JP5679589B2 - 鳥類において増強された免疫応答 - Google Patents
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Description
鳥類種において免疫応答を誘起する本発明の方法は、該鳥類種における免疫応答を誘起するために有効量の免疫修飾剤組成物を該鳥類種に投与することを包含する。該免疫修飾剤組成物は、リポソーム送達ビヒクルおよび少なくとも一の核酸分子を包含する。特に、該免疫修飾剤は、少なくとも一の生物学的薬剤、例えば、ワクチンの投与によりさらに増強される非抗原特異的免疫応答を誘起する。
a.免疫修飾剤
本発明の一実施態様において、該免疫修飾剤組成物は、米国特許第6,693,086号に記述されたとおりにリポソーム送達ビヒクルおよび少なくとも一の核酸分子を包含し、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明の別の実施態様において、該免疫修飾剤は、リポソーム送達ビヒクル、核酸分子、および少なくとも一の生物学的薬剤を包含する。
a.免疫刺激の方法
本発明の一実施態様において、免疫応答は、有効量の免疫修飾剤組成物を鳥類種に投与することにより該鳥類種において誘起される。有効量は、該鳥類種において免疫応答を誘起するのに十分である。該免疫修飾剤は、リポソーム送達ビヒクルおよび核酸分子を包含する。
本発明の方法は、対象を免疫応答の誘起の影響を受けやすい疾患から保護できるように、対象における免疫応答を誘起する。本明細書にて使用されるとおり、句「疾患から保護される」とは、疾患の兆候低下;疾患の発症低下、および疾患の重症度の低下をいう。対象を保護することとは、疾患の発症から保護するために、および/または該疾患の兆候、症候または原因を治癒または緩和するために該対象に投与された場合の本発明の治療用組成物の能力を指すことができる。そのため、鳥類種を疾患から保護することとは、疾患発症を防止すること(予防的処置)ならびに疾患を有する鳥類種を処置すること(治療的処置)の両方を包含する。特に、疾患から対象を保護することは、いくつかの例においてはさらなる抑制、低減、阻害または過剰または有害な免疫応答を遮断することができる有価な免疫応答または保護的免疫応答を誘導することにより、該鳥類種における免疫応答を誘起することによって達成される。該用語「疾患」とは、鳥類種の正常な健康状態からのあらゆる逸脱をいい、疾患の兆候が存在する場合および兆候がまだ顕在化していないが該逸脱が起こっている(例えば、感染、遺伝子変異、遺伝子欠陥等)場合の状態を含む。
本発明の方法は、屋内または野外いずれでも任意の対象または鳥類種に投与され得る。特に、繁殖、食肉または卵の製造のために商業的に飼育されたそれらの対象に投与されてもよい。好適な鳥類の対象は、ニワトリ、七面鳥、ガチョウ、アヒル、キジ、ウズラ、ハト、ダチョウ、愛玩鳥、動物学上の収集物および鳥小屋にいる鳥などを包含するが、これらに限定しない。一実施態様において、該鳥類種は、ニワトリまたは七面鳥からなる群から選択される。本発明の方法が、高密度の育雛小屋において飼育される鳥、例えば、ブロイラーおよび卵を生むニワトリのために非常に有益であることは、かかる鳥が感染物質に対する環境的暴露に特に弱いことから、当業者には理解されるであろう。
多様な投与経路は利用可能である。選択された特定の様式は、もちろん、選択される特定の生物学的薬剤、および対象の年齢や一般的な健康状態、処置される特定の症状、治療効果に必要な用量に依存する。本発明の方法は、臨床学的に認められない副作用を引き起こさずに免疫応答の有効なレベルを生み出す任意の投与様式を用いて実施され得る。該組成物は、単位用量形態にて従来的に提示され、当業者には十分既知のいずれかの方法により製造され得る。
用語「有効量」とは、所望の生物学的効果を実現するために必要または十分な量をいう。例えば、感染症を処置または予防するための有効量の免疫修飾剤とは、微生物への暴露による抗原特異的免疫応答を生じさせるために必要な量、即ち対象における微生物の量を低下させる量、好ましくは微生物を撲滅させる量である。特定用途のための有効量は、処置される疾患または症状として、かかる因子、対象のサイズ、または疾患または条件の重症度に依存して変更できる。当業者は、過度な実験を必要とせずに有効量の免疫修飾剤を経験的に決定できる。
以下の実施例は、本発明の様々な実施形態を示すものである。
免疫修飾剤
この試験で使用した免疫修飾剤は、カチオン性脂質および非コードDNAを含む組成物であった。該合成免疫修飾剤脂質成分[1-[2-[9-(Z)-オクタデセノイルオキシ]]-2-[8](Z)-ヘプタデセニル]-3-[ヒドロキシエチル]イミダゾリニウムクロライド(DOTIM)および合成の天然脂質コレステロールを製剤して、約200 nm の直径のリポソームを製造した(米国特許第6,693,086号を参照されたい)。該DNA成分は、E.coliで産生される4242塩基対の非コードDNAプラスミド(pMB 75.6)であって、これは陰性電荷を持ち、陽性電荷(カチオン)リポソーム(米国特許第6,693,086号を参照されたい)と会合する。
市販購入し得るニワトリの卵(食肉用ブロイラー)に光を当てて、インキュベーション18日目の生存能を決定した。健康な胚を試験に含め、無精胚、死亡胚、および不健康な胚を廃棄した。雛を、一般的なカリフォルニアスタイルの片側がカーテンの(curtain-sided)鶏舎で飼育した。各囲いに、直留で50匹の鳥を0日目に置いた。この雛を、試験動物の年齢および体重についてのMRC推奨基準に応じた食餌を与え、雛は、囲い毎に水道と繋がったベル型給水器から随意に水を摂水した。
雛を、免疫応答の効率を決定するために生物により抗原投与した。抗原投与または実験的感染は、生物体の接種材料、例えばEscherichia coli (E.coli)への暴露を含む。該生物体を、2.63X105 の濃度で使用し、各孵化卵に接種材料(0.15 mL)をスプレーすることにより孵化トレイ内にて投与した。
実施例1に記載した免疫修飾剤の効果を決定するための試験を、18日齢のニワトリの卵に投与し、その後Escherichia coli (E. coli)に暴露して行った。この試験には2群が含まれ(表2)、一群はE. coli (T1-4)により抗原投与したもので、もう一方は抗原投与していないものである(T5およびT6)。E. coli 抗原投与した群内には、なし(T1)、0.1 μg (T2)、1.0 μg (T3)、および10.0 μg (T4)の用量を含む免疫修飾剤の様々な用量を各々投与した4つの下位群がある。非抗原投与群は、免疫修飾剤を投与してないか(T5)または1.0 μg の免疫修飾剤を投与した(T6)2つの下位群を含む。
実施例1に記載したとおり、E. coliに暴露されるマレック病ワクチン接種したニワトリにおける免疫修飾剤の効果を決定するために試験を行った。試験には、E. coliにて抗原投与した一群(T1-T4)および抗原投与していない別の一群(T5およびT6)の二群を含める。E.coli 抗原投与群の中には、なし(T1)、0.1 μg (T2)、1.0 μg (T3)、1.0 μg+1 用量のマレックワクチン(T4)を含む各々異なる用量の免疫修飾剤を投与した4つの下位群がある(表3)。非抗原投与群には、免疫修飾剤を投与していないか(T5)、または1.0 μgの免疫修飾剤を投与した(T6)2つの下位群が含まれる。
試験を、E. coliに暴露されるマレック病ワクチン投与したニワトリにおける免疫修飾剤の効果を決定するために行った。この試験は、表4に示したように示差的に処置された9つの群を含む。
抗原投与したコントロール群(82.2 %、図28)と比較して、抗原投与後に免疫修飾剤により処置した鳥についての生存率(95 %、図28)は有意に高かった。これらの結果を、400個の卵/群を含むセットを用いて概括した(図29)。
試験を、免疫修飾剤がマレック病の二価ワクチンの早期複製に負の影響を与えるかどうかを決定するために行った。マレック病の二価ワクチンは、HVT(七面鳥ヘルペスウイルス)およびSB1(ニワトリのヘルペスウイルス)を包含する。
試験を、ニューカッスル病に暴露される、修飾された生のニューカッスル病ワクチン接種されたニワトリによる、免疫修飾剤の効果を決定するために行った。この試験には、表6に示したとおりに示差的に処置された9つの群が包含される。
試験を、18日齢の孵化卵において、通常のマレック病ワクチン接種と1回用量の免疫修飾剤との干渉を評価するためにおこなった。この試験により、毒性抗原投与に対するマレック病ワクチン接種の有効性を比較した。
Claims (18)
- 大腸菌(Escherichia coli)に暴露された孵化鶏卵の孵化率を高める方法であって、0.05μgないし10μgの免疫修飾剤組成物を該卵に卵内投与することを含み、ここで
該免疫修飾剤組成物が下記の
a. カチオン性リポソーム送達ビヒクル、および
b. 抗原をコードしない核酸分子、
を含む、方法。 - 該核酸分子が細菌由来の核酸ベクターまたはその断片である、請求項1に記載の方法。
- 該核酸分子がDNAプラスミドである、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 0.1μgないし5μgの該免疫修飾剤組成物を該卵に卵内投与する、請求項1ないし請求項3のいずれかに記載の方法。
- 1.0μgの該免疫修飾剤組成物を該卵に卵内投与する、請求項1ないし請求項4のいずれかに記載の方法。
- 該免疫修飾剤組成物をインキュベーション18日目の孵化鶏卵に投与する、請求項1ないし請求項5のいずれかに記載の方法。
- 該カチオン性リポソーム送達ビヒクルが、N-[1-(2,3-ジオレイルオキシ)プロピル]-N,N,N-トリメチルアンモニウムクロライド(DOTMA)およびコレステロール、N-[1-(2,3-ジオレイルオキシ)プロピル]-N,N,N-トリメチルアンモニウムクロライド(DOTAP)およびコレステロール、1-[2-(オレイルオキシ)エチル]-2-オレイル-3-(2-ヒドロキシエチル)イミダゾリニウム塩化物(DOTIM)およびコレステロール、ならびにジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド(DDAB)およびコレステロールからなる群から選択される一対の脂質を含む、請求項1ないし請求項6のいずれかに記載の方法。
- 該カチオン性リポソーム送達ビヒクルが、1-[2-(オレイルオキシ)エチル]-2-オレイル-3-(2-ヒドロキシエチル)イミダゾリニウム塩化物(DOTIM)およびコレステロールを含む、請求項1ないし請求項7のいずれかに記載の方法。
- 該免疫修飾剤組成物が、さらに生物学的薬剤を含み、該生物学的薬剤が、マレック病ウイルス(MDV)、ニューカッスル病ウイルス(NDV)、鶏貧血ウイルス(CAV)、感染性ファブリキウス嚢病ウイルス(IBDV)、感染性気管支炎ウイルス(IBV)、七面鳥ヘルペスウイルス(HVT)、感染性喉頭気管炎ウイルス(ILTV)、鶏脳脊髄炎ウイルス(AEV)、鶏痘ウイルス(FPV)、鳥類のインフルエンザウイルス(AIV)、レオウイルス、鶏白血病ウイルス(ALV)、網膜内皮症ウイルス(REV)、鶏アデノウイルスおよび出血性腸炎ウイルス(HEV)、およびその組合せに対する保護のために使用されるワクチンである、請求項1ないし請求項8のいずれかに記載の方法。
- 大腸菌に暴露された孵化鶏卵から孵化するニワトリの死亡率を低下させる方法であって、0.05μgないし10μgの免疫修飾剤組成物を該卵に卵内投与することを含み、ここで
該免疫修飾剤組成物が下記の
a. カチオン性リポソーム送達ビヒクル、および
b. 抗原をコードしない核酸分子、
を含む、方法。 - 該核酸分子が細菌由来の核酸ベクターまたはその断片である、請求項10に記載の方法。
- 該核酸分子がDNAプラスミドである、請求項10または請求項11に記載の方法。
- 0.1μgないし5μgの該免疫修飾剤組成物を該卵に卵内投与する、請求項10ないし請求項12のいずれかに記載の方法。
- 1.0μgの該免疫修飾剤組成物を該卵に卵内投与する、請求項10ないし請求項13のいずれかに記載の方法。
- 該免疫修飾剤組成物をインキュベーション18日目の孵化鶏卵に投与する、請求項10ないし請求項14のいずれかに記載の方法。
- 該カチオン性リポソーム送達ビヒクルが、N-[1-(2,3-ジオレイルオキシ)プロピル]-N,N,N-トリメチルアンモニウムクロライド(DOTMA)およびコレステロール、N-[1-(2,3-ジオレイルオキシ)プロピル]-N,N,N-トリメチルアンモニウムクロライド(DOTAP)およびコレステロール、1-[2-(オレイルオキシ)エチル]-2-オレイル-3-(2-ヒドロキシエチル)イミダゾリニウム塩化物(DOTIM)およびコレステロール、ならびにジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド(DDAB)およびコレステロールからなる群から選択される一対の脂質を含む、請求項10ないし請求項15のいずれかに記載の方法。
- 該カチオン性リポソーム送達ビヒクルが、1-[2-(オレイルオキシ)エチル]-2-オレイル-3-(2-ヒドロキシエチル)イミダゾリニウム塩化物(DOTIM)およびコレステロールを含む、請求項10ないし請求項16のいずれかに記載の方法。
- 該免疫修飾剤組成物が、さらに生物学的薬剤を含み、該生物学的薬剤が、マレック病ウイルス(MDV)、ニューカッスル病ウイルス(NDV)、鶏貧血ウイルス(CAV)、感染性ファブリキウス嚢病ウイルス(IBDV)、感染性気管支炎ウイルス(IBV)、七面鳥ヘルペスウイルス(HVT)、感染性喉頭気管炎ウイルス(ILTV)、鶏脳脊髄炎ウイルス(AEV)、鶏痘ウイルス(FPV)、鳥類のインフルエンザウイルス(AIV)、レオウイルス、鶏白血病ウイルス(ALV)、網膜内皮症ウイルス(REV)、鶏アデノウイルスおよび出血性腸炎ウイルス(HEV)、およびその組合せに対する保護のために使用されるワクチンである、請求項10ないし請求項17のいずれかに記載の方法。
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