-10-15 | Du Pont | HAIR CARE AND COLORANTS BASED ON PEPTIDES FOR HAIR, SKIN AND NAILS |
ES2375360T3 (es) * | 2003-11-06 | 2012-02-29 | Danisco Us Inc. | Péptidos soportados y de unión a vegf para tratar enfermedades de la piel. |
US9062392B2 (en) * | 2003-12-30 | 2015-06-23 | Intel Corporation | Methods for isolating a peptide methods for identifying a peptide |
US20070196305A1 (en) * | 2005-03-01 | 2007-08-23 | Hong Wang | Method for identifying hair conditioner-resistant hair-binding peptides and hair benefit agents therefrom |
CN101278051B (zh) * | 2005-05-05 | 2011-10-05 | 金克克国际有限公司 | 个人护理组合物及其使用方法 |
US20060286047A1 (en) * | 2005-06-21 | 2006-12-21 | Lowe David J | Methods for determining the sequence of a peptide motif having affinity for a substrate |
US20070065387A1 (en) * | 2005-09-16 | 2007-03-22 | Beck William A | Method for enhancing the effect of particulate benefit agents |
US7736633B2 (en) | 2005-09-28 | 2010-06-15 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Method for enhancing effects of colorants and conditioners |
US8318659B2 (en) | 2005-11-15 | 2012-11-27 | E I Du Pont De Nemours And Company | Peptide-based organic sunscreens |
US7709601B2 (en) * | 2005-12-15 | 2010-05-04 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Nylon binding peptides and methods of use |
US7632919B2 (en) * | 2005-12-15 | 2009-12-15 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Polystyrene binding peptides and methods of use |
US7858581B2 (en) * | 2005-12-15 | 2010-12-28 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | PMMA binding peptides and methods of use |
US7928076B2 (en) * | 2005-12-15 | 2011-04-19 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Polypropylene binding peptides and methods of use |
US7906617B2 (en) | 2005-12-15 | 2011-03-15 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Polyethylene binding peptides and methods of use |
US7700716B2 (en) * | 2005-12-15 | 2010-04-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Polytetrafluoroethylene binding peptides and methods of use |
WO2007109299A2 (en) * | 2006-03-21 | 2007-09-27 | Duke University | Peptide |
US7749957B2 (en) | 2006-04-06 | 2010-07-06 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Clay-binding peptides and methods of use |
DE102006030028A1 (de) * | 2006-06-29 | 2008-02-14 | Forschungszentrum Jülich GmbH | Verfahren zum Auffinden von spezifisch an einen Köder bindende Moleküle, sowie spezifisch an einen Köder bindende Moleküle und deren Verwendung |
US20080280810A1 (en) * | 2006-10-30 | 2008-11-13 | O'brien John P | Peptides having affinity for body surfaces |
US20080175798A1 (en) * | 2006-12-11 | 2008-07-24 | Beck William A | Peptide-based hair protectants |
US7951559B2 (en) | 2007-07-25 | 2011-05-31 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Recombinant peptide production using a cross-linkable solubility tag |
US7829311B2 (en) | 2007-07-25 | 2010-11-09 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Ketosteroid isomerase inclusion body tag engineered to be acid-resistant by replacing aspartates with glutamate |
US7678883B2 (en) | 2007-07-25 | 2010-03-16 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Solubility tags for the expression and purification of bioactive peptides |
US7754680B2 (en) | 2007-07-26 | 2010-07-13 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Peptides for binding calcium carbonates and methods of use |
US20090142283A1 (en) * | 2007-11-30 | 2009-06-04 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Peptide-based antidandruff reagents |
US7998702B2 (en) * | 2008-09-17 | 2011-08-16 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Mutant arabinose promoter for inducible gene expression |
JP5740308B2 (ja) | 2008-10-15 | 2015-06-24 | ダニスコ・ユーエス・インク | 修飾変異ボウマンブリックプロテアーゼインヒビター |
US7772181B2 (en) * | 2008-10-15 | 2010-08-10 | Danisco Us Inc. | Personal care compositions comprising modified variant Bowman Birk Protease Inhibitors |
US7803902B2 (en) * | 2008-10-15 | 2010-09-28 | Danisco Us Inc. | Modified variant bowman birk protease inhibitors |
US8697654B2 (en) | 2008-12-18 | 2014-04-15 | E I Du Pont De Nemours And Company | Peptide linkers for effective multivalent peptide binding |
US20100158837A1 (en) | 2008-12-18 | 2010-06-24 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Iron oxide-binding peptides |
US7915011B2 (en) * | 2009-03-05 | 2011-03-29 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Host cell modifications that improve peptide production and downstream processing |
CA2758049A1 (en) | 2009-03-30 | 2010-10-14 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Peptide-based systems for delivery of cosmetic agents |
WO2010114638A1 (en) | 2009-03-30 | 2010-10-07 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Peptide-based tooth whitening reagents |
US20100310495A1 (en) * | 2009-06-08 | 2010-12-09 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Peptides having affinity for poly (benzyl methacrylate-co-methacrylic acid) potassium salt copolymers and methods of use |
WO2012134416A2 (en) * | 2009-11-18 | 2012-10-04 | Arizona Board Of Regents Acting For And On Behalf Of Arizona State University | Peptide ligands |
US8609621B2 (en) | 2010-11-15 | 2013-12-17 | E I Du Pont De Nemours And Company | Acid-cleavable linkers exhibiting altered rates of acid hydrolysis |
US8663616B2 (en) | 2010-12-20 | 2014-03-04 | E I Du Pont De Nemours And Company | Enzymatic peracid generation for use in oral care products |
KR20140114269A (ko) | 2010-12-20 | 2014-09-26 | 이 아이 듀폰 디 네모아 앤드 캄파니 | 표적화된 과가수분해효소 |
US9273336B2 (en) | 2011-02-21 | 2016-03-01 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Recombinant host cells having an increase in buoyant density |
US9062312B2 (en) | 2011-06-21 | 2015-06-23 | Danisco Us Inc. | Fusion peptides comprising multi-functional peptidic solubility tags for efficient production, processing and surface applications |
WO2014179363A1 (en) | 2013-04-29 | 2014-11-06 | Adimab, Llc | Polyspecificity reagents, methods for their preparation and use |
WO2017115853A1 (ja) * | 2015-12-28 | 2017-07-06 | 出光興産株式会社 | ペプチドタグおよびそれを含むタグ付加タンパク質 |
CN110453292B (zh) * | 2019-06-28 | 2021-06-29 | 浙江大学 | 一种利用噬菌体抗体库高效筛选纤维蛋白原的方法 |
Family Cites Families (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2437090A1 (de) | 1974-08-01 | 1976-02-19 | Hoechst Ag | Reinigungsmittel |
US3929676A (en) * | 1974-08-02 | 1975-12-30 | Int Flavors & Fragrances Inc | Bicyclic fragrance materials and processes therefor |
US4760025A (en) * | 1984-05-29 | 1988-07-26 | Genencor, Inc. | Modified enzymes and methods for making same |
US4683202A (en) * | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
US4800197A (en) * | 1987-07-17 | 1989-01-24 | Richardson-Vicks Inc. | Anti-acne composition |
US5223409A (en) * | 1988-09-02 | 1993-06-29 | Protein Engineering Corp. | Directed evolution of novel binding proteins |
US5011681A (en) * | 1989-10-11 | 1991-04-30 | Richardson-Vicks, Inc. | Facial cleansing compositions |
US5283173A (en) * | 1990-01-24 | 1994-02-01 | The Research Foundation Of State University Of New York | System to detect protein-protein interactions |
US5061620A (en) * | 1990-03-30 | 1991-10-29 | Systemix, Inc. | Human hematopoietic stem cell |
DK0600866T3 (da) | 1990-06-01 | 1998-03-09 | Chiron Corp | Præparater og fremgangsmåder til identifikation af biologisk aktive molekyler |
EP0533838B1 (en) * | 1990-06-11 | 1997-12-03 | NeXstar Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acid ligands |
US5723286A (en) | 1990-06-20 | 1998-03-03 | Affymax Technologies N.V. | Peptide library and screening systems |
US5270181A (en) * | 1991-02-06 | 1993-12-14 | Genetics Institute, Inc. | Peptide and protein fusions to thioredoxin and thioredoxin-like molecules |
US5292646A (en) * | 1991-02-06 | 1994-03-08 | Genetics Institute, Inc. | Peptide and protein fusions to thioredoxin and thioredoxin-like molecules |
US5665539A (en) * | 1991-07-12 | 1997-09-09 | The Regents Of The University Of California | Immuno-polymerase chain reaction system for antigen detection |
US5582981A (en) * | 1991-08-14 | 1996-12-10 | Gilead Sciences, Inc. | Method for identifying an oligonucleotide aptamer specific for a target |
US5733731A (en) * | 1991-10-16 | 1998-03-31 | Affymax Technologies N.V. | Peptide library and screening method |
US5270170A (en) * | 1991-10-16 | 1993-12-14 | Affymax Technologies N.V. | Peptide library and screening method |
US5605793A (en) * | 1994-02-17 | 1997-02-25 | Affymax Technologies N.V. | Methods for in vitro recombination |
US5677136A (en) * | 1994-11-14 | 1997-10-14 | Systemix, Inc. | Methods of obtaining compositions enriched for hematopoietic stem cells, compositions derived therefrom and methods of use thereof |
US6341256B1 (en) * | 1995-03-31 | 2002-01-22 | Curagen Corporation | Consensus configurational bias Monte Carlo method and system for pharmacophore structure determination |
US5609826A (en) | 1995-04-17 | 1997-03-11 | Ontogen Corporation | Methods and apparatus for the generation of chemical libraries |
US6475806B1 (en) | 1995-06-07 | 2002-11-05 | Praecis Pharmaceuticals, Inc. | Anchor libraries and identification of peptide binding sequences |
ES2200084T3 (es) | 1995-12-18 | 2004-03-01 | Praecis Pharmaceuticals Incorporated | Metodos para identificar compuestos que se unen a una diana. |
AU2537397A (en) | 1996-03-22 | 1997-10-10 | Ontogen Corporation | Methods for spatially-dispersed positionally-encoded combinatorial library synthesis |
DK0985032T4 (da) | 1997-05-28 | 2009-08-31 | Crescendo Biolog Ltd | Ribosom-komplekser som selektionspartikler til in vitro fremvisning og evolution af proteiner |
GB9716094D0 (en) * | 1997-07-30 | 1997-10-01 | Univ Glasgow | Mehods for screening bacteriophage libraries |
US6639051B2 (en) * | 1997-10-20 | 2003-10-28 | Curis, Inc. | Regulation of epithelial tissue by hedgehog-like polypeptides, and formulations and uses related thereto |
GB9805793D0 (en) * | 1998-03-18 | 1998-05-13 | Glaxo Group Ltd | Sodium ion channels |
US6861227B2 (en) * | 1998-03-19 | 2005-03-01 | Human Genome Sciences, Inc. | Antibodies to cytokine receptor common gamma chain like |
US6201104B1 (en) | 1998-12-04 | 2001-03-13 | Entremed, Inc. | Angiogenesis—inhibiting protein binding peptides and proteins and methods of use |
US20020098524A1 (en) | 2000-04-14 | 2002-07-25 | Murray Christopher J. | Methods for selective targeting |
-
2001
- 2001-04-11 US US09/832,723 patent/US20020098524A1/en not_active Abandoned
- 2001-04-11 AT AT01930480T patent/ATE455304T1/de active
- 2001-04-11 EP EP01930480A patent/EP1360500B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-11 DK DK01930480.7T patent/DK1360500T3/da active
- 2001-04-11 AU AU2001257012A patent/AU2001257012A1/en not_active Abandoned
- 2001-04-11 PT PT01930480T patent/PT1360500E/pt unknown
- 2001-04-11 CA CA2405715A patent/CA2405715C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-11 WO PCT/US2001/011811 patent/WO2001079479A2/en active Application Filing
- 2001-04-11 DE DE60141088T patent/DE60141088D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-11 JP JP2001577462A patent/JP4966470B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-11 ES ES01930480T patent/ES2338097T3/es not_active Expired - Lifetime
-
2004
- 2004-10-19 US US10/968,732 patent/US20050112692A1/en not_active Abandoned
-
2008
- 2008-04-08 US US12/099,632 patent/US8318640B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2010
- 2010-03-10 CY CY20101100233T patent/CY1109876T1/el unknown
-
2011
- 2011-07-27 JP JP2011164796A patent/JP5689764B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-10-23 US US13/658,713 patent/US8779091B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-05-29 US US14/289,799 patent/US20140342930A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20020098524A1 (en) | 2002-07-25 |
EP1360500B1 (en) | 2010-01-13 |
AU2001257012A1 (en) | 2001-10-30 |
ES2338097T3 (es) | 2010-05-04 |
DE60141088D1 (de) | 2010-03-04 |
US20090093393A1 (en) | 2009-04-09 |
PT1360500E (pt) | 2010-04-19 |
JP2012002818A (ja) | 2012-01-05 |
JP2004518403A (ja) | 2004-06-24 |
ATE455304T1 (de) | 2010-01-15 |
EP1360500A2 (en) | 2003-11-12 |
JP4966470B2 (ja) | 2012-07-04 |
CA2405715A1 (en) | 2001-10-25 |
WO2001079479A3 (en) | 2003-08-21 |
DK1360500T3 (da) | 2010-05-25 |
US20130102757A1 (en) | 2013-04-25 |
WO2001079479A2 (en) | 2001-10-25 |
US8779091B2 (en) | 2014-07-15 |
CA2405715C (en) | 2011-11-15 |
US8318640B2 (en) | 2012-11-27 |
US20050112692A1 (en) | 2005-05-26 |
CY1109876T1 (el) | 2014-09-10 |
US20140342930A1 (en) | 2014-11-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5689764B2 (ja) | 選択性標的化方法 | |
US9120840B2 (en) | Methods for selective targeting | |
JP3210342B2 (ja) | 全合成親和性試薬 | |
JP3143477B2 (ja) | 生物学的サンプル中における生物学的分子の検出のためのバクテリオファージの使用に基づく方法 | |
JP5255841B2 (ja) | 競合示差スクリーニング | |
JP4564062B2 (ja) | 抗体ライブラリーをスクリーニングする方法 | |
US10351970B2 (en) | Method for screening anti-ligand libraries for identifying anti-ligands specific for differentially and infrequently expressed ligands | |
TW201410709A (zh) | 肽庫及其利用 | |
JP2018154627A (ja) | スクリーニング方法およびその使用 | |
Anni et al. | Selection of phage-display library peptides recognizing ethanol targets on proteins | |
Messmer et al. | Sequential determination of ligands binding to discrete components in heterogeneous mixtures by iterative panning and blocking (IPAB) | |
Schatz | Construction and screening of biological peptide libraries | |
Wu et al. | Selection of Aflatoxin B1 Mimic Epitope Peptides by Phage Display | |
Bonvin et al. | Mutagenesis by phage display | |
CN114410640A (zh) | 一种用于检测麻疹病毒的核酸适配体、试剂盒及应用 | |
Cho et al. | Construction of a hexapeptide library using phage display for bio-panning |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120827 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20121121 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130220 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20130225 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130319 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20130325 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130422 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20131106 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140305 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20140313 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140702 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20141001 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20141006 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20141031 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150107 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150129 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5689764 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |